Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii. Sabina Purkrtová

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii. Sabina Purkrtová"

Transkript

1 Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii Sabina Purkrtová

2 Mikrobiologické metody Analyt měřená komponenta vzorku Analyty v mikrobiologii mikroorganismy jako mikrobiální buňky části mikroorganismů např. DNA, proteins produkty mikroorganismů např. enterotoxiny S. aureus Přítomnost nebo nepřítomnost analytu v určitém množství vzorku Kvalitativní metody Množství: dle legislativy EU obvykle 25 g (příp. příležitostně 10 g) Množství analytu Měřené přímo či nepřímo v určitém množství vzorku Kvantitativní metody Množství: dle legislativy EU obvykle 10 g

3 Types of methods 1. Mezinárodní, regionální či národní standardy převzaté od mezinárodně, regionálně či národně uznávaných autorit pro vývoj a validaci metod ISO, International Dairy Foods Association (IDFA), FDA (Food and Drug Administration), AIJN (European Fruit Juice Association), SZÚ (Státní zdravotní ústav, ČR) We're ISO, the International Organization for Standardization. We develop and publish International Standards. 2. Metody vyvinuté v laboratoři Metody (obvykle in vitro diagnostické testy) navržené, vyráběné a užívané v určité laboratoři 3. Nestandardní metody Převzaté z jiných zdrojů než z obecně uznávaných autorit pro vývoj a validaci metod Např. metody publikované v odborné vědecké literatuře, nepublikované laboratorní metody

4 Log 10 (počet buněk) Kultivační metody Klasické kultivační mikrobiologické metody studují mikroorganismy nikoliv jako jednotlivé buňky, ale jako populaci dceřiných buněk vzniklých dělením jedné buňky mateřské. Příklad: Přírůstek množství bakterií v exponenciální fázi (generační doba: 0.5 h) stevesbook/artifacts/images/chapter_002/section 002/typical_growth_curve_002.jpg Hod 4

5 Kultivační metody Tato populace mikroorganismů ( masa buněk ) je viditelná na ztuženém médiu jako kolonie Růst kolonie z jedné mateřské buňky (teoreticky) Video: om/watch?v=zrx7xg0g kq4 Dobře izolovaná kolonie rostoucí z jedné původní mateřské buňky ideální stav, ale pouze teoreticky (některé MO buňky v shlucích). Počet kolonií není proto označován jako odpovídající počtu buněk, ale jako odpovídající počtu kolonií tvořících jednotek (KTJ) Tato populace mikroorganismů je viditelná v tekutém médiu (bujón) Tato populace mikroorganismů je schopná dát detekovatelný signál v biochemických testech 5

6 Kultivační metody Schopnost mikroorganismů přežít a množit se (tj. být kultivovány, růst ) za daných environmentálních podmínek závisí na kompatibilitě mezi těmito podmínkami a fyziologickými a biochemickými vlastnostmi mikroorganismů. Fyzikální faktory teplota* ph* osmotický tlak* atmosféra* tlak záření (UV, γ...) Biologické faktory Vliv ostatních mikroorganismů (synergismus vzájemná podpora růstu, kompetice, antagonismus, symbióza, mutualismus ) VOLBOU KULTIVAČNÍCH PODMÍNEK LZE SELEKTIVNĚ VYBRAT SPEKTRUM MIKROORGANISMŮ, K JEJICHŽ PŘEDNOSTNÍMU POMNOŽENÍ BUDE DOCHÁZET Chemické faktory Nároky na výživu* Zdroj energie Zdroj C, N Zdroje dalších látek Antimikrobiální (bakteriocidní/bakteriostatické) and další chemické látky* Fyziologický stav ( fitness )* Kultivovatelné buňky v dobrém stavu poškozené či suprimované vnějšími podmínkami uncultivable cells *...Faktory běžně užívané nebo uvažované v kultivačních metodách potravinářské mikrobiologie 6

7 Kultivační metody obligate anaerobes: oxygen is toxic for them

8 Kultivační metody Teplotní rozsah růstu 27 kvasinek. Optimální růstová teplota je označena kolečkem. S., Saccharomyces Sc, S. cerevisiae; Sp, S. paradoxus; Smik, S. mikatae; Sarb, S.arboricolus; Scar, S.cariocanus; Su, S. bayanus var. uvarum; Sk, S. kudriavzevii; Km, Kluyveromyces marxianus; Pf, Pichia fermentans; Td,Torulaspora delbrueckii; Cs, Candida stellata; Hu, Hanseniaspora uvarum. Salvadó Z et al. Appl. Environ. Microbiol. 2011;77:

9 Kultivační metody Bacteria T min ( C) T opt ( C) T max ( C) Listeria monocytogenes Vibrio marinus Pseudomonas maltophilia Thiobacillus novellus Staphylococcus aureus Escherichia coli Clostridium kluyveri Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae Bacillus flavothermus Thermus aquaticus Archaebacteria T min ( C) T opt ( C) T max ( C) Methanococcus jannaschii Sulfolobus acidocaldarius Pyrobacterium brockii Kultivační teplota pro kvasinky: 25 C. 9

10 Kultivační metody

11 Kultivační metody

12 Kultivační metody

13 Kultivační metody affectingthegrowthandsurvivalofmicro- organismsinfoods conversion-gate01/95/factors-affectingthe-growth-and-survival-of-microorganisms-in-foods jpg?cb=

14 Kultivační metody _ png Většina bakterií významných v klinické a potravinářské mikrobiologii, všechny kvasinky a plísně jsou chemoheteroorganotrofní: zdrojem uhlíku a energie a redoxních sloučenin jsou organické sloučeniny /acprof_ _graphic_012.gif 14

15 Kultivační média Dělení dle konzistence: Tekutá média (bujóny) buňka absorbuje živiny celým povrchem, lepší distribuce živin Tuhá média např. brambor, mrkve kultivace některých plísní Média ztužená agarem (polysacharid - agarosa 70 % + agaropektin 30 %, není hydrolyzován většinou bakterií) želatinou (hydrolyzát kolagenu) ztužená agarová média: 1-3 % agaru vznik jednotlivých kolonií poloztužená agarová média: 0,2-0,5 % - sledování motility média ztužená želatinou: test na ztekucování želatiny (např. Clostridium perfringens) Dělení dle složení: Média pro chemoheteroorgantrofní organismy musí obsahovat: zdroj uhlíku a energie (totožný), dusíku, u auxotrofů (nejsou schopni syntetizovat některé potřebné sloučeniny) též vitamíny a stopové prvky Syntetická (chemicky definovaná) je známo přesné chemické složení připravena z čistých chemikálií Komplexní média připravena z různých chemicky nepřesně definovaných materiálů a některých jednoduchých čistých chemikálií Dělení dle účelu kultivace 15

16 Kultivační média Různé mikroorganismy se v nárocích na výživu velice liší Výživově nenáročné mikroorganismy Např. E. coli snadno kultivovatelná Výživově náročné mikroorganismy (ang. fastidious): náročné na výživové podmínky 16

17 Kultivační média Komplexní média základní složky Různé přírodní materiály (=přesné chemické složení se liší v jednotlivých šaržích dle výrobce a způsobu přípravy) + některé jednoduché čisté chemikálie Produkty hydrolýzy různých druhů proteinů (maso, sója, želatina, kasein, rostlinná pletiva...) proteolytickými enzymy: pepsin (peptony), trypsin (tryptony), papain, pankreatin (pankreatická natrávenina...) = hlavní zdroj dusíku (též energie a uhlíku, ale utilizace je pomalejší) Kvasničný extrakt, extrakt z masa... Zdroj zvláště vitamínů a růstových faktorů (kvasničný extrakt B vitamíny) Zdroj energie a uhlíku, minoritně dusíku Další růstové faktory pro náročné mikroorganismy: Beraní/koňská krev, NADH+ Jednoduché sacharidy (glukóza, laktóza, maltóza...) zdroj uhlíku a energie Minerální soli: NaCl vhodné osmotické prostředí ( 0,85-0,90 % NaCl fyziologický roztok) Hydrogenfosforečnany a dihydrogenfosforečnany pufrovací systém pro SO 4-2, Ca 2+, Mg 2+, Fe 2+,3+, Mn 2+ aj. podpora růstu mikroorganismů 17

18 Kultivační média Dehydrated mixture prepared by the producer Ready-to-use Mixed from single parts 18

19 Kultivační média Univerzální kultivační média Vhodná pro růst všech mikroorganismů, kterým vyhovuje jejich nutriční složení (neobsahují žádná selektivní činidla) Selekce růstu mikroorganismů částečně volbou kultivační teploty PCA (Plate Count Agar) pepton z kaseinu, masový extrakt, glukóza, agaragar; ph: 7.0 ± 0.2 při 25 C živný agar (Nutrient agar) pepton z masa, masový extrakt, agar-agar; ph: 7.0 ± 0.2 při 25 C trypton-sójový agar (Tryptic soy agar) pepton z kaseinu, pepton ze sójové drtě, NaCl, agar-agar; ph: 7.3 ± 0.2 při 25 C trypton-sójový bujón (Tryptic soy broth) - pepton z kaseinu, pepton ze sójové drtě, glukóza, K 2 HPO 4 (pufrovací aktivita v průběhu růstu), NaCl; ph: 7.3 ± 0.2 při 25 C pufrovaná peptonová voda (Buffered Peptone water) - pepton z kaseinu, glukóza, Na 2 HPO 4.12 H 2 O, KH 2 PO 4 (pufrovací aktivita v průběhu růstu), NaCl; ph: 7.0 ± 0.2 při 25 C 19

20 Živný agar (Nutrient Agar) 20

21 Kultivační média Obohacená univerzální kultivační média Obohacená některými dalšími živiny (krev, extrakty...) pro podporu růstu mikroorganismů, včetně výživově náročnějších Columbia agar pepton z kaseinu, pepton z masa, srdcový extrakt, kvasničný extrakt, škrob, NaCl, agar-agar; ph: 7.3 ± 0.2 při 25 C Columbia agar s 5 % beraní krve k základu po ochlazení na 45 C přidána beraní krev (např. 95 ml + 5 ml) možnost sledování hemolýzy též Čokoládový agar k základu po ochlazení na 45 C přidána beraní krev a směs povařena 10 min při 80 C do zhnědnutí (např. 90 ml + 10 ml) Mozko-srdcová infúze (BHI) mozko-srdcový extrakt, pepton, glukóza, NaCl, Na 2 HPO 4 ; ph: 7.4 ± 0.2 při 25 C 21

