Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 1. Mikrofluidní bioaplikace
|
|
- Antonín Dušek
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 1 Mikrofluidní bioaplikace
2 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 2 Mikrofluidní aplikace pro bioanalýzu Transport, dávkování, promíchávání a adresování vzorků, pufrů a dalších elektrolytů. Homogenní a heterogenní biologické interakce typu ligand-receptor. Separace biologických molekul. Detekce a kvantifikace biologických složek. Zařízení integrující některé nebo všechny předešlé kroky.
3 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 3 Typická zařízení pro mikrofluidní bioaplikace Kapilární/mikrokanálkové elektroforetické a isoelektrické fokusační systémy. Dielektroforetické a elektroosmotické třídiče a koncentrátory. Mikrokanálkové struktury pro řízený elektrokinetický transport vzorků. Mikrofluidní čipy pro proteinovou analýzu s různým stupněm integrace. Vysoce integrované mikrofluidní čipy pro analýzu DNA/RNA. Mikrofluidní PCR systémy. Kontinuálně pracující biosenzory. Průtokové cytometry
4 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 4 PCR polymerázová řetězová reakce Metoda používaná ke zmnožení molekuly DNA ze vzorku Ke zmnožení je dostačující jedna kopie DNA molekuly, z toho plyne citlivost metody na kontaminaci vzorku biologickým materiálem Metoda je založena na řízeném střídání teplotních cyklů, kdy dochází ke zmnožování DNA rychlostí 2 n, kde n je počet teplotních cyklů Cykly se skládají z následujících kroků denaturace dvojšroubovice DNA při C hybridizace primeru na specifické místo ssdna 62 C syntéza komplementárního řetězce termofilní DNA polymerázou C Řízení teplotního režimu je klíčovým problémem PCR metody V mikrofluidice je kvalitní řízení teplotního režimu umožněno vysokým poměrem teplosměnné plochy vůči reakčnímu objemu
5 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 5 Mikrofluidní čip pro dynamickou PCR V dynamickém uspořádání protéká roztok obsahující vzorek DNA, primery, báze a DNA polymerázu opakovaně různými teplotními zónami. Amplifikace molekul DNA (cca 30 cyklů) trvá obvykle kolem 30 minut. Transport reakční směsi je obvykle proveden elektroosmoticky.
6 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 6 Dynamická PCR v zařízení se segmentovaným tokem V každé červené kapce probíhá amplifikace DNA. Jednotlivé kapky jsou odděleny olejovou fází. Kapky proudí v mikrokanálech v různých teplotních zónách dochází k amplifikaci. Jedná se o kontinuální sériové uspořádání PCR. IMM Mainz.
7 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 7 Mikrofluidní čip pro stacionární PCR Ve stacionárním uspořádání je vzorek a ostatní komponenty umístěn v mikrofluidní komoře. Pomocí topných tělísek je měněna okolní teplota v požadovaných cyklech. Běžně je dosahováno rychlosti změn teploty okolo 30 C s -1. Toto uspořádání je typické pro klasické PCR systémy, kde je ovšem dosahováno mnohem pomalejších změn teploty. Mikrofluidní čipy jsou náchylnější na kontaminaci DNA kvůli vysoké vzájemné afinitě používaných konstrukčních materiálů a biologických molekul.
8 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 8 Příklady komerčních PCR čipů Stacionární PCR Dynamická PCR
9 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 9 Elektroforéza Separační metoda založená na různé pohyblivosti iontů ve vloženém elektrickém poli. Obvykle jsou separovány velké molekuly biologického původu fragmenty DNA, proteiny atd. K separaci dochází, pokud molekuly nesou odlišný efektivní elektrický náboj nebo se liší jejich molekulové hmotnosti. Nárůst molekulové hmotnosti koreluje s poklesem difúzního koeficientu složky. Separace je obvykle prováděna na stacionárním médiu (vrstvě gelu) nebo v mikrokapiláře/mikrokanálku s axiálně vloženým stejnosměrným elektrickým napětím Molekuly s odlišnou pohyblivostí se rozdělí do separovaných zón. Velikost a poloha zón vypovídají o kvantitativním a kvalitativním složení separované směsi. K elektroforetickému systému je připojen detektor.
10 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 10 Princip kapilární elektroforézy v mikrofluidních systémech Odpadní rezervoár W Rezervoár mobilní fáze - pufru Směr toku separovaných částic Odpadní rezervoár B Separační kanál Detektor W S Dávkování vzorku Rezervoár vzorku Zdroj stejnosměrného elektrického napětí
11 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 11 Využití elektroforézy elektroforetické kapilární pole Radiální matice separačních kanálků 96 kanálové mikrozařízení určené pro elektroforetickou separaci molekul DNA. Zařízení je opatřeno fluorescenčním detektorem. Separační kanál má průměr 200 mm. Kanálky dávkovacích zařízení mají šíři 110 mm a hloubku 50 mm. Délka separačních kanálů je 33 mm. Dávkovací zařízení
12 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 12 Využití elektroforézy automatizované 96-kapilárové zařízení pro separaci DNA 96 jamkové destička se vzorky DNA Separační kapiláry Zdroj vysokého napětí Fluorescenční detektor
13 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 13 Sekvenování DNA: Sangerova metoda
14 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana kanálová kapilární zařízení pro sekvenování DNA Zařízení slouží k detekci různě velkých fragmentů DNA vzniklých syntézou komplementárního řetězce DNA při sekvenování. Každá báze je označena specifickou značkou (jednou ze čtyř), jejíž přítomnost je možno detekovat pomocí laserem indukované fluorescence. Z pořadí detekovaných zón a barvy lze určit sekvenci bazí.
15 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 15 Příklad komerčních sekvenovacích zařízení s integrovanou kapilární elektroforézou MegaBACE 4000 Capillary Array (jedno pole obsahuje 64 kapilár). Přístroj lze dále rozšířit.
