Návod k odečítání. Disková difuzní metoda EUCAST pro vyšetřování antibiotické citlivosti. Verze 3.0 Duben 2013

Transkript

1 Návod k odečítání Disková difuzní metoda EUCAST pro vyšetřování antibiotické citlivosti Verze 3.0 Duben

2 Modifikace obrázkového návodu k odečítání EUCAST Verze Verze 3.0 Duben 2013 Verze 2.0 Květen 2012 Verze 1.1 Prosinec 2010 Verze 1.0 Duben 2010 Modifikace Objasnění odečítání týkající se nezřetelných okrajů zón, obr. 11 Stafylokoky změněny na S. aureus, obr. 15 a 21 Dodatečná informace k S. maltophilia a trimetoprimusulfametoxazolu, obr. 17 Další příklady pro enterokoky a vankomycin, obr. 20 Objasnění týkající se odečítání, obr. 3, 9, 10 a 22 Dodatečné příklady ohledně kolonií uvnitř zón obr. 6 Dodatečné příklady s nezřetelnými okraji zón u stafylokoků, obr. 10 Příklady s β-hemolýzou, obr. 13 Speciální pokyny pro S. maltophilia, obr. 17 Speciální pokyny pro E. coli a mecilinam, obr. 19 Další příklady pro enterokoky a vankomycin, obr. 20 Speciální pokyny pro stafylokoky a benzylpenicilin, obr. 21 Objasnění týkající se Enterobacteriaceae a ampicilinu na obr. 3 a 17 První zveřejnění obrázkového návodu k odečítání na webové stránce EUCAST 3

3 Odečítání zón Následující pokyny pro odečítání průměrů inhibičních zón jsou součástí diskové difuzní metody EUCAST. Odečítá se na plotně vzdálené zhruba 30 cm od oka, v místě úplné inhibice růstu na okraji inhibiční zóny (výjimky a speciální pokyny jsou na obr ). Průměry inhibičních zón se měří pravítkem, posuvným měřítkem nebo automatizovaným odečítačem zón. 4

4 Odečítání zón MH plotny se odečítají na spodní straně, v odraženém světle proti tmavému pozadí. MH-F plotny se odečítají zepředu po odstranění víčka, v odraženém světle. 5

5 Kolonie uvnitř zóny Odlišné kolonie uvnitř zóny se vyizolují, ověří se jejich čistota a případně se retestují. Nejedná-li o kontaminaci, je zapotřebí při odečítání zón vzít tyto kolonie do úvahy. Žádná zóna nebo žádná zóna Odečítání zón s koloniemi uvnitř zóny. 5

6 Kolonie uvnitř zóny Odlišné kolonie uvnitř zóny se vyizolují, ověří se jejich čistota a případně se retestují. Nejedná-li o kontaminaci, je zapotřebí při odečítání zón vzít tyto kolonie do úvahy. E. coli s ESBL H. influenzae s mutací PBP Žádná zóna Žádná zóna Odečítání zón s koloniemi uvnitř zóny. 6

7 Plazivé kolonie Odečítá se růst a plazení se přehlíží (vyskytuje se nejčastěji u Proteus spp). 7

8 Dvojité zóny Ověří se čistota a vyšetření se případně opakuje. Nejedná-li o kontaminaci, je při odečítání zón zapotřebí vzít tyto kolonie do úvahy. Odečítání dvojitých zón. 8

9 Neostré okraje zón Enterobacteriaceae Okraj zóny se odečítá proti tmavému pozadí, na plotně vzdálené zhruba 30 cm od oka. Nepoužívá se procházející světlo nebo lupa. Odečítání zón s neostrými okraji u Enterobacteriaceae. 9

10 Neostré okraje zón Stafylokoky Okraj zóny se odečítá proti tmavému pozadí, na plotně vzdálené zhruba 30 cm od oka. Nepoužívá se procházející světlo nebo lupa. Odečítání zón s neostrými okraji u stafylokoků. 10

11 Neostré okraje zón S. pneumoniae Při odečítání zón se berou do úvahy malé kolonie, viditelné na plotně vzdálené zhruba 30 cm od pouhého oka. Odečítání zón s neostrými okraji u S. pneumoniae. 11

