Významné metabolické produkty a substráty
|
|
- Alexandra Tesařová
- před 5 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Významné metabolické produkty a substráty Kapitola zahrnuje přehled základních biochemických analytů, které se stanovují v laboratořích všech velikostí. Tyto analyty tvoří poměrně nehomogenní skupinu a to jak z hlediska analytického (metodického), tak klinického (význam a funkce v organismu). Následně je tedy kapitola rozdělena do pěti částí, které korespondují se základním dělením z pohledu obecné biochemie (struktura, funkce, metabolismus). Jedná se o proteiny, nebílkovinné dusíkaté látky, lipidy, sacharidy a barviva. V každé části jsou uvedeny základní analyty ev. analyty, které s danou problematikou souvisí a jejichž stanovení patří k běžné laboratorní praxi. Principy zde uváděných metod patří mezi doporučené rutinní metody dle EHK (Externí hodnocení kvality). Kromě toho lze použít též metody referenční (většinou ale ne v běžné praxi). Proteiny (bílkoviny) Jsou vysokomolekulární látky složené z více než 100 aminokyselin a s relativní molekulovou hmotností nad Jsou to látky amfoterní povahy. Při ph > 7 se chovají jako kyseliny a nesou záporný náboj. Při ph < 7 se chovají jako zásady a nesou kladný náboj. Elektroneutrální jsou při ph svého isoelektrického bodu. V krevním séru (plasmě) se dají prokázat stovky různých bílkovin, které se liší koncentrací, velikostí molekuly a funkcí. Většina je syntetizována v játrech a secernována do krve. V organismu plní řadu funkcí. Jsou zdrojem pro výstavbu a regeneraci buněk i tkání; zajišťují transport minerálů, lipidů, hormonů i katabolitů; podílejí se na udržení onkotického tlaku; zajišťují hemokoagulaci i fibrinolýzu; jsou energetickým zdrojem a součástí enzymů; plní některé speciální funkce (např. ochrana před volnými radikály). Principy metod používaných pro dělení, identifikaci a stanovení bílkovin jsou velmi rozdílné. K základním metodám patří metody elektroforetické (ELFO). Využívají se pro různé biologické materiály, zejména sérum (plasmu), moč a mozkomíšní mok. Pro rutinní ELFO se používá jako nosič agarosový gel nebo acetátcelulosa. Tak lze rozdělit bílkoviny krevního séra na 5 až 6 základních frakcí. Jsou to albumin a globuliny α 1, α 2, β 1, β 2, γ.
2 Elektroforéza bílkovin krevní plasmy v agarosovém gelu Vyhodnocení elektroforeogramu se provádí denzitometricky a poskytuje o frakcích bílkovin jen arbitrární číselné hodnoty. Pokud je známa i koncentrace celkové bílkoviny, lze jednotlivé frakce kvantifikovat. Při hodnocení výsledku je nutné počítat s faktem, že pouze frakce albuminu je homogenní (je tvořena jedinou bílkovinou). Zbylé frakce (globulinové) zahrnují množství různých proteinů, které se odlišují barvitelností, podílem na celkovém objemu a zejména funkcí. Ke kvantitativnímu stanovení jednotlivých proteinů (specifické proteiny) se používají metody imunochemické (imunoturbidimetrie, nefelometrie) v roztoku, ev. v gelu. Kromě základní zónové elektroforézy se využívá řada modifikací: agarosový gel + SDS; polyakrylamidový gel (PAAG); PAAG + SDS; kapilární elfo; izoelektrická fokusace; izotachoforesa. Pro identifikaci (průkaz) bílkovin je nejčastěji používána imunofixační elektroforéza a imunoelektroforéza. I tyto metodiky lze použít v různých úpravách pro speciální účely (např. protisměrné imunoelfo). Kromě metodik elektroforetických patří k běžným laboratorním metodám stanovení celkové bílkoviny, albuminu, specifických proteinů (jednotlivé bílkoviny krevní plasmy) a apoproteinů. Apoproteiny A, B (stanovují se nejčastěji) mají význam v metabolismu lipidů. Protože se jedná o proteinovou složku jednotlivých lipoproteinových tříd, jsou uváděny v této části. Též princip stanovení (imunochemie v roztoku) je shodný se stanovením specifických proteinů.
3 Celková bílkovina (TP) Referenční metoda: reakce s biuretovým činidlem. Doporučená metoda: reakce s biuretovým činidlem. Nejběžnější metoda pro stanovení bílkovin v séru. Reagují všechny látky se dvěma nebo více CONH skupinami. Peptidové vazby reagují s měďnatými ionty (Cu 2+ ) v alkalickém prostředí za vzniku modrofialového komplexu. Součástí reakčního činidla je i vinan sodno-draselný (jako komplexotvorné činidlo zabraňuje precipitaci Cu(OH) 2 ) a jodid draselný, který zabraňuje autoredukci Cu 2+. protein + Cu 2+ ph > 7 Cu protein komplex Intenzita zbarvení je úměrná koncentraci bílkoviny ve vzorku. Absorpční max.je při vlnové délce nm. Lze použít i bichromatické uspořádání (540, 700 nm), end-point měření. Pro stanovení celkové bílkoviny v jiných biologických tekutinách (moč, mozkomíšní mok) se používají metodiky na principu turbidimetrie, nefelometrie, ev. též fotometrie. Látky reagující s bílkovinami jsou nejčastěji benzethonium chlorid, pyrogallová červeň + molybdenan sodný, Coomasie blue, ev. kyselina sulfosalicylová, kyselina trichloroctová. Podmínky měření pak závisí na výsledném produktu reakce, tj. zda vzniká zákal nebo barevný komplex. Albumin Referenční metoda není k dispozici. Doporučená metoda: fotometrické metody (BCG, BCP), imunoturbidimetrie, imunonefelometrie. Pro rutinní stanovení v séru se používají metody fotometrické. BCP (bromkrezolový purpur) se ve slabě kyselém prostředí (za přítomnosti povrchově aktivních látek) váže na albumin za vzniku červeného komplexu. Jeho množství je úměrné koncentraci albuminu ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce 600 nm, end-point měření. Lze použít i polychromatické měření (600, 540, 700 nm), které zvyšuje citlivost a minimalizuje spektrální interferenci lipemie. ph 4,9 Albumin + BCP Albumin BCP komplex
4 BCG (bromkresolová zeleň) dává s albuminem (ve slabě kyselém prostředí) modrozeleně zbarvený komplex. Jeho množství je úměrné koncentraci albuminu ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce nm, end-point měření. ph 4,3 Albumin + BCG Albumin BCG komplex Metody imunoturbidimetrické nejsou pro tento účel časté. Za použití specifického antiséra vzniká precipitát, intenzita zákalu je úměrná koncentraci albuminu ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce 340 nm. Vzhledem k vysoké koncentraci albuminu v séru a charakteru metody jsou vzorky vždy před analytickou reakcí ředěny. Imunoturbidimetrie se využívá pro stanovení albuminu zejména v moči (mikroalbuminurie). Albumin reaguje se specifickou protilátkou za tvorby precipitátu; jeho intenzita se měří při 340 nm. Pro ovlivnění stability vzniklého komplexu se přidává polyethylenglykol (PEG). PEG Albumin + anti-alb. Albumin anti-alb. komplex Tento typ měření vyžaduje sestrojení kalibrační křivky. Imunoturbidimetrie (ev. imunonefelometrie) se používá běžně pro stanovení koncentrace jednotlivých specifických proteinů a apoproteinů. Tyto reakce jsou založeny na imunochemickém principu, tj. reakci mezi antigenem (Ag) a specifickou protilátkou (Ab) za vzniku imunokomplexu (Ag Ab) = precipitát. Množství precipitátu je závislé na kvantitativním poměru Ag/Ab. Při imunochemických reakcích v roztoku by reakce měla probíhat v zóně ekvivalence; precipitát je stabilizován přídavkem PEG; intenzita zákalu je úměrná koncentraci Ag ve vzorku; absorpční max. je při vlnové délce 340 nm. PEG Ag + Ab Ag Ab Specifické proteiny (příklad): C-reaktivní protein (CRP), α 1 -kyselý glykoprotein (orosomukoid), prealbumin, transferin, imunoglobuliny IgA, IgG, IgM.