16 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 16 Využití elektroforézy příprava koncentrovaného analytu Polopropustná vrstva DF Schéma koncentrátoru Zvýšení koncentrace vzorku Přivedení vzorku DF Odvedení koncentrátu na separaci
17 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 17 Isoelektrická fokusace Separační metoda využívající odlišnosti hodnoty isoelektrického bodu různých biomolekul. Isoelektrický bod odpovídá hodnotě ph, kdy daná molekula nese celkově nulový elektrický náboj. Pokud je hodnota ph nižší, biomolekula získává celkově kladný elektrický náboj. Pro hodnoty ph vyšší je náboj biomolekuly celkově záporný. Fokusační metoda je založena na faktu, že biologická molekula migruje v elektrickém poli pouze tehdy, pokud je její celkový elektrický náboj nenulový. Jestliže je molekula transportována do oblasti, kde hodnota ph je rovna isoelektrickému bodu, její migrace se zastaví. V tomto místě může být poté detekována. Obvykle je používáno sériové uspořádání (viz dále). Mikrofluidní systémy umožňují také paralelní uspořádání.
18 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 18 Isoelektrická fokusace Klasické sériové uspořádání s imobilizovaným gradientem ph V klasickém uspořádání je vytvořen sendvič skládající se z gelových komůrek oddělených membránami. V každé komůrce je pomocí pufru nastavena určitá hodnota ph. Komůrky jsou řazeny v sérii tak, aby hodnota ph monotónně klesala nebo rostla. Na systém je vloženo elektrické pole a do některé komory je vložen vzorek obsahující biologické molekuly. Ty se poté migrují do komor, kde je hodnota ph blízká jejich isoelektrickému bodu.
19 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 19 Paralelní uspořádání komor s různou hodnotou ph Isoelektrická fokusace V paralelním uspořádání jsou komůrky s rozdílně nastavenými hodnotami ph odděleny nepropustnou přepážkou. V mikrofluidice je možno vytvořit velké pole komůrek s velmi malým charakteristickým rozměrem. Kolmo k tomuto komůrkovému poli je vložen gradient elektrického potenciálu a vzorek obsahující biologické molekuly je umístěn nad a/nebo pod komorami. Biomolekuly jsou poté separovány podle svého isoelektrického bodu v odpovídajících komůrkách. Uvedené řešení výrazně urychluje fokusaci vzhledem ke krátkým transportním vzdálenostem v laterálním směru. Je možno také využít automatických detektorů.
20 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 20 SDS-PAGE Western blot Nterminus antibody T Sch
21 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 21 Chemické a biochemické interakce Při interakci jedné nebo několika chemických komponent (reaktantů) může dojít k jejich chemické přeměně za vzniku produktů. Chemická přeměna probíhá za přítomnosti nebo bez přítomnosti katalyzátorů, které se přímo účastní transformace a snižují její aktivační energii. Reaktanty katalyzátor Produkty V biochemických reakcích dochází velmi často při interakci ligandu a receptoru ke tvorbě ligandreceptorového komplexu a/nebo jeho zpětné disociaci Ligand + Receptor Komplex
22 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 22 Uspořádání chemické interakce Homogenní všechny reaktanty i katalyzátor jsou v jedné fázi, obvykle kapalné například kompetitivní imunoanalýza v roztoku Ag (aq) + Ab (aq) C (aq) Heterogenní jeden nebo více reaktantů nebo katalyzátor je umístěn v jiné fázi než ostatní reaktanty například heterogenní imunoanalýza s antigenem nebo protilátkou vázanou na pevný nosič Ag (s) + Ab (aq) C (s)
23 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 23 Heterogenní biochemické reakce Heterogenní uspořádání je obvyklé u všech vysoce paralelizovaných aplikací DNA čipů nebo různých proteinových čipů. Jeden z reaktantů receptor je imobilizován buď na povrchu pevné fáze nebo v gelové vrstvě. Receptorem může být antigen, protilátka, proteinové ligandy a receptory (GF, EGFR), jiné proteiny, ssdna, RNA atd. Rozpoznávání se děje na základě specifity komplementární interakce mezi antigenem a protilátkou, ssdna-ssdna, enzymem a substrátem atd. Zatímco DNA čipy obsahují velké množství vazných míst (až desítky tisíc), u proteinů to bývají obvykle jednotky až desítky.
24 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 24 hemaglutinace
25 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 25 DNA čipy Zařízení pro detekci specifické sekvence bází v molekule DNA nebo RNA DNA čip je tvořen maticí detekčních míst (microarray) Detekční místa jsou obvykle tvořena gelem s imobilizovaným receptorem ssdna (denaturovaná jednořetězcová DNA) V analyzovaném vzorku jsou přivedeny fluorescenčně značené ssdna (ligandy) V případě komplementarity ligandu a receptoru proběhne hybridizace a stabilní dsdna (dvouřetězcová DNA) je vytvořena v detekčním místě Po odmytí nenavázané ssdna, může být provedena fluorescenční detekce.
