Cytometrické metody pro stanovení proliferace lymfocytů. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "Cytometrické metody pro stanovení proliferace lymfocytů. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol"

Transkript

1 Cytometrické metody pro stanovení proliferace lymfocytů RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol

2 Funkční testy lymfocytů Stanovení proliferace lymfocytů Schopnost lymfocytů reagovat na antigen Důležité pro diagnostiku imunodeficitů i pro výzkum Fáze aktivace, mitóza, klonální expanze

3 Aktivace lymfocytů Specifické antigeny (tetanus, varicella, pneumococcus, candida apod.) Nevýhoda stimulace jen malého množství specifických lymfocytů Polyklonální aktivátory stimulují nezávisle na specifitě TCR Polyklonální mitogeny Mitogen Phytohemaglutinin (PHA) Concanavalin A (ConA) Pokeweed mitogen (PWM) Lipopolysacharid (LPS) Odpovídající populace T lymfocyty T lymfocyty T i B lymfocyty B lymfocyty

4 Superantigeny proteiny se dvěma vazebnými místy pro MHC gp II a druhé pro vnější stranu Vβ regionu TCR superantigen je specifický pro jeden až několik různých Vβ domén, kterých je superantigen tak může aktivovat 1-20% T lymfocytů polyklonální mitogeny spouštějí v zásadě stejné reakce jako antigeny podobný efekt dosáhneme protilátkami proti TCR nebo CD3

5 Cytometrické metody detekce proliferace Měření povrchových aktivačních markerů (CD69, CD71, CD25, HLA-DR) Kvantifikace vznikajících blastů v procesu blastické transformace Kvantifikace celkové DNA (PI, EB) Měření intracelulárních aktivačních markerů (Ki-67) Inkorporace značených prekurzorů do nově syntetizované DNA (thymidin, BrdU, EdU,) Obarvení cytoplazmy nebo membrány buněk (CFSE, Oregon Green, CellVue Claret apod.)

6 Blastogeneze lymfocytů Intracelulární změny a přeměna klidových lymfocytů na lymfoblasty: T buněčné blasty jsou velké lymfocyty s výrazným objemem cytoplazmy

7 FASCIA Flow Cytometric Assay of specific cell-mediated immune response in activated whole blood Kvantifikuje blasty vznikající při aktivaci lymfocytů Development and evaluation of a flow-cytometric assay of specific cell-mediated immune response in activated whole blood for the detection of cell-mediated immunity against varicella-zoster virus. Svahn A, Linde A, Thorstensson R, Karlen K, Andersson L, Gaines H. J Immunol Methods Jun 1; 277(1-2): Heparinizovaná krev zředěná médiem 1:8 + mitogeny Kultivace 3-7 dní Značení CD3, CD4, CD8, lýza erytrocytů a měření

8 Měří se BD Trucount a vypočítá se absolutní počet proliferujících buněk/ml Možnost multiplexu s povrchovými znaky

9 Nestimulované, 72 h kultivace PHA, 72 h kultivace

10 Měření celkové DNA etidium bromid, propidium jodid, hexidium jodid tzv. interkalační barviva s červenou fluorescencí barvivo se vmezeří mezi páry bazí dvojité šroubovice DNA nejsou specifická pro DNA, proto vyžaduje použití RNAzy barvení předchází permeabilizace buněk (-20 o C) nedává informaci o nově syntetizované DNA, nekoreluje s 3 H-thy Development of a propidium iodide fluorescence assay for proliferation and cytotoxicity assays. Dengler W.A., Anti-Cancer Drugs 09/1995; 6(4):522-32

11 Ki-67 Proliferating cell associated protein Jaderný protein role v regulaci buněčného dělení Intenzivně studovaný v souvislosti s proliferací nádorových buněk Exprimovaný během všech aktivních fází buněčného dělení Není exprimovaný v klidové fázi Specifický a kvantitativní indikátor proliferace Korelace s BrdU 0,80 0,93 Korelace s Oregon green 0,94-0,98 (Soarez et al., 2010)

12 Ki-67 Výhody: jednoduché provedení k buňkám v kultuře se nic nepřidává Biolegend anti Ki67 APC Lymfocyty 72 h s PHA celkem levná varianta značení buněk běžný intracelulární protokol možnost současného stanovení dalších antigenů

13 CD3+ NS PHA CD4+

14 Komerční reagencie anti-human Ki-67 Antibody BioLegend ( (AF488, AF647, APC, BV421, BV510, BV605, BV711, Pacific Blue, PE, PE- Cy7, PerCP-Cy5.5) BD Pharmingen ( (AF488, AF555, AF647, AF700, FITC, PE-Cy7, PerCP-Cy5.5)

15 Inkorporace 3 H-thymidinu Zlatý standard detekce proliferace, používá se od r Metoda s vysokou citlivostí Inkorporace značeného thymidinu se měří na β-counteru, výsledek v cpm Typické hodnoty nestimulovaných lymfocytů ~1.300 cpm Stimulované lymfocyty (PHA) ~ cpm Stimulační index (stimulované/nestimulované) U zdravých dárců SI nad 50 Výsledky jsou relativní ke zdravé kontrole

16 Bromodeoxyuridin (BrdU) 5-bromo-2-deoxyuridin syntetický nukleotid, analog thymidinu Inkorporace do nově syntetizované DNA dělících se buněk (během S fáze) Substituce thymidinu Značení BrdU protilátkou vyžaduje permeabilizaci buněk a denaturaci DNA (kyselina, teplo, nukleáza apod.)

