Chromatografické metody
|
|
- Růžena Lišková
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Chromatografické metody Irina Nikolova, Mgr. Oddělení ochrany čistoty ovzduší Český hydrometeorologický ústav, pobočka Ústí nad Labem Kočkovská 18, Ústí nad Labem tel: fax: mail 1
2 Chromatografické metody V současné době jsou nejvýznamějšími separačními metodami, které jsou zároveň i metodami kvantitativně analytickými. Zakladatelem je ruský chemik a botanik Cvět ( ), který ve skleněné koloně naplněné uhličitanem vápenatým rozdělil listová barviva. Chromatografie (z řečtiny χρώμα barva, γραφειν psát) je souhrnné označení pro skupinu fyzikálněchemických separačních metod. Výsledek chromatografie chlorofylu 2
3 Terminologie a obecný princip Analyty složky vzorku/směsi, které mají být chromatograficky rozděleny Mobilní fáze neboli eluent, je fáze pohybující se chromatografickým systémem. Tato fáze přivádí vzorek do stacionární fáze, kde dochází k jeho separaci Stacionární fáze je v chromatografickém systému ta fáze, která je nepohyblivá. Stacionární fází může být pevná látka nebo film kapaliny zakotvený na pevné látce. - k separaci analytu dochází na základě distribuce mezi 2 fáze: mobilní (pohyblivou) a stacionární (nepohyblivou) - složky směsi se liší svojí afinitou k oběma fázím - dělení je založeno na rozdílné distribuci složek směsi mezi mobilní a stacionární fázi a liší se vzájemně dobou setrvání v jednotlivých fázích - po určité době se ustaví dynamická rovnováha poměr látkových množství každé látky ve fázi stacionární a mobilní je konstantní základní princip chromatografického procesu 3
4 Start B A směr pohybu mob. fáze mobilní fáze stacionární fáze B A A B fázové rozhraní I. II. t 1 t 2 III. Kolona nebo plošné uspořádání - směs je na kolonu nebo papír vnesena v intervalu I. - po dosažení dynamické rovnováhy (interval II.) platí pro každou látku, že její látkové množství v jednotlivých fázích je konstantní, takže: n(a) SF /n(a) MF = k A n(b) SF /n(b) MF = k B k - kapacitní poměr Látka A je více zadržována stacionární fází a látka B mobilní fází. Výsledkem je separace obou látek 4
5 Rozdělení chromatografických metod Rozdělení chromatografie podle uspořádání chromatografie v plošném (planárním) uspořádání - papírová chromatografie (PC, paper chromatography) - tenkovrstvá chromatografie (TLC, thin layer chromatography) chromatografie v kolonovém (sloupcovém) uspořádání Základní rozdělení podle separačního principu (mechanismu) adsorpční chromatografie rozdělovací (partiční) chromatografie iontová výměna Rozdělení chromatografie podle skupenství fází kapalinová chromatografie (LC, liquid chromatography): mobilní fáze je kapalina plynová chromatografie (GC, gas chromatography): mobilní fáze je plyn 5
6 Rozdělení chromatografických metod hlavní typ chromatografie mobilní fáze stacionární fáze název zkratka anglický název plynová chr. (GC gass chromatography) plyn kapalina pevná látka plynová rozdělovací chromatografie plynová adsorpční chromatografie GLC GSC gass-liquid chr. gass-solid chr. kapalinová rozdělovací chromatografie LLC liquid-liquid chr. kapalina gelová permeační chromatografie GPC gel-permeation chr. kapalinová chr. (LC liquid chromatography) kapalina papírová chromatografie PC paper chr. tenkovrstvá chromatografie TLC * thin layer chr. kapalinová adsorpční chromatografie LSC liquid-solid chr. pevná látka iontově výměnná chromatografie tenkovrstvá chromatografie * TLC chromatografie existuje jako rozdělovací (stacionární fází je kapalina zakotvená na pevné látce) i jako adsorpční (stacionární fází je přímo tuhá látka) chromatografie IEC TLC * ion exchange chr. thin layer chr. 6
7 CHROMATOGRAFIE V PLOŠNÉM USPOŘÁDÁNÍ Papírová chromatografie (Paper Chromatography, PC) rozdělovací - stacionární fáze je kapalina zachycená v papíře a mobilní fáze je též kapalná - starší a jednodušší metoda Tenkovrstvá chromatografie (Thin Layer Chromatography, TLC) rozdělovací - stacionární fáze je kapalina zachycená na tenké vrstvě a mobilní fáze je také kapalná adsorpční - stacionární fáze je tuhý adsorbent, který je součástí tenké vrstvy, a mobilní fáze je kapalná - jednoduchá, levná metoda, vyžaduje minimální instrumentaci Vysokoúčinná tenkovrstvá chromatografie (High Performance Thin Layer Chromatography, HPTLC) - využívá účinné stacionární fáze o malé a jednotné velikosti částic, instrumentaci pro automatické dávkování, vyvíjení (čerpadlo) a detekci => srovnatelná metoda s GC či HPLC 7
8 Princip dělení analytů při PC a TLC Vzorek se nanese ve formě malé kulaté skvrnky na papír nebo tenkou vrstvu a poté se mobilní fáze nechá vzlínat póry papíru nebo tenké vrstvy. Mobilní fáze unáší dělené látky ze vzorku, které se více či méně zpožďují interakcí (rozpouštěním nebo adsorpcí) se stacionární fází, a tím se vzájemně dělí. Poměr vzdálenosti středu koncentračního maxima každé zóny od startu ke vzdálenosti čela mobilní fáze od startu se označuje jako retardační faktor (R F ). Chromatogram se vyvíjí v uzavřené chromatografické komoře, která je dobře nasycena parami mobilní fáze. 8
9 Vyvíjení Rozdělení podle uspořádání : Vzestupné vyvíjení Sestupné vyvíjení Kruhové (radiální) vyvíjení Opakovatelné vyvíjení (eluent o jiné polaritě) Dvojrozměrné vyvíjení 9
10 Detekční metody při PC a TLC Vyvíjení se ukončí vyjmutím chromatogramu z vyvíjecí komory, když čelo mobilní fáze dosáhne téměř protilehlého okraje papíru či tenké vrstvy. Chromatogram se vysuší a skvrny nebarevných analytů je třeba před vyhodnocováním chromatogramu detegovat použitím vhodné detekční metody. Detekční metody 1) ponoření nebo postřik chromatogramu vhodným činidlem konc. H 2 SO 4 (pouze TLC), KMnO 4, I 2 (organické látky); dithizon (ionty kovů); ninhydrin (aminy, AMK, aminocukry), fluorescamin (aminy, peptidy, sulfonamidy); acidobazické indikátory (kyseliny nebo zásady) 2) fluorescence luminoforů v UV záření (excitace při 254 nm) 3) zhášení fluorescence tenkovrstvé desky nadopované fluorescenčním indikátorem (např. hořčíkem aktivovaný křemičitan zinečnatý) 10
