Aspartate Aminotransferase Liquid Reagent Aspartát aminotransferáza (ASTL)

Transkript

1 Aspartate Aminotransferase Liquid Reagent Aspartát aminotransferáza () Kapalná reagencie Informace pro objednání COBAS INTEGRA 500 Tests Kat. č Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít Aspartate Aminotransferase Systémové-ID Calibrator f.a.s ml Kat. č Calibrator f.a.s. (pro USA) 12 3 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U plus 10 3 ml Kat. č Precinorm U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U plus 10 3 ml Kat. č Precipath U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Systémové informace COBAS INTEGRA Aspartate Aminotransferase () Test, test ID Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení katalytické aktivity AST (EC ; L-aspartát: 2-oxoglutarát aminotransferáza) v lidském séru a plazmě na systémech COBAS INTEGRA. Tento příbalový leták popisuje aplikaci pro AST bez aktivace pyridoxal fosfátem (test, 0-494). Aplikace pro AST, aktivovanou pyridoxal fosfátem, je popsána v příbalovém letáku Aspartate Aminotransferase Pyridoxal Phosphate Activated (Liquid Reagent). Souhrn 1,2 Enzym aspartát aminotransferáza je široce rozšířený v mnoha tkáních, především však jater, srdce, svalů a ledvin. Zvýšené hladiny v séru jsou důsledkem postižení těchto tkání při onemocnění. Hepatobiliární choroby, jako jsou cirhóza, metastázující karcinom a virová hepatitida, rovněž zvyšují hladiny AST v séru. Následkem infarktu myokardu se zvyšuje AST v séru a vrcholu dosahuje druhý den po nástupu. U pacientů, podstupujících dialýzu nebo kteří mají deficit vitamínu B 6, může být AST v séru snížené. Zdánlivý pokles aktivity AST může být způsoben nižší hladinou pyridoxal fosfátu, prostetické skupiny aminotransferáz, která zvyšuje poměr apoenzymu ku holoenzymu. Známy jsou dva izoenzymy AST, cytoplazmatický a mitochondriální. Za běžných podmínek je v séru jen cytoplazmatický izoenzym, zatímco mitochondriální spolu s cytoplazmatickým izoenzymem jsou detekovatelné v séru pacientů s koronárním nebo hepatobiliálním onemocněním. Princip testu Metoda dle International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), ale bez pyridoxal-5 -fosfátu. 3,4 AST katalyzuje přenos aminoskupiny mezi L-aspartátem a 2-oxoglutarátem za tvorby oxalacetátu a L-glutamátu. Oxalacetát, vytvářený v reakci, je redukován NADH v přítomnosti malátdehydrogenázy (MDH) na L-malát a NAD +. L-Aspartát + 2-oxoglutarát AST oxalacetát + L-glutamát MDH Oxalacetát + NADH + H + L-malát + NAD + Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě AST. Stanovuje se měřením poklesu absorbance při 340 nm. Reagencie - pracovní roztoky Složky Koncentrace R1 R2=SR Test TRIS mmol/l L-Aspartát mmol/l MDH(mikrobiální) 24 7 µkat/l ( 0,4 ku/l) LDH (mikrobiální) µkat/l ( 0,9 ku/l) Albumin (hovězí) 0,25 0,08 % NADH 1,7 0,2 mmol/l 2-Oxoglutarát mmol/l ph (37 C) 7,8 7,8 Reagencie obsahují nereaktivní stabilizátory (R1), nereaktivní pufr (R2) a nereaktivní konzervans (R1, R2). Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v této Příručce metod, Kapitola 1, Úvod. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití , V 4 CS 1 / 3

2 Enzymy Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při 10 až 15 C 12 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 800 Na palubě při 8 C 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum (bez hemolýzy): Sérum získané odběrem standardní soupravou. Plazma (bez hemolýzy): Li-heparinová nebo EDTA plazma. Nepoužívejte jiné antikoagulanty. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Stabilita: 1 den při C 5 7 dní při 2-8 C 6 Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Aplikace pro sérum a plazmu COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-S-SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 39/64 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 40 µl 29 µl Vzorek 11 µl 26 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-S-SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 54/97 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 40 µl 29 µl Vzorek 11 µl 26 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl Kalibrace Kalibrátor Typ kalibrace Opakování kalibrace Kalibrační interval Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion. vodu. Lineární regrese Doporučen duplikát Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle původní přípravy IFCC, ale bez pyridoxal-5 -fosfátu, pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 7 Kontrola kvality Referenční rozmezí Patologické rozmezí Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Precinorm U nebo Precinorm U plus Precipath U nebo Precipath U plus Doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci analytu pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktor: U/L 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Ikterus Hemolýza Lipemie Antikoagulanty Bez významných interferencí. Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 25 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 16 µmol/l nebo 25 mg/dl). Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Citrát a fluorid inhibují enzymovou aktivitu. 2 / , V 4 CS