17 BrdU Na posledních 2-24 h ke kultuře přidáme BrdU (18µg/ml, Sigma) Buňky harvestujeme a označíme povrchové antigeny Denaturace a permeabilizace: 70% etanol, deoxyribonukleáza, Tween20 Anti-BrdU značená protilátka Poměr BrdU pozitivních k celkovému počtu buněk Dobrá korelace s inkorporací 3H-thymidinu (r=0,934 pro ConA)

18 BrdU Nevýhoda: nešetrný protokol pro denaturaci DNA může mít za následek destrukci buněčné morfologie a antigenních determinant, na které se váže protilátka Kity s DNAzou jsou relativně drahé (cca Kč/100 testů) Varianta ELISA levnější ( Kč/1000 testů)

19 Komerční reagencie SIGMA ( 5-Bromo-2 -deoxyuridine, 100mg (496.-Kč) Anti BrdU protilátky: BioLegend ( ebioscience ( BrdU Staining Kit for Flow Cytometry (APC, PE, FITC) Kč Abcam ( Serotec ( FITC, AF647, AF488, PE, APC (cca Kč/100 testů)

20 EdU (5-ethynyl-2 deoxyuridine) novější alternativa k BrdU detekce je založena na tzv. click reakcí mezi azidem a alkenovou skupinou alkenová skupina je obsažena v ethynylu azid je konjugován s Pacific Blue, AF647 nebo AF488 nízké pozadí, vysoká citlivost

21 Struktura analogů nukleosidu Ethynyl du Brom du

22 Princip click reakce Click značení nevyžaduje denaturaci DNA Fluorochrom s azidem reaguje s alkenovou skupinou na dsdna EdU vestavěný do DNA

23 EdU protokol Přidáme EdU do buněčné kultury, inkubace (2-24h) Buňky harvestujeme naznačíme protilátkami proti povrchovým antigenům dle potřeby (nelze použít PE) Inkubujeme 15 min s fixačním roztokem, promyjeme Inkubujeme 15 min s permeabilizačním roztokem, promyjeme Inkubujeme 30 min s reakčním pufrem, promyjeme Měříme na cytometru

24 NS PHA

25 Komerční soupravy Invitrogen (Life Technologies) Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Flow Cytometry Assay Kit Click-iT EdU Alexa Fluor 647 Flow Cytometry Assay Kit Click-iT EdU Pacific Blue Flow Cytometry Assay Kit Cena Kč / 50 testů

26 Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester (CFDA-SE) CFSE MW=557 Používán od roku 1994 Lipofilní molekula, která je minimálně fluorescenční, dokud není transportována do buňky Do buňky proniká pasivní difuzí V buňce esterázy štěpí acetylové skupiny a molekula se stává výrazně fluorescenční Succinimidyl ester se váže kovalentně k volným aminoskupinám na makromolekulách v cytoplazmě Nenavázaný zbytek se z buňky vyloučí

27 CFSE WANG et al.,2005 Komplexy CFSE zůstávají v buňce během celého vývoje a dělení detekováno ještě po 8 týdnech Polovina CFSE se dostává do dceřiných buněk při každém dělení nebo při buněčné fúzi CFSE není předáváno okolním buňkám v kultuře

28 CFSE koncentrace Doba kultivace CFSE 4 h 1 24 h 48 h 72 h 5µM 95% 53% 33% 28% 2.5µM 97% 90% 85% 84% Doporučené koncentrace: Výrobce (Invitrogen): 5µM 2,5µM (Garza et al., 2011) 0.5µM 95% 90% 89% 88% 0.05µM 94% 93% 92% 90% 0 (blank) 97% 95% 93% 92% Stanovení životnosti lymfocytů trypanovou modří - třídenní kultivace Garza et al., 2011

29 CFSE FITC Excitace Emise Cell Trace Violet Pacific Blue CellVue Claret PerCP

30 CFSE protokol - lymfocyty Celá řada modifikací barvícího postupu Lymfocyty v 1 ml PBS (nesmí obsahovat sérum), minimálně přidáme CFSE (několik µl podle požadované koncentrace) Inkubace 15 minut za občasného míchání Přidáme 4 ml PBS s 2% FCS Promyjeme 3x (poslední promytí v komplet. médiu) Spočítáme buňky a naředíme na koncentraci

31 Kultivace 72 h PBMC % divided

32 Vyhodnocení Proliferující frakce: procento buněk, které se rozdělí jednou nebo vícekrát % buněk nebo MFI populace, SI Nezajímá nás, kolikrát se buňka rozdělí, ale kolik vznikne nových buněk Srovnáváme pacienta se zdravou kontrolou Frekvence prekurzorů: procento rodičovské populace, které odpovídá na mitogenní stimulaci

33 Komerční soupravy Life Technologies (Invitrogen) CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit - For Flow Cytometry ( Kč/ testů) CellTrace Violet Cell Proliferation Kit, for flow cytometry ( Kč/ testů) ABCAM CFSE - Cell Labeling Kit ( Kč) ebioscience CFSE Cell Proliferation Dye efluor 450 Cayman Chemicals CFSE Cell Division Assay Kit SIGMA ( CellVue Claret Far Red Fluorescent Cell Linker Mini Kit ( Kč/10 testů)

34 Ekonomické hledisko Metoda FASCIA 0 Propidium jodid 9 Cena Kč/test CFSE 5-50 CellTrace Violet 8-80 BrdU ELISA * 50 Ki H-thymidin * 140 *Stanovení v tripletech Ceny nezahrnují náklady na izolaci a kultivaci buněk FASCIA s BD Trucount 230 BrdU 250 EdU 250 CellVue Claret 520

Nové metody v průtokové cytometrii. Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P.

