LABORATORNÍ PŘÍRUČKA ÚIA FN PLZEŇ Přehled laboratorních vyšetření, referenčních mezí a doporučení

Transkript

1 LABORATORNÍ PŘÍRUČKA ÚIA FN PLZEŇ Přehled laboratorních vyšetření, referenčních mezí a doporučení Účinnost od: Revize: 1x za rok Rozsah působnosti: Všechna pracoviště ZOK Příloha 9.2. Podrobný přehled metodik Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování IgG, IgA, IgM g/l sražená krev (sérum) 2x denně viz detaily Věk Imunoglobulin G A M 1D - 1M 7,00-16,00 nedokazatelné 0,10-0,30 1M - 3M 2,50-7,50 0,05-0,50 0,10-0,70 3M - 6M 1,80-8,00 0,08-0,80 0,20-1,00 6M - 12M 3,00-10,00 0,30-1,40 0,30-1,00 1R - 2R 3,50-10,00 0,30-1,20 0,40-1,40 Strana 1 (celkem 64)

2 2R - 5R 5,00-13,00 0,40-1,80 0,40-1,80 5R - 9R 6,00-13,00 0,60-2,20 0,40-1,60 9R - 13R 7,00-14,00 0,70-2,30 0,40-1,50 13R - 99R 7,00-16,00 0,70-4,00 0,40-2,30 Imunoglobuliny - glykoproteiny se složkou polypeptidickou a cukernou. Složené z lehkých a těžkých řetězců, dělící se na konstantní a variabilní část. Variabilní část obsahuje vazebné místo, vážící antigen. IgG: představuje asi 75% Ig v séru, dělí se dále na 4 podtřídy (viz). IgG je jediný Ig přestupující placentu a chránící novorozence do 3-6 měsíce života, kdy začíná tvorba vlastních IgG. IgA: imunoglobulin sliznic, v séru asi 15% Ig, velké množství obraženo v slizničních sekretech sliny, slzy, sekrety dýchacích cest, střevní sliznice, vaginální sliznice. Primární ochrana před virovými infekcemi působí protivirově přímo na sliznicích. IgM: asi 10% celkových Ig v séru, se vyskytuje ve formě pentamerů. Je protilátkou časné imunitní odpovědi. Nefelometrie na analyzátoru. Vyšetření základních tříd protilátek IgG, IgM, IgA dává obraz o stavu humorální imunity organismu.zvýšení hladin bývá nejčastěji známkou autoimunitních nemocí (zejména IgG) nebo chronických i akutních infekcí. Vysoké hladiny Ig (nad 20 g/l) jsou podezřením na myelom a vyžadují další vyšetření. Snížení Ig je známkou primárního či sekundárního imunodeficitu. Odchylky hladin imunoglobulinů: Strana 2 (celkem 64)

3 Ig Patologie snížení Patologie zvýšení IgG deficit primární deficit sekundární autoimunitní onemocnění jaterní choroby myelom IgG chronické infekce IgA deficit primární deficit sekundární ataxia teleangiectasia chronické infekce myelom IgA cirhóza jater IgA nefropatie IgM deficit primární deficit sekundární akutní hepatitis akutní infekce Waldenströmova choroba chronické jaterní léze hyper IgM sy myelom IgM Odběr - materiál: Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Zkumavka: Červená s gelem Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Podtřídy IgG g/l sražená krev (sérum) 2x měsíčně (čtvrtek 1. a 3. týden) viz detaily Věk Imunoglobulin G1 G2 G3 G4 Strana 3 (celkem 64)

4 0-1M 2,40-10,60 0,87-4,10 0,14-0,55 0,04-0,56 1M - 4M 1,80-6,70 0,38-2,10 0,14-0,70 0,03-0,36 4M - 6M 1,80-7,00 0,34-2,10 0,15-0,80 0,03-0,23 6M - 12M 2,00-7,70 0,34-2,30 0,15-0,97 0,03-0,43 12M - 18M 2,50-8,20 0,38-2,40 0,15-1,07 0,03-0,62 18M - 2R 2,90-8,50 0,45-2,60 0,15-1,13 0,03-0,79 2R - 3R 3,20-9,00 0,52-2,80 0,14-1,20 0,03-1,06 3R - 4R 3,50-9,40 0,63-3,00 0,13-1,26 0,03-1,27 4R - 6R 3,70-10,00 0,72-3,40 0,13-1,33 0,03-1,58 6R - 9R 4,00-10,80 0,85-4,10 0,13-1,42 0,03-1,89 9R - 12R 4,00-11,50 0,98-4,80 0,15-1,49 0,03-2,10 12R - 18R 3,70-12,80 1,06-6,10 0,18-1,63 0,04-2,30 18R - 99R 4,90-11,40 1,50-6,40 0,20-1,10 0,08-1,40 Strana 4 (celkem 64)

5 IgG protilátky se vyskytují ve čtyřech podtřídách IgG1, IgG2, IgG3 a IgG4, které rozdílně reagují s různými antigeny. Protilátky proti proteinovým antigenům se vyskytují převážně v podtřídě IgG1, někdy v kombinaci s IgG3, protilátky proti polysacharidovým antigenům opouzdřených bakterií se tvoří v podtřídě IgG2. Opakovaná dlouhodobá stimulace antigenem může vést ke specifické IgG4 odpovědi. Nefelometrie na analyzátoru. Vyšetření podtříd IgG může odhalit defekt imunity i při normální nebo zvýšené hladině celkového IgG. Pacienti s deficitem IgG1 a/nebo IgG3 mají sklon k rekurentním infekcím dolních dýchacích cest, pacienti s deficitem IgG2 spíše k opakovaným komplikovaným infekcím horních dýchacích cest. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Zkumavka: Červená s gelem Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování IgG pneumokok g/l sražená krev (sérum) 2x měsíčně (čtvrtek 1. a 3. týden) viz detaily Specifické IgG proti kapsulárním polysacharidovým antigenům pneumokoka (PCP) Strana 5 (celkem 64)

