Testosterone II. Testosterona. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 602

Transkript

1 Česky Použití Imunostanovení pro in vitro kvantitativní měření testosteronu v lidském séru a plazmě. Elektrochemiluminiscenční imunostanovení ECLIA je určeno pro použití na analyzátorech imunostanovení Elecsys a cobas e. Souhrn Odkazy 1,,3,,5,6 Androgen testosteron (17β hydroxyandrostenon) má molekulovou hmotnost 88 daltonů. U mužů je testosteron syntetizován výhradně v Leydigových buňkách ve varlatech. Vylučování testosteronu je regulováno luteinizačním hormonem (LH) a negativně ovlivňováno zpětnou vazbou z hypotalamu a hypofýzy. Testosteron podporuje vývoj sekundárních pohlavních znaků u mužů a slouží k udržování funkce prostaty a seminálních váčků. Většina testosteronu v oběhu je vázána na transportní protein (SHBG = sex hormone binding globulin). U žen je malé množství testosteronu vytvářeno ve vaječnících. Ve fyziologických koncentracích nemají androgeny specifické účinky na ženy. Avšak zvýšená produkce testosteronu u žen může způsobit virilizaci (v závislosti na zvýšení). Měření testosteronu u žen je přínosné při diagnostice androgenního syndromu (AGS), polycystických ovarií (Stein Leventhal syndrom) a při podezření na karcinom ovarií, nadledvinek, hyperplazii nadledvinek nebo nedostatečnost ovarií. Testosteron je u mužů měřen při podezření na jeho sníženou produkci, např. při hypogonadismu, estrogenové terapii, chromozomální aberaci (Klinefelterův syndrom) a cirhóze jater. Stanovení Elecsys je založeno na principu kompetitivního testu použitím monoklonální protilátky (králičí) s vysokou afinitou, specificky směřované proti testosteronu. Endogenní testosteron uvolněný ze vzorku bromoestradiolem soutěží s přidaným derivátem testosteronem značeným rutheniovým komplexem a) o vazebná místa biotinylované protilátce. Stanovení Elecsys vykazuje zlepšené využití ve srovnání s referenční metodou izotopová diluce-plynová chromatografie/hmotnostní spektrometrie (ID GC/MS) v rozmezí koncentrace u žen. a) Tris(,'-bipyridyl)ruthenium(II)-komplex (Ru(bpy) ) Princip testu Kompetitivní test. Celková doba stanovení: 18 minut. 1. inkubace: 0 µl vzorku je inkubováno s biotinylovanou monoklonální protilátkou specifickou proti testosteronu. Vazebná místa značené protilátky budou obsazená analytem vzorku (v závislosti na koncentraci).. inkubace: Po přidání mikročástic potažených streptavidinem a derivát testosteronu značený rutheniovým komplexem se komplex váže na pevnou fázi prostřednictvím interakce mezi biotinem a streptavidinem. Reakční směs je nasáta do měřící cely, kde jsou mikročástice s navázanými komplexy zachyceny prostřednictvím magnetu. enavázané složky jsou odstraněny roztokem ProCell/ProCell M. Přivedené napětí na pracovní elektrodě vyvolá chemiluminiscenční emisi fotonů, která je změřena fotonásobičem. Výsledky jsou zjištěny z kalibrační křivky, která je specificky vytvořena pro přístroj dvoubodovou kalibrací, a master křivky, která se do přístroje načte z čárového kódu reagencie. Reagencie - pracovní roztoky Reagenční rackpack je označen jako TESTO II. M R1 R Elecsys 010 MODULAR AALYTICS E170 cobas e 11 cobas e 601 cobas e 60 Mikročástice potažené streptavidinem (průhledné víčko), 1 nádobka, 6.5 ml: Streptavidinem potažené mikročástice 0.7 mg/ml; konzervans. Anti-testosteron-Ab~biotin (šedé víčko), 1 nádobka, 10 ml: Biotinylovaná monoklonální protilátka proti testosteronu (ovčí) 0 ng/ml; uvolňující reagencie -bromoestradiol; MES pufr 50 mmol/l, ph 6.0; konzervans. Testosteron-peptid~Ru(bpy) (černé víčko), 1 nádobka, 9 ml: Derivát testosteronu, značený rutheniovým komplexem 1.5 ng/ml; MES pufr 50 mmol/l, ph 6.0; konzervans. Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. U všech reagencií a druhů vzorků (vzorky, kalibrátory a kontroly) zabraňte vytvoření pěny. Zacházení s reagenciemi Reagencie v soupravě jsou sestaveny tak, že tvoří komplet připravený k použití a nemohou být odděleny. Všechny informace, potřebné pro správnou činnost, jsou načteny z příslušného čárového kódu reagencie. Uskladnění a stabilita Skladujte při 8 C. emrazit. Reagenční soupravu Elecsys skladujte ve vzpřímené poloze, aby byla zajištěna dostupnost všech mikročástic během automatického míchání před použitím. Stabilita: neotevřené při 8 C po otevření při 8 C v analyzátorech do uvedeného data exspirace týdnů 8 týdnů Odběr vzorků a příprava Jen uvedené vzorky byly testovány v dostatečném množství a jsou vhodné ke stanovení. Sérum odebrané standardní odběrovou soupravou nebo pomocí zkumavek se separačním gelem. Li heparin, K - a K 3 EDTA plazma. Kritérium: Výtěžnost v rámci 80 0 % hodnot séra > 1 ng/ml, výtěžnost ± 0. ng/ml hodnot séra 1 ng/ml a sklon úsek na ose 0.05 ng/ml + korelační koeficient > Stabilní 1 týden při 8 C, 6 měsíců při -0 C. Zmrazit jen jednou. 7 Uvedené druhy vzorků byly testované s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn., že do testu nebyly zařazené všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech zásadní vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením stanovení , V 8.0 Česky 1 / 6

2 epoužívejte teplem inaktivované vzorky. epoužívejte vzorky a kontroly stabilizované azidem. Před měřením zajistěte, aby vzorky, kalibrátory a kontroly měly teplotu 0 5 C. Vzhledem k možnému odparu roztoků by měly být vzorky, kalibrátory a kontroly v analyzátoru analyzovány/stanoveny do hodin. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) , CalSet II, pro x 1 ml , PreciControl Universal, pro x 3 ml každý PreciControl Universal 1 a Celkové vybavení laboratoře Elecsys 010, MODULAR AALYTICS E170 nebo analyzátor cobas e Příslušenství pro analyzátory Elecsys 010 a analyzátory cobas e 11: , ProCell, 6 x 380 ml systémový pufr , CleanCell, 6 x 380 ml čistící roztok pro měřící celu , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml promývací přísada , Adapter for SysClean , Elecsys 010 AssayCup, 60 x 60 reakčních nádobek , Elecsys 010 AssayTip, 30 x 0 pipetovacích špiček Příslušenství pro analyzátory MODULAR AALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 60: , ProCell M, x L systémový pufr , CleanCell M, x L čistící roztok pro měřící celu , PC/CC Cups, kalíšků pro předehřátí ProCell M a CleanCell M před užitím , ProbeWash M, x 70 ml čistícího roztoku pro finalizaci a mytí během změny reagencií , PreClean M, 5 x 600 ml systémový čistící roztok , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 8 palet x 8 reak. nádobek nebo pipet. špiček, odpadní vaky , WasteLiner, odpadní vaky , SysClean Adapter M Příslušenství pro všechny analyzátory: , Elecsys SysClean, 5 x 100 ml systémový čistící roztok Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Promíchání mikročástic před použitím proběhne automaticky. ačtěte specifické parametry pro test z čárového kódu reagencie. Ve výjimečných případech, kdy čárový kód nemůže být načten, zadejte 15místnou sekvenci čísel. Analyzátory MODULAR AALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 60: Je vyžadován roztok PreClean M. Vytemperujte chlazené reagencie na přibl. 0 C a umístěte je do reagenčního kotouče (0 C) analyzátoru. Zabraňte tvorbě pěny. Systém automaticky reguluje teplotu reagencií a otvírá a zavírá nádobky. Kalibrace ávaznost: Tato metoda byla standardizována pomocí ID GC/MS ("plynová chromatografie s hmotnostní spektrometrií a s izotopovým zřeďováním"). 