3 Enzymy Léky Ostatní Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Doxycyklin HCl způsobuje uměle nízké hodnoty AST. Izoniazid může způsobovat uměle nízké výsledky aspartátaminotransferázy při terapeutických koncentracích. Hydroxokobalamin (Cyanokit) může způsobit falešně nízké výsledky. Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Zvláštní požadavky na mytí Při zpracovávání určitých kombinací testů v analyzátorech COBAS INTEGRA je nezbytné používat speciální mycí kroky. Pro více informací o kombinacích testu vyžadujících extra mycí cykly čtěte, prosím, Příručku metod, Úvod, Extra mycí cykly (EWC). Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Rozsah měření U/L (0,03-11,7 µkat/l) Vzorky s vyššími koncentracemi se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 2 U/L (0,03 µkat/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 30). Očekávané hodnoty 11 Dle optimalizované standardní metody (srovnatelné s metodou IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem 12 ): Muži do 40 U/L (do 0,67 µkat/l) Ženy do 32 U/L (do 0,53 µkat/l) Vypočítané hodnoty: Pro konverzi od 25 C do 37 C je použit faktor 2, Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Hladina 1 Hladina 2 Průměr 39 U/L 198 U/L (0,65 µkat/l) (3,3 µkat/l) VK v sérii 1,4% 0,40% VK mezi sériemi 1,7% 1,5% Porovnání metod Hodnoty AST ve vzorcích lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 s COBAS INTEGRA Aspartate Aminotransferase (), byly porovnány s výsledky stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro AST na analyzátoru COBAS INTEGRA a alternativními biochemickými systémy. Vzorky byly měřeny v duplikátu. Počet (n) představuje všechny replikáty. Analyzátor COBAS Alternativní systém INTEGRA Počet vzorků (n) Korel. koeficient (r) 0,999 0,999 (r s ) 0,998 0,996 Lin. regrese y = 1,03x - 1,7 U/L y = 1,03x + 0,2 U/L Passing/Bablok 14 y = 1,02x - 1,1 U/L y = 1,02x + 0,1 U/L Hodnoty byly v rozmezí od 5 až 503 U/L (0,08 až 8,4 µkat/l). Odkazy 1. Nagy B. Muscle disease. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation. St. Louis: Mosby 1984: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 2. IFCC method for aspartate aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-aspartate aminotransferase (EC , ASAT) Klin Chem Mitt 1989;20: Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, PA: WB Saunders 1995: Guder WG, Narayanan H, Wisser et al. List of Analytes; Preanalytical Considerations. Roche Diagnostics, ed Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C - Part 4. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Aspartate Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Report on the Symposium Drug effects in clinical chemistry methods, Breuer J, Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Thefeld W, Hoffmeister H, Busch, E-W, Koller PU, Vollmar J. Referenzwerte für die Bestimmungen der Transaminasen GOT und GPT sowie der alkalischen Phosphatase im Serum mit optimierten Standardmethoden. Dtsch Med Wschr 1974;99: Klein G, Lehmann P, Michel E, Regenauer H. Vergleich der IFCC-Methoden für ALAT, ASAT und GGT bei 37 C mit den eingeführten Standardmethoden bei 25 C und 37 C. Lab Med 1994;18: Zawta B, Klein G, Bablok W. Temperaturumrechnung in der klinischen Enzymologie? Klin Lab 1994;40: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim , V 4 CS 3 / 3