Nové metody v průtokové cytometrii. Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P. Nové metody v průtokové cytometrii Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P. Průtoková cytometrie Analytická metoda využívající interakce částic a záření. Technika se vyvinula z počítačů částic Počítače

Více

METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví

METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY Veřejné zdravotnictví METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY průtoková cytometrie metody stanovení funkční aktivity lymfocytů testy fagocytárních funkcí Průtoková cytometrie

Více

T lymfocyty. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol

T lymfocyty. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol T lymfocyty RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol Klasifikace T lymfocytů Lymfocyty exprimující TCR nebo Lymfocyty exprimující koreceptory CD4 a CD8 Regulační T lymfocyty Intraepiteliální

Více

Progrese HIV infekce z pohledu laboratorní imunologie

Progrese HIV infekce z pohledu laboratorní imunologie Progrese HIV infekce z pohledu laboratorní imunologie 1 Lochmanová A., 2 Olbrechtová L., 2 Kolčáková J., 2 Zjevíková A. 1 OIA ZÚ Ostrava 2 klinika infekčních nemocí, FN Ostrava HIV infekce onemocnění s

Více

Intracelulární detekce Foxp3

Intracelulární detekce Foxp3 Intracelulární detekce Foxp3 Ústav imunologie 2.LFUK a FN Motol Daniela Rožková, Jan Laštovička T regulační lymfocyty (Treg) Jsou definovány funkčně svou schopností potlačovat aktivaci a proliferaci CD4+

Více

T lymfocyty. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol

T lymfocyty. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol T lymfocyty RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol Klasifikace T lymfocytů Lymfocyty exprimující TCR ab nebo gd Lymfocyty exprimující koreceptory CD4 a CD8 Regulační T lymfocyty

Více

IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek

IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení

Více

Test aktivity a cytotoxicity lymfocytů

Test aktivity a cytotoxicity lymfocytů Test aktivity a cytotoxicity lymfocytů Teorie: Proliferace je jedním z fyziologických jevů buněčné aktivace. Existuje několik způsobů zjišťování aktivity lymfocytů. Jedna z nejznámějších je použitím radioaktivně

Více

Analýza proliferace pomocí průtokové cytometrie

Analýza proliferace pomocí průtokové cytometrie Analýza proliferace pomocí průtokové cytometrie Karel Souček Oddělení cytokinetiky Biofyzikální ústav AVČR, v.v.i. Královopolská 135 612 65 Brno e-mail: ksoucek@ibp.cz tel.: 541 517 166 Přístupy analýza

Více

Aktivace lymfocytů v klinické laboratoři

Aktivace lymfocytů v klinické laboratoři Aktivace lymfocytů v klinické laboratoři Veronika Kanderová CLIP (Childhood Leukaemia Investigation Prague) - Cytometrie Klinika dětské hematologie a onkologie 2. LF UK a FN v Motole Disclaimer Přednáška

Více

Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit

Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit Mgr. Martin Čonka EXBIO Praha, a.s. Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit Funkční testy napodobení biologický procesů in vitro nehrozí nebezpečí ohrožení pacienta v průběhu testování možná analýza

Více

Praktický kurz Praktický kurz monitorování apoptózy a autofágie u nádorových prostatických buněk pomocí průtokové cytometrie

Praktický kurz Praktický kurz monitorování apoptózy a autofágie u nádorových prostatických buněk pomocí průtokové cytometrie Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Praktický kurz Praktický kurz monitorování apoptózy a autofágie u nádorových prostatických buněk pomocí průtokové cytometrie Nastavení průtokového cytometru a jeho

Více

Mnohobarevná cytometrie v klinické diagnostice

Mnohobarevná cytometrie v klinické diagnostice Mnohobarevná cytometrie v klinické diagnostice Mgr. Marcela Vlková, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie, FN u sv. Anny v Brně Průtoková cytometrie v klinické laboratoři Relativní a absolutní

Více

ZÁVĚREČNÝ PROTOKOL O TESTOVÁNÍ BIOAKTIVNÍCH VLASTNOSTÍ LÁTKY CYTOPROTECT

ZÁVĚREČNÝ PROTOKOL O TESTOVÁNÍ BIOAKTIVNÍCH VLASTNOSTÍ LÁTKY CYTOPROTECT MIKROBIOLOGICKÝ ÚSTAV Akademie věd České republiky Vídeňská 1083, 420 20 Praha 4 Krč Imunologie a gnotobiologie ZÁVĚREČNÝ PROTOKOL O TESTOVÁNÍ BIOAKTIVNÍCH VLASTNOSTÍ LÁTKY CYTOPROTECT Zadání: Na základě

Více

Cytometrická detekce intracelulárních signalizačních proteinů

Cytometrická detekce intracelulárních signalizačních proteinů Cytometrická detekce intracelulárních signalizačních proteinů Proč? Ačkoli značení povrchových antigenů může dobře charakterizovat různé buněčné populace, neposkytuje nám informace o funkční odpovědi buňky

Více

Specifická imunita. Ond!ej Beran. Laborato! AIDS a bun"#né imunologie III. klinika infek#ních a tropick$ch nemocí 1. FK UK a FN Na Bulovce

