Liquid Stable (LS) 2-Part HOMOCYSTEINE REAGENT

Transkript

1 Liquid Stable (LS) 2-Part HOMOCYSTEINE REAGENT FHRK Pouze pro odborné použití na COBAS MIRA Axis-Shield Diagnostics Ltd., The Technology Park, Dundee, DD2 1XA, UK Tel: +44 (0) Fax: +44 (0) Web:

2 Obsah pro COBAS MIRA: Použití... 3 Souhrn a vysv tlení testu.. 3 Princip kvantitativního rozboru... 4 Sou ásti sady.. 5 Uchovávání reagencií... 5 Varování a bezpe nostní opat ení.. 6 P íprava... 6 Odb r vzork a zacházení s nimi Výsledky... 7 Postupy kontroly kvality... 7 O ekávané hodnoty... 7 Omezení použití... 7 Data pro hodnocení výsledk... 8 Protokol kvantitativního rozboru.. 10 Odkazy na literaturu

3 ESKY: POUŽITÍ inidlo Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent je ur eno pro in vitro kvantitativní stanovení celkového homocysteinu v séru a plazm. Toto za ízení m že pomoci p i diagnóze a lé b pacient s podez ením na hyperhomocysteinémii a homocystinurii. Tento kvantitativní rozbor je ur en pouze pro profesionální použití. SOUHRN A VYSV TLENÍ TESTU Homocystein (HCY) je aminokyselina obsahující thiol vznikající mezibun nou demethylací methioninu. Homocystein je exportován do plazmy, kde obíhá v tšinou ve své oxidované form, vázán na plazmové proteiny jako sm sný protein-hcy disulfid albumin (protein-ss-hcy). 1-5 Jsou p ítomna i menší množství redukovaného homocysteinu a disulfid homocystein. Celkový homocystein (thcy) p edstavuje sou et všech druh HCY, které se nacházejí v séru nebo plazm (volný a vázaný na protein). Homocystein se metabolizuje bu na cystein nebo methionin. V transsulfura ní cest vitamínu B6 je homocystein ireverzibiln katabolizován na cystein. P evážná ást homocysteinu se remethyluje na methionin, hlavn prost ednictvím folát a kobalamin dependentního enzymu methioninsyntázy. Homocystein se akumuluje a vylu uje do krve, kde se tyto reakce zhoršují. 3,5 Siln zvýšené koncentrace celkového homocysteinu se objevují u pacient s homocystinurii, vzácnou genetickou poruchou enzym podílejících se na metabolismu homocysteinu. 2,6 U pacient s homocystinurii se projevuje mentální retardace, p ed asná arterioskleróza a arteriální a venózní tromboembolismus. 7-9 Epidemiologické studie zkoumaly vztah mezi zvýšenými hladinami homocysteinu a kardiovaskulárním onemocn ním (CVD). Metaanalýza 27 t chto studií zahrnujících více než 4000 pacient odhadla, že zvýšení celkového homocysteinu o 5 µmol/l bylo spojeno s pravd podobností výskytu onemocn ní koronárních artérií (CAD) 1,6 (95% interval spolehlivosti [Cl], 1,4 až 1,7 pro muže a 1,8 (95% CI 1,3 až 1,9) pro ženy; pravd podobnost cerebrovaskulárního onemocn ní byl 1,5 (95% CI 1,3 až 1,9). Riziko spojené se zvýšením celkového homocysteinu o 5 µmol/l bylo stejné jako riziko spojené se zvýšením cholesterolu o 0,5 mmol/l (20 mg/dl). Rovn ž se projevila silná souvislost s onemocn ním periferních artérií. 10 Hyperhomocysteinémie, zvýšené hladiny homocysteinu, lze dávat do souvislosti se zvýšeným rizikem CVD. Existuje rovn ž veliký po et publikovaných zpráv o prospektivních studiích zkoumajících stav mezi hyperhomocysteinémii a rizikem CVD u muž a žen, kte í byli zpo átku zdraví. Kone né výsledky byly založeny na kardiovaskulární p íhod, jako nap íklad infarkt myokardu, mrtvice, CAD nebo úmrtí. Výsledky jedenácti z t chto vno ených p ípadových kontrolních studií, které prov oval Cattaneo 11 byly dvojzna né, kde p t studií souvislost s rizikem potvrzovalo a šest nikoliv. Pozd ji byly hladiny homocysteinu stanovovány v prospektivní studii postmenopauzálních žen, které se ú astnily studie o ženském zdraví. Na homocystein byly testovány vzorky od 122 žen, u nichž následn došlo ke vzniku kardiovaskulárních p íhod, a porovnávány s kontrolní skupinou 244 žen, které jim byly postaveny narove z hlediska v ku a kou ení. Ženy v kontrolní skupin b hem t íletého sledovacího období nebyly onemocn ním postiženy. Výsledky prokázaly, že u postmenopauzálních žen, u nichž došlo ke kardiovaskulárním p íhodám, byly signifikantn vyšší výchozí hladiny homocysteinu. Ženám s hladinami v nejvyšší kvartilu hrozilo dvojnásobné zvýšení rizika jakékoliv kardiovaskulární p íhody. Ukázalo se, že zvýšené výchozí hladiny homocysteinu jsou nezávislým rizikovým faktorem. 12 Hladiny homocysteinu byly rovn ž stanovovány u 1933 starších muž a žen pro kohortu ve Framinghamov srde ní studii a prokázalo se, že zvýšené hladiny homocysteinu jsou nezávisle spojeny se zvýšenými mírami všeobecné úmrtnosti a úmrtnosti vyvolané CVD. 13 U pacient s chronickým onemocn ním ledvin se projevovala nadm rná morbidita a mortalita zp sobená arteriosklerotickou CVD. U t chto pacient se asto objevují nálezy zvýšené koncentrace homocysteinu v krvi. A koliv t mto pacient m chybí vitamíny podílející se na metabolismu homocysteinu, zvýšené hladiny HCY jsou hlavn zp sobeny zhoršeným 14, 15 odbouráváním HCY ledvinami z krve. Poslední d kaz rovn ž nep ímo nazna uje na roli zvýšených hladin homocysteinu v krvi na riziko potrat a vrozených vad. 16 Metabolismus HCY mohou narušovat lé iva jako metotrexát, karbamazepin, fenytoin, oxid dusný a 6-azauridin triacetát a mohou zvyšovat hladiny HCY. 17 3