4 Aspartate Aminotransferase Pyridoxal Phosphate Activated (Liquid Reagent) Aspartát aminostransferáza (ASTPL) Aktivovaná pyridoxal fosfátem (kapalná reagencie) Informace pro objednání COBAS INTEGRA 500 Tests Kat. č Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít Aspartate Aminotransferase Systémové-ID Calibrator f.a.s ml Kat. č Calibrator f.a.s. (pro USA) 12 3 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U plus 10 3 ml Kat. č Precinorm U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U plus 10 3 ml Kat. č Precipath U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Pyridoxal fosfát ml Kat. č Systemové-ID Systémové informace COBAS INTEGRA Aspartate Aminotransferase () Test ASTPL, test ID Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení katalytické aktivity AST (EC ; L-aspartát: 2-oxoglutarát aminotransferáza) v lidském séru a plazmě na systémech COBAS INTEGRA. Tento příbalový leták popisuje aplikaci pro AST aktivovanou pyridoxal fosfátem (test ASTPL, 0-594). Aplikace pro AST bez aktivace pyridoxal fosfátem je popsána v příbalovém letáku Aspartate Aminotransferase Liquid Reagent. Souhrn 1,2 Enzym aspartát aminotransferáza je široce rozšířený v mnoha tkáních, především však jater, srdce, svalů a ledvin. Zvýšené hladiny v séru jsou důsledkem postižení těchto tkání při onemocnění. Hepatobiliární choroby, jako jsou cirhóza, metastazující karcinom a virová hepatitida, rovněž zvyšují hladiny AST v séru. Následkem infarktu myokardu se zvyšuje AST v séru a vrcholu dosahuje druhý den po nástupu. Známy jsou dva izoenzymy AST, cytoplazmatický a mitochondriální. Za běžných podmínek je v séru jen cytoplazmatický izoenzym, zatímco mitochondriální spolu s cytoplazmatickým izoenzymem jsou detekovatelné v séru pacientů s koronárním nebo hepatobiliálním onemocněním. Přidání pyridoxal fosfátu k metodě způsobuje zvýšení aktivity aminotransferáz. Aktivace je vyšší u AST než u ALT. Aktivace pyridoxal fosfátem předchází falešnému snížení aktivity aminotransferáz ve vzorcích pacientů s nedostatkem endogenního pyridoxal fosfátu (deficit vitamínu B 6 ). Princip testu Metoda dle International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), s pyridoxal-5 -fosfátem. 3,4 AST katalyzuje přenos aminoskupiny mezi L-aspartátem a 2-oxoglutarátem za tvorby oxalacetátu a L-glutamátu. Oxalacetát, vytvářený v reakci, je redukován NADH v přítomnosti malátdehydrogenázy (MDH) na L-malát a NAD +. Pyridoxal fosfát slouží jako koenzym při přenosu aminoskupiny v reakci. Zajišťuje úplnou aktivaci enzymů. L-Aspartát + 2-oxoglutarát AST oxalacetát + L-glutamát MDH Oxalacetát + NADH + H + L-malát + NAD + Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě AST. Stanovuje se měřením poklesu absorbance při 340 nm. Reagencie - pracovní roztoky Složky Koncentrace R1 SD R2=SR Test TRIS mmol/l L-Aspartát mmol/l MDH(mikrobiální) 24 7 µkat/l ( 0,4 ku/l) LDH (mikrobiální) µkat/l ( 0,9 ku/l) Albumin (hovězí) 0,25 0,08 % Pyridoxal phosphate µmol/l NADH 1,7 0,2 mmol/l 2-Oxoglutarát mmol/l ph (37 C) 7,8 7,8 Reagencie obsahují nereaktivní stabilizátory (R1), nereaktivní pufry (SD, R2) a konzervans (R1, SD, R2). Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v této Příručce metod, Kapitola 1, Úvod. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití , V 5 CS 1 / 4 ASTPL

5 Enzymy Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při 10 až 15 C 12 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 800 Na palubě při 8 C 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum (bez hemolýzy). Sérum získané odběrem standardní soupravou. Plazma (bez hemolýzy): Li-heparinová nebo EDTA plazma. Nepoužívejte jiné antikoagulanty. Sérum bez hemolýzy je vhodným vzorkem. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Stabilita: 1 den při C 5 7 dní při 2-8 C 6 Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Pyridoxal Phosphate, Kat. č , System-ID Roztok pyridoxal fosfátu je připraven k použití a je umístěn do své předdefinované pozice ve stojánku. Jedna nádobka postačuje pro 500 testů a je stabilní na palubě 8 týdnů. Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Aplikace pro sérum a plazmu COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-SD S----SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 71/96 Jednotka U/L ASTPL je prováděna jako dlouhotrvající test (trvání cca 17 minut). Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 40 µl 29 µl Vzorek 11 µl 8 µl Speciální diluent (SD) 18 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-SD/S-SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 113/156 Jednotka U/L ASTPL je prováděna jako dlouhotrvající test (trvání cca 16 minut). Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 40 µl 29 µl Vzorek 11 µl 8 µl Speciální diluent (SD) 18 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl Kalibrace Kalibrátor Typ kalibrace Opakování kalibrace Kalibrační interval Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion. vodu. Lineární regrese Doporučen duplikát Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality. Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle původní přípravy IFCC pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 7 Kontrola kvality Referenční rozmezí Patologické rozmezí Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Precinorm U nebo Precinorm U plus Precipath U nebo Precipath U plus Doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají aktivitu analytu pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktor: U/L 0,0167 = µkat/l ASTPL 2 / , V 5 CS

