Imunologické metody imunitní odpovědí humorální typ protilátek odpověď na buněčné úrovni plazmové buňky Antigenní determinant neboli epitop
|
|
- Nela Machová
- před 7 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Imunologické metody Obratlovci vystavení působení cizorodých molekul a organismů reagují imunitní odpovědí, jejímž cílem je eliminace jejich škodlivého vlivu. Imunitní odpověď je dvojího typu, humorální typ - produkce a cirkulace protilátek (antibody - Ab), odpověď na buněčné úrovni - produkce specializovaných buněk, které reagují s antigeny na povrchu hostitelských buněk. Protilátky se vytvářejí ve zralých B lymfocytech, nazývaných plazmové buňky. Ab mají specifitu proti danému antigenu, určitá linie plazmových buněk produkuje stejné monoklonální protilátky (MAb). Jiné linie tvoří Ab proti stejnému antigenu, ale odlišné struktury. Vzniká tak směs - polyklonální protilátka. Antigenní determinant neboli epitop = strukturní element antigenu, který je rozpoznáván protilátkou. Proteiny - několik aminokyselin, vyšší sacharidy - několik cukerných zbytků. Z krve imunizovaných obratlovců se izoluje antisérum (případně se přečišťuje), které obsahuje polyklonální protilátky. Monoklonální protilátky se připravují v kulturách hybridomových buněk, které vzniknou fúzí B buněk s rychle se dělícími tumorovými buňkami. Alternativní cestou je nadměrná exprese monoklon. Ab v buňkách E. coli jako hostitelském organismu. Struktura protilátek Všeobecná struktura je stejná, čtyři polypeptidové řetězce, dvě kopie těžkého řetězce (H) a dvě kopie lehkého řetězce (L). Vyjímkou velbloud - pouze pár těžkých řetězců. 1
2 Lehký řetězec má dvě formy, těžký řetězec 5 forem, které se liší v aminokyselinové sekvenci. H řetězce jsou glykosylovány. Nekovalentní interakce řetězců, -S-S- vazby. N-koncové části obou řetězců jsou tzv. variabilní domény - vazebné místo pro antigen. Dvě identická vazebná místa. Typ H řetězců určuje třídu: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM IgA a IgG se dělí do podtříd (indexy). IgG jsou dominantní, IgM jsou jediné pentamerní (1000 kda), jinak kda. Různé konc. v séru, funkce, poločas. Konstantní oblasti - fyziologické funkce protilátek, vazba komplementu. 2
3 Štěpení proteolytickým enzymem papainem probíhá mezi c H 1 a c H 2, vzniknou dvě kopie tzv. Fab fragmentu (monovalentní) a jeden Fc fragment. Pepsin poskytuje bivalentní F(ab) 2. Fab = fragment antibody Bohužel se shlukují ( sticking ), což činí potíže při terapii. Příprava protilátek Imunologické metody jsou nezastupilné v biochemických, ale zejména klinických laboratořích. Polyklonální protilátky se připravuji imunizací laboratorních zvířat. Nejčastěji se imunizuje biopolymery - proteiny, ale i polysacharidy. Nukleové kyseliny jsou špatnými antigeny. Pro kvalitu (specifitu) protilátek je nutná čistota antigenu. Nízkomolekulární látky (peptidy, léčiva) mohou vyvolávat imunitní odpověď po vazbě na inertní nosič. Pak se z nich stávají tzv. hapteny. Jako nosiče se používají např. hemocyanin, BSA. Často se provádí několik typů konjugací pro možnost porovnání specifity generovaných protilátek. 3
4 Přečištění antigenů používaných pro imunizaci V případě proteinů je nejvýhodnější použití preparativní SDS- PAGE, chromatografické metody - afinitní chromatografie. Po preparativní ELFO se vzorek vyřízne z gelu (bez barvení, musí být známa pozice v gelu), rozdrtí se, suspenduje v PBS pufru a protlačuje injekční stříkačkou pro jemné rozdrcení. Pak je možná imunizace. Pro imunizaci se obvykle aplikuje µg proteinu smíseného s adjuvans - funguje jako depot pro pomalé uvolňování antigenu a nespecifický aktivátor imunitní reakce. Freundovo adjuvans - obsahuje mannidomonooleát a parafínový olej. Je-li kompletní, obsahuje dále inaktivované mykobaktérie pro stimulaci imunitního systému zvířete. Kompletní F.a. se užívá pouze na počátku imunizace, dále následuje použití inkompletního F.a. Emulze použitá pro inokulaci musí být stabilní (ultrazvuk). V některých zemích je použití F.a. zakázáno (SRN), alternativy. Výběr zvířete pro přípravu antiséra závisí na množství potřebných protilátek. Nejčastěji králík a koza. Pro první injekci s kompletním F.a. se doporučuje intramuskulární aplikace. Následující aplikace mají být podkožní. Protokoly pro imunizaci bývají různé, obvykle trvají dnů. Na počátku se odebere kontrolní sérum. Po počáteční injekci se užije relativně velkého množství antigenu, pro další injekce se toto snižuje. 4
5 Antigen se má aplikovat do různých míst zvířecího těla - omezení fyzické bolesti. Krev králíků se odebírá z ušních žil, drastické je utrácení zvířat vykrvácením. Po 14 dnech od první injekce se odebírá zkušební sérum pro analýzu titru protilátky, pak následují další injekce s menším množstvím antigenu (aby se nevyvinula tolerance) pro povzbuzení imutního systému za účelem vyšší produkce protilátek. Po dalších 14 dnech následuje další injekce pro povzbuzení imunitního systému ( booster ). Dále po týdnu může být odebráno antisérum. Může být i třetí injekce Ag pro povzbuzení (8 týdnů o poč. injekce), po dalším týdnu se odebere antisérum. 5
6 Rupert Purifikace protilátek Po získání krve ze zvířete se nechá krev srazit, krevní koláč se odstraní centrifugací při 5,000 g, připravíme tak sérum. Sérum lze skladovat několik let při -80 o C. Doporučuje se inaktivace komplementu zahřátím při 56 o C po dobu min. Pro přečištění immunoglobulinové frakce séra existuje několik metod: 1) precipitace síranem amonným, 45% sat. pro králičí sérum 2) konvenční chromatografické techniky 3) afinitní chromatografie na nosičích protein A nebo G; Jde o immobilizované komponenty z buněčné stěny bakterie Streptococcus aureus (A) nebo růz. spreptokokových kmenů (G), vážící IgG v konst. Fc regionech. 6