6 Obecné referenční hladin sp. IgG proti PCP nelze určit. Ve zdravé, neočkované populaci s běžným výskytem pneumokokových infekcí je v 95% hladina nad 15mg/l U imunokompetentních pacientů s akutní infekcí dosahují hladiny 4-5 násobku Postvakcinační hladiny u adolescentů a dospělých dosahují hodnot od 100 až do 300mg/l Novorozenci jsou do věku asi 2-3 měsíců chráněni mateřskými protilátkami. Skupina dětí do 2 let je riziková, neboť jejich imunitní systém ještě není schopen adekvátně reagovat na polysacharidové antigeny. Imunokompromitované děti jsou ze zákona očkovány. Postvakcinační hladiny u dětí 2 12 letých, očkovaných nekonjugovanou vakcinou se pohybují kolem mg/l. Hladiny po očkování konjugovanými vakcínami se neliší u očkovaných dětí od neočkovaných. Specifické IgG protilátky (zejména v podtřídě IgG2) ukazují funkční schopnost organismu reagovat na konkrétní infekční podněty nebo vakcinaci, tj.schopnost tvořit protilátky proti polysacharidovému antigenu pouzdra Streptococcus pneumonie. Hladiny těchto specifických protilátek u zdravého jedince ně stoupají v době infekce pneumokokem a po očkování pneumokokovou vakcinou. U pacientů s primárním (např. CVID) či sekundárním (např. AIDS) imunodeficitem je tato schopnost potlačena či snížena. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí. I při normálních hladinách IgG a IgG podtříd a klinice rekurentních infekcí opouzdřenými bakteriemi je indikováno toto vyšetření k vyloučení specifické poruchy tvorby protilátek. U splenektomovaných se doporučuje očkování proti pneumokoku a následné sledování hladin protilátek. Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 6 (celkem 64)

7 ! Při vyšetřování specifické tvorby protilátek po vakcinaci pneumokokovou vakcinou je doporučen odběr 6-8 týdnů po očkování! Parametr IgG Hemophilus infl. g/l Jednotky Materiál Humorální imunita sražená krev (sérum) Frekvence stanovování 1x měsíčně (čtvrtek 1.týden) Referenčn í viz detaily Specifické IgG proti kapsulárním polysacharidovým antigenům Hemophilus influenzae typ B (Hib) Obecné referenční hladin sp. IgG proti Hib nelze určit. U dospělé populace hladiny kolísají, při probíhající infekci způsobené Hemophilem infl. se pohybují kolem horní hranice 9mg/l. Postvakcinační hladiny dětí očkovaných v prvních dvou letech života kolísají mezi 1 9 mg/l, ale zvyšují se také při infekci. Za dostatečnou dlouhodobou protektivní hladinu je považováno >1 mg/l, za krátkodobou protektivní hladinu > 0,15 mg/l Očkování má bránit invazivním, těžkým onemocněním meningitis, epiglotitis. Nebrání běžným hemofilovým infekcím ani nosičství. Specifické IgG protilátky (zejména v podtřídě IgG2) ukazují funkční schopnost organismu reagovat na konkrétní infekční podněty nebo vakcinaci, tj.schopnost tvořit protilátky proti polysacharidovému antigenu pouzdra Hemophilus influenzae typ B. Hladiny těchto specifických protilátek u zdravého jedince ně stoupají v době hemofilové infekce a po očkování hemofilovou vakcinou. U některých pacientů s primárním (např. CVID) či sekundárním (např. AIDS) imunodeficitem je tato schopnost potlačena či snížena. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí. Strana 7 (celkem 64)

8 I při normálních hladinách IgG a IgG podtříd a klinice rekurentních infekcí opouzdřenými bakteriemi je indikováno toto vyšetření k vyloučení specifické poruchy tvorby protilátek. V současné době, kdy je celá dětská populace od 07/2001 očkována hemofilovou vakcínou je vyšetření hladiny specifických protilátek dobrým ukazatelem stavu humorální imunity. Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Při vyšetřování specifické tvorby protilátek po vakcinaci hemofilovou vakcinou je doporučen odběr 6-8 týdnů po očkování. U kojenců se schopnost tvorby protilátek hodnotí až po 3. dávce vakcíny. Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování ASLO kiu/l sražená krev (sérum) denně 0,0 360,0 ASLO (Antistreptolyzin O) Streptolyzin O je jedním z několika toxických imunogenních exoenzymů produkovaných ß hemolytickými streptokoky skupiny A. Zvýšení titru protilátek proti streptolyzinu O je známkou nedávné infekce ß hemolytickými streptokoky skupiny A. Nefelometrie s využitím polystyrenových partikulí na analyzátoru. Pomoc při diagnostice a léčbě streptokokové anginy, spály, akutní revmatické horečky a akutní glomerulonefritidy % jedinců s prbíhající streptokokovou infekcí nebo následným onemocněním má zvýšený titr ASLO. Za signifikantní vzestup titru protilátek je považován Strana 8 (celkem 64)

9 rozdíl ve výsledcích dvou vzorků séra (odběr na začátku onemocnění a po 4 týdnech) vyšší než 30%. Normálních hodnot bývá dosaženo do 6 měsíců. Perzistence vysoké hodnoty: pomocný diagnostický pro revmatickou horečku a pozdní následky streptokokových onemocnění. U kožních infekcí není zvýšení titru ASLO běžné. U zdravých dospělých lidí se titry ASLO pohybují do 200 kiu/l. Laboratorní výsledky by měly být vždy interpretovány ve spojitosti s dalšími klinickými nálezy. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Zkumavka: Červená s gelem Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování CRP mg/l sražená krev (sérum) denně viz detaily CRP (C-reaktivní protein) Věk Rozmezí 0-6D 0,00-15,00 6D - 2T 0,00-10,00 2T ,00-8,00 C-reaktivní protein je dominantním proteinem akutní fáze zánětu. Jeho syntéza je v jaterní tkáni stimulována přítomností tkáňového poškození (nekrotických buněk) při bakteriální infekci, malignitách, ischémii nebo Strana 9 (celkem 64)

