METODY STANOVENÍ HLADIN VITAMÍNU D. Stanovení. Struktury 1α,25-dihydroxyvitamin D3 kalcitriol. Chemicky Chromatograficky Imunochemicky

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "METODY STANOVENÍ HLADIN VITAMÍNU D. Stanovení. Struktury 1α,25-dihydroxyvitamin D3 kalcitriol. Chemicky Chromatograficky Imunochemicky"

Hynek Bařtipán
před 8 lety
Počet zobrazení:

1 Vrzalová Jindra METODY STANOVENÍ HLADIN VITAMÍNU D Stanovení Chemicky Chromatograficky Imunochemicky Deproteinace a extrakce předcházející analýze Kyselina/zásada (denaturace bí.) + Acetonitril/hexan/metanol/benzen SPE odstraní i interferující lipidy Struktury 1α,25-dihydroxyvitamin D3 kalcitriol kalcidiol

2 Jednotky 25 OH vitamin D ng/ml nmol/l 1,25 OH vitamin D pg/ml pmol/l (nmol/l x 0.40) = ng/ml (pmol/l x 0.42) = pg/ml Chemicky Fotometrické a fluorimetrické barevné reakce s chloridem antimonitým nebo s trifluoroctovou kyselinou nedostatečně citlivé a specifické obsolentní HPLC Nejčastěji: reverzní stac. fáze mobilní fáze voda-metanol detekce je obvykle UV v oblasti 264 nm Komerční: Chromsystems Alpco Immunoassays Esa Biosciences ESA HPLC ECD plně automatizovaný

nedostatečně citlivé a specifické obsolentní HPLC Nejčastěji: reverzní stac.

3 HPLC/MS (/MS) Komerčně např. soupravy Perkin Elmer, Chromsystems Neaktivní 3-epimer 25OHD3 lze rozlišit až MS/MS APCI nebo ESI iontový zdroj NIST (USA): ID-LC-MS 2 H 6-25(OH)D3 a 2 H 3-25(OH)D2 Extrakce hexan, kolona s C18 a kyanopropyl. náplní APCI MS: positivní mód [M-H 2 O+H + ] HPLC/MS (/MS) Kratší doba samotné analýzy při použití MS detekce Zde např. 5 min. Jak vydávat výsledky HPLC??? Vydávání výsledků pro kliniku D2 a D3 odděleně??25 OHD2 a 25OHD3 a součet total 25OHD?

(USA): ID-LC-MS 2 H 6-25(OH)D3 a 2 H 3-25(OH)D2 Extrakce hexan, kolona s C18 a kyanopropyl.

4 Mezinárodní standard nově SRM 972 Level 1 normální lidské sérum Level 2 L.1 naředěno koňským sérem Level 3 L.1 fortifikované 25OH D2 Level 4 L.1 fortifikované 3-epi-25-OH D3 NIST (National Institute of Standards and Technology) Hladiny v SRM 972 Imunochemické 25 OH vit. D 25OH D SEKK BM1/11 Celkem 56 laboratoří RIA Diasorin 4 IDS 6 Chemiluminiscence CMIA Abbott Architect (restandardizace) 5 Siemens Bayer Advia Centaur 3 Liaison - Diasorin ECLIA Roche (nyní nově 2. generace - již navázána na SRM) 33 ELISA - IDS 1,25 OH vit. D pouze RIA po imunoextrakci IDS

1 fortifikované 3-epi-25-OH D3 NIST (National Institute of Standards and Technology) Hladiny v SRM 972 Imunochemické 25 OH vit.

ARCHITECT Imunochemické 2 Vytěsnění z vazby na proteiny Značené protilátky nebo vazebný protein Imunochemické m. - zdroj rozdílů Různá citlivost především k vit.

