PT#V/5/2012 Stanovení mikroskopického obrazu v přírodních koupalištích, stanovení sinic a stanovení chlorofylu-a

Transkript

1 PT#V/5/2012 Stanovení mikroskopického obrazu v přírodních koupalištích, stanovení sinic a stanovení chlorofylu-a Petr Pumann Státní Seminář k vyhodnocení PT#V/5/ upraveno pro zveřejnění na internetu

2 Státní kód účastníka, pod kterým je veden v celé zprávě

3 Státní Vývoj počtu účastníků

4 Akce Vodárenská biologie Praha, hotel DAP Determinační kurz 2013 červen 2013 pravděpodobně Nová Říše Kurzy pro začátečníky SZÚ podle dohody Semináře Třeboň (Lenka Šejnohová) 1x 2 měsíce Státní

5 Poznámka účastníka u vzorků 2: U rodů Microcystis a Anabaena je konkrétní určování do druhů pouze na základě determinační literatury značně obtížné i s respektem na jejich určitou variabilitu. Vyžaduje to zkušenosti. Uvítali bychom krátký determinační kurz (1-denní).

6 Literatura Mikrobiální biofilmy autor: Martin Rulík a kol Státní International Guidance Manual for the Management of Toxic Cyanobacteria Gayle Newcombe Publication Date: 15 Aug 2012 ISBN: Pages: 254 (pouze elektronicky)

7 Determinační literatura v laboratořích účastníků Publikace Počet Komárek (1996) X X X X X X X X 8 Hindák a kol. (1978) X X X X X X 6 Hindák (2008) X X X X X 5 Komárek (1999) X X X X X 5 Sládeček, Sládečková (1996) X X X X X 5 Hindák (2001) X X X X 4 Šejnohová a kol. (2005) X X X X 4 Hindák a kol. (1975) X X X 3 Komárek, Anagnostidis (1999) X X X 3 Komárek, Anagnostidis (2005) X X 2 John a kol. (2005) X 1 X 1 X 1 Komárek, Komárková (2002) X 1 Komárek, Zapomělová (2007) X 1

8 Státní Kvalitativní rozbor sinic

9 Vzorek 2A Huťský rybník (odběr) vodní květ fixováno formalínem v laboratoři Státní

10 Huťský rybník ( ) Státní

11 Microcystis viridis Státní

12 Microcystis viridis Státní

13 Microcystis flos-aquae? Microcystis viridis Státní

14 Microcystis viridis Microcystis aeruginosa? Státní

15 Taxon SZÚ Microcystis aeruginosa Microcystis cf. aeruginosa 2 Microcystis cf. firma + Microcystis flos-aquae Microcystis cf. flos-aquae Microcystis ichthyoblabe 15 Microcystis cf. novacekii 1 Microcystis viridis Microcystis cf. viridis 98 Microcystis wesenbergii + + Microcystis cf. wesenbergii + Microcystis sp. div. + Planktothrix agardhii 6 Pseudanabaena mucicola P Microcystis viridis počet bodů úspěšnost sporný výsledek SZÚ - Státní Vzorek 2A žádný problém

16 Vzorek 2B Hostivař - koupaliště planktonka 20 µm formalín Státní

17 Hostivař koupaliště ( ) vláknité zelené řasy (jejich velký nárůst se projevil na jaře po napuštění nádrže)

18 Státní Hostivař koupaliště ( ) - ale v planktonu již pozorovatelný vodní květ

19 Anabaena sigmoidea Státní

20 Anabaena sigmoidea Státní

21 Aphanizomenon flos-aquae Státní

22 Aphanizomenon flos-aquae Státní

23 Merismopedia Státní

24 Merismopedia Státní

25 Merismopedia Státní Pandorina zelený bičíkovec

26 Taxon SZU Anabaena circinalis 12 Anabaena cf. flos-aquae Anabaena cf. mendotae 49 Anabaena sigmoidea Anabaena cf. sigmoidea Anabaena sp. 45 Aphanizomenon flos-aquae Aphanizomenon cf. flos-aquae Aphanizomenon cf. klebahnii 15 Aphanizomenon sp. 53 Cyanogranis basifixa 60 Merismopedia cf. glauca Merismopedia knuissima* + Merismopedia cf. marssonii + Merismopedia cf. punctata 1 Merismopedia sp Microcystis aeruginosa + Microcystis cf. aeruginosa + Microcystis ichtyoblabe 4 Microcystis wesenbergii 44 Microcystis sp. 1 Planktothrix agardhii 4 Planktothrix sp. + + Woronichinia naegeliana + Aphanizomenon flos-aquae počet bodů úspěšnost sporný výsledek Anabaena sigmoidea počet bodů úspěšnost sporný výsledek? SZÚ - Státní * O existenci taxonu Merismopedia knuissima nemáme žádné inforamce. Zřejmě jde o překlep místo M. minutissima nebo M. tenuissima. Vzorek 2B drobné

