Havarijní plán pro práci s geneticky modifikovanými mikroorganismy Mikrobiologický ústav AV ČR

Transkript

1 Mikrobiologický ústav AV ČR Příloha 6 Havarijní plán 1/5 Havarijní plán pro práci s geneticky modifikovanými mikroorganismy Mikrobiologický ústav AV ČR a) Adresa pracoviště Mikrobiologický ústav AV ČR (dále MBÚ) Vídeňská 1083, Praha 4, IČO Statutární orgán: Prof. RNDr. Blanka Říhová, DrSc., ředitelka ústavu, tel.: , rihova@biomed.cas.cz, Odborný poradce pro GMO - mikroorganismy Ing. Miroslav Pátek, CSc. Bydliště: Zimova 625/3, Praha 4 Kontaktní adresa: Mikrobiologický ústav AV ČR, Vídeňská 1083, Praha 4 Telefon: , , Fax: , patek@biomed.cas.cz Osoby odpovědné za likvidaci havárie (podle č. oddělení): Č. L. Jméno Laboratoř Tel 111 Ing. Jiří Janata fyziologie a genet. mikroorganismů 2370 janata@biomed.cas.cz 112 RNDr. Sylva Pažoutová. fyziologie a genetiky vláknitých hub2352 pazouto@biomed.cas.cz 115 Ing. Miroslav Sobotka fermentačních technologií 2244 sobotka@biomed.cas.cz 116 RNDr. Pavel Kyslík enzymové technologie 2777 kyslik@biomed.cas.cz 121 RNDr. Jaroslav Weiser mikrobiální proteomiky 2378 weiser@biomed.cas.cz 122 RNDr. Ivana Malcová reprodukce buňky 2769 janatova@biomed.cas.cz 123 Ing. Miroslav Pátek molekulární genetiky bakterií 2398 patek@biomed.cas.cz 124 Ing. Alena Pichová buněčné biologie 2526 pichova@biomed.cas.cz 125 Ing. Peter Šebo molekulární biologie bakteriálních 2566 sebo@biomed.cas.cz patogenů 127 RNDr. Pavel Branny buněčné signalizace 2658 branny@biomed.cas.cz 128 Dr. Leoš Valášek genové exprese 2188 valasekl@biomed.cas.cz 141 RNDr. Ladislav biochemie dřevokazných hub 2397 homolka@biomed.cas.cz Homolka 142 prom. biol. Karel Novák experimentální mykologie 2339 novak@biomed.cas.cz 143 RNDr. Pavla Binarová biologie hub 2130 binarova@biomed.cas.cz 151 specifické imunity 152 RNDr. Milada Šírová humorální imunity sirova@biomed.cas.cz 156 přirozené buněčné imunity 158 RNDr. Karel Bezouška architektury proteinů 2383 bezouska@biomed.cas.cz b) Popis prostor, kde probíhá nakládání s GMO: Místnosti MBÚ určené pro uzavřené nakládání s GMO jsou v budovách C, L, Xa a Xb. Budova C Laboratoře: Suterén: S 07, zvěřinec (suterén B) Přízemí: 015, 016, 020, 021, patro: 112, 117, 118, 127, 129, 147, patro: 216, 221, 236, 237, 238, 241, 242, 244, 246, 248A, 249, patro: 306, 309, 312, 315, 321, 323, 326A, 327, 328, 329, 329A 331, 332, 338, 339, 340, 346, 347A, 348, 349 Chladové místnosti: 2. patro: 243, 245

2 Mikrobiologický ústav AV ČR Příloha 6 Havarijní plán 2/5 3. patro: 336A, 344 Kultivační místnosti: přízemí: 013, 014 Autokláv: přízemí: 001, 024, 3. patro 301 Budova L Laboratoře: Přízemí: 008, 014, 016, 022, patro: 112, 113, 114, 116, 117A, 118, 119A, 120, 121, patro: 205, 209, 212, 213A, 214A, 215, 216, 219, 220A, 222, 223, 224, 225 Ostatní místnosti spadají do kategorie 1. Chladová místnost 023B Pro nakládání s GMO 2. kategorie jsou určeny laboratoře L008 a L014. Budova Xa: Laboratoře: 1. patro: 205, 206, 207, 208, 210, 215, 216, 217, 218 Umývárna: přízemí: 102 Centrifugovna: 104 Budova Xb (732/OER/05, všechny místnosti jsou určeny pro nakládání s GMO 2. kat.): Laboratoře: v přízemí a prvním patře: 115 (BTH) 142, 235, 236, 237, 238, 239, 242 Plány budov a plánky všech místností a jejich bezpečnostní prvky jsou v příloze 7 Vybavení laboratoří: digestoře, laminární boxy, mrazáky, chladničky, PCR cyclery, zařízeni pro