5 Apoproteiny: apo-ai, apo-b V některých případech (pro zvýšení citlivosti metody) je používána varianta, kdy jsou příslušné protilátky navázány na latexové částice (PETIA). Nejčastěji u stanovení CRP. Měření probíhá při 340 nm; ev. bichromaticky (340, 700 nm), end-point měření. Nebílkovinné dusíkaté látky Značnou část dusíkatých látek v séru (plasmě) tvoří bílkoviny. Mimoto jsou zde přítomny i dusíkaté látky nebílkovinné povahy. Řada z nich má diagnostický význam. Nejčastěji se jedná o látky odpadní (konečné metabolity); liší se jak svým původem a významem tak i koncentrací. Nejdůležitější je močovina (urea, diamid kyseliny uhličité), která tvoří 48% těchto látek. Močovina je konečný metabolit dusíku bílkovin (aminokyselin) a primárním produktem detoxikace amoniaku. Kreatinin (cyklický imid kreatinu) vzniká jako metabolit kreatinu a kreatinfosfátu. Kyselina močová (1,3,8 trioxopurin) je u člověka konečným produktem metabolismu purinových basí (adenin, guanin). Amoniak vzniká při degradaci dusíku aminokyselin v játrech. Jedná se o toxickou látku, která je ihned metabolizována dále na močovinu. Močovina (urea) Referenční metoda: ID-GC/MS Doporučená metoda: UV enzymová metoda (s GMD), elektrochemické stanovení (biosenzory). Všechny enzymové metody jsou založeny na specifickém štěpení ureasou. Produkty reakce je oxid uhličitý a amoniak. Ten dále reaguje s 2-oxoglutarátem za přítomnosti glutamátdehydrogenasy (GMD) a koenzymu NADH. Vzniká L-glutamát za současné oxidace NADH na NAD +. Rychlost úbytku NADH je přímo úměrná koncentraci močoviny. Průběh reakce je sledován změnou absorbance (340 nm), kinetické uspořádání. Lze měřit i bichromaticky (340, 383 nm). ureasa močovina + H 2 O 2 NH CO 3 2-
6 GMD NH oxoglutarát + NADH L-glutamát + NAD + + H 2 O Při využití enzymových elektrod je ureasa zakotvena v příslušném nosiči na povrchu elektrody (možnost různého konstrukčního uspořádání). ureasa močovina + H 2 O CO NH 3 NH 3 + H 2 O NH 4 OH NH 4 OH NH OH - Lze měřit jednotlivé produkty reakcí (tj. CO 2, NH 3 v plynném stavu, NH 4 + ). Měří se vždy rozdíl potenciálu mezi měrnou a referenční elektrodou; potenciometrické stanovení. Kreatinin (KNN) Referenční metoda: ID-GC/MS, ID-LC/MS. Doporučená metoda: HPLC, Jaffé bez deproteinace, enzymové metody. Většina metod je založena na modifikacích Jaffého reakce spočívající v reakci kyseliny pikrové s kreatininem v alkalickém prostředí. Modifikace zvyšuje specifitu reakce a eliminuje vliv tzv. Jaffé pozitivních látek, které falešně pozitivně ovlivňují výsledky. Kreatinin reaguje s kyselinou pikrovou (ph > 7) za vzniku barevného komplexu (oranžově-červený). Rychlost tvorby komplexu je přímo úměrná koncentraci v séru. Absorpční max. je při vlnové délce nm, kinetické měření. Lze měřit i bichromaticky (510, 600 nm). ph > 7 kreatinin + kys. pikrová oranžově červený komplex NaOH Enzymové metody nejsou časté, ale jejich používání se zvyšuje. Lze použít několik variant. První je založena na Tanganelliho reakci. Kreatinin je za přítomnosti
7 kreatindeimininasy (CRDIM) rozložen na amoniak a N-methylhydantoin. Následně (za katalýzy glutamátdehydrogenasou, GMD) vzniká z amoniaku, 2-oxoglutarátu a NADPH glutamát a NADP +. Rychlost úbytku NADPH je přímo úměrná koncentraci kreatininu. Průběh reakce je sledován změnou absorbance (340 nm), používá se kinetické uspořádání. CRDIM kreatinin N-methylhydantoin + NH 3 GMD NH oxoglutarát + NADPH L-glutamát + NADP + + H 2 O Další varianta vychází z přeměny kreatininu kaskádou enzymatických reakcí na sarkosin. Jeho oxidací sarkosinoxidasou (SOD) vzniká glycin, formaldehyd a peroxid vodíku. Ten se stanoví modifikovanou Trinderovou reakcí s 4-aminoantipyrinem (4-AAP) a N-ethyl- N-sulfopropyl-m-toluidinem (TOPS) za vzniku červeně zbarveného chinoniminového komplexu. Intenzita zbarvení je úměrná koncentraci kreatininu v séru. Absorpční max. je při vlnové délce 552 nm, end-point měření. CRIMI kreatinin + H 2 O N-methylhydantoin + NH 3 NMHasa N-methylhydantoin + ATP + 2H 2 O N-karbamoylsarkosin + ADP + P i GSHase N-karbamoylsarkosin + H 2 O sarkosin + NH 3 + CO 2 SOD sarkosin + O 2 + H 2 O glycin + HCHO + H 2 O 2 POD H 2 O AAP + TOPS červeně zbarvený komplex + 2H 2 O
8 V poslední variantě lze kreatinin převést pomocí hexokinasy a ATP na kreatinfosfát a ADP. ADP se za přítomnosti pyruvátkinasy a fosfoenolpyruvátu přemění na pyruvát a ATP. V posledním kroku laktátdehydrogenasa (LD) oxiduje NADH na NAD + za současné redukce pyruvátu na laktát. Koncentrace kreatininu je přímo úměrná úbytku absorbance (340 nm), kinetické měření. Kyselina močová (KM, UA) Referenční metoda: ID-GC/MS, HPLC. Doporučená metoda: enzymové fotometrické metody. Všechny metodiky vycházejí z oxidace kyseliny močové kyslíkem za katalýzy urikasou. Vzniká peroxid vodíku a allantoin. Koncentraci kyseliny močové lze stanovit nepřímo (stanovení vzniklého H 2 O 2 ) nebo přímo ze změny absorbance při 293 nm. U nepřímého stanovení reaguje 4-aminoantipyrin (4-AAP) a N-ethyl-N-(2-hydroxy-2- sulfopropyl)-m-toluidin (TOOS) se vzniklým peroxidem vodíku za vzniku červeně zbarveného chinoniminového komplexu. Intenzita zbarvení je úměrná koncentraci kyseliny močové ve vzorku. Absorpční maximum je při vlnové délce 520 nm, ev. 545 nm, end-point měření. urikasa kys. močová + O 2 + 2H 2 O allantoin + H 2 O 2 + CO 2 POD 2H 2 O AAP + TOOS červeně zbarvený komplex + 4H 2 O Přímé stanovení vychází z faktu, že kyselina močová absorbuje světlo při vlnové délce 293 nm. Allantoin, který vzniká oxidací kyseliny močové při 293 nm neabsorbuje. Změna absorbance způsobená úbytkem kys. močové je přímo úměrná koncentraci ve vzorku. Měření je bichromatické (293, 700 nm), end-point. urikasa kys. močová + O 2 + 2H 2 O allantoin + H 2 O 2 + CO 2 (absorbuje při 293 nm) (neabsorbuje při 293 nm)
9 Pro stanovení lze použít i metody elektrochemické (měření úbytku kyslíku Clarkovou elektrodou po přidání vzorku do reakční směsi, která obsahuje urikasu). Stejný princip se využívá i při stanovení pomocí enzymových elektrod. Amoniak Pro stanovení amoniaku se používají enzymové metody využívající glutamátdehydrogenasu (GMD). Ta katalyzuje kondenzaci amoniaku s 2-oxoglutarátem za souběžné oxidace NADPH. Změna absorbance (340nm) způsobená úbytkem NADPH je přímo úměrná koncentraci amoniaku při kinetickém měření. Lze měřit i bichromaticky (340, 383 nm). GMD NH oxoglutarát + NADPH L-glutamát + NADP + + H 2 O Specifické podmínky preanalytické fáze: Odběr do EDTA (plasma), plná zkumavka, uzavřená; ihned po odběru uchovávat a transportovat v ledové tříšti; okamžitá centrifugace (nejlépe +4 C); analýza do 20-ti (max. 30-ti) minut. Lipidy (tuky) Jsou strukturně i funkčně velmi různorodé látky a mají i rozdílné chemické vlastnosti. Převážná část lipidů je dobře rozpustná v organických rozpouštědlech (aceton, chloroform, ether) a prakticky nerozpustná ve vodě. Proto jsou v séru (plasmě) transportovány pomocí vazby na bílkoviny. Vzniklé částice se nazývají lipoproteiny. Jádro lipoproteinů tvoří nepolární triacylglyceroly a esterifikovaný cholesterol, na povrchu jsou fosfolipidy, volný cholesterol a proteiny (apoproteiny). V organismu jsou lipidy zdrojem pro výstavbu membránových buněčných útvarů, zdrojem energie a jsou prekurzory řady biologicky aktivních látek (steroidní hormony, prostaglandiny, žlučové kyseliny, aj.). K rozdělení lipoproteinů na jednotlivé třídy se využívá ultracentrifugace (dělení dle hmotnosti). Mezi starší metodiky patří elektroforéza (dělení dle pohyblivosti). Ultracentrifugací lze lipoproteiny rozdělit na 5 základních tříd: chylomikrony, VLDL, IDL, LDL, HDL.