22 Columbia Agar s 5 % beraní krve Escherichia coli Streptococcus pyogenes

23 Brain Heart Infusion Broth

24 Kultivační média Selektivní kultivační média Cíl: Selektivní kultivace pouze vybrané skupiny mikroorganismů Růst ostatních nežádoucích skupin mikroorganismů je potlačen přídavkem selektivních činidel a volbou kultivačních podmínek, která jsou pro tyto nežádoucí skupiny letální Selektivní činidla: Povrchově aktivní látky: žluč a žlučové soli, lauryl suflát sodný, tergitol Antibiotika: výběr závisí na nežádoucí skupině mikroorganismů Anorganické soli: chlorid lithný (inhibuji G- a enterokoky), tetrathionát (inhibuje G+ a koliformní bakterie), azid sodný (inhibuje G-) Barviva: krystalová violeť, briliantová zeleň, malachitová zeleň... Pomnožovací média: Navržena pro zvýšení počtu mikroorganismů na detekovatelnou úroveň Neselektivní Selektivní 24

25 Kultivační média Diferenciační (diagnostická) média Cíl: Odlišit kolonie cílové skupiny mikroorganismů od ostatních na základě některé typické biochemické reakce Např. A) fermentace cukrů za vzniku kyseliny (změna ph) a/nebo plynu (Durhamova plynovka) B) degradace některých sloučenin (např. dekarboxylace) obvykle změna ph C) tvorba určitých sloučenin za vzniku precipitátu (např. tvorba sirovodíku) D) změna barvy nebo fluorescence kolonií vzhledem k degradaci chromogenních nebo fluorogenních substrátů Typickým detekčním systémem je použití acidobazických indikátorů změna barvy kolonií v závislosti na ph média. Selektivně diferenciační (diagnostická) média Potlačují růst nežádoucích skupin mikroorganismů Umožňují selektivní růst cílového mikroorganismu a zároveň souběžně s vizuálním odlišením jeho kolonie 25

26 Acidobazické indikátory Chemické sloučeniny měnící barvu dle ph General.gif

27 Selektivně-diagnostická kultivační média Složení (g/l) Pepton (z masa a kaseinu) 3.0 Pankreatická natrávenina želatiny 17.0 NaCl Žlučové sole 1.5 Krystalová violeť Laktóza monohydrát 10.0 Neutrální červeň Agar ph po sterilizaci (při 25 C) 7.1±0.2 Pepton (z masa a kaseinu) Pankreatická natrávenina želatiny: Zdroj dusíku a vitamínů NaCl: osmotická rovnováha MacConkey Agar Agar pro selektivní izolaci a odlišení laktózu fermentujících a nefermentujících Enterobacteriaceae = selektivnědiagnostické médium pro koliformní bakterie Selektivní působení krystalové violeti a žlučových solí inhibuje růst většiny druhů G+ bakterií (např. S. aureus neroste) G- bakterie, zvláště enterobakterie (žijící v zažívacím traktu) rostou dobře.

28 MacConkey Agar Selektivně-diagnostická kultivační média Kmeny fermentující laktózu (koliformní bakterie) rostou červeně nebo růžově, s možnou zónou precipitované žluči Kmeny nefermentující laktózu (Shigella, Salmonella, Proteus...) jsou bezbarvé a typicky neodlišitelné vzhledem od média ph po sterilizaci (při 25 C) 7.1±0.2 Složení (g/l) Pepton (z masa a kaseinu) 3.0 Pankreatická natrávenina želatiny 17.0 NaCl Žlučové sole 1.5 Krystalová violeť Laktóza monohydrát 10.0 Neutrální červeň Agar Diagnostická složka: fermentace laktózy za vzniku kyseliny vede k poklesu ph a změně acidobazického indikátoru (neutrální červeň) při ph nižším než 6.8 ze žluté na červenou XaGKyJzCBPk/UgS8FU96L3I/ AAAAAAAAAt8/7B6bSjxLjjI/s 1600/lol.PNG

29 Chromogenní kultivační média Obsahují jeden nebo více chromogenních substrátů (substrát pro specifický enzym s připojeným chromoforem) Umožňují detekci specifických enzymů, schopných odštěpit z chromogenního substrátu chromofor (změna barvy) Koliformní bakterie (MPN metoda) YUpHuBzWmdbKoWQ79qbh3nLIhZ18ww CHROMOGENNÍ MÉDIUM (Colilert): Koliformní bakterie mají enzym β-galactosidasu a jsou schopny z ONPG odštěpit chromofor (o-nitrofenol) změna barvy na žlutou z bezbarvé.

30 Fluorogenní kultivační média Obsahují jeden nebo více fluorogenních substrátů (substrát pro specifický enzym s připojeným fluoroforem) Umožňují detekci specifických enzymů, schopných odštěpit z fluorogenního substrátu fluorofor (fluorescence po ozáření UV) E. coli (MPN metoda) FLUOROGENIC MEDIUM (Colilert): E. coli (96-97 % kmenů mimo některé patogenní sérotypy) má enzym β-d-glucuronidasu, který je schopen rozštěpit MUG a vykazovat tak fluorescenci (UV 360 nm).

31 Produktivita (P R productivity ratio) vyjadřuje schopnost růstu mikroorganismu v testovaném médiu ve srovnání se schopností růstu na referenčním médiu Pro kvantitativní vyjádření je definována následně: Produktivita Neselektivní médium (referenční) 0.2 ml P R =N S / N O N S médiu N O - celkový počet KTJ na testovaném celkový počet KTJ na příslušném referenčním médiu (min. 100 KTJ) Správný počet buněk (0.2 ml) Hodnoty P R neselektivní média..min. 0,7 selektivní média min. 0,1 Selektivní médium

32 Selektivita Selektivita (S F ) demonstruje, že médium je schopno potlačit růst nežádoucích mikroorganismů Neselektivní médium 0.2 ml Nejsou necílové mikroorganismy (doprovodná mikroflóra) schopny též růstu? Správný počet buněk (0.2 ml) Selektivní médium

33 Specifita Specificita (fyziologická charakteristika) Specifita kultivačního média označuje jeho schopnost rozlišit příbuzné organismy na základ přítomnosti/nepřítomnosti nebo míry biochemické odpovědi a velikosti kolonií a jejich morfologii. Cílový mikroorganismus roste na daném médiu ve shodě se specifikací. Jednotlivé kmeny stejné skupiny se mohou lišit testováno proto více kmenů dané skupiny. Bude mít vždy cílový mikroorganismu pozitivní reakci? Cílový mikroorganismus Dává očekávanou reakci

34 Kultivační metody stanovení počtu MO ZPRACOVÁNÍ VZORKU Plotnové metody a MPN (tekuté a tuhé vzorky) resuspenze vzorku ve vhodném dilučním roztoku (1:10) desítkové ředění Filtrace (tekuté vzorky) Filtrace vzorku, příp. po vhodném naředění IZOLACE NA SELEKTIVNÍ/NESELEKTIVNÍ MÉDIA Plotnové metody - výsev roztěrem či přelivem MPN inokulace tekutého média Filtrace přenos filtru na povrch ztuženého média SUB-IZOLACE PRESUMPTIVNÍCH KOLONIÍ NA NESELEKTIVNÍ MÉDIA Mikrobiální kultury rostoucí na selektivních médií nejsou vhodné pro biochemické testování selektivní médiu snižuje fitness i cílových bakterií a jejich fenotypové vlastnosti, což interferuje s přesností a spolehlivostí testů KONFIRMACE/IDENTIFIKACE PRESUMPTIVNÍCH KOLONIÍ

35 Kultivační metody stanovení počtu MO VZOREK DESÍTKOVÉ ŘEDĚNÍ IZOLACE VZOREK: obvykle 10 g nebo 10 ml (1X) DILUČNÍ MÉDIUM: např. fyziologický roztok s peptonem, pufrovaná peptonová voda (prostředí neovlivňující počet MO) Ředěno 1:9 1. ředění sterilní sáček (10 g/ml + 90 ml; 1X + 9X), resuspenze/smíšení Následující ředění zkumavky (1 ml suspenze + 9 ml dilučního média) KULTIVACE POČÍTÁNÍ KOLONIÍ 1:10 1:100 1:1000 1: : : SUB-IZOLACE PRESUPMTIVNÍCH KOLONIÍ KULTIVACE A KONFIRMAČNÍ TESTY VÝSLEDEK

36 Kultivační metody stanovení počtu MO VZOREK DESÍTKOVÉ ŘEDĚNÍ IZOLACE Izolace = inokulace vybraných ředění (výběr dle limitu výskytu MO v potravině) + kultivace o Roztěrem na povrch média v Petriho misce (obvykle 0.1 nebo 0.2 ml) o Přeliv suspenze v prázdné Petriho misce sterilním rozehřátým ztuženým médiem při teplotě 45 C (obvykle 1 ml) KULTIVACE 1:100 1:1000 1: : : POČÍTÁNÍ KOLONIÍ SUB-IZOLACE PRESUPMTIVNÍCH KOLONIÍ KULTIVACE A KONFIRMAČNÍ TESTY VÝSLEDEK

37 Inokulační metody Metoda přelivu dává lepší výsledky pro fakultativně anaerobní mikroorganismy než metoda roztěru Metoda roztěru užívána pro aerobní mikroorganismy al%20growth%20ss5.htm Izolace čárkováním istry330/fall2004/abickert/images/streak.gif

38 Kultivační metody stanovení počtu MO VZOREK DESÍTKOVÉ ŘEDĚNÍ IZOLACE KULTIVACE Kultivace: čas a teplota závisí na MO a metodě Počítání kolonií: limit KTJ obvykle pro stanovení počtu všech mikroorganismů (neselektivní média), pro stanovení počtu presumptivních/typických/atypických kolonií (selektivní média) Konfirmace: výběr až 5 presumptivních/typických/atypických kolonií, pokud přítomny, z každé plotny použité k výpočtu Konfirmace biochemickými testy (viz selektivita a specifita média) Výsledek: A.B x 10 c KTJ/g, ml (např. 5.2 x 10 4 KTJ/g, ml) POČÍTÁNÍ KOLONIÍ SUB-IZOLACE PRESUPMTIVNÍCH KOLONIÍ (ADAPTED S.P.) KULTIVACE A KONFIRMAČNÍ TESTY VÝSLEDEK

39 Čeleď Enterobacteriaceae Gramnegativní fakultativně anaerobní rovné tyčinky, některé z nich pohyblivé Většina rodů roste dobře při 37 C, ačkoliv některé rostou lépe při C Fermentují glukózu, oxidáza negativní Schopny růst v přítomnosti žlučových solí Koliformní bakterie Fermentují laktózu (přítomnost enzymu β-galaktosidáza) Enterobacteriaceae VČŽG (Violeť, Červeň, Žlučové kyseliny, Glukóza) Agar VČŽL (Violeť, Červeň, Žlučové kyseliny, Laktóza) Agar Agar dle MacConkey, ENDO agar, Chromocult Coliform agar Escherichia coli Většina kmenů (mimo některé patogenní kmeny cca 3-4 %) produkuje enzym β-d-glukuronidázu Tvorba indolu z tryptofanu TBX