10 při imunokomplexové tkáňové lézi. CRP se váže na biomembrány a složky jaderného aparátu nekrotických buněk (např. polysacharidový obal pneumokoků C /proto C-reaktivní protein/), identifikuje patogenní mikroorganismy a vlastní poškozené buňky a podílí se na jejich eliminaci prostřednictvím komplementového systému a fagocytujících buněk. Nefelometrie s využitím polystyrenových partikulí na analyzátoru. Diagnostika a monitorace akutní fáze infekčních a zánětlivých onemocnění včetně autoimunit, malignit (normální hodnoty CRP nevylučují malignitu), stavů spojených s operačním a traumatickým stresem, procesů postihujících cévy (endoteliální dysfunkce, rizikový faktor infarktu myokardu). CRP je specifičtějším vyšetřením při zánětu než rychlost sedimentace erytrocytů (FW) a počet leukocytů. Neprochází placentární bariérou, jeho koncentrace v séru novorozence není závislá na koncentraci v séru matky. U novorozenců max. zvýšení 2. den po porodu (resorpce nekrotické tkáně pahýlu pupečníku). Význam zvýšení: Až 1000x v průběhu hod, reaguje na dynamiku zánětu, indikuje závažnost stavu - zhoršená prognóza pacienta. Bakteriální infekce: vzestup během hod. na mg/l, při nekomplikovaném průběhu a úspěšné ATB terapii návrat k normálním hodnotám během 4 dnů. Perinatální těžší infekce (septikémie, meningitida, peritonitida): CRP vždy > než 50 mg/l. Bakteriálních sepse: purulentní meningitida CRP > 50mg/l v 80%. Virová infekce nebývá provázena zvýšením CRP ( při diferenciální diagnostice mezi bakteriální a virovou pneumonií). Aktivní stádia systémových autoimunitních onemocnění typu revmatoidní artritidy nebo jejích juvenilních forem, Bechtěrevovy Strana 10 (celkem 64)

11 choroby a systémových vaskulitid. Pacienti s hypogamaglobulinémií: CRP je ným markerem zánětu (nedochází u nich ke zvýšení FW). Chronicky vyšší hladiny CRP: riziko vzniku a progrese aterosklerózy. CRP nebývá zvýšeno u systémového lupus erythematodes, dermatomyozitidy, sklerodermie, Sjogrenova syndromu a u většiny orgánově specifických autoimunitních chorob. Výrazná zánětlivá aktivita v akutní fázi SLE nevede ke zvýšení CRP (v diskrepanci s vysokou FW). Vysoké CRP u SLE svědčí pro komplikující, většinou infekční proces. Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Zkumavka: Červená s gelem Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování ECP g/l sražená krev (sérum) 1x týdně (středa) 0,0-24,0 ECP (Eosinofilní kationický protein) ECP eozinofilní kationický protein je produkován aktivovanými eozinofily a je markerem probíhajícího alergického (eozinofilního) zánětu. Enzymatická imunoanalýza s chemiluminiscenční detekcí na analyzátoru. Strana 11 (celkem 64)

12 ECP je markerem intenzity probíhajícího alergického zánětu. Stanovení je využíváno zejména pro diagnostiku a monitorování léčby alergického průduškového astmatu, ale vyšší hladiny mohou být přítomny i u jiných alergických onemocnění a u atopické dermatitidy. Vzorek dodat co nejdříve po odběru do laboratoře! Vzorky mohou být skladovány při teplotě pod -20 C až tři měsíce, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Zkumavka: Červená s gelem Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Tryptáza g/l sražená krev (sérum) po domluvě 0,0-11,4 Tryptáza je mediátor alergické reakce uvolňovaný z žírných buněk ve tkáni po expozici alergenu. Její diagnostické stanovování je výhodnější oproti jiným mediátorům (např. histaminu) vzhledem k tomu, že není uvolňována z buněk periferní krve (bazofilů) tím je vyloučeno falešně pozitivní uvolnění in vitro, a má i delší poločas rozkladu in vivo, takže může být provedeno i několik hodin po prodělané alergické reakci. Zvýšená bazální sérová hladina tryptázy může být známkou přítomnosti systémové mastocytózy. Enzymatická imunoanalýza s fluorescenční detekcí na analyzátoru. Zvýšené hladiny tryptázy jsou detekovatelné od několika málo minut po anafylaktické reakci, maxima jsou zjišťována v intervalu cca 15 minut až 3 hodiny po reakci, zvýšené hladiny obvykle přetrvávají několik hodin. Hladina je úměrná intenzitě reakce. Detekce tryptázy má největší Strana 12 (celkem 64)

13 při diferenciální diagnostice anafylaktických reakcí např. polékových nebo po bodnutí hmyzem. Dlouhodobě zvýšené hladiny tryptázy jsou přítomny u mastocytózy. Při detekci zvýšené hodnoty je vhodné provést kontrolní odběr v odstupu 1-2 týdnů od reakce k ověření poklesu hladiny. Odběr až za 30 min. po anafylaktické příhodě. Co nejrychlejší transport do laboratoře. Vzorky mohou být skladovány při teplotě pod -20 C až tři měsíce, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Kryoglobuliny +/- sražená krev (sérum) dle objednání negativní Kryoglobuliny jsou abnormální sérové proteiny nebo bílkovinné komplexy precipitující při teplotách pod 37 C Spontánní 24-hodinová precipitace při teplotě 0-8 C s následným hodnocením zákalu. Přítomnost při některých virových (EBV, virová hepatitis) infekcí a autoimunitách. m projevem mohou být chladové urtikarie, otoky, Raynaudův sy., vaskulitis, purpura, glomerulonefritis. Nespecifická metoda. Nalačno! Krev nutno odebrat do media 37 C teplého a hned zpracovat v laboratoři. Strana 13 (celkem 64)

14 Vyšetření nutno objednat na laboratoři ÚIA Pacienti FN mohou být odebráni na lůžku laborantka přijde s mediem Pacienti mimo FN odběr na ambulancích ÚIA Parametr Jednotky Materiál IL-6 ng/l sražená krev (sérum) Humorální imunita Frekvence stanovování statim v pracovní dny od 7.00 do hod 2,0-15,0 Interleukin-6 je glykoprotein, který patří mezi tzv.cytokiny, tedy obecně molekuly, které přenášejí mezi imunitními buňkami důležité informace a regulují jejich růst, dělení a diferenciaci a dále zánět a imunitu vůbec. Interleukin-6 patří mezi tzv.prozánětlivé cytokiny: působí jednak prozánětlivě (tj.podporuje vznik a rozvoj zánětu) a jednak jako regulační (diferenciační) faktor pro různé imunitní buňky, zejména pak lymfocyty. Enzymatická imunoanalýza s chemiluminiscenční detekcí na analyzátoru metoda STATIM Stanovení interleukinu-6 se využívá jako marker sepse nebo bakteriálního onemocnění obecně. Význam zvýšení: Zvýšené hladiny se objevují u sepsí nebo bakteriálních infekcí obecně, toto zvýšení se objevuje dříve než např.u CRP a stejně tak k poklesu při ústupu onemocnění dochází dříve. Strana 14 (celkem 64)