Specifická imunita. Ond!ej Beran. Laborato! AIDS a bun#né imunologie III. klinika infek#ních a tropick$ch nemocí 1. FK UK a FN Na Bulovce Specifická imunita Ond!ej Beran Laborato! AIDS a bun"#né imunologie III. klinika infek#ních a tropick$ch nemocí 1. FK UK a FN Na Bulovce 3. Motolsk$ minikurz cytometrie, 29.- 30.10.2007 Metody vy!et!ování

Více

Principy a instrumentace

Principy a instrumentace Průtoková cytometrie Principy a instrumentace Ing. Antonín Hlaváček Úvod Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým

Více

Specifická imunitní odpověd. Veřejné zdravotnictví

Specifická imunitní odpověd. Veřejné zdravotnictví Specifická imunitní odpověd Veřejné zdravotnictví MHC molekuly glykoproteiny exprimovány na všech jaderných buňkách (MHC I) nebo jenom na antigen prezentujících buňkách (MHC II) u lidí označovány jako

Více

Fluorescenční mikroskopie

Fluorescenční mikroskopie Luminiscence jev, kdy látka vysílá do prostoru světlo chemická reakce chemiluminiscence (např. světluška) světlo fotoluminiscence fluorescence (emisní záření jen krátkou dobu po skončení exitačního záření)

Více

Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii

Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Kvantitativní analýza: F = k φ Φ o Vysoká citlivost metody: 2.3 c l ε použití laserů odezva na relativně malé změny v okolí

Více

Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomu

Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomu Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomu Minařík J., Ordeltová M., Ščudla V., Vytřasová, M., Bačovský J., Špidlová A. III.interní

Více

F l u o r e s c e n c e

F l u o r e s c e n c e F l u o r e s c e n c e Fluorescenční mikroskopie Luminiscence jev, kdy látka vysílá do prostoru světlo chemická reakce chemiluminiscence světlo fotoluminiscence Vyvolávající záření exitační fluorescence

Více

Vícebarevná průtoková cytometrie v klinice

Vícebarevná průtoková cytometrie v klinice Vícebarevná průtoková cytometrie v klinice EXBIO seminář 21.5.2014 Miroslav Benko EXBIO Praha a.s. Nad Safinou II Vestec Vícebarevná průtoková cytometrie v klinice EXBIO seminář 21.5.2014 Miroslav Benko

Více

Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii

Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 1/1 Proč biofyzikální metody? Biofyzikální metody využívají fyzikální principy ke studiu biologických systémů Poskytují kvantitativní

Více

IMUNOMUDULAČNÍ AKTIVITY IZOTONICKÉHO A HYPERTONICKÉHO ROZTOKU QUINTON

IMUNOMUDULAČNÍ AKTIVITY IZOTONICKÉHO A HYPERTONICKÉHO ROZTOKU QUINTON IMUNOMUDULAČNÍ AKTIVITY IZOTONICKÉHO A HYPERTONICKÉHO ROZTOKU QUINTON I. ČÁST Studie zaměřená na testování imunomodulační aktivity izotonického a hypertonického roztoku Quinton, a to jak in vitro, tak

Více

Metody testování humorální imunity

Metody testování humorální imunity Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový

Více

Marcela Vlková Jana Nechvátalová. FN u sv. Anny v Brně LF MU Brno

Marcela Vlková Jana Nechvátalová. FN u sv. Anny v Brně LF MU Brno Marcela Vlková Jana Nechvátalová FN u sv. Anny v Brně LF MU Brno Leukocytární subpopulace CD45 CD45 Lymfocytární subpopulace Fenotypizace základní subpopulace T a B lymfocytů a NK buněk subpopulace základních

Více

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru Informace o výrobku Informace o ostatních produktech jsou dostupné na www.demeditec.com Návod k použití CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného

Více

Antigeny. Hlavní histokompatibilitní komplex a prezentace antigenu

Antigeny. Hlavní histokompatibilitní komplex a prezentace antigenu Antigeny Hlavní histokompatibilitní komplex a prezentace antigenu Antigeny Antigeny: kompletní (imunogen) - imunogennost - specificita nekompletní (hapten) - specificita antigenní determinanty (epitopy)

Více

Nastavení metod pro imunofenotypizaci krevních. EXBIO Praha, a.s.

Nastavení metod pro imunofenotypizaci krevních. EXBIO Praha, a.s. Nastavení metod pro imunofenotypizaci krevních buněk pomocí průtokové cytometrie Martin Špryngar EXBIO Praha, a.s. Obsah: Porovnání vícebarevné vs. dvoubarevné cytometrie Požadavky průtokové cytometrie

Více

Průtoková cytometrie Flow Cytometry

Průtoková cytometrie Flow Cytometry Průtoková cytometrie Flow Cytometry PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE (fluorescenční metoda) Měření fyzikálně-chemických vlastností buněk během jejich průchodu laserovým paprskem Nejčastěji imunofenotypizace krevních

Více

Metody vyšetření imunity

Metody vyšetření imunity Metody vyšetření imunity Motto laboratorního vyšetření Cílem je nalézt abnormální funkci imunitního systému, která přináší vysvětlení příznaků/nemoci /nemocí Některé chybné funkce se nemusí projevovat

Více

RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc

RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc Výukové materiály: http://www.zoologie.upol.cz/osoby/fellnerova.htm Prezentace navazuje na základní znalosti Biochemie a cytologie. Bezprostředně

Více

Systém HLA a prezentace antigenu. Ústav imunologie UK 2.LF a FN Motol

Systém HLA a prezentace antigenu. Ústav imunologie UK 2.LF a FN Motol Systém HLA a prezentace antigenu Ústav imunologie UK 2.LF a FN Motol Struktura a funkce HLA historie struktura HLA genů a molekul funkce HLA molekul nomenklatura HLA systému HLA asociace s nemocemi prezentace

Více

HLA B27: molekulární marker Ankylozující spondylitidy. Peter Novota. 16.2.2016, Praha

HLA B27: molekulární marker Ankylozující spondylitidy. Peter Novota. 16.2.2016, Praha HLA B27: molekulární marker Ankylozující spondylitidy Peter Novota 16.2.2016, Praha HLA B součást MHC komplexu HLA I. třídy (chromosom 6) úsek značně polymorfní antigeny se vyskytují na povrchu buněk podílí

Více

IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ POJIVA

IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ POJIVA IMUNOLOGIE Systémová autoimunitní onemocnění IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ POJIVA Antinukleární protilátky (ANA) IIF souprava pro stanovení protilátek

Více

Spadia News. Úvodní slovo Vážené kolegyně, vážení kolegové, SPADIA LAB, a.s.

Spadia News. Úvodní slovo Vážené kolegyně, vážení kolegové, SPADIA LAB, a.s. 26. číslo Červen 2018 Spadia News Úvodní slovo Vážené kolegyně, vážení kolegové, blíží se prázdniny a chceme vás, ještě před odjezdy na dovolenou, informovat o novinkách z naší laboratoře. Jedním z hlavních

Více

Molekulárně biologické metody v mikrobiologii. Mgr. Martina Sittová Jaro 2014

Molekulárně biologické metody v mikrobiologii. Mgr. Martina Sittová Jaro 2014 Molekulárně biologické metody v mikrobiologii Mgr. Martina Sittová Jaro 2014 Harmonogram 1. den Izolace DNA 2. den Měření koncentrace DNA spektrofotometricky, real-time PCR 3. den Elektroforéza Molekulární

Více

Výskyt MHC molekul. RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. ajor istocompatibility omplex. Funkce MHC glykoproteinů

Výskyt MHC molekul. RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. ajor istocompatibility omplex. Funkce MHC glykoproteinů RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc = ajor istocompatibility omplex Skupina genů na 6. chromozomu (u člověka) Kódují membránové glykoproteiny, tzv. MHC molekuly, MHC molekuly

Více

Aplikace průtokové cytometrie v klinické imunologii a hematologii

Aplikace průtokové cytometrie v klinické imunologii a hematologii Aplikace průtokové cytometrie v klinické imunologii a hematologii Lukáš Kubala kubalal@ibp.cz Laboratoř patofyziologie volných radikálů BFÚ AV ČR Imunologie - Stanovení statusu imunitního systému Vrozené

Více

Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky

Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny

Více

Intracelulární detekce cytokinů. http://www.biosite.se/viewglossary.aspx?id=93 Markéta Rodová Analytická cytometrie 2011 Cytokiny molekuly zapojené do procesu buněčné signalizace základní regulátory IS

Více

Modul IB. Histochemie. CBO Odd. histologie a embryologie. MUDr. Martin Špaček

Modul IB. Histochemie. CBO Odd. histologie a embryologie. MUDr. Martin Špaček Modul IB Histochemie CBO Odd. histologie a embryologie MUDr. Martin Špaček Histochemie Histologická metoda užívaná k průkazu různých látek přímo v tkáních a buňkách Histochemie Katalytická histochemie

Více

PROLIFERACE VIABILITA DIFERENCIACE (APOPTÓZA) Změna cytokinetických parametrů odráží efekt použitých modulátorů signálních drah

PROLIFERACE VIABILITA DIFERENCIACE (APOPTÓZA) Změna cytokinetických parametrů odráží efekt použitých modulátorů signálních drah CYTOKINETICKÉ PARAMETRY PROLIFERACE VIABILITA DIFERENCIACE (APOPTÓZA) Změna cytokinetických parametrů odráží efekt použitých modulátorů signálních drah PROLIFERACE Množení buněk mitózou Dostatek živin,

Více

Helena Langhansová. 30. listopadu 2011

Helena Langhansová. 30. listopadu 2011 VYUŽIT ITÍ PRŮTOKOV TOKOVÉ CYTOMETRIE V IMUNOLOGII Helena Langhansová 30. listopadu 2011 Projekt Vytvoření a rozvoj týmu zaměřeného na výzkum a výuku v oblasti medicínské biologie, reg. č. CZ.1.07/2.2.00/15.0361,

Více

IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA

IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA RIA zdravotní riziko krátký poločas rozpadů izotopů nákladné zařízení na měření radioaktivity EIA místo radioaktivity se měří enzymová aktivita není zdravotní riziko není nutné

Více

Proteinové znaky dětské leukémie identifikované pomocí genových expresních profilů

Proteinové znaky dětské leukémie identifikované pomocí genových expresních profilů Proteinové znaky dětské leukémie identifikované pomocí genových expresních profilů M.Vášková a spol. Klinika dětské hematologie a onkologie 2.LF UK a FN Motol Childhood Leukemia Investigation Prague Průtoková

Více

Princip a využití protilátkových mikročipů RNDr. Zuzana Zákostelská

Princip a využití protilátkových mikročipů RNDr. Zuzana Zákostelská Princip a využití protilátkových mikročipů RNDr. Zuzana Zákostelská Laboratoř buněčné a molekulární imunologie Odd. Imunologie a gnotobiologie MBÚ AVČR v.v.i, Praha Konference XXXIII. Imunoanalytické dny