10 Tab : Rozdělení a vlastnosti hlavních tříd lipoproteinů Typ lipoproteinu Hustota Elektroforetická Hlavní Zdroj [g/ml] pohyblivost apoprotein chylomikrony cca 0,980 zůstávají na startu tenké střevo B-48 lipoproteiny o velmi nízké hustotě (VLDL) cca 1,006 preβ játra B-100 lipoproteiny o střední hustotě (IDL) 1,006-1,019 - katabolismus VLDL B-100 lipoproteiny o nízké hustotě (LDL) 1,019-1,063 β katabolismus IDL B-100 lipoproteiny o vysoké hustotě (HDL) 1,063-1,210 α játra, tenké střevo aj. A-I (A-II) K nejběžnějším analytům patří cholesterol. Asi 70 % z celkového množství je esterifikováno; v krevním séru je součástí lipoproteinů, nejvíce LDL. Vzhledem k jeho významu (rizikový faktor rozvoje aterosklerosy) se stanovuje i cholesterol v těch třídách lipoproteinů, které mají rozhodující význam v patogenesi aterosklerosy, tj. HDL cholesterol a LDL cholesterol. Součástí lipoproteinů jsou dále triacylglyceroly. Skládají se z glycerolu, na který jsou esterovou vazbou vázány tři vyšší mastné kyseliny (převážně se 16-ti a 18-ti atomy uhlíku). Spektrum základních lipidových parametrů doplňují ještě apoproteiny A, B. Ty regulují a kontrolují metabolismus lipoproteinů, působí jako kofaktory lipolytických enzymů a zprostředkovávají vazbu lipoproteinů na specifické receptory. Lp(a) je částice řadící se do třídy LDL. Dědí se autosomálně dominantně, zvýšená koncentrace v séru (plasmě) je dána geneticky. Metabolicky nejaktivnější složkou lipidů jsou mastné kyseliny (tzv. neesterifikované FA). V séru se vyskytují hlavně kyselina olejová, palmitová a stearová. Pro většinu orgánů jsou (vedle glukosy) nejdůležitějším energetickým substrátem. Biologický poločas je velmi krátký (2 5 min). Cholesterol (TCH) Referenční metoda: ID-GC/MS; ID-LC/MS Doporučená metoda: CHOD-PAP. Protože asi 70 % cholesterolu je esterifikováno, prvním krokem stanovení je hydrolýza na volný cholesterol a mastné kyseliny za katalýzy cholesterolesterasou (CE). Cholesterol je poté (spolu s volným cholesterolem) oxidován za katalýzy cholesteroloxidasou (CHOD) na cholesten-3-on a peroxid vodíku (H 2 O 2 ). Poslední fází je oxidační kopulace 4-aminoantipyrinu (4-AAP) s fenolem za přítomnosti H 2 O 2. Reakce je katalyzována peroxidasou (POD). Vzniká červeně zbarvený chinoniminový komplex.
11 Intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci cholesterolu ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce nm; end-point měření. estery cholesterolu + H 2 O cholesterol + FA CE CHOD cholesterol + O 2 cholesten-3-on + H 2 O 2 POD 2 H 2 O AAP + fenol červeně zbarvený komplex + 4 H 2 O Poslední krok této reakce (oxidační kopulace) může být ve variantě, kdy H 2 O 2 oxiduje (katalýza POD) N, N-diethylanilin-HCl/4-AAP (DEA-HCl/AAP) na červeně zbarvený komplex. Absorpční max. je při vlnové délce 540 nm. Měření je polychromatické (540, 450, 700 nm), end-point. Triacylglyceroly (TAG) Referenční metoda: ID-GC/MS. Doporučená metoda: GPO-PAP. Triacylglyceroly jsou hydrolyzovány lipoproteinovou lipasou (LPL) na glycerol a volné mastné kyseliny. Následně je glycerol fosforylován ATP za katalýzy glycerolkinasou (GK) na glycerol-3-fosfát. Ve třetím kroku se glycerol-3-fosfát oxiduje (katalýza glycerolfosfátoxidasou GPO) na dihydroxyacetonfosfát za vzniku H 2 O 2. Poslední fází je opět oxidační kopulace 4-AAP s 4-chlorfenolem za přítomnosti H 2 O 2 a katalýzy peroxidasou (POD). Vzniká červeně zbarvený chinoniminový komplex. Intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci triacylglycerolů ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce nm; end-point měření. LPL Triacylglyceroly + 3 H 2 O glycerol + 3 FA
12 GK glycerol + ATP glycerol-3-fosfát + ADP GPO glycerol-3-fosfát + O 2 dihydroxyacetonfosfát + H 2 O 2 POD 2 H 2 O AAP + 4-chlorfenol červeně zbarvený komplex + 4 H 2 O Vzniklý glycerol (1. krok reakce) lze též stanovit užitím glyceroldehydrogenasy (GD) a NAD +. Změna absorbance při 340 nm způsobená vznikem NADH je přímo úměrná množství glycerolu. Měření je bichromatické (340, 383 nm), kinetické. GD glycerol + NAD + dihydroxyaceton + NADH + H + Další možností je stanovení ADP (2. krok základní reakce). Využívá se jeho fosforylace na ATP za přítomnosti fosfoenolpyruvátu (PEP) a katalýzy pyruvátkinasou (PK). Vzniklý pyruvát je redukován na laktát. Reakci katalyzuje laktátdehydrogenasa (LD). Současně dochází k oxidaci NADH. Změna absorbance při 340 nm je úměrná množství glycerolu ve vzorku. PK ADP + PEP pyruvát + ATP POD pyruvát + NADH + H + NAD + + laktát HDL cholesterol (přímé stanovení) Stanovení cholesterolu v HDL částicích je homogenní metoda, která již nepočítá s úpravou vzorků (separační kroky) a centrifugací. Stanovení probíhá vždy ve dvou krocích. V prvním kroku se polyanionty selektivně adsorbují na povrch lipoproteinových částic LDL, VLDL a chylomiker. Vznikají komplexy, které jsou rezistentní vůči detergentu. Zvyšuje se tak selektivita pro vlastní působení detergentu a příslušných enzymů na částice
13 HDL. Ve druhém kroku pak detergent rozpustí HDL částice, rozštěpí je a současně inhibuje reakci enzymů (pro stanovení cholesterolu) s LDL, VLDL a chylomikrony tak, že se souběžně adsorbuje na jejich povrch. Následně jsou estery cholesterolu a cholesterol uvolněny z HDL částic a je stanoven cholesterol metodou CHOD-PAP (viz výše). LDL, VLDL, chylomikra + polyanionty lipoprotein-polyaniont komplex (stabilní) HDL + detergent rozštěpení HDL (micelární komplexy) CE, CHOD rozštěpený HDL cholesten-3-on + H 2 O 2 POD H 2 O AAP + DSBmT červeně zbarvený komplex Absorpční max. je při vlnové délce nm. Lze použít i bichromatické měření (600, 700 nm); end-point (DSBmT = N, N-bis(4-sulfobutyl)-m-toluidin). V modifikaci této reakce lze nejprve ochránit HDL částice. Uvolnit a eliminovat cholesterol a estery cholesterolu z ostatních částic. Teprve poté je pomocí detergentu cholesterol a jeho estery uvolněn z částic HDL a následně stanoven běžným postupem CHOD-PAP. LDL cholesterol (přímé stanovení) Obdobně jako u HDL cholesterolu i toto stanovení probíhá ve dvou krocích. Nejprve je uvolněn (pomocí detergentu 1) cholesterol ze všech lipoproteinových částic vyjma LDL. Proběhne reakce (CHO-PAP) za vzniku barevného produktu. Částice LDL jsou během tohoto kroku inaktivní. Vlastní stanovení cholesterolu v LDL proběhne následně po přidání specifického detergentu 2, který rozštěpí LDL částice a uvolní k reakci cholesterol i jeho estery. Stanovení pak probíhá standardní metodou. 1. detergent 1 HDL, VLDL, chylomikra cholesterol
14 CE, CHOD cholesterol cholesten-3-on + H 2 O 2 POD H 2 O AAP + DSBmT červeně zbarvený komplex 2. detergent 2 LDL cholesterol CE, CHOD cholesterol cholesten-3-on + H 2 O 2 POD H 2 O AAP + DSBmT červeně zbarvený komplex V modifikaci tohoto stanovení je peroxid vodíku vznikající v kroku 1 eliminován reakcí s katalasou. Ta je poté inhibována azidem sodným. Pro oxidační kopulaci lze použít TOOS (N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylanilin) místo DSBmT. Stanovení neesterifikovaných mastných kyselin (NEFA) se běžně neprovádí, přestože metoda je k dispozici. Sacharidy (cukry) Představují nejdůležitější a nejrychleji využitelný zdroj energie. Fyziologicky důležité jsou zejména monosacharidy, a to jak hexosy (glukosa, fruktosa, galaktosa) tak pentosy (ribosa, deoxyribosa). Z disacharidů lze uvést (jako významné) sacharosu, laktosu a maltosu. Glukosa je nejběžnější přirozená organická sloučenina, základní monosacharid. Na základě poruch jejího metabolismu (viz kapitola 3.1.) se manifestuje závažné metabolické onemocnění diabetes mellitus. Proto patří stanovení glukosy v biologických tekutinách k základním vyšetřením. Z celého spektra vyšetření používaných k diagnostice, kontrole průběhu a úspěchu léčby lze využít stanovení glykovaného hemoglobinu a AGE látky (konečné produkty pokročilé glykace).