6 Enzymy Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Ikterus Hemolýza Lipemie Antikoagulanty Léky Ostatní Bez významných interferencí. Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 25 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 16 µmol/l nebo 25 mg/dl). Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Citrát a fluorid inhibují enzymovou aktivitu. Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Dobesilát vápenatý a Doxycyklin HCl způsobují umělé nízké hodnoty AST. Izoniazid může způsobovat uměle nízké výsledky aspartátaminotransferázy při terapeutických koncentracích. Hydroxokobalamin (Cyanokit) může způsobit falešně nízké výsledky. Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Zvláštní požadavky na mytí Při zpracovávání určitých kombinací testů v analyzátorech COBAS INTEGRA je nezbytné používat speciální mycí kroky. Pro více informací o kombinacích testu vyžadujících extra mycí cykly čtěte, prosím, Příručku metod, Úvod, Extra mycí cykly (EWC). Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Rozsah měření U/L (0,03-11,7 µkat/l) Vzorky s vyššími koncentracemi se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 2 U/L (0,03 µkat/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 30). Očekávané hodnoty Dle IFCC/Standard Method 94 s aktivací pyridoxal fosfátem měřeno při 37 C: 11 Muži Ženy U/L (0,17-0,83 µkat/l) U/L (0,17-0,58 µkat/l) Konsenzuální hodnoty s aktivací pyridoxal fosfátem: 12 Muži do 50 U/L (do 0,83 µkat/l) Ženy do 35 U/L (do 0,58 µkat/l) Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Hladina 1 Hladina 2 Průměr 48 U/L 162 U/L (0,80 µkat/l) (2,69 µkat/l) VK v sérii 2,6% 1,8% VK mezi sériemi 2,9% 2,0% Porovnání metod Hodnoty AST pro vzorky lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 s COBAS INTEGRA Aspartate Aminotransferase reagent () a pyridoxal fosfátem jako speciálním diluentem, byly porovnány s výsledky stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro AST (s pyridoxal fosfátem) na analyzátoru COBAS INTEGRA a biochemických systémech alternativních výrobců. Vzorky byly měřeny v duplikátu. Počet (n) představuje všechny replikáty. Analyzátor COBAS Alternativní systém INTEGRA Počet vzorků (n) Korel. koeficient (r) 0,999 0,999 (r s ) 0,998 0,996 Lin. regrese y = 1,06x - 2,2 U/L y = 1,02x + 0,9 U/L Passing Bablok 13 y = 1,03x - 1,0 U/L y = 1,02x + 1,1 U/L Hodnoty byly v rozmezí od 12,7 až 604 U/L (0,21 až 10,1 µkat/l). Odkazy 1. Nagy B. Muscle disease. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation. St. Louis: Mosby 1984: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 2. IFCC method for aspartate aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-aspartate aminotransferase (EC , ASAT) Klin Chem Mitt 1989;20: Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, PA: WB Saunders 1995: Guder WG, Narayanan H, Wisser et al. List of Analytes; Preanalytical Considerations. Roche Diagnostics, ed Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C - Part 4. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Aspartate Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Breuer J, Report on the Symposium Drug Effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Klauke R, Schmidt E, Lorentz K. Recommendations for carrying out standard ECCLS procedures (1988) , V 5 CS 3 / 4 ASTPL

7 Enzymy for the catalytic concentrations of creatine kinase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase and γ-glutamyltransferase at 37 C. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31: Thomas L et al. Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum. J Lab Med 2005;29(5): Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim ASTPL 4 / , V 5 CS