7 IgG se váží na afinitní nosič v neutrálním či slabě alkalickém prostředí, eluují se glycin-hcl pufrem, ph 2.7. Nutná okamžitá neutralizace kyselého eluátu. Podobně může být afinitní chromatografie provedena s immobilizovaným antigenem použitým pro imunizaci (navázání na aktivovaný nosič CNBr-Sepharosa, vinylsulfonyl agarosa). Nanášení při neutrálních podmínkách, eluce chaotropními látkami či nižším ph. Touto purifikací nelze získat monoklonální protilátky, ale směs monospecifických protilátek proti různým antigenním determinantům. Monoklonální protilátky 7
8 Nanoprotilátky ( nanobodies ) Běžné protilátky mohou být přirovnány k tankům: pro léčbu jistých onemocnění jsou velké, složité a nákladné. Nedokonalost lidského imunitního systému: často velmi pomalý v reakci (nádory, určité respirační infekce), jindy naopak reaguje nadměrně (odmítnutí transplantovaných orgánů, astma, alergie). Konečně může napadnout vlastní buňky (revmatická artritida). Snaha produkovat umělé protilátky bez negativních efektů u MAb problematické a nákladné. Velbloudi a lamy produkují ve svém imunitním systému neúplné protilátky, které mohou být pozměněny genovým inženýrstvím (použije se jediný variabilní segment). NanoAb jsou pak kódovány jediným genem a mohou být snadno produkovány expresí v hostitelském mikrobiálním organismu. Nanoprotilátky mají velikost 1/10 běžné Ab. Konstrukce a aplikace studovány firmou Ablynx v Gentu (Belgie). V podobné velikosti firma Domantis (Cambridge, MA, USA) produkuje doménové protilátky variabilní domény z Fab. 8
9 Interakce protilátka - antigen Použití vysoce specifické interakce pro analýzu. Provádí se v roztoku nebo na nosiči (gelu). Vytvoření Ab-Ag precipitátu (zákal) v roztoku se děje pouze v úzkém rozmezí koncentrací, které se nazývá zóna ekvivalence. K precipitaci dochází vazbou bivalentních Ab na antigen, který je multivalentní - vytvoří se nerozpustná síťová struktura. Fab fragmenty precipitát neposkytují. Podobně se precipitát netvoří u monoklonálních protilátek, které váží antigen s více kopiemi jediného epitopu. Precipitace vyžaduje malý nadbytek Ag (2:1). Kvantifikace měřením rozptylu světla (nefelometrie) nebo jeho pohlcování (turbidimetrie) zákalem. Imunoprecipitace se kombinuje s SDS- PAGE pro semikvantitativní detekci proteinů. 9
10 Př. Studium membránových Ag imunoprecipitací. Proteiny v b. membráně se radioaktivně značí metabolickou cestou -např. použitím jodovaných aminokyselin. Buňky jsou pak lyzovány detergentem. Membránové částice s antigeny jsou vychytány přídavkem monoklonálních protilátek vázaných na nerozpustné částice nosiče - vytvoří se nerozpustné komplexy. Vše ostatní se vymyje. Komplexy Ab-Ag Ag se štěpí přídavkem SDS, uvolněné proteiny se separují SDS-PAGE a identifikují dle radioaktivity. Interakce v gelu 1. Radiální imunodifuse 1. Radiální imunodifuse. V 1-2% agarovém gelu obsahujícím protilátku jsou vyřezány kruhové jamky pro aplikaci různě zředěného antigenu. Ag difunduje do gelu a dle jeho koncentrace vznikají různě široké precipitační prstence (dosažení ekvivalence). Kvantifikace s kalibrační přímkou. 10
11 2. Dvojitá imunodifuze. Protilátka a antigen se umístí do různých jamek na opačné konce agarového gelu a ponechají se difundovat proti sobě. Precipitační linie se vytvoří v místě příslušné ekvivalence v poloze mezi Ab a Ag. Obsahuje-li vzorek Ag více složek (rodílné mobility) rozpoznávaných stejnou Ab, vznikne více precip. linií. Semikvantifikace, studium antigenních determinant. 3. Ouchterlonyho imunodifuze. Čtvercový agarový gel, centrální jamka, periferní jamky umístěny v kruhu kolem jamky centrální. Do centrální jamky se dávkuje protilátka, do periferních jamek různé antigeny. Po difuzi a vytvoření precipitačních linií můžeme posoudit, identitu, částečnou identitu nebo naprostou odlišnost těchto antigenů. 11
12 Imunoelektroforetické metody jsou podstatně rychlejší a a pro analýzu tudíž efektivnější než metody imunodifuzní. 4.. Raketová imunoelektroforéza. Provádí se v agarovém gelu s protilátkou. Na katodové straně se dávkuje antigen o různé koncentraci. Ab-Ag komplexy tvoří obrazce podobnému plamenuům hořícího paliva rakety. Hodnota ph (~ 8.0) zajišťuje, že Ab a Ag migrují do opačných směrů. 5. Křížová imunoelektroforéza. Protilátka a antigen se dávkují na opačných stranách agarosového gelu, Ag na katodové straně, Ab na anodové. Po připojení zdroje el. napětí se Ab a Ag pohybují proti sobě (nutné správné ph) a v místě dosažení koncentrační ekvivalence se vytvoří precipitační linie. 12
13 6. Imunoelektroforéza pro směsi antigenů. Provádí se ve dvou krocích. Nejprve se směs antigenů vpravená do dvou centrálně umístěných jamek separuje zónovou elektroforézou. Do podélné ( slot-like ) jamky v gelu, která je mezi jamkami pro antigen) se vnese protilátka. Jamka je paralelní s osou provedené elektroforézy pro separaci antigenů. Ab difunduje proti separovaným antigenům, tvoří se obloukovité precipitační linie. Poloha linií odpovídá mobilitě antigenů separovaných elektroforézou. Kvalitativní i kvantitativní analýza směsi antigenů. 13