26 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 26 DNA čipy DNA čipy vykazují extrémní specifitu, která je závislá na počtu párů bází (pb) ve vzniklém komplexu ligandreceptor (~ 4 n, kde n je počet pb). Charakteristický rozměr detekčních míst bývá v mm, což umožňuje vytváření obrovských matic detekčních míst (fotolitografie, microspotting, inject printing). Na jednom DNA čipu mohou být vázány všechny sekvence DNA kódující nějaký gen určitého organizmu (cca desítky tisíc míst) DNA čipy jsou využívány pro detekci genetických poruch (mutací), identifikaci osob (DNA fingerprint), detekci přítomnosti virových nebo bakteriálních infekcí, zjišťování nejúčinnějšího léčebného postupu u závažných onemocnění (personal therapy)
27 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 27 Princip DNA čipu- schéma Typický fluorescenční obraz DNA čipu po hybridizaci
28 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 28
29 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 29 DNA čipy Pod detekčním místem (gelem) bývá umístěna elektroda Vložené elektrické pole urychluje transport DNA ze vzorku k detekčnímu místu vlivem elektroforetické migrace Analýzu na čipu tak lze urychlit z hodin na minuty Zapojením vybraných elektrod je možné složky vzorku usměrňovat (adresovat) pouze ke zvoleným detekčním místům Vzhledem k univerzálnosti interakce ssdnassdna a její vysoké specificitě, je již mnoho DNA čipů dodáváno komerčně
30 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 30 Příklady komerčních DNA čipů DNA čip firmy Nanogen se 100 testovacími místy s uloženými mikroelektrodami pro adresování. DNA čip s možností adresování standardního připojení k řídící jednotce. Typická čtečka signálu DNA čipů
31 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 31 Na DNA čipu může být umístěn celý genom libovolného organizmu DNA čip Escherichia coli detekčních míst (25 pb) o průměru 11 mm Sledování exprese až 5500 transkriptů Affymetrix, Inc. DNA čip Drosophila melanogaster (octomilka) detekčních míst (25 pb) o průměru 11 mm Sledování exprese až transkriptů Affymetrix, Inc. DNA čip Myš detekčních míst (25 pb) o průměru 11 mm Sledování exprese až transkriptů Affymetrix, Inc. DNA čip Člověk detekčních míst (25 pb) o průměru 11 mm Sledování exprese až transkriptů Affymetrix, Inc.
32 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 32 Příklady komerčních DNA čipů Vzhledem k vysoké specificitě hybridizační reakce lze princip DNA čipů použít např. ke zvýšení bezpečnosti různých čipových karet Každá sekvence DNA je spojena se specifickým signálem elektronického čipu karty. Tento signál může být identifikován pomocí čtecího zařízení s komplementárním signálem.
33 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 33 Proteinové čipy Interakce mezi dvěma komplementárními proteiny nebo proteinem a molekulou nebílkovinné povahy Proteiny jsou velmi rozmanité molekuly proteiny, lipoproteiny, glykoproteiny fibrilární a globulární hydrofilní nebo hydrofóbní charakter povrchu isoelektrický bod, celkový elektrický náboj protilátky, antigeny, enzymy, receptory, ligandy, substráty řádové rozdíly v molekulární hmotnosti Specificita nebývá absolutní, enzym je schopen zpracovávat více substrátů, protilátky se mohou vázat na více antigenů (epitopů)
34 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 34 Proteinové čipy Z uvedených vlastností plyne, že žádný proteinový čip nemůže být tak univerzální a specifický jako DNA čipy Přístup ke konstrukci proteinového čipu také není univerzální, protože každá aplikace vyžaduje zvláštní přístup, což je determinováno charakterem zkoumaného proteinového systému Obvykle není vyžadován vysoký stupeň paralelizace (jedno až několik desítek detekčních míst) Typickým příkladem může být čip pro paralelní detekci několika antigenů spjatých s různými infekčními chorobami
35 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 35 Proteinové čipy Proteinové čipy mají řádově menší charakteristické rozměry než klasické systémy pro detekci proteinů (např. ELISA destičky) řádové snížení doby analýzy (např. rychlá diagnostika) snížení spotřeby proteinových reaktantů (cena) přenositelnost systému (k pacientovy, na místo analýzy) snadnější paralelizace reprodukovatelnější reakční podmínky (přesné dávkování, lepší homogenizace vzorku, ) Protože proteinové čipy nejsou masově rozšířené chybí univerzální porty ceny analýz jsou podstatně dražší než v klasických systémech, protože pořizovací náklady na detektory, obslužné zařízení i samotné čipy jsou obrovské čipy jsou vyráběny v malých sériích výhody proteinových čipů nepronikly mezi odbornou veřejnost
36 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 36 Příklad imunoanalýzy v homogenním uspořádání Kompetitivní imunoanalytické stanovení teofylinu v homogenním uspořádání. Dávkování reaktantů a manipulace s roztoky je založena na elektroosmotickém transportu.teofylin ze vzorku (5) a známé množství značeného teofylinu (6) jsou nejprve smíchány. Poté jsou inkubovány s omezeným množstvím protilátky (7). Vznikají komplexy značeného a neznačeného teofylinu s protilátkou a zůstává část nespotřebovaného značeného teofylinu. Značený teofylin a značený teofylin v komplexu jsou následně na základě různé elektroforetické mobility odděleny v separačním kanále a jejich množství je detekováno.
37 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 37 Příklad imunoanalýzy v homogenním uspořádání Míchání a inkubace Kalibrační křivka relativní poměr značeného teofylinu volného a v komplexu vypovídá o koncentraci neznačeného teofylinu ve vzorku. Separace
38 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 38 Příklad imunoanalýzy v homogenním uspořádání Vysoce integrované šestikanálové zařízení pro paralelní imunoanalýzu v homogenním uspořádání. Zařízení obsahuje pouze jeden fluorescenční detektor. Separace komplexu a značeného antigenu se provádí na základě rozdílných elektroforetických mobilit. Využit elektroosmotický transport roztoků.
39 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 39 Mikrofluidní čip pro detekci proteinů na pevné fázi Reakční komora Zařízení kombinuje následující procesy: imobilizace proteinu, inkubace, proplachování, detekce a regenerace. Transport je uskutečněn výhradně elektrokineticky. Heterogenní stanovení IgG ze vzorku vazbou na imobilizovaný Protein A
40 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 40 Mikrofluidní čip pro detekci proteinů na pevné fázi Fluorescenční detekce vázané protilátky Kvantifikace signálu v elektroosmotickém biosenzoru kalibrační křivka
41 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 41 Polystyrénový mikročip pro detekci IgG Experimentální mikročip testovaný pro přímou a sendvičovou detekci lidských IgG na Proteinu A. Protein A je imobilizován na stěně zařízení. Vzorek je přiveden v roztoku. Doba inkubace je 5 minut. Paralelizace kanálů umožňuje sestavení kalibračních křivek nebo paralelní detekci různých vzorků.
42 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 42 Polystyrénový mikročip pro detekci IgG Intenzita fluorescenčního zabarvení v konkrétním kanále po vymytí zbytku vzorku vypovídá o koncentraci imobilizovaného komplexu PA-hIgG nebo PA-hIgGgIgG a tedy i o původní koncentraci IgG v analyzovaném vzorku.
43 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 43 Polystyrénový mikročip pro detekci IgG Analýzou intenzity fluorescenčního signálu je možno získat kalibrační křivky mikrofluidního zařízení. Z nich lze pomocí matematického modelu určit rovnovážné a kinetické konstanty vazby ligand-receptor. Rychlostní konstanta Ab Ag kon C Rovnovážná konstanta K k d off k on Imobilizovaný Protein A a lidské IgG v roztoku k on = 5.5 m 3 mol -1 s -1 K d mol m -3
44 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 44 PDMS mikročip pro kvantifikaci protilátek Mikročip z polydimethylsiloxanu (PDMS) Vynikající optické vlastnosti, snadná výroba Hydrofobní charakter povrchu Dvoukroková detekce myších protilátek migg higg glutardialdehyde migg FITC-gIgG
45 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 45 PDMS mikročip pro kvantifikaci protilátek Měřen profil fluorescenční emise napříč čipem Schéma detekční aparatury Zařízení obsahuje excitační laser a fotonásobič
46 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 46 PDMS mikročip pro kvantifikaci protilátek Výsledkem je kalibrační závislost intenzity fluorescenčního signálu na koncentraci myších protilátek ve vzorku
47 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 47 Mikročip pro heterogenní imunoanalýzu na vrstvě částic Sendvičová heterogenní imunoanalýza stanovení CEA (carcinoembryonic antigen) při diagnostice rakoviny. Mikrofluidní zařízení obsahuje mikročástice s imobilizovanou Ab proti CEA. CEA ze vzorku se váže na protilátku. Na vzniklý komplex se váží protilátky proti CEA a dále zlatem značené protilátky proti CEA protilátkám. Komplex obsahující zlaté částice může být detekován.
48 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 48 Mikročip pro heterogenní imunoanalýzu na vrstvě částic Zařízení obsahuje lože mikročástic. Úniku mikročástic je zabráněno zúžením kanálku. Roztoky obsahující analyty jsou dávkovány tlakem řízenou konvekcí. Zařízení je schopno zpracovávat paralelně několik vzorků.
49 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 49 Příklad komerčních proteinových čipů Kompaktní analyzátor Sandia fluorescenčně značených proteinových toxinů nm koncentrace Jádrem analyzátoru je mikrofluidní čip fungující na principu kapilární elektroforézy Modrý diodový laser excituje fluorescenční značku proteinů Transport vzorků je realizován elektrokineticky
50 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy 50 Průtoková cytometrie Metoda slouží k identifikaci a kvantifikaci specifických buněk třídění buněk Typické aplikace detekce rakovinných buněk v krvy, detekce mikroorganizmů Buňky se pohybují v sérii kanálkem a specifické buňky (například značené fluoreskující protilátkou) jsou opticky detekovány
51 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy 51 Průtokový cytometr v mikrofluidním čipu Chen HT, Wang YN, MICROFLUIDICS AND NANOFLUIDICS 6, , 2009
52 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 52 FACS - fluorescence activated cell sorting
53 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy 53 Elektrostatický dezintegrátor buněk Krátkodobé pulsy (50 ms) silného elektrického pole ( Vm -1 ) dezintegrují buněčnou membránu/stěnu Carlos de la Rosa et al, IEEE TRANSACTIONS ON BIOMEDICAL ENGINEERING, VOL. 55, NO. 10, OCTOBER 2008
54 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 54 Dielektroforéza v AC elektrickém poli Dielektroforetická síla působí částice dielektrika v nehomogenním elektrickém poli Jedná se o interakci časově proměnného elektrického pole (AC) a parciálního náboje molekul nebo částic dielektrika (dipólu) Částice nemusí nést celkový elektrický náboj Velikost dielektroforetické síly závisí na tvaru částice, elektrických vlastnostech částic a okolního kapalného média, frekvenci AC elektrického pole Dielektroforetická síla nezávisí na polaritě elektrického pole Částice jsou vtahovány do oblastí s nejvyšší intenzitou elektrického pole, pokud je jejich dielektrická konstanta vyšší (jsou lépe polarizovatelné) než dielektrická konstanta okolního média (pozitivní dielektroforéza) Částice jsou vtahovány do oblastí s nejnižší intenzitou elektrického pole, pokud je jejich dielektrická konstanta nižší (jsou hůře polarizovatelné) než dielektrická konstanta okolního média Vysoce selektivní metoda pro manipulaci a separaci mikro a nanočástic, buněk atd.
55 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 55 Dielektroforéza v mikročipu - příklad Separování a koncentrování směsi kvasinek a polystyrénových mikročástic Buňky malé, světlé Polystyrénové mikročástice velké, tmavé (Zhou et al., 2005)
56 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Přednáška #12 Strana 56 Dielektroforéza - princip Frekvenčně závislá pozorovatelná až při velmi vysokých frekvencích (reorientace dipólů) Lépe (rychleji) jsou polarizovány dielektrika s větší dielektrickou konstantou Tato více polarizovaná dielektrika jsou vtahovány do oblasti větších intenzit elektrického pole (pozitivní dielektroforéza) Částice více polarizované vytlačují z těchto míst částice méně polarizované (negativní dielektroforéza) + d + d d + d
57 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 57 Dielektroforéza celková síla působící na kulovou částici Pro malé frekvence je Clausius- Mossotiho faktor (člen v závorce záporný) Pro vyšší frekvence je kladný f i g E r F k k rms m p m p m DEP * 2 * * * * 3
58 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 58 Detektor červených krvinek založený na dielektroforéze Minerick et al. Electrophoresis (2003). Ve AC elektrickém poli se částice s odlišnou dielektrickou konstantou než má nosný elektrolyt koncentrují v místech největší nebo nejmenší intenzity elektrického pole. Buňky jsou také odpuzovány z povrchu elektrod vlivem elektrodové polarizace interagující s polarizací buněčné membrány.
59 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 59 Kombinovaný AC elektroosmotický mísič a dielektroforetický koncentrátor Systém dvou soustředných elektrod na které je vloženo AC elektrické pole. Tangenciální coulombovskou silou je ke středu centrální elektrody strháván elektrický náboj tvořený polarizací elektrody. Pohybující se náboj strhává tekutinu, která proudí tangenciálně ke středu elektrody a poté normálovým směrem od elektrody. Dochází tak k promíchávání roztoku. Nad středem centrální elektrody jsou potom dielektroforetickou silou selektivně zachytávány molekuly DNA.
60 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 60 Detektor bakterií založený na elektroosmotickém transportu ve střídavém elektrickém poli Zachycení Escherichia coli ve stagnantních bodech elektrod. Wu et al. Microfluid Nanofluid (2005). Páry ko-planárních elektrod. AC zdroj vytváří časově proměnné elektrické pole. Vlivem tangenciální složky elektrického pole dochází ke tvorbě vírů. Nad určitým místem elektrod vzniká stagnantní bod s nulovou tangenciální coulombovskou silou a bez pohybu tekutiny, kde jsou zachycovány částice buňky.
61 Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 61 Hlavní budova ÚFE je situována v severní části Prahy, v Kobylisích, a je snadno dostupná z MHD. Nejjednoduším způsobem, jak se dopravit k hlavní budově ÚFE, je využití Pražského metra. Vystupte z metra na trase C v zastávce "KOBYLISY". Odtud je to již přibližně 10 minut pěšky. Můžete ale rovněž nasednout do tramvaje č. 17 ve směru "VOZOVNA KOBYLISY". Hlavní budova ÚFE se nachází mezi zastávkami "LÍBEZNICKÁ" a "VOZOVNA KOBYLISY". Hned po vystoupení z tramvaje uvidíte velkou žlutou budovu s malou věžičkou a anténami (parabolami) na střeše.
Princip DNA čipu- schéma
DNA čipy Zařízení pro detekci specifické sekvence bází v molekule DNA nebo RNA DNA čip je tvořen maticí detekčních míst (microarray) Detekční místa jsou obvykle tvořena gelem s imobilizovaným receptorem
VíceVícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 1. Mikrofluidní bioaplikace
Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 1 Mikrofluidní bioaplikace Vícefunkční chemické a biochemické mikrosystémy Strana 2 Mikrofluidní aplikace pro bioanalýzu Transport, dávkování, promíchávání
VíceMicrofluidic systems, advantages and applications Monika Kremplová, Mgr.
Název: Školitel: Microfluidic systems, advantages and applications Monika Kremplová, Mgr. Datum: 21. 6. 2013 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.3.00/20.0148 Název projektu: Mezinárodní spolupráce v oblasti "in
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceImunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
VíceMetody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
VícePokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii
Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 1/1 Proč biofyzikální metody? Biofyzikální metody využívají fyzikální principy ke studiu biologických systémů Poskytují kvantitativní
VíceHybridizace nukleových kyselin
Hybridizace nukleových kyselin Tvorba dvouřetězcových hybridů za dvou jednořetězcových a komplementárních molekul Založena na schopnosti denaturace a renaturace DNA. Denaturace DNA oddělení komplementárních
VíceRekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer
Rekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer Virologie a diagnostika Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i., Brno Alternativní
VíceImplementace laboratorní medicíny do systému vzdělávání na Univerzitě Palackého v Olomouci. reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/
Implementace laboratorní medicíny do systému vzdělávání na Univerzitě Palackého v Olomouci reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/28.0088 Hybridizační metody v diagnostice Mgr. Gabriela Kořínková, Ph.D. Laboratoř molekulární
VíceVýzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.
Výzkumné centrum genomiky a proteomiky Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Systém pro sekvenování Systém pro čipovou analýzu Systém pro proteinovou analýzu Automatický sběrač buněk Systém pro sekvenování
VícePrůtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)
Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.
VíceDNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová
DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH Michaela Nesvadbová Význam identifikace živočišných druhů v krmivu a potravinách povinností každého výrobce je řádně a pravdivě označit
VíceHmotnostní spektrometrie
Hmotnostní spektrometrie Princip: 1. Ze vzorku jsou tvořeny ionty na úrovni molekul, nebo jejich zlomků (fragmentů), nebo až volných atomů dodáváním energie, např. uvolnění atomů ze vzorku nebo přímo rozštěpení
VíceModerní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví. René Kizek
Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví René Kizek 12.04.2013 Fluorescence je fyzikálně chemický děj, který je typem luminiscence. Luminiscence se dále dělí
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
VíceVizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN
ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
VíceAfinitní kapilární elektroforéza
Pražské analytické centrum inovací Projekt CZ.04.3.07/4.2.01.1/0002 spolufinancovaný ESF a Státním rozpočtem ČR Afinitní kapilární elektroforéza Věra Pacáková a Tereza Vařilová PřF UK Praha Obsah 1. Úvod
VíceIzolace nukleových kyselin
Izolace nukleových kyselin Požadavky na izolaci nukleových kyselin V nativním stavu z přirozeného materiálu v dostatečném množství požadované čistotě. Nukleové kyseliny je třeba zbavit všech látek, které
VíceZkušební okruhy k přijímací zkoušce do magisterského studijního oboru:
Biotechnologie interakce, polarita molekul. Hydrofilní, hydrofobní a amfifilní molekuly. Stavba a struktura prokaryotní a eukaryotní buňky. Viry a reprodukce virů. Biologické membrány. Mikrobiologie -
VíceMetody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
VíceAPLIKOVANÉ ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
APLIKOVANÉ ELEKTROMIGRAČNÍ METODY Princip: migrace elektricky nabitých částic v elektrickém poli Druhy iontů: +, -, obojaký (zwitterion), vícenásobný Typy migrace: a) přímá migrují ionty analytů b) nepřímá
VíceIZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
Více1. Definice a historie oboru molekulární medicína. 3. Základní laboratorní techniky v molekulární medicíně
Obsah Předmluvy 1. Definice a historie oboru molekulární medicína 1.1. Historie molekulární medicíny 2. Základní principy molekulární biologie 2.1. Historie molekulární biologie 2.2. DNA a chromozomy 2.3.