Více

Polychromatická cytometrie - setup experimentu

Polychromatická cytometrie - setup experimentu Polychromatická cytometrie - setup experimentu Polychromatická cytometrie - setup experimentu Cíl: Najít nejlepší kompromis Hladina exprese Intenzita fluorochromu Četnost subsetu buněk Kvalitativní x kvantitativní

Více

PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD

PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD 1* P. Mikula, 1 B. Maršálek 1 Botanický ústav Akademie věd ČR, Oddělení experimentální fykologie a ekotoxikologie,

Více

Protinádorová imunita. Jiří Jelínek

Protinádorová imunita. Jiří Jelínek Protinádorová imunita Jiří Jelínek Imunitní systém vs. nádor l imunitní systém je poslední přirozený nástroj organismu jak eliminovat vlastní buňky které se vymkly kontrole l do boje proti nádorovým buňkám

Více

IMUNOFLUORESCENCE. Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU

IMUNOFLUORESCENCE. Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Luminiscence jev, při kterém látka emituje záření po absorpci excitačního záření (fotoluminiscence)

Více

6. T lymfocyty a specifická buněčná imunita

6. T lymfocyty a specifická buněčná imunita Obsah: 5. B lymfocyty a specifická látková imunita 5.1 Protilátky (imunoglobuliny, Ig) 5.2 Receptor B lymfocytů (BCR) a další signalizační molekuly 5.3 Subpopulace a vývoj B lymfocytů 5.4 Aktivace B lymfocytů

Více

Buněčný cyklus. Replikace DNA a dělení buňky

Buněčný cyklus. Replikace DNA a dělení buňky Buněčný cyklus Replikace DNA a dělení buňky 2 Regulace buněčného dělení buněčný cyklus: buněčné dělení buněčný růst kontrola kvality potomstva (dceřinných buněk) bránípřenosu nekompletně zreplikovaných

Více

CZ.1.07/2.4.00/31.0133

CZ.1.07/2.4.00/31.0133 BiochemNet - Vytvoření sítě pro podporu spolupráce biomedicínských pracovišť a zvýšení uplatnitelnosti absolventů biochemických oborů v praxi CZ.1.07/2.4.00/31.0133 Univerzita Palackého Přírodovědecká

Více

ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549

ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 O B S A H 1. Aplikace testovaných látek na buněčné kultury 2. Oxidační poškození DNA

Více

Metoda Live/Dead aneb využití fluorescenční mikroskopie v bioaugmentační praxi. Juraj Grígel Inovativní sanační technologie ve výzkumu a praxi

Metoda Live/Dead aneb využití fluorescenční mikroskopie v bioaugmentační praxi. Juraj Grígel Inovativní sanační technologie ve výzkumu a praxi Metoda Live/Dead aneb využití fluorescenční mikroskopie v bioaugmentační praxi Juraj Grígel Inovativní sanační technologie ve výzkumu a praxi Co je to vlastně ta fluorescence? Některé látky (fluorofory)

Více

IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI

IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI Radka Závodská, PedF JU v Českých Budějovicích Imunocytochemická metoda - použítí protilátky k detekci antigenu v buňkách (Imunohistochemie-

Více

Ústav molekulární a translační medicíny LF UP - cytometry

Ústav molekulární a translační medicíny LF UP - cytometry ZADÁVACÍ DOKUMENTACE ve smyslu zákona č. 137/2006 Sb., ve znění pozdějších předpisů (dále jen zákon ) a v souladu s podmínkami pro zadávání veřejných zakázek v rámci Operačního programu Výzkum a vývoj

Více

Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie

Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie Výukový materiál pro praktická cvičení z histologie Anna Malečková Vytvořeno v rámci projektu OP VVV Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance

Více

Ing. Martina Almáši, Ph.D. OKH-LEHABI FN Brno, Babákova myelomová skupina při Ústavu patologické fyziologie, LF MU, Brno

Ing. Martina Almáši, Ph.D. OKH-LEHABI FN Brno, Babákova myelomová skupina při Ústavu patologické fyziologie, LF MU, Brno Zpracování a využití biologického materiálu pro výzkumné účely od nemocných s monoklonální gamapatií Ing. Martina Almáši, Ph.D. OKH-LEHABI FN Brno, Babákova myelomová skupina při Ústavu patologické fyziologie,

Více

FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza

FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza FIA a CIA FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza Značky pro antigeny a protilátky: radioizotop enzym fluorescenční sonda luminiscenční sonda kovové

Více

BOVINE BLOOD NEUTROPHILS: INFLUENCE OF ISOLATION TECHNIQUES TO SURVIVAL KREVNÍ NEUTROFILY SKOTU: VLIV IZOLAČNÍCH TECHNIK NA ŽIVOTNOST

BOVINE BLOOD NEUTROPHILS: INFLUENCE OF ISOLATION TECHNIQUES TO SURVIVAL KREVNÍ NEUTROFILY SKOTU: VLIV IZOLAČNÍCH TECHNIK NA ŽIVOTNOST BOVINE BLOOD NEUTROPHILS: INFLUENCE OF ISOLATION TECHNIQUES TO SURVIVAL KREVNÍ NEUTROFILY SKOTU: VLIV IZOLAČNÍCH TECHNIK NA ŽIVOTNOST Sláma P. Ústav morfologie, fyziologie a veterinářství, Agronomická

Více

DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách

DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách Zadavatel tímto poskytuje dodavatelům v souladu s 49 odst. 4 zákona o veřejných zakázkách dodatečné informace k veřejné zakázce