27 Vzorek 2C Bezejmenná nádrž Milíčovském potoce odebráno planktonkou 20µm Lugol Státní

28 Bezejmenná nádrž Milíčovském potoce ( ) přítomen vodní květ

29 Cuspidothrix issatschenkoi Státní

32 Hostivař, :00; šířka všech vláken kolem 2,5 µm Raphidiopsis mediterranea Aphanizomenon issatschenkoi

33 Taxon SZÚ Anabaena cf. circinalis 1 Anabaena flos-aquae Anabaena cf. flos-aquae 1 7 Anabaena cf. lemmermannii 9 11 Anabaena cf. mendotae 10 Anabaena cf. planctonica + Anabaena cf. sigmoidea 10 7 Anabaena sp Aphanizomenon flos-aquae Aphanizomenon cf. flos-aquae Aphanizomenon sp Aphanocapsa sp. + Cuspidothrix cf. elenkinii 43 Cuspidothrix issatschenkoi Cuspidothrix cf. issatschenkoi Cylindrospermopsis raciborskii 26 Microcystis aeruginosa Microcystis cf. aeruginosa + Microcystis flos-aquae Microcystis cf. ichthyoblabe 10 Microcystis cf. novacekii + Microcystis viridis 7 Microcystis wesenbergii + Microcystis cf. wesenbergii + Microcystis sp Oscillatoriales + Planktolyngbya limnetica + Planktothrix agardhii Pseudanabaena mucicola P Raphidiopsis mediterranea Cuspidothrix issatschenkoi počet bodů úspěšnost sporný výsledek? SZÚ - Státní

34 Vzorek 2D Hostivař - hráz Vodní květ Lugol Státní

35 Hostivař hráz,

36 Anabaena flos-aquae

37 Anabaena flos-aquae

38 Microcystis sp.

39 Anabaena sp.

40 Taxon SZÚ Anabaena circinalis 4 Anabaena flos-aquae Anabaena cf. flos-aquae Anabaena cf. oscillarioides + Anabaena cf. perturbata 56 Anabaena planctonica 1 Anabaena cf. planctonica + Anabaena sp Anabaenopsis cf. milleri + 1 Anabaenopsis sp. + Anabaenopsis spp. 1 Aphanizomenon aphanizomenoides 1 + Aphanizomenon flos-aquae Aphanizomenon cf. flos-aquae Aphanizomenon cf. gracile + Aphanizomenon sp Aphanocapsa sp. 1 Cuspidothrix cf. issatschenkoi + 1 Limnothrix redekei + Limnothrix sp Limnothrix sp.? 6 Microcystis aeruginosa Microcystis flos-aquae 20 + Microcystis cf. flos-aquae 4 Microcystis viridis 1 Microcystis sp Oscillatoriales + Planktolyngbya cf. limnetica + Planktolyngbya sp. 1 Planktothrix agardhii Planktothrix cf. agardhii 23 Planktothrix sp Pseudanabaena limnetica 4 + Pseudanabaena cf. limnetica 2 Pseudanabaena mucicola P Pseudanabaena cf. mucicola P Pseudanabaena sp Snowella sp. + tenké oscilatoriální sinice 4 Anabaena flos-aquae počet bodů úspěšnost sporný výsledek SZÚ - Státní