VíceFluorescence (luminiscence)
Fluorescence (luminiscence) Patří mezi luminiscenční metody fotoluminiscence. Luminiscence efekt, kdy excitované molekuly či atomy vyzařují světlo při přechodu z excitovaného do základního stavu. Podle
VíceSerologické vyšetřovací metody
Serologické vyšetřovací metody Serologické reakce Přímý průkaz Nepřímý průkaz průkaz antigenu průkaz nukleové kyseliny průkaz protilátek Nepřímý průkaz = průkaz specifických protilátek neboli průkaz serologický
VíceChemické senzory Principy senzorů Elektrochemické senzory Gravimetrické senzory Teplotní senzory Optické senzory Fluorescenční senzory Gravimetrické chemické senzory senzory - ovlivňov ování tuhosti pevného
VíceTypy molekul, látek a jejich vazeb v organismech
Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Organismy se skládají z molekul rozličných látek Jednotlivé látky si organismus vytváří sám z jiných látek,
VíceTECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K část B
TECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K část B OBSAH Sestava pro vertikální elektroforézu... 2 Jednotka pro elektroforézu... 3 Termocykler... 4 Elektrický zdroj pro elektroforézu...
VícePrincip a využití protilátkových mikročipů RNDr. Zuzana Zákostelská
Princip a využití protilátkových mikročipů RNDr. Zuzana Zákostelská Laboratoř buněčné a molekulární imunologie Odd. Imunologie a gnotobiologie MBÚ AVČR v.v.i, Praha Konference XXXIII. Imunoanalytické dny
VícePříklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie. Miroslav Průcha
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie Miroslav Průcha Příklady optických technik Atomová absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie kinetická
VíceMikročipy v mikrobiologii
Mikročipy v mikrobiologii doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2014 Obsah přednášky 1) Charakteristika biočipů, DNA microarrays a DNA chip 2) Výroba čipů, charakteristika
VíceVeronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha
Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha interakce antigenu s protilátkou probíhá pouze v místech epitopů Jeden antigen může na svém povrchu nést
VíceSTAFYLOKOKOVÉ ENTEROTOXINY. Zdravotní nezávadnost potravin. Veronika Talianová, FPBT, kruh: 346 Angelina Anufrieva, FPBT, kruh: 336
STAFYLOKOKOVÉ ENTEROTOXINY Zdravotní nezávadnost potravin Veronika Talianová, FPBT, kruh: 346 Angelina Anufrieva, FPBT, kruh: 336 OBSAH: Základní charakteristika Staphylococcus aureus Stafylokokové enterotoxiny
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální choroby
VíceSeminář izolačních technologií
Seminář izolačních technologií Zpracoval: Karel Bílek a Kateřina Svobodová Podpořeno FRVŠ 2385/2007 a 1305/2009 Úpravy a aktualizace: Pavla Chalupová ÚMFGZ MZLU v Brně 1 Lokalizace jaderné DNA 2 http://www.paternityexperts.com/basicgenetics.html
VíceVícefázové reaktory. Probublávaný reaktor plyn kapalina katalyzátor. Zuzana Tomešová
Vícefázové reaktory Probublávaný reaktor plyn kapalina katalyzátor Zuzana Tomešová 2008 Probublávaný reaktor plyn - kapalina - katalyzátor Hydrogenace méně těkavých látek za vyššího tlaku Kolony naplněné
VíceEnterotoxiny Staphylococcus aureus. Jana Kotschwarová Andrea Koťová
Enterotoxiny Staphylococcus aureus Jana Kotschwarová Andrea Koťová Obsah Charakteristika Staphylococcus aureus Vlastnosti Faktory virulence Enterotoxiny Patogeneze Výskyt Metody stanovení Prevence výskytu
VícePolymerázová řetězová reakce. Základní technika molekulární diagnostiky.
Polymerázová řetězová reakce Základní technika molekulární diagnostiky. Kdo za to může? Kary Mullis 1983 Nobelova cena 1993 Princip PCR Polymerázová řetězová reakce (polymerase chain reaction PCR) umožňuje
VícePrecipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie Mgr. Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny Ag - Ab hypervariabilní oblasti - antigen vazebná aktivita
VíceLuminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii
Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Kvantitativní analýza: F = k φ Φ o Vysoká citlivost metody: 2.3 c l ε použití laserů odezva na relativně malé změny v okolí
VíceMolekulární diagnostika
Molekulární diagnostika Odry 11. 11. 2010 Michal Pohludka, Ph.D. Buňka základní jednotka živé hmoty Všechny v současnosti známé buňky se vyvinuly ze společného předka, tedy buňky, která žila asi před 3,5-3,8
VíceNové metody v průtokové cytometrii. Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P.