14 Radioimunoanalýza (RIA) Jedna z nejcitlivějších a nejpřesnějších metod analýzy (až pg/ml). Založena na kompetici radioaktivně značeného a neznačeného antigenu o vazbu na protilátku. Může být prováděna dvěma způsoby: 1. Smísí se Ag* (známá konc.) a Ag (neznámá konc.) a směs se inkubuje se specifickou protilátkou (volně v roztoku). Následuje přídavek sekundární protilátky, komplex Ab- Ag/Ag* je takto precipitován, separován, v precipitátu se měří radioaktivita. Primární protilátka může být immobilizována, např. na stěně zkumavky, pak se zkumavka po přídavku směsi a inkubaci pouze vymyje. 2. Protilátka reaguje nejdříve pouze se značeným antigenem a přídavky neznačeného antigenu o různé koncentraci různě vytěsňují Ag* z vazby. Ab-Ag* se tak doplňuje Ab-Ag. 14
15 Značení I a 131 I pro proteinové antigeny, tritium nebo 14 C pro nízkomol. látky. Radioaktivita se měří např. scintilací. Pro kvantifikaci nutná standardizace. 15
16 ELISA Dnes nejběžnější imunoanalýza v biochemických a klinických laboratořích. Stejná specifita a srovnatelná citlivost jako u RIA. Detekce spočívá v přeměně chromogenního substrátu nějakým enzymem (alkalická fosfatasa, křenová peroxidasa), který je ve formě konjugátu s antigenem nebo protilátkou. Komplex protilátky s antigenem je immobilizován na pevný povrch - plastové mikrotitrační destičky. Existuje několik způsobů provedení: přímá ELISA, nepřímá ELISA, kompetitivní ELISA, sendvičová ELISA. Liší způsobem provedení detekce, immobilizované jsou buď protilátky nebo antigeny. Přímá ELISA Pro detekci antigenu (virus, bakterie; rekombinantní peptid či protein, ale i jiné antigeny). Protilátka pro detekci je značena (HRP, AP, FITC). Po vymytí nadbytku Ab-konjugátu se přidá chromogenní substrát pro tvorbu zbarvení nebo se měří fluorescence. Ab-konjugát je komerční nebo připravený v laboratoři. 16
17 Nepřímá ELISA Opět immobilizovaný antigen. Nejdříve se Ag inkubuje s primární protilátkou a její nadbytek se vymyje. Sekundární protilátka - konjugát se váže na primární Ab, nadbytek se opět vymyje. Positivní reakce - ve vzorku musí být přítomna primární Ab. Podmínkou spolehlivosti je, že sekundární Ab neváže immobilizovaný Ag ani nepřilne na stěny mikrotitrační destičky. Sendvičová ELISA ( capture, sandwich ELISA) Varianta se záchytem antigenu Varianta se záchytem antigenu. Protilátka vážící Ag je immobilizována (může to být i test jejího titru). Přídavek Ag, vymytí. Přidá se značená protilátka, která váže zachycený Ag. Přísné podmínky podobně jako u nepřímé ELISA - značená Ab nesmí reagovat s immobilizovanou Ab. Značená Ab by měla být z jiného obratlovce (králík - koza). Nesmí být nespecifická vazba s pevnou fází. 17
18 Sendvičová ELISA Varianta se záchytem protilátky. Immobilizovaná protilátka váže protilátky ze vzorku (např. lidské IgG, IgA nebo IgM ze zkoumaného séra pacientů). Po vymytí se přidá specifický antigen a nakonec anti- Ag konjugát poskytující signál. Značená Ab nesmí reagovat s Ab ve vzorku bez přítomnosti Ag. Nesmí ani vytvářet nespecifickou vazbu s pevnou fází Při sendvičové ELISE může být použito i sekundární protilátky. 18
19 Kompetitivní nebo blokovací ELISA U kompetitivní ELISA se zkoumané sérum inkubuje společně se značeným anti-ag konjugátem. Antigen je vázán na nosič. Kompetice o vazbu, čím více Ab v séru, tím silnější zbarvení. Nutná standardizace. U blokovací ELISA se nejdříve přidá zkoumané sérum. Nadbytek se po inkubaci vymyje. Pak se přidá anti-ag konjugát, který vytěsňuje zkoumanou Ab z vazby. Komp. ELISA má varianty s immobilizovanou protilátkou. Nespecifické vazby protilátek mohou být odstraněny blokováním stěn ELISA destiček 0.1% roztokem BSA. 19
20 Používané substráty pro peroxidasu v Ab-konjugátech: 3, 3, 5, 5 -tetramethylbenzidin 2,2 -azinobis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonát) - ABTS o-fenylendiamin o-dianisidin o-toluidin Používané substráty pro alkalickou fosfatasu v Ab-konjugátech: 4-nitrofenylfosfát Western blotting a dot blotting Jde o metody s vysokou citlivostí pro detekci proteinů separovaných elektroforézou, obě jsou založené na použití specifických protilátek. Proteiny (= antigeny) jsou vázány na membránu, nejčastěji se používá hydrofobní PVDF. U dot blottingu se protein aplikuje přímo na membránu bez počáteční elektroforetické separace. Detekce je stejná jako u Western blottingu (viz dále). Pro kvalitativní a semikvantitativní stanovení. Při Western blottingu se proteiny nejdříve separují elektroforézou (SDS-PAGE). Následuje blotting na PVDF membránu. Stejně jako u dot blottingu, vazebná místa na membráně musí být blokovány inertním proteinem (BSA, želatina, odtučněné mléko) před aplikací protilátek. 20
21 Pro viditelnou detekci se používá Ab-konjugát s enzymy (HRP, ALP) nebo protein A konjugát s HRP. Pro Western blotting je třeba jiných enzymových substrátů než pro ELISA; je nutné, aby poskytovaly precipitující barevné produkty. Př. pro peroxidasu se používají diaminobenzidin a 4-chlor-1- naftol; pro ALP se používá 5-brom-4-chlorindoxyl fosfát/nitrotetrazoliová modř. Detekční limit proteinů je tak 1 ng/mm 2 membrány. O řády citlivější je použití luminiscenčních detekčních technik (fluoresc. substráty pro Ab-konjugáty s enzymy). Emitované světlo lze zachytit např. film. 21
22 Mikroskopické techniky - imunofluorescence a imunogold Protilátky lze využít k in vivo detekci látek v buňce nebo buněčných organelách. Jako sekundární protilátky se používají fluorescenční konjugáty (fluorescein, rhodamin, FITC) nebo konjugáty s částečkami zlata (připravují se redukcí kyseliny tetrachlorzlatité, průměr několik nm). Vazba částeček je elektrostatická, závislá na ph (obvykle ~ 7). Detekce se provádí viditelným (pro imunogold) či fluorescenčním (pro imunofluorescenci) mikroskopem na tkáňových řezech. Elektronová mikrosk. dává přednost imunogold konjugátům. Při imunofluorescenční mikroskopii lze detekovat simultánně dvě látky, pokud se použijí konjugáty s různými fluorescenčními značkami. V EM se analogicky použijí různě velké částečky zlata. Přímý test 22