41 Vzorek 1A Pískovna u Kostelce nad Labem Státní

42 Státní

43 Státní Woronichinia naegeliana a?

44 Státní Snowella nebo Coelomoron?

45 Snowella nebo Coelomoron? Woronichinia naegeliana Státní

46 Státní Snowella!!!

47 Aphanocapsa nanoplanktonní sinice nanoplanktonní sinice Cyanogranis Státní

48 Planktothrix agardhii Státní

49 Cuspidothrix issatschenkoi Planktothrix agardhii vláknitá sinice nebo bakterie Státní

50 Ceratium furcoides extrémně dlouhý dolní trn ; Státní

51 Actinocyclus normanii Státní

52 Státní

53 Státní

54 Státní Fragilaria (Centronella) reicheltii

55 Vzorek 1B Šeberák filtrováno přes síto 300µm pro odstranění špíny a velkých kolonií Státní

56 Sinice Planktothrix agardhii Státní

57 Planktothrix agardhii s parazitickou mikromycetou Státní

58 Sinice Anabaenopsis cf. mulleri Anabaena cf. flos-aquae Microcystis sp. Aphanizomenon sp. Státní

59 Zelené řasy (ukázky počet taxonů byl mnohem vyšší) drobný zelený bičíkovec Coelastrum pseudomicroporum Pediastrum duplex Pteromonas angulosa Quadricoccus sp. Golenkinia radiata? Desmodesmus sp. Oocystis lacustris Actinastrum hantzschii Státní

60 Rozsivky centrické rozsivky centrická rozsivka Nitzschia sp. Aulacoseira granulata Státní centrické rozsivky Nitzschia sp. Nitzschia acicularis

61 Krásnoočka Skrytěnky Haptophyta Cryptomonas sp. (zřejmě C. reflexa) Cryptomonas sp. (zřejmě C. reflexa) Hymenomonas roseola Phacus (Monomorphina) pyrum. Cryptomonas reflexa Euglena agilis Trachelomonas sp. Státní

62 Mikroskopický obraz Vzorek 1A Dominantní organismy - sinice Woronichinia naegeliana a Snowella lacustris. Poznámka: U druhého organismu jsme byli shovívaví k jeho určení (i proto, že slizové stopky byly poměrně nezřetelné a naprostou jistotu o správnosti určení ani teď nemáme). Vzorek 1B Mezi sinicemi dominovala Planktothrix agardhii, významně byly zastoupeny i řasy (pravděpodobně ve větší míře než sinice) - zelené řasy, krásnoočka, rozsivky, případně skrytěnky. Státní

63 Státní Kvantitativní rozbor sinic

64 Kvantifikace Robustní statistika robustní aritmetický průměr robustní směrodatná odchylka (podle potřeby rozšířena) Státní

65 Vzorky 1 - zajištění homogenity promícháno v 5 litrovém barelu se spodním výpustním kohoutek celkem připraveno 17 vzorků SZU zpracování vzorků 1, 6, 11, 17 Státní

66 Vzorek 1A kokální sinice Woronichinia naegeliana a Snowella lacustris vláknité sinice Plantkothrix agardhii pískovna u Kostelce nad Labem Státní

67 buňky/ml Homogenita vzorek 1A (SZÚ) A1a 1A1b 1A6a 1A6b 1A11a 1A11b 1A17a 1A17b Státní

68 Tabulka Z-score pro kvantitativní rozbor sinic - vz. 1A (buňky) V lab výsledek (buňky/ml) z-score X ,89 X ,77 X ,58 X ,41 X ,50 X ,52 počet laboratoří: 6 z toho vyhovuje: 6 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: ,3 buňky/ml vztažná odchylka: ,9 buňky/ml interval správných hodnot: buňky/ml terč 4 Příliš široké meze vzorek vyhodnocen pouze pro informaci (úspěšná účast není součástí certifikátu) Tabulka Z-score pro kvantitativní rozbor sinic - vz. 1A (buňky) V lab výsledek (buňky/ml) z-score X ,97 X ,58 X ,53 X ,89 X ,77 X ,67 X ,58 X ,45 X ,50 X ,52 počet laboratoří: 10 z toho vyhovuje: 10 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: ,3 buňky/ml vztažná odchylka: ,9 buňky/ml interval správných hodnot: buňky/ml účastník

69 72 buněk Jak počítat počet buněk Snowelly? Velké zvětšení, téměř vyschlý preparát, průměrný počet buněk v kolonii x počet kolonií 75 buněk

70 Vzorek 1B ) Šeberák filtrováno přes síto 300µm pro odstranění špíny a velkých kolonií Státní

71 buňky/ml Homogenita vzorek 1B (SZÚ) Státní

72 Tabulka Z-score pro kvantitativní rozbor sinic - vz. 1B (buňky) V lab výsledek (buňky/ml) z-score X ,95 X ,85 X ,51 X ,41 X ,95 X ,96 počet laboratoří: 6 z toho vyhovuje: 6 z toho nevyhovuje: 0 X-vyhovuje,? - sporné,! - nevyhovuje vztažná hodnota: ,5 buňky/ml vztažná odchylka: 56259,1 buňky/ml interval správných hodnot: buňky/ml terč