11 Kvalitativní vyhodnocení chromatogramu Jednotlivé separované analyty se charakterizují tzv. Retardačním faktorem R F. R F, i u u i m d d i m 1 1 k u i - rychlost skvrny i-tého analytu u m - rychlost (čela) mobilní fáze d i - vzdálenost středu skvrny i-tého analytu od startu d m - vzdálenost čela mobilní fáze od startu R F <0, 1> R F =0 látka nemigruje, zůstává na startu R F =1 látka se nezadržuje, migruje s čelem rozpouštědla 11
12 Identifikace analytů Protože existuje značné množství faktorů (např. teplota, malé odchylky ve složení chromatografické soustavy, vlhkost), které do jisté míry ovlivňují polohu zóny, a tedy hodnotu R F, vyvíjíme obvykle na chromatogramu zároveň vzorek standardu (autentické látky). Dosáhne-li standard a látka oddělená z neznámého vzorku stejné hodnoty R F (a to nejméně ve třech různých chromatografických soustavách), je pravděpodobné, že se jedná o látky chemicky totožné. R F, rel, i R R F, i F, std R F,rel,i je relativní retardační faktor tj. retardační faktor chromatografované látky vztažený k retardačnímu faktoru standardu 12
13 Kvantitativní vyhodnocení Množství látky v zóně lze odhadnout podle její plochy, kvantitativně stanovit fotodozimetrem, či po vymytí látky ze zóny vhodným rozpouštědlem a stanoví se vhodnou metodou v roztoku. 13
14 TENKOVRSTVÁ CHROMATOGRAFIE (TLC) jednoduchá, rychlá a často používaná chromatografická metoda, se kterou se dají realizovat všechny metody kapalinové chromatografie. Tenkovrstvou chromatografii lze charakterizovat jako chromatografii v otevřené koloně. Na tenké vrstvě je podstatně méně stacionární fáze a tudíž analýza na tenké vrstvě může být velmi rychlá v porovnání s kolonou. Všechny nanesené látky se musí objevit mezi startem a čelem rozpouštědla; nic nemůže zůstat v koloně. 14
15 Chromatografie v kolonovém (sloupcovém) A+B+C Kol Vzorek C B C B Mobilná fáze C C uspořádání t Ro čas nástřiku t R, A retenční čas latky A t R, B retenční čas latky B t R, C retenční čas latky C Det A A B chromatogram B C C retenční čas: kvalitativní charakteristika (závisí na druhu látky) plocha píku: kvantitativní údaj (závisí na množství látky) t Ro t R, A t R, B t R, C 15
16 Chromatografie v kolonovém (sloupcovém) uspořádání 16
17 RETENČNÍ DATA Retenční čas a retenční objem Měření retence v eluční chromatografii může být vyjádřeno retenčním časem (t R ), přímo definovaným polohou vrcholu píku na chromatogramu. Z retenčního času může být vypočítán retenční objem (V R ) podle vztahu: V R = t R F m, v němž značí: t R - retenční čas nebo vzdálenost podél základní linie od bodu nástřiku ke kolmici spuštěné z vrcholu píku odpovídajícího dané složce, F m objemový průtok mobilní fáze. 17
18 Hmotnostní distribuční poměr Hmotnostní distribuční poměr známý jako kapacitní faktor k nebo retenční faktor je definován jako: k' A n n ( A) s ( A) m c c ( A) s ( A) m V V s m k D V V s m kc v němž značí: k A - kapacitní poměr pro látku A, n (A)s - množství rozpuštěné látky A ve stacionární fázi, n (A)m - množství rozpuštěné látky A v mobilní fázi, k D - rovnovážný distribuční koeficient (známý jako distribuční konstanta), V S - objem stacionární fáze, V M - objem mobilní fáze, β je fázový poměr, β = V m /V s. 18
19 Hmotnostní distribuční poměr kapacitní faktor k složky může být určen z chromatogramu s použitím výrazu: k' A t R - t t M M t' t R M v němž značí: t R - retenční čas nebo vzdálenost (nebo objem) podél základní linie od bodu nástřiku ke kolmici spuštěné z vrcholu píku odpovídajícího dané složce, t M - mrtvý čas nebo vzdálenost (nebo objem) podél základní linie od bodu nástřiku ke kolmici spuštěné z vrcholu píku odpovídajícího nezadržované složce, t R redukovaný retenční čas, t R = t R t M. 19
20 Klasická teorie chromatografických pater (ideální chromatografie) Chromatografická kolona je tvořena velkým či menším množstvím tzv. teoretických pater. Složky vzorku unášené tokem mobilní fáze vstupují do 1. patra kolony nerozdělené. Zde se ustavuje rovnováha mezi stacionární fází 1.patra a mobilní fází. Po ustavení rovnováhy se změní koncentrace složek v mobilní fázi a roztok dělených látek v mobilní fázi vstupuje do 2.patra, kde se opět ustavuje rovnováha mezi fázemi. Celý proces se mnohonásobně opakuje. Na počtu pater kolony je závislá účinnost separace. Zjednodušující předpoklady: rovnováha mezi fázemi se ustavuje okamžitě podélná difuse látky je zanedbatelná sorpční izoterma je zcela lineární pístový tok mobilní fáze 20
21 Počet teoretických pater N Počet teoretických pater N bezrozměrná veličina pro vyjádření účinnosti chromatografické kolony. Vypočítá se z šířky píku v chromatogramu N = 16. (t R /w) 2 nebo N = 5,54. (t R /b 1/2 ) 2 v němž značí: w šířka píku u základní linie b 1/2 šířka píku v polovině výšky Výškový ekvivalent teoretického patra H délka kolony připadající na jedno teoretické patro H L N 21
22 Počet teoretických pater N Počet teoretických pater N bezrozměrná veličina pro vyjádření účinnosti chromatografické kolony. Vypočítá se z šířky píku v chromatogramu. N = 16. (t R /w) 2 nebo N = 5,54. (t R /b 1/2 ) 2 v němž značí: w šířka píku u základní linie b 1/2 šířka píku v polovině výšky Výškový ekvivalent teoretického patra H délka kolony připadající na jedno teoretické patro H L N 22
23 Van Deemterova rovnice 23
24 Van Deemterova rovnice 24
25 Van Deemterova rovnice 25
26 Van Deemterova rovnice EcCbC&subNav=wnjedDsHqnOxmOlIEcCbCmF 26
27 Van Deemterova rovnice 27
28 Rozlišení Rozlišení R S je parametr charakterizující míru oddělení dvou píků (složek 1 a 2) R S = 2 (t R2 -t R1 )/(w 1 +w 2 ) = 2Δt/(w 1 +w 2 ) w šířka píku u základní linie W1 W2 Dosažení požadovaného rozlišení R S = 1 dostatečné R S = 1,5 téměř dokonalé R S > 2 nadbytečné 28
29 Rozlišení 29
30 Rozlišení R S N 1 k' k' 2 účinnost selektivita retence Faktory ovlivňující rozlišení selektivita vyjadřovaná separačním (selektivitním) faktorem α α = k 2/k 1 = t R2 /t R1 (t R2 > t R1 ) Když α=1 => R=0 retence později eluované složky vyjádřená jejím kapacitním poměrem účinnost vyjádřená odmocninou z počtu teoretických pater Ovlivnění selektivity a retence Volba mobilní fáze, volba stacionární fáze, teplota. Ovlivnění účinnosti Délka kolony, velikost částic, průtok. 30
31 Rozlišení R S N 1 k' k' 2 α - Největší vliv na rozlišení zvýšení lze dosáhnout optimalizací stacionární i mobilní fáze. N - Má význam, ale rozlišení roste jen s druhou odmocninou N. k - pro vyšší retenční časy se poslední člen blíží k 1 a nemá tedy smysl dále retenci zvyšovat. 31