5 ARCHITECT Imunochemické 2 Vytěsnění z vazby na proteiny Značené protilátky nebo vazebný protein Imunochemické m. - zdroj rozdílů Různá citlivost především k vit. D2 Nutné sledovat tabulky zkřížených reaktivit a recovery Někdy skutečnost odpovídá údajům od výrobce Carter GD et al.: How accurate are assays for 25-hydroxyvitamin D? Data from the international vitamin D external quality assessment scheme. Clin Chem Nov;50(11): Srovnání Architect / RIA IDS N = y = 1, ,0081 x Intercept A 1, % CI -1,4445 to 5,4244 Slope B 1, % CI 0,9452 to 1,0793 Cusum test for linearity No significant deviation from linearity (P>0.10) RIA

Data from the international vitamin D external quality assessment scheme. Clin Chem. 2004 Nov;50(11):2195-7.

6 Liaison ROCHE Srovnání Roche I / RIA IDS N= y = 22, ,6337 x Intercept A 22, % CI 17,3468 to 26,8355 Slope B 0, % CI 0,5368 to 0,7605 Cusum test for linearity No significant deviation from linearity (P>0.10) RIA2 Srovnání Liaison / RIA IDS N= y = -8, ,2330 x 20 Intercept A -8, % CI -21,1318 to 0, Slope B 1,2330 RIA3 95% CI 1,0461 to 1,5271 Cusum test for linearity No significant deviation from linearity (P>0.10) EHK SEKK Kostní metabolismus Deqas : to ensure the analytical reliability of 25 hydroxyvitamin D (25OHD) and 1,25 dihydroxyvitamin D (1,25(OH)2D) assays Liquid serum pools (5) are distributed quarterly (January, April, July, October) at ambient temperature

10) 20 20 40 60 80 100 120 RIA2 Srovnání Liaison / RIA IDS 180 160 140 N= 40 120 100 80 60 40 y = -8,0442 + 1,2330 x 20 Intercept A -8,0442 0 95% CI -21,1318 to 0,3627 0 50 100 150 200 Slope B 1,2330

7 Referenční hodnoty 25 OH vit. D nmol/l ng/ml návod Architect (2,5-97,5 percentil) 23,75 138,75 9,5 55,5 návod Architect ženy 23,5 147,75 9,4 59,1 návod Architect muži 23, ,4 52,4 návod Architect léto 39,25 150,75 15,7 60,3 návod Architect zima ,75 8,8 46,3 návod Architect target value citlivost/nejnižší hodnota Architect 20 8 Clin. Chemistry, Bishop Euromedlab Euromedlab 2009 insuficience (grey zone) Euromedlab 2009 deficience Článek česky Nichols institute děti Článek česky Nichols institute léto Článek česky Nichols institute zima Článek česky Nichols institute zdraví léto 95% 41,6 192,4 16,64 76,96 Tietz severe deficiency pod 25 pod 10 Tietz moderare deficiency Tietz optimal ,4 80 Lothar Thomas 7. pac. do 50 let Lothar Thomas 7. pac. nad 50 let ,2 70 Lothar Thomas 7. stillzeit A mnoho dalších zdrojů Know What's a Normal Vitamin D Level so You ll Know More than Your Doctor Referenční hodnoty 1,25vit.D pmol/l pg/ml Návod RIA citlivost/nejnižší hodnota Clin. Chemistry Bishop Článek česky Nichols institute dospělí Tietz Lothar Thomas 7. dospělí Lothar Thomas 7. dospělí nad 50 Lothar Thomas 7. schwangere Lothar Thomas 7. děti ,06 70,56 5 2, , Kalkulátory??? Vitamin D metabolite calculator Marshallův protokol Zadání výsledku hladiny 1,25 OH vit. D a 25 OH vit. D Nikdo se ale neptá na metodu stanovení

návod Architect zima 22 115,75 8,8 46,3 návod Architect target value 75 30 citlivost/nejnižší hodnota Architect 20 8 Clin.

Podobné dokumenty

Současný stav stanovení vitaminu D v séru

Současný stav stanovení vitaminu D v séru J. Vávrová, B. Friedecký, J. Maláková Ústav klinické biochemie a diagnostiky Fakultní nemocnice Hradec Králové FONS 2012 Pardubice Vysoká poptávka po stanovení