BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials

Transkript

1 BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials Èesky ÚÈEL POUŽITÍ Kultivaèní lahvièky BACTEC Standard/10 Aerobic/F (obohacená živná pùda s výtažkem sójového kaseinu a CO 2 ) se používají pro aerobní krevní kultury. Hlavní použití je s fluorescenčními přístroji BACTEC pro kvalitativní kultivaci a průkaz aerobních mikroorganismů (bakterií a kvasinek) v krvi. SHRNUTÍ A VYSVÌTLENÍ Testovaný vzorek se inokuluje do jedné nebo nìkolika lahvièek, které se vloží do fluorescenèního pøístroje BACTEC za úèelem inkubace a pravidelného odeètu. Každá lahvièka obsahuje chemické èidlo, které detekuje zvýšení množství CO 2 vyprodukovaného rùstem mikroorganismù. Pøístroj každých deset minut monitoruje zvýšení fluorescence èidla, která je pøímo úmìrná množství pøítomného CO 2. Pozitivní odeèet znamená, že se v lahvièce pravdìpodobnì nachází životaschopné mikroorganismy. Detekce se týká pouze mikroorganismù, které se budou množit v urèitém typu média. ZÁSADY POSTUPU Pokud se v testovaném vzorku inokulovaném do lahvièky BACTEC mikroorganismy nachází, budou organismy pøi metabolizaci substrátù nacházejících se v lahvièce vytváøet CO 2. Fluorescenèní pøístroj BACTEC bude monitorovat zvyšování fluorescence èidla v lahvièce zpùsobené zvýšením množství CO 2. Analýza rychlosti zvýšení CO 2 a zvýšení množství CO 2 umožòuje fluorescenènímu pøístroji BACTEC urèit, zda je lahvièka pozitivní, tj. zda testovaný vzorek obsahuje životaschopné organismy. REAGENTY Kultivaèní lahvièky BACTEC Standard/10 Aerobic/F obsahují pøed zpracováním následující aktivní složky: Seznam složek (WTR) Destilovaná voda...40 ml (SCB) Živná pùda s výtažkem sójového kaseinu...3,0% w/v (YEX) Kvasnièný výtažek...0,3% w/v (ATD) Natrávenina zvíøecí tkánì...0,01% w/v (SCR) Tøtinový cukr...0,1% w/v (HEM) Hemin...0,0005% w/v (MEN) Menadion...0,00005% w/v (PXH) Pyridoxal HCl (vitamín B 6 )...0,001% w/v (SBC) Bikarbonát sodný...0,04% w/v (SPS) Polyanetholsulfonát sodný...0,035% w/v Všechna média BACTEC jsou zøedìna pøidaným CO 2. PP105JAA 2008/01 Varování a bezpeènostní opatøení Pro diagnostiku in vitro. Výrobek obsahuje suchou pøírodní pryž. Klinických vzorcích se mohou nacházet patogenní mikroorganismy vèetnì viru hepatitidy a viru lidské imunodeficience (HIV). Proto dodržujte pøi práci s veškerým materiálem kontaminovaným krví a jinými tìlními tekutinami standardní bezpeènostní opatøení" 1-4 a pøedpisy své instituce. Pøed použitím každou lahvièku prohlédnìte a zkontrolujte, zda není poškozená, kontaminovaná èi opotøebená. Lahvièky, které vykazují známky poškození nebo kontaminace, napø. netìsnost, zakalení, zmìnu zabarvení (ztmavnutí), vypoukliny nebo stlaèené víèko, nepoužívejte. V kontaminované lahvièce by mohl být pøetlak. Pokud pro pøímý odbìr použijete kontaminovanou lahvièku, mohlo by dojít ke zpìtnému prùtoku kontaminovaného kultivaèního média do žíly pacienta. Kontaminace lahvièky nemusí být zøejmá na první pohled. Rozhodnete-li se použít pøímý odbìr, pozornì jeho postup sledujte, abyste zabránili zpìtnému prùtoku látek do tìla pacienta. Ve výjimeèných pøípadech