15 Odběr: Vzorek dodat co nejdříve po odběru do laboratoře! Ve dnech pracovního volna dodat vzorek co nejdříve po odběru na příjem ÚKBH. Humorální imunita Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování CIK - PEG abs.j sražená krev (sérum) 1x týdně (pondělí) 0,0-60,0 Cirkulující imunokomplexy (CIK) Komplexy antigen protilátka cirkulující v periferii. Komplexy patologicky usazené v cévách a orgánech, kde způsobují tkáňové poškození nelze tímto vyšetřením odhalit. Precipitace s polyethylenglykolem v mikrotitračních destičkách s fotometrickou detekcí. Jde o vyšetření nespecifické, pomocné. Zvýšení cirkulujících imunokomplexů je nespecifickým jevem u imunokomplexových chorob, SLE, glomerulonefritid, vaskulitid, revmatoidní arthritidy, ale mohou být zvýšeny i u chronických infekčních onemocnění. V současné době je vhodnější vyšetřovat protilátky specifické pro jednotlivá onemocnění. Strana 15 (celkem 64)

16 Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Zkumavka: červená s gelem Alergie Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Celková hladina IgE kiu/l sražená krev (sérum) denně viz detaily Věk Rozmezí 0-6D 0,0-1,5 6D - 1R 0,0-15,0 1R - 5R 0,0-60,0 5R - 10R 0,0-90,0 Strana 16 (celkem 64)

17 10R - 15R 0,0-200,0 15R - 99R 0,0-100,0 IgE je třída protilátek uplatňující se fyziologicky zejména při obraně proti mnohobuněčným parazitům, patologicky hraje úlohu v patogeneze alergických reakcí časného typu Nefelometrie s využitím polystyrenových partikulí na analyzátoru. Celková hladina IgE protilátek bývá zvýšena u atopických pacientů, ale normální hladina nevylučuje přítomnost alergického onemocnění. Extrémně vysoké hodnoty (řádově tisíce IU/ml) bývají někdy přítomny u pacientů s atopickou dermatitidou. Zvýšené hodnoty jsou zjišťovány i u parazitárních onemocnění, vzácně i u zdravých osob. U extrémně vysokých hodnot je nutno vyloučit hyper IgE syndrom. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Alergie Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Alergen-specifické IgE kiu/l sražená krev (sérum) dle typu alergenu denně nebo 2x týdně (úterý, čtvrtek) 0,0-0,35 Strana 17 (celkem 64)

18 Alergen-specifické IgE protilátky se uplatňují přímo v patogeneze alergické reakce vůči danému alergenu. Po vazbě alergenu spouštějí uvolnění mediátorů alergické reakce (histaminu, leukotrienů atd.) žírnými buňkami a bazofily. Enzymatická imunoanalýza s chemiluminiscenční nebo fluorescenční detekcí na analyzátoru. Přítomnost alergen-specifických IgE protilátek je patognomonická pro alergické onemocnění. Laboratorní vyšetření specifických IgE protilátek doplňuje jejich detekci in vivo (kožními testy), případně ji nahrazuje (v případě, kdy není možno kožní testy provést). Pozitivita sp.ige protilátek je známkou senzibilizace organismu, nemusí znamenat klinické projevy alergie. Za jednoznačnou pozitivitu vyšetření je považována detekce hladiny 0,7 IU/ml a vyšší. Hladina spec. IgE nemusí korelovat s tíží alergického onemocnění. Nejčastěji je prováděno vyšetřování protilátek proti jednotlivým alergenům (případně jejich složkám rekombinatním alergenům), možné je provádět i vyšetření proti směsím několika různých alergenů spíše charakteru screeningu (např. tzv. Phadiatop /inhalační alergeny/, směs FX5 /potravinové alergeny/ atd.). Je třeba myslet na to, že při extrémně vysokých hladinách celkového IgE mohou být detekovány zvýšené hladiny spec. IgE, které mají z klinického pohledu charakter falešné pozitivity. Odběr: množství odebrané krve se řídí podle počtu vyšetřovaných alergenů 1 ml žilní krve cca 3-4 alergeny Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 18 (celkem 64)

19 Komplement Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Komplement KC, AC, MBL % sražená krev (sérum) 2x měsíčně (čtvrtek 1. a 3. týden) komentovaný výsledek Funkční vyšetření klasické, alternativní a mannanbinding lektinové cesty aktivace komplementu Komplement je složkou humorální imunity, jeho hlavní funkcí je opsonizace, chemotaxe a osmotická lýza cílové buňky. Při podezření na deficienci funkce komplementové kaskády provádíme vyšetření funkčnosti klasické, alternativní i mannan-lektinové cesty kaskády komplementu. ELISA Indikací k tomuto vyšetření jsou stavy po těžkých invazivních infekcích opouzdřenými bakteriemi, zejména meningokoky, gonokoky, ale i pneumokoky a hemofily, dále rekurentní průjmová onemocnění, která nemají jiné vysvětlení. Pacienti s deficiencí komplementu mohou mít větší sklon k HIV infekci a systémovým autoimunitám zejména SLE, vaskulitidám a glomerulonefritidám. Ke správnému provedení vyšetření a tedy k použitelnému výsledku je nutno ovšem krev po odebrání hned zpracovat. Nutné tedy bude pacienty odesílat k vyšetření na naše ambulance. Pokud půjde o pacienty na lůžku v rámci FN, bude vyšetření nutno předem domluvit v rámci konsiliárního vyšetření a laborantka nabranou krev ihned odnese ke zpracování. Odebírá se 5 ml žilní srážlivé krve do zkumavky bez separačního gelu. Komplement Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Strana 19 (celkem 64)

20 Složky komplementu C3 a C4 g/l sražená krev (sérum) denně viz detaily Věk C3 C4 0-1M 0,50-1,00 1M - 1R 0,80-1,70 1R - 15R 0,90-1,80 0,14-0,34 15R - 99R 1,00-1,80 Komplement je složkou humorální imunity, jeho hlavní funkcí je opsonizace, chemotaxe a osmotická lýza cílové buňky. C3 hraje klíčovou roli v komplementové kaskádě, při aktivaci C3 se sbíhá klasická i alternativní dráha aktivace. K jeho zvyšování dochází při akutních a chronických zánětech, snížení může být způsobeno zvýšenou spotřebou při imunopatologických dějích. C4 se spotřebovává pouze při klasické cestě aktivace komplementu, chová se analogicky s C3. Nefelometrie na analyzátoru. - vrozený imunodeficit jmenovaných komponent - dynamika imunopatologických onemocnění - snížená hladina C4 složky může signalizovat poruchu C1 inhibitoru Strana 20 (celkem 64)