4 PRINCIP KVANTITATIVNÍHO ROZBORU Vázaný homocystein nebo ve form diméru (oxidovaná forma) se redukuje na volný homocystein, který poté reaguje se serinem za katalýzy cystathionin beta-synthasou (CBS) za vzniku cystathioninu. Cystathionin je postupn rozkládán na homocystein cystathionin betalyasou (CBL), kdy p i tomto procesu vzniká i pyruvát a pavek. Pyruvát se poté konvertuje pomocí laktát dehydrogenásy (LDH) na laktát s nikotinamid adenin dinukleotidem (NADH) jakožto koenzymem. Rychlost konverze NADH na NAD+ je p ímo úm rná koncentraci homocysteinu ( A340 nm). Redukce: Dimérovaný homocystein, sm sný disulfid a formy HCY vázané na protein ve vzorku se redukují za vzniku volného HCY pomocí tris [2-karboxyethyl]fosfinu (TCEP). TCEP HCY-SS-HCY (dimérizovaný homocystein) R1-SS-HCY (R1 = thiolový zbytek) HCY Protein-SS-HCY Enzymatická konverze: Volný HCY se p evedena na cystathionin pomocí cystathionin betasyntázy a nadbyte ného serinu. Cystathionin se poté rozkládá na homocystein, pyruvát a pavek. Pyruvát se konvertuje na laktát pomocí laktát dehydrogenásy s NADH jako koenzymem. Rychlost konverze NADH na NAD+ ( A340 nm) je p ímo úm rná koncentraci homocysteinu. Serin Homocystein Cystathionin -syntháza (CBS) Cystathionin -lyáza (CBL) Cystathionin Pyruvát detekován p i 340 nm pomocí LDH/NADH Pyruvát + pavek 4