mùže pøi snímání zaklápìcího víèka nebo pøi manipulaci dojít k prasknutí sklenìné lahvièky nebo ke zlomení krèku. Ve výjimeèných pøípadech mùže také dojít k nedostateènému uzavøení lahvièky. V obou pøípadech mùže obsah lahvièek vytéci. Dojde-li po inokulaci lahvièky k úniku nebo rozlití jejího obsahu, postupujte opatrnì, protože se zde mohou nacházet patogenní organismy nebo látky. Pøed likvidací všechny inokulované lahvièky sterilizujte v autoklávu. Pozitivní kultivaèní lahvièky urèené k subkultivaci, histologickému barvení atd.: Pøed odebráním vzorkù je nezbytné odstranit plynné metabolity mikroorganismù. Odbìr vzorkù provádìjte pokud možno v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Pøed odbìrem si obleète odpovídající ochranný odìv, rukavice a masku. Další informace o subkultivaci naleznete v èásti Postup. Možný únik bìhem inokulace vzorkù do kultivaèních lahvièek lze minimalizovat pomocí injekèních støíkaèek s trvale nasazenými jehlami nebo hroty typu Luer-Lok. Pokyny ke skladování Lahvièky BACTEC jsou po dodání pøipraveny k použití; nevyžadují žádnou rekonstituci ani zøedìní obsahu. Skladujte pøi teplotì 2 25 C na suchém místì mimo dosah pøímého sluneèního záøení. ODBÌR VZORKÙ Odbìr vzorkù provádìjte sterilními postupy, abyste snížili riziko kontaminace. Obvyklý objem vzorkù je 8 10 ml. Doporuèujeme inokulovat vzorky do lahvièek BACTEC v blízkosti lùžka pacienta. Vìtšinou se vzorky odebírají 10 ml nebo 20 ml injekèní støíkaèkou s hrotem Luer-Lok. Podle potøeby lze použít držák na jehly Vacutainer soupravu pro odbìr krve Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer Safety-Lok nebo jinou soupravu hadièek s kanylou typu butterfly. Rozhodnete-li se pro pøímý odbìr použít jehlu se soupravou hadièek, pozornì pøi zahájení odbìru vzorku sledujte smìr prùtoku krve. Vakuum v lahvièce obvykle pøesáhne hodnotu 10 ml, takže je dùležité, aby uživatel sledoval odebraný objem prostøednictvím znaèek v rozestupu 5 ml na štítku lahvièky. Po natažení požadovaných 8 10 ml zastavte prùtok ohnutím hadièky a odstranìním soupravy hadièek z lahvièky BACTEC. Vzorky o objemu 3 ml lze také použít, ale jejich prokázání nebude tak výrazné jako u vzorkù s vìtším objemem. Inokulovanou lahvièku BACTEC co nejrychleji pøepravte do laboratoøe. POSTUP Odstraòte z lahvièky BACTEC zaklápìcí víèko a zkontrolujte, zda není lahvièka popraskaná, kontaminovaná, pøíliš zakalená, vypouklá nebo zda nemá stlaèenou zátku. Jestliže si všimnete jakéhokoli defektu, lahvièku NEPOUŽÍVEJTE. Pøed naoèkováním oèistìte víèko alkoholem (použití jódu NEDOPORUÈUJEME). Aseptickým postupem vstøíknìte nebo proveïte pøímý odbìr 8 10 ml vzorku na každou lahvièku. Pokud se rozhodnete použít vzorky o objemu 3 4 ml, nebude jejich prùkaznost tak výrazná jako u vzorkù s vìtším objemem (viz Omezení postupu). Inokulované aerobní lahvièky umístìte co nejrychleji do fluorescenèního pøístroje BACTEC za úèelem inkubace a monitorování. Pokud inokulovanou lahvièku neumístíte do pøístroje ihned a shledáte v ní viditelný rùst, netestujte ji ve fluorescenèním pøístroji BACTEC, ale radìji proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou.

2 Lahvièky vložené do pøístroje budou automaticky testovány každých deset minut po dobu uvedenou v testovacím protokolu. Fluorescenèní pøístroj BACTEC urèí pozitivní lahvièky (viz příslušná Uživatelská příručka fluorescenčního přístroje BACTEC). Èidlo uvnitø pozitivních lahvièek se nebude na první pohled lišit od èidla v negativních lahvièkách, fluorescenèní pøístroj BACTEC však zjistí rozdíl ve fluorescenci. Pokud bude na konci testu negativní lahvièka BACTEC Standard/10 Aerobic/F na první pohled pozitivní (znaky: krev èokoládového zbarvení, vypouklé víèko, hemolyzovaná a/nebo velmi tmavá krev), proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. Pozitivní lahvièky subkultivujte a na podložním sklíèku proveïte Gramovo barvení. Ve velké vìtšinì pøípadù budou organismy viditelné a laboratoø bude moci lékaøi oznámit pøedbìžné výsledky. Subkultivace na selektivních médiích a pøedbìžný pøímý antimikrobiální test na citlivost lze pøipravit z tekutiny obsažené v lahvièkách BACTEC. Subkultivace: Pøed zahájením subkultivace umístìte lahvièku do svislé polohy a na víèko umístìte alkoholem napuštìné krytí. Abyste z lahvièky uvolnili tlak, zaveïte pøes alkoholem napuštìné krytí a pøes víèko sterilní jehlu s odpovídajícím filtrem nebo tampónem. Po uvolnìní tlaku a pøed odbìrem vzorku lahvièky za úèelem provedení subkultivace jehlu vyjmìte. Pøi zavádìní a vyjímání udržujte jehlu v pøímé poloze, nezavádìjte ji ani ji nevyjímejte otáèivými pohyby. Abyste získali maximální množství izolátù, mùžete negativní kultury nejprve zkontrolovat barvením a/nebo subkultivací a teprve poté je zlikvidovat jako negativní. KONTROLA KVALITY Požadavky na kontrolu kvality musí být splnìny v souladu s platnými místními, státními a federálními zákony a požadavky na akreditaci a se standardními postupy kontroly kvality vaší laboratoøe. Doporuèujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provedení kontroly kvality v pøíslušných smìrnicích CLSI (dříve NCCLS) a pøedpisech CLIA. Po uplynutí data expirace kultivaèní lahvièky NEPOUŽÍVEJTE. Lahvièky, které vykazují známky popraskání nebo jiného poškození, NEPOUŽÍVEJTE a odpovídajícím zpùsobem je zlikvidujte. Souèástí každého balení médií jsou certifikáty kontroly jakosti. Certifikáty kontroly jakosti uvádìjí seznam testovacích organismù vèetnì kultur ATCC urèených normou CLSI, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media. 5 Èasové rozmezí pøed detekcí v hodinách pro každý z organismù uvedený v certifikátu kontroly jakosti pro toto médium je 72 h: Streptococcus pyogenes ATCC Escherichia coli ATCC Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC Candida albicans ATCC Neisseria meningitidis ATCC Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC *Kmen CLSI Informace o kontrole kvality pro fluorescenční přístroj BACTEC naleznete v příslušné uživatelské příručce fluorescenčního přístroje BACTEC. OMEZENÍ POSTUPU Kontaminace Bìhem odbìru a inokulace do lahvièky BACTEC nesmí dojít ke kontaminaci vzorku. Výsledkem kontaminovaného vzorku bude pozitivní odeèet, který však nebude relevantním klinickým vzorkem. Rozhodnutí musí uèinit uživatel v závislosti na takových faktorech, jako je typ prokázaných organismù, pøítomnost stejných organismù ve více kulturách, záznamy pacienta atd. Prokázání organismù citlivých na SPS ze vzorkù krve Jelikož krev mùže vùèi organismùm citlivým na SPS (napø. nìkteré druhy Neisseria) neutralizovat toxicitu SPS, je pøítomnost optimálního objemu krve (8 10 ml) pøi prokazování tìchto organismù výhodou. Nìkteré nároèné organismy, napø. nìkteré druhy Haemophilus, vyžadují faktory rùstu, napø. NAD nebo faktor V, které lze získat ze vzorkù krve. Je-li objem vzorku krve 3,0 ml nebo ménì, bude zøejmì nutné pro prokázání tìchto organismù pøidat odpovídající množství. Přídavek pro náročné organismy BACTEC FOS může být použit jako vyživovací přídavek. Organismy, které nejsou životaschopné Nátìr s Gramovým barvením z kultivaèního média mùže obsahovat malé množství organismù, které nejsou životaschopné. Zdrojem tìchto organismù jsou složky médií, chemikálie pro barvení, imerzní olej, podložní sklíèka a vzorky používané pro inokulaci. Také pacientovy vzorky mohou obsahovat organismy, které se v kultivaèním médiu nebo médiu urèeném k subkultivaci nerozmnoží. Takové vzorky podle potøeby subkultivujte na speciálních médiích. 