Více

Funkce imunitního systému

Funkce imunitního systému Téma: 22.11.2010 Imunita specifická nespecifická,, humoráln lní a buněč ěčná Mgr. Michaela Karafiátová IMUNITA je soubor vrozených a získaných mechanismů, které zajišťují obranyschopnost (rezistenci) jedince

Více

Flowcytometrie u MG. - zasedání pracovní skupiny. Lucie Kovářová a kol. OKH, FN Brno

Flowcytometrie u MG. - zasedání pracovní skupiny. Lucie Kovářová a kol. OKH, FN Brno Flowcytometrie u MG - zasedání pracovní skupiny Lucie Kovářová a kol. OKH, FN Brno 2/26 Program setkání Program setkání 1) Využití flow cytometrie u MG 2) Zkušenosti jednotlivých center - zhodnocení dotazníku

Více

LRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 3. TESTY ŽIVOTASCHOPNOSTI A POČÍTÁNÍ BUNĚK

LRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 3. TESTY ŽIVOTASCHOPNOSTI A POČÍTÁNÍ BUNĚK LRR/BUBCV CVIČEÍ Z BUĚČÉ BILGIE 3. TESTY ŽIVTASCHPSTI A PČÍTÁÍ BUĚK TERETICKÝ ÚVD: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability). Tímto

Více

DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová

DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH Michaela Nesvadbová Význam identifikace živočišných druhů v krmivu a potravinách povinností každého výrobce je řádně a pravdivě označit

Více

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující

Více

Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha

Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha interakce antigenu s protilátkou probíhá pouze v místech epitopů Jeden antigen může na svém povrchu nést

Více

Vybrané parametry neurodegenerace u animálních modelů i lidí. Psychiatrické centrum Praha

Vybrané parametry neurodegenerace u animálních modelů i lidí. Psychiatrické centrum Praha Vybrané parametry neurodegenerace u animálních modelů i lidí Psychiatrické centrum Praha RNDr. Jan Říčný MUDr. Aleš Bartoš MUDr. Anna Kubešová Mgr. Michala Kolářová Mgr. Lenka Hromádková MUDr. Anna Kubešová

Více

Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:

Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup: Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)

Více

Diagnostika genetických změn u papilárního karcinomu štítné žlázy

Diagnostika genetických změn u papilárního karcinomu štítné žlázy Diagnostika genetických změn u papilárního karcinomu štítné žlázy Vlasta Sýkorová Oddělení molekulární endokrinologie Endokrinologický ústav, Praha Nádory štítné žlázy folikulární buňka parafolikulární

Více

Metody testování humorální imunity

Metody testování humorální imunity Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový

Více

Jan Krejsek. Funkčně polarizované T lymfocyty regulují obranný i poškozující zánět

Jan Krejsek. Funkčně polarizované T lymfocyty regulují obranný i poškozující zánět Funkčně polarizované T lymfocyty regulují obranný i poškozující zánět Jan Krejsek Ústav klinické imunologie a alergologie, FN a LF UK v Hradci Králové ochrana zánět poškození exogenní signály nebezpečí

Více

Serologické vyšetřovací metody

Serologické vyšetřovací metody Serologické vyšetřovací metody Serologické reakce Přímý průkaz Nepřímý průkaz průkaz antigenu průkaz nukleové kyseliny průkaz protilátek Nepřímý průkaz = průkaz specifických protilátek neboli průkaz serologický

Více

Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA)

Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice systémových autoimunitních onemocnění ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou

Více

PROTOKOL WESTERN BLOT

PROTOKOL WESTERN BLOT WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají

Více

Imunitní systém.

Imunitní systém. Imunitní systém Karel.Holada@LF1.cuni.cz Klíčová slova Imunitní systém Antigen, epitop Nespecifická, vrozená Specifická, adaptivní Buněčná a humorální Primární a sekundární lymfatické orgány Myeloidní

Více

Precipitační a aglutinační reakce

Precipitační a aglutinační reakce Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený

Více

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ IMUNOLOGIE Autoimunita IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) a soupravy

Více

laboratorní technologie

laboratorní technologie Průtoková cytometrie L. Roubalová Metoda průtokové cytometrie je v současné době považována za standardní metodu analýzy částic v suspenzi. Umožňuje kvalitativní a kvantitativní analýzu fyzikálních (optických)

Více

Aktuální výzkum kmenových buněk: ze zkumavky k terapeutickému využití

Aktuální výzkum kmenových buněk: ze zkumavky k terapeutickému využití Od fyziologie k medicíně Aktuální výzkum kmenových buněk: ze zkumavky k terapeutickému využití Tomáš Bárta, Dáša Doležalová, Aleš Hampl, Zuzana Holubcová, Josef Jaroš, Vladimír Vinarský Projekt Od fyziologie

Více

METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY. Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno

METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY. Vytvořilo Oddělení lékařské genetiky FN Brno METODY KLASICKÉ CYTOGENETIKY DETEKCE VROZENÝCH CHROMOSOMOVÝCH ABERACÍ Standardní postup: vyšetření metodami klasické cytogenetiky + následně metodami molekulární cytogenetiky pruhování / barvení chromosomů

Více

Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie

Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie RNDr. Jana Nechvátalová, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Reakce Ag - Ab primární fáze rychlá; vznik vazby

Více

strojů umožň lní vstupní infiltraci Mgr. Silvie Dudová, RNDr. Iva Burešová, Drahomíra Kyjovská

strojů umožň lní vstupní infiltraci Mgr. Silvie Dudová, RNDr. Iva Burešová, Drahomíra Kyjovská Možnosti a změny při p i zpracování vzorků kostní dřeně po aktivaci přístrojp strojů umožň žňujících ch selekci MM buněk k ve vysoké čistotě i při p i minimáln lní vstupní infiltraci Mgr. Silvie Dudová,

Více

Izolace RNA. doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD..