15 Aldehydická skupina glukosy (ev. jiných sacharidů) se váže na volné aminoskupiny bílkovin (zejména aminoskupinu lysinu). Tento proces se nazývá glykace. Jedná se o neenzymatický děj a jeho rychlost závisí na koncentraci glukosy. Koncentraci bílkovin lze považovat za konstantní. Glykaci podléhá též hemoglobin v erytrocytech za vzniku tří derivátů HbA 1a, HbA 1b, HbA 1c, kdy poslední frakce je vlastní stabilní ketoamin (glykovaný hemoglobin). Glykaci podléhají i proteiny. Pokud mají dlouhý poločas, podléhají změnám vedoucím ke vzniku tzv. křížových vazeb (cross-link). Postupně dochází k ireversibilní přeměně na tzv. AGE látky s odlišnými vlastnostmi než původní bílkoviny, které jsou toxické. S metabolismem glukosy (glykolýza) úzce souvisí i produkce laktátu (kyselina mléčná). Jeho stanovení se používá pro posouzení hypoxie organismu (laktátová acidóza). Glukosa Referenční metoda: ID-GC/MS Doporučená metoda: GOD-PAP fotometricky, GOD-PAP ampérometricky, metoda s hexokinasou, enzymové elektrody (biosensory). Nejčastěji používaná metoda je GOD-PAP. Glukosa je oxidována kyslíkem. Reakci katalyzuje glukosaoxidasa (GOD). Při reakci vzniká glukonolakton a peroxid vodíku (H 2 O 2 ), který následnou oxidační kopulací s 4-aminoantipyrinem (4-AAP) a fenolem dává vznik červeně zbarvenému komplexu (chinonimin). Poslední krok reakce je katalyzován peroxidasou (POD). Intenzita zbarvení je úměrná koncentraci glukosy ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce 505 nm. Měření probíhá v režimu end-point. GOD D-glukosa + O 2 + H 2 O D-glukonolakton + H 2 O 2 POD 2 H 2 O AAP + fenol červeně zbarvený komplex + 4 H 2 O Stále více se využívá metoda s hexokinasou. Glukosa je fosforylována ATP za katalýzy hexokinasou (HK). Vzniklý glukoso-6-fosfát je poté oxidován glukoso-6- fosfátdehydrogenasou (G-6-PD); současně je redukován NAD +. Jeden mol NAD + je redukován vždy jedním molem glukosy. Změna absorbance při 340 nm je úměrná koncentraci glukosy. Měření je end-point. Lze použít i bichromatické měření (340, 383 nm).
16 HK D-glukosa + ATP D-glukoso-6-fosfát + ADP G-6-PD D-glukoso-6-fosfát + NAD + D-6-fosfoglukonát + NADH + H + (Jako redox dvojici lze použít i NADP + NADP + H + ) Elektrochemické metody jsou převážně založeny na užití Clarkovy kyslíkové elektrody. Koncentrace glukosy se stanoví buď z úbytku kyslíku v reakční směsi, která obsahuje GOD a katalasu nebo pomocí enzymové elektrody (elektroda opatřená membránou obsahující GOD), ampérometrický princip stanovení. Glykovaný hemoglobin (HbA 1C ) Referenční metoda: HPLC-ESI/MS; HPLC-CE Doporučená metoda: HPLC, LC, imunochemické metody s kalibrátorem s návazností na metodu IFCC. Záznam chromatogramu a vyhodnocení glykovaného hemoglobinu Glykovaný hemoglobin (Hb vzniklý reakcí terminálních NH 2 skupin β-řetězců HbA s glukosou) je stanoven po hemolýze z plné krve. Metody HPLC, LC využívají separace na slabě kyselých ionexech. Jednotlivé frakce Hb jsou nejprve rozděleny dle jejich fyzikálněchemických vlastností v měnícím se prostředí (změna ph, koncentrace iontů).
17 Z chromatogramu je vyhodnocen pík pro HbA 1c. Pík není homogenní, separaci ovlivňují podmínky celého systému. Absorpční max. pro HbA 1c je při vlnové délce 415 nm. Kromě klasických separačních technik se používají i imunochemické postupy v různých variantách. Nejčastěji se jedná o inhibiční imunoturbidimetrické stanovení (TINIA). V tomto případě je pro stanovení HbA 1c ještě nutná znalost koncentrace celkového hemoglobinu (Hb). Metoda je založena na modifikaci hematinové reakce. Z hodnot obou stanovení (Hb, HbA 1c ) je vypočteno procento glykovaného hemoglobinu vzhledem k celkovému Hb a vyjádřeno ve tvaru % HbA 1c. Ke vzorku lyzované plné krve se přidá v nadbytku protilátka proti HbA 1c. Nevázaný podíl protilátky se stanoví po přidání polyhaptenového činidla obsahujícího násobné specifické epitopy HbA 1c. Polyhapten reaguje s přebytkem protilátky za vzniku nerozpustného komplexu. Rychlost reakce je měřena turbidimetricky při vlnové délce 340 nm (ev. bichromaticky při 340, 700 nm) a je nepřímo úměrná koncentraci HbA 1c ve vzorku. HbA 1c + antihba 1c komplex HbA 1c antihba 1c antihba 1c (přebytek) + polyhapten komplex antihba 1c polyhapten (nerozpustný) AGE látky Stanovení se nejčastěji provádí kompetitivní imunoanalýzou s použitím polyklonálních protilátek proti AGE. Detekce fluorometricky (emisní max. v oblasti 440 nm, po excitaci zářením o vlnové délce 370 nm). Laktát Enzymové metody využívají nejčastěji oxidaci laktátu na pyruvát za katalýzy laktátdehydrogenasou (LD). Změna absorbance (způsobená vznikajícím NADH) je úměrná koncentraci laktátu. Měření je bichromatické (340, 383 nm), end-point. LD L-laktát + NAD + pyruvát + NADH + H + Ve variantě tohoto principu lze použít oxidaci laktátu za katalýzy laktátoxidasou (LOX). Vznikající peroxid vodíku (H 2 O 2 ) poté reaguje s 4-AAP a THB (2,4,6-tribrom-3-
18 hydroxybenzoová kyselina) za vzniku červeného chinoniminového komplexu. Reakce je katalyzována peroxidasou (POD). Intenzita zbarvení je úměrná koncentraci laktátu ve vzorku. Absorpční max. je při vlnové délce 552 nm, end-point měření. LOX L-laktát + O 2 pyruvát + H 2 O 2 2 H 2 O AAP + THB červený komplex + 4 H 2 O Pro stanovení laktátu lze použít i enzymové elektrody. Na povrch membrány je imobilizována laktátoxidasa (LOX). Vznikající peroxid vodíku (H 2 O 2 ) je dále oxidován na Pt elektrodě. Změna proudu je úměrná výchozí koncentraci laktátu ve vzorku; ampérometrické stanovení. Barviva Mezi barviva se v klinické biochemii řadí látky, které vznikají v organismu a tvoří nehomogenní skupinu. Lze je třídit z několika hledisek. Nejobvyklejší je dělení dle příbuznosti chemické struktury na barviva pyrrolová, karoteny, flaviny a melaniny. Nejvíce zastoupená jsou barviva pyrrolová, jejichž základní struktura se odvozuje od pyrrolu. Jeho čtyři jádra jsou spojena do cyklu pomocí methinových resp. methylenových můstků za vzniku heterocyklických tetrapyrrolů (porfyrinů). Jsou-li pyrrolová jádra spojena lineárně, pak se od této struktury odvozují barviva žlučová. Z pyrrolových barviv se v organismu vyskytují a nejvíce využívají v laboratorní diagnostice hemoglobin a jeho deriváty (glykovaný Hb, oxy-hb, CO-Hb, met-hb, myoglobin) a bilirubin. Bilirubin je strukturně nejednotná látka tvořená řadou tetrapyrrolů. Vzniká při štěpení hemu v poloze α z hemoglobinu. Za fyziologického ph je ve vodě téměř nerozpustný. Isomery β, γ, δ jsou rozpustnější a mohou se vylučovat močí. Isomer α na tyto rozpustnější isomery přechází na světle. Bilirubin Vzhledem k nerozpustnosti ve vodě je bilirubin α vázán na hydrofilní nosič (albumin), který umožní transport bilirubinu ve vodném prostředí. Vzniklý komplex je tvořen v molárním poměru 1:1. Při průchodu játry je bilirubin esterifikován s kyselinou