32 Rozlišení subnav=ywjeddshqnoxmolieccbcqe 32
33 Rozlišení Efektivní počet pater N ef = N. [k 2 /(1+k 2 ) ] 2 R S N 4 ef 1 Počet teoretických pater N je proporcionální k délce kolony L. To znamená že i rozlišení R je proporcionální odmocninou délky kolony L. Dvounásoubná délka kolony zvyšuje R jenom 1,41 krát. 33
34 Potřebný počet efektivních pater k dosažení hodnoty rozlišení 1 a 1,5 Separační faktor α R S =1 R S =1,5 N ef 1, , , , , , , ,
35 CHROMATOGRAFICKÁ DATA Pík může být definován plochou píku (A) nebo výškou píku (h) a šířkou píku v poloviční výšce (b 1/2 ) nebo výškou píku (h) a šířkou píku mezi body inflexe (w). Pro gaussovské píky platí vztah: w 1/2 =1,18w 35
36 ASYMETRIE PÍKU Asymetrie píku souvisí s účinností kolony a má negativní vliv na integraci píku. Existují dvě metody vyjádření asymetrie píku a to jako faktor asymetrie A S, který je vyjádřen jako poměr šířky píku vzestupné (t) k sestupné části píku (f) nejčastěji v 5 nebo 10 % výšky píku: A S a dále faktor chvostování píku (tailing faktor) T f, který je vyjádřen jako šířka píku k dvojnásobku šířky píku vzestupné části f v 5 % výšky píku: T f t t f f f
37 ASYMETRIE PÍKU Hodnota faktoru 1,0 značí úplnou (ideální) symetrii píku. T f > 1 pro píky asymetrické v sestupné časti ( tailing píky) T f < 1 pro píky asymetrické v vzestupné časti ( fronting píky) 37
38 Plynová chromatografie - GLS Schématický nákres plynového chromatografu: Metoda GLC je instrumentální metoda (tzn. používá se přístroj vyrobený přímo pro provádění GLC analýz). Přístroj používaný pro plynovou chromatografii se nazývá plynový chromatograf. Podmínka pro použití GC: látka musí být Plynová rozdělovací chromatografie (GLC) používá jako mobilní fázi plyn a jako stacionární fázi kapalinu zakotvenou na povrchu pevné látky těkavá a termicky stabilní, látky netěkavé je třeba derivatizovat. plynový chromatograf firmy Agilent 38
39 Nosný plyn Nosný plyn slouží v GLC chromatografii jako transportní médium pro plynnou směs, která je analyzována. Nosný plyn neinteraguje se stacionární fází ani se složkami analyzované směsi na rozdíl od kapalinové chromatografie, kde dochází k významné interakci mezi mobilní fází a analyzovanou směsí. Jako nosný plyn se používají plyny He, Ar, N 2, H 2, CO 2. Regulátor průtoku slouží pro udržení konstantní průtokové rychlosti (nebo konstantního tlaku) nosného plynu v separační koloně během analýzy. výhody nevýhody H 2 levný dává nejlepší časově efektivní separace efektivní separace i při vysokých průtokových rychlostech nosného plynu ( ~60 cm/sec) může tvořit výbušné směsi se vzduchem je to redukční plyn He velmi inertní, nereaguje s analyty dává velmi časově efektivní separace nehořlavý drahý N 2 levný velmi inertní, nereaguje s analyty nehořlavý velmi pomalé rychlosti k dosažení dobré účinnosti 39
40 Nosný plyn 40
41 Nástřikový port Nástřikový port je místo, které slouží pro vpravení vzorku do plynového chromatografu a do separační kolony. Nástřik se provádí ručně nebo automaticky speciální injekční stříkačkou (typický objem 1 ul). Nastřikovaný vzorek může být kapalný nebo plynný. V případě kapalných vzorků musí mít nástřikový port dostatečně vysokou teplotu aby došlo k okamžitému převedení vzorku do plynného stavu. Plynný vzorek je z nástřikového portu zaveden do proudu nosného plynu, který ho pak transportuje přes kolonu, přičemž dochází k separaci složek analyzované směsi. Pokud je původní vzorek jen velmi málo těkavý a byl by problém s jeho odpařením, pak se provede jeho derivatizace. Typickým příkladem derivatizace je například převedení málo těkavých mastných kyselin chemickou reakcí na methylestery mastných kyselin, které jsou již dobře analyzovatelné plynovým chromatografem. 41
42 Nástřikový port Nástřiky plynné fáze mohou být prováděny pomocí statických nebo dynamických head-space dávkovacích systémů. Dynamické head-space (Purge and Trap system) dávkovací systémy pro adsorpci a desorpci obsahují probublávací zařízení, pomocí kterého jsou těkavé látky uvolňovány z roztoku a vyplavovány do adsorpční kolonky udržované na nízké teplotě. Zadržené látky jsou pak desorbovány do mobilní fáze rychlým ohřátím adsorpční kolonky. Statické head-space dávkovací systémy obsahují termostatovanou komůrku, do které se vkládají uzavřené nádobky, obsahující pevné nebo kapalné vzorky na předem stanovenou dobu, potřebnou k ustavení rovnováhy těkavých složek vzorku mezi pevnou nebo kapalnou fází a plynnou fází. Po dosažení této rovnováhy je předem určené množství plynné fáze z lahvičky dávkováno do plynového chromatografu. 42
43 Požadavky: rychlá odezva vysoká citlivost selektivita linearita odezvy stabilita Detektory Detektory tepelně vodivostní detektor, katarometr (TCD, thermal conductivity detector) plamenový ionizační detektor (FID, flame ionization detector) termoionizační detektor, plamenový ionizační detektor se solí alkalického kovu, dusíkofosforový detektor (TID, thermionic detector, AFID alkali flame ionization detector, NPD) detektor elektronového záchytu (ECD, electron capture detector) plamenový fotometrický detektor (FPD, flame photometric detector) atomový emisní detektor (AED, atomic emission detector) hmotnostně spektrometrický detektor (MSD, mass spectrometric detector) další detektory heliový nebo argonový ionizační detektor infračervený (FTIR) detektor fotoionizační detektor (PID) chemiluminiscenční detektor 43
44 Detektory Vlastnosti detektorů 44
45 Stacionární fáze Stacionární fáze jsou umístěny v kolonách, které mohou být: - kapilární kolony (capillary column) (křemenné, skleněné), na jejichž stěnách jsou naneseny stacionární fáze WCOT(wall coated open tubular) SCOT (support coated open tubular) PLOT (porous layer open tubular) 45
46 Stacionární fáze Stacionární fáze jsou umístěny v kolonách, které mohou být: - kapilární kolony (capillary column) (křemenné, skleněné), na jejichž stěnách jsou naneseny stacionární fáze WCOT(wall coated open tubular) SCOT (support coated open tubular) PLOT (porous layer open tubular) - náplňové kolony (packed column) (kovové, skleněné) - kolony naplněné inertními částicemi impregnovanými stacionární fází (GLC), - kolony naplněné pevnou stacionární fází (GSC). Parametr kolony Náplňové WCOT SCOT délka, m vnitřní průměr, mm 2-4 0,1-0,75 0,5 Počet pater, m Množství vzorku, μg 0, ,01-1 0,01-1 Tlak velký malý malý 46