23 Nepřímý test 23
24 FACS - fluorescence activated cell sorting Průtoková cytometrie ( flow cytometry ) je technika pro rychlé měření jednotlivých částic/buněk, které procházejí snímačem. Argonový laser umožňuje analýzu mnoha parametrů na základě odklonu laserového paprsku. Úroveň tohoto odklonu odpovídá velikosti a granularitě (denzitě). Cytoplazmatické znaky (antigenní determinanty) v buněčné membráně mohou být značeny fluorescenčním konjugátem monoklonálních protilátek. Je tak možné určit přítomnost, denzitu i distribuci těchto znaků. Analogicky lze studovat i vnitřní znaky, např. obsah DNA. Cytoplazmatické znaky jako tzv. diferenciační znaky (Clusters of Differentiation - CD) umožňují určovat specifické buněčné subpopulace - například CD4+ T lymfocyty značené monoklonální protilátkou proti znaku CD4 na jejich povrchu. až 10 7 b. /h tolik obsaženo např. v 1 ml krve 24
25 Flow cytometry is a technique for counting, examining and sorting microscopic particles suspended in a stream of fluid. It allows simultaneous multiparametric analysis of the physical and/or chemical characteristics of single cells flowing through an optical/electronic detection apparatus. A beam of light (usually laser light) of a single frequency (colour) is directed onto a hydrodynamically focused stream of fluid. A number of detectors are aimed at the point where the stream passes through the light beam; one in line with the light beam (Forward Scatter or FSC) and several perpendicular to it (Side Scatter (SSC) and one or more fluorescent detectors). Each suspended particle passing through the beam scatters the light in some way, and fluorescent chemicals in the particle may be excited into emitting light at a lower frequency than the light source. This combination of scattered and fluorescent light is picked up by the detectors, and by analysing fluctuations in brightness at each detector (one for each fluorescent emission peak) it is possible to deduce various facts about the physical and chemical structure of each individual particle. FSC correlates with the cell volume and SSC depends on the inner complexity of the particle (i.e. shape of the nucleus, the amount and type of cytoplasmic granules or the membrane roughness). There are now some flow cytometers on the market that have eliminated the need for fluorescence and use only light scatter for measurement. Measurable parameters are: volume and morphological complexity of cells cell pigments such as chlorophyll or phycoerythrin DNA (cell cycle analysis, cell kinetics, proliferation etc.) RNA chromosome analysis and sorting (library construction, chromosome paint) proteins cell surface antigens (CD markers) intracellular antigens (various cytokines, secondary mediators etc.) nuclear antigens enzymatic activity ph, intracellular ionized calcium, magnesium, membrane potential membrane fluidity apoptosis (quantification, measurement of DNA degradation, mitochondrial membrane potential, permeability changes, caspase activity) cell viability monitoring electropermeabilization of cells oxidative burst characterising multi-drug resistance (MDR) in cancer cells glutathione various combinations (DNA/surface antigens etc.) This list is very long and constantly expanding. 25
Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
VíceIMUNOENZYMOVÉ METODY EIA
IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA RIA zdravotní riziko krátký poločas rozpadů izotopů nákladné zařízení na měření radioaktivity EIA místo radioaktivity se měří enzymová aktivita není zdravotní riziko není nutné
VícePrecipitační a aglutinační reakce
Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený
VícePrecipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie RNDr. Jana Nechvátalová, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Reakce Ag - Ab primární fáze rychlá; vznik vazby
VícePrecipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie Mgr. Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny Ag - Ab hypervariabilní oblasti - antigen vazebná aktivita
VíceObsah. Sarkosin Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu. Dagmar Uhlířová
Investice do rozvoje vzdělávání Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu Dagmar Uhlířová 7.2.2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 NanoBioMetalNet Název projektu: Partnerská síť centra
VíceZáklady imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách Obecné principy reakce antigenprotilátka 1929 Kendall a Heidelberg Precipitační reakce Oblast nadbytku protilátky
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti IMUNOCHEMICKÉ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti IMUNOCHEMICKÉ METODY ZÁKLADNÍ TERMÍNY antigen jakákoli látka, se kterou specificky reaguje protilátka imunogen látka schopná vyvolat v
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceImunoblot, imunoelektroforéza
Imunoblot, imunoelektroforéza Jana Švarcová. Plazmatické proteiny. http://slideplayer.cz/slide/2345714/ Jana Švarcová. Plazmatické proteiny. http://slideplayer.cz/slide/2345714/ Jana Švarcová. Plazmatické
VíceMetody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
VíceIMUNOELEKTROFORETICKÉ METODY
IMUNOELEKTROFORETICKÉ METODY Imunoelektroforetické metody kombinace metod elektroforetických + imunodifúzních gel: agarozový (1-2 %) agarový gel pufry: 0,025 M ph 8-9 veronalový borátový Tris-barbitalový
VíceZáklady imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách Imunoglobuliny membránově vázané a solubilní receptory Epitopy Antigen = částice rozpoznávaná protilátkou Epitop