19 glukuronovou (mono-, diglukuronid). Tento tzv. konjugovaný bilirubin je rozpustný ve vodě. Dle vlastností a výskytu lze tedy bilirubiny rozdělit na: bilirubin nekonjugovaný, vázaný na albumin, neesterifikovaný; dle rekce s činidlem někdy označovaný nepřímý. bilirubin konjugovaný (Dbil), esterifikovaný; přímý reaguje přímo s činidlem, není nutné použít akcelerátor. Referenční metoda: Doumas Perry. Doporučené metody: Jendrassik Grof, fotometrické metody s DCA a DPD, přímá bilirubinometrie. Nejrozšířenější metody jsou založeny na kopulaci s diazoniovými solemi za vzniku barevných azoderivátů, kdy zbarvení závisí na ph, metoda Jendrassik Grof. Bilirubin přímý: Diazotovaná kyselina sulfanilová (dusitan sodný, kys. sulfanilová, nízké ph) kopuluje s bilirubinem za vzniku azobilirubinu (červený chromofor). HCl kys. sulfanilová + NaNO 2 diazotovaná kys. sulfanilová ph 1,5 bilirubin + diazot. kys. sulfanilová + NaNO 2 azobilirubin Absorpční max. je při vlnové délce nm, end-point měření. Lze použít i bichromatické měření (540, 700 nm). Bilirubin nepřímý: Při současném použití akcelerátoru (kofein, benzoan sodný) se stanoví celkový bilirubin (tj. současně přímý i nepřímý). Reakční prostředí (akcelerátor) umožní uvolnit bilirubin z vazby na albumin. Průběh vlastní reakce stanovení je poté shodný jako u bilirubinu přímého. Literatura: 1. Doležalová V., Breinek P., Fischer J. a kol. Principy biochemických vyšetřovacích metod. I. část. Brno : Institut pro další vzdělávání pracovníků ve zdravotnictví, 1995, 234 s., ISBN X. 2. Jacobs, D.S., Oxley, D.K., DeMott, W.R. Laboratory Test Handbook, 5 th edition. Cleveland : Lexi-Comp Inc, 2001, 1031 p., ISBN
20 3. Racek, J., Eiselt, J., Friedecký, B. et al. Klinická biochemie. Praha : Galén - Karolinum, 1999, 317 s., ISBN Burtis, C. A., Ashwood, E. R. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3 rd Edition. Philadelphia: W. B. Saunders Co., 1999, 1917 p., ISBN Zima, T., Kazda, A., Průša, R. et al. Laboratorní diagnostika. Praha : Galén, 2002, 728 s., ISBN
Lipidy Lipoproteiny Apolipoproteiny Petr Breinek
Lipidy Lipoproteiny Apolipoproteiny Petr Breinek Lipidy_2014 1 Lipos = tuk Lipidy Význam lipidů v organismu 1) Zdroj energie (tukové buňky) + zdroj esenciálních mastných kyselin 2) Strukturní funkce (součást
VíceLipidy Lipoproteiny Apolipoproteiny Petr Breinek
Lipidy Lipoproteiny Apolipoproteiny Petr Breinek BC_Lipidy_2011 1 Lipos = tuk Lipidy Význam lipidů v organismu 1) Zdroj zásobní energie alternativní ke glukóze (triacylglyceroly) 2) Součást buněčných membrán
VíceKlinicko-biochemická diagnostika
Klinicko-biochemická diagnostika 1. Kvalitativní analýza 2. Semikvantitativní analýza diagnostické proužky 3. Kvantitativní analýza Spektroskopické metody - Absorpční Fotometrie UV/VIS (kolorimetrie) -
VíceLIPIDY. Enzymové metody Hydrolýza m že být provedena klasicky pomocí roztoku hydroxidu za zvýšené teploty nebo pomocí enzymu cholesterolesterasy:
LIPIDY Cholesterol Obrázek. 1. P evzato z Textbook of Biochemistry T.M. Devlin a kol, 2006. Cholesterol (obrázek.1) stanovujeme celkový suma cholesterolu a jeho ester. 60-70% cholesterolu v séru je esterifikováno.
VíceMetabolismus lipidů a lipoproteinů. trávení a absorpce tuků
Metabolismus lipidů a lipoproteinů lipidy ~ 98-99% - triacylglyceroly zbytek cholesterol (fytosteroly, ergosterol,..) fosfolipidy DAG, MAG, vitamíny rozp. v tucích, steroidy, terpeny, volné mastné kyseliny
VíceBILIRUBIN a IKTERUS. Vznik a metabolismus bilirubinu:
Vznik a metabolismus bilirubinu: BILIRUBIN a IKTERUS Až 80% bilirubinu vzniká rozpadem hemu ze stárnoucích červených krvinek. Zbytek pochází např. z prekurzorů červené krevní řady či z myoglobinu. Nejprve
VíceGlykovaný hemoglobin. Ing. Martina Podborská, Ph.D. OKB FN Brno. Školní rok 2015/2016. Zpracováno s pomocí přednášek RNDr.
Glykovaný hemoglobin Ing. Martina Podborská, Ph.D. OKB FN Brno Zpracováno s pomocí přednášek RNDr. Petra Breineka Školní rok 2015/2016 Glykovaný hemoglobin (HbA 1c ) Hemoglobin [http://sweet-aboutme.webnode.cz]
VíceGLUKÓZA a DIABETES MELLITUS
GLUKÓZA a DIABETES MELLITUS Udržování stálé hladiny glukózy je nutné pro plynulé zásobení buněk energií. Při jejím nedostatku získává organismus glukózu z glykogenu nebo ji tvoří z nesacharidových zdrojů,
VíceBiochemie jater. Vladimíra Kvasnicová
Biochemie jater Vladimíra Kvasnicová Obrázek převzat z http://faculty.washington.edu/kepeter/119/images/liver_lobule_figure.jpg (duben 2007) Obrázek převzat z http://connection.lww.com/products/porth7e/documents/ch40/jpg/40_003.jpg
VíceGlukóza Ing. Martina Podborská, Ph.D. OKB FN Brno Zpracováno s pomocí přednášek RNDr. Petra Breineka Školní rok 2015/2016
Glukóza Ing. Martina Podborská, Ph.D. OKB FN Brno Zpracováno s pomocí přednášek RNDr. Petra Breineka Školní rok 2015/2016 Glukóza klinický význam FPG (plazmatická koncentrace glukózy v žilní krvi nalačno)
VíceInovace profesní přípravy budoucích učitelů chemie
Inovace profesní přípravy budoucích učitelů chemie I n v e s t i c e d o r o z v o j e v z d ě l á v á n í CZ.1.07/2.2.00/15.0324 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem
VíceBiochemická laboratoř
Biochemická laboratoř školní rok 2013/14 Ing. Jarmila Krotká 3. LF UK, Klinická biochemie, bakalářské studium Hlavní úkol biochemické laboratoře Na základě požadavku lékaře vydat co nejdříve správný výsledek
VíceVYŠETŘENÍ META BOLISM U LIPIDŮ A
VYŠETŘENÍ META BOLISM U LIPIDŮ A CHOLESTEROLU Úvod Problematika poruch lipidového metabolismu se dostává do popředí zájmu především v souvislosti s prevencí a léčbou kardiovaskulárních onemocnění. Základní
VíceStanovení vybraných enzymů. Roman Kanďár
Stanovení vybraných enzymů Roman Kanďár Takže prvně malé opakování ENZYM Protein (RNA) s katalytickou aktivitou Protein (RNA) kofaktor (prosthetická skupina, koenzym) Jaký je vlastně rozdíl mezi prosthetickou
VíceFiltr: minimální četnost skupin n = Cyklus EHK: AKS3/7 - Analyty krevního séra Stop termín: (4) Vápník celkový % Vzorek A,6,7,8 9 CRV,6,39
Filtr: minimální četnost skupin n = Cyklus EHK: AKS3/7 - Analyty krevního séra RoM = robustní průměr SD = směrodatná odchylka = variační koeficient Ntot = celkový počet účastníků Nout = počet výsledků
Více2) Připravte si 7 sad po pěti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
VíceLipidy. RNDr. Bohuslava Trnková ÚKBLD 1.LF UK. ls 1
Lipidy RNDr. Bohuslava Trnková ÚKBLD 1.LF UK ls 1 Lipidy estery vyšších mastných kyselin a alkoholů (příp. jejich derivátů) lipidy jednoduché = acylglyceroly (tuky a vosky) lipidy složené = fosfoacylglyceroly,
VíceImunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
VíceStanovení hemoglobinu v krvi
Stanovení hemoglobinu v krvi ejběžnější stanovení b ve venosní nebo kapilární krvi je založeno na reakci s kyanidem sodným a hexakyanoželezitanem draselným. Reakce se provádí v prostředí pufru -methylglukaminu.