5 SOU ÁSTI SADY Bezbarvá kapalina bez zápachu Sv tle žlutá kapalina bez zápachu Bezbarvá kapalina bez zápachu Bezbarvá kapalina bez zápachu 1 x 30 ml v oranžové injek ní lahvi ce 1 x 5,0 ml v oranžové injek ní lahvi ce 1 x 3,0 ml v nepr hledn é injek ní lahvi ce (modré ví ko) 1 x 3,0 ml v nepr hledn é injek ní lahvi ce ( ervené ví ko) NADH (0,47 mm), LDH (38 tis.jednotek/l), Serin (0,76 mm), Trizma Base 1-10%, Trizma hydrochlorid 1-10%, Azid sodný < 1% Reduk ní inidlo (TCEP:2,9 mm) P ipraveno k použití Cyklické enzymy CBS (0,748 tis.jednotek/l) a CBL (16,4 tis.jednotek/l) Azid sodný < 1% P ipraveno k použití Vodný roztok bez homocysteinu (0 µmol/l). P ipraveno k použití Vodný roztok homocysteinu (28 µmol/l). P ipraveno k použití Kalibrátory se p ipravují gravimetricky a jsou vysledovatelné podle NIST SRM 1955, což se potvrzuje ur eným postupem m ení (vysokotlaká kapalinová chromatografie). P i azené hodnoty jsou vytišt ny na štítcích (0 µmol/l a 28 µmol/l). UCHOVÁVÁNÍ REAGENCIÍ Poznámky o manipulaci a zpracování 1. Sou ásti sady uchovávejte v rozmezí teplot 2-8 C a používejte do doby použitelnosti vyzna ené na štítcích. Reagencie s prošlou dobou použitelnosti nepoužívejte. 2. Nesm šujte reagencie ze sad s r znými ísly šarží. 3. CHRA TE REAGENCIE P ED MRAZEM. 4. Nevystavujte Reagencii 1 a Reagencii 2 p sobení sv tla b hem použití v p ístroji. 5. Chra te reagencie p ed zne išt ním. Používejte nový pipetovací hrot na jedno použití pro manipulaci s každou reagencií nebo vzorkem. 6. Uchovávání po vložení do p ístroje. Reagencie se nesmí uchovávat vložené do p ístroje COBAS MIRA. Známky zhoršení kvality Reagencie by m ly být bez materiálu z ástic. Jestliže se objeví turbidita, je nutné je zlikvidovat. 5

6 VAROVÁNÍ A BEZPE NOSTNÍ OPAT ENÍ Pouze pro diagnostické použití in vitro Bezpe nostní opat ení 1. P ísn dodržujte pokyny uvedené v tomto letáku, zejména podmínky pro nakládání a uchovávání. 2. Reagencii 1 a Reagencii 2 obsahují azid sodný, který m že reagovat s olovem nebo m dí v potrubí za vzniku výbušných azid kov. P i likvidaci proplachujte velkými objemy vody, aby se zabránilo tvorb azid. 3. Pro všechny nebezpe né složky obsažené v této sad jsou u Axis-Shield Diagnostics Ltd. k dispozici bezpe nostní listy materiálu na požádání. Škodlivé R22: Zdraví škodlivý p i požití. R32: Uvol uje vysoce toxický plyn p i styku s kyselinami. S36/37/39: Používejte vhodný ochranný od v, ochranné rukavice a ochranné brýle nebo obli ejový štít. S29/35: Nevylévejte do kanalizace, tento materiál a jeho obal musí být zneškodn ny bezpe ným zp sobem. S46: P i požití okamžit vyhledejte léka skou pomoc a ukažte tento obal nebo ozna ení. P ÍPRAVA Požadované materiály, které nejsou sou ástí dodávky 1. Deionizovaná voda. 2. Analyzátor schopný dávkovat dv inidla a m it absorbanci p i vlnové délce 340 nm za kontroly teploty (37 C). ODB R VZORK A ZACHÁZENÍ S NIMI 1. K m ení homocysteinu lze použít sérum (odebrané do sérových zkumavek) a plazmu (odebraná do zkumavek s draselnou solí EDTA nebo lithium heparinem). Nedoporu ujeme však používat výsledky jednotlivých pacient st ídav ze séra, heparinizované plazmy a plazmy EDTA. Pro minimalizaci nár st koncentrace homocysteinu ze syntézy ervenými krvinkami zpracovávejte vzorky následujícím zp sobem: - Po odb ru a p ed zpracováním uložte všechny vzorky (sérum a plazma) na led. Sérum se m že srážet pomaleji a objem se m že snížit P ed separací odst e ováním lze všechny vzorky uchovávat na ledu až po 6 hodin Odd lte ervené krviny od séry i plazmy centrifugací a p eve te do šálku na vzorky nebo do jiné nádoby. Poznámka: Vzorky, které nebudou okamžit uloženy na led, mohou vykazovat zvýšení koncentrace homocysteinu o 10-20% Jestliže se kvantitativní rozbor bude provád t v pr b hu 2 týdn po odb ru, vzorky je nutné uchovávat p i 2-8 C. Jestliže se testování opozdí o více než 2 týdny, vzorky je nutné uchovávat p i -20 C nebo nižších teplotách. Ukázalo se, že vzorky jsou stabilní p i -20 C po 8 m síc. 17,19 3. Provozovatel odpovídá za ov ení správného použitého typu( ) vzork u inidla Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent. 4. Zkontrolujte, zda-li nejsou v n jakém vzorku (vzorky, kalibra ní a kontrolní vzorky) p ítomny bubliny. P ed analýzou bubliny odstra te. 5. Pro dosažení optimálních výsledk je nutné, aby vzorky neobsahovaly fibrin, ervené krvinky nebo jinou ásticovou hmotu. Vyvarujte se používání siln lipemických vzork. 6