8 V4 Aspartate Aminotransferase acc. to IFCC without pyridoxal phosphate activation Vyznačuje systémy cobas c, na kterých lze reagencie použít Informace pro objednání Systémy Roche/Hitachi cobas c Aspartate Aminotransferase acc. to IFCC cobas c 311 cobas c tests Kat. č Systémové-ID Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml) Kat. č Kód 401 Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 401 Precinorm U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 300 Precinorm U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 300 Precipath U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 301 Precipath U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 301 Precinorm U (20 x 5 ml) Kat. č Kód 300 Precipath U (20 x 5 ml) Kat. č Kód 301 NaCl Diluent 9% (50 ml) Kat. č Systémové-ID Česky Systémové informace : ACN 687 S: ACN 587 (STAT, reakční čas: 7) Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení aspartátaminotransferázy (AST) v lidském séru a plazmě na systémech Roche/Hitachi cobas c. Souhrn 1,2 Enzym aspartátaminotransferáza je široce rozšířený v mnoha tkáních, především však jater, srdce, svalů a ledvin. Zvýšené hladiny v séru jsou důsledkem postižení těchto tkání při onemocnění. Hepatobiliární choroby, jako jsou ciróza, metastázující karcinom a virová hepatitida, rovněž zvyšují hladiny AST v séru. Následkem infarktu myokardu se zvyšuje AST v séru a vrcholu dosahuje druhý den po nástupu. U pacientů, podstupujících dialýzu nebo kteří mají deficit vitamínu B 6, může být AST v séru snížené. Zdánlivý pokles aktivity AST může být způsoben nižší hladinou pyridoxal fosfátu, prostetické skupiny aminotransferáz, která zvyšuje poměr apoenzymu ku holoenzymu. Známé jsou dva izoenzymy AST, cytoplazmatický a mitochondriální. Za běžných podmínek je v séru jen cytoplazmatický izoenzym, zatímco mitochondriální spolu s cytoplazmatickým izoenzymem, jsou detekovatelné v séru pacientů s koronárním nebo hepatobiliárním onemocněním. Princip testu Toto stanovení se drží doporučení IFCC, bylo ale optimalizováno pro provedení a stabilitu. 3,4 AST katalyzuje přenos aminoskupiny mezi L-aspartátem a 2-oxoglutarátem za tvorby oxalacetátu a L-glutamátu. Oxalacetát, vytvářený v reakci, je redukován NADH v přítomnosti malátdehydrogenázy (MDH) na L-malát a NAD +. L-Aspartát + 2-oxoglutarát AST oxalacetát + L-glutamát MDH Oxalacetát + NADH + H + L-malát + NAD + Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě AST. Stanovuje se měřením poklesu absorbance. Reagencie - pracovní roztoky R1 TRIS pufr: 264 mmol/l, ph 8,1 (25 C); L-aspartát: 792 mmol/l; MDH (mikroorganismy): 24 µkat/l; LDH (mikroorganismy): 48 µkat/l; Albumin (hovězí): 0,25%; konzervans R2 NADH: 1,7 mmol/l; 2-oxoglutarát: 94 mmol/l; konzervans Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: NaCl Diluent 9% Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: Viz datum exspirace na štítku cobas c packu. 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku cobas c packu. 12 týdnů Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum. Plazma: Li-heparin a K 2 -EDTA plazma. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Stabilita: 24 hodin při C 5 7 dní při 2-8 C 6 Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Viz část "Informace pro objednání". Destilovaná voda Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definován uživatelem. Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Bezpečnostní listy jsou dostupné pro odborné uživatele na vyžádání. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití , V 4 Česky 1 / 3 systémy cobas c