VíceChemie 2018 CAUS strana 1 (celkem 5)
Chemie 2018 CAUS strana 1 (celkem 5) 1. Vápník má atomové číslo 20, hmotnostní 40. Kolik elektronů obsahuje kationt Ca 2+? a) 18 b) 20 c) 40 d) 60 2. Kolik elektronů ve valenční sféře má atom Al? a) 1
Více2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
VíceDusíkaté látky nebílkovinné povahy. Petr Breinek
Dusíkaté látky nebílkovinné povahy Petr Breinek Dusíkaté látky_2014 1 Hlavní nebílkovinné dusíkaté látky Analyt Zdroj Klinický význam Močovina Amoniak Onemocnění ledvin Onemocnění jater Kreatinin Kreatin
VíceProteiny krevní plazmy SFST - 194
Plazmatické proteiny Proteiny krevní plazmy SFST - 194 zahrnují proteiny krevní plazmy a intersticiální tekutiny Vladimíra Kvasnicová Distribuce v tělních tekutinách protein M r (x 10 3 ) intravaskulárně
VíceSEKK Filtr: minimální četnost skupin n = 5 Cyklus EHK: AKS1/18 - Analyty krevního séra RoM = robustní průměr SD = směrodatná odchylka CV = variační ko
RoM = robustní průměr SD = směrodatná odchylka = variační koeficient Ntot = celkový počet účastníků Nout = počet výsledků vyloučených před výpočtem AV = vztažná hodnota CRV = certifikovaná referenční hodnota
VíceGlukóza, glykovaný hemoglobin, glykované proteiny. Glykované proteiny mechanismus glykace, stanovení ve formě formazanů.
Část Analytické metody 3. Glukóza, glykovaný hemoglobin, glykované proteiny Glukóza: referenční hodnoty, definitivní a referenční metoda, glukózaoxidázová metoda a interference stanovení, glukózadehydrogenázová
VíceMetody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
VíceSEKK Filtr: minimální četnost skupin n = 5 Cyklus EHK: AKS1/15 - Analyty krevního séra RoM = robustní průměr SD = směrodatná odchylka CV = variační ko
RoM = robustní průměr SD = směrodatná odchylka = variační koeficient Ntot = celkový počet účastníků Nout = počet výsledků vyloučených před výpočtem AV = vztažná hodnota CRV = certifikovaná referenční hodnota
VíceCharakteristika analýzy: Identifikace: APOLIPOPROTEIN A-I (APO-AI) Využití: negativní rizikový faktor aterosklerózy Referenční mez : g/l
Charakteristika analýzy: Identifikace: APOLIPOPROTEIN A-I (APO-AI) Využití: negativní rizikový faktor aterosklerózy Referenční mez : g/l Pohlaví Věk od Mez spodní Mez horní M 4 let 1,110 1,900 Z 50 let
VíceEtanol Etanol je obsažen v alkoholických nápojích: whisky, slivovice apod. obsahují %, vína 6 12 % a pivo 2 5 % etanolu V klinické praxi se vysk
Etanol Miroslava Beňovská Etanol Etanol je obsažen v alkoholických nápojích: whisky, slivovice apod. obsahují 30 60 %, vína 6 12 % a pivo 2 5 % etanolu V klinické praxi se vyskytují: Projevy chronického
VíceMetabolismus lipoproteinů. Vladimíra Kvasnicová
Metabolismus lipoproteinů Vladimíra Kvasnicová animace: http://www.wiley.com/college/fob/quiz/quiz19/19-5.html Obrázek převzat z knihy Grundy, S.M.: Atlas of lipid disorders, unit 1. Gower Medical Publishing,
VíceKATALOG DIAGNOSTICKÝCH SETŮ S K A L A B 2018
KATALOG DIAGNOSTICKÝCH SETŮ S K A L A B 2018 set Princip Objem Cena Hořčík 600 A (Mg 600 A) 104 Hořečnaté ionty reagují v prostředí trisového pufru při ph = 8,8 s arsenazem III za vzniku stabilního modrého
VíceMetabolismus krok za krokem - volitelný předmět -
Metabolismus krok za krokem - volitelný předmět - Vladimíra Kvasnicová pracovna: 411, tel. 267 102 411, vladimira.kvasnicova@lf3.cuni.cz informace, studijní materiály: http://vyuka.lf3.cuni.cz Sylabus
VícePříklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie. Miroslav Průcha
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie Miroslav Průcha Příklady optických technik Atomová absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie kinetická
VíceOptické a elektroforetické metody v biochemii 1
Optické a elektroforetické metody v biochemii 1 Spektrofotometrie absorbance, transmitance, Lambertův-Beerův zákon. Zákalové metody nefelometrie, turbidimetrie. Elektroforéza princip, elektroforetická
VícePetr Breinek. BC_HbA1c_N2011 1
Glykovaný hemoglobin ba1c Petr Breinek B_bA1c_N2011 1 Glykovaný hemoglobin (ba1c) Ukazatel dlouhodobé kompenzace diabetu Diagnostika onemocnění Kontrola terapie Včasné odhalení hrozících komplikací V roce
VícePrecipitační a aglutinační reakce
Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený
VíceŠtěpení lipidů. - potravou přijaté lipidy štěpí lipázy gastrointestinálního traktu
METABOLISMUS LIPIDŮ ODBOURÁVÁNÍ LIPIDŮ - z potravy nebo z tukových rezerv - hydrolytické štěpení esterových vazeb - vznik glycerolu a mastných kyselin - hydrolytické štěpení LIPÁZY (karboxylesterázy) -
VíceBílkoviny. Miroslava Beňovská OKB FN Brno a KLM LF MU
Bílkoviny Miroslava Beňovská OKB FN Brno a KLM LF MU Bílkoviny CB v séru, plasmě, moči a likvoru: Mezi základní biochemická vyšetření patří stanovení celkové bílkoviny. Hlavní skupiny bílkovin tvoří albumin
Vícesynlab czech, s.r.o. Laboratoř Plzeň, Majerova 2525/7 Majerova 2525/7, Plzeň
Pracoviště zdravotnické laboratoře: 1. 2. Odběrové pracoviště Plzeň, Terezie Brzkové 15 Terezie Brzkové 15, 318 00 Plzeň 1. Vyšetření: 1 Stanovení hmotnostní koncentrace albuminu fotometricky [Albumin]
VícePříloha je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 146/2017 ze dne:
Pracoviště zdravotnické laboratoře: 1. laboratoř 2. odběrové a sběrné místo Krčská Krčská 1075/58, 1400 00 Praha 4 3. odběrové a sběrné místo Tajovského Tajovského 1310/4, 142 00 Praha 4 4. odběrové a
VíceGlykovaný hemoglobin A 1c (HbA 1c ) Petr Breinek
Glykovaný hemoglobin A 1c (HbA 1c ) Petr Breinek HbA1c_2014 1 Klinický význam stanovení HbA1c Rutinní a efektivní nástroj sledování průběhu DM (diabetes mellitus) Ukazatel dlouhodobé hodnoty koncentrace
VíceMetabolismus lipidů. (pozn. o nerozpustnosti)
Metabolismus lipidů (pozn. o nerozpustnosti) Trávení lipidů Lipidy v potravě - většinou v hydrolyzovatelné podobě, především jako triacylglayceroly (TAG), fosfatidáty a sfingolipidy. V trávicím traktu
VíceZáklady fotometrie, využití v klinické biochemii
Základy fotometrie, využití v klinické biochemii Základní vztahy ve fotometrii transmitance (propustnost): T = I / I 0 absorbance: A = log (I 0 / I) = log (1 / T) = log T Lambertův-Beerův zákon A l = e
VíceMMN, a.s. Oddělení laboratoře Metyšova 465, Jilemnice
Vyšetření: 1. Kvantitativní stanovení albuminu v lidském séru a Albumin 2. Kvantitativní stanovení katalytické aktivity ALT ALT 3. Kvantitativní stanovení katalytické aktivity AST AST 4. Kvantitativní
