ZÁSADY A VYSVĚTLENÍ POSTUPU

Transkript

1 POKYNY K POUŽITÍ MÉDIA NA MISKÁCH K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ PA Rev.: April 2013 Glucose Agar Chloramphenicol Gentamicin and Chloramphenicol Penicillin and Streptomycin ÚČEL POUŽITÍ Médium Glucose Agar je určeno k izolaci a kultivaci plísní (kvasinky, plísně a dermatofyty) z klinických vzorků. Médium Chloramphenicol, médium Gentamicin and Chloramphenicol a médium BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin jsou selektivní média pro izolaci plísní z klinických vzorků. ZÁSADY A VYSVĚTLENÍ POSTUPU Mikrobiologická metoda. Glukózový agar Sabouraud je médium pro obecné použití, které bylo původně vynalezeno pro kultivaci dermatofytů. 1,2 Dnes se používá k izolaci a kultivaci všech plísní. 3-5 Zdrojem dusíkatých faktorů růstu v glukózovém agaru Sabouraud jsou peptony. Glukóza zajišťuje zdroj energie pro růst mikroorganismů. Vysoká koncentrace glukózy představuje pro růst (osmoticky stabilních) plísní výhodu, zatímco většina bakterií vysoký obsah cukru nesnáší. Kromě toho je pro plísně, na rozdíl od mnohých bakterií, nízké ph optimální. 3 Glukózový agar Sabouraud je proti bakteriím jen mírně selektivní. Chloramphenicol, Gentamicin and Chloramphenicol a Penicillin and Streptomycin jsou selektivní média založená na glukózovém agaru Sabouraud. Byly přidány selektivní látky, které potlačují bakterie. Chloramfenikol je širokospektrální antibiotikum, které potlačuje širokou škálu Gram negativních a Gram pozitivních bakterií, ale může mít inhibiční účinek i na několik patogenních plísní. 4 U antibakteriálních prostředků jako penicilin, gentamicin a streptomycin nebo jejich kombinací bylo prokázáno, že jsou účinné při potlačování bakterií, aniž by negativně ovlivňovaly růst plísní. 2-5 Tato média se používají k izolaci plísní z klinických vzorků nebo materiálů, u nichž je podezření, že obsahují bakteriální kontaminaci. Glukózový agar Sabouraud je jedním z médií používaných 6, 12 v testech mikrobiálních limitů v USP a EP. ČINIDLA Přípravky: viz Tabulka 1 BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ. Pouze pro odborné použití. Nepoužívejte misky, pokud vykazují známky mikrobiální kontaminace, změny zabarvení, vysušení, popraskání nebo jiné známky poškození. Pokyny pro aseptickou manipulaci, biologické nebezpečí a likvidaci použitého produktu naleznete v dokumentu VŠEOBECNÉ POKYNY K POUŽITÍ. SKLADOVÁNÍ A ŽIVOTNOST Po převzetí skladujte misky až do doby těsně před použitím v originálním pouzdru, v temnu a při teplotě 2 až 8 C. Systém nesmí zmrznout nebo se přehřát. Misky lze očkovat až do data platnosti (viz štítek na obalu) a inkubovat je lze po doporučenou dobu inkubace. Misky z otevřených sad po 10 kusech lze použít po dobu jednoho týdne, pokud jsou uloženy v čistém prostředí při teplotě 2 až 8 C. PA

2 Tabulka 1: ČINIDLA Vzorce* na litr deionizované vody Název výrobku Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Přísady Streptomycin Chloramphenicol Pankreatická 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g natrávenina kaseinu Peptická natrávenina zvířecí tkáně Glukóza Agar Penicilin G IU (imunizačních jednotek) PA Agar with Chloramphenicol Streptomycin - 0,06 g - - Gentamicin Chloramfenikol ph ph 5,6 ± - 0, / / /- 0.2 *Upraveno anebo doplněno dle požadavků tak, aby byla splněna kritéria výkonu. KONTROLA KVALITY UŽIVATELEM Naočkujte reprezentativní vzorky následujícími kmeny (podrobnosti naleznete v dokumentu VŠEOBECNÉ POKYNY K POUŽITÍ. Informace o inkubaci naleznete ve vysvětlivce. Název výrobku Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Chloramphenicol Testované kmeny Streptomycin Chloramphenicol **Candida albicans ATCC **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus aureus Bez inhibice Úplná inhibice ATCC *Escherichia coli Bez inhibice ATCC Úplná inhibice Slepý vzorek Světle oranžová Inkubace: *48 h C / **</= 5 days, C, aerobně POSTUP Dodané materiály Glucose Agar, Chloramphenicol, Gentamicin and Chloramphenicol, nebo Penicillin and Streptomycin, vše dodáváno ve formě misek v velikosti 90 mm Stacker). Mikrobiologicky kontrolováno.