9 Aspartate Aminotransferase acc. to IFCC without pyridoxal phosphate activation Aplikace pro sérum a plazmu cobas c 311 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10/12-31 (STAT 7/12-31) Vlnová délka (sub/main) 700/340 nm Jednotky Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 40 µl 51 µl R2 17 µl 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 9 µl Snížený 9 µl 15 µl 135 µl Zvýšený 18 µl cobas c 501 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10/18-46 (STAT 7/18-46) Vlnová délka (sub/main) 700/340 nm Jednotky Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 40 µl 51 µl R2 17 µl 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 9 µl Snížený 9 µl 15 µl 135 µl Zvýšený 18 µl Kalibrace Kalibrátory Typ kalibrace Frekvence kalibrace S1: H 2 O S2: C.f.a.s. Linear 2-bodová kalibrace - po změně šarže reagencií - a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle původní přípravy IFCC pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 7 Kontrola kvality Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Systém Roche/Hitachi cobas c automaticky vypočítá koncentraci analytu každého vzorku. Převodní faktor: U/L x 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rámci ±10% počáteční hodnoty při aktivitě AST 30 U/L (0,50 µkat/l). Ikterus: Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 1026 µmol/l (60 mg/dl)). Hemolýza: Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 40 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 25,6 µmol/l (40 mg/dl)). Kontaminace erytrocyty zvýší výsledky, protože hladina analytu v erytrocytech je vyšší než v běžném séru. Úroveň interference může kolísat v závislosti na obsahu analytu v lyzovaných erytrocytech. Lipemie (Intralipid): Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Léky: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Isoniazid způsobuje uměle nízké výsledky AST. Cyanokit (Hydroxokobalamin) může způsobit ovlivnění výsledků. Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Zvláštní požadavky na mytí: Je nezbytné používat speciálních mycích cyklů při zpracovávání určitých kombinací testů v systémech Roche/Hitachi cobas c. Pro informace o kombinacích testu vyžadujících speciální cyklus mytí viz poslední verzi Seznamu vyhnutí se přenosu mezi vzorky (carry-over) a příručku pro obsluhu pro další pokyny. Rozsah měření U/L (0,08-11,7 µkat/l) Vzorky s vyššími koncentracemi se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 5 U/L (0,08 µkat/l) Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard SD, přesnost v sérii, n = 21). Očekávané hodnoty 11 Dle optimalizované standardní metody (srovnatelné s metodou IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem 12 ): Muži do 40 U/L až do 0,67 µkat/l Ženy do 32 U/L až do 0,53 µkat/l Vypočítané hodnoty: Pro konverzi od 25 C do 37 C je použit faktor 2, Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena opakovanou analýzou lidských vzorků podle interního postupu (v sérii n = 21; celkem n = 60). Byly získány následující výsledky: V sérii Průměr SD VK % Precinorm U 36,6 (0,61) 0,3 (0,01) 0,8 Precipath U 128 (2,14) 1 (0,02) 0,4 Lidské sérum (2,10) 1 (0,02 0,4 Lidské sérum 2 12,0 (0,20) 0,4 (0,01) 3,1 Celkem Průměr SD VK % Precinorm U 36,7 (0,61) 0,5 (0,01) 1,3 Precipath U 130 (2,17) 1 (0,02) 0,8 Lidské sérum 3 30,0 (0,50) 0,7 (0,01) 2,3 Lidské sérum (2,02) 2 (0,03) 1,9 systémy cobas c 2 / , V 4 Česky

10 V4 Aspartate Aminotransferase acc. to IFCC without pyridoxal phosphate activation Porovnání metod Hodnoty AST pro vzorky lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 501 (y), byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím stené reagencie na analyzátoru Roche/Hitachi 917 (x). Počet vzorků (n) = 192 Passing/Bablok 14 Lineární regrese y = 1,000x - 0,15 U/L y = 0,991x + 1,22 U/L τ = 0,970 r = 0,999 Aktivita vzorků byla v rozmezí 30,4 až 674 U/L (0,50 až 11,3 µkat/l). Odkazy 1. Nagy B. Muscle disease. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation. St. Louis: Mosby 1984: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 2. IFCC method for aspartate aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-aspartate aminotransferase (EC , ASAT) Klin Chem Mitt 1989;20: Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 rd ed. Philadelphia, PA: WB Saunders,1995: Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C - Part 5. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Aspartate Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Breuer J. Report on the Symposium Drug Effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Thefeld W, Hoffmeister H, Busch, E-W, Koller PU, Vollmar J. Referenzwerte für die Bestimmungen der Transaminasen GOT und GPT sowie der alkalischen Phosphatase im Serum mit optimierten Standardmethoden. Dtsch Med Wschr 1974;99: Klein G, Lehmann P, Michel E, Regenauer H. Vergleich der IFCC-Methoden für ALAT, ASAT und GGT bei 37 C mit den eingeführten Standardmethoden bei 25 C und 37 C. Lab Med 1994;18: Zawta B, Klein G, Bablok W. Temperaturumrechnung in der klinischen Enzymologie? Klin Lab 1994;40: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim , V 4 Česky 3 / 3 systémy cobas c