47 Stacionární fáze Výběr stacionární fáze/kolony polarita selektivita Nepolární analyty mají vysokou retenci na nepolárních stacionárních fázích a naopak. Nepolární sloučeniny a sloučeniny o střední polaritě je vhodné dělit na nepolární nebo středně polární stacionární fázi. Pro dělení polárních sloučenin se hodí polární a středně polární fáze. 47
48 Teplotní program Chromatografická kolona je uložená v termostatu. Teplotní program může být: - isotermický - s programovanou teplotou (teplotním gradientem) Příklad optimizace teplotního programu na koloně: 2.3 m MXT-5 Silicosteel column with a 180 μm I.D. and a 0.4 μm 5% phenyl/95% dimethyl polysiloxane film Látky v směsi: n-hexane n-octane n-nonane n-decane n-undecane n-dodecane n-tridecane 48
49 Optimizace metody výběr mobilní fáze (nosného plynu) výběr stacionární fáze: - typ kolony (polarity) - délka kolony (prakticky 5-60 m) - průměr kolony (prakticky 0,1-0,53 mm) - tloušťka filmu (bývá typicky 0,1-0,25µm) optimizace průtoku optimizace teploty, teplotního programu výběr detectoru noxmolieccpbkf&subnav=acdsedshqnoxmolieccpbkfdf 49
50 Optimizace metody výběr mobilní fáze (nosného plynu) výběr stacionární fáze: - typ kolony (polarity) - délka kolony (prakticky 5-60 m) - průměr kolony (prakticky 0,1-0,53 mm) - tloušťka filmu (bývá typicky 0,1-0,25µm) optimizace průtoku optimizace teploty, teplotního programu výběr detectoru noxmolieccpbkf&subnav=acdsedshqnoxmolieccpbkfdf 50
51 Optimizace metody 51
52 Vzorek se vpraví do kolony spec. injekční stříkačkou přes gumové septum. Objem závisí na použité koloně a charakteru vzorku. Plynné vzorky od 0,5-20 ml. Kapalné vzorky 1 10 l. Vyhodnocení chromatografických křivek - pro identifikaci látky je rozhodující eluční (retenční) čas - pro kvantitativní analýzu je rozhodující výška nebo plocha píkem ohraničená. - nutná kalibrace pomocí standardních látek 52
53 53 Naše chromatografická laboratoř
54 Kapalinová chromatografie - HPLC Schématický nákres kapalinového chromatografu: Mezi metodami kapalinové chromatografie zaujímá významné místo technika HPLC. Zkratka je odvozena od dvou používaných názvů této techniky a to high performance liquid chromatography (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) nebo high pressure liquid chromatography (vysokotlaká kapalinová chromatografie). Mobilní fází je kapalina. Stacionární fází je film příslušné látky zakotvený na povrchu nosiče nebo pevný adsorbent. Přístroj, na kterém se provádí HPLC analýzy se nazývá kapalinový chromatograf. kapalinový chromatograf firmy Agilent 54
55 Kapalinová chromatografie - HPLC Metoda HPLC existuje jako tzv. normální a reversní. Normální HPLC Při normální HPLC je stacionární fáze polárnější než fáze mobilní. Reversní HPLC Při reversní HPLC je naopak stacionární fáze méně polární než fáze mobilní. Reversní HPLC bývá též označovaná jako RP HPLC (reverse phase HPLC). RP HPLC technika je již řadu let používána mnohem častěji než normální HPLC. Dále se budeme věnovat technice RP HPLC. 55
56 Mobilní fáze Mobilní fází v RP HPLC může být např. voda, methanol, acetonitril a jejich směsi v různých vzájemných poměrech a další. Zásobníky jsou skleněné láhve, kterých může být několik s navzájem různými mobilními fázemi, které je možné spolu automaticky mísit v předem zvoleném poměru. Na rozdíl od GLC zde mobilní fáze vstupuje do interakce se složkami analyzované směsi a konkrétní složení mobilní fáze může významným způsobem ovlivňovat celou analýzu (kvalitu separace). Izokratická eluce: Složení mobilní fáze (její eluční síla) se během analýzy nemění. Gradientová eluce: Eluční síla mobilní fáze vzrůstá během analýzy. Výhody gradientové eluce: Vhodnější pro komplexní vzorky s velkým počtem analytů Lepší rozlišení pro píky na začátku a konci chromatogramu Vyšší citivost pro píky na konci chromatogramu Větší kapacita píků (víc se jich vejde do chromatogramu) Nevýhody gradientové eluce: Náročnější instrumentace (čerpadla) Náročnější vývoj metody Delší doby analýzy vyplývající z nutnosti ekvilibrace kolon 56
57 Stacionární fáze Stacionární fáze je tvořena mikročásticemi silikagelu (2-10 um) na kterých je navázána vlastní stacionární fáze. Vlastní stacionární fáze může být tvořena například nepolárními uhlovodíky (C8 oktan, C18 oktadekan), nebo polárnějšími uhlovodíky s funkční skupinou ( např. -CN a pod). Účinnost separace roste se snižující se velkostí částic náplně. Minimum křivky udává průtokové rychlosti, při kterých kolona vykazuje největší účinnost. Minimum je pro malé částice ploché, tj. je možno pracovat v širším rozsahu průtoků bez ztráty účinnosti. 57
58 Výhody silikagelových částic s pevným jádrem 58
59 Výhody silikagelových částic s pevným jádrem 59
60 Výhody silikagelových částic s pevným jádrem Rozlišení 60
61 Výhody silikagelových částic s pevným jádrem 61
62 Jednotlivé části kapalinového chromatografu a jejich funkce Zásobník mobilní fáze zpravidla skleněné láhve s přívodní kapilárou z PTFE a filtrační fritou Vysokotlaké čerpadlo Čerpadla: isokratická (pro isokratickou eluci) gradientová (pro gradientovou eluci, eluci s programovaným složením mobilní fáze: binární, ternární, kvarternární) Požadavky na kvalitní čerpadlo stálý průtok (0,01-10 ml/min), minimální tlakové pulsy chemická inertnost materiálů (ocel, PEEK) tlak běžně do 15 MPa automatické vypnutí při překročení nastaveného tlakového limitu přesná tvorba gradientu 62
63 Jednotlivé části kapalinového chromatografu a jejich funkce Nástřikové zařízení (injektor) obvykle šesticestný dávkovací ventil se smyčkou definovaného objemu Nastřikovaný objem (řídí se rozměry kolony) 5-50 μl (většina analytických aplikací) 200 μl 2 ml (semipreparativní a preparativní účely) Předkolona - má ochrannou funkci, chrání kolonu před látkami s velmi silnou retencí; může a nemusí být instalována Analytická kolona (může být uložena v termostatované skříni) Rozměry : obvykle délka cm, vnitřní průměr 2-8 mm (nejčastěji 250x4,6 mm) větší průměry a délky u preparativních kolon Materiály: nerezavějící ocel, titanová ocel sklo, ocelový plášť PEEK (polyetheretherketon) 63