elektroforézy, třepačky, centrifugy, spektrofotometry, termostaty, inkubátor, homogenizátory. Rozvod elektrické energie: Budova C v suterénu rozvodna napájená z hlavní rozvodny v budově E Budova L nemá vlastní rozvodnu, hlavní přívod je z rozvodny v budově E do rozvaděče v přízemí Budova Xa v suterénu je rozvodna napájená z areálové rozvodny Budova Xb hlavní rozvaděč u vchodu do BTH Zásobování vodou: hlavní uzávěr vody je u hlavní vrátnice, dále na stoupačkách v každé budově Rozvod plynu: Hlavní uzávěry plynu pro jednotlivé budovy jsou umístěny na fasádě každé budovy. Hasicí přístroje: zakresleny v pláncích pater i jednotlivých laboratoří, velké pojízdné hasicí přístroje jsou v budově C v suterénu.. c) Plán pracoviště Plán pracoviště je v Příloze č. 7. Jsou v nich vyznačeny místnosti, ve kterých probíhá nakládání s GMO, umístění bezpečnostních prvků uzavření prostoru, hlavní ovladače přívodu elektřiny, plynu a vody a umístění hasicích přístrojů. d) Popis havárie, která může vzniknout v prostorách nebo místě, kde probíhá nakládání: Havárie je závažná nekontrolovaná kontaminace pracovního prostoru nebo únik GMO mimo uzavřený prostor. V takovém případě je třeba neprodleně učinit opatření k likvidaci havárie. Za havárie ve vlastním slova smyslu se nepovažují malé úniky GMO, při nichž jsou GMO spolehlivě zlikvidovány v rámci uzavřeného prostoru. V případě nakládání s GMO první kategorie rizika při úniku GMO větší nebezpečí nehrozí a uniklé GMO je možno likvidovat připravenými prostředky, jak je uvedeno dále. V prostorách MBÚ určených pro práci s GMO může vzniknout havárie hlavně rozlitím většího objemu mikrobiální kultury nebo rozbitím skleněné či jiné kultivační nádoby s kulturami GMO v místnosti určené pro práci s GMO (v uzavřeném prostoru). Zasažené místo je třeba s použitím ochranných rukavic vysušit, odpad

3 Mikrobiologický ústav AV ČR Příloha 6 Havarijní plán 3/5 zlikvidovat autoklávováním a místo ošetřit v dostatečném rozsahu dvěma typy dezinfekčních roztoků: např. Ajatinem a následně přípravkem SAVO nebo 2% roztokem chloraminu a poté ozařováním germicidní UV lampou (viz bod g). V případě havárie musí být uvědoměn odpovědný pracovník (viz seznam bod a), vedoucí pracoviště (Prof. RNDr. Blanka Říhová, DrSc.), případně odborný poradce. Havárie musí být do 24 h ohlášena na MŽP (viz bod m). e) Přehled možných následků havárie na zdraví lidí, zvířat, životní prostředí a biologickou rozmanitost, včetně způsobů zjišťování těchto následků a účinné ochrany před nimi: Práce s GMO v MBÚ se provádí s nepatogenními kmeny bakterií, kmeny nepatogenních kvasinek a s buněčnými liniemi. Vkládané geny pocházejí ve všech případech z nepatogenních organismů a nesouvisí s patogenitou, toxicitou ani jinými negativními účinky na zdraví lidí či zvířat ani na biologickou diverzitu (viz též Hodnocení rizika). Používají se též běžné selekční geny pro rezistenci k antibiotikům, avšak ani u nich nebyly prokázány škodlivé účinky na zdraví lidí, zvířat či přírodní prostředí. Riziko spojené s jejich použitím je uvedeno v Hodnocení rizika. Ve všech případech se jedná o nakládání s GMO 1. kategorie, při němž riziko škodlivých účinků na zdraví člověka a zvířat, životní prostředí a biologickou rozmanitost, které by mohly nastat jako možné následky havárie při nakládání s GMO, jsou minimální. Přesto je nezbytné preventivně dodržovat zásady práce s mikroorganismy a nakládat