40 VČŽG VČŽG (Violeť, Červeň, Žlučové kyseliny, Glukosa) Agar půda s violetovou červení, žlučí a glukózou Selektivní půda pro Enterobacteriaceae Escherichia coli ATCC 8739 Typické složení (l): pepton 7 g; kvasničný extrakt 3 g, chlorid sodný 5 g; D(+) glukosa 10 g; směs žlučových solí 1,5 g; methylčerveň 0,03 g; krystalová violeť 0,002 g; agar-agar 13 g. Selektivní složka Krystalová violeť inhibuje růst doprovodné grampozitivní bakteriální flóry ze vzorku. Žlučové kyseliny inhibují růst doprovodné mikroflóry a selektivně podporují růst Enterobacteriaceae Diagnostická složka Fermentace glukosy produkce kyselin je indikována změnou barvy přidaného acidobazického indikátoru methylčerveně. Půda není pro Enterobacteriaceae zcela specifická stejný vzhled mohou vykazovat např. aeromonády. Vzhled kolonií Červené, obklopené načervenalou precipitační zónou či bez zóny Bezbarvé Mikroorganismy Enterobacteriaceae a jiné Žádné Enterobacteriaceae nejsou přítomné Shigella flexneri ATCC 29903

41 Enterobacteriaceae ČSN ISO (560096) Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metody pro průkaz a stanovení počtu bakterií čeledi Enterobacteriaceae - Část 2: Technika počítání kolonií Vzorek 0. ředění 10 g vzorku + 90 ml ŘR** - 1. ředění 1 ml (-1. ředění) + 9 ml ŘR** - 2. ředění. 1 ml (-(X+1). ředění + 9 ml ŘR** - X. ředění Příprava vzorku a desítkové ředění* Přeliv 1 ml půdou VČŽG*** VČŽG VČŽG VČŽG VČŽG VČŽG VČŽG VČŽG VČŽG Kultivace: 37 C, 24 h±2 h Izolace na selektivní ztužená média 1. den Výběr typických (příp. atypických) kolonií pro konfirmaci Přeočkování až 5 náhodně vybraných typických (příp. atypických) kolonií živný agar, 37 C, 24±3 h Přeočkování na neselektivní agar 2. den Biochemické testy: test na oxidázu, fermentace glukózy - glukózový agar (37 C, 24 h) Vyhodnocení biochemických testů Výpočet a vyjádření výsledku Konfirmační testy Vyhodnocení testů 3. den 4. den *Minimálně minimálně dvě po sobě jdoucí ředění vysetá v paralele **ŘR..ředící roztok PPV ***1 ml testované suspenze přelít půdou VČŽG temperovanou na 44 C 47 C, doba od zaočkování inokula a přelití inokula půdou nesmí přesáhnout 15 minut. Nejdříve asi 10 ml, po úplném ztuhnutí půdy převrstvit dalšími 15 ml vytvoření semi anaerobního prostředí.

42 Průkaz oxidázy Průkaz cytochromoxidáza/oxidáza Průkaz enzymů, který se podílí na oxidativních procesech v bakteriální buňce, přítomny u všech aerofilních bakterií s respiračním metabolismem. Podstata testu je reakce derivátů p-fenylendiaminu se železem obsaženým v cytochromových respiračních komlexech. Přítomnost cytochromoxidázy je detekována barevnými reakcemi pomocí příslušných činidel. Postup kultura je přenesena na plochu navhlčenou činidlem pomocí platinové či plastové kličky (nikoliv železné! možná falešně pozitivní reakce), produkce oxidázy dojde ke vzniku sytě fialové až modré barvy do cca s v závislosti na formátu testu Oxidáza pozitivní G- bakterie (OXI +) Pseudomonas sp., Aeromonas sp. Oxidáza negativní G- bakterie (OXI -) Čeleď Enterobacteriaceae, Acinetobacter sp.

43 VČŽL VČŽG (Violeť, Červeň, Žlučové kyseliny, Glukosa) Agar půda s violetovou červení, žlučí a glukózou Selektivní půda pro Enterobacteriaceae Escherichia coli ATCC Typické složení (l): pepton 7 g; kvasničný extrakt 3 g, chlorid sodný 5 g; D(+) glukosa 10 g; směs žlučových solí 1,5 g; methylčerveň 0,03 g; krystalová violeť 0,002 g; agar-agar 13 g. Selektivní složka Krystalová violeť inhibuje růst doprovodné grampozitivní bakteriální flóry ze vzorku. Žlučové kyseliny inhibují růst doprovodné mikroflóry a selektivně podporují růst Enterobacteriaceae Diagnostická složka Fermentace laktózy produkce kyselin je indikována změnou barvy přidaného acidobazického indikátoru methylčerveně. Escherichia coli ATCC Salmonella gallinarum NCTC 9240 Vzhled kolonií Červené, obklopené načervenalou precipitační zónou či bez zóny Malé červené kolonie ( tečky ) Bezbarvé Mikroorganismy koliformní bakterie Příležitostně enterokoky laktóza negativní enterobakterie a jiné

44 Endo Agar Složení (l): Peptická natrávenina zvířecí tkáně 10.0 g, Laktóza 10.0, Hydrogenfosforečnan draselný 3,5, Siřičitan sodný 2.5, Základní fuchsin 0.5, Agar 15.0, ph 7,4 ± 0,2 Selektivně-diagnostické médium pro izolaci a rozlišení druhů Enterobacteriaceae a dalších gramnegativních tyček z klinických vzorků či vyšetření potravin. Selektivní složka: siřičitan sodný a základní fuchsin (částečné potlačení Gram pozitivních mikroorganismů) Shigella flexneri ATCC Diagnostická složka: Koliformní bakterie fermentace laktózy - tmavě růžové až středně červené kolonie s měňavým nazelenalým kovovým leskem a podobným zabarvením média. E. coli dochází ke krystalizaci fuchsinu nazelenalý metalický lesk. Kolonie organismů, které nefermentují, jsou na světle růžovém pozadí média bezbarvé až narůžovělé. 44

45 Endo Agar

46 ChromoCult Coliform Agar Selective agar for the simultánní detekci koliformů a E. coli v pitné vodě a potravinách Typical Composition (g/litre) Peptone 3.0; sodium chloride 5.0; sodium dihydrogen phosphate 2.2; di-sodium hydrogen phosphate 2.7; sodium pyruvate 1.0; tryptophan 1.0; agar-agar 10.0; Sorbitol 1.0; Tergitol ; 6-chloro-3-indoxyl-beta-Dgalactopyranoside 0.2; 5- bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-d-glucuronic acid 0.1; isopropyl-beta- Dthiogalactopyranoside 0.1. ph: 6.8 ± 0.2 at 25 C. Escherichia coli ATCC Identifikace koliformů Salmon-GAL štěpen β-d-galactosidasou charakteristický pro koliformy lososové až červené kolonie Identifikace E. coli X-glucuronide štepen β-d-glucuronidasou charakteristické pro E. coli. E. coli též štěpí Salmon-GAL tmavěmodré až fialové kolonie. Citrobacter freundii ATCC 8090

47 TBX Chromocult TBX agar (trypton bile X-glucuronid)=chromogenní půda Escherichia coli ATCC Escherichia coli DSMZ 502 Složení (l): pepton 20 g; žlučové soli No. 3 1,5 g; X-ß-D-glukuronid 0,075 g; agar-agar 15 g. Selektivně-diagnostické chromogenní médium pro β-d-glukuronidáza pozitivní kmeny E. coli Inhibiční složka: Růst doprovodné mikroflóry je inhibován přídavkem žlučových solí a kultivační teplotou 44 C. Diagnostická (chromogenní složka) E. coli se odlišuje od ostatních koliformních bakterií syntézou enzymu β- D-glukuronidázy, který je schopen štěpit chromogenní substrát 5-bromo- 4-chloro-3-indolyl-D-glukuronid (X-ß-D-glukuronid). Dochází ke štěpení vazby mezi chromoforem 5-bromo-4-chloro-3-indolyl a D-glukuronidem, odštěpení chromoforu vede k modrozelenému zbarvení kolonií E. coli. Vzhled kolonií Mikroorganismy modrozelené E. coli indikace přítomnosti β-dglukuronidázy Bezbarvé glukuronidáza negativní E. coli (3-4 % kmenů) schopné růstu při 44 C (např. E. coli O157) (další glukuronidáza negativní E. coli jako E. coli O157:H7 při 44 C nejsou schopny růst)

48 Escherichia coli ČSN ISO (560079) Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metoda stanovení počtu betaglukuronidázopozitivních Escherichia coli - Část 2: Technika počítání kolonií vykultivovaných při 44 C s použitím 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-d-glukuronidu Vzorek 0. ředění 10 g vzorku + 90 ml ŘR** - 1. ředění 1 ml (-1. ředění) + 9 ml ŘR** - 2. ředění. 1 ml (-(X+1). ředění + 9 ml ŘR** - X. ředění Příprava vzorku a desítkové ředění* TBX TBX Přeliv 1 ml půdou TBX*** TBX TBX TBX TBX TBX Izolace na selektivní ztužená média 1. den TBX Kultivace: 44 C, hodin Odečet typických kolonií (biochemická reakce, která je základem vzhledu kolonií, je považována za natolik specifickou, že není prováděna konfirmace) Výpočet a vyjádření výsledku Vyhodnocení 2. den *Minimálně minimálně dvě po sobě jdoucí ředění vysetá v paralele **ŘR..ředící roztok PPV ***1 ml testované suspenze přelít asi 15 ml půdy TBX temperované na 44 C 47 C.

49 Celkový počet mikroorganismů ČSN EN ISO 4833 (560083) Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metoda pro stanovení celkového počtu mikroorganismů - Technika počítání kolonií vykultivovaných při 30 C Vzorek 0. ředění 10 g vzorku + 90 ml ŘR** - 1. ředění 1 ml (-1. ředění) + 9 ml ŘR** - 2. ředění. 1 ml (-(X+1). ředění + 9 ml ŘR** - X. ředění Příprava vzorku a desítkové ředění* PCA PCA Přeliv 1 ml půdou PCA*** PCA PCA PCA PCA PCA Izolace na neselektivní ztužená média 1. den PCA Kultivace: 30 C, 72 h±3 h Odečet kolonií Výpočet a vyjádření výsledku Vyhodnocení 4. den *Minimálně minimálně dvě po sobě jdoucí ředění vysetá v paralele. je-li to vhodné a možné, zvolí se takový stupeň ředění, která poskytnou počty kolonií mezi 15 a 300 na misku. **ŘR..ředící roztok PPV ***1 ml testované suspenze přelít asi ml půdy PCA temperovanou na 44 C 47 C, doba od zaočkování inokula po přelití inokula půdou nesmí přesáhnout 45 minut. Pouze v případě očekává-li se výskyt mikroorganismů, jejichž kolonie přerůstají povrch půdy, přelije se ztuhlá vrstva dalšími 4 ml půdy pro převrstvení.