8,9 Každá reagenční souprava Elecsys je opatřena štítkem s čárovým kódem obsahujícím specifické informace pro kalibraci dané šarže reagencií. Předdefinovaná master křivka je uzpůsobena pro analyzátor pomocí příslušného CalSet. Frekvence kalibrace: Kalibrace musí být provedena jednou pro celou šarži reagencií novými reagenciemi (tj. ne více než hodin od registrace reagenční soupravy v analyzátoru). Obnovení kalibrace je doporučeno: po 1 měsíci (8 dní) při používání stejné šarže reagencií po 7 dnech (při používání stejné reagenční soupravy v analyzátoru) dle potřeby: např. výsledky kontroly kvality jsou mimo definované rozmezí Kontrola kvality Pro kontrolu kvality používejte PreciControl Universal. avíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontroly pro rozdílné koncentrační rozmezí by měly být jednotlivě stanoveny nejméně jednou za hodin při používání testu, alespoň 1x na soupravu reagencií a po každé kalibraci. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. aměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátor automaticky počítá koncentraci analytu pro každý vzorek (buď v ng/ml, ng/dl nebo nmol/l). Převodní faktory: ng/ml x 3.7 = nmol/l ng/ml x 100 = ng/dl nmol/l x 0.88 = ng/ml Omezení - interference Stanovení není ovlivněno ikteritou (bilirubin < 513 µmol/l nebo < 30 mg/dl), hemolýzou (Hb < 0.37 mmol/l nebo < g/dl), lipémií (Intralipid < 1000 mg/dl) a biotinem (< 3 nmol/l nebo < 30 ng/ml). Kritérium: Výtěžnost v rámci ± 10 % počátečních hodnot (rozmezí koncentrace > 1 15 ng/ml), výtěžnost v rámci ± 15 % počátečních hodnot (rozmezí koncentrace > ng/ml) a výtěžnost ± ng/ml (rozmezí koncentrace ng/ml). Vzorky by neměly být odebrány pacientům podstupujícím léčbu s vysokými dávkami biotinu (tj. > 5 mg/den) po dobu nejméně 8 hodin od podání poslední dávky biotinu. U revmatoidních faktorů nebyla interference pozorována do koncentrace 1000 IU/mL. In vitro testy byly prováděny na 18 běžně užívaných lécích. ebyla zjištěna žádná interference. Dodatečně byly testovány speciální látky. Byla zjištěna silná interakce s androlonem (I mezinárodní nechráněný název, WHO). epoužívejte vzorky pacientů léčených androlonem. V ojedinělých případech je možné pozorovat zvýšené hladiny testosteronu u vzorků žen s konečným stádiem renálního onemocnění (ESRD). epravděpodobné zvýšené hladiny testosteronu u žen by měly být ověřeny metodou extrakce nebo schválenou tandemovou metodou LC MS/MS. 5 Ve vzácných případech je možné pozorovat interferenci způsobenou velmi vysokým titrem protilátek proti test specifickým protilátkám, streptavidinu nebo rutheniu. Tyto účinky jsou minimalizovány vhodným navržením testu. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. Limity a rozmezí Rozsah měření ng/ml nebo nmol/l (definováno limitem detekce a maximem master křivky). Hodnoty pod limitem detekce jsou vykazovány jako ng/ml nebo < nmol/l. Hodnoty nad rozsahem měření jsou vykazovány jako > 15.0 ng/ml nebo > 5.0 nmol/l. Spodní limity měření Limit blanku (LoB), limit detekce (LoD) a limit kvantifikace (LoQ) Limit blanku = 0.0 ng/ml nebo 0.0 nmol/l Limit detekce = 0.05 ng/ml nebo nmol/l Limit kvantifikace = 0.0 ng/ml nebo 0.16 nmol/l / , V 8.0 Česky

3 ms_ v8.0 Limit blanku i limit detekce byly měřeny v souladu s požadavky CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) EP17 A. Limit kvantifikace byl měřen použitím výsledku testování funkční senzitivity. Mez blanku je hodnotou 95. percentilu z n 60 měření vzorku bez obsahu analytu v průběhu několika nezávislých sérií. Mez blanku odpovídá koncentraci, pod kterou jsou vzorky bez analytu zjištěny s pravděpodobností 95 %. Mez detekce se měří na základě meze blanku a standardní odchylky vzorků s nízkou koncentrací. Mez detekce odpovídá nejnižší koncentraci analytu, kterou lze detekovat (hodnota nad mezí blanku s pravděpodobností 95 %). Kvantitativní Limit (funkční senzitivita) je nejnižší koncentrace analytu, která může