6 Prokázání Streptococcus pneumoniae U aerobních médií bude S. pneumoniae obvykle na první pohled i po otestování pøístrojem pozitivní, ale v nìkterých pøípadech se mùže stát, že se po Gramovì barvení nebo po bìžné subkultivaci žádný organismus neprokáže. Pokud byla inokulována i anaerobní lahvièka, lze organismus obvykle prokázat provedením aerobní subkultivace anaerobní lahvièky. Bylo totiž prokázáno, že tento organismus se v anaerobních podmínkách dobøe množí. 7 Všeobecné informace Optimálního prokázání izolátù bude dosaženo pøidáním 8 10 ml krve. Použití menšího èi vìtšího množství mùže nepøíznivì ovlivnit prokazování a/nebo èasová rozmezí detekce. Krev mùže obsahovat antimikrobiální látky nebo jiné inhibitory, které mohou zpomalit množení mikroorganismù nebo tomuto množení úplnì zabránit. Pokud jsou pøítomny organismy, které neprodukují dostateèné množství CO 2 na to, aby je pøístroj detekoval, nebo pokud došlo pøed umístìním lahvièky do pøístroje k výraznému rùstu, mùže dojít k falešnì negativnímu odeètu. K nesprávnému urèení pozitivity mùže dojít v pøípadì, že je poèet bílých krvinek vysoký. OÈEKÁVANÉ VÝSLEDKY Studie týkající se inokulace kultur na pùdu byly provedeny za použití inokula v rozmezí od 10 do 50 CFU na jednu kultivaèní lahvièku v kombinaci s ATCC i nekultivovanými mikrobiálními kmeny. Dále je uveden seznam organismů, které byly zjištěny v médiu BACTEC Standard/10 Aerobic/F během pěti (5) dnů. Acinetobacter anitratus Cryptococcus neoformans Proteus mirabilis Staphylococcus epidermidis Acinetobacter lwoffii Enterobacter cloacae Providencia stuartii Streptococcus pneumoniae Alcaligenes faecalis Enterococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pyogenes (skup. A) Candida (Torulopsis) glabrata Escherichia coli Salmonella typhimurium Xanthomonas maltophilia Candida albicans Haemophilus influenzae Serratia marcescens Corynebacterium J-K Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus 2

3 VLASTNOSTI ÚÈINNOSTI Byla provedena klinická studie, v níž bylo porovnáno kultivaèní médium BACTEC Standard/10 Aerobic/F a kultivaèní médium BACTEC Standard Aerobic/F. Bylo vyhodnoceno celkem párù vzorkù. Nebyly zjištìny žádné falešnì pozitivní lahvièky. Bìhem studie byly identifikovány tøi falešnì negativní lahvièky s kultivaèním médiem BACTEC Standard/10 Aerobic/F. Procento falešnì negativních lahvièek bylo 0,2%. Bylo prokázáno celkem 113 organismù. V tabulce 1 jsou uvedeny prokázané izoláty dle typu média. Z tìchto izolátù bylo 76 (67,3%) oznaèeno jako klinicky signifikantní. Ze 76 klinicky signifikantních izolátù jich 53 (69,7%) bylo prokázáno v obou médiích, 8 (10,5%) pouze v kultivaèním médiu BACTEC Standard/10 Aerobic/F a 15 izolátù (19,7%) pouze v kultivaèním médiu BACTEC Standard Aerobic/F. Rozdíl pøi prokázání pouze v kultivaèním médiu BACTEC Standard/10 Aerobic/F ve srovnání s kultivaèním médiem BACTEC Standard Aerobic/F nebyl ze statistického hlediska signifikantní. Prùmìrná doba pøed detekcí byla u všech skupin 20,4 hodin u kultivaèního média BACTEC Standard/10 Aerobic/F a 21,5 hodin u kultivaèního média BACTEC Standard Aerobic/F. TABULKA 1: Prokázání izolátù v klinické studii dle typu média Organismus Prokázán POUZE v médiu Standard/10 Aerobic/F Prokázán POUZE v médiu Standard Aerobic/F Prokázán v OBOU médiích NEGATIVNÍ PO GRAMOVÌ BARVENÍ POZITIVNÍ PO GRAMOVÌ BARVENÍ KVASNICE Seznam organismù prokázaných v médiích BACTEC Standard/10 Aerobic/F: Candida albicans Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Candida tropicalis Haemophilus influenzae Staphylococcus aureus Druhy Streptococcus Citrobacter diversus Klebsiella pneumoniae Staphylococcus coag. negat. Enterobacter aerogenes Morganella morganii Staphylococcus haemolyticus Enterococcus faecalis Proteus mirabilis Streptococcus constellatus DOSTUPNOST Kat. c. Popis BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials (kultivační lahvičky), krabice s 50 lahvičkami Odkazy: 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.) Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:50-53.

4 4

5 B Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland U.S.A BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, FOS, Vacutainer, Luer-Lok and Safety-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.