VíceRADIOIMUNOANALÝZA (RADIOIMMUNOASSAY) Převzato: sciencephoto.com Test krve hepatitis virus
RADIOIMUNOANALÝZA (RADIOIMMUNOASSAY) Převzato: sciencephoto.com Test krve hepatitis virus RADIOIMUNOANALÝZA Stanovení látek, proti kterým lze připravit protilátky ng (10-9 g) až pg (10-12 g) ve složitých
VíceAnalýza proteinů. Stanovení bílkovin. Elektroforéza plazmatických bílkovin
Analýza proteinů udržování onkotického tlaku transport minerálů, hormonů, lipidů, katabolitů (prealbumin, Alb, ceruloplasmin, transferin, apoproteiny ) obrana proti infekci (imunoglobuliny) hemokoagulace
VíceAntiparalelní beta list
Antiparalelní beta list Paralelní beta list Schematický model beta listu (stužkový) Proteiny obsahují zpětné kličky (beta kličky nebo vlásenkové ohyby). Obvykle je CO skupina i-té aminokyseliny vázána
VíceSpecifická imunitní odpověd. Veřejné zdravotnictví
Specifická imunitní odpověd Veřejné zdravotnictví MHC molekuly glykoproteiny exprimovány na všech jaderných buňkách (MHC I) nebo jenom na antigen prezentujících buňkách (MHC II) u lidí označovány jako
VíceIMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI
IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI Radka Závodská, PedF JU v Českých Budějovicích Imunocytochemická metoda - použítí protilátky k detekci antigenu v buňkách (Imunohistochemie-
VíceRozdělení imunologických laboratorních metod
Rozdělení imunologických laboratorních metod Aglutinace Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Rozdělení imunologických laboratorních
VíceAglutinace Mgr. Jana Nechvátalová
Aglutinace Mgr. Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Aglutinace x precipitace Aglutinace Ag + Ab Ag-Ab aglutinogen aglutinin aglutinát makromolekulární korpuskulární
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceZÁKLADNÍ DĚLENÍ IMUNOLOGICKÝCH LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ
Aglutinace přímá a nepřímá, Coombsův test, antiglobulinová séra Precipitační reakce v roztoku a v gelu Imunoelektroforéza, imunoelektrofixace, Western-blot Imunofluorescence ELISA, RIA, LIA Praktikum č.
VíceMetody práce s proteinovými komplexy
Metody práce s proteinovými komplexy Zora Nováková, Zdeněk Hodný Proteinové komplexy tvořeny dvěma a více proteiny spojenými nekovalentními vazbami Van der Waalsovy síly vodíkové můstky hydrofobní interakce
VíceIMUNOCHEMICKÉ METODY
IMUNOCHMICKÉ MTODY Antigeny Protilátky Imunochemické metody Kvantitativní imunoprecipitační křivka Imunoprecipitační metody Imunoanalýza Využití imunochemických metod v rychlé diagnostice Praktické úlohy
VíceMETODY STUDIA PROTEINŮ
METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání
VíceELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY. Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová
ELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová Parazitologické laboratorní techniky, 26. listopadu 2014 Průkaz protilátek proti Toxoplasma gondii Průkaz protilátek proti Toxoplasma
VíceMetody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
VíceVeronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha
Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha interakce antigenu s protilátkou probíhá pouze v místech epitopů Jeden antigen může na svém povrchu nést
VíceIMUNOGENETIKA I. Imunologie. nauka o obraných schopnostech organismu. imunitní systém heterogenní populace buněk lymfatické tkáně lymfatické orgány
IMUNOGENETIKA I Imunologie nauka o obraných schopnostech organismu imunitní systém heterogenní populace buněk lymfatické tkáně lymfatické orgány lymfatická tkáň thymus Imunita reakce organismu proti cizorodým
VíceFunkce imunitního systému
Téma: 22.11.2010 Imunita specifická nespecifická,, humoráln lní a buněč ěčná Mgr. Michaela Karafiátová IMUNITA je soubor vrozených a získaných mechanismů, které zajišťují obranyschopnost (rezistenci) jedince
VíceWestern blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
VíceNativní a rekombinantní Ag
Antigeny z hlediska diagnostiky a pro potřeby imunizace Nativní a rekombinantní Ag Ag schopna vyvolat I odpověď, komplexní, nekomplexní Ag, hapten, determinanty, nosič V laboratořích: Stanovení Ab proti:
VíceImunoreakce se značenými protilátkami
Imunoreakce se značenými protilátkami Kvantitativní stanovení antigenu/protilátky: precipitace - 30 g/ml aglutinace - 1 g/ml Neprecipitační imunochemické metody: RIA, FIA, EIA - 1 pg/ml Rozdělení metod
VíceÚVOD DO IMUNOCHEMICKÝCH METOD
ÚVOD DO IMUNOCHEMICKÝCH METOD Imunochemické metody antigen + protilátka biospecifická haptén vazba komplement protein A + protilátka nespecifická vazba Fc receptory Význam imunochemických metod důkaz přítomnosti
VícePřehled histologických barvení včetně imunohistochemie
Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie Výukový materiál pro praktická cvičení z histologie Anna Malečková Vytvořeno v rámci projektu OP VVV Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance
VíceOBRANNÝ IMUNITNÍ SYSTÉM
Mgr. Šárka Vopěnková Gymnázium, SOŠ a VOŠ Ledeč nad Sázavou VY_32_INOVACE_02_3_04_BI2 OBRANNÝ IMUNITNÍ SYSTÉM Základní znaky: není vrozená specificky rozpoznává cizorodé látky ( antigeny) vyznačuje se
VíceVybrané imunologické metody
Vybrané imunologické metody Ing. Petra Šandová Klinická imunologie a alergologie laboratoř ÚKBLD a 1. LF UK VFN Laboratorní imunologická vyšetření Humorální imunita proteiny krevního séra (Ig, C, CRP),
VíceMETODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví
METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY Veřejné zdravotnictví METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY průtoková cytometrie metody stanovení funkční aktivity lymfocytů testy fagocytárních funkcí Průtoková cytometrie
VíceSerologické vyšetřovací metody
Serologické vyšetřovací metody Serologické reakce Přímý průkaz Nepřímý průkaz průkaz antigenu průkaz nukleové kyseliny průkaz protilátek Nepřímý průkaz = průkaz specifických protilátek neboli průkaz serologický
VíceRekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer
Rekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer Virologie a diagnostika Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i., Brno Alternativní
VíceIMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody. 3. ročník Klinická biologie a chemie
IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody 3. ročník Klinická biologie a chemie Princip elektroforézy I. Separační metoda využívající různé pohyblivosti různých iontů (složek směsi) ve stejnosměrném
VícePrincipy a instrumentace
Průtoková cytometrie Principy a instrumentace Ing. Antonín Hlaváček Úvod Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE Cytomegalovirus ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM v lidském
VíceRNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc
RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc Výukové materiály: http://www.zoologie.upol.cz/osoby/fellnerova.htm Prezentace navazuje na základní znalosti Biochemie a cytologie. Bezprostředně
VíceNové metody v průtokové cytometrii. Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P.
Nové metody v průtokové cytometrii Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P. Průtoková cytometrie Analytická metoda využívající interakce částic a záření. Technika se vyvinula z počítačů částic Počítače
VíceJaromír Šrámek, 5108 1. LF UK 2006/07
Jaromír Šrámek, 5108 1. LF UK 2006/07 Obecné principy 2 Rozdělení metod imunoprecipitační metody při reakci vzniká precipitát např. aglutinační reakce, imunodifúze, imunoelektroforéza neprecipitační metody
VíceVybrané imunochemické metody
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybrané imunochemické metody Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Lenka Fialová 2013 Úloha 1 Imunoprecipitační křivka lidského
VíceHistochemie. Histochemie. Histochemie Příklady histochemických metod: Ionty. Histochemie Příklady histochemických metod: Ionty
Modul IB CBO Odd. histologie a embryologie MUDr. Martin Špaček http://www.lf3.cuni.cz/histologie Histologická metoda užívaná k průkazu různých látek přímo v tkáních a buňkách Katalytická histochemie Imunohistochemie
VíceVýskyt MHC molekul. RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. ajor istocompatibility omplex. Funkce MHC glykoproteinů
RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc = ajor istocompatibility omplex Skupina genů na 6. chromozomu (u člověka) Kódují membránové glykoproteiny, tzv. MHC molekuly, MHC molekuly
VíceAfinitní kapilární elektroforéza
Pražské analytické centrum inovací Projekt CZ.04.3.07/4.2.01.1/0002 spolufinancovaný ESF a Státním rozpočtem ČR Afinitní kapilární elektroforéza Věra Pacáková a Tereza Vařilová PřF UK Praha Obsah 1. Úvod
VíceMetody vyšetření imunity
Metody vyšetření imunity Motto laboratorního vyšetření Cílem je nalézt abnormální funkci imunitního systému, která přináší vysvětlení příznaků/nemoci /nemocí Některé chybné funkce se nemusí projevovat
VíceSTAFYLOKOKOVÉ ENTEROTOXINY. Zdravotní nezávadnost potravin. Veronika Talianová, FPBT, kruh: 346 Angelina Anufrieva, FPBT, kruh: 336
STAFYLOKOKOVÉ ENTEROTOXINY Zdravotní nezávadnost potravin Veronika Talianová, FPBT, kruh: 346 Angelina Anufrieva, FPBT, kruh: 336 OBSAH: Základní charakteristika Staphylococcus aureus Stafylokokové enterotoxiny
VíceIzolace nukleových kyselin
Izolace nukleových kyselin Požadavky na izolaci nukleových kyselin V nativním stavu z přirozeného materiálu v dostatečném množství požadované čistotě. Nukleové kyseliny je třeba zbavit všech látek, které
VíceJ06 Úvod do serologie, precipitace a aglutinace
VLLM0421c (jaro 2016) J06 Úvod do serologie, precipitace a aglutinace Osnova přímé a nepřímé metody antigen a protilátka precipitace, aglutinace, aglutinace na nosičích 2/45 Přímé vs. nepřímé metody přímé
VícePŘÍPRAVA MONOKLONÁLNÍCH PROTILÁTEK
PŘÍPRAVA MONOKLONÁLNÍCH PROTILÁTEK Antigenový determinant aktivuje jeden klon buněk Klon buněk: syntetizuje jeden druh imunoglobulinových molekul (stejný alotyp, idiotyp i podskupina) (třída a podtřída
VíceImunohistochemické metody
Imunohistochemické metody -stanovení Ag či Ab Reakce: Ag + Ab IK- imunokomplex - jeden z reaktantů nese značku: -radioaktivní (Ria) -fluorescenční (Fia) -enzymatickou (Eia) -a další EIA, IMUNOENZYMOVÉ
VícePříklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie. Miroslav Průcha
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie Miroslav Průcha Příklady optických technik Atomová absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie kinetická
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován
VíceIZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
VíceLuminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii
Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Kvantitativní analýza: F = k φ Φ o Vysoká citlivost metody: 2.3 c l ε použití laserů odezva na relativně malé změny v okolí
VíceAntinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA)
Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice systémových autoimunitních onemocnění ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou
VíceIzolace RNA. doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD..