být opakovatelně měřena s VK mezilehlé preciznosti 0 %. Stanovení bylo provedeno použitím vzorků testosteronu s nízkými koncentracemi. Testosteron Percentily ng/ml nmol/l 0-9 let 0-9 let Ředění ení nutné kvůli širokému měřícímu rozsahu. Očekávané hodnoty ásledující tabulky ukazují výsledky získané použitím stanovení Elecsys Testosterone II v referenčním souboru 95 mužů (7 18 let) a 100 žen (8 18 let), kteří byli v dobrém endokrinologickém zdravotním stavu. Subjekty byly klinicky popsány podle jejich Tannerovy stupnice. Tannerova stupnice byla popsána dle Marshallovy a Tannerovy metody.10,11 Rozložení hodnot testosteronu ve zdánlivě zdravé skupině mužů založené na věku (n = 1). Plná čára: 50 % percentil, horní čára: 95 % percentil, spodní čára: 5 % percentil. y Referenční hodnoty pro muže (7 18 let) popsané Tannerovou stupnicí Tannerova stupnice percentil (ng/ml) Referenční hodnoty pro ženy (8 18 let) popsané Tannerovou stupnicí 0 Tannerova stupnice percentil (ng/ml) x: Věk (roky) y: Testosteron (ng/ml) - skupina mužů Rozložení hodnot testosteronu ve zdánlivě zdravé skupině žen založené na věku (n = 160). Plná čára: 50 % percentil, horní čára: 95 % percentil, spodní čára: 5 % percentil. ásledující tabulka ukazuje výsledky, získané stanovením Elecsys Testosterone II ve zdravé skupině 1 můžů a 160 žen, neužívajících antikoncepci a léky na předpis (studie č. CIM ). Vzorky krve byly odebrány mezi 6:30 až 13:00 hod. Tato klinická studie zaměřená na stanovení Elecsys Testosterone II zahrnovala současně i měření stanovením Elecsys SHBG. Výsledky byly vyhodnoceny pro stanovení Elecsys Testosterone II a Elecsys SHBG a běžně používané parametry, odvozené z různých postupů výpočtů, zahrnujících jako důležitý parametr rovněž albumin. y x Výpočet indexu volného testosteronu (% FTI) nebo indexu volných androgenů (% FAI) v molárních jednotkách: FTI (%) = (testosteron v nmol/l děleno SHBG v nmol/l) x 100 Volný testosteron vypočítaný (FTc) v nmol/l a % Biologicky dostupný testosteron vypočítaný (BATc) v nmol/l a % FTc a BATc byly vypočítány pomocí individuálních koncentrací pro celkový testosteron, SHBG a albumin a asociační konstantou albuminu k testosteronu. Podrobný popis postupu výpočtu je přístupný na vyžádání. Čtěte rovněž domovskou stránku Byly získány následující výsledky: x x: Věk (roky) y: Testosteron (ng/ml) - skupina žen , V 8.0 Česky 5 3/6

4 SHBG nmol/l 0 9 let let Index volného testosteronu nebo index volných androgenů FTI nebo FAI (%) 0 9 let let Volný testosteron, vypočítaný 0 9 let 0 9 let Percentily FTc (nmol/l) FTc (%) Biologicky dostupný testosteron, vypočítaný 0 9 let 0 9 let Percentily BATc (nmol/l) BATc (%) Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím reagencií Elecsys, vzorků a kontrol podle protokolu (EP5 A) CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): série denně v duplikátech každý pro 1 dní (n = 8). Byly získány následující výsledky: Analyzátory Elecsys 010 a cobas e 11 Opakovatelnost Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum PreciControl U b) PreciControl U b) U = Universal Analyzátory Elecsys 010 a cobas e 11 Mezilehlá preciznost Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum PreciControl U PreciControl U Analyzátory MODULAR AALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 60 Opakovatelnost Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum PreciControl U PreciControl U Analyzátory MODULAR AALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 60 Mezilehlá preciznost Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum PreciControl U PreciControl U / , V 8.0 Česky