Nové metody v průtokové cytometrii Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P. Průtoková cytometrie Analytická metoda využívající interakce částic a záření. Technika se vyvinula z počítačů částic Počítače
VíceSDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE)
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) Princip SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza slouží k separaci proteinů na základě jejich velikosti (molekulové hmotnosti). Zahřátím vzorku za
Více1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
VíceMetody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin
Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Nukleové kyseliny analýza a manipulace Elektroforéza (délka fragmentů, čistota, kvantifikace) Restrikční štěpení (manipulace s DNA, identifikace
VíceLABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) Použití GC-MS spektrometrie
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) C Použití GC-MS spektrometrie Vedoucí práce: Doc. Ing. Petr Kačer, Ph.D., Ing. Kamila Syslová Umístění práce: laboratoř 79 Použití GC-MS spektrometrie
VícePrincipy a instrumentace
Průtoková cytometrie Principy a instrumentace Ing. Antonín Hlaváček Úvod Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceMetody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin
Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Nukleové kyseliny analýza a manipulace Elektroforéza (délka fragmentů, čistota, kvantifikace) Restrikční štěpení (manipulace s DNA, identifikace
VíceZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN
ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN Možnosti stanovení Listeria monocytogenes popis metod a jejich princip Mária Strážiková Aleš Holfeld Obsah Charakteristika Listeria monocytogenes Listerióza Metody detekce
VíceMolekulárně biologické a cytogenetické metody
Molekulárně biologické a cytogenetické metody Molekulárně biologickému vyšetření obvykle předchází na rozdíl od všech předcházejících izolace nukleových kyselin, což je ve většině případů DNA jako nositelka
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceMETODY STUDIA PROTEINŮ
METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání
VíceStanovení potenciálu a elektroosmotické mobility v mikrofluidním čipu
Stanovení potenciálu a elektroosmotické mobility v mikrofluidním čipu Úvod V mikrofluidních aparátech proudí kapalné nebo plynné médium soustavou mikrokanálkových struktur [1 2]. Zpravidla je tekutina
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován
VíceMetody molekulární biologie
Metody molekulární biologie 1. Základní metody molekulární biologie A. Izolace nukleových kyselin Metody využívající různé rozpustnosti Metody adsorpční Izolace RNA B. Centrifugační techniky o Princip
VíceMendělejevova tabulka prvků
Mendělejevova tabulka prvků V sušině rostlin je obsaženo přibližně 45% uhlíku, 42% kyslíku, 6,5% vodíku, 1,5% dusíku a 5% minerálních prvků. Tzv. organogenní prvky (C, O, H, N) představují tedy 95% veškerých
VícePrecipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie RNDr. Jana Nechvátalová, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Reakce Ag - Ab primární fáze rychlá; vznik vazby
VíceHMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním
HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním prostředí - farmakokinetické studie - kvantifikace proteinů
Vícelaktoferin BSA α S2 -CN α S1 -CN Popis: BSA bovinní sérový albumin, CN kasein, LG- laktoglobulin, LA- laktalbumin
Aktivita KA 2340/4-8up Stanovení bílkovin v mléce pomocí SDS PAGE (elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s přídavkem dodecyl sulfátu sodného) vypracovala: MVDr. Michaela Králová, Ph.D. Princip: Metoda
VíceTřífázové trubkové reaktory se zkrápěným ložem katalyzátoru. Předmět: Vícefázové reaktory Jméno: Veronika Sedláková
Třífázové trubkové reaktory se zkrápěným ložem katalyzátoru Předmět: Vícefázové reaktory Jméno: Veronika Sedláková 3-fázové reakce Autoklávy (diskontinuální) Trubkové reaktory (kontinuální) Probublávané
VíceStanovení biochemicky významných flavinů pomocí kapilární elektroforézy s fluorescenční detekcí
Teoretická část Stanovení biochemicky významných flavinů pomocí kapilární elektroforézy s fluorescenční detekcí Mezi biochemicky významné flaviny patří kofaktory flavinmononukleotid (FMN) a flavinadenindinukleotid
VícePříprava vektoru IZOLACE PLASMIDU ALKALICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLACE DNA GELOVÁ ELEKTROFORÉZA RESTRIKČNÍ ŠTĚPENÍ. E. coli. lyze buňky.
Příprava vektoru IZOLCE PLSMIDU LKLICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLCE DN E. coli plasmidová DN proteiny proteiny + + vysrážená plasmidová lyze buňky + snížení ph chromosomální DN centrifugace DN chromosomální
VíceLABORATOŘ OBORU I. Příprava diagnostického testu na bázi lateral flow immunoassay ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111)
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) C Příprava diagnostického testu na bázi lateral flow immunoassay Vedoucí práce: Ing. Aram Zolal Ing. Lukáš Filip Umístění práce: laboratoř S58 1. Úvod
VíceCHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).
CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou
VíceStanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou
Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Úkol Stanovte obsah cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce pomocí kapilární elektroforézy. Teoretická část Cholesterol je steroidní
VíceHybridizace. doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz
Hybridizace doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2013 Obsah přednášky 1) Způsoby provedení hybridizace 2) Hybridizace v roztoku 3) Příprava značených sond 4) Hybridizace
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti CHROMATOGRAFIE
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti CHROMATOGRAFIE Chromatografie co je to? : široká škála fyzikálních metod pro analýzu nebo separaci komplexních směsí proč je to super?