s jejich kulturami jako s infekčním materiálem. Při manipulacích s GMO je třeba používat sterilní uzavíratelné nádoby, pipety, očkovací kličky a k sterilizaci využívat otevřený oheň. Vědečtí pracovníci mají k dispozici nukleotidové sekvence inzertů, s nimiž pracují, přístrojové vybavení a metody k analýze bakterií, která umožňuje mapovat a eliminovat jejich rozšíření a následně tuto eliminaci zkontrolovat. Podle potřeby mohou podle pokynů odpovědného pracovníka, případně odborného poradce, přistoupit k asanaci kontaminovaného místa dle bodů d) a f). f) Validované postupy detekce přítomnosti geneticky modifikovaných organismů Zjišťování kontaminace vzduchu Metoda slouží k monitorování úniku GMO do prostoru. Provádí se rozložením otevřených agarových misek v prostoru možné havárie. Půda v agarových miskách je svým složením specifická pro testované mikroorganismy, s nimiž se pracuje a u kterých hrozí riziko úniku, s antibiotikem (ampicilin, kanamycin, spektinomycin) selektujícím GMO s plazmidem nesoucím genetickou modifikaci, případně bez antibiotik, pokud není možné některou z modifikací tímto způsobem identifikovat. Misky s půdou se otevřené položí do prostor s potenciálním rizikem úniku. Po 15 minutách se opět přikryjí a nechají inkubovat v termostatu na 37 C resp. 30 C podle mikroorganismu po dobu 1 3 dnů. V případě nárůstu kolonií se genetická modifikace vylučuje resp. dokazuje polymerasovou řetězovou reakcí (PCR) s příslušnými primery. V případě pozitivní PCR reakce následují opatření na zneškodnění detekovaného geneticky modifikovaného mikroorganismu. Zjišťování kontaminace povrchů stěrovou metodou Metoda se provádí setřením povrchu monitorovaného objektu sterilní gázou a následným rozetřením na agarové misky uvedené v metodě zjišťování kontaminace vzduchu. V případě nárůstu kolonií se pokračuje podobně jako v předešlé metodě, metodou PCR a následnými opatřeními na likvidaci havárie. Detekce GMO pomocí polymerasové řetězové reakce (PCR) Základní metodou detekce GMO je amplifikace úseku genu, ohraničeného zvolenými oligonukleotidy (primery) pomocí PCR. V případě pochybnosti se provádí sekvenování amplifikovaného úseku a porovnání se známou sekvencí genu. Vzor testu přítomnosti rekombinantní DNA s využitím PCR: Složení reakční směsi (50 µl):

4 Mikrobiologický ústav AV ČR Příloha 6 Havarijní plán 4/5 Složka Objem Extrakt testovaného vzorku 1 µl 10 konc. pufr pro Taq polymerasu 5 µl dntp (20 mm) 1 µl Oligonukleotid 1 1 µl (100 pmol) Oligonukleotid 2 1 µl (100 pmol) Taq polymerasa 1 µl voda destilovaná 40 µl Program automatického cyklátoru: Číslo cyklu Počet cyklů Teplota ( C) Čas (s) µl produktu se pak podrobí elektroforetické analýze. g) Validované metody a postupy použitelné k likvidaci GMO a k dekontaminaci prostoru Pro zneškodnění geneticky modifikovaných organismů a dekontaminaci uzavřeného prostoru není nutná izolace prostor zasažených havárií. Únik bakterií je třeba likvidovat dezinfekčními prostředky, Ajatinem a následně přípravkem SAVO, 2% roztokem chloraminu nebo kys. peroctovou. Jednotlivé drobné předměty, které byly únikem zasaženy, je nutno autoklávovat, pokud tímto postupem nedojde k jejich poškození. V takovém případě jsou použity chemické dezinfekční prostředky. V případě zjištění GMO i po této dekontaminaci je nutno dezinfekci provádět na větší ploše alternativním dezinfekčním prostředkem. Po dezinfekci prostor