7 6. Aby se zajistila shoda výsledk po roztátí vzorky d kladn promíchejte nízkorychlostním vortexem nebo opatrným p evracením vzh ru nohama. Chra te p ed opakovaným zmražením a roztátím. Vzorky obsahující ástice, erytrocyty nebo zákal je nutné p ed testováním odst edit. 7. Uchovávání po vložení do p ístroje. Vzorky se mohou uchovávat vložené do p ístroje COBAS MIRA po dobu 3 hodin. COBA MIRA vytiskne výsledky v µmol/l. VÝSLEDKY POSTUPY KONTROLY KVALITY Zajist te provád ní odpovídající údržby a kalibrace podle pokyn výrobce. Pro vyhodnocení výkonnostních charakteristik inidel používejte materiál pro kontrolní kvantitativní rozbor s hodnotami pro homocystein v normálním i abnormálním rozmezí. Úkolem uživatel je pln se seznámit s pokyny pro kvantitativní rozbory, zejména s ástí Varování a bezpe nostní opat ení a Poznámky o nakládání a zpracování. Uživatelé musí prokázat, že získali výkonové technické parametry pro p esnost a rozsah vysledovatelných zkušebních výsledk srovnatelných s výsledky dosaženými výrobcem p edtím, než budou vykazovat výsledky pacientský test. K dostání u Axis-Shield je i kontrolní homocysteinová sada Axis-Shield (FHCY200), obsahující kontrolní vzorky s nízkých, st edním a vysokým rozsahem, pro použití s inidlem Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent. O EKÁVANÉ HODNOTY Zkušební rozsah: Je nutné, aby každá laborato stanovila referen ní rozsah pro potvrzení charakteristik testované populace. Následující údaje lze použít jako referen ní bod, dokud laborato neanalyzuje dostate ný po et vzork pro stanovení vlastního referen ního rozsahu. Koncentrace HCY v plazm i séru zdravých jednotlivc se m ní s v kem, pohlavím, geografickou polohu a genetickými faktory. V decká literatura uvádí referen ní hodnoty pro dosp lé muže a ženy v rozmezí od 5 do 15 µmol/l, kdy muži mají vyšší hodnoty než ženy a 17, 20, 21 postmenopauzální ženy mají vyšší hodnoty homocysteinu než ženy premenopauzální. Hodnoty HCY obvykle rostou s v kem, ímž se u starší populace (> 60 let) dostáváme k referen nímu rozp tí 5 20 µmol/l. 22 V zemích s programy posílení p íjmu kyseliny listové lze pozorovat snížené hladiny HCY. 23,24 M itelný rozsah: M itelný rozsah kapalného stabilního (LS) dvousložkového homocysteinového kvantitativního rozboru je 0-50 µmol/l. Vzorky v rozsahu kvantitativního rozboru byly na ed ny pod vedením Ústavu klinických a laboratorních standard (CLSI, d íve NCCLS), Dokument EP6-A 29 pomocí kalibrátoru 0 mol/l. OMEZENÍ POUŽITÍ 1. Mez linearity chování inidla Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent, jestliže se s ním pracuje podle pokyn, je do 50 µmol/l. 2. inidla by m la být pr hledná. Jestliže dojde k zakalení, zlikvidujte jej. 3. Cystathionin se m í pomocí homocysteinu, ale u b žné populace má hladina cystathioninu (0,065-0,30 µmol/l) zanedbatelný ú inek. Ve velmi vzácných p ípadech u pacient s terminálním stádiem onemocn ní ledvin a pacient se závažnými poruchami metabolismu mohou hladiny cystathioninu dramaticky vzr st a v n kterých p ípadech zp sobit rušení 25, 26 v tší než 20%. 4. M že dojít k p enosu hydroxylaminu p ítomného v n kterých inidlech obsahujících železo (sonda inidla nebo reak ní kyveta) a zp sobit falešn nízké výsledky. K odstran ní tohoto problému ve v tšin p ípad nesta í rutinní oplachovací postupy. Možným ešením byly speciální oplachovací protokoly, vým na za vzorek železa, který používá kyselinu askorbovou jako reduk ní inidlo nebo trvalé železo a vzorky homocysteinu na samostatných p ístrojích. 5. Karbamazepin, metotrexát, fenytoin, oxid dusný nebo 6-azauridin triacetát mohou nep ízniv ovliv ovat koncentraci homocysteinu. 17 7