Izolace RNA doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD.. Metodiky izolace RNA celková buněčná RNA ( total RNA) zahrnuje řadu typů RNA, které se mohou lišit svými fyzikálněchemickými vlastnostmi a tedy i nároky na jejich
VíceObjednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Parainfluenza viry typu 1. Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky proti virům parainfluenzy 1 (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI 2721-9601 G Parainfluenza viry typu 1 IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96
VíceBiochemická laboratoř
Biochemická laboratoř školní rok 2013/14 Ing. Jarmila Krotká 3. LF UK, Klinická biochemie, bakalářské studium Hlavní úkol biochemické laboratoře Na základě požadavku lékaře vydat co nejdříve správný výsledek
VíceVirus klíšťové encefalitidy (TBEV)
Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice klíšťové encefalitidy ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM v lidském séru, plazmě nebo
VíceMetody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin
Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Nukleové kyseliny analýza a manipulace Elektroforéza (délka fragmentů, čistota, kvantifikace) Restrikční štěpení (manipulace s DNA, identifikace
VíceEnterotoxiny Staphylococcus aureus. Jana Kotschwarová Andrea Koťová
Enterotoxiny Staphylococcus aureus Jana Kotschwarová Andrea Koťová Obsah Charakteristika Staphylococcus aureus Vlastnosti Faktory virulence Enterotoxiny Patogeneze Výskyt Metody stanovení Prevence výskytu
VíceModerní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví. René Kizek
Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví René Kizek 12.04.2013 Fluorescence je fyzikálně chemický děj, který je typem luminiscence. Luminiscence se dále dělí
VíceProtinádorová imunita. Jiří Jelínek
Protinádorová imunita Jiří Jelínek Imunitní systém vs. nádor l imunitní systém je poslední přirozený nástroj organismu jak eliminovat vlastní buňky které se vymkly kontrole l do boje proti nádorovým buňkám
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ
IMUNOLOGIE Autoimunita IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) a soupravy
VíceLABORATOŘ OBORU I. Příprava diagnostického testu na bázi lateral flow immunoassay ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111)
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) C Příprava diagnostického testu na bázi lateral flow immunoassay Vedoucí práce: Ing. Aram Zolal Ing. Lukáš Filip Umístění práce: laboratoř S58 1. Úvod
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE TOXOPLAZMÓZY
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Parazitologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE TOXOPLAZMÓZY Toxoplasma gondii ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgE, IgG a
Vícenejsou vytvářeny podle genetické přeskupováním genových segmentů Variabilita takto vytvořených což je více než skutečný počet sloučenin v přírodě
PROTILÁTKY Specifické rozpoznání v imunitním systému zprostředkují speciální proteinové molekuly jediné, které nejsou vytvářeny podle genetické matrice, ale nahodilým přeskupováním genových segmentů Variabilita
VíceMolekulárně biologické metody v mikrobiologii. Mgr. Martina Sittová Jaro 2014
Molekulárně biologické metody v mikrobiologii Mgr. Martina Sittová Jaro 2014 Harmonogram 1. den Izolace DNA 2. den Měření koncentrace DNA spektrofotometricky, real-time PCR 3. den Elektroforéza Molekulární
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKCE HELICOBACTER PYLORI
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKCE HELICOBACTER PYLORI Helicobacter pylori ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy
VíceVýzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.
Výzkumné centrum genomiky a proteomiky Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Systém pro sekvenování Systém pro čipovou analýzu Systém pro proteinovou analýzu Automatický sběrač buněk Systém pro sekvenování
VíceTypy molekul, látek a jejich vazeb v organismech
Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Organismy se skládají z molekul rozličných látek Jednotlivé látky si organismus vytváří sám z jiných látek,
VíceImunitní systém.