Izolace RNA. doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD.. Izolace RNA doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD.. Metodiky izolace RNA celková buněčná RNA ( total RNA) zahrnuje řadu typů RNA, které se mohou lišit svými fyzikálněchemickými vlastnostmi a tedy i nároky na jejich

Více

IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ JATER A ŽALUDKU

IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ JATER A ŽALUDKU IMUNOLOGIE Autoimunitní onemocnění jater a žaludku IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ JATER A ŽALUDKU Mitochondrie Hladké svalstvo Mikrosomy jater a ledvin Parietální buňky

Více

Fluorescenční sondy. Fluorescenční sondy. Indikátory pro anorganické ionty. Fluorescenční sondy pro využití v analytické chemii, medicíně a biologii

Fluorescenční sondy. Fluorescenční sondy. Indikátory pro anorganické ionty. Fluorescenční sondy pro využití v analytické chemii, medicíně a biologii Fluorescenční sondy Fluorescenční sondy vnější fluorofory, které se ke sledovaným molekulám, iontům, atd. váží nekovalentní vazbou změna fluorescenční vlastností (intenzita emise, posun emisního maxima,

Více

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického

Více

Metody vyšetření imunity

Metody vyšetření imunity Metody vyšetření imunity Motto lab.vyš Cílem je nalézt abnormální funkci imunitního systému, která přináší vysvětlení příznaků/nemoci /nemocí Některé chybné funkce se nemusí projevovat onemocněním pacienta

Více

Metody separace buněk Funkční testy lymfocytů. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. RNDr. Daniela Rožková, PhD. Ústav imunologie 2.

Metody separace buněk Funkční testy lymfocytů. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. RNDr. Daniela Rožková, PhD. Ústav imunologie 2. Metody separace buněk Funkční testy lymfocytů RNDr. Jan Lašťovička, CSc. RNDr. Daniela Rožková, PhD. Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody izolace buněk Historické shrnutí - První pokusy kolem r.

Více

SKANÁ imunita. VROZENÁ imunita. kladní znalosti z biochemie, stavby membrán n a fyziologie krve. Prezentace navazuje na základnz

SKANÁ imunita. VROZENÁ imunita. kladní znalosti z biochemie, stavby membrán n a fyziologie krve. Prezentace navazuje na základnz RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc Prezentace navazuje na základnz kladní znalosti z biochemie, stavby membrán n a fyziologie krve Rozšiřuje témata: Proteiny přehled pro fyziologii

Více

Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví

Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví Dle čl. 7 odst. 2 Směrnice děkana pro realizaci bakalářských

Více

FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP

FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP na gymnáziu Pierra de Coubertina v Táboře Pavla Trčková, kabinet Biologie, GPdC Tábor Co je fluorescence Fluorescence je jev spočívající v tom, že některé látky (fluorofory) po

Více

Stanovení základních lymfocytárních populací -Příprava k akreditaci IVD metoda

Stanovení základních lymfocytárních populací -Příprava k akreditaci IVD metoda Stanovení základních lymfocytárních populací -Příprava k akreditaci IVD metoda Mgr. Marcela Vlková, Ph.D; Mgr. Olga Tichá, Ph.D. Ústav klinické alergologie a imunologie, FNUSA, Brno RNDr. Veronika Kanderová,

Více

METODY STUDIA PROTEINŮ

METODY STUDIA PROTEINŮ METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání

Více

PREZENTACE ANTIGENU A REGULACE NA ÚROVNI Th (A DALŠÍCH) LYMFOCYTŮ PREZENTACE ANTIGENU

PREZENTACE ANTIGENU A REGULACE NA ÚROVNI Th (A DALŠÍCH) LYMFOCYTŮ PREZENTACE ANTIGENU PREZENTACE ANTIGENU A REGULACE NA ÚROVNI Th (A DALŠÍCH) LYMFOCYTŮ PREZENTACE ANTIGENU Podstata prezentace antigenu (MHC restrikce) byla objevena v roce 1974 V současnosti je zřejmé, že to je jeden z klíčových

Více

Imunofenotypizace leukemií z kostní dřeně, periferní krve, výpotku a mozkomíšního moku průtokovou cytometrií

Imunofenotypizace leukemií z kostní dřeně, periferní krve, výpotku a mozkomíšního moku průtokovou cytometrií Imunofenotypizace leukemií z kostní dřeně, periferní krve, výpotku a mozkomíšního moku průtokovou cytometrií 1) Použití validovaných kitů od výrobce značka CE/IVD 2) Home made metoda s vlastní (laboratoří

Více

Proč jsme zavedli cytometrické vyšetření uzlin. Tomáš Zajíc Oddělení klinické mikrobiologie a imunologie KNL a.s.

Proč jsme zavedli cytometrické vyšetření uzlin. Tomáš Zajíc Oddělení klinické mikrobiologie a imunologie KNL a.s. Proč jsme zavedli cytometrické vyšetření uzlin Tomáš Zajíc Oddělení klinické mikrobiologie a imunologie KNL a.s. Proč jsme zavedli cytometrické vyšetření uzlin? Protože nás o to požádali patologové Limitace

Více