21 Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Komplement Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování C1 inhibitor g/l sražená krev (sérum) denně 0,15-0,35 Kvantitativní výšetření C1-inhibitoru C1-inhibitor je regulační složka komplementu, která brzdí komplementovou kaskádu. Deficit C1-inhibitoru je přítomen u vrozeného hereditárního nebo získaného angioedému. Nefelometrie na analyzátoru. Diagnostika angioedému Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 21 (celkem 64)

22 Komplement Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování C1 inhibitor funkční test % sražená krev (sérum) 1x měsíčně (středa 1. týden) komentovaný výsledek Funkční test C1-inhibitoru Komplement je složkou humorální imunity, jeho hlavní funkcí je opsonizace, chemotaxe a osmotická lýza cílové buňky C1-inhibitor je regulační složka komplementu, která brzdí komplementovou kaskádu. Deficit C1-inhibitoru je přítomen u vrozeného hereditárního nebo získaného angioedému. ELISA - diagnostika angioedému Vzorek je nutno dodat co nejdříve, je nutno ho zpracovat do 6 hodin po odběru. Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování ANA (ANF) poz./neg sražená krev (sérum) denně, statim po domluvě negativní Strana 22 (celkem 64)

23 Antinukleární protilátky Antinukleární protilátky jsou autoprotilátky proti orgánově nespecifickým buněčným antigenům. ANA zahrnují protilátky proti antigenům jádra (DNA, RNA, histony, nukleoproteiny) a cytoplazmy (mitochondrie, mikrozomy, lysozomy, peroxizomy, Golgiho aparát). Nejčastější používanou metodou pro ANA je imunofluorescenční metoda, při které autoprotilátky vyvolávají různy druh fluorescence. Základní typy jsou homogenní typ (jde o protilátky proti cílovému antigenu ds-dna); periferní a zrnitý typ (protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům). Lze odečíst také fluorescenci dalších struktur, např. protilátky proti centroméře, proti jadérku, proti mitotickému aparátu aj. Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na preparátu Hep-2 buněk (buněčná linie odvozená od lidského karcinomu hrtanu) Titr sera pro hodnocení pozitivní reakce je 1:100 (Při pozitivitě v titru 1:100 možno hodnotit v titru 1:320, 1:1000 a 1:3200). Laboratorní vyšetření autoprotilátek přispívá k diagnóze autoimunitního onemocnění, eventuálně k posouzení jeho aktivity. Nález autoprotilátek však neznamená automaticky diagnózu autoimunitního onemocnění. Indikace vyšetření - neinfekční artritída - pleurální a perikardiální výpotek - onemocnění ledvin - hemolytická anemie, trombocytopenie, neutropenie - kožní změny (projevy sklerodermie, dermatomyositída, SLE a vaskulitidy) - Raynaudův fenomén - atypické neurologické a psychiatrické příznaky Tabulka výskytu ANA Klinická situace Výskyt v % Zdraví jedinci 5 Chronické infekce Dermatomyositis Polékový SLE Feltyho syndrom Strana 23 (celkem 64)

24 Juvenilní arthritis Nádorové onemocnění Jedinci nad 60 let (zdraví) < 30 Polyarteritis nodosa Revmatoidní artritis Revmatická horečka < 5 Sjoegrenův syndrom SLE Sklerodermie Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti-ds DNA kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (pondělí), statim po domluvě 0,0-300,0 Protilátky proti nativní dvouvláknové DNA (a-dsdna) Anti - dsdna jsou protilátky proti nativní dvouvláknové DNA. Jsou přítomny asi u 60% pacientů se SLE a jsou pro toto onemocnění patognomonické. Silně pozitivní nález je typický pro neléčený SLE. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. Při hodnotách nad 200 se provádí konfirmace nepřímou imunofluorescenční mikroskopií na preparátu s antigeny Crithidium lucilliae. Strana 24 (celkem 64)

25 Test je vysoce specifický pro aktivní, neléčený SLE (asi % případů). Vzácněji se vyskytuje v průběhu dalšího vývoje léčeného SLE. Možný výskyt i u jiných onemocnění např. systémové sklerodermie, polymyositis, dermatomyositis, Sjögrenův syndrom Laboratorní vyšetření autoprotilátek přispívá k diagnóze autoimunitního onemocnění, eventuálně k posouzení jeho aktivity. Nález autoprotilátek však neznamená automaticky diagnózu autoimunitního onemocnění. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti -nukleozomy kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (pondělí) 0,0-20,0 Protilátky proti nukleosomům Nukleozomy jsou komplexy bílkovin zajišťujících prostorové uspořádání dvoušroubovice DNA (dsdna) a samotné DNA. Z hlediska vyšetřování autoprotilátek namířených proti jaderným strukturám se jeví jako velmi specifická a senzitivní vyšetřování jak protilátky proti dsdna tak proti nukleozomům, zvláště v souvislosti s diagnostikou systémového lupus erytematodes (SLE). Toto vyšetření totiž umožňuje zachytit i přítomnost protilátek namířených proti konformačním epitopům, které nelze zjistit při vyšetření protilátek namířených jen proti dsdna. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. Strana 25 (celkem 64)

26 Zlepšení diagnostiky SLE Kromě SLE bývají tyto protilátky pozitivní i u léky indukovaného lupusu a zvláště pak u lupusové nefritidy. Podle některých studií se specificita vyšetření pohybovala kolem 99% a senzitivita 56%. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování ENA kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (úterý) screening 0,0-20,0 ENA typizace arb.j. sražená krev (sérum) dle doporučení 0.0-1,0 Extrahovatelné nukleární antigeny (ENA) jsou rozpustné jaderné a cytoplazmatické komponenty. Protilátky proti ENA jsou namířeny především proti ribonukleoproteinům a enzymům. Nejčastěji jsou stanovovány protilátky proti antigenům: Sm, U1-nRNP, SS-A, SS-B, Scl- 70, Jo-1. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí. Nejdříve se provádí tzv. ENA screening, což je vyšetření IgG protilátek Strana 26 (celkem 64)