8 6. Vzorky se zvýšenými hladinami protein ukazují >10% rozdíl v porovnání s výsledky získanými z normálních vzork a nesmí se používat. 7. Na COBAS MIRA NEJSOU zkumavky pro odd lení séra kompatibilní s inidlem Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent. DATA PRO HODNOCENÍ VÝSLEDK - COBAS MIRA Správnost Byla provedena korela ní studie se vzorky plazmy od o ividn zdravých dosp lých osob. Všechny vzorky byly analyzovány inidlem Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent a záchytným inidlem Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent podle dokumentu CLSI (d íve NCCLS) EP9-A2. 27 Všechny výsledky jsou založeny na 95% intervalu spolehlivosti. Vzorky inidla Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent uvád ly hodnoty od 5,3 do 47,9 µmol/l. Získané údaje poskytly následující statistické hodnoty: Srovnávací metoda Axis-Shield versus záchyt Po et vzork 95 Sklon regresní p ímky 0,965 Y-záchyt 0,021 Korela ní koeficient 1,0 P esnost Studie byla provád na podle pokyn dokumentu CLSI (d íve NCCLS) EP5-A2. 28 T i kontrolní panely HCY a t i panely s lidskou plasmou byly p edm tem kvantitativního rozboru p i použití dvou šarží inidel, p i replikaci t chto dvou šarží, p i dvou r zných denních dobách po 20 dn na jednom p ístroji (n=80). Každý den byla vynášena kalibra ní k ivka. Výsledky (zaokrouhlené na 1 desetinné místo) jsou shrnuty dále: Vzorek Šarže reagencie Pr m r (µmol/l) V rámci b hu CV % Celkem CV % Panel 1 1 6,6 6,7 7,5 2 6,4 6,5 8,4 Panel ,6 1,8 2,7 2 36,4 1,9 3,2 Panel ,1 2,6 3,0 2 47,1 1,7 3,2 Nízký kontrolní vzorek 1 6,5 2,8 4,6 2 6,5 2,9 4,0 St ední kontrolní vzorek 1 12,6 2,6 3,3 2 12,5 2,2 3,3 Vysoký kontrolní vzorek 1 25,5 1,8 2,6 2 25,5 1,8 2,1 8