50 3M Petrifilm Count Plates an all-in-one plating system made by the Food Safety Division of the 3M Corporation cost-effectiveness, simplicity, convenience, and ease of use

51 3M Petrifilm Count Plates - principle 3M Petrifilm Count Plates: Coating technology 1. Top Film Plastic Film coated with adhesive, indicator and cold water soluble gel. 2. Bottom Film Plastic coated paper printed with a grid, adhesive standard methods nutrients, cold water soluble gel.

52 3M Petrifilm Coliform Count Plates Koliformní bakterie fermentace laktózy za vzniku kyseliny a plynu VČŽL dehydratované médium Červeně až fialově zbarvené kolonie Umožněna však též detekce tvorby plynu (plyn je zachycen vrchním filmem) Vyšší specifita stanovení

53 Stanovení počtu metodou filtrace 1. KROK FILTRACE TEKUTINY (OBVYKLE 100 ML) 2. KROK PŘENOS FILTRU SE ZACHYCENÝMI MIKROORGANISMY NA SELEKTIVNÍ MÉDIUM 3. KROK KONFIRMACE TYPICKÝCH KOLONIÍ

54 Laktózový TTC agar s tergitolem TTC ze spodu Zvrchu Reálný vzorek 54

55 Stanovení počtu metodou MPN 1. KROK PŘÍPRAVA VÝCHOZÍ SUSPENZE TESTOVANÉ POTRAVINY A DESÍTKOVÝCH ŘEDĚNÍ 2. KROK INOKULACE VÝCHOZÍ SUSPENZE A JEDNOTLIVÝCH ŘEDĚNÍ DO SÉRIE PO 3, 5, 10 ČI 15 ZKUMAVKÁCH SE SELEKTIVNÍ POMNOŽOVACÍ PŮDOU (SPP) 10 ml 2X SPP + 10 ml výchozí suspenze = 1 g/ zkumavka (2x dvojnásobná koncentrace média z důvodu vysokého ředění vzorkem) 10 ml 1X SPP + 1 ml výchozí suspenze=0.1 g/ zkumavka 10 ml 1X SPP + 1 ml 2.ředění výchozí suspenze =0.01 g/ zkumavka 10 ml 1X SPP + 1 ml 3.ředění výchozí suspenze=0.001 g/zkumavka etc. 3. KROK KONFIRMACE ZKUMAVEK SE ZÍSKANOU POZITIVNÍ REAKCÍ Předpoklad: o v tekutém médiu je distribuce buněk uniformní, nejsou spojeny ve shluky, k detekovatelnému růstu (=projevuje se pozitivní reakcí) dochází i kdyby pouze jedne životaschopná buňka byla ve zkumavce) o Jaká je pravděpodobnost, že při X KTJ/ml suspenze, bude v A případech odebrána alespoň jedna buňka v daném objemu (poz.) a v B případech naopak žádná (neg.) = odhad počtu bakterií na základě statistiky o Zde pro vyhodnocení získán číselný kód 4-2-1

56 Stanovení počtu metodou MPN Odhad nejvýše pravděpodobného počtu 1) Výpočet dle vzorce IS0 7218: ) Software programy 3) Použití MPN tabulek B.5 ISO 7218:2007 MPN indexy pro 3 následující ředění se 3 zkumavkami, kdy první zkumavka obsahuje 1 g vzorku (4 3 možností) B.7 ISO 7218:2007/ Tabulka A.1 ISO 7251:2005(E) MPN index pro 3 následující ředění s 5 zkumavkami, kdy první zkumavka obsahuje 1 g vzorku (6 3 možností).) Počet pozitivních výsledků Index MPN Kategorie Hranice spolehlivosti (95%) Dolní limit Horní limit Kategorie: Pokud je analýza provedena přesně, poté 95 % kombinací spadá do kategorie 1; 1.4% do kategorie 2; 0.9 % do kategorie 3 and 0.1 % do kategorie 0.

57 Stanovení počtu metodou MPN Odhad nejvýše pravděpodobného počtu 1) Výpočet dle vzorce IS0 7218: ) Software programy 3) Použití MPN tabulek B.5 ISO 7218:2007 MPN indexy pro 3 následující ředění se 3 zkumavkami, kdy první zkumavka obsahuje 1 g vzorku (4 3 možností) B.7 ISO 7218:2007/ Tabulka A.1 ISO 7251:2005(E) MPN index pro 3 následující ředění s 5 zkumavkami, kdy první zkumavka obsahuje 1 g vzorku (6 3 možností).) Počet pozitivních výsledků Index MPN Kategorie Hranice spolehlivosti (95%) Dolní limit Horní limit Kategorie: Pokud je analýza provedena přesně, poté 95 % kombinací spadá do kategorie 1; 1.4% do kategorie 2; 0.9 % do kategorie 3 and 0.1 % do kategorie 0.

58 Stanovení počtu metodou MPN Výběr série zkumavek pro výpočet Vzor ek Tekutý vzorek 10 ml 1 ml 10-1 ml 10-2 ml 10-3 ml MPN Ostatní vzorky 1 g 10-1 g 10-2 g 10-3 g 10-4 g Tek. vzorek (ml -1 ) Ost. vzorky (g -1 ) x x10 2 Dolní limit 0.2x x10 2 Horní limit 4.0x x10 2 Pokud x gramů vzorku v první zkumavce, násobit výsledek 1/x) např. pro 10 g násobit 0.1, pro 0.1 g = násobit 10 Počet pozitivních výsledků Index MPN Kat ego rie Hranice spolehlivosti (95%) Dolní limit Horní limit 1 lepší kategorie 3-3-2: vyšší celkový počet pozitivních zkumavek

59 Horizontální metoda průkazu Průkaz přítomnosti či nepřítomnosti byť jen jediné životaschopné buňky cílového mikroorganismu v testované potravině, obvykle 25 g (dáno Nařízením č. 2073/2005) Kultivační metoda stanovení: Získání cílového mikroorganismu jako jednotlivě rostoucích kolonií, které lze dále identifikovat 1. KROK POMNOŽENÍ CÍLOVÉHO MIKROORGANISMU V POTRAVINĚ V TEKUTÉM MÉDIU Primární pomnožení: X g, ml potraviny + 9X ml pomnožovacího média resuscitace a opatrné pomnožení stresovaných mikroorganismů (nižší nebo žádná koncentrace selektivních činidel, přídavek složek pro potlačení toxicity selektivních činidel) Sekundární pomnožení: přenos 0,1-10 ml z primárně pomnožené suspenze intenzivní pomnožení cílového mikroorganismu na koncentraci detekovatelnou v izolačním kroku 2. KROK IZOLACE CÍLOVÉHO MIKROORGANISMU Z POMNOŽOVACÍHO MÉDIA NA ZTUŽENÉ MÉDIU Vyočkování z pomnožovacího média na selektivní nebo selektivně-diagnostické půdy Nárůst cílového mikroorganismu v jednotlivých typických koloniích 3. KROK KONFIRMACE A IDENTIFIKACE ZÍSKANÝCH TYPICKÝCH KOLONIÍ Vyočkování typických kolonií na neselektivní kultivační médium a provedení příslušných biochemických testů Přímé provedení biochemických testů nemusí poskytovat spolehlivé reakce

60 Listeria monocytogenes ČSN EN ISO : Horizontální metoda průkazu a stanovení počtu Listeria monocytogenes Část 1: Metoda průkazu (aktuální znění ČSN EN ISO /Amd 1:2004). Selektivní předpomnožení (preenrichment) 25g vzorku ml ½ Fraser (poloviční Fraser) kultivace 30 C, 24 h Sterilní očkovací kličky s očkem o objemu 10 µl zaočkujeme 0,1 ml Selektivní předpomnožení (pre-enrichment) 1. den Izolace na selektivní ztužená média ALOA* 37 C, 24±3 h Oxford** 37 C, 24±3 h Výběr typických (příp. atypických) kolonií pro konfirmaci*** 10 ml plný Fraser kultivace 37 C, 24 h Sterilní očkovací kličky s očkem o objemu 10 µl Selektivní pomnožení (enrichment) 2. den Přeočkování na neselektivní agar Konfirmační testy TSYEA 37 C, 24±3 h TSYEA 37 C, 24±3 h Biochemické testy (37 C, 24 h) ALOA* 37 C, 24±3 h Oxford** 37 C, 24±3 h Výběr typických (příp. atypických) kolonií pro konfirmaci*** TSYEA 37 C, 24±3 h TSYEA 37 C, 24±3 h Izolace na selektivní ztužená média Přeočkování na neselektivní agar 3. den 4. den Vyhodnocení testů Vyhodnocení biochemických testů Biochemické testy (37 C, 24 h) Konfirmační testy 5. den Vyhodnocení biochemických testů Vyhodnocení testů 6. den * ALOA povinný selektivní agar, **Oxford volitelný selektivní agar ***Vyočkovat z každé plotny nejméně jednu kolonii považovanou za typickou nebo suspektní na živný agar. Další čtyři kolonie se vyberou až poté, je-li první kolonie negativní. (Pro epidemiologické studie: konfirmace nejméně pěti kolonií. Pokud typických kolonií méně než pět na misce, vyberou se všechny typické nebo suspektní ke konfirmaci.)

61 Horizontální metoda průkazu Příklad: ISO :1996: Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metoda průkazu a stanovení počtu Listeria monocytogenes - Část 1: Metoda průkazu 1. KROK POMNOŽENÍ LISTERIA MONOCYTOGENES PŘÍTOMNÉ V POTRAVINĚ V TEKUTÉM MÉDIU Primární pomnožení: X g, ml potraviny + 9X ml pomnožovacího média POLOVIČNÍ BUJÓN DLE FRASER (poloviční koncentrace inhibujících složek- akriflavin, kyselina nalidixová - opatrné pomnožení stresovaných mikroorganismů Kultivace: 30 C, 24 h ±3 hodiny Sekundární pomnožení: přenos 0,1 ml z primárně pomnožené suspenze do 10 ml plného Fraserova bujónu (plná koncentrace inhibujících látek) Kultivace: 35/37 C, 48 ±3 hodiny 2. KROK IZOLACE CÍLOVÉHO MIKROORGANISMU Z POMNOŽOVACÍHO MÉDIA NA ZTUŽENÉ MÉDIU Vyočkování z obou pomnožovacích médií na plotnu dvou selektivních ztužených půd - povinná půda ALOA (kultivace: 37 C, 24 ±24 hodiny) + druhá volitelná půda (Oxford agar, Palcam agar)

62 L. monocytogenes bujón dle Frasera Pomnožovací médium: bujón podle Frasera Složení (g/l): Proteose peptone 5.0; pepton z kaseinu 5.0; kvasniční extrakt 5.0; masový exktrakt 5.0; NaCl 20.0; hydrogenfosforečnan disodný 9.6; dihydrogenfosforečnan draselný 1.35; eskulin 1.0; chlorid lithný 3.0. ph: 7.2 ± 0.2 at 25 C. Suplementy: Suplement citrát amonno-železitý: 500 mg/l pro poloviční Fraserův bujón Selective Supplement: akriflavin 12.5 mg; kyselina nalidixová 10 mg /l pro poloviční Fraserův bujón Vysoký obsah živin Pufrovací systém - udržování stálého ph, které se mění vlivem biochemické činnosti rostoucích mikroorganismů Inhibiční látky inhibice doprovodné mikroflóry a některých druhů listerií Detekce β-d-glukosidázy rodu Listeria: Glukóza eskulin je štěpen na eskuletin, který s železitým kationtem tvoří komplex v průběhu růstu L. monocytogenes dochází ke zčernání média E2BC87AC12574C6002FD7BD?opendocument&LG=EN&