64 Detektory Jednotlivé části kapalinového chromatografu a jejich funkce Na rozdíl od GLC zde však není k dispozici tak univerzální detektor, jakým je v GLC detektor FID. Metoda HPLC využívá tyto typy detektorů: spektrofotometrický detektor (UV-VIS), fluorescenční detektor (FLD), hmotnostní spektrometr (MS), refraktometrický detektor (RID) a další. Volba detektoru opět závisí na konkrétní aplikaci. Často používaným detektorem je detektor spektrofotometrický (UV-VIS) a fluorescenční. Podmínkou použití těchto detektorů je, aby daný analyt absorboval záření určité vlnové délky (UV- VIS detekce) anebo aby emitoval flourescenční záření (fluorescenční detekce). 64
65 Literatura OxmOlIEcCbC&subNav=wnjedDsHqnOxmOlIEcCbCmF
66 Děkují za pozornost! 66
67 Iontově výměnná chromatografie - využívá rozdílné afinity jednotlivých iontů k výměnným skupinám používaných ionexů - stacionární fázi je obvykle ionex s kyselou nebo bazickou funkční skupinou na makromolekulárním nosiči - každá aktivní skupina je pevně vázaný iont kladného nebo záporného náboje, který na sebe váže protiiont opačného náboje - podle charakteru aktivní skupiny rozlišujeme: a) KATEXY jejichž kyselá funkční skupina (sulfo- nebo karboxylová kyselina) nese záporný náboj. Jsou určeny pro dělení kationtů. b) ANEXY nesou bazickou funkční skupinu (aminoskupina, kvarterní amoniová báze) s kladným nábojem a slouží k dělení aniontů. Afinitní chromatografie - základem jsou specifické reakce funkčních skupin zabudovaných pro zcela konkrétní případy do syntetických molekul matrice, obdobných gelům, se separovanými látkami - jde o interakce charakteristické pro některé biologické a biochemické 67 procesy
68 Adsorpční chromatografie Vykazují-li složky rozdílnou adsorpční afinitu dochází k jejich distribuci mezi pevnou stacionární a kapalnou nebo plynnou mobilní fázi. příčinou je ADSORPCE MOLEKUL na povrchu vhodného sorbentu. Tento proces je definován ADSORPČNÍ IZOTERMOU. Langmuirova izoterma: c S k. z. c 1 k. c m m k je adsorpční koeficient z je počet volných aktivních center na povrchu sorbentu c S a c m jsou koncentrace sorbované látky, resp. látky v mobilní fázi 68
69 c s K.c m <<1 I II III Pouze v úseku I platí lineární závislost adsorbované látky na koncentraci této látky v mobilní fázi. Lineární závislost existuje jen při nízkých koncentracích K.c m >>1 látky v roztoku. Langmuirova izoterma se pak zjednoduší na obecný tvar c s = K.z.c m V úseku III už není koncentrace v c m sorbentu ovlivněna koncentrací v roztoku v důsledku nasycení aktivních center. Pro chromatografii je žádoucí splnění podmínky pro lineární závislost úsek I. Pro větší koncentrace úsek II platí Langmuirova izoterma v plném rozsahu. 69
70 Eluční data, tvorba elučních křivek - dvě různé látky lišící se svými distribučními konstantami, utvoří dvě zóny, které se během migrace rozšiřují - aby bylo možno dvě látky bezpečně rozlišit musí mít dostatečně rozdílné distribuční konstanty - za chromatografickou kolonou získáme tzv. píky, které jsou závislostí odezvy detektoru na retenčních (elučních) veličinách a mají tvar podobná Gaussově křivce Retenční (eluční) čas t R čas, který látka potřebuje od okamžiku vnesení do kolony do doby kdy detektor zaznamená maximum píku. Retenční objem V R = t R. F M (F M objemová rychlost mobilní fáze v cm 3 /s) Mrtvý objem V M objem mobilní fáze v koloně od nástřiku po detektor Redukovaný retenční objem V R = V R V M Redukovaný retenční čas t R = t R - t M 70
UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ RIGORÓZNÍ PRÁCE
UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMACEUTICKÉ CHEMIE A KONTROLY LÉČIV RIGORÓZNÍ PRÁCE HPLC stanovení obsahu amlodipinu a perindoprilu v kombinovaném léčivém přípravku
VíceSeparační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip
Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (Gas chromatography, zkratka GC) je typ separační metody, kdy se od sebe oddělují složky obsažené ve vzorku a které mohou být převedeny do plynné
VíceSeparační metody SEPARAČNÍ (DĚLÍCÍ) METODY CHROMATOGRAFIE ROZDĚLENÍ SEPARAČNÍCH METOD. www.natur.cuni.cz/~suchan. Jana Sobotníková
Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra analytické chemie Separační metody Jana Sobotníková tel.: 221951230 e-mail: jana.sobotnikova@natur.cuni.cz www.natur.cuni.cz/~suchan *přednášky
VíceChromatografické metody základní rozdělení a instrumentace
Chromatografické metody základní rozdělení a instrumentace Plynová chromatografie separace organických látek s bodem varu do 400 C není vhodná k separaci biomakromolekul detekce produktů enzymových reakcí
VíceChromatografie. Petr Breinek
Chromatografie Petr Breinek Chromatografie-I 2012 Společným znakem všech chromatografických metod je kontinuální dělení složek analyzované směsi mezi dvěma fázemi. Pohyblivá fáze (mobilní), eluent Nepohyblivá
VícePříprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 9 Adsorpční chromatografie: Chromatografie v normálním módu Tento chromatografický mód je vysvětlen na silikagelu jako nejdůležitějším
VíceChromatografie. 1 Úvod
Chromatografie 1 Úvod Chromatografie je metoda sloužící k separaci a analýze složitých směsí. Chromatografie se velmi široce uplatňuje ve všech vědeckých odvětvích včetně lékařství. V rámci lékařských
VíceTYPY KOLON A STACIONÁRNÍCH FÁZÍ V PLYNOVÉ CHROMATOGRAFII
TYPY KOLON A STACIONÁRNÍCH FÁZÍ V PLYNOVÉ CHROMATOGRAFII Náplňové kolony - historicky první kolony skleněné, metalické, s metalickým povrchem snažší výroba, vysoká robustnost nižší účinnost nevhodné pro
Víceisolace analytu oddělení analytu od matrice (přečištění) zakoncentrování analytu stanovení analytu (analytů) ve vícesložkové směsi
SEPARAČNÍ METODY Využití separačních metod isolace analytu oddělení analytu od matrice (přečištění) zakoncentrování analytu stanovení analytu (analytů) ve vícesložkové směsi Druhy separačních metod Srážení
VíceSeparační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip
Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (Liquid chromatography, zkratka LC) je typ separační metody, založené na rozdílné distribuci dělených látek ve směsi mezi dvě různé nemísitelné
VíceCHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).
CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou
VíceRepetitorium chemie IX (2016) (teorie a praxe chromatografie)
Repetitorium chemie IX (2016) (teorie a praxe chromatografie) Chromatografie Podstatou je rozdělování složek směsi dávkovaného vzorku mezi dvěma fázemi Stacionární fáze je nepohyblivá (silikagel, celulóza,
VíceKapalinová chromatografie - LC
Kapalinová chromatografie - LC Fyzikálně-chemická metoda dělení kapalin (roztoků) využívající rozdělování složky mezi dvě nestejnorodé fáze, nepohyblivou (stacionární) a pohyblivou (mobilní), přičemž pohyblivou
VíceZáklady analýzy potravin Přednáška 6
PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC) Mobilní fází v GC je nosný plyn (N 2, Ar, He, H 2 ). Interakce analytu s nosným plynem jsou slabé. GSC (gas-solid chromatography): separované látky jsou adsorbovány tuhou stacionární
VíceVysokoúčinná kapalinová chromatografie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie HPLC High Performance Liquid Chromatography Vysokoúčinná...X... Vysoceúčinná kapalinová chromatografie RRLC Rapid Resolution Liquid Chromatography Rychle rozlišovací
VíceTeorie chromatografie - I
Teorie chromatografie - I Veronika R. Meyer Practical High-Performance Liquid Chromatography, Wiley, 2010 http://onlinelibrary.wiley.com/book/10.1002/9780470688427 Příprava předmětu byla podpořena projektem
VíceSeparační metody. Jana Sobotníková. přednášky též ke stažení v SIS nebo Moodle
Separační metody Jana Sobotníková e-mail: jana.sobotnikova@natur.cuni.cz www.natur.cuni.cz/~suchan přednášky též ke stažení v SIS nebo Moodle SEPARAČNÍ (DĚLÍCÍ) METODY založeny (většinou) na rozdílné distribuci
VíceNÁPLŇOVÉ KOLONY PRO GC
NÁPLŇOVÉ KOLONY PRO GC DÉLKA: 0,6-10 m VNITŘNÍ PRŮMĚR: 2,0-5,0 mm MATERIÁL: sklo, ocel, měď, nikl STACIONÁRNÍ FÁZE: h min = A + B / u + C u a) ADSORBENTY b) ABSORBENTY - inertní nosič (Chromosorb, Carbopack,
Vícemobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární fázi.
separační metody Chromatografické metody Distribuce látky mezi dvě fáze: stacionární fáze nepohyblivá - ukotvený materiál mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární
VíceVysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Teorie HPLC Praktické
VíceSTANOVENÍ TĚKAVÝCH HALOGENOVÝCH UHLOVODÍKŮ VE VODNÉM PROSTŘEDÍ METODOU PLYNOVÉ CHROMATOGRAFIE S DETEKCÍ NA PRINCIPU ELEKTRONOVÉHO ZÁCHYTU (GC/ECD)
Organické kontaminanty Pracovní úkol 1. Určete složení neznámého vzorku. 2. Pro přípravu vzorku k analýze použijte 2 různé postupy pro extrakci. 3. Separujte a identifikujte jejich jednotlivé analyty.
VíceMobilní fáze. HPLC mobilní fáze 1
Mobilní fáze 1 VLIV CHROMATOGRAFICKÝCH PODMÍNEK NA ELUČNÍ CHARAKTERISTIKY SEPAROVANÝCH LÁTEK - SLOŽENÍ MOBILNÍ FÁZE Složení mobilní fáze má vliv na eluční charakteristiky : účinnost kolony; kapacitní poměr;
VíceSTANOVENÍ AMINOKYSELINOVÉHO SLOŽENÍ BÍLKOVIN. Postup stanovení aminokyselinového složení
STANVENÍ AMINKYSELINVÉH SLŽENÍ BÍLKVIN Důvody pro stanovení AK složení určení nutriční hodnoty potraviny, suroviny (esenciální vs. neesenciální AK) charakterizace určité bílkovinné frakce nebo konkrétní
VíceInovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/15.0247
Papírová a tenkovrstvá chromatografie Jednou z nejrozšířenějších analytických metod je bezesporu chromatografie, umožňující účinnou separaci látek nutnou pro spolehlivou identifikaci a kvantifikaci složek
Více13/sv. 6 CS (80/891/EHS)
65 31980L0891 27.9.1980 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ L 254/35 SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. července 1980 o analytické metodě Společenství pro stanovení obsahu kyseliny erukové v olejích a tucích
VícePrincipy chromatografie v analýze potravin
Principy chromatografie v analýze potravin živočišného původu p Ivana Borkovcová Ústav hygieny a technologie mléka FVHE VFU Brno, borkovcovai@vfu.cz Úvod, základní pojmy chromatografické systémy dělení
VíceANALYTICKÉ METODY STOPOVÉ ANALÝZY
ANALYTICKÉ METODY STOPOVÉ ANALÝZY Požadavky na analytické metody: - robustnost (spolehlivost) - citlivost - selektivita stanovení - možnost automatizace Klasická chemická roztoková analýza většinou nevyhovuje
VíceMetody separační. -rozdělení vzorku na jednotlivá chemická individua nebo alespoň na jednodušší směsi - SELEKTIVITA - FRAKCIONAČNÍ KAPACITA
Metody separační Klíčový požadavek -rozdělení vzorku na jednotlivá chemická individua nebo alespoň na jednodušší směsi DŮLEŽITÉ POJMY - SELEKTIVITA - FRAKCIONAČNÍ KAPACITA Metody separační SELEKTIVITA
VíceChromatografie. Petr Breinek. Chromatografie_2011 1
Chromatografie Petr Breinek Chromatografie_2011 1 Společným znakem všech chromatografických metod je kontinuální rozdělování složek analyzované směsi vzorku mezi dvěma fázemi. Nepohyblivá fáze (stacionární
VíceSylabus přednášek z analytické chemie I. v letním semestru 2015/2016
Sylabus přednášek z analytické chemie I. v letním semestru 2015/2016 1. Základní pojmy Úkoly ACH, základní dělení (kvantitativní, kvalitativní, distribuční a strukturní, speciační) Vzorek, analyt, matrice
VíceStanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (UHPLC-ELSD)
Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (UHPLC-ELSD) A) Ultrazvuková extrakce Ultrazvuková extrakce je významnou
VícePříloha 2. Návod pro laboratorní úlohu
Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 42 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza
VíceAplikace elektromigračních technik
Aplikace elektromigračních technik Capillary electrophoresis D.L.Barker High Performance Capillary electrophoresis M.G. Khaledi Analysis and detection by capillary electrophoresis M.L.Marina (ed.) Electrophoresis
VíceAnalýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie
Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován
VíceHmotnostní spektrometrie
Hmotnostní spektrometrie Podstatou hmotnostní spektrometrie je studium iontů v plynném stavu. Tato metoda v sobě zahrnuje tři hlavní části:! generování iontů sledovaných atomů nebo molekul! separace iontů
VíceNázev: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková
Název: Vypracovala: Zuzana Lacková Datum: 7. 2. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního bionanotechnologického výzkumu MĚLI BYCHOM ZNÁT: informace,
Více215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT
215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT ÚVOD Snižování emisí výfukových plynů a jejich škodlivosti je hlavní hnací silou legislativního procesu v oblasti motorových paliv. Po úspěšném snížení obsahu
VíceP. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech
P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech Perfluorované a polyfluorované uhlovodíky (PFC,PFAS) Perfluorované - všechny vodíky
VíceVysokoúčinná kapalinová chromatografie High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Kapalinová chromatografie (LC) 1.1. Teorie kapalinové
VícePLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC)
PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC) Dělení látek mezi stacionární a mobilní fázi na základě rozdílů v těkavosti a struktuře (separované látky vykazují rozdílnou chromatografickou afinitu) Metoda vhodná pro látky:
VícePříprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických
VíceOptimalizace metody stanovení volných mastných kyselin v reálných systémech. Bc. Lenka Hasoňová
Optimalizace metody stanovení volných mastných kyselin v reálných systémech Bc. Lenka Hasoňová Diplomová práce 2015 ABSTRAKT Předkládaná diplomová práce se zabývá optimalizací metody stanovení volných
VíceVYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE (HPLC) HPLC = high performance liquid chromatography high pressure liquid chromatography
VYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE (HPLC) HPLC = high performance liquid chromatography high pressure liquid chromatography Separační principy kapalinové chromatografie adsorpce: anorg. sorbenty Al
VíceAnalýza směsí, kvantitativní NMR spektroskopie a využití NMR spektroskopie ve forenzní analýze
Analýza směsí, kvantitativní NMR spektroskopie a využití NMR spektroskopie ve forenzní analýze Analýza směsí a kvantitativní NMR NMR spektrum čisté látky je lineární kombinací spekter jejích jednotlivých
VíceTrendy v moderní HPLC
Trendy v moderní HPLC Josef Cvačka, 5.1.2011 CHROMATOGRAFIE NA ČIPECH Miniaturizace separačních systémů Mikrofluidní čipy Mikrofabrikace Chromatografické mikrofluidní čipy s MS detekcí Praktické využití
VíceEXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza
Studijní materiál EXTRAKČNÍ METODY 1. Obecná charakteristika extrakce 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE 3. Alkalická hydrolýza 4. Soxhletova extrakce 5. Extrakce za zvýšené teploty a tlaku PLE, ASE, PSE
VícePentachlorfenol (PCP)
Zpracováno podle Raclavská, H. Kuchařová, J. Plachá, D.: Podklady k provádění Protokolu o PRTR Přehled metod a identifikace látek sledovaných podle Protokolu o registrech úniků a přenosů znečišťujících
VíceRepetitorium chemie IV (2014)
Repetitorium chemie IV (2014) Chromatografie Podstatou je rozdělování složek směsi dávkovaného vzorku mezi dvěma fázemi Stacionární fáze je nepohyblivá (silikagel, celulóza, polymerní částice) Mobilní
VíceEXTRAKCE, CHROMATOGRAFICKÉ DĚLENÍ (C18, TLC) A STANOVENÍ LISTOVÝCH BARVIV
Úloha č. 7 Extrakce a chromatografické dělení (C18 a TLC) a stanovení listových barviv -1 - EXTRAKCE, CHROMATOGRAFICKÉ DĚLENÍ (C18, TLC) A STANOVENÍ LISTOVÝCH BARVIV LISTOVÁ BARVIVA A JEJICH FYZIOLOGICKÝ
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda je určena pro kvantitativní a kvalitativní určení složení směsi methylesterů
VícePlynová chromatografie
Základní přednáška Doc.RNDr. Pavel Coufal, Ph.D. RNDr. Radomír Čabala, Dr. Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra analytické chemie GC - Definice fyzikálně-chemická metoda separace směsi
VíceSPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá
Extrakce na pevné fázi (SPE) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Extrakce na pevné fázi (SPE) (Solid Phase Extraction) SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků,
VíceVYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS
1 VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS JAN KNÁPEK Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta MU, Kotlářská 2, Brno 611 37 Obsah 1. Úvod 2. Tepelný zmlžovač 2.1 Princip 2.2 Konstrukce 2.3 Optimalizace
VíceChromatografie Královna analýz
Chromatografie Královna analýz Monika Klusáčková monika.klusackova@jh-inst.cas.cz Ústav fyzikální chemie J.Heyrovského, AVČR, v.v.i. Analytická chemie Jaké látky se nachází ve vzorku? kvalitativní složení
VíceHydrofobní chromatografie
Hydrofobní chromatografie Hydrofobicita proteinu insulin malwmrllpl lallalwgpd paaafvnqhl cgshlvealy lvcgergffy tpktrreaed lqvgqvelgg gpgagslqpl alegslqkrg iveqcctsic slyqlenycn vliv soli na protein Stacionární
VícePři reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma fázemi První ucelená teorie respektující uvedenou skutečnost byla
Teorie chromatografie - III Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 4.3.3 Teorie dynamická Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D v premixech pro výrobu krmných směsí metodou HPLC.
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU C METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU C METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu C v krmivech a premixech metodou vysokoúčinné kapalinové
VíceCvičení KATA Analytická chemie Chromatografie
je analytická metoda, při které dochází k separaci (rozdělení) jednotlivých složek, které tvoří analyzovaný vzorek. Je založena na opakovaném ustanovení rovnováh mezi dvěma fázemi, mobilní (pohybující
VíceProblémy u kapalinové chromatografie
Problémy u kapalinové chromatografie Troubleshooting 1 Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již zpouhého průběhu základní linie,
VíceKapalinová chromatografie - LC
Kapalinová chromatografie - LC Fyzikálně-chemická metoda dělení kapalin (roztoků) využívající rozdělování složky mezi dvě nestejnorodé fáze, nepohyblivou (stacionární) a pohyblivou (mobilní), přičemž pohyblivou
VíceNávod pro laboratorní úlohu: Komerční senzory plynů a jejich testování
Návod pro laboratorní úlohu: Komerční senzory plynů a jejich testování Úkol měření: 1) Proměřte závislost citlivosti senzoru TGS na koncentraci vodíku 2) Porovnejte vaši citlivostní charakteristiku s charakteristikou
VíceSeparační metoda. Fázový diagram
Separační metody využívají se k izolování (separaci) dokazované nebo stanovované složky z analyzované směsi a k odstranění rušivých (interferujících) komponent analyzovaného roztoku (účel získání čistých
VíceCRH/NPU I - Systém pro ultraúčinnou kapalinovou chromatografii (UHPLC) ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem (MS/MS)
ODŮVODNĚNÍ VEŘEJNÉ ZAKÁZKY v souladu s 156 zákona č. 137/2006, Sb., o veřejných zakázkách, ve znění pozdějších předpisů Nadlimitní veřejná zakázka na dodávky zadávaná v otevřeném řízení v souladu s ust.
VíceMetody separace. přírodních látek
Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897
VícePříprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 4 - Nástřik vzorku Dávkovače vzorků/injektory Dávkování vzorků je jednou z klíčových záležitostí v HPLC. Ani nejlepší kolona
VíceProgramovaná změna teploty kolony v době analýzy Je využívána v separacích látek s velmi odlišným bodem varu Lze dosáhnout zkrácení doby analýzy za
Detektory GC - I Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 2.3 Programovaná teplota kolony Programovaná změna teploty kolony v době analýzy Je využívána v separacích látek
VíceKapalinová chromatografie
Kapalinová chromatografie LC - mobilní fáze kapalina, která proudí kolonou naplněnou stacionární fází 1 - adsorpční chromatografie (LSC) tuhá látka jako sorbent (použití méně často proti LLC) 2 -rozdělovací
Více06. Plynová chromatografie (GC)
06. Plynová chromatografie (GC) Plynová chromatografie je analytická a separační metoda, která má výsadní postavení v analýze těkavých látek. Mezi hlavní výhody této techniky patří jednoduché a rychlé
VíceKonfirmace HPLC systému
Mgr. Michal Douša, Ph.D. Obsah 1. Měření modulové... 2 1.1 Těsnost pístů tlakový test... 2 1.2 Teplota autosampleru (správnost a přesnost)... 2 1.3 Teplota kolonového termostatu... 2 1.3.1 Absolutní hodnota...
VíceStudijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC)
Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) V Brně dne 20. 11. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Hydroxymethylfurfural
VíceÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 220 443 185; jana.hajslova@vscht.cz LABORATOŘ Z ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
VíceProblémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting
Problémy v kapalinové chromatografii Troubleshooting Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již z pouhého průběhu základní linie,
VíceSeparační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních metod v rámci analytické chemie Význam chromatografie a
Úvod do separačních metod pro analýzu léčiv Příprava předmětu byla podpořena projektem OPP č. CZ..7/3..00/3353 Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních
VíceDávkování vzorku v GC - II Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Dávkování vzorku v GC - II Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 7. Dávkování ventily (Valves) Dávkovací ventily jsou jednoduchá zařízení umožňující vnesení daného objemu
VíceKAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE ČERPADLA
KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE ČERPADLA Čerpadla kapalin patří mezi první technická díla lidského rodu. Už několik tisíc let je používáme pro čerpání závlahové vody. A i dnes je většina z nich založena na změně
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení zearalenonu v krmivech. 1 Zearalenon (ZON) je charakterizován
VíceMetodický postup pro stanovení PAU v půdách volných hracích ploch metodou HPLC a GC
Strana : 1 1. Úvod 1.1.Předmět a vymezení působnosti Stanovení polycyklických aromatických uhlovodíků. Tyto analyty se běžně stanovují: A: HPLC metodou s fluorescenčním a DA detektorem / HPLC-FLU+DAD/
VíceCvičení k předmětu Metody studia fotochemických procesů (KTEV / 2MSFP) (prozatímní učební text, srpen 2012)
Cvičení k předmětu Metody studia fotochemických procesů (KTEV / 2MSFP) (prozatímní učební text, srpen 2012) Mgr. Václav Štengl, Ph.D., stengl@iic.cas.cz 1. FOTOKATALÝZA: Úvod a mechanismus Oxid titaničitý
VíceStanovení texturních vlastností fyzisorpcí dusíku
Stanovení texturních vlastností fyzisorpcí dusíku Michal Dudák Pod texturními vlastnostmi porézních látek se skrývá popis složité porézní struktury. Fyzisorpce dusíku je jedna z nejrozšířenějších metod
VíceÚvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová
Úvod k biochemickému mu praktiku Vladimíra Kvasnicová organizace praktik pravidla bezpečné práce v laboratoři laboratorní vybavení práce s automatickou pipetou návody: viz. aplikace Výuka automatická pipeta
VíceÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) J Katalytická oxidace fenolu ve vodách Vedoucí práce: Doc. Ing. Vratislav Tukač, CSc. Umístění práce: S27 1 Ústav organické technologie, VŠCHT Praha
VíceMINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN. Jakub Hraníček
MINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN Jakub Hraníček Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova, Albertov 6, 128 43 Praha 2 E-mail:
VíceGelová permeační chromatografie
Gelová permeační chromatografie (Gel Permeation Chromatography - GPC) - separační a čisticí metoda - umožňuje separaci skupin sloučenin s podobnou molekulovou hmotností (frakcionace) - analyty jsou po
VíceTECHNOLOGIE KE SNIŽOVÁNÍ EMISÍ (SEKUNDÁRNÍ OPATŘENÍ K OMEZOVÁNÍ EMISÍ)
TECHNOLOGIE KE SNIŽOVÁNÍ EMISÍ (SEKUNDÁRNÍ OPATŘENÍ K OMEZOVÁNÍ EMISÍ) 5. část TĚKAVÉ ORGANICKÉ SLOUČENINY A PACHOVÉ LÁTKY Zpracoval: Tým autorů EVECO Brno, s.r.o. TĚKAVÉ ORGANICKÉ SLOUČENINY Těkavé organické
VíceNávod pro laboratorní úlohu: Závislost citlivosti plynových vodivostních senzorů na teplotě
Návod pro laboratorní úlohu: Závislost citlivosti plynových vodivostních senzorů na teplotě Náplní laboratorní úlohy je proměření základních parametrů plynových vodivostních senzorů: i) el. odpor a ii)
VícePlynová chromatografie
Plynová chromatografie Kvalitativní a kvantitativní analýza Základní přednáška RNDr. Radomír Čabala, Dr. Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra analytické chemie ZS2008 Kat.anal.chem.
VíceULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC)
ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC) Pokroky v moderních separačních metodách, 2012 Eva Háková CHARAKTERISTIKA UPLC Nová, velmi účinná separační
VíceIontové zdroje II. Iontový zdroj. Data. Vzorek. Hmotnostní analyzátor. Zdroj vakua. Iontové zdroje pracující za sníženého tlaku
Iontové zdroje II. Iontové zdroje pracující za sníženého tlaku Elektronová/chemická ionizace Iontové zdroje pro spojení s planárními separacemi Ionizace laserem za účasti matrice Ambientní ionizační techniky
VíceKontinuální měření emisí Ing. Petr Braun
ODBORNÉ VZDĚLÁVÁNÍ ÚŘEDNÍKŮ PRO VÝKON STÁTNÍ SPRÁVY OCHRANY OVZDUŠÍ V ČESKÉ REPUBLICE Kontinuální měření emisí Ing. Petr Braun Způsob provádění Emise jako předmět měření Pro účely zákona o ovzduší č. 201/2012
VíceStanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou
Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Úkol Stanovte obsah cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce pomocí kapilární elektroforézy. Teoretická část Cholesterol je steroidní
VíceNázev práce: VLIV IONTOVÝCH KAPALIN NA STEREOSELEKTIVNÍ HYDROGENACE V HOMOGENNÍ FÁZI PRO PŘÍPRAVU OPTICKY ČISTÝCH LÁTEK.
L A B O R A T O Ř O B O R U I Název práce: VLIV IONTOVÝCH KAPALIN NA STEREOSELEKTIVNÍ HYDROGENACE V HOMOGENNÍ FÁZI PRO PŘÍPRAVU OPTICKY ČISTÝCH LÁTEK Označení práce: Vedoucí práce: Ing. Tomáš Floriš Vliv
VíceElektrická dvojvrstva
1 Elektrická dvojvrstva o povrchový náboj (především hydrofobních) částic vyrovnáván ekvivalentním množstvím opačně nabitých iontů (protiiontů) o náboj koloidní částice + obal protiiontů = tzv. elektrická
VíceMetody separační. Klíčový požadavek -rozdělení vzorku na jednotlivá chemická individua nebo alespoň na jednodušší směsi
Metody separační Klíčový požadavek -rozdělení vzorku na jednotlivá chemická individua nebo alespoň na jednodušší směsi DŮLEŽITÉ POJMY - SELEKTIVITA - FRAKCIONAČNÍ KAPACITA - ROZSAH POUŽITELNOSTI Metody
VícePrůtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)
Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.
VíceMetodika 3: uvedení systému Jasco LC 2000 do provozu
Metodika 3: uvedení systému Jasco LC 2000 do provozu (HPLC High Performance Liquid Chromatography) 7 8 4 9 10 1 2 5 11 3 6 12 Popis sestavy: 1) Refraktometrický detektor RI 2000, 2) detektor diodového
VíceL 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie
L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 8. Výsledky kruhových testů V rámci ES byly provedeny kruhové testy, při nichž až 13 laboratoří zkoušelo čtyři vzorky krmiva pro selata, včetně jednoho
Více