9 Linearita ed ní Linearita ed ní inidla Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent na COBAS MIRA podle pokyn v dokumentu CLSI (d íve NCCLS) EP6-A 29 dává pr m rný výt žek v rozsahu ed ní pro každý vzorek 100% + 12% v celém rozsahu ed ní kvantitativního rozboru (6 50 µmol/l). Mez detekce Mez detekce (LOD) inidla Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent podle dokumentu CLSI (d íve NCCLS) EP17-A 30 byla stanovena na 1,0 µmol/l. Analytická specificita Specificita inidla Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent byla hodnocena podle pokyn v dokumentu CLSI (d íve NCCLS) EP6-A 31 pro interferující látky uvedené na následujícím seznamu. Interferující látka Koncentrace interferující látky % interference Bilirubin 20 mg/dl +10 Hemoglobin 500 mg/dl +10 ervené krvinky 0,4% +10 Triglycerid 500 mg/dl +10 Glutathion 1000 µmol/l +10 Methionin 800 µmol/l +10 Cystein 200 µmol/l +10 Pyruvát 1250 µmol/l +10 Žádná z t chto látek p i kvantitativním rozboru signifikantn neinterferovala. Možná rušení zp sobená lé ivy, onemocn ními nebo preanalytickými prom nnými viz strana 11 této p íbalové informace (odkaz 17). Vzájemná kontaminace Studie vzájemné kontaminace na COBAS MIRA ukazují, že vzájemná kontaminace je menší než mez detekce kvantitativního rozboru. % výt žek inidlo Liquid Stable (LS) 2-Part Homocysteine Reagent dává % výt žek % pro pr m r každého vzorku každého z následujících typ zkumavek (lithium heparin a sérum) p i porovnání s odpovídající pr m rnou hodnotou vzork draselné soli EDTA, p i emž se bere úvahu p esnost kvantitativního rozboru na COBAS MIRA. 9

10 PROTOKOL KVANTITATIVNÍHO ROZBORU -COBAS MIRA Procesní parametry COBAS MIRA: G E N E R A L Measurement Mode : ABSORB Reaction Mode : R-S-SR1 Calibration Mode : SLOPE AVG Reagent Blank : REAG/SOL Cleaner : NO Wavelength : 340 nm Decimal Position : 1 Unit : µmol/l : A N A L Y S I S *Post Dil. Factor : NO *Conc Factor : NO Sample CYCLE : 1 Volume : 20.0 µl Diluent NAME : H20 Volume : 8.0 µl Reagent CYCLE : 1 Volume : 280 µl : Start R1 CYCLE : 11 Volume : 28.0 µl Diluent NAME H20 Volume 4.0 µl : C A L C U L A T I O N Sample Limit : NO Reac. Direction : DECREASE Check : OFF *Convers. Factor : *Offset : *Test Range Low : NO *High : NO *Norm. Range Low : NO *High : NO Number of Steps : 1 Calc. Step A : KINETIC Readings : FIRST 14 LAST 24 *Reaction Limit : NO : C A L I B R A T I O N Calib. Interval : EACH RUN Blank SOL-POS : 1 *Reag. Range Low : NO *High : NO *Blank Range Low : NO *High : NO : **Standard POS : USER DEFINED **STD 1 : VALUE ON BOTTLE STD 2 : NO STD 3 : NO Replicate : DUP *Deviation : NO : *C O N T R O L *CS1 Pos : NO *CS2 Pos : NO *CS3 Pos : NO *Definováno uživatelsky **Zadejte hodnoty na injek ní lahvi ce kalibrátoru Zajist te, aby parametry kvantitativního rozboru p esn odpovídaly shora uvedeným parametr m. 10