63 L. monocytogenes ALOA agar ALOA agar (agar pro listerie podle Ottavianiho a Agostiho) složení báze g/l agar-agar 13.0 Pepton z masa 18.0 Pepton z kaseinu 6.0 Kvasničný extrakt 10.0 Pyruvát sodný 2.0 Glycerofosforečnan hořečnatý 1.0 Ochrana přes letálním účinkem inhibičních látek glukóza 2.0 bohaté na živiny NaCl 5.0 Hydrogenfosforečnan disodný 2.5 pufrovací systém chlorid lithný 10.0 Síran hořečnatý 0.5 inhibice doprovodné mikroflóry Selektivní suplement (mg/l): Amphotericin B 10 mg; Ceftazidim 20 mg; Sodná sůl kyseliny nalidixové 20 mg; Polymyxin B síran U. 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranosid 0.05; Chromogenní substrát detekce β-d-glukosidázové aktivity Rod Listeria má β-d-glukosidázovou aktivitu tvorba modrozelených kolonií Detekční systém Obohacovací suplement (g/l): L-α-fosfatidylinositol 2 g Detekce enzymu fosfatidylinositol fosfolipázy C (PI-PLC) - virulenčního faktoru L. monocytogenes Fosfolipázová aktivita L. monocytogenes průhledná haló zóna kolem kolonií (pro L. ivanovii tvorba zpožděná)

64 ALOA agar L. monocytogenes ALOA agar (agar pro listerie podle Ottavianiho a Agostiho) Růst Vzhled L. monocytogenes Výborný Modrozelené kolonie Haló zóna L. ivanovii Výborný Pokud haló zóna, tak po 48 hodinách L. inocua Zpomalený Bez haló zóny L. seeligeri inhibovaný Bez haló zóny Typické kolonie brané pro další konfirmaci: Modrozelené kolonie s haló zónou nutno potvrdit (mohou být L. monocytogenes, L. ivanovii či některé bacily) Listeria monocytogenes ATCC Listeria innocua ATCC 33090

65 L. monocytogenes - Oxford agar Oxford agar složení báze g/l agar-agar 13.0 Pepton 23.0 škrob 1.0 méně výživný agar NaCl 5.0 Chlorid lithný 10.0 inhibice doprovodné mikroflóry a některých druhů listerií Selektivní suplement (mg/l): Cycloheximid mg, kolistin sulfáte 10.0 mg Acriflavin 2.5 mg, Cefotetan 1.0 mg, Fosfomycin 5.0 mg eskulin 1.0; citrát amonno-železitý 0.5 L. monocytogenes hydrolyzuje eskulin na eskuletin, který tvoří černý komplex s železitými kationty tvoří hnědozelené kolonie s haló efektem Listeria monocytogenes ATCC Detekční systém Listeria innocua ATCC 33090

66 L. monocytogenes - PALCAM agar Oxford agar složení báze g/l agar-agar 13.0 Pepton 23.0; glucose 0.5; starch 1.0 živiny Kvasničný extrakt 3.0; NaCl 5.0 lithium chloride 10.0 inhibice doprovodné mikroflóry a některých druhů listerií Selektivní suplement (mg/l): Polymyxin B sulfate 5.0 mg, Ceftacidime 12.0 mg Acriflavine 2.5 mg eskulin 1.0; citrát amonno-železitý 0.5 L. monocytogenes hydrolyzuje eskulin na eskuletin, který tvoří černý komplex s železitými kationty hnědo-zelené kolonie s černou haló zónou D(-)mannitol 10.0; phenol red Odlišení manitol pozitivních G+ bakterií (např. stafylokoky, enterokoky) žlutý nárůst Listeria innocua ATCC Detekční systém Listeria monocytogenes ATCC 19118

67 Horizontální metoda průkazu Příklad: ISO :1996: Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metoda průkazu a stanovení počtu Listeria monocytogenes - Část 1: Metoda průkazu 3. KROK KONFIRMACE A IDENTIFIKACE ZÍSKANÝCH TYPICKÝCH KOLONIÍ Vyočkování 1-5 typických kolonií na neselektivní kultivační KTJ ztužené médium TSYEA (Agar s tryptonem, sójovým peptonem a kvasničným extraktem) Z každé plotny selektivního agaru vzít jednu a při negativním potvrzení až do pěti typických kolonií Kultivace: 37 C, 24 ±3 hodiny a provedení příslušných biochemických testů Biochemické testy pro potvrzení rodu Listeria Gramovo barvení: G+ štíhlé, krátké tyčinky Kataláza pozitivní Motilita Listeria spp. jsou pohyblivé při 25 C Biochemické testy pro potvrzení druhu Listeria monocytogenes Hemolýza Produkce kyseliny z CAMP test Druh Rhamnózy Xylózy S. aureus R. equi L. monocytogenes

68 Konfirmace rodu Listeria Výběr pro konfirmaci: Z každé plotny selektivního agaru vzít jednu a při negativním potvrzení až do pěti typických kolonií Konfirmační biochemické testy nutno provádět s kulturami narostlými za optimálních, nezátěžových podmínek INKUBACE NA SELEKTIVNÍCH PŮDÁCH ZATĚŽUJE I CÍLOVÉ MIKROORGANISMY, PROVÁDĚNÉ TESTY MOHOU POSKYTOVAT NESPOLEHLIVÉ REAKCE KTJ Inokulace na TSYEA (trypton-sójový agar s kvasničním extraktem) Živiny (g/l): trypton 17.0, pepton ze sóji 3.0, kvasničný extrakt 6.0, glukóza monohydrát 2.5, Osmotický a pufrovací systém: hydrogenfosforečnan disodný 2.5, NaCl 5.0, Bakteriologický agar 15.0, (g/l) Inkubace: 35 C nebo 37 C, h či déle, až je nárůst dostatečný

69 Konfirmace rodu Listeria Rodová konfirmace Gramovo barvení: G+ štíhlé, krátké tyčinky Kataláza pozitivní Kataláza: enzym, který katalyzuje rozklad toxického peroxidu vodíku na vodu a kyslík 2 H 2 O 2 2 H 2 O + O 2 kataláza bubliny Průkaz katalázy do kapky 3%peroxidu vodíku přeneseme kličkou vyšetřovanou kolonii. V pozitivním případě se uvolňují bublinky kyslíku. Motilita Listeria spp. jsou pohyblivé při 25 C Přímý test za použití mikroskopie 1 kolonie suspendována ve zkumavce s trypton-sójovým bujónem s kvasničným extraktem a inkubována při 25 C, 8-24 h - pohyb je sledován po nakápnutí kultury na podložní sklíčko Agar pro motilitu Inokulace vpichem, inkubace 48 h (až pět dnů, pokud není růst dostatečný) při 25 C typický nárůst podél vpichu ve tvaru deštníku důsledek motility

70 Druh Konfirmace L. monocytogenes Hemo lýza Pozn. L. monocytogenes + úzké, jasné, světlé zóny β-hemolýzy L. innocua - bez hemolýzy L. ivanovii + široká, neohraničená zóna β-hemolýzy L. seeligeri + slabá zóna β-hemolýzy L. welshimerii (+) hemolýza: degradace hemoglobinu či lýze erytrocytů L. grayi - přidaných do půdy (hemolýza) : subsp.grayi α- hemolýza - viridace - tvoří se meziprodukty (zelenohnědé zbarvení)/β- hemolýza - projasnění půdy způsobené difúzí L. grayi - uvolněného hemoglobinu do okolí/γ - negativní hemolýza - subsp.marrayi barva půdy beze změny Inokulace na krevní agar společně s pozitivní (L. monocytogenes) a negativní (L. innocua) kontrolou, inkubace při 35 nebo 37 C, 24±2 h V: variabilní reakce, (+): slabá reakce, +: > 90 % kmenů pozitivní reakce, -: žádná reakce Poznámka : Vzácně existují kmeny L. monocytogenes, které nevykazují β-hemolýzu anebo pozitivní reakci CAMP testu za podmínek daných normou ISO

71 Konfirmace L. monocytogenes Rhodococus equi L. monocytogenes Krevní agar 1 cm 1-2 mm L. ivanovii L. inocua Testovaný izolát (L. inocua) Staphylococcus aureus Test dle Christie-Atkins-Munch-Peterson = (CAMP) test β-hemolytický Staphylococcus aureus a nehemolytický Rhodococcus equi Inkubace při 35 C, h L. monocytogenes (listeriolysin O způsobuje hemolýzu erythrocytes) a hemolytické reakce L. seeligeri jsou slabě zvýrazněny v zóně v blízkosti S. aureus čáry, zatímco hemolytická reakce L. ivanovii je silně zvýšena v zóně R. equi. Ostatní druhy netvoří hemolýzu anebo pouze slabou hemolýzu bez synergestického efektu (L. welshimerii).

72 Konfirmace L. monocytogenes Hemolýza Produkce kyseliny z CAMP test Druh Rhamnózy Xylózy S. aureus R. equi L. monocytogenes L. innocua - V L. ivanovii L. seeligeri (+) - L. welshimerii (+) V L. grayi subsp.grayi L. grayi subsp.marrayi V V: variabilní reakce, (+): slabá reakce, +: > 90 % kmenů pozitivní reakce, -: žádná reakce Poznámka : Vzácně existují kmeny L. monocytogenes, které nevykazují β-hemolýzu anebo pozitivní reakci CAMP testu za podmínek daných normou ISO Produkce kyseliny z cukrů: L-rhamnóza, D-xylóza Inokulace do média s jednotlivými cukry, inkubace při 35 C nebo 37 C až 5 dnů Média obsahují acidobazický indikátor pozitivní reakce (tvorba kyseliny) je indikována změnou barvy z fialové na žlutou, obvykle během 24 až 48 hodin

73 Konfirmace L. monocytogenes API Listeria 24 hodinová identifikace všech druhů Listeria sp. Výrobce Biomérieux patentované biochemické testy (DIM) Miniaturizované biochemické testy jsou zaočkovány inokulem o nízké bakteriální koncentraci (0.5 McFarland) SinglePath L.Mono Příklad LFA (lateral flow assay) imunochemická metoda detekce Listeria monocytogenes po pomnožení ve Fraserově bujónu aneb BLEB bujónu

74 Salmonella ČSN EN ISO 6579 Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metoda průkazu bakterií rodu Salmonella 25g vzorku ml PPV (pufrovaná peptonová voda) kultivace 37 C, 18±2 h zaočkujeme 1 ml zaočkujeme 0,1 ml Neselektivní pomnožení (pre-enrichment) 1. den 10 ml Müller - Kauffman kutivace 37 C, 24±3 h 10 ml Rappaport - Vasilliadis kultivace 41 C, 24±3 h Sterilní očkovací kličky s očkem o objemu 10 µl Selektivní pomnožení (enrichment) 2. den XLD* 37 C, 24±3 h BGA** 37 C, 24±3 h XLD* 37 C, 24±3 h BGA** 37 C, 24±3 h Výběr typických (příp. atypických) kolonií pro konfirmaci*** Izolace na selektivní ztužená média 3. den živný agar 37 C, 24±3 h živný agar 37 C, 24±3 h živný agar 37 C, 24±3 h živný agar 37 C, 24±3 h Přeočkování na neselektivní agar 4. den Biochemické testy (37 C, 24 h), sérologická konfirmace, sérotypizace Konfirmační testy 5. den Vyhodnocení biochemických testů Vyhodnocení testů 6. den * XLD povinný selektivní agar, **BGA volitelný selektivní agar ***Vyočkovat z každé plotny nejméně jednu kolonii považovanou za typickou nebo suspektní na živný agar. Další čtyři kolonie se vyberou až poté, je-li první kolonie negativní. (Pro epidemiologické studie: konfirmace nejméně pěti kolonií. Pokud typických kolonií méně než pět na misce, vyberou se všechny typické nebo suspektní ke konfirmaci.)