5 Porovnání metod a) Porovnání metod stanovení Elecsys (y) s metodou ID GC/MS (x) použitím 39 vzorků séra poskytlo následující korelace (ng/ml): Vzorky mužů a žen (n = 39): y x x: ID GC/MS (ng/ml) y: Stanovení Elecsys (ng/ml) Body - - x = y Passing/Bablok y = 1.0x y = 1.01x τ = 0.98 r = Koncentrace vzorků byly v rozmezí až 17.3 ng/ml (0.600 až 60.0 nmol/l). Vzorky žen (n = 0): y = 0.959x y = 0.969x τ = r = 0.99 Koncentrace vzorků byly v rozmezí až.9 ng/ml (0.600 až 7.95 nmol/l). b) Porovnání stanovení Elecsys (y) se stanovením Elecsys Testosterone (x) použitím klinických vzorků poskytlo následující korelace (ng/ml): Počet naměřených vzorků: 39 mužů, 19 žen Výsledky externí multicentrické studie (studie č. CIM ). Vzorky mužů (n = 39): y = 0.977x y = 0.957x τ = r = Koncentrace vzorků byly v rozmezí až 1.0 ng/ml (0.19 až 8.5 nmol/l). Vzorky žen (n = 19): y = 0.715x y = 0.957x , V 8.0 Česky 5 / 6 τ = r = 0.97 Koncentrace vzorků byly v rozmezí 0.03 až 9.6 ng/ml (0.080 až 3.1 nmol/l) se vysoce zvýšenými vzorky.16 ng/ml (1. nmol/l) a 9.6 ng/ml (3.1 nmol/l). Analytická specifičnost Pro použité deriváty protilátek byla shledána následující křížová reaktivita (v %): Koncentrace (ng/ml) Křížová reaktivita (%) Androstendion Kortizol Kortison 000 n.d. c) Danazol Dexamethason 000 n.d. DHEA DHEA-S D-5-Androsten-3β,17β-diol Estradiol Estron Ethisteron orgestrel Testosteron propionát α-Androstan-3β,17β-diol α-Dihydro-testosteron β-Hydroxy-testosteron Keto-testosteron orethisteron Prednison 1000 n.d. Prednisolon Progesteron 1000 n.d. c) n.d. = nedetekovatelné Odkazy 1 ieschlag E, Behre HM. Testosteron Action, Deficiency, Substitution. Cambridge University Press, 00. ISB Runnebaum B, Rabe T. Gynäkologische Endokrinologie und Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 199; Band 1:36-38,70,116 Band 1:39-0, 50-51, , -3. ISB , ISB x. 3 Wheeler MJ. The determination of bio-available testosterone. Ann Clin Biochem 1995;3: Kane J, Middle J, Cawood M. Measurement of serum testosterone in women; what should we do? Ann Clin Biochem 007;: Rosner W, Auchus RJ, Azzis R, et al. Position Statement: Utility, Limitations, and Pitfalls in Measuring Testosterone: An Endocrine Society Positions Statement. J Clin Endocrinol Metab 007;9(): Arlt W. Androgen Therapy in Women. Eur J Endocrinol 006;15(1): Wu AHB. Tietz Clinical Guide To Laboratory Tests. th Edition, WB Saunders Co, 006:1010 pp. 8 Thienpont LM, De Brabandere VI, Stöckl D, et al. Use of cyclodextrins for prepurification of progesterone and testosterone from human serum prior to determination with isotope dilution-gas chromatography/mass spectrometry. Anal Chem 199;66:

6 9 Thienpont LM, Franzini C, Kratochvila J, et al. Analytical quality specifications for reference methods and operating specifications for networks of reference laboratories. Recommendations of the European EQA-Organizers Working Group B. Eur J Clin Chem and Clin Biochem 1995;33: Marshall WA, Tanner JM. Variations in the pattern of pubertal changes in boys. Arch Dis Childh 1970;5: Marshall WA, Tanner JM. Variations in the pattern of pubertal changes in girls. Arch Dis Childh 1969;: Vermeulen A, Verdonck L, Kaufman JM. A critical evaluation of simple methods for the estimation of free testosterone in serum. J Clin Endocrinol Metab 1999;8: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 ov;6(11): Pro více informací čtěte prosím příslušný návod k použití daného analyzátoru, jednotlivé aplikační listy, informace o produktu a metodické listy všech potřebných komponent (jsou-li dostupné ve Vaší zemi). Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá následující symboly a znaky, včetně uvedených v normě ISO Obsah soupravy Analyzátory/přístroje, na kterých lze reagencie použít Reagencie Kalibrátor Objem po rekonstituci nebo smíchání Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 013, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 6 / , V 8.0 Česky