VíceBiosenzory. Helena Uhrová
Biosenzory Helena Uhrová L.C.Clarc, článek o O 2 elektrodě, 1956 1962, symposium v New Yorku oxidoredukční enzym glukózooxidáza byl uchycen na dialyzační membránu a s ní na kyslíkovou elektrodu - enzymová
VíceSeparační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip
Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (Gas chromatography, zkratka GC) je typ separační metody, kdy se od sebe oddělují složky obsažené ve vzorku a které mohou být převedeny do plynné
VíceMetody separace. přírodních látek
Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897
VíceMagPurix Blood DNA Extraction Kit 200
MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 Kat. č. ZP02001-48 Doba zpracování: 50-60 minut pro MagPurix 12S 50-70 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 je určena pro izolátor
VíceProjekt realizovaný na SPŠ Nové Město nad Metují
Projekt realizovaný na SPŠ Nové Město nad Metují s finanční podporou v Operačním programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost Královéhradeckého kraje Modul 02 Přírodovědné předměty Hana Gajdušková 1 Viry
VíceKlinická a farmaceutická analýza. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Klinická a farmaceutická analýza Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Spojení separačních technik s hmotnostní spektrometrem Separační
VíceELEKTRICKÉ POLE V BUŇKÁCH A V ORGANISMU. Helena Uhrová
ELEKTRICKÉ POLE V BUŇKÁCH A V ORGANISMU Helena Uhrová Hierarichické uspořádání struktury z fyzikálního hlediska organismus člověk elektrodynamika Maxwellovy rovnice buňka akční potenciál fenomenologická
VícePrvní testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti
První testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti Vysvětlete co znamená pojem α-aminokyselina Jaký je rozdíl mezi D a L řadou aminokyselin Kolik je základních stavebních aminokyselin a z čeho jsou odvozeny
VíceMetody práce s proteinovými komplexy
Metody práce s proteinovými komplexy Zora Nováková, Zdeněk Hodný Proteinové komplexy tvořeny dvěma a více proteiny spojenými nekovalentními vazbami Van der Waalsovy síly vodíkové můstky hydrofobní interakce
VícePolymorfizmy detekované. polymorfizmů (Single Nucleotide
Polymorfizmy detekované speciálními metodami s vysokou rozlišovací schopností Stanovení jednonukleotidových polymorfizmů (Single Nucleotide Polymorphisms - SNPs) Příklad jednonukleotidových polymorfizmů
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/
I n v e s t i c e d o r o z v o j e v z d ě l á v á n í Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti IMUNOCHEMICKÉ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti IMUNOCHEMICKÉ METODY ZÁKLADNÍ TERMÍNY antigen jakákoli látka, se kterou specificky reaguje protilátka imunogen látka schopná vyvolat v
VíceVÝUKOVÝ MODUL MEMBRÁNOVÝCH PROCESŮ TÉMATA PŘEDNÁŠEK
VÝUKOVÝ MODUL MEMBRÁNOVÝCH PROCESŮ TÉMATA PŘEDNÁŠEK TRANSPORT LÁTEK MEMBRÁNAMI Transport látek porézními membránami - Plouživý tok nestlačitelných tekutin vrstvou částic - Plouživý tok stlačitelných tekutin
VíceNěkteré vlastnosti DNA důležité pro analýzu
Některé vlastnosti DNA důležité pro analýzu Spiralizace Denaturace Záporný náboj Syntéza Ligace Rekombinace Mutabilita Despiralizace Reasociace Štěpení Metody používané k analýze DNA Southern blotting
VíceZÁKLADNÍ MODELY TOKU PORÉZNÍ MEMBRÁNOU
ZÁKLADNÍ MODELY TOKU PORÉZNÍ MEMBRÁNOU Znázornění odporů způsobujících snižování průtoku permeátu nástřik porézní membrána Druhy odporů R p blokování pórů R p R a R m R a R m R g R cp adsorbce membrána
VíceMagnetické částice, izolace a detekce chřipky (hemaglutininu)
Název: Magnetické částice, izolace a detekce chřipky (hemaglutininu) Školitel: Ludmila Krejčová, MVDr. Datum: 7.11. 2013 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního
VíceBiologie buňky. systém schopný udržovat se a rozmnožovat
Biologie buňky 1665 - Robert Hook (korek, cellulae = buňka) Cytologie - věda zabývající se studiem buňek Buňka ozákladní funkční a stavební jednotka živých organismů onejmenší známý uspořádaný dynamický
VíceU = E a - E k + IR Znamená to, že vložené napětí je vyrovnáváno
Voltametrie a polarografie Princip. Do roztoku vzorku (elektrolytu) jsou ponořeny dvě elektrody (na rozdíl od potenciometrie prochází obvodem el. proud) - je vytvořen elektrochemický článek. Na elektrody
VíceDETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018
DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii Izolační a separační metody, 2018 Detektory v kapalinové chromatografii Typ detektoru Zkratka Měřená veličina Refraktometrický detektor RID index lomu Spektrofotometrický
VíceDELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay
DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay Fluoroimunoanalytická metoda vyvinutá finskou firmou Wallac Oy (LKB Pharmacia), velmi citlivá a specifická metoda pro stanovení nízko- i
VíceMOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII. Martina Nováková, VŠCHT Praha
MOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII Martina Nováková, VŠCHT Praha MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE V BIOREMEDIACÍCH enumerace FISH průtoková cytometrie klonování produktů PCR sekvenování
VíceTematické okruhy pro státní závěrečné zkoušky v navazujícím magisterském studiu na Fakultě chemicko-inženýrské v akademickém roce 2015/2016
Tematické okruhy pro státní závěrečné zkoušky v navazujícím magisterském studiu na Fakultě chemicko-inženýrské v akademickém roce 2015/2016 1. Průběh státní závěrečné zkoušky (SZZ) navazujících magisterských
VíceDiagnostické metody v analýze potravin. Matej Pospiech, FVHE Brno
Diagnostické metody v analýze potravin Matej Pospiech, FVHE Brno Důvody diagnostiky potravin Dodržování legislativních požadavků Vlastní kontrola v provozu Národní legislativa Evropská a mezinárodní legislativa
VíceMETODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví
METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY Veřejné zdravotnictví METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY průtoková cytometrie metody stanovení funkční aktivity lymfocytů testy fagocytárních funkcí Průtoková cytometrie
VíceSPR Povrchová Plasmonová Resonance. Zdroj: Wiki
SPR Povrchová Plasmonová Resonance Zdroj: Wiki Co je SPR? Fyzikální jev využívající interakci světla s tenkou vrstvou kovu k měření absorbce látek na tuto vrstvu Rozhraní optický hranol voda Voda Lom Odraz
Více