VíceAnalýza proteinů. Stanovení bílkovin. Elektroforéza plazmatických bílkovin
Analýza proteinů udržování onkotického tlaku transport minerálů, hormonů, lipidů, katabolitů (prealbumin, Alb, ceruloplasmin, transferin, apoproteiny ) obrana proti infekci (imunoglobuliny) hemokoagulace
VíceMETABOLISMUS SACHARIDŮ
METABOLISMUS SACHARIDŮ PRINCIP Rozštěpené sacharidy vstřebávání střevní sliznicí do krevního oběhu dopraveny vrátnicovou žílou do jater. V játrech enzymaticky hexózy štěpeny na GLUKÓZU vyplavována do krve
VíceRADIOIMUNOANALÝZA (RADIOIMMUNOASSAY) Převzato: sciencephoto.com Test krve hepatitis virus
RADIOIMUNOANALÝZA (RADIOIMMUNOASSAY) Převzato: sciencephoto.com Test krve hepatitis virus RADIOIMUNOANALÝZA Stanovení látek, proti kterým lze připravit protilátky ng (10-9 g) až pg (10-12 g) ve složitých
VíceDusíkaté látky nebílkovinné povahy
Dusíkaté látky nebílkovinné povahy Ing. Martina Podborská, Ph.D. OKB FN Brno Zpracováno s pomocí přednášek RNDr. Petra Breineka Školní rok 2015/2016 hlavní exkreční orgán hlavní fce: tvorba a vylučování
VíceFunkce jater 7. Játra stavba, struktura jaterní buňky, žluč. Metabolismus základních živin v játrech. Metabolismus bilirubinu.
Funkce jater 7 Játra stavba, struktura jaterní buňky, žluč. Metabolismus základních živin v játrech. Metabolismus bilirubinu. Játra centrální orgán v metabolismu živin a xenobiotik 1. Charakterizujte strukturu
VíceKrevní barviva porfyriny, hemoglobin, bilirubin
Krevní barviva porfyriny, hemoglobin, bilirubin Porfyriny: Poruchy metabolismu porfyrinů: Získané (např. při otravě olovem) S dědičným podkladem porfyrie Porfyriny - tetrapyroly, prekurzory hemu - Vznikají
VíceVybrané klinicko-biochemické hodnoty
Vybrané klinicko-biochemické hodnoty Obecným výsledkem laboratorního vyšetření je naměřená hodnota, která může být fyziologická, zvýšená či snížená. Abychom zjištěnou hodnotu mohli takto zařadit, je třeba
VíceIntermediární metabolismus. Vladimíra Kvasnicová
Intermediární metabolismus Vladimíra Kvasnicová Vztahy v intermediárním metabolismu (sacharidy, lipidy, proteiny) 1. po jídle (přísun energie z vnějšku) oxidace CO 2, H 2 O, urea + ATP tvorba zásob glykogen,
VíceKA 2340/4-8up Chemické laboratorní metody v analýze potravin H1CL. Studijní podklady
KA 2340/4-8up Chemické laboratorní metody v analýze potravin H1CL Studijní podklady Téma: Principy enzymových metod v analýze potravin živočišného původu Vypracovala Prof. MVDr. Lenka Vorlová, Ph.D. Úvod:
VíceLékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce
Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce 1. Máte pufr připravený smísením 150 ml CH3COOH o c = 0,2 mol/l a 100 ml CH3COONa o c = 0,25 mol/l. Jaké bude ph pufru, pokud přidáme 10 ml
VíceDidaktické testy z biochemie 2
Didaktické testy z biochemie 2 Metabolismus Milada Roštejnská Helena Klímová br. 1. Schéma metabolismu Zažívací trubice Sacharidy Bílkoviny Lipidy Ukládány jako glykogen v játrech Ukládány Ukládány jako
VíceMETABOLISMUS SACHARIDŮ
METABOLISMUS SAHARIDŮ A. Odbourávání sacharidů - nejdůležitější zdroj energie pro heterotrofy - oxidací sacharidů až na. získávají aerobní organismy energii ve formě. - úplná oxidace glukosy: složitý proces
VíceV organismu se bílkoviny nedají nahradit žádnými jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy.
BÍLKOVINY Bílkoviny jsou biomakromolekulární látky, které se skládají z velkého počtu aminokyselinových zbytků. Vytvářejí látkový základ života všech organismů. V tkáních vyšších organismů a člověka je
VíceTEST + ŘEŠENÍ. PÍSEMNÁ ČÁST PŘIJÍMACÍ ZKOUŠKY Z CHEMIE bakalářský studijní obor Bioorganická chemie 2010
30 otázek maximum: 60 bodů TEST + ŘEŠEÍ PÍSEMÁ ČÁST PŘIJÍMACÍ ZKUŠKY Z CEMIE bakalářský studijní obor Bioorganická chemie 2010 1. apište názvy anorganických sloučenin: (4 body) 4 BaCr 4 kyselina peroxodusičná
VíceZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE
ZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE Zabezpečování jakosti v laboratorní praxi je významnou součástí práce každé laboratoře. Problematiku jakosti řeší řada předpisů, z
VíceBÍLKOVINY. V organismu se nedají nahradit jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy.
BÍLKOVINY o makromolekulární látky, z velkého počtu AMK zbytků o základ všech organismů o rostliny je vytvářejí z anorganických sloučenin (dusičnanů) o živočichové je musejí přijímat v potravě, v trávicím
VícePrvní testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti
První testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti Vysvětlete co znamená pojem α-aminokyselina Jaký je rozdíl mezi D a L řadou aminokyselin Kolik je základních stavebních aminokyselin a z čeho jsou odvozeny
VíceCholesterol Fosfolipidy Triacylglyceroly Mastné kyseliny
Lipoproteiny 3 Tenzidy struktura, přirozené tenzidy. Lipidy krevní plazmy vztah struktury k polaritě molekuly. Lipoproteiny (LP) struktura, klasifikace, složení, metabolismus, lipasy. Apoproteiny. Enterohepatální
VíceDidaktické testy z biochemie 1
Didaktické testy z biochemie 1 Trávení Milada Roštejnská elena Klímová Trávení br. 1. Trávicí soustava Rubrika A Z pěti možných odpovědí (alternativ) vyberte tu nejsprávnější. A B D E 1 Mezi monosacharidy
VíceDiabetes mellitus. úplavice cukrová - heterogenní onemocnění působení inzulínu. Metabolismus glukosy. Insulin (5733 kda)
Diabetes mellitus úplavice cukrová - heterogenní onemocnění působení inzulínu ~ nedostatečná sekrece ~ chybějící odpověď buněk periferních tkání Metabolismus glukosy ze střeva jako játra 50 % glykogen
VícePřehled energetického metabolismu
Přehled energetického metabolismu Josef Fontana EB 40 Obsah přednášky Důležité termíny energetického metabolismu Základní schéma energetického metabolismu Hlavní metabolické dráhy energetického metabolismu
VíceTUKY. Autor: Mgr. Stanislava Bubíková. Datum (období) tvorby: 15. 3. 2013. Ročník: devátý
TUKY Autor: Mgr. Stanislava Bubíková Datum (období) tvorby: 15. 3. 2013 Ročník: devátý Vzdělávací oblast: Člověk a příroda / Chemie / Organické sloučeniny 1 Anotace: Žáci se seznámí s lipidy. V rámci tohoto
VíceStruktura proteinů. - testík na procvičení. Vladimíra Kvasnicová
Struktura proteinů - testík na procvičení Vladimíra Kvasnicová Mezi proteinogenní aminokyseliny patří a) kyselina asparagová b) kyselina glutarová c) kyselina acetoctová d) kyselina glutamová Mezi proteinogenní
VíceOligobiogenní prvky bývají běžnou součástí organismů, ale v těle jich již podstatně méně (do 1%) než prvků makrobiogenních.