75 Salmonella Pufrovaná peptonová voda Složení (l) : pepton 10 g; NaCl 5 g; dodekahydrát hydrogenfosforečnanu disodného 9 g; dihydrogenfosforečnan draselný 1,5 g. Pepton bohatý na obsah živin umožňuje resuscitaci buněk, subletálně poškozených či oslabených vlivem zacházení s potravinou či přídavkem konzervačních látek. Fosfátový pufrovací systém chrání bakterie před změnami ph v médiu v důsledku metabolismu, které by jinak nastaly v důsledku metabolismu rostoucích buněk. RAPPAPORT a VASSILIADIS (RVS Broth) obohacené bujóny pro salmonely Složení (l): pepton ze soji 4,5 g, hexahydrát chloridu hořečnatého 29 g; NaCl 8 g; hydrogenfosforečnan didraselný 0,4 g; dihydrogenfosforečnan draselný 0,6; malachitová zeleň 0,036 g. ph: 5.2 ± 0.2 at 25 C, kultivace 41 C, 24±3 h Selektivní podmínky pro růst salmonel v přítomnosti doprovodné bakteriální mikroflóry, zvláště Enterobacteriaceae) - vyšší rezistence k malachitové zeleni a vyššímu osmotickému tlaku (přídavek chloridu hořečnatého), nízkému ph, vyšší teplotě a nižším nároku na živiny (pepton ze sóji). Fosfátový pufrovací systém. RVS bujón není vhodný pro selektivní pomnožení S. typhi and S. paratyphi A. MULLER-KAUFFMANN (MK) bujón s tetrathionanem Složení média (l): masový extrakt 0,9 g; pepton z masa 4,5 g; kvasničný extrakt 1,8 g; NaCl 4,5 g; uhličitan vápenatý 25,0; thiosíran sodný 40,7 g; volská žluč 4,75 g. Přidává se jodid draselný 5 g; jód 4 g a briliantová zeleň 0,01 g. ph: 7.6 ± 0.2 at 25 C, kultivace 37 C, 24±3 h Inhibice doprovodné mikroflóry: žluč, briliantová zeleň G+ bakterie, tetrathionan (tvořen z thiosíranu přídavkem jódu) koliformní a dalších enterobakterie. Salmonella, Proteus a další druhy redukují tetrathionan za vzniku kyseliny sírové (následně pufrována uhličitanem vápenatým).

76 Buffered Peptone Water (BPW) Pufrovaná peptonová voda Složení (l) : pepton 10 g; NaCl 5 g; dodekahydrát hydrogenfosforečnanu disodného 9 g; dihydrogenfosforečnan draselný 1,5 g. Pepton bohatý na obsah živin umožňuje resuscitaci buněk, subletálně poškozených či oslabených vlivem zacházení s potravinou či přídavkem konzervačních látek. Fosfátový pufrovací systém chrání bakterie před změnami ph v médiu v důsledku metabolismu, které by jinak nastaly v důsledku metabolismu rostoucích buněk. ph: 7.0 ± 0.2 at 25 C.

77 Rappaport-Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth RAPPAPORT a VASSILIADIS (RVS Broth) obohacené bujóny pro salmonely Složení (l): pepton ze soji 4,5 g, hexahydrát chloridu hořečnatého 29 g; NaCl 8 g; hydrogenfosforečnan didraselný 0,4 g; dihydrogenfosforečnan draselný 0,6; malachitová zeleň 0,036 g. ph: 5.2 ± 0.2 při 25 C, kultivace 41 C, 24±3 h Selektivní podmínky pro růst salmonel v přítomnosti doprovodné bakteriální mikroflóry, zvláště Enterobacteriaceae vyšší rezistence k malachitové zeleni a vyššímu osmotickému tlaku (přídavek chloridu hořečnatého) nízkému ph, vyšší teplotě a nižším nároku na živiny (pepton ze sóji). Fosfátový pufrovací systém. RVS bujón není vhodný pro selektivní pomnožení S. typhi and S. paratyphi A.

78 Muller-Kauffmann Tetrathionate-Novobiocin Broth (MKTTn) Salmonella (turbidity and decoloration) 2. Shigella (turbidity and turquois) 3. Other Enterobacteriaceae (without turbidity) MULLER-KAUFFMANN (MK) bujón s tetrathionanem Složení média (l): masový extrakt 0,9 g; pepton z masa 4,5 g; kvasničný extrakt 1,8 g; NaCl 4,5 g; uhličitan vápenatý 25,0; thiosíran sodný 40,7 g; volská žluč 4,75 g. Přidává se jodid draselný 5 g; jód 4 g a briliantová zeleň 0,01 g. ph: 7.6 ± 0.2 at 25 C, kultivace 37 C, 24±3 h Inhibice doprovodné mikroflóry: žluč, briliantová zeleň G+ bakterie, tetrathionan (tvořen z thiosíranu přídavkem jódu) koliformní a dalších enterobakterie. Salmonella, Proteus a další druhy redukují tetrathionan za vzniku kyseliny sírové (následně pufrována uhličitanem vápenatým). A sediment of calcium carbonate appears in the turbid broth at the bottom of the tubes

79 Salmonella XLD agar Xylóza Lysin Deoxycholát Agar (XLD) Složení média (l): kvasničný extrakt 3 g; NaCl 5 g; D(+) xylóza 3,75 g; laktóza 7,5 g; sacharóza 7,5 g; L(+) lysin 5 g; deoxycholát sodný 1 g; thiosíran sodný 6,8 g; citrát železitoamonný 0,8 g; fenolová červeň 0,08 g; agar-agar 14,5 g. Zkvašování cukrů (xylóza, laktóza a sacharóza) za vzniku kyselin = zežloutnutí acidobazického indikátor fenolová červen. Produkce sulfanu v přítomnosti thiosíranu sodného a železitých solí - tvorba precipitátu černého sulfidu železitého ve středu kolonií. Dekarboxylace lysinu na kadaverin zvýšení ph vede ke vzniku fialového zabarvení kolem kolonií (acidobazický indikátor). Vzhled kolonií Žluté, obklopené žlutými zónami, neprůsvitné se zónami precipitace Žluté, obklopené žlutými zónami, neprůsvitné, na povrchu slizké se zónami precipitace Žluté, obklopené žlutými zónami, neprůsvitné, mohou mít černý střed Žluté, obklopené žlutými zónami, neprůsvitné Žluté, obklopené žlutými zónami, průsvitné s černými středem Kolonie mající stejnou barvu jako agarové médiem, průsvitné Kolonie mající stejnou barvu jako agarové médiem, průsvitné, s černým středem Oranžové, lehce neprůsvitné Růžové kolonie s tmavším růžovým středem Žluté kolonie, které mají nebo nemají černý střed Mikroorganismy Escherichia coli, Enterobacter, Aeromonas Klebsiella Citrobacter (laktosa-positivní kmeny) Serratia, Hafnia Proteus vulgaris, nejčastěji Proteus mirabilis Shigella, Providencia, Pseudomonas Typické kolonie Salmonella H 2 S+, XYL -, LAC -, SAC - Salmonella Typhi (xylóza-pozitivní kmeny) Sulfan neprodukující salmonely (S. Paratyphi A) Laktóza pozitivní salmonely Salmonella enteritidis NCTC 5188 Klebsiella pneumoniae ATCC 13883

80 Salmonella BG agar Salmonella enteritidis NCTC 5188 Brilliant-green agar BGA (Agar s briliantovou zelení, fenolovou červení a laktózou) Složení média (l): pepton z masa 7 g; NaCl 5 g; laktóza 15 g; fenolová červeň 0,04 g; brilliantová zeleň 0,005 g; agar-agar 13 g. Inhibiční systém: briliantová zeleň G+ bakterie, též Salmonella Typhi a rod Shigella, 0,2 % deoxycholátu sodného inhibice plazivosti kolonií rodu Proteus Diagnostický systém: zkvašování laktózy je indikováno zežloutnutím acidobazického indikátoru fenolové červeně z červené na žlutou (v alkalickém prostředí tmavě červený) Vzhled kolonií Světle růžové, průsvitné, obklopené červenými zónami Žlutozelené, neprůsvitné, obklopené žlutozelenými zónami Mikroorganismy Laktóza-negativní: Salmonella, výjimečně Proteus a Citrobacter Laktóza-pozitivní: E. coli, Enterobacter, Klebsiella. Ostatní jsou převážně inhibovány. Salmonella typhimurium ATCC 14028

81 Biochemická konfirmace Salmonella spp. TSI: tvorba kyseliny z glukózy TSI: tvorba plynu z glukózy TSI: tvorby kyseliny z laktózy TSI: tvorba kyseliny ze sacharózy TSI: tvorba sirovodíku Kmeny Salmonella spp. S. Typhi S. Parathypi A S. Parathypi B S. Parathypi C Ostatní kmeny reakce % reakce % reakce % reakce % reakce % Štěpení močoviny Dekarboxylace lyzinu Tvorba β- galaktozidázy Voges-Proskauerova reakce Tvorba indolu

82 Biochemická konfirmace Salmonella spp. Izolace charakteristických kolonií na neselektivní média živný agar (37± C, 24± 3h) Konfirmace: Biochemická (37± C, 24± 3h) TSI Urea agar (Christensen) L-lysin dekarboxylasa β-galaktosidasa (ONPG) VP test Indol test Motile (semi-solid nutrient agar) Sérologická (37± C, 24± 3h) O antigeny (somatické) H antigeny (flagelární) Vi antigeny (kapsulární) fáze I fáze II sults-_shigella jpg /product/microgen-salmonella-latex-kit.jpg