3 Materiál, který není součástí dodávky Pomocné živné půdy, činidla a laboratorní vybavení dle potřeby. Druhy vzorků Produkty popsané v tomto dokumentu jsou izolační média pro houby a lze je použít (alternativně nebo jako kombinaci dvou těchto médií) pro všechny klinické vzorky (viz také VÝKONOVÉ CHARAKTERISTIKY A OMEZENÍ POSTUPU). Tato média se také používají v mnoha oblastech průmyslové mikrobiologie a při hygienickém sledování. Provedení testu Co nejdříve po přijetí do laboratoře vzorek rozočkujte. Miska s nátěrem se používá především k izolaci čistých kultur ze vzorků obsahujících smíšenou flóru. Nebo pokud je materiál kultivován přímo z výtěru, otřete výtěr o malou plochu na okraji a poté proveďte rozočkování z takto naočkovaného místa. Je-li vzorkem stěr kůže, vlasy nebo nehty, umístěte materiál do středu plochy média. Delší částice je vhodné pokud možno mírně zatlačit sterilní pinzetou do povrchu, aby byl zajištěn dobrý kontakt s médiem. Pro určení dermatofytů použijte také BD Dermatophyte Agar nebo BD Mycosel Agar. Používáte-li agar Chloramphenicol, Gentamicin and Chloramphenicol nebo Penicillin and Streptomycin, použijte také misku s Glucose Agar. Nakonec je potřeba naočkovat základní médium, např. BD Columbia 5% Sheep Blood, aby bylo zajištěno určení bakteriálních patogenů přítomných ve vzorku. Používáte-li médium k určení kvasinek (např. druhu Candida) v klinických vzorcích, inkubujte je po dobu 48 hodin při 30 až 35 C. V případě podezřenína vláknité houby včetně dermatofytů inkubujte po dobu až jednoho týdne při teplotě 25 až 30 C. Dertamofyty někdy potřebují 3 a více týdnů, než se u nich projeví růst. Při použití pro hygienické sledování inkubujte po dobu 7 dnů při teplotě 20 až 25 C. Trvá-li inkubace déle než 3 dny, zajistěte odpovídající vlhkost. Misky mohou být utěsněny lepicí páskou, aby nedocházelo k vysušování. Další podrobnosti o teplotě při růstu a inkubaci naleznete v odkazech. 5,7-10 Výsledky Po dostatečné inkubaci se mohou na miskách ukázat izolované kolonie v naočkovaných místech a splývající růst v místech se silným nátěrem. Prohlédněte misky, zda se na nich objevily plísňové kolonie typické barvy a morfologie. Pro ověření nálezů je nutno provést biochemické testy a mikroskopické a serologické vyšetření. 6-9 Protože počet patogenních plísní je velký, nejsou zde uvedeny žádné podrobnosti o jejich 2,3, 5-9 vzhledu. Podívejte se na odkazy. VÝKONOVÉ CHARAKTERISTIKY A OMEZENÍ POSTUPU Média popsaná v tomto dokumentu jsou standardní média pro izolaci a kultivaci plísní ze všech typů klinických a neklinických vzorků Kvůli velkému rozsahu teplot pro růst plísní může být potřeba naočkovat několik misek stejného 5, 7-10 média a inkubovat je při různých teplotách. Viz část Provedení testu a příslušné odkazy. Protože Glucose Agar je jen slabě selektivní, rostou na médiu i bakterie, a to zejména při delší době inkubace. V případě podezření na bakteriální kontaminaci zkoumaných vzorků, materiálů nebo oblastí je nutno pro kultivaci vzorku nebo souboru použít média s vyšší selektivitou, např. Chloramphenicol, Gentamicin a Chloramphenicol nebo Penicillin and Streptomycin. Nocardia a Actinomyces jsou vláknité bakterie (ne houby), a proto nerostou na žádném médiu Sabouraud obsahujícím inhibitory bakterií. PA

4 CITACE 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. BALENÍ/DOSTUPNOST Glucose Agar Kat. č Kat. č Médium na miskách k okamžitému použití, 120 misek Chloramphenicol Kat. č Gentamicin and Chloramphenicol Kat. č Kat. č Médium na miskách k okamžitému použití, 120 misek Penicillin and Streptomycin Kat. č DALŠÍ INFORMACE Další informace vám poskytne místní zástupce společnosti BD: Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com PA

5 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA