METODIKA HODNOCENÍ REZISTENCE MERUNĚK K VIRU ŠARKY ŠVESTKY (PLUM POX VIRUS)
|
|
- Julie Matoušková
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 METODIKA HODNOCENÍ REZISTENCE MERUNĚK K VIRU ŠARKY ŠVESTKY (PLUM POX VIRUS) UPLATNĚNÁ METODIKA Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2008
2 Strana 2 z 22 Autoři: Doc. Ing. Jaroslav Polák, DrSc. Dr. Ing. Jaroslav Salava Název: Metodika hodnocení rezistence meruněk k viru šarky švestky (Plum pox virus) Vydal: Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. Drnovská 507, Praha 6 Vydáno v elektronické podobě. Vyšlo v roce: 2008 Vydáno bez jazykové úpravy. Kontakt na autora: Odborný oponent: Oponent ze státní zprávy: polak@vurv.cz Ing. Ivan Oukropec, Zahradnická fakulta Lednice, MZLU Brno, 69142, Lednice Ing. Ivan Branžovský, CSc., Ministerstvo zemědělství, Těšnov 17, , Praha 1 Autoři fotografii: Jaroslav Polák, Jaroslav Salava a Tomáš Nečas Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. ISBN: Fotografie na obálce: List, plod a pecka meruňky s příznaky šarky Detail plodů meruňky na větvích hybridu rezistentního k PPV Tato metodika vznikla za finanční podpory Ministerstva zemědělství České republiky a je výstupem řešení projektu MZE
3 Strana 3 z 22 Obsah 1. Cíl metodiky Vlastní popis metodiky Umělá infekce hodnoceného rostlinného materiálu Hodnocení příznaků na listech a plodech Detekce PPV pomocí ELISA Detekce PPV pomocí IC-RT-PCR Biologický test na indikátorové rostlině Prunus tomentosa Závěrečné stanovení stupně rezistence Srovnání novosti postupů Popis uplatnění metodiky Seznam použité související literatury Seznam publikací, které předcházely metodice... 21
4 Strana 4 z Cíl metodiky Cílem metodiky je vyhodnotit rezistenci odrůd, klonů, novošlechtění a hybridů meruňky k viru šarky švestky, Plum pox virus (PPV). Metodický postup zahrnuje přípravu hodnocených rostlin, jejich umělou infekci konkrétním kmenem PPV, hodnocení symptomů infekce, objektivní stanovení přítomnosti viru pomocí DAS-ELISA, stanovení relativní koncentrace virového proteinu v listech infikovaných rostlin semikvantitativní metodou ELISA (stanovení titru virového proteinu v listech), potvrzení přítomnosti viru v rostlinách pomocí IC-RT-PCR, případně pomocí biologického indikátoru při ověřování, zda se jedná o vysoký stupeň rezistence nebo o imunitu, a konečné vyhodnocení stupně rezistence hodnocených rostlin meruňky k viru.
5 Strana 5 z Vlastní popis metodiky Hodnocení rezistence rostlin meruňky k PPV je metodicky a časově náročný proces, který kombinuje objektivní imunochemické a molekulárně biologické postupy stanovení přítomnosti a koncentrace viru se subjektivním hodnocení intenzity a rozsahu příznaků na listech a plodech. S ohledem na vliv ročníkových faktorů a na různé mechanizmy rezistence je nutné nejméně tříleté hodnocení uměle infikovaného rostlinného materiálu Umělá infekce hodnoceného rostlinného materiálu Při hodnocení rezistence používáme odrůdy a klony meruňky z udržovacího šlechtění nebo novošlechtění a hybridy meruňky. Pro hodnocení rezistence meruněk k PPV provedeme umělou infekci rostlin meruňky očkováním, nebo roubováním testovaných rostlin na podnož infikovanou silně patogenním kmenem, nejlépe originálním kmenem PPV-M. Pro hodnocení rezistence je třeba použít silně patogenní kmen viru, při použití slabě patogenního kmenu může dojít v přírodních podmínkách k překonání rezistence silněji patogenním kmenem viru a výsledky hodnocení tak ztrácí spolehlivost. Očkováním, nebo roubováním na virem infikovanou náchylnou podnož nebo odrůdu docílíme stálý a rovnoměrný infekční tlak viru na hodnocenou rostlinu. Podle druhu testovaného materiálu volíme infikovanou podnož, přičemž nejvhodnější je stejný druh, tzn. meruňka. Hodnotíme-li jednotlivé rostliny potomstva křížení meruněk, použijeme jednoleté rostliny podnože meruňky MVA-2, která je k PPV náchylná a na infekci PPV reaguje zřetelnými difúzními skvrnami na listech (Obrázek č. 1). Roční rostliny podnože MVA-2 infikujeme kmenem PPV-M metodou chip-budding (Obrázek č. 2) použitím virem infikovaných oček infekčního zdroje náchylné odrůdy meruňky vykazující silné příznaky šarky. Během dalšího vegetačního období ověříme přítomnost viru v rostlinách hodnocením příznaků na listech a sérologicky pomocí ELISA. Na šarkou infikované rostliny meruňky MVA-2 naočkujeme jednotlivé rostliny z hybridního potomstva meruněk ve třech opakováních, tzn. že od každého jedince máme tři rostliny. Rostliny hodnotíme po tři vegetační cykly. Pro hodnocení rezistence odrůd, klonů a hybridů meruněk použijeme jejich roubování ve třech až pěti opakováních na dvou až tříleté stromy odrůdy meruňky náchylné k PPV (Karola, Vegama), uměle infikované virem. Během čtyř vegetačních cyklů pak spolehlivě vyhodnotíme nejen příznaky na listech (4 vegetační cykly hodnocení), ale i příznaky na plodech a peckách (2 vegetační cykly) (viz Polák et al., 1997).
6 Strana 6 z 22 Obrázek č. 1: Difúzní skvrny způsobené PPV na listech stromu meruňky Obrázek č. 2: Chip-budding (Forkertovo očkování) (zleva seřezávání oček, detaily seříznutého očka, naříznutá podnož a zavázané očko) 2.2. Hodnocení příznaků na listech a plodech Rostliny meruňky naočkované na podnoži MVA-2 infikované PPV, nebo naroubované na infikované k PPV náchylné odrůdě meruňky pěstujeme a hodnotíme v technickém izolátu (Obrázek č. 3). Hodnocení příznaků na listech provádíme dvakrát během vegetačního období. Poprvé hodnotíme příznaky viru na listech v době, kdy se na náchylné podnoži nebo odrůdě objeví zřetelné příznaky šarky, podruhé za čtyři týdny po prvním hodnocení. Hodnocení příznaků na listech provádíme minimálně po tři vegetační období, nebo cykly. V případě hodnocení rezistence odrůd, klonů nebo hybridů provádíme také hodnocení příznaků PPV na plodech v době začínajícího zrání plodů. Hodnocení příznaků na plodech provádíme po dvě vegetační období.
7 Strana 7 z 22 Obrázek č. 3: Hodnocení rezistence hybridů meruněk v technické izolaci Hodnocení intenzity a typu příznaků. Pro hodnocení příznaků šarky na listech a plodech meruňky používáme pětibodovou stupnici. Stupnice hodnocení příznaků šarky na listech: 0 = žádné příznaky 1 = velmi slabé difúzní skvrny, nebo kroužky na několika málo listech (1 5) (Obrázek č. 4) 2 = slabé difúzní skvrny a kroužky na několika listech (6 15) (Obrázek č. 5) 3 = středně silné difúzní skvrny a kroužky na větším počtu (cca 50%) listů (Obrázek č. 6) 4 = velmi silné difúzní skvrny a kroužky na většině listů, deformace listů (Obrázek č. 7) Stupnice hodnocení příznaků šarky na plodech: 0 = žádné příznaky 1 = velmi slabé difúzní skvrny na malém počtu plodů (do 15%), 1 2 na jednom plodu (Obrázek č. 8) 2 = slabé difúzní skvrny nebo kroužky na menším počtu plodů (15 30%) (Obrázek č. 9) 3 = středně silné difúzní skvrny a kroužky na větším počtu plodů (25 50%) (Obrázek č. 10) 4 = silné difúzní skvrny a kroužky na většině, nebo všech plodech, malformace plodů. Malformace plodů a příznaky šarky na všech, nebo většině plodů jsou rozhodujícím kritériem pro zařazení do stupně hodnocení 4. Intenzita difuzních skvrn a kroužků může být přitom nižší než v případech, kdy se malformace plodů nevyskytují. (Obrázek č. 11) Je možno použít i mezistupně hodnocení (0-1, 1-2, 2-3, 3-4), v tom případě získáme devítibodovou stupnici.
8 Strana 8 z 22 Obrázek č. 4: Listy meruňky se slabým zesílením žilek nebo velmi slabými difúzními skvrnami a kroužky Obrázek č. 5: Listy meruňky se slabými difúzními skvrnami a kroužky
9 Strana 9 z 22 Obrázek č. 6: Listy meruňky se středně silnými difúzními skvrnami a kroužky Obrázek č. 7: Listy meruňky s velmi silnými difúzními skvrnami a kroužky, deformace listů
10 Strana 10 z 22 Obrázek č. 8: Plody meruňky s velmi slabými difúzními skvrnami Obrázek č. 9: Plody meruňky se slabými difúzními skvrnami a kroužky
11 Strana 11 z 22 Obrázek č. 10: Plody meruňky, odrůdy náchylné k PPV, silné difúzní skvrny a kroužky. Obrázek č. 11: Plody meruňky, hybridu silně náchylného k PPV, malformace a difúzní skvrny.
12 Strana 12 z Detekce PPV pomocí ELISA Přítomnost viru v hodnocených rostlinách a stromech meruňky ověřujeme objektivní diagnostickou metodou pomocí ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Pro sérologické testování odebíráme listy s příznaky šarky, listy bez příznaků odebíráme jen v případě, že na testované odrůdě, stromu, resp. výhonu žádné příznaky nejsou. V tom případě odebíráme starší listy ze středu výhonů. Průměrný vzorek připravíme ze šesti listů odebraných na různých místech testovaného jedince. 0,2 g listového pletiva homogenizujeme v poměru 1:20, resp. ve 4 ml v extrakčního pufru PBS (fysiologický roztok pufrovaný fosfátem), ph 7,2 s přísadami 0,05% Tween 20, 2% PVP (polyvinylpyrrolidon) a 0,2% vaječného albuminu v polyetylenových sáčcích s použitím ručního nebo elektrického homogenizátoru. Pro stanovení PPV pomocí DAS-ELISA (Adams, 1978) použijeme komerční ELISA kit (např. fy Bioreba nebo Loewe). IgG a IgG konjugovaných s alkalickou fosfatázou ředíme podle návodu výrobce. Do jedné jamky ELISA desky pipetujeme 0,2 ml homogenizovaného vzorku. Pro testování jednoho vzorku použijeme dvě jamky mikrotitrační destičky. Hodnoty absorbance měříme na fotometru pro ELISA při 405 nm. Hodnocení relativní koncentrace viru pomocí semikvantitativní ELISA (stanovení titru viru v listech) Při stanovení relativní koncentrace viru v listech hodnocené odrůdy, klonu, novošlechtění a hybridu meruňky pomocí ELISA připravíme vzorek stejným postupem jako pro stanovení viru. Získaný vzorek, homogenát listů v extrakčním pufru s přísadami, ředíme aritmetickou řadou (1:2, 1:4, 1:8, 1:16 atd.) čistým extrakčním pufrem bez přísad. V takto získané řadě zředění vzorku provedeme ELISA test a zjistíme hodnoty absorbance. Relativní koncentraci viru šarky švestky, titr viru ve vzorku, zjistíme jako ředění vzorku s hodnotou absorbance 0,04. Hodnota absorbance negativní kontroly (vzorku ze zdravé rostliny) by měla být 0,01 nebo nižší. Relativní koncentrace viru je převrácenou hodnotou konečného zředění vzorku s hodnotou absorbance 0, Detekce PPV pomocí IC-RT-PCR Odběr vzorků Správný odběr vzorků je kritický pro molekulární detekci viru šarky švestky. Jestliže jsou přítomny listy s typickými příznaky, tak by měly být odebrány. U rostlin bez příznaků standardní vzorek odebereme ze šesti výhonů, po jednom listu odebraném ze střední části každého výhonu. Vzorky odebíráme během měsíce června, později klesá obsah viru v listech. Rostlinný materiál přednostně vybíráme z vnitřní části koruny stromů. Vzorky listů mohou být před zpracováním skladovány ve 4 o C ne však po dobu delší než 7 dní. Příprava vzorků pro testování Navážíme 1 g rostlinného materiálu jako průměrný vzorek ze šesti listů, nařežeme ho na malé kousky a vložíme do vhodných plastikových sáčků. Přidáme 20 objemů extrakčního pufru (Cambra et al., 1994) a vzorek rozdrtíme pomocí ručního homogenizátoru Homex 6 (Bioreba) nebo malým ručním válečkem. Extrakční pufr se skládá z fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem (phosphate-buffered saline, ph 7,2 - PBS) (viz. Používané pufry), doplněného 2% polyvinylpyrrolidonem (PVP-10) a 0,2 % sodium diethyl dithiokarbamátem (DIECA). Vzorky pro molekulární testy připravujeme v plastikových sáčcích individuálně.
13 Strana 13 z 22 Imunopoutání (immunocapture, IC) (Wetzel et al., 1992) Připravíme ředění (1 µg/ml) polyklonálních nebo monoklonálních protilátek (Loewe nebo Bioreba) specifických pro PPV v karbonátovém pufru s ph 9,6 (viz. Používané pufry). Naředěné protilátky rozdělíme po 100 µl do Eppendorfových zkumavek. Inkubujeme 3 hodiny při 37 o C. Zkumavky vypláchneme dvakrát 150 µl sterilního promývacího pufru (viz. Používané pufry). Odstředěním (5 min při ot. min -1 ) vyčistíme 100 µl dříve získaného rostlinného extraktu (viz. Příprava vzorků pro testování). Supernatant použijeme k imunopoutání v potažených Eppendorfových zkumavkách (2 hod při 37 o C) (Wetzel et al., 1992). Na závěr vypláchneme třikrát Eppendorfovy zkumavky jako v předchozím kroku. Amplifikace pomocí RT-PCR (Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction) Detekce PPV s primery P1 a P2 podle Wetzel et al. (1991): Sekvence primerů: P1: 5-3 ACC GAG ACC ACT ACA CTC CC P2: 5-3 CAG ACT ACA GCC TCG CCA GA Součástí reakční směsi (µl) jsou: H 2 O 15,55; 10x Taq Polymerase Buffer 2,5; 25 mm MgCl 2 1,5 (1,5 mm); 4% Triton X (0,3%), 25 µm P1 (1 µm); 25 µm P2 (1 µm); 10 U µl -1 AMV 0,1; 5 U µl -1 Taq Polymerase 0,1; do celkového objemu 25 µl. Přidáme 25 µl reakční směsi do vypláchnutých zkumavek. Podmínky pro RT-PCR: 42 o C 45 min; 92 o C 2 min; 40 cyklů (92 o C 30 vteřin, 60 o C 30 vteřin, 72 o C 1 min); 72 o C 10 min; 4 o C až do vyjmutí vzorků z teplotního cykleru. Elektroforéza produktů PCR Připravíme 2% agarózový gel v 0,5x TAE pufru (viz. Používané pufry). Na parafilmu vytvoříme kapky nanášecího pufru (viz. Používané pufry) o objemu přibližně 3 µl, přidáme 20 µl produktů PCR, před nanášením pomalu promícháme pipetou. Produkty včetně pozitivní a negativní kontroly naneseme do jamek v gelu. Do první jamky na gelu zařadíme DNA 100 bp marker. Elektroforézu provádíme 20 minut při 120 V (střední vanička na gel: 15x10 cm) nebo 40 minut při 160 V (velká vanička: 15x25 cm) v 0,5x TAE pufru. Pak gel ponoříme na 20 minut do roztoku ethidium bromidu (0,5 µg ml -1 ). Amplifikované DNA produkty zviditelníme na UV transiluminátoru, kde pozorujeme specifický amplikon dlouhý 243 bp (Obrázek č. 12).
14 Strana 14 z 22 M bp Obrázek č. 12: Ukázka výsledků detekce PPV pomocí IC-RT-PCR s primery P1 a P2. Dráhy: 1-pozitivní kontrola, 2-negativní kontrola 1 (RNA hostitelské rostliny) a M-velikostní standard GeneRuler TM 100bp DNA Ladder (Fermentas Life Sciences, Litva) Purifikace virové DNA pomocí RNeasy Plant Mini Kit (kat. č , Qiagen GmbH, Hilden, SRN) Jako vzorek použijeme 200 µl rostlinného extraktu (viz. Příprava vzorků pro testování). Vzorek intenzivně promícháme s 350 µl pufru RLT. Lyzát přímo pipetujeme do centrifugační kolonky QIA shredder (fialová) umístěné v 2 ml jímací zkumavce a centrifugujeme 2 minuty při maximálních otáčkách. Supernatant, který protekl kolonkou, opatrně přeneseme do nové mikrozkumavky bez porušení sedimentu tvořeného zbytky buněk v jímací zkumavce. V následných krocích používáme pouze tento supernatant. K vyčištěnému lyzátu přidáme 0,5 objemu 96% ethanolu a hned promícháme pipetou. Necentrifugujeme! Bez prodlení pokračujeme následujícím krokem. Vzorek včetně sraženin, které se mohou tvořit, přeneseme do RNeasy mini kolonky (růžová) umístěné ve 2 ml jímací zkumavce. Pomalu zavřeme zkumavku a centrifugujeme 15 vteřin při g. Vylijeme obsah jímací zkumavky a zkumavku vyhodíme. Kolonku RNeasy přeneseme do nové 2 ml jímací zkumavky. Do kolonky RNeasy pipetujeme 500 µl pufru RPE. Pomalu zavřeme zkumavku a odstřeďujeme 15 vteřin při >8 000 g, aby se kolonka promyla. Vylijeme obsah jímací zkumavky. Přidáme dalších 500 µl pufru RPE do kolonky RNeasy. Pomalu zavřeme zkumavku a centrifugujeme 2 minuty při >8 000 g, aby se vysušila silikagelová membrána RNeasy. Okamžitě pokračujeme následujícím krokem, aby se vyloučila jakákoliv možnost vzájemné kontaminace pufrem RPE. Kolonku RNeasy umístíme do nové 2 ml jímací zkumavky a vyhodíme starou jímací zkumavku i s jejím obsahem. Centrifugujeme při maximálních otáčkách 1 minutu. K vymytí přeneseme kolonku RNeasy do nové 1,5 ml zkumavky. Na silikagelovou membránu kolonky
15 Strana 15 z 22 RNeasy pipetujeme 50 µl vody RNeasy-free. Pomalu uzavřeme zkumavku a centrifugujeme 1 min při >8 000 g, aby došlo k vymytí RNA. Používané pufry: Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS) ph 7,2: NaCl 8g, KCl 0,2g, Na 2 HPO 4 x12 H 2 O 2,9g, destilovaná voda 1l. Karbonátový pufr ph 9,6: Na 2 CO 3 1,59 g, NaHCO 3 2,93 g, destilovaná voda 1l. Promývací pufr (PBS, ph 7,2-7,4 s 0,05% Tween 20): NaCl 8g, KCl 0,2g, Na 2 HPO 4 x12 H 2 O 2,9g, Tween µl, destilovaná voda 1l. 50x TAE pufr: Tris 242 g, 0,5 M Na 2 EDTA ph 8,0 100 ml, ledová kyselina octová 57,1 ml, destilovaná voda do 1l. Nanášecí pufr: 0,10% bromfenolová modř, 0,1% xylen cyanol FF, 0,2% oranž G, 62,5 µm EDTA (ph 8,0), 20% Ficoll 400, sterilní destilovaná voda do 10 ml Biologický test na indikátorové rostlině Prunus tomentosa Rostliny, které jsou po třetím růstovém cyklu bez příznaků šarky a výsledky testování pomocí DAS-ELISA a RT-PCR jsou negativní (slabé příznaky, nízká relativní koncentrace viru a pozitivní reakce RT-PCR však mohly být zjištěny v prvním, případně druhém růstovém cyklu) testujeme pomocí biologického indikátoru Prunus tomentosa. Očka ze zdravé rostliny P. tomentosa očkujeme na výhon testované meruňky metodou chip-budding. Jedno očko umístíme na bazální část testovaného stromu blízko infikované podnože, zatímco druhé očko na horní část výhonu. Tento způsob testu dovoluje zjistit migraci PPV na krátkou vzdálenost (z buňky do buňky) nebo na dlouhou vzdálenost (cévami). Na listech výhonů P. tomentosa rostoucích z oček zjišťujeme příznaky šarky. Pokud se žádné příznaky neobjeví ani další vegetační období, je hodnocený genotyp meruňky k PPV imunní. Pokud se na P. tomentosa objeví příznaky šarky, je hodnocený genotyp k šarce rezistentní, virus v rostlině migruje na krátkou nebo delší vzdálenost Závěrečné stanovení stupně rezistence Závěrečné stanovení stupně rezistence analyzovaných rostlin dané odrůdy, klonu, novošlechtění nebo hybridu meruňky je syntézou hodnocení příznaků PPV na listech, případně na plodech, semikvantitativního hodnocení relativní koncentrace viru v listech pomocí metody ELISA, hodnocení přítomnosti viru pomocí RT-PCR a biologického indikátoru ve čtvrtém růstovém cyklu v případě rozhodovaní, zda se jedná o vysoký stupeň rezistence nebo o imunitu. Hodnocené genotypy meruňky zařazujeme do skupin: 4 velmi náchylný 3 náchylný 2 středně rezistentní 1 rezistentní (se zeslabovacím mechanismem přítomnosti viru a příznaků silencing ) 0 imunní (absence viru v hodnocené rostlině, odrůdě)
16 Strana 16 z 22 Orientační tabulka závěrečného stanovení rezistence meruněk k PPV: Příznaky PPV Relativní koncentrace RT-PCR P. tomentosa Výsledek hodnocení na listech na plodech (titr ELISA) imunní 0 až 1 0 až 1 0 až rezistentní nt středně rezistentní nt náchylná nt velmi náchylná Vysvětlivky: nt = není testováno Poznámky: Vzhledem k tomu, že jsou hodnoceny tři vegetační cykly, nemusí být v jednotlivých letech dosaženy shodné výsledky hodnocení příznaků a relativní koncentrace viru. Pokud je v jedné ze třech kategorií - příznaky na listech, příznaky na plodech a relativní koncentrace viru v listech - dosaženo hodnocení odlišné o jeden stupeň, např. příznaky na listech, plodech i koncentrace viru odpovídají stupni středně rezistentní, avšak v jednom vegetačním cyklu hodnocení příznaků na listech nebo relativní koncentrace viru odpovídaly kategorii náchylná, nebude tato odlišnost brána v úvahu. Bude-li však horší hodnocení dosaženo ve dvou kategoriích, např. silnější příznaky na plodech a vyšší koncentrace viru v listech, byť v jediném roce, přičemž příznaky na listech budou ve všech třech hodnoceních odpovídat kategorii středně rezistentní, bude hodnocená odrůda zařazena jako náchylná k PPV.
17 Strana 17 z Srovnání novosti postupů Virus šarky švestky způsobuje hospodářsky nejvýznamnější virovou chorobu meruněk. Krátkodobá ochranná opatření proti viru šarky zahrnují odstranění nemocných stromů a pěstování certifikovaného materiálu. Chemická ochrana vůči hmyzím přenašečům je z důvodu neperzistentního přenosu PPV neúčinná. Proto je jediným účinným řešením šlechtění a pěstování nových rezistentních odrůd. Studium rezistence meruněk k viru šarky švestky započalo v Řecku, kde byly zjištěny dvě odrůdy meruňky, Mari de Cenad a Stella rezistentní k šarce (Syrgianidis, 1979). Karayiannis (1988) a Karayiannis a Mainou (1993) objevili další odrůdy meruňky amerického původu rezistentní k šarce. Hodnocení úrovně rezistence k PPV bylo prováděno pozorováním příznaků na listech a plodech přirozeně infikovaných stromů. Dosba et al. (1992) testovali ve Francii řadu kultivarů a hybridů meruňky na rezistenci k PPV. Stromy inokulovali virem šarky švestky buď očkováním pomocí metody chip-budding, nebo přenosem viru mšicemi, standardní postup hodnocení nebyl publikován. Virologický program hodnocení rezistence meruněk k viru šarky švestky začal v České republice v roce 1991 (Polák et al., 1995a). Čtyřleté výsledky hodnocení odrůd a hybridů meruněk na rezistenci k PPV byly publikovány (Polák et al., 1997). Podrobný postup hodnocení rezistence, na základě kterého by bylo možno odrůdy a hybridy meruňky hodnotit, nebyl zveřejněn. Hodnocení rezistence meruněk k PPV probíhá i v zahraničí, např. ve Francii (Guillet- Bellanger a Audergon, 2001), ve Španělsku (Moustafa et al., 2001), v Itálii (Bazzoni et al., 2008). Metody hodnocení rezistence jsou zdokonalovány, výsledky dosažené na jednotlivých pracovištích a v jednotlivých státech jsou srovnávány. Odrůdy v současné době pěstované i nové odrůdy introdukované ze zahraničí včetně novošlechtění je třeba charakterizovat z hlediska náchylnosti, nebo rezistence k viru šarky švestky. Dosud však nebyl v České republice ani v zahraničí vypracován a publikován žádný původní metodický postup hodnocení rezistence meruněk k viru šarky švestky, podle které by bylo možno na různých pracovištích rezistenci jednotně hodnotit a dosažené výsledky srovnávat. Proto jsme vypracovali původní standardní postup hodnocení rezistence. V rámci řešení výzkumného záměru MZE odboru rostlinolékařství, jehož součástí je výzkum problematiky rezistence meruňky k PPV předkládáme nový postup, metodiku hodnocení rezistence meruněk k viru šarky švestky.
18 Strana 18 z Popis uplatnění metodiky Metodika hodnocení rezistence meruněk k viru šarky švestky je určena pro Ministerstvo zemědělství ČR, Státní rostlinolékařskou správu, šlechtitele a školkaře jako konkrétní metodický postup pro charakterizaci českých i zahraničních odrůd a klonů meruňky, pro charakterizaci nových novošlechtění a hybridů, pro výběr zdrojů rezistence pro šlechtění odolných odrůd. Vypracovaný metodický postup hodnocení rezistence bude rovněž uplatněn ve výzkumu dědičnosti rezistence meruněk k PPV a vývoji DNA markerů rezistence meruněk k PPV.
19 Strana 19 z Seznam použité související literatury Adams A.N., 1978: The detection of plum pox virus in Prunus species by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Ann. Appl. Biol. 90: Albrechtová L., Karešová R., Pluhař Z., Balcarová, E., 1986: ELISA method used for the evaluation of the resistance of plum cultivars to plum pox virus. Sbor. Ref. X. Čs. Konf. Ochr. Rostl., Brno: Audergon J.M., Morvan G., Dicenta I., Chastelliére G., Karayiannis I., 1995: A method to determine the susceptibility of apricot cultivars to plum pox virus. Acta Horticult. 384: Bazzoni A., Didonna A., Savino V., Palmisano F., 2008: Preliminary results of trials evaluating the behaviour to Plum pox virus of different apricot crosses. Acta Horticult.781: Cambra M., Asensio M., Gorris M.T., Pérez E., Camarasa E., García J.A., Moya J.J. López- Abella D., Vela C., Sanz A., 1994: Detection of plum pox potyvirus using monoclonal antibodies to structural and non-structural proteins. Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 24: Dosba F., Orliac S., Duttranoy F., Maison P., Massonié G., Audergon J.M., 1992: Evaluation of resistance to plum pox virus in apricot trees. Acta Horticult. 309: Guillet-Bellanguer I., Audergon J.M., 2001: Inheritance of the Stark Early Orange apricot cultivar resistance to Plum pox virus. Acta Horticult. 550: Karayiannis I., 1988: Susceptibility of apricot cultivars to Plum pox virus in Greece. Acta Horticult. 235: Karayiannis I., Mainou A., 1993: Plum pox resistance in apricots. Conference on Plum Pox. EPPO, Bordeaux, , 64-65: abstr.. Komínek P., Bittóová M., Polák J., 1996: To the differentiation of Plum pox virus strains isolated in the Czech Republic. Middle European Meeting 96 on Plum Pox, Budapest, 2 4 October 1996: 43, abstr.. Moustafa T.A., Badenes M.L., Martínez-Calvo J., Llácer G., 2001: Studies on Plum pox (sharka) resistance in apricot. Acta Horticult. 550: Polák J., Oukropec I., Chod J., Krška B., Jansta Z., Pívalová J., 1995a: Virological programme in breeding of apricots for resistance to plum pox virus in the Czech Republic. Acta Horticult. 384: Polák J., Komínek P., Jokeš M., Oukropec I., Krška B., 1995b: The evaluation of resistance of apricots to plum pox virus by ELISA and ISEM. Acta Horticult. 386: Syrgianidis G., 1979: Research on the sensitivity of apricot varieties to Sharka (Plum Pox) virus disease. Agric. Res. III:
20 Strana 20 z 22 Wetzel T., Candresse T., Ravelonandro M., Dunez J.,1991: A polymerase chain reaction assay adapted to plum pox virus detection. Journal of Virological Methods 33: Wetzel T., Candresse T., Macquaire G., Ravelonandro M., Dunez J. 1992: A highly sensitive immunocapture polymerase chain reaction method for plum pox virus detection. Journal of Virological Methods 39:
21 Strana 21 z Seznam publikací, které předcházely metodice Lalli D.A., Abbott A.G., Zhebentyayeva T.N., Badenes M.L., Damsteegt V., Polák J.; Krška B., Salava, J. 2008: A genetic linkage map for an apricot (Prunus armeniaca L.) BC 1 population mapping plum pox virus resistance. Tree Genetics and Genomes 4: Polák J., Oukropec I., Komínek P., Krška B., Bittóová M., 1997: Detection and evaluation of resistance of apricots and peaches to plum pox virus. J. Plant Dis. Protect. 104: Polák J., Komínek P., Salava J., Krška B., Sasková H., 2002: Preliminary studies on the inheritance of resistance to Plum pox virus (PPV) in aprocots. Plant s Health 6: Polák, J.; Krška, B.; Pívalová, J.; Svoboda, J., 2005: Apricot cultivars Harlayne and Betinka were proved to be highly resistant to the six different strains and isolates of Plum pox virus (PPV). Phytopathologia polonica 36: Polák J., Komínek P., Krška B., Pívalová J., 2008: Durable resistance of apricot cultivars Harlayne and Betinka to six different strains of Plum pox virus. J. Plant Pathol. 90 (1, Supplement): Salava J., Wang Y., Krška B., Polák J., Komínek P., Miller W. R., Dowler L. W., Reighard L. G., Abbott G. A. 2002:, Identification of molecular markers linked to resistance of apricot (Prunus armeniaca L.) to Plum pox virus. Journal of Plant Diseases and Protection 109: Salava J., Abernathy D., Krška B., Polák J., Abbott A., 2004: Mapping of resistance genes to Plum pox virus. In: Proceedings of International Symposium Advances in Molecular Biology: Methods for Genotype Identification, Plant Breeding and Product Control, Prague, November 3, 2004: Salava, J.; Polák, J.; Krška, B., 2005a: Oligogenic inheritance of resistance to Plum Pox Virus in apricots. Czech Journal of Genetics and Plant Breeding 41 (4): Salava, J.; Abernathy, D.; Polák, J.; Krška, B., Abbott, 2005b: A.G. Identifikace DNA markerů rezistence meruněk k viru šarky švestky a jejich využití ve šlechtění. In: Seminář "Nové metody ve studiu a šlechtění ovocných dřevin", Lednice, , s Salava J., Polák J., Krška B., Lalli D.A., and Abbott A.G., 2007: Construction of a genetic map for apricot with molecular markers and identification of markers associated with Plum pox virus resistance. Acta Horticulturae 738: Salava J., Polák J., Krška B., 2008a: Preliminary results on inheritance of resistance to Plum pox virus in apricot cv. Harlayne. J. Plant Pathol. 90 (1, Supplement): S Salava J., Polák J., Krška B., 2008b: Two-gene resistance to Plum pox virus in apricot. Acta Horticult., 781:
22 Strana 22 z 22
Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. Jaroslav Salava & Jaroslav Polák CERTIFIKOVANÁ METODIKA
Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i METODIKA FENOTYPIZACE REZISTENCE BROSKVONÍ K VIRU ŠARKY ŠVESTKY Jaroslav Salava & Jaroslav Polák CERTIFIKOVANÁ METODIKA 2014 Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
Víceing. Petr Komínek, Ph.D. Metodika diagnostiky virů rodu Vitivirus v rostlinách révy vinné v ČR METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY
ing. Petr Komínek, Ph.D. Metodika diagnostiky virů rodu Vitivirus v rostlinách révy vinné v ČR METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2011 Metodika pro útvary státní
VíceANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 O B S A H 1. Aplikace testovaných látek na buněčné kultury 2. Oxidační poškození DNA
VíceZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení
ZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA PROJEKTU DOTAČNÍHO TITULU 3.d. za dobu řešení 2008-2013 1. TITULNÍ LIST Podpora tvorby rostlinných genotypů s vysokou rezistencí k biotickým i abiotickým faktorům a diferencovanou kvalitou
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální choroby
VíceMagPurix Blood DNA Extraction Kit 200
MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 Kat. č. ZP02001-48 Doba zpracování: 50-60 minut pro MagPurix 12S 50-70 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 je určena pro izolátor
VíceProtokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:
Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)
VíceNÁVOD K POUŽITÍ PRO HER2 DNA QUANTIFICATION KIT
IČ: 80 DIČ: CZ80 sales@intellmed.eu NÁVOD K POUŽITÍ PRO HER DNA QUANTIFICATION KIT IČ: 80 DIČ: CZ80 sales@intellmed.eu OBSAH Návod k použití pro HER DNA QUANTIFICATION KIT.... Úvod.... Označení.... Rozsah
VíceIzolace nukleových kyselin
Izolace nukleových kyselin Požadavky na izolaci nukleových kyselin V nativním stavu z přirozeného materiálu v dostatečném množství požadované čistotě. Nukleové kyseliny je třeba zbavit všech látek, které
VíceSeminář izolačních technologií
Seminář izolačních technologií Zpracoval: Karel Bílek a Kateřina Svobodová Podpořeno FRVŠ 2385/2007 a 1305/2009 Úpravy a aktualizace: Pavla Chalupová ÚMFGZ MZLU v Brně 1 Lokalizace jaderné DNA 2 http://www.paternityexperts.com/basicgenetics.html
VíceIZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)
17.1 Izolace DNA (kit DNeasy Plant Mini) Strana 1 IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini) 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorku pomocí komerčního kitu DNeasy Plant
VíceColumn DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202)
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202) Popis Column DNA Lego Kit je základ moderní stavebnicové (Lego) soupravy pro izolaci čisté DNA různého
VíceMendelova univerzita v Brně Zahradnická fakulta Ústav ovocnictví. Dědičnost rezistence meruněk k šarce švestky. Dizertační práce
Mendelova univerzita v Brně Zahradnická fakulta Ústav ovocnictví Dědičnost rezistence meruněk k šarce švestky Dizertační práce Školitel: Prof. Dr. Ing. Boris Krška Vypracovala: Ing. Petra Pilařová Lednice
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/
I n v e s t i c e d o r o z v o j e v z d ě l á v á n í Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním
Víceing. Petr Komínek, Ph.D. Metodika stanovení rozšíření virů révy vinné ve výsadbách v ČR METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY
ing. Petr Komínek, Ph.D. Metodika stanovení rozšíření virů révy vinné ve výsadbách v ČR METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2012 Metodika pro útvary státní správy
VíceEGFR XL StripAssay. Kat. číslo 5-630. 20 testů 2-8 C
EGFR XL StripAssay Kat. číslo 5-630 20 testů 2-8 C Popis stripu Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA použijte vhodný izolační kit. Doporučené kity jsou následující: Pro izolaci čerstvých nebo
VíceJaroslav Polák, Jiban Kumar, Boris Krška, Petr Komínek, Jana Jarošová UPLATNĚNÁ CERTIFIKOVANÁ METODIKA
Komplexní metodika hodnocení rezistence GM švestky, Prunus domestica L., klon C5 k viru šarky švestky, kvality plodů a možného přenosu transgenu do rostlin r. Prunus. Jaroslav Polák, Jiban Kumar, Boris
VíceTESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin
Teoretický úvod: TESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin 1 Teoretický úvod: TESTOVÁNÍ GMO Obecně na úvod Určitě jste už slyšeli pojem geneticky modifikovaný organismus (GMO). Úprava vlastností přirozeně
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv
Národní referenční laboratoř Strana KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ GENETICKÝCH MODIFIKACÍ METODOU qpcr POMOCÍ ROTOR-GENE PROBE PCR KITU Účel a rozsah Postup slouží ke kvantitativnímu stanovení genetických modifikací
VíceVýzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.
Výzkumné centrum genomiky a proteomiky Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Systém pro sekvenování Systém pro čipovou analýzu Systém pro proteinovou analýzu Automatický sběrač buněk Systém pro sekvenování
VíceNávod k použití souprav. Wipe test. Kontaminační kontrola. Testovací souprava pro kontrolu kontaminace využívající molekulárně - biologické metody
Návod k použití souprav Wipe test Kontaminační kontrola Testovací souprava pro kontrolu kontaminace využívající molekulárně - biologické metody REF 7091 40 reakcí 1. Popis výrobku V posledních letech se
VícePOLYMERÁZOVÁ ŘETĚZOVÁ REAKCE (PCR)
POLYMERÁZOVÁ ŘETĚZOVÁ REAKCE (PCR) Polymerázová řetězová reakce (PCR, z anglického Polymerase Chain Reaction) je metoda rychlého zmnožení (amplifikace) vybraného úseku DNA. Množený (amplifikovaný) úsek
VícePROTOKOL WESTERN BLOT
WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají
VíceVýsledky v roce 2017
Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský Oddělení mezilaboratorních porovnávacích zkoušek Poskytovatel zkoušení způsobilosti č.7005 akreditovaný ČIA podle ČSN EN ISO/IEC 17043 Mezilaboratorní porovnávací
VíceIzolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
VíceProtokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze
1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,
VíceMetody analýzy DNA využívané ve Výzkumném a šlechtitelském ústavu Holovousy RNDr. Jana Čmejlová, Ph.D.
Metody analýzy DNA využívané ve Výzkumném a šlechtitelském ústavu Holovousy RNDr. Jana Čmejlová, Ph.D. 1951 - Výzkumný ústav ovocnářský Holovousy 1997 - Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy
VíceDNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová
DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH Michaela Nesvadbová Význam identifikace živočišných druhů v krmivu a potravinách povinností každého výrobce je řádně a pravdivě označit
VícePolymorfismus délky restrikčních fragmentů
Polymorfismus délky restrikčních fragmentů Princip: Chemikálie: PCR produkt z předchozího praktického cvičení Endonukleáza KpnI 10 U μl -1 Pufr pro KpnI 10 koncentrovaný (Tris-HCl 100 mmol l -1 ph 7,5,
VícePCR IN DETECTION OF FUNGAL CONTAMINATIONS IN POWDERED PEPPER
PCR IN DETECTION OF FUNGAL CONTAMINATIONS IN POWDERED PEPPER Trojan V., Hanáček P., Havel L. Department of Plant Biology, Faculty of Agronomy, Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno, Zemedelska
VícePopis výsledku QC1156/01/2004 Identifikace projektu:
Popis výsledku QC1156/01/2004 Identifikace projektu: ČÍSLO PROJEKTU QC1156 PROGRAM TÉMA PRIORITA Program I B) Zlepšování biologického potenciálu rostlin a zvířat a jeho efektivní využívání 3) Metody charakterizace
VíceQH71273. Výzkum nekrotrofních patogenů z r. Phytophthora na ekonomicky významných listnatých dřevinách
QH71273 Výzkum nekrotrofních patogenů z r. Phytophthora na ekonomicky významných listnatých dřevinách Podprogram 1 Efektivní postupy v agrárním sektoru Výzkumný směr 12 - Ochrana zdraví rostlin a zvířat
VíceNávod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie
Datum... Jméno... Kroužek... Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie Téma: Vybrané imunochemické metody 1. Úloha Imunoprecipitační křivka lidského albuminu a stanovení Princip: koncentrace
VícePraktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu
Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu Toto blokové praktické cvičení spočívá v teoretickém i praktickém seznámení s rekombinantními proteiny, jejich izolací, purifikací a využitím.
VíceDYNEX nabízí komplexní řešení v oblasti zpracování a analýzy biologických materiálů pomocí molekulárně biologických metod.
DYNEX nabízí komplexní řešení v oblasti zpracování a analýzy biologických materiálů pomocí molekulárně biologických metod. Od 1.1.2014 DYNEX jediným OFICIÁLNÍM (autorizovaným) distributorem společnosti
VíceSure-MeDIP I. with magnetic beads and MNase. www.krd.cz
Sure-MeDIP I with magnetic beads and MNase www.krd.cz 1 Obsah soupravy a skladování MeDIP souprava obsahuje reagencie na provedení 25 reakcí. Souprava je rozdělen do dvou částí, jedna je distribuována
Víceα-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C
α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C Popis stripů: Pracovní postup Izolace DNA Doporučujeme použít následující kit pro izolaci DNA z plné krve nebo jiných typů vzorků: Spin Micro DNA Extraction
VíceBraf V600E StripAssay
Braf V600E StripAssay Kat. číslo 5-570 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci čerstvých nebo mražených biopsií použijte soupravy Qiagen QIAmp DNA Mini nebo Micro. Pro izolaci
VíceKonečná zpráva hodnocení různých způsobů přípravy vzorků pro AMPLICOR HPV test firmy Roche
Konečná zpráva hodnocení různých způsobů přípravy vzorků pro AMPLICOR HPV test firmy Roche Charakteristika testu: Set AMPLICOR HPV vyráběný firmou Roche je určený pro detekci vysoko-rizikových typů lidských
VíceMagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit Kat. č. ZP02003 Doba zpracování: 40-55 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit je určena
VíceVybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1.
VíceNRAS StripAssay. Kat. číslo 5-610. 20 testů 2-8 C
NRAS StripAssay Kat. číslo 5-610 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA musí být použita vhodná metoda vzhledem k typu tkáně vzorku. Pro doporučení vhodné metody kontaktujte
VíceŠLECHTĚNÍ MERUNĚK V ČESKÉ REPUBLICE
ŠLECHTĚNÍ MERUNĚK V ČESKÉ REPUBLICE Pěstováním a šlechtěním meruněk se v ČR věnoval Prof. Ing. Zdeněk Vachůn, DrSc. - pedagog Zahradnické fakulty v Lednici Mendelovy univerzity, kterého 80. výročí narození
VíceVýzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o.
Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o. Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o. Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy, s.r.o. Výzkumný a šlechtitelský
VícePolymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP)
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Polymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP) Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2017/18 Obsah POLYMORFISMUS
VícePO STOPÁCH BAKTERIÍ V/KOLEM NÁS
PO STOPÁCH BAKTERIÍ V/KOLEM NÁS Jana Spáčilová, UK v Praze, PřF, Katedra buněčné biologie Svět bakterií je nesmírně druhově bohatý a máme ho blíž než před očima. Mikroskopickými metodami můžeme obdivovat
VíceZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN
ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN Možnosti stanovení Listeria monocytogenes popis metod a jejich princip Mária Strážiková Aleš Holfeld Obsah Charakteristika Listeria monocytogenes Listerióza Metody detekce
VíceMetodika řízkování podnoží vybraných ovocných druhů
Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy s.r.o. Mendelova univerzita v Brně, Zahradnická fakulta v Lednici Metodika řízkování podnoží vybraných ovocných druhů Tomáš Nečas, Jan Náměstek, Luděk
VíceMendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin Inovace laboratorních úloh genetických předmětů metodikami pracujícími s ribonukleovými kyselinami pšenice Metodické návody pro laboratorní
VíceRNA Blue REAGENS PRO RYCHLOU PŘÍPRAVU ČISTÉ A NEDEGRADOVANÉ RNA (katalogové číslo R011, R012, R013)
RNA Blue REAGENS PRO RYCHLOU PŘÍPRAVU ČISTÉ A NEDEGRADOVANÉ RNA (katalogové číslo R011, R012, R013) Upozornění: RNA Blue obsahuje fenol a další toxické komponenty. Při kontaktu s kůží je nutné omytí velkým
VíceVyužití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách
Využití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách Chemie a mikrobiologie potravin, III. ročník Ústav hygieny a technologie mléka, FVHE, VFU Brno Říjen 2013 Technika ELFA Enzyme Linked
VíceBraf 600/601 StripAssay
Braf 600/601 StripAssay Kat. číslo 5-560 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup Kit umožňuje detekci 9 mutací v genu BRAF (kodón 600 a 601) Další informace najdete v OMIM Online Mendelian Inheritance
VíceDoc. Ing. Jaroslav Polák, DrSc. Ing. Alena Hauptmanová
Autoři: Název: Vydal: Doc. Ing. Jaroslav Polák, DrSc. Ing. Alena Hauptmanová Metodika ozdravování odrůd slivoně a meruňky infikovaných virem šarky švestky metodou termoterapie in vivo a chemoterapie in
VíceOBSAH. PP Master Mixy... 11 PPP Master Mix 12 Plain PP Master Mix 13 Combi PPP Master Mix 14
OBSAH DNA polymerázy pro PCR a pufry.................. 3 Taq DNA polymeráza 4 Taq DNA polymeráza Unis 5 TaqPurple DNA polymeráza 6 Taq DNA polymeráza 1.1 7 Combi Taq DNA polymeráza 8 LA DNA Polymerases
VíceCYCLER CHECK. Test pro validaci teplotní uniformity cyklérů. Připraveno k použití, prealiquotováno. REF 7104 (10 testů) REF (4 testy)
CZ Návod k použití CYCLER CHECK Test pro validaci teplotní uniformity cyklérů Připraveno k použití, prealiquotováno REF 7104 (10 testů) REF 71044 (4 testy) Obsah 1. Popis výrobku... 2 2. Materiál... 3
VíceSeznam použitých chemikálií
PŘÍLOHY Tabulky Tabulka č. 1. Přehled výsledků teplot tání pro amplifikáty primeru G3010A. Testování teplot tání rozředěného zásobího roztoku o koncentraci ndna 1ng / 1μl, ředění uvedeno v tabulce. Tabulka
VíceUSING OF AUTOMATED DNA SEQUENCING FOR PORCINE CANDIDATE GENES POLYMORFISMS DETECTION
USING OF AUTOMATED DNA SEQUENCING FOR PORCINE CANDIDATE GENES POLYMORFISMS DETECTION VYUŽITÍ AUTOMATICKÉHO SEKVENOVÁNÍ DNA PRO DETEKCI POLYMORFISMŮ KANDIDÁTNÍCH GENŮ U PRASAT Vykoukalová Z., Knoll A.,
VíceKVANTITATIVNÍ REAL-TIME PCR (q-real-time PCR)
KVANTITATIVNÍ REAL-TIME PCR (q-real-time PCR) Metoda Real-time PCR slouží pro kvantifikaci DNA a transkripce. Metoda je založena na klasické PCR, ovšem s využitím speciálního cycleru, který v průběhu PCR
VíceMetodické listy OPVK. Diagnostické metody detekce patogenních organismů
Metodické listy OPVK Diagnostické metody detekce patogenních organismů 9. DIAGNOSTICKÉ METODY DETEKCE PATOGENNÍCH ORGANISMŮ Ovocné dřeviny trpí chorobami, které jsou často přítomností virů, fytoplazem,
VíceMODERNÍ BIOFYZIKÁLNÍ METODY:
MODERNÍ BIOFYZIKÁLNÍ METODY: POKROČILÉ PRAKTICKÉ VZDĚLÁVÁNÍ V EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGII Operační program Vzdělávání pro konkurenceschopnost Číslo projektu: CZ.1.07/2.3.00/09.0046 Praktický kurz pokročilých
VíceÚLOHA C Klonování PCR produktu do plasmidu
Jméno a učo: Datum: ÚLOHA C Klonování PCR produktu do plasmidu TEORETICKÝ ÚVOD Při klonování PCR produktů do plasmidů se využívá vlastnosti Taq polymerasy, a jiných non-proofreading polymeras, přidávat
VíceMagPurix Forensic DNA Extraction Kit
MagPurix Forensic DNA Extraction Kit Kat. č. ZP02010 Doba zpracování: 40-50 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Forensic DNA Extraction Kit je určena pro izolátor
VíceMolekulární diagnostika
Molekulární diagnostika Odry 11. 11. 2010 Michal Pohludka, Ph.D. Buňka základní jednotka živé hmoty Všechny v současnosti známé buňky se vyvinuly ze společného předka, tedy buňky, která žila asi před 3,5-3,8
VíceAdnaTest ProstateCancerSelect
AdnaTest ProstateCancerSelect Obohacení nádorových buněk z krve pacientů s rakovinou prostaty pro analýzu genové exprese Pro diagnostiku in vitro Příručka T-1-520 Obsah Informace pro objednávky... 3 Účel...
VíceLABORATORNÍ PŘÍRUČKA. Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky
LABORATORNÍ PŘÍRUČKA Transfuzní oddělení Laboratoř systému a PCR diagnostiky Účinnost od 15. 9. 2015 Verze č. 4 Tímto předpisem se ruší Verze č. 3, platnost od 1. 4. 2014 Odborný garant Jméno a příjmení,
VíceUrčeno pro obecné laboratorní užití. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. POUZE PRO POUŽITÍ IN VITRO.
Určeno pro obecné laboratorní užití. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. POUZE PRO POUŽITÍ IN VITRO. PCR Nucleotide Mix Předem připravený roztok ultračistých PCR deoxynukleotidů (datp,
VíceImunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
VíceMagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B
MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B Kat. č. ZP02012 Doba zpracování: 45-60 minut pro MagPurix 12S 45-65 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction
VíceCVD-T StripAssay. Kat. číslo 4-360. 20 testů 2-8 C
CVD-T StripAssay Kat. číslo 4-360 20 testů 2-8 C Popis stripu Pracovní postup Izolace DNA Použijte čerstvou nebo zmraženou krev s EDTA nebo citrátem, jako antikoagulans, vyhněte se krvi s obsahem heparinu.
VíceFunkční vzorek 4595/2018. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Streptococcus suis
Funkční vzorek 4595/2018 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Streptococcus suis Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,
VíceProtilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu
Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2080-9601 G Helicobacter pylori IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96)
VíceCharakterizace hybridních trav pomocí cytogenetických a molekulárních metod
Molekulární přístupy ve šlechtění rostlin Olomouc 14. února, 2017 Charakterizace hybridních trav pomocí cytogenetických a molekulárních metod Jan Bartoš Ústav experimentální botaniky Olomouc, Czech Republic
Více1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
VíceIZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
VíceMetodika detekce čtyř významných virů révy vinné pomocí molekulární hybridizace METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY
ing. Petr Komínek, Ph.D. ing. Marcela Komínková Metodika detekce čtyř významných virů révy vinné pomocí molekulární hybridizace METODIKA PRO ÚTVARY STÁTNÍ SPRÁVY Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.
VíceDiagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení
Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení Mgr. Klára Vilimovská Dědečková, Ph.D. Synlab genetics s.r.o. Molekulární
VícePraktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Praktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA Vyučující: Mgr. Monika Holubová, Bc. Petr
VíceTéma: DEMONSTRACE SYMPTOMŮ ZPŮSOBENÝCH FYTOPLAZMAMI, PŘENOSU KOKOTICÍ A ROUBOVÁNÍ. Ing. Jana Fránová, Dr., Biologické centrum AV ČR v.v.i.