73 Státní Objemová biomasa

74 Tabulka Z-score pro kvantitativní rozbor sinic - vz. 1A (objemová biomasa) V lab výsledek (mm3/l) z-score X ,60-1,29 X ,18-0,58 X ,22-0,44 X ,11-0,20 X 36 19,56 0,37 X ,05 1,08 X ,50 1,26 počet laboratoří: 7 z toho vyhovuje: 7 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 16,67 mm3/l vztažná odchylka: 7,79 mm3/l interval správných hodnot: 1,09-32,25 mm3/l Tabulka Z-score pro kvantitativní rozbor sinic - vz. 1B (objemová biomasa) V lab výsledek (mm3/l) z-score X ,30-1,02 X ,89-0,82 X 36 11,23-0,70 X ,77 0,19 X ,12 0,31 X ,11 0,66 X ,21 1,39 počet laboratoří: 7 z toho vyhovuje: 7 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 13,23 mm3/l vztažná odchylka: 2,87 mm3/l interval správných hodnot: 7,49-18,97 mm3/l

75

76

77

78

79

80 Státní

81 Státní Co dál s biomasou v koupacích vodách?

82 Státní Chlorofyl-a a feopigmenty

83 Chlorofyl-a a feopigmenty Příprava vzorků: vysoká koncentrace chlorofylu-a filtrace vzorku planktonní sítí mícháno ve 120 litrovém barelu celkem připraveno 15 vzorků SZÚ zpracování vzorků 1, 6, 10, 15 Státní

84 Vzorek 3A Šeberák

85 Vzorek 3A homogenita, stabilita

86 Tabulka Z-score pro chlorofyl-a vzorek 3A V lab výsledek (µg/l) z-score X ,6-1,03 X ,5-0,78 X ,8-0,62 X ,1-0,45 X ,1-0,06 X ,9 0,55 X ,1 1,60 X ,3 1,63 počet laboratoří: 8 z toho vyhovuje: 8 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 90,6 µg/l vztažná odchylka: 7,8 µg/l interval správných hodnot: ,2 µg/l terč Tabulka Z-score pro chlorofyl-a vzorek 3A V lab výsledek (µg/l) z-score X ,6-0,88 X ,5-0,67 X ,8-0,53 X ,1-0,39 X ,1-0,06 X ,9 0,47 X ,5 0,98 X ,1 1,38 X ,7 2,00 počet laboratoří: 9 z toho vyhovuje: 9 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 90,6 µg/l vztažná odchylka: ±20% interval správných hodnot: 72,48-108,72 µg/l účastník

87 Tabulka Z-score pro feopigmenty vzorek 3A V lab výsledek (µg/l) z-score X 36 23,9-1,11 X ,4-1,00 X ,8-0,70 X ,2-0,17 X ,8 0,41 X ,5 0,58 X ,1 0,71 X ,7 1,29 počet laboratoří: 8 z toho vyhovuje: 8 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 28,9 µg/l vztažná odchylka: 4,5 µg/l interval správných hodnot: 19,9-37,9 µg/l terč Tabulka Z-score pro feopigmenty vzorek 3A V lab výsledek (µg/l) z-score! ,4-3,01 X ,4-1,00 X ,8-0,70 X ,2-0,17 X ,8 0,41 X ,5 0,58 X ,1 0,71 X ,7 1,29 počet laboratoří: 8 z toho vyhovuje: 7 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 28,9 µg/l vztažná odchylka: 4,5 µg/l interval správných hodnot: 19,9-37,9 µg/l účastník