1 (3) CHEMICKÉ SLOŢENÍ ORGANISMŮ Prvky Stejné prvky a sloučeniny se opakují ve všech formách života, protože mají shodné principy stavby těla i metabolismu. Např. chemické děje při dýchání jsou stejné
VíceÚvod k biochemickému praktiku. Pavel Jirásek
Úvod k biochemickému praktiku Pavel Jirásek Úvodní informace 4 praktika B1 B2 B3 B4 4 týdny 8 pracovních stolů rozdělení kruhu do 8 pracovních skupin (v každé 2-3 studenti) Co s sebou na praktika plášť
VícePublikováno z 2. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze (http://www.lf2.cuni.cz)
Publikováno z 2. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze (http://www.lf2.cuni.cz) Biochemie Napsal uživatel Marie Havlová dne 8. Únor 2012-0:00. Sylabus předmětu Biochemie, Všeobecné lékařství, 2.
VícePrecipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie RNDr. Jana Nechvátalová, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Reakce Ag - Ab primární fáze rychlá; vznik vazby
VíceFakultní nemocnice Brno Laboratoř Oddělení klinické biochemie (LOKB) Jihlavská 20, Brno
Pracoviště zdravotnické laboratoře: 1. Pracoviště medicíny dospělého věku (PMDV) 2. Pracoviště dětské medicíny (PDM) Černopolní 9, 625 00 Brno 3. Pracoviště reprodukční medicíny (PRM) Obilní trh11, 625
VíceOSVEDCENI O AKREDIT ACI
Signatář EA MLA Český institut pro akreditaci, o.p.s. Olšanská 54/3,13000 Praha 3 vydává v souladu s 16 zákona Č. 2211997 Sb., o technických požadavcích na výrobky. ve znčnl pozdčjšich předpisů v V, OSVEDCEN
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceRegulace metabolizmu lipidů
Regulace metabolizmu lipidů Principy regulace A) krátkodobé (odpověď s - min): Dostupnost substrátu Alosterické interakce Kovalentní modifikace (fosforylace/defosforylace) B) Dlouhodobé (odpověď hod -
VíceCentroLab s.r.o. Sokolovská 810/304, Praha 9
Pracoviště zdravotnické laboratoře: 1. Laboratoř Sokolovská 2. Odběrové místo Lovosická Lovosická 440/40, 190 00 Praha 9 3. Odběrové místo Mazurská Mazurská 484/2, 181 00 Praha 8 4. Odběrové místo Zenklova
VíceDELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay
DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay Fluoroimunoanalytická metoda vyvinutá finskou firmou Wallac Oy (LKB Pharmacia), velmi citlivá a specifická metoda pro stanovení nízko- i
VíceDoučování IV. Ročník CHEMIE
1. Chemie přírodních látek Biochemie a) LIPIDY 1. Triacylglyceroly se štěpí účinkem: a) ligas b) lyas c) lipas d) lihlas Doučování IV. Ročník CHEMIE 2. Žluknutí tuků je z chemického hlediska: a) polymerace
VíceVzdělávací materiál. vytvořený v projektu OP VK CZ.1.07/1.5.00/ Anotace. Metabolismus lipidů - odbourávání. VY_32_INOVACE_Ch0212
Vzdělávací materiál vytvořený v projektu P VK Název školy: Gymnázium, Zábřeh, náměstí svobození 20 Číslo projektu: Název projektu: Číslo a název klíčové aktivity: CZ.1.07/1.5.00/34.0211 Zlepšení podmínek
VíceBiochemie. ochrana životního prostředí analytická chemie chemická technologie Forma vzdělávání: Platnost: od 1. 9. 2009 do 31. 8.
Studijní obor: Aplikovaná chemie Učební osnova předmětu Biochemie Zaměření: ochrana životního prostředí analytická chemie chemická technologie Forma vzdělávání: denní Celkový počet vyučovacích hodin za
Vícesloučeniny C, H, O Cukry = glycidy = sacharidy staré názvy: uhlohydráty, uhlovodany, karbohydráty
sloučeniny C, H, O Cukry = glycidy = sacharidy staré názvy: uhlohydráty, uhlovodany, karbohydráty triviální (glukóza, fruktóza ) vědecké (α-d-glukosa) organické látky nezbytné pro život hlavní zdroj energie
VíceRozdělení imunologických laboratorních metod
Rozdělení imunologických laboratorních metod Aglutinace Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Rozdělení imunologických laboratorních
VíceSekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch
Sekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch Atom, složení a struktura Chemické prvky-názvosloví, slučivost Chemické sloučeniny, molekuly Chemická vazba
VíceFakultní nemocnice u sv. Anny v Brně Laboratoře Oddělení klinické biochemie Pekařská 53, Brno
Vyšetření: 1. Stanovení arbitrární koncentrace Ca 15-3 chemiluminiscenční imunoanalýzou [Ca 15-3_S,P] 2. Stanovení látkové koncentrace glykovaného hemoglobinu (HbA 1 c) kapalinovou chromatografií [Glykovaný
VíceIMUNOCHEMICKÉ METODY
IMUNOCHMICKÉ MTODY Antigeny Protilátky Imunochemické metody Kvantitativní imunoprecipitační křivka Imunoprecipitační metody Imunoanalýza Využití imunochemických metod v rychlé diagnostice Praktické úlohy
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceMetody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
VíceKrevní barviva porfyriny, hemoglobin, bilirubin
Krevní barviva porfyriny, hemoglobin, bilirubin Porfyriny: Poruchy metabolismu porfyrinů: Získané (např. při otravě olovem) S dědičným podkladem porfyrie Porfyriny - tetrapyroly, prekurzory hemu - Vznikají
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceStanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů
Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,
VíceLékařská chemie -přednáška č. 8
Lékařská chemie -přednáška č. 8 Lipidy, izoprenoidya steroidy Václav Babuška Vaclav.Babuska@lfp.cuni.cz Lipidy heterogenní skupina látek špatně rozpustné ve vodě, dobře rozpustné v organických rozpouštědlech
VíceBiochemie Praktický zapocet
Biochemie Praktický zapocet Stanovení koncentrace hemoglobinu v krvi Tomáš P. Mirchi 2017, v1.0 Oxidace hemoglobinu na methemoglobin: HbFeII [FeIII(CN)6]3- + Hemoglobin HbFeIII + [FeII(CN)6]4- Methemoglobin
VíceBIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ
BIOMEMRÁNA BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA - všechny buňky na povrchu plazmatickou membránu - Prokaryontní buňky (viry, bakterie, sinice) - Eukaryontní buňky vnitřní členění do soustavy membrán KOMPARTMENTŮ - za
VíceStruktura lipidů. - testík na procvičení. Vladimíra Kvasnicová
Struktura lipidů - testík na procvičení Vladimíra Kvasnicová Od glycerolu jsou odvozené a) neutrální tuky b) některé fosfolipidy c) triacylglyceroly d) estery cholesterolu Od glycerolu jsou odvozené a)
VíceZákladní stavební kameny buňky Kurz 1 Struktura -7
Základní stavební kameny buňky Kurz 1 Struktura -7 vladimira.kvasnicova@lf3.cuni.cz Oddělení biochemie - 4. patro pracovna 411 Doporučená literatura kapitoly z biochemie http://neoluxor.cz (10% sleva přes
Více1. Napište strukturní vzorce aminokyselin E a W a vzorce guanosinu a uracilu
Test pro přijímací řízení magisterské studium Biochemie 2018 1. Napište strukturní vzorce aminokyselin E a W a vzorce guanosinu a uracilu U dalších otázek zakroužkujte správné tvrzení (pouze jedna správná
VícePropojení metabolických drah. Alice Skoumalová
Propojení metabolických drah Alice Skoumalová Metabolické stavy 1. Resorpční fáze po dobu vstřebávání živin z GIT (~ 2 h) glukóza je hlavní energetický zdroj 2. Postresorpční fáze mezi jídly (~ 2 h po
Více