Imunitní systém Karel.Holada@LF1.cuni.cz Klíčová slova Imunitní systém Antigen, epitop Nespecifická, vrozená Specifická, adaptivní Buněčná a humorální Primární a sekundární lymfatické orgány Myeloidní
VíceToxoplasma gondii. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice toxoplazmózy
Toxoplasma gondii Imunoenzymatické soupravy k diagnostice toxoplazmózy ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgE, IgG a IgM v lidském séru nebo plazmě ÚVOD
VíceNovinky VIDIA v di agnost ce Lymeské borreliózy
Novinky VIDIA v diagnostice i Lymeské borreliózy Marie Šteinbachová ELISA testy VIDIA pro diagnostiku LB testy III. generace vysoce specifické rekombinantní antigeny (IgG verze obsahuje VlsE) vysoká specifita
VíceMetody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin
Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Nukleové kyseliny analýza a manipulace Elektroforéza (délka fragmentů, čistota, kvantifikace) Restrikční štěpení (manipulace s DNA, identifikace
VíceIMUNOANALÝZA BIOSENSORY V KLINICKÉ BIOCHEMIE
IMUNOANALÝZA V KLINICKÉ BIOCHEMII BIOSENSORY V KLINICKÉ BIOCHEMIE Vazba antigen protilátka cizorodé látky (toxické, léky) látky tělu vlastní infekční látky specifické protilátky Antigeny přirozený umělý
VíceZákladní pojmy. Antigen specifická povrchová struktura schopná vyvolat imunitní reakci
Sérologie Prezentace pro obor: Všeobecná sestra Jan Smíšek ÚLM. LF UK specifická povrchová struktura schopná vyvolat imunitní reakci Často proteinová, ale i polysacharidová, glykoproteinová, lipoproteinová
VícePŘÍPRAVA MONOKLONÁLNÍCH PROTILÁTEK
PŘÍPRAVA MONOKLONÁLNÍCH PROTILÁTEK Antigenový determinant aktivuje jeden klon buněk Klon buněk: syntetizuje jeden druh imunoglobulinových molekul (stejný alotyp, idiotyp i podskupina) (třída a podtřída
VíceModul IB. Histochemie. CBO Odd. histologie a embryologie. MUDr. Martin Špaček
Modul IB Histochemie CBO Odd. histologie a embryologie MUDr. Martin Špaček Histochemie Histologická metoda užívaná k průkazu různých látek přímo v tkáních a buňkách Histochemie Katalytická histochemie
VíceSeminář izolačních technologií
Seminář izolačních technologií Zpracoval: Karel Bílek a Kateřina Svobodová Podpořeno FRVŠ 2385/2007 a 1305/2009 Úpravy a aktualizace: Pavla Chalupová ÚMFGZ MZLU v Brně 1 Lokalizace jaderné DNA 2 http://www.paternityexperts.com/basicgenetics.html
Více1 Metody stanovení protilátek
1 Metody stanovení protilátek Stanovení protilátek patří bezesporu mezi základní imunologická vyšetření. Rozlišujeme stanovení kvantitativní, kvalitativní a stanovení specifických protilátek. Při kvantitativním
VíceTreponema pallidum. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice syfilis
Treponema pallidum Imunoenzymatické soupravy k diagnostice ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a v lidském séru nebo plazmě ÚVOD Syfilis (lues) je sexuálně
VíceIMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE Bordetella pertussis Bordetella parapertussis ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny
VíceFunkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit
Mgr. Martin Čonka EXBIO Praha, a.s. Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit Funkční testy napodobení biologický procesů in vitro nehrozí nebezpečí ohrožení pacienta v průběhu testování možná analýza
VíceProtilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu
Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2080-9601 G Helicobacter pylori IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96)
VíceAntigeny. Hlavní histokompatibilitní komplex a prezentace antigenu
Antigeny Hlavní histokompatibilitní komplex a prezentace antigenu Antigeny Antigeny: kompletní (imunogen) - imunogennost - specificita nekompletní (hapten) - specificita antigenní determinanty (epitopy)
VíceMetody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin
Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Proteiny analýza a manipulace Izolace, purifikace (rozdělovací metody) Centrifugace Chromatografie Elektroforéza Blotting (identifikace, western
VíceVariabilita takto vytvořených molekul se odhaduje na , což je více než skutečný počet sloučenin v přírodě GENETICKÝ ZÁKLAD TĚŽKÉHO ŘETĚZCE
PROTILÁTKY Specifické rozpoznání v imunitním systému zprostředkují speciální proteinové molekuly jediné, které nejsou vytvářeny podle genetické matrice, ale nahodilým přeskupováním genových segmentů GENETICKÝ
VíceObsah. Seznam zkratek... 15. Předmluva k 5. vydání... 21
Obsah Seznam zkratek... 15 Předmluva k 5. vydání... 21 1 Základní pojmy, funkce a složky imunitního systému... 23 1.1 Hlavní funkce imunitního systému... 23 1.2 Antigeny... 23 1.3 Druhy imunitních mechanismů...
VíceTransglutamináza Deamidovaný gliadin Gliadin Kravské mléko ASCA
Transglutamináza Deamidovaný gliadin Gliadin Kravské mléko ASCA Imunoenzymatické soupravy k diagnostice celiakie, potravinových intolerancí a nespecifických střevních zánětů (IBD) ELISA soupravy jsou určeny
VícePrincip testu. Kdy se PAT provádí (1) Kdy se PAT provádí (2) PAT kvalitativní a kvantitativní stanovení na ID-gelových kartách
PAT kvalitativní a kvantitativní stanovení na IDgelových kartách Eliška Rýznarová LABMED Systems s.r.o. Princip testu Přímým antiglobulinovým (Coombsovým) testem (PAT) prokazujeme in vivo navázané imunoglobuliny
VíceHybridizace nukleových kyselin
Hybridizace nukleových kyselin Tvorba dvouřetězcových hybridů za dvou jednořetězcových a komplementárních molekul Založena na schopnosti denaturace a renaturace DNA. Denaturace DNA oddělení komplementárních
Vícejako markeru oxidativního
Monitoring koncentrace 8-isoprostanu jako markeru oxidativního stresu v kondenzátu vydechovaného vzduchu Lukáš Chytil Ústav organické technologie Úvod Cíl: - nalezení vhodného analytické metody pro analýzu
Více