Téma: DEMONSTRACE SYMPTOMŮ ZPŮSOBENÝCH FYTOPLAZMAMI, PŘENOSU KOKOTICÍ A ROUBOVÁNÍ Ing. Jana Fránová, Dr., Biologické centrum AV ČR v.v.i. Symptomatologie Fytoplazmy vyvolávají u infikovaných rostlin různé
VíceMetodika molekulární detekce virů peckovin pomoci RT-PCR a multiplex-rt-pcr
VÝZKUMNÝ ÚSTAV ROSTLINNÉ VÝROBY, v.v.i. Metodika molekulární detekce virů peckovin pomoci RT-PCR a multiplex-rt-pcr Metodika pro Státní rostlinolékařskou správu Jana Jarošová, Jaroslav Polák & Jiban Kumar
VíceSTATISTICKÉ HODNOCENÍ MARKEROVACÍ SCHOPNOSTI PCR MARKERU REZISTENCE JABLONÍ VŮČI STRUPOVITOSTI
STATISTICKÉ HODNOCENÍ MARKEROVACÍ SCHOPNOSTI PCR MARKERU REZISTENCE JABLONÍ VŮČI STRUPOVITOSTI Statistical Evaluation of the PCR Marker Ability for Resistance against Apple Scab Markering Pavel Vejl 1,
VíceÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK. Vyšetření moči
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vyšetření moči močový sediment, stanovení sodíku, opakování Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka, Lenka
VíceYi TPMT. Diagnostická souprava. Návod k použití. Haasova 27 Brno Česká republika. tel.:
Yi TPMT Diagnostická souprava Návod k použití Výrobce: YBUX s.r.o. Haasova 27 Brno 616 00 Česká republika IČ 63487951 tel.: +420 541 423 710 e-mail: ybux@ybux.eu Název: Yi TPMT Popis: Diagnostická souprava
VíceMolekulárně biologické metody v mikrobiologii. Mgr. Martina Sittová Jaro 2014
Molekulárně biologické metody v mikrobiologii Mgr. Martina Sittová Jaro 2014 Harmonogram 1. den Izolace DNA 2. den Měření koncentrace DNA spektrofotometricky, real-time PCR 3. den Elektroforéza Molekulární
Více8 PŘÍLOHA A - TABULKY
8 PŘÍLOHA A - TABULKY Tabulka A - 1 Přehled reagencií a jejich koncentrací na přípravu reakční směsi PCR reagencie objem (µl) koncentrace ddh 2 O N x 7 PPP mix N x 10 5 primer N x 1 10 µm 3 primer N x
VíceODLIŠENÍ ODRŮD PŠENICE OBECNÉ TRITICUM AESTIVUM L. METODOU RAPD
ODLIŠENÍ ODRŮD PŠENICE OBECNÉ TRITICUM AESTIVUM L. METODOU RAPD Distinguishing of Wheat Varieties (Tritium aestivum L.) by Method RAPD Zuzana Kohutová, Zuzana Kocourková, Hana Vlastníková, Petr Sedlák
VíceSure-MeDIP II. with agarose beads and Mse I. www.krd.cz
Sure-MeDIP II with agarose beads and Mse I www.krd.cz 1 Obsah soupravy a skladování MeDIP souprava obsahuje reagencie na provedení 25 reakcí. Souprava je rozdělen do dvou částí, jedna je distribuována
VíceMetodika analýzy molekulárních markerů u jilmu, Ulmus L.
Metodika analýzy molekulárních markerů u jilmu, Ulmus L. Metodika byla vypracovaná jako výstup projektu NAZV QI92A247 Charakterizace genetické struktury autochtonních populací jilmů pomocí DNA analýz,
VíceNávod k použití souprav. Wipe test. Elektronická verze Návodu k použití je ke stažení na Kontaminační kontrola
CZ Návod k použití souprav Wipe test Elektronická verze Návodu k použití je ke stažení na www.bag-healthcare.com Kontaminační kontrola Testovací souprava pro kontrolu kontaminace využívající molekulárně
VícePAROTITIDA VRACEJÍCÍ SE ONEMOCNĚNÍ. Vlasta Štěpánová 1, Miroslav Fajfr 1,2, Lenka Plíšková 3
PAROTITIDA VRACEJÍCÍ SE ONEMOCNĚNÍ Vlasta Štěpánová 1, Miroslav Fajfr 1,2, Lenka Plíšková 3 Ústav klinické mikrobiologie 1, Ústav klinické biochemie a diagnostiky 3, Fakultní nemocnice Hradec Králové,
VíceNárodní ozdravovací program pro ozdravení rozmnožovacího materiálu (dále jen NOPRM )
Ministerstvo zemědělství Čj.: 74248/2014-MZE-17221 V Praze, dne 9. prosince 2014 Národní ozdravovací program pro ozdravení rozmnožovacího materiálu (dále jen NOPRM ) ovocných rostlin, révy a chmele v České
VíceFunkční vzorek 5456/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Enterococcus spp.
Funkční vzorek 5456/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Enterococcus spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,
VíceDiagnostika retrovirů Lentiviry - HIV. Vladislava Růžičková
Diagnostika retrovirů Lentiviry - HIV Vladislava Růžičková VI. Třída RNA-viry se zpětnou transkriptázou RT Čeleď: Retroviridae (hostitelé: Obratlovci) Rody: Alpharetrovirus Betaretrovirus Gammaretrovirus
VíceC V C. Návod k použití pro Biofortuna SSPGo TM HLA No Template Control Kit BF-40-02. Revize 2. Červenec 2014
DOT130v1 Instructions for Use Biofortuna SSPGo TM HLA No Template Control Kit BF-40-02 Strana 1 / 7 Návod k použití pro Biofortuna SSPGo TM HLA No Template Control Kit BF-40-02 Revize 2 Červenec 2014 DOT130v1
VícePROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE)
PROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE) Denaturující proteinová elektroforéza (SDS PAGE - SDS Protein Acrylamide Gel Electrophoresis) je metoda, která se používá k separaci proteinů podle velikosti,
VíceMETODIKA DIAGNOSTIKY APMV, ACLSV A ASGV V ODRŮDÁCH A PODNOŽÍCH JABLONĚ A HRUŠNĚ POMOCÍ ELISA
Jiří Svoboda a Jaroslav Polák METODIKA DIAGNOSTIKY APMV, ACLSV A ASGV V ODRŮDÁCH A PODNOŽÍCH JABLONĚ A HRUŠNĚ POMOCÍ ELISA CERTIFIKOVANÁ METODIKA PRO PRAXI Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2010
VíceNanotransportéry pro teranostické aplikace
Název: Nanotransportéry pro teranostické aplikace Školitel: Simona Dostálová, Markéta Vaculovičová Datum: 21. 3. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.3.00/20.0148 Název projektu: Mezinárodní spolupráce v oblasti
VíceIn vitro testování scaffoldů pro tkáňové inženýrství. Mgr. Jana Horáková
In vitro testování scaffoldů pro tkáňové inženýrství Mgr. Jana Horáková 9.12.2015 Proces tkáňového inženýrství 1. Návrh nosiče Seznámení se s problematikou dané tkáně/orgánu Návrh nosiče pro danou aplikaci
VíceRapid-VIDITEST Influenza A+B
Rapid-VIDITEST Influenza A+B (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku viru Influenzy typu A a B z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o.,
Více