27 proti směsi antigenů, při pozitivitě ENA screeningu následuje ENA typizace (konfirmace) provedena také metodou ELISA, která umožní stanovit autoprotilátku proti konkrétnímu antigenu. Laboratorní vyšetření autoprotilátek přispívá k diagnóze autoimunitního onemocnění, eventuálně k posouzení jeho aktivity. Nález autoprotilátek však neznamená automaticky diagnózu autoimunitního onemocnění. Indikace vyšetření: - neinfekční artritída - pleurální a perikardiální výpotek - onemocnění ledvin - hemolytická anemie, trombocytopenie, neutropenie - kožní změny (projevy sklerodermie, dermatomyositída, SLE a vaskulitidy) - Raynaudův fenomén - atypické neurologické a psychiatrické příznaky Diagnostické asociace Antigeny - cíl autoprotilátek Sm SS-A SS-B Scl-70 /td> Jo-1 U1-nRNP Asociace s nosologickou jednotkou SLE Sjögrenův syndrom, SLE Sjögrenův syndrom, SLE sklerodermie polymyozitída a dermatomyozitída /td> smíšena choroba pojiva, SLE Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Doporučení V laboratoři ÚIA je prováděno screeningové vyšetření protilátek proti komplexu antigenů ENA screen. Hranicí jasné pozitivity je v tomto vyšetření hodnota 20 kiu/l, při pozitivitě lze provést tzv. typizaci ENA, tj. vyšetření protilátek proti jednotlivým antigenům komplexu. Hodnoty Strana 27 (celkem 64)

28 mezi 10 a 20 kiu/l počítáme do tzv. šedé zóny. Tedy při hodnotách nad 10 kiu/l bude sérum v laboratoři uchováno po dobu 1 měsíce. Pokud si zašlete novou žádanku s požadavkem ENA typizace, bude toto vyšetření provedeno z uchovaného séra. Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování APA IgG, IgM kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (pátek) 0,00 15,00 Protilátky proti fosfolipidům: APA IgG, APA IgM Antifosfolipidové protilátky jsou namířené proti různým fosfolipidovým strukturám. V případě infekčních nemocí obvykle třídy IgM, namířeny proti antigenním strukturám mikroorganismů nebo proti fosfolipidům uvolněným z vlastních tkání poškozených infekčním procesem. V patogenetických mechanismech antifosfolipidového syndromu se uplatňují antifosfolipidové protilátky především třídy IgG, v některých případech také IgA proti kardiolipinu, fosfatidyletanolaminu, fosfatidylserinu, kyselině fosfatidové, hlavním cílovým antigen je ß2- glykoprotein, event. fosfatidylcholin. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. Antifosfolipidový syndrom - opakované hluboké žilní trombózy Plicní embolie Potraty Těžké nebo atypické migrény Trombocytopénie Recidivující CMP Vzácně jako samostatné onemocnění Častěji doprovází onemocnění pojivové tkáně: SLE (25 50 %), Sjogrenův syndrom, vaskulitidy /Behcetův syndrom/ (12%), virové (HIV-I, EBV, HSV, hepatitidy B a C) a bakteriální (syfilis, lymská borelióza, tuberkulóza, toxoplasmóza) infekce (35 %), solidní nádory, akutní leukémii, lymfoproliferativní onemocnění, mnohočetný myelom. Strana 28 (celkem 64)

29 Vyskytují se i u 2 10 % zdravých osob. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti-b2gp IgG,IgM kiu/l sražená krev (sérum) 2x měsíčně (čtvrtek 1. a 3. týden) 0,0-8,0 Protilátky proti beta2 glykoproteinu IgG a IgM β2 glykoprotein je hlavním cílovým antigenem, který se uplatňuje v patogenetických mechanismech antifosfolipidového syndromu. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. Strana 29 (celkem 64)

30 Frekvence stanovování Vyšetřování protilátek proti β2 glykoproteinu-i ve třídách IgG a IgM v séru, je součástí diagnostiky antifosfolipidového syndromu, vedle vyšetření antikardiolipinových protilátek. Podle mezinárodního konsenzu klasifikačních kritérií pro diagnózu antifosfolipidového syndromu (APS), (Sydney 2006) je toto vyšetření zařazeno do laboratorních kritérií spolu s vyšetřením lupus antikoagulant (LA) a vyšetřením antikardiolipinových protilátek. 1x za 14 dnů Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování ANCA poz./neg. sražená krev (sérum) denně, statim po domluvě negativní ANCA (protilátky proti cytoplazmě neutrofilů) Zkratka ANCA zahrnuje skupinu autoprotilátek namířených proti řadě antigenů cytoplasmatických granulí neutrofilních leukocytů. Protilátky proti serinové proteináze 3 vytváří cytoplazmatický (canca) Strana 30 (celkem 64)

31 obraz, protilátky proti myeloperoxidáze, ale také elastáze, katepsinu G, laktoferinu, lysozymu a BPI vytváří perinukleární (panca) fluorescenční obraz. Protilátky proti proteinu BPI a lysozymu vytvářejí atypický canca obraz. Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na etanolem (event. i formalínem) fixovaných neutrofilních granulocytech periferní krve. Fluorescenční obraz aktivity panca může být změněn s přítomností antinukleárních protilátek, proto je doporučováno provádět paralelně ANF. Při pozitivitě tohoto testu se autoprotilátky proti jednotlivým antigenům (proteináze a myeloperoxidáze) konfirmují ELISA testem. Potvrzení vaskulitid malých cév a některých nevaskulitických klinických syndromů, např. zánětlivých střevních onemocnění. canca - Wegenerova granulomatóza (90-98%), Churg-Straussové syndrom ( %) Cystická fibróza (50%), bakteriální endokarditida. panca - ostatní vaskulitidy: Churg- Straussové syndrom (60%), SLE, revmatoidní vaskulitis, rychle progredující glomerulonefritida (30-60%), polyarteritis nodosa. panca - zánětlivá střevní onemocnění, primární sklerozující cholangitis Tabulka souvislostí ANCA pozitivity s klinickými projevy C-ANCA P-ANCA atypická P-ANCA Wegenerova granulomatóza Mikroskopická polyangiitida Churg-Strauss syndrome Polyarteritis nodosa Strana 31 (celkem 64)