83 Biochemická konfirmace Salmonella spp. TSI Triple Sugar Iron Agar agar s glukózou, laktózou, sacharózou a citranem železitým - detekce fermentace glukózy, sacharózy a/nebo laktózy s produkcí či bez produkce plynu, detekce tvorby sulfanu z thiosíranu v kyselém prostředí Fenolová červeň Alkalické prostředí = červená, kyselé prostředí = žlutá Složení / litr Enzymatická trávenina kaseinu... 5 g Enzymatická trávenina zvířecí tkáně... 5 g Pepton s kvasničným extraktem g Dextróza... 1 g Laktóza g Sacharóza g Citran železito-amonný g Chlorid sodný... 5 g Thiosíran sodný g Fenolová červeň g Agar g Výsledné ph: 7.3 ± 0.2 při 25 C Inokulace sloupce vpichem Inokulace na povrch Fermentace dextrózy (glukózy) na kyselinu anaerobně pokles ph = žlutý sloupec Aerobně vznik produktů, které jsou na vzduchu dále oxidovány a ph zůstává zásadité = červený povrch Fermentace glukózy na plyn (anaerobně ve vpichu) Trhliny, bublinky ve sloupci v místě vpichu a kolem Tvorba sulfanu (H 2 S) reakce se síranem želzitým a thiosíranem sodným vznik černého precipitátu ve sloupci Fermentace laktózy a/nebo sacharózy Aerobně i anaerobně - Tvorba kyseliny žlutý sloupec i povrch Bakterie fermentující laktózu a/nebo sacharózu jsou schopny fermentovat též glukózu

84 Biochemická konfirmace Salmonella spp. TSI Triple Sugar Iron Agar agar s glukózou, laktózou, sacharózou a citranem železitým - detekce fermentace glukózy, sacharózy a/nebo laktózy s produkcí či bez produkce plynu, detekce tvorby sulfanu z thiosíranu v kyselém prostředí

85 Biochemická konfirmace Salmonella spp. Agar s močovinou (Christensenův agar) - detekce štěpení močoviny ureázou za vzniku amoniaku a oxid uhličitého Fenolová červeň: Kyselé prostředí - žluté (ph 6.8±0.2) Zásaditá reakce v důsledku hydrolýzy močoviny růžová barva Složení g/l Pepton ze zvířecí tkáně Dextróza Chlorid sodný Hydrogenfosforečna disodný Dihydrogenfosforečnan draselný Fenolová červeň Agar Výsledné ph (25 C) 6.8± C phpapp01/95/campylobacter-jejunihelicobacter-pylori jpg?cb=

86 Biochemická konfirmace Salmonella spp. Test na tvorbu indolu - detekce štěpení tryptofanu na indol Složení g/l Trypton L-Tryptofan 1.00 Chlorid sodný 5.00 Výsledné ph 7.5 ± 0.1 (25 C) Inokulace tekutého média pro detekci tvorby indolu Kovácsovo činidlo p-dimethylaminobenzaldehyd HCl, 37% amylalkohol 50.0 gm ml ml Tvorba indolu z tryptofanu Produkce indolu je detekována Kovacsovým činidlem

87 Biochemická konfirmace Salmonella spp. L-lysin dekarboxyláza - Detekce dekarboxylace lysinu na kadaverin (anaerobně po inokulace do tekutého média je překry sterilní parafínovým olejem) Lysine Decarboxylase Broth Typical Composition (g/litre) Pepton ze zvířecí tkáně 5.000; 21_m.jpg Kvasničný extrakt 3.000;Dextróza1.000 (glukóza připravená ze škrobu, chemicky ekvivalentní glukóze); L-Lysin hydrochlorid 5.000; bromokresolová červeň Výsledné ph (25 C) 6.8±0.2 Dvoustupňová detekce: 1. stupeň Dextróza je fermentována za vzniku kyseliny v kyselém prostředí bromokresolová červeň zežloutně teprve v kyselém prostředí dochází k aktivaci lysindekarboxylázy 2. step L-lysin je dekarboxylován za vzniku OH - - v alkalickém prostředí bromokresolová červeň mění svou barvu zpět do fialovo-červené Za předpokladu viditelného nárůstu kultury je výsledná fialovo-červená barva bujónu důkaz pozitivní reakce, žlutá barva bujónu důkaz negativní reakce + CO 2 + OH -

88 Biochemická konfirmace Salmonella spp. β-galactosidáza (ONPG) (use a 1 μl loop full) - stanovení přítomnosti ß-galaktosidázy za využití o-nitrofenyl-beta-dgalactopyranosidu (ONPG). - ONPG je hydrolyzováno na žlutý o-nitrofenol a galaktózu Laktózu fermentující bakterie (ONPG positive): Dva enzymy Permeáza přenos molekul laktózy do buňky β-galactosidáza štěpení galaktosidové vazby za vzniku glukózy a galaktózy, indukovatelný enzym, tvořený pouze v přítomnosti laktózy Koliformní bakterie jako E.coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp. supenze ve fyz. roztoku + toluen + substrát ONPG Bakterie se zpožděnou fermentací laktózy Permeáza není přítomna β-galactosidase přítomna ONPG test je pozitivní, ale pozitivní reakce je zpožděná Citrobacter spp., Arizona spp, Laktózu nefermentující bakterie (ONPG Negative): Permeáza není přítomna β-galactosidáza není přítomna Salmonella spp; Shigella spp; Proteus spp; Providencia spp., Morganella spp. a další ONPG je strukturně podobný laktóze, ONPG je bezbarvá sloučenina, O-nitrofenol je žlutý vizualizace hydrolýzy hydrolysi s

89 Biochemická konfirmace Salmonella spp. Voges Proskauerův (VP) test Detekce produkce acetylmethylkarbinolu (acetoinu) při fermentaci glukózy Detekce acetoinu: acetoin je přeměněn na diacetyl v přítomnost in the - naphthol (VP činidlo I nutno přidat jako první), silné zásady (VP činidlo II - 40% KOH) a kyslíku. Diacetyl a sloučeniny obsahující guanidin, které se vyskytují v peptonech, poté kondenzují za vzniku růžovo-červeného polymeru. Postup VP Testu 1.Inokulace čerstvé kultury do MRVP bujónu. 2.Inkubace: 37 C, 24 hod. 3. Přidat 6 kapek činidla VP I a dobře promíchat (aerace). 4.Přidat 6 kapek činidla VPII a dobře promíchat (aerace). 5.Pro pozitivní reakci tvorba červeného zabarvení v průběhu 30 minut. Pozitivní reakce: Růžovo-červená zbarvení Např. : viridantní streptokoky (except Streptococcus vestibularis), Listeria, Enterobacter, Klebsiella, Serratia marcescens, Hafnia alvei, Vibrio eltor, Vibrio alginolyticus, etc. Negativní reakce: Bez růžovo-červeného zbarvení Např. : Streptococcus mitis, Citrobacter sp., Shigella, Yersinia, Edwardsiella, Salmonella, Vibrio furnissii, Vibrio fluvialis, Vibrio vulnificus, and Vibrio parahaemolyticus etc. A copper color should be considered negative. A rust color is a weak positive reaction. Kontrola kvality VP positivní: Enterobacter aerogenes (ATCC13048) VP negativní: Escherichia coli (ATCC25922) + - Voges-Proskauer činidlo I (Barrittovo činidlo A) Alfa-Nafthol, 5% 50 gm Voges-Proskauer činidlo II (Barrittovo činidlo B) Hydroxid draselný 400 gm MRVP bujón (ph 6.9) pepton = 7.0 g/l glukóza = 5.0 g/l hydrogenfosforečnan draselný = 5.0 g/l Absolutní ethanol 1000 ml Deionizovaná voda 1000 ml

90 Miniaturizované komerční soupravy API 20E - souprava 20 biochemických reakcí pro identifikace Enterobacteriaceae a dalších nenáročných gramnegativních tyčinek (BioMerieux) Miniaturizované komerční soupravy EnteroTest 24 (Erba Lachema, ČR) souprava 24 biochemických reakcí pro rutinní identifikaci významných druhů střevních bakterií z čeledi Enterobacteriaceae

91 ENTEROTEST 24 Souprava ENTEROtest 24 je určena pro rutinní identifikaci významných druhů střevních bakterií z čeledi Enterobacteriaceae pomocí 24 biochemických testů. Pro přípravu testu: zákalu, který odpovídá stupni 1 McFarlandovy zákalové stupnice, tj. cca 3 x 10 8 buněk v ml (zákal stupně 1 je definován zákalem, který vytvoří sraženina BaSO 4 při smíchání 0,1 ml roztoku 1 % bezvodého BaCl 2 a 9,9 ml 1 % H 2 SO 4 )

92 ENTEROTEST 24 dekarboxylace Schopnost růst na citrátu jako jediném zdroji C (půda: Simonsův citrát) utilizace malonátu deaminace Zkvašování cukrů Hydrolýza eskulinu Zkvašování cukrů

93 Biochemické testy Erba Lachema ANAEROtest 23 - anaerobní bakterie, vyskytujících se nejčastěji v klinickém materiálu a v potravinách. NEFERMtest 24 - gramnegativní nefermentující bakterie a čeleď Vibrionaceae, Aeromonadaceae a druhu Plesiomonas shigelloides. STAPHYtest 24 - rod Staphylococcus a další grampozitivní kataláza pozitivní koky. STREPTOtest 24 - rody Streptococcus a Enterococcus a další grampozitivních kataláza negativní koky. CANDIDA-Screen je určena pro screeningové rozlišení nejčastěji se vyskytujících klinicky významných druhů kvasinek, CANDIDAtest 21 - rutinní identifikace kvasinek převážně z klinického materiálu Biomérieux API Gram negative Identification (např. API Listeria 24-hour identification of all Listeria species), API Gram positive Identification, API Anaerobe Identification a další. API 20E Enterobacteriacae a další nenáročné gramnegativní bakterie Microgen Microgen Bacillus identifikace mezofilních druhů rodu Bacillus

94 Sérologická konfirmace Salmonella spp. Sérotypizace - Kaufmann-Whiteovo schéma salmonely rozděluje podle antigenních vlastností a jejich kombinací, čímž je pro každý sérotyp vytvořena specifická antigenní formule. Antigeny se nacházejí v buněčné stěně (somatické O-Antigeny), v bičících (flagelární H-antigeny) a v kapsulích (Vi Antigeny). Somatické O-Antigeny jsou endotoxickou součástí lipopolysacharidových struktur, které se nachází na vnější straně buněčné stěny. Vyvolávají specifickou imunitní reakci systému a zároveň jsou faktory patogenity, neboť chrání bakterie před bakteriolytickým účinkem komplementu. Podjednotky O-antigenu jsou tvořeny několika sacharidovými zbytky, jejich pořadí pak určuje variabilnost O-antigenu. Jeho variabilita nám umožňuje rozlišovat až 67 séroskupin, které značíme písmeny nebo číslicemi. Bičíkové H-antigeny se vyskytují u pohybu schopných salmonel, tento antigen je tvořen z bílkovin, převážně flagelinem. Bičíkové H-antigeny mají dvě rozdílné antigenní fáze (první specifická fáze H1 a druhá nespecifická fáze H2). Odlišují se primární strukturou, která je způsobena střídavou expresí jednotlivých genů řídících tvorbu bičíků. Můžeme se setkat i s monofázními izoláty, u nichž se vyskytuje pouze jeden typ bičíkového H-antigenu. Rozlišujeme celkem 89 typů H-antigenu. Kapsulární Vi antigeny jsou složeny z pouzderných povrchových polysacharidů a jsou zodpovědné za virulenci. Jsou charakteristické pro sérovary S. Typhi, S. Dublin a S. Hirschfeldii.