88 Vzorek 3B Vltava - Modřany

89 Vzorek 3B homogenita, stabilita

90 Tabulka Z-score pro chlorofyl-a vzorek 3B V lab výsledek (µg/l) z-score X ,7-1,39 X ,0-0,72 X ,2-0,37 X ,6 0,01 X ,6 0,03 X 36 18,1 0,16 X ,1 0,16 X ,2 0,19 X ,1 1,60 počet laboratoří: 9 z toho vyhovuje: 9 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 17,5 µg/l vztažná odchylka: ±40% interval správných hodnot: 10,5-24,5 µg/l terč Tabulka Z-score pro chlorofyl-a vzorek 3B V lab výsledek (µg/l) z-score X ,7-1,39 X ,0-0,72 X ,2-0,37 X ,6 0,01 X ,6 0,03 X ,1 0,16 X ,2 0,19 X ,1 1,60? ,1 2,44 počet laboratoří: 9 z toho vyhovuje: 8 z toho nevyhovuje: 1 vztažná hodnota: 17,5 µg/l vztažná odchylka: ±40% interval správných hodnot: 10,5-24,5 µg/l účastník

91 Tabulka Z-score pro feopigmenty vzorek 3B V lab výsledek (µg/l) z-score X ,7-1,60 X ,7-0,61 X ,9-0,40 X ,1-0,18 X ,5 0,20 X 36 7,0 0,68 X ,1 0,80 X ,6 1,25 počet laboratoří: 8 z toho vyhovuje: 8 z toho nevyhovuje: vztažná hodnota: 6,3 µg/l vztažná odchylka: 1 µg/l interval správných hodnot: 4,3-8,3 µg/l terč Tabulka Z-score pro feopigmenty vzorek 3B V lab výsledek (µg/l) z-score X ,7-1,60 X ,7-0,61 X ,9-0,40 X ,1-0,18 X ,5 0,20 X ,1 0,80 X ,6 1,25 počet laboratoří: 7 z toho vyhovuje: 7 z toho nevyhovuje: 0 vztažná hodnota: 6,3 µg/l vztažná odchylka: 1 µg/l interval správných hodnot: 4,3-8,3 µg/l účastník

92 Státní Vzorek 4 (extrakt)

93 Vzorek 4 (extrakt) homogenita, stabilita homogenita stabilita nesprávně uchováno správně uchováno správné zpracování zpracování s prodlevou

94 rozdíl absorbancí při 665 a 750 nm Absorbance (A 665 -A 750 )/1cm 0,15 0,14 0,13 0,12 0,11 0,10 0,09 0,08 0, SZU1 SZU6 SZU11 SZU16

95 Olšanský rybník Vzorek 5 - filtry Suchý led Státní

96 filtry zfialověly

97 stejný vzorek 24 h mrazáku (-18 C) extrakty z fialových filtrů vzorek vodního květu 24 h mrazáku (-18 C)

98 Vzorek 5 - homogenita

99 rozdíl absorbancí při 665 a 750 nm 5,00 4,50 4,00 3,50 3,00 2,50 2, SZU1 SZU2 SZU7 SZU12SZU17SZU22SZU27SZU28

100 Státní Chlorofyl - syntéza

101 Chlorofyl - syntéza 1,70 1,60 1,50 1,40 1,30 1,20 3A 3B Extrakt Filtry 1,10 1,00 0,90

102 přepočítaní absorbance při 665 nm přepočítaní absorbance při 665 nm přepočítaní absorbance při 665 nm Vliv doby extrakce Vliv doby extrakce 90% etanolem na výslednou absorbanci při 665 nm ve dvou vzorcích 3A, 3B a 5. Pro srovnatelnost byly výsledky účastníků přepočítány jednotně na optickou dráhu kyvety 1 cm, objem extrakčního činidla 1 ml a objem vzorku 1 litr. 10 9,8 9,6 9,4 9,2 9 8,8 8,6 8,4 8,2 8 MPZ chlorofyl-a (čas extrakce) - vzorek 3A čas extrakce v hodinách MPZ chlorofyl-a (čas extrakce) - vzorek 5 2,4 2,2 2 1,8 1,6 1,4 MPZ chlorofyl-a (čas extrakce) - vzorek 3B čas extrakce v hodinách 1, čas extrakce v hodinách

103 Zajímavé taxony Novinky v normách Státní

104 Microcystis botrys Podle Hindáka je na Slovensku častá (skoro až expanzivní) Má někdo pocit, že ji má ve vzorcích? _Microcystis_botrys_20x_2.jpg Státní

105 Revize norem A B C D Probíhá revize ČSN pro stanovení saprobního indexu E F ČSN Příloha B H Příklady vyjadřování jedinců G I Státní Některé posuny od striktního posuzování 100µm hranice K J L

106 Děkuji za pozornost a zase za rok na shledanou