32 Rychle progredující glomerulonefritida SLE Revmatoidní artritida Ulcerativní kolitida Crohnova nemoc Primární sklerozující cholangitida Autoimunitní hepatitida Primární biliární cirhóza Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování ANCA typizace arb.j sražená krev (sérum) denně, statim po domluvě 0,0-1,0 ANCA typizace - ANCA protilátek ve třídě IgG proti myeloperoxidáze a proteináze 3 Proteináza 3: neutrální serinová proteáza 3. Myeloperoxidáza: katalyzátor peroxidázové reakce. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí. Význam ANCA protilátek proti dílčím antigenům: Strana 32 (celkem 64)

33 Protilátky proti proteináze (c-anca): Specifické pro Wegenerovu granulomatózu (98%, koncentrace autoprotilátky koreluje s aktivitou onemocnění) Cystickou fibrózu (50%) Mikroskopickou polyarteritis Syndrom Churga- Straussové (30%), ale i při bakteriální endokarditidě. Protilátky proti myeloperoxidáze (60% p-anca): Rychle progredující glomerulonefritida (30-60%) Syndrom Churga - Straussové (60%) Mikroskopická polyangiitis (60%) RA Polyarteritis nodosa Nespecifické střevní záněty SLE a jiná autoimunitní systémová onemocnění. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování RF - latex kiu/l sražená krev (sérum) denně 0,0 25,0 Strana 33 (celkem 64)

34 RF (Revmatoidní faktor anti IgG protilátky) RF jsou autoprotilátky proti Fc-oblasti IgG. RF náleží především ke třídě IgM, ale vyskytuje se i v ostatních třídách imunoglobulinů. Jsou hlavní složkou imunitních komplexů, které se nacházejí v séru a v synoviální tekutině nemocných s RA. Imunitní komplexy obsahující RF jsou schopny vázat a aktivovat komplementový systém. Množství RF v séru dobře koreluje s aktivitou artritidy, rozsahem kloubního poškození a s projevy vaskulitidy. Nefelometrie s využitím polystyrenových partikulí na analyzátoru. Revmatoidní artritida (70-90%), Feltyho a Stillův syndrom (20%). Význam v diferenciální diagnostice mezi RA a ostatními revmatoidními nemocemi. Při RA mají prognostický : vysoké koncentrace RF asociují s těžkým průběhem onemocnění. Někdy se vyskytují séronegativní typy RA bez zjištěných RF. RF mohou být i při hepatitidě, endokarditida a parazitické nebo virové infekci, SLE (30%), Sjogrenovu syndromu (90%), sklerodermii a polymyozitidě (30%). Se vzrůstající věkem stoupá počet pozitivních nálezů RF bez odpovídajících projevů onemocnění (po 65. roce 20%). RF bývá i u zdravých osob, které byly imunizovány. Po imunizačním stimulu dochází postupně k supresi sekrece RF, u nemocných s RA tvorba RF dlouhodobě přetrvává, dochází k izotypové přeměně z RF IgM na RF IgA a RF IgG. Nemocní s vysokými hladinami RF (zejména RF IgA) mají častější erozivní průběh RA. Samostatné RF nemůže sloužit k diagnóze, ale musí být interpretováno společně s dalšími klinickými nálezy. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud Strana 34 (celkem 64)

35 jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování RF IgG,IgA,IgM kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (středa) 0,00 15,00 Vyšetření revmatoidních faktorů ve třídách IgG, IgA, IgM RF jsou autoprotilátky proti Fc-oblasti IgG. RF náleží především ke třídě IgM, ale vyskytuje se i v ostatních třídách imunoglobulinů. Jsou hlavní složkou imunitních komplexů, které se nacházejí v séru a v synoviální tekutině nemocných s RA. Imunitní komplexy obsahující RF jsou schopny vázat a aktivovat komplementový systém. Množství RF v séru dobře koreluje s aktivitou artritidy, rozsahem kloubního poškození a s projevy vaskulitidy. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. Průkaz RF u séronegativních RA (20%): antiimunoglobulinová aktivita v izotopech IgG a IgA (20%), IgM (15%). Kvantita RF-IgG koreluje s aktivitou RA lépe než RF-IgM, provází sekundární vaskulitidy, svědčí pro horší prognózu onemocnění. Pozitivita RF-IgA signalizuje vážnější erozivní kloubní postižení v průběhu RA. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud Strana 35 (celkem 64)

36 jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Autoprotilátky - Systémové autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti-ccp kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (čtvrtek) 0,0 15,0 Anti-CCP (specifické autoprotilátky proti syntetickým cyklickým citrulinovaným peptidům) V synoviální membráně kloubů pacientů s revmatoidní artritidou (RA) byly nalezeny proteiny alfa a beta řetězce fibrinu reagující s tzv. antikeratinovými autoprotilátkami, prokázanými v séru nemocných a RA. Proteiny reagují jen pokud obsahují deiminovaný arginin citrulin, který je považován za cílový epitop protilátek. Proto byly vyvinuty syntetické peptidy obsahující citrulin. Byla zjištěna vysoká specificita 92% pro onemocnění RA, při sensitivitě 68%. ELISA na automatickém analyzátoru Jde o vysoce specifické vyšetření u pacientů s RA, jehož pozitivita předchází pozitivitu revmatoidních faktorů (RF), a vysoké hodnoty tohoto markeru jsou považovány za známku závažnějšího průběhu nemoci, při kterém častěji dochází k destrukci kloubních tkání.běžně vyšetřované RF bývá nespecificky pozitivní i u řady dalších systémových autoimunit (SLE 15-35%, Sjoegrenův sy 75-95%, MCTD 50-60%, systémová skleróza 20-30%), zatímco pozitivita protilátek proti CCP ukazuje na RA. U ostatních systémových chorob je pozitivita vzácná - 10% SLE, 0% systémová skleróza, 8% ostatní. Strana 36 (celkem 64)

37 Vzorek poslat ke zpracování co nejdříve po odběru. Sérum separované po odběru lze skladovat do 3 dnů při T 2-8st C, nebo zmražené na -20 st. C několik týdnů. Po rozmražení musí být zpracováno ihned. Zkumavka: červená s gelem Autoprotilátky - Gastrointestinální autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování Strana 37 (celkem 64)