12 Růst nebo hemolýza? Odečítá se inhibice růstu, nikoli inhibice hemolýzy. Někdy je obtížné rozlišit mezi hemolýzou a růstem. β-hemolyziny difundují do agaru. Z toho důvodu obvykle není přítomen růst uvnitř β-hemolýzy. α-hemolyziny do agaru nedifundují. V oblasti α-hemolýzy může být přítomen růst. U S. pneumoniae a β-laktamových antibiotik jsou okraje zón obvykle provázeny α-hemolýzou. 12

13 β-hemolýza Hemolýzu od růstu lze při odečítání snadněji odlišit na nakloněné plotně. β-hemolýza je obvykle bez růstu. S. pyogenes Streptokoky sk. C 13

14 α-hemolýza Hemolýzu od růstu lze při odečítání snadněji odlišit na nakloněné plotně. Růst je obvykle přítomen v celé oblasti α-hemolýzy. U některých kmenů se vyskytuje další α-hemolýza bez růstu. K odlišení růstu pomůže naklonění plotny! 14

15 Speciální pokyny k odečítání Trimetoprim a trimetoprim-sulfametoxazol obecně Stenotrophomonas maltophilia a trimetoprim-sulfametoxazol Enterobacteriaceae a ampicilin E. coli a mecilinam Enterokoky a vankomycin S. aureus a benzylpenicilin 15

16 Trimethoprim a trimetoprim-sulfametoxazol Následující pokyny jsou určeny odečítání vnitřních a dvojitých zón (příklady jsou uvedeny níže). Jemný, nepatrný růst kolem disku uvnitř zóny s jasnými okraji se přehlíží. E. coli KNS Moraxella Haemophilus 16

17 Stenotrophomonas maltophilia a trimetoprim-sulfametoxazol Přehlíží se růst uvnitř inhibiční zóny, který se běžně vyskytuje u Stenotrophomonas maltophilia a trimethoprimusulfametoxazolu. Hustota růstu v zóně může kolísat od jemného po masivní. Žádná zóna Pokud je viditelný jakýkoli okraj inhibiční zóny, pak se růst uvnitř přehlíží. Kmen je citlivý, pokud je průměr zóny 16 mm Rezistentní kmen: žádná inhibiční zóna, růst k disku. 17

18 Enterobacteriaceae a ampicilin Jemný růst, který se u některých šarží MH může vyskytnout jako vnitřní zóna, se přehlíží. Na některých šaržích se vnitřní zóna nevyskytuje, a pokud se odečítá vnější zóna, pak není mezi šaržemi rozdíl. 18

19 E. coli a mecilinam Kolonie uvnitř inhibiční zóny se přehlížejí. Žádná zóna 19

20 Enterokoky a vankomycin Zóny se prohlíží v procházejícím světle (plotna se drží v blízkosti světla). Neostré okraje zóny a kolonie uvnitř zóny ukazují na rezistenci k vankomycinu. Pokud je průměr zóny 12 mm a její okraje jsou neostré, je zapotřebí další vyšetření. E. faecalis ne-vre E. faecium VRE 20

21 S. aureus a benzylpenicilin Zóny se prohlíží v procházejícím světle (plotna se drží v blízkosti světla). Disková difuze je pro detekci producenta penicilinázy spolehlivější než MIC, pokud se měří průměr zóny a pečlivě se prohlíží její okraj. S. aureus s ostrým okrajem zóny a průměrem zóny 26 mm = rezistentní S. aureus s neostrým okrajem zóny a průměrem zóny 26 mm = citlivý 21

22 Návod k odečítání Okraje zóny se odečítají na plotně vzdálené zhruba 30 cm od oka, v místě úplné inhibice růstu. Výjimka E. coli Ciprofloxacin S. aureus Linezolid S. aureus Erytromycin Enterobacteriaceae Ampicilin Často se vyskytuje růst uvnitř oblasti α-hemolýzy! S. pneumoniae Chloramfenikol S. pneumoniae Tetracyklin S. pneumoniae Cefaklor 22