je vhodné přistoupit k plošnému ozařování prostoru a ploch germicidní UV lampou nejméně po dobu 1 h ze vzdálenosti nejdále 2 m. Dle potřeby je prostor ozařován UV lampou přes noc. h) Metody izolace prostor a zařízení zasažených havárií, včetně metod kontroly účinnosti izolace Do provedení kontroly přítomnosti GMO mimo prostor pro uzavřené nakládání a do provedení případné dekontaminace je okolní prostor v přiměřeném rozsahu uzavřen. V případě podezření šíření mimo určenou místnost budou uzavřena okna a vstupní dveře a provede se úplná dekontaminace celého pracoviště (chemicky a germicidní UV lampou). Kontrola izolace se provádí metodami detekce GMO popsanými v bodě f), v případě zjištění GMO jsou likvidovány postupy dle bodu g). i) Popis a nákres uložení asanačních prostředků použitelných k likvidaci geneticky modifikovaných organismů a dekontaminaci zasaženého prostoru. Asanační prostředky: Ajatin, SAVO 2%, chloramin, kys. peroctová a germicidní UV lampa jsou umístěny na viditelných, označených místech v prostorách určených pro práci s GMO. j) Postupy na ochranu zdraví lidí, zvířat, životního prostředí a biologické rozmanitosti Vzhledem k tomu, že z hodnocení rizika nevyplývá nebezpečí okamžitého ani dlouhodobého škodlivého účinku uniklých GMO na zdraví lidí, zvířat, na životního prostředí a biologickou

5 Mikrobiologický ústav AV ČR Příloha 6 Havarijní plán 5/5 rozmanitost, nejsou nutná žádná zvláštní opatření na ochranu zdraví v případě havárie, mimo ochrany souvisejí s vlastní podstatou havárie (např. požár), nebo s postupy dekontaminace (ochrana před dráždivými účinky při expozici aktivnímu chlóru ze SAVO, ochrana před účinky germicidního UV záření. Součástí ochrany před účinky GMO je důsledná inaktivace kultur, dekontaminace zasažených prostor a její kontrola. k) Popis postupu zajištění následného monitoringu prostor po ukončení asanace Kontrola přítomnosti geneticky modifikovaných organismů v prostoru, na plochách a zařízení se provádí postupy detekce popsanými v bodě f). l) Obce, případně osoby, kterým je havarijní plán předkládán podle 20 odst. 3 zákona Havarijní plán bude zaslán na magistrát hl. m. Prahy, odbor krizového řízení, František Janich, Frantisek.Janich@cityofprague.cz, telefon: , a dále na Hasičský záchranný sbor hl.m. Prahy, odbor ochrany obyvatelstva a plánování, Sokolská 62, Praha 2. m) Způsob vyrozumění správních orgánů uvedených v 27 zákona v případě havárie V případě havárie budou informováni pracovníci odboru environmentálních rizik Ministerstva životního prostředí: 1) telefonicky: Ing. Zuzana Doubková (vedoucí Oddělení - sekretariátu České komise pro nakládání s GMO a produkty), tel , fax ) elektronickou poštou: Zuzana_Doubkova@env.cz (vedoucí Oddělení - sekretariátu České komise pro nakládání s GMO a produkty), Monika_Cerna@env.cz, Vaclav_Routa@env.cz 3) písemně poštou: MŽP, Odd.- sekretariát České komise pro nakládání s GMO a produkty, Vršovická 65, Praha 10 Vzhledem k povaze a vlastnostem GMO a rozsahu nakládání s nimi na pracovišti MBÚ se varování občanů nepovažuje za účelné. Havarijní plán vypracovali: Ing. Václav Kobliha (vedoucí technicko-hospodářské správy MBÚ) a Ing. Miroslav Pátek, CSc. n) Vyjádření odborného poradce: Havarijní plán odpovídá požadavkům zákona 78/2004 Sb. ve znění zákona č. 346/2005 Sb. a vyhlášce 209/2004 Sb. Datum: Podpis: Ing. Miroslav Pátek, CSc. odborný poradce pro GMO