11 ODKAZY NA LITERATURU 1. McCully KS. Vascular Pathology of Homocysteinemia: Implications for the Pathogenesis of Arteriosclerosis. Am J Pathol 1969;56: Malinow MR. Plasma Homocyst(e)ine and Arterial Occlusive Diseases: A Mini-Review. Clin Chem 1995;41: Ueland PM. Homocysteine Species as Components of Plasma Redox Thiol Status. Clin Chem 1995;41: Perry IJ, Refsum H, Morris RW, et al. Prospective Study of Serum Total Homocysteine Concentration and Risk of Stroke in Middle-aged British Men. The Lancet 1995;346: Finkelstein JD. Methionine Metabolism in Mammals. J Nutr Biochem 1990;1: Mudd SH, Levy HL, Skovby F. Disorders of Transsulfuration. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, et al., eds The Metabolic and Molecular Basis of Inherited Disease. New York: McGraw- Hill, 1995; Clarke R, Daly L, Robinson K, et al. Hyperhomocysteinemia: An Independent Risk Factor for Vascular Disease. N Engl J Med 1991;324: Deloughery TG, Evans A, Sadeghi A, et al. Common Mutation in Methylenetetrahydrofolate Reductase. Circulation 1996;94: Schmitz C, Lindpaintner K, Verhoef P, et al. Genetic Polymorphism of Methyenetetrahydrofolate Reductase and Myocardial Infarction. Circulation 1996;94: Boushey CJ, Beresford SAA, Omenn GS, et al. A Quantitative Assessment of Plasma Homocysteine as a Risk Factor for Vascular Disease. JAMA 1995;274: Cattaneo M. Hyperhomocysteinemia, Artherosclerosis and Thrombosis. Thromb Haemost 1999;81: Ridker PM, Manson JE, Buring JE, et al. Homocysteine and Risk of Cardiovascular Disease Among Postmenopausal Women. JAMA 1999;281: Bostom AG, Silbershatz H, Rosenberg IH, et al. Nonfasting Plasma Total Homocysteine Levels and All-Cause and Cardiovascular Disease Mortality in Elderly Framingham Men and Women. Arch Intern Med 1999;159: Guttormsen AB, Svarstad E, Ueland PM, et al. Elimination of Homocysteine from Plasma in Subjects with Endstage Renal Failure. Irish J Med Sci 1995;164 (Suppl. 15): Bostom AG, Lathrop L. Hyperhomocysteinemia in End-stage Renal Disease: Prevalence, Etiology, and Potential Relationship to Arteriosclerotic Outcomes. Kidney Int 1997;52: Rosenquist TH, Ratashak SA, Selhub J. Homocysteine Induces Congenital Defects of the Heart and Neural Tube: Effect of Folic Acid. Proc Natl Acad Sci USA 1996;93: Ueland PM, Refsum H, Stabler SP, et al. Total Homocysteine in Plasma or Serum: Methods and Clinical Applications. Clin Chem 1993;39: Ueland PM, Refsum H. Plasma Homocysteine, A Risk Factor for Vascular Disease: Plasma Levels in Health, Disease, and Drug Therapy. J Lab Clin Med 1989;114: Fiskerstrand T, Refsum H, Kvalheim G, et al. Homocysteine and Other Thiols in Plasma and Urine: Automated Determination and Sample Stability. Clin Chem 1993;39: Nehler MR, Taylor LM Jr, Porter JM. Homocysteinemia as a Risk Factor for Atherosclerosis: A Review. Cardiovascular Pathol 1997;6: Lussier-Cacan S, Xhignesse M, Piolot A, et al. Plasma Total Homocysteine in Healthy Subjects: Sex-Specific Relation with Biological Traits. Am J Clin Nutr 1996;64: Clarke R, Woodhouse P, Ulvik A, et al. Variability and Determinants of Total Homocysteine Concentrations in Plasma in an Elderly Population. Clin Chem 1998;44: Jacques PF, Selhub J, Bostom AG, et al. The Effect of Folic Acid Fortification on Plasma Folate and Total Homocysteine Concentrations. N Engl J Med 1999;340: Lawrence JM, Petitti DB, Watkins M and Umekubo MA. Trends in Serum Folate after Food Fortification. The Lancet 1999;354: Herrmann W, Schorr H, Obeid R, et al. Disturbed Homocysteine and Methionine Cycle Intermediates S-adenosylhomocysteine and S-adenosylmethionine are Related to Degree of Renal Insufficiency in Type 2 Diabetes. Clin Chem 2005:51; Obeid R, Kuhlmann MK, Kohler H, et al. Response of Homocysteine, Cystathionine, and Methylmalonic Acid to Vitamin Treatment in Dialysis Patients. Clin Chem 2005;51: National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method Comparison and Bias Estimation using Patient Samples; Approved Guideline-Second Edition. NCCLS document EP9-A2. Wayne, PA: NCCLS, National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline Second Edition. NCCLS Document EP5-A2, Wayne, PA: NCCLS,

12 29. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline. NCCLS Document EP6-A. Wayne, PA: NCCLS, National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. NCCLS Document EP17-A. Wayne, PA: NCCLS, Clinical Laboratory Standards Institute. Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline Second Edition. CLSI Document EP7-A2. Wayne, PA: CLSI,

13 Zdravotnický prost edek pro diagnostiku In Vitro Kód výrobku íslo šarže 100 test Prostudujte návod k použití Použijte do Uchovávejte p i 2-8 C Výrobce Uchovávejte v temnu Reagencie 1, 2 Kalibrátor 0 µmol/l, kalibrátor 28 µmol/l Axis-Shield Diagnostics Ltd., The Technology Park, Dundee, DD2 1XA, UK Tel: +44 (0) Fax: +44 (0) Ver 2008/09 13