95 Sérologická konfirmace Salmonella spp. určení poddruhu (biochemické testy kmeny různých podruhů mohou mít stejné antigeny) rozlišení O, H a Vi antigenů aglutinačními testy za použití antisér Rozlišení izolátů s jednou antigenní H fází a s dvěma fázemi inokulace na médium, které obsahuje antisérum k určitému H-antigenu. Výsledkem je, že bakterie, které mají pouze tento určitý H-antigen, budou imobilizované antisérem, kdežto bakterie syntetizující také druhý H-antigen, budou pohybu schopné a tak porostou v celém médiu. Sklíčková aglutinace: Někteří bakteriální původci infekčních chorob uvolňují při svém množení v tekutém prostředí nadbytek svých pouzderných antigenů. Antigeny lze prokazovat např. pomocí latexových mikročástic pokrytých protilátkou proti příslušnému antigenu - částice výrazně aglutinují. Některé kmeny jsou schopny autoaglutinace k aglutinaci dochází i bez přítomnosti antisér (protilátek) aglutinaci s jednotlivými antiséry poté není možno stanovit. Identifikace na základě aglutinace s omnivalentními, polyvalentními, monovalentní O, H a Vi antiséry.

96 Koagulázapozitivní stafylokoky ČSN EN ISO (560092) Mikrobiologie potravin a krmiv - Horizontální metoda stanovení počtu koagulázapozitivních stafylokoků (Staphylococcus aureus a další druhy)-část 1: Technika s použitím agarové půdy podle Baird-Parkera 1. KROK PŘÍPRAVA SÉRIE DESÍTKOVÝCH ŘEDĚNÍ TESTOVANÉ POTRAVINY Ředící médium: pufrovaná peptonová voda 2. KROK IZOLACE CÍLOVÉHO MIKROORGANISMU Z JEDNOTLIVÝCH DESÍTKOVÝCH ŘEDĚNÍ 0,2 ml testované suspenze rozetřít na plotnu Baird-Parkerova agaru, po rozetření se inokulum nechá vsáknout 15 minut Kultivace: 37 C, 48 hodin 3. KROK KONFIRMACE A IDENTIFIKACE ZÍSKANÝCH TYPICKÝCH KOLONIÍ, STANOVENÍ POČTU KTJ A VÝPOČET KTJ/G NEBO KTJ/ML Vybrat plotny z dvou po sobě jdoucích ředění vhodné k výpočtu a z nich náhodně vybrat 5 kolonií pro konfirmaci a přeočkovat na a) krevní agar kultivace: 30 C, 24 hodin - průkaz β hemolýzy b) BHI (brain-heart infusion, mozkosrdcová infúze) kultivace: 37 C, 24 hodin - průkaz přítomnosti plazmakoagulázy

97 BAIRD-PARKER AGAR (BP) Složení (l): Základní půda (l): Pepton z kaseinu 10.0; masový extrakt 5.0; kvasničný extrakt 1.0; pyruvát sodný 10.0; glycin 12.0; chlorid lithný 5.0; agaragar Suplement Emulze vaječného žloutku s teluričitanem Egg-yolk tellurite emulsion 50 ml; pokud požadováno, sulfamethazin 0.05 g/l Živiny: pepton, masový extrakt, kvasničný extrakt Inhibice doprovodné mikroflóry: chlorid lithný, terluričitan draselný Resuscitace oslabených buněk: glycin, pyruvát sodný Diagnostické složky: Lipolýza a proteolýza vaječného žloutku tvorba projasněných zón (přítomnost lecitinázy, lipázy atd. - typické pro S. aureus) Redukce teluričitanu draselného na telur vznik černých kolonií Staphylococcus aureus ATCC Tvorba projasněných zón kolem černých kolonií je obvykle v souvislosti s pozitivním testem na koagulázu (koagulázapozitivní stafylokoky S. aureus a další druhy)

98 BAIRD-PARKER AGAR (BP) Vzhled kolonií Typické kolonie: Černé nebo šedé, lesklé, vypouklé, 1-5 mm v průměru, obklopené zónou projasnění 2-5 mm širokou, která může být zčásti matná, po nejméně 24 hod inkubace se může v těsné blízkosti kolonií objevit opalescentní prstenec. Atypické kolonie: Šedé kolonie bez zóny projasnění, nebo černé kolonie s úzkým bílým okrajem nebo bez něj, zóna projasnění chybí nebo je sotva viditelná. Atypické kolonie vytvářejí hlavně kmeny koagulázapozitivních stafylokoků izolovaných z mléčných výrobků, mořských plodů a drobů. Černé, lesklé kolonie, nepravidelného tvaru. Matné zóny se vyvíjejí kolem kolonií po 24 hodinách. Občasný růst: velmi malé kolonie, hnědé až černé, bez projasněné zóny Tmavě hnědé, zmatnělé zóny se často objevují po 48 hodinách Bílé, bez projasněných zón Mikroorganismus Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis mikrokoky Bacillus sp. Kvasinky Staphylococcus aureus ATCC 25923

99 KOAGULÁZOVÝ TEST Test na produkci koagulázy (enzym schopný koagulovat plazmu) odlišení Staphylococcus aureus (tvorba enterotoxinů, podmíněně patogenní, zdravotní riziko) od méně či zdravotně nezávadných, běžně rozšířených druhů stafylokoků (S. epidermidis, S. saprophyticus), výskyt ostatních koagulázapozitivních stafylokoků (S. schleiferi, S. intermedius) není tak běžný, produkce koagulázy obvykle koreluje s patogenitou S. aureus produkuje dva typy koagulázy vázaná koaguláza (též aglutinační faktor) zůstává přichycená k buněčné stěné volná koaguláza - extracelulární enzym produkovaný při kultivaci v bujónu Sklíčkový test smísení husté suspenze ve FR s králičí plazmou shlukování detekce pouze vázané koagulázy Zkumavkový test inkubace kultury (narostlé v BHI, několika kolonií) společně s králičí plazmou detekce volné i vázané koagulázy volná koaguláza reaguje s plazmatickým faktorem za vzniku tzv. stafylotrombinu stafylotrombin katalyzuje přeměnu fibrinogenu na fibrin (tvorba chuchvalců, sraženin či úplné ztuhnutí plazmy ve zkumavce)

100 Hemolýza Ke zjištění hemolytické aktivity se používá krevního agaru, příp. dalších agarů s krví. Tvorba hemolyzinů je typická pro řadu patogenních bakterií, ale i některých podmíněně patogenních či nepatogenních (některé streptokoky, Staphylococcus aureus, hemolytické Escherichia coli, Pseudomonas, některé bacily apod.) V okolí kolonie může dojít buď k úplné hemolýze nebo neúplné hemolýze Při neúplné hemolýze neboli viridaci dochází k částečnému rozrušení hemoglobinu na zelenohnědý pigment methemoglobin a erytrocyty nejsou lyzovány. Při úplné hemolýze dojde k úplnému rozložení hemoglobinu i lýzi erytrocytů, takže kolem kolonie dojde k vytvoření průhledného dvorce. Úplná hemolýza je často nepřesně obecně označována jako β- hemolýza, neúplná hemolýza poté jako α-hemolýza. Přesné označení však závisí na označení hemolyzinu, který hemolýzu vyvolává, což je rodově odlišné. Rod Streptococcus/Enterococcus β hemolyzin α hemolyzin γ hemolýza S. aureus úplná hemolýza způsobená α hemolyzinem 100

Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii. Sabina Purkrtová

Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii. Sabina Purkrtová Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii Sabina Purkrtová Mikrobiologické metody Analyt měřená komponenta vzorku Analyty v mikrobiologii mikroorganismy jako mikrobiální buňky části mikroorganismů

Více

OBSAH. Předm luva...9

OBSAH. Předm luva...9 OBSAH Předm luva...9 1 ÚVOD... Il 2 M IKROBIOLOGICKÝ ROZBOR POTRAVIN - LEG ISLA TIV A...12 2.1 Nařízení EU č. 178/2002...12 2.2 Nařízení EU č. 2073/2005...12 2.2.1 Kritéria bezpečnosti potravin...13 2.2.2

Více

Stanovení celkového počtu mikroorganismů

Stanovení celkového počtu mikroorganismů Stanovení celkového počtu mikroorganismů GTK agar zalití 1 ml 30 C, 72 h, aerobně počítání všech narostlých kolonií GTK agar s glukosou, tryptonem a kvasničným extraktem Typické kolonie CPM GTK agar: počítáme

Více

Kultivační metody stanovení mikroorganismů

Kultivační metody stanovení mikroorganismů Kultivační metody stanovení mikroorganismů Základní rozdělení půd Syntetická, definovaná media, jednoduché sloučeniny, známé sloţení Komplexní media, vycházejí z ţivočišných nebo rostlinných tkání a pletiv,

Více

Moderní metody stanovení mikroorganismů

Moderní metody stanovení mikroorganismů Moderní metody stanovení mikroorganismů Mgr. Martin Polách NOACK ČR, spol. s r.o. Legislativní požadavky EU na mikrobiologické parametry potravin Závazným předpisem je nařízení 1441 / 2007 / ES, pozměňující

Více

Od byla nabídka CCM rozšířena o 12 nových kontrolních. kultivačních médiích

Od byla nabídka CCM rozšířena o 12 nových kontrolních. kultivačních médiích M. Dřímalková, Z. Páčová NOVÉ KONTROLNÍ KMENY CCM PRO TESTOVÁNÍ KULTIVAČNÍCH PŮD Od 1.5.2005 byla nabídka CCM rozšířena o 12 nových kontrolních kmenů pro účely kontroly kvality kultivačních médiích Kompletní

Více

M. Laichmanová NOVINKY V NABÍDCE KONTROLNÍCH KMENŮ ČESKÉ SBÍRKY MIKROORGANISMŮ

M. Laichmanová NOVINKY V NABÍDCE KONTROLNÍCH KMENŮ ČESKÉ SBÍRKY MIKROORGANISMŮ M. Laichmanová NOVINKY