38 anti - parietální buňky poz/neg sražená krev (sérum) 2x měsíčně (pátek 1. a 3. týden) negativní Protilátky proti parietálním buňkám žaludeční sliznice Antigenem jsou parietální buňky žaludeční sliznice. Tyto buňky jsou producentem HCl a podílí se na vstřebávání vitaminu B12. Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na tkaňových řezech krysích žaludků. Asociace s perniciózní anemií a chronickou atrofickou gastritidou. Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 38 (celkem 64)

39 Autoprotilátky - Gastrointestinální autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti - pankreas poz/neg sražená krev (sérum) 2x měsíčně (pondělí 1. a 3. týden) negativní Protilátky proti sekretu zevních vývodů pankreatu (a-pankreas) Antigenem jsou acinární buňky exokrinního pankreatu, které jsou producenty pankreatického izoenzymu alfa-amylázy. Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na tkáňových řezech opičích pankreatů. Asociace s M. Crohn Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 39 (celkem 64)

40 Autoprotilátky - Gastrointestinální autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti -pohárkové buňky tlustého střeva poz/neg sražená krev (sérum) 2x měsíčně (pondělí 1. a 3. týden) negativní Protilátky proti pohárkovým buňkám střevní sliznice Popis analytu Antigenem je 40kD protein pohárkových buněk sliznice tlustého střeva, který je součástí cytoskeletu těchto buněk tropomyosin. Protilátky proti tomuto antigenu se označují jako CCA-IgAb (colon-colitis-associatedigantibody). Hlavní funkcí pohárkových buněk je produkce hlenu. Popis metody Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na tkáňových řezech opičí střevní sliznice. Asociace s ulcerózni kolitidou Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 40 (celkem 64)

41 Parametr Jednotky Materiál ASCA IgA poz/neg Autoprotilátky Gastrointestinální autoimunity Frekvence stanovování sražená krev (sérum) 2x měsíčně (pondělí 1. a 3. týden) negativní Protilátky proti Saccharomyces cerevisiae IgA Popis analytu Antigenem jsou fosfopeptidomannany buněčných stěn kvasinek Saccharomycescerevisiae (ASCA). V patogenezi M. Crohn se v případě protilátek proti ASCA předpokládá imunopatologická odpověď na střevní mikroorganismy při zvýšené permeabilitě střevní stěny Popis metody Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na preparátu s antigeny Saccharomyces cerevisiae Asociace s M. Crohn Odběr - materiál Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Strana 41 (celkem 64)

42 Autoprotilátky - Gastrointestinální autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti ttg IgA kiu/l sražená krev (sérum) 2 x týdně (úterý, pátek) 0,00-15,0 Protilátky proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA Bylo zjištěno, že cílovým antigenem pro anti-endomysiální protilátky je tkáňová transglutamináza, tedy enzym štěpící bílkovinu gliadin; právě proti komplexu enzymu a jednoho ze štěpných produktů gliadinu vzniká u geneticky disponovaných jedinců imunitní reakce, jež vede u celiakie k poškození sliznice střeva. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. (Stanovují se pouze protilátky ve třídě IgA, ve třídě IgG nikoli.) Patří mezi základní screeningové sérologické metody detekce celiakie. Pozitivita protilátek ukazuje na přítomnost neléčené celiakie nebo dermatitis herpetiformis Dühring (která je kožním projevem intolerance lepku). Po nasazení bezlepkové diety protilátky postupně vymizí. Diagnózu celiakie je vždy třeba potvrdit pomocí charakteristického histologického nálezu ve střevní biopsii. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování. Strana 42 (celkem 64)

43 Autoprotilátky - Gastrointestinální autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování EMA IgA, IgG poz/neg sražená krev (sérum) po domluvě negativní Protilátky proti endomysiu IgA, IgG (Endomysial antibodies) Endomysium je složka pojivové tkáně, která obklopuje snopce hladkých svalů v určitých lokalizacích (např.v opičím jícnu či játrech, lidském pupečníku). Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie na tkáňových řezech krysích jater(testuje se přítomnost protilátek ve třídě IgA, po domluvě možno testovat i protilátky ve třídě IgG.) Vyšetření na přítomnost protilátek proti endomysiu již nepatří mezi základní screeningové sérologické metody detekce celiakie. Jako screeningová metodika bylo konsenzuálně určeno vyšetření autoporotiátek proti tkáňové transglutamináze. Přesto po domluvě protilátky proti endomysiu ve třídě IgA i IgG (v případě IgA deficience) můžeme vyšetřit. Pozitivita protilátek ukazuje na přítomnost neléčené celiakie nebo dermatitis herpetiformis Dühring (která je kožním projevem intolerance lepku). Po nasazení bezlepkové diety protilátky postupně vymizí. Diagnózu celiakie je vždy třeba potvrdit pomocí charakteristického histologického nálezu ve střevní biopsii. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich opakovanému rozmrazování Strana 43 (celkem 64)

44 Autoprotilátky - Gastrointestinální autoimunity Parametr Jednotky Materiál Frekvence stanovování anti - gliadin IgG,IgA kiu/l sražená krev (sérum) 1x týdně (úterý) 0,0-15,0 Protilátky proti deamidovanému gliadinu IgG, IgA Gliadin je bílkovina, která je frakcí lepku (směs proteinů tvořících součást zrn některých obilnin - např.pšenice, žito, ječmen). Předpokládá se, že nativní gliadinové peptidy jsou ve střevě selektivně deamidovány enzymem tkáňovou transglutaminázou. Selektivní deamidace zvyšuje antigenicitu peptidů a vyvolává tvorbu vysoce specifických protilátek jak ve třídě IgA, tak IgG u pacientů s celiakií. ELISA v mikrotitračních destičkách s kolorimetrickou detekcí na analyzátoru. Protilátky proti nativním gliadinu vykazují velmi nízkou specificitu v diagnostice celiakie. Naproti tomu protilátky proti deamidovaným gliadinovým peptidům jsou vysoce specifické, podle dosavadních studií srovnatelně senzitivní jako vyšetření protilátek proti ttg a proti endomysiu ve třídě IgA. Výhodou je ovšem vysoká specificita a senzitivita i ve třídě IgG, která umožňuje tímto testem diagnostikovat a sledovat IgA deficitní pacienty. Lze zpracovat i odsáté sérum - vzorky skladované 3 dny při teplotě +2 až +8 C nebo zamražené při teplotě pod -20 C pro delší uchování, pokud jsou zamraženy do 24 hodin po odběru a je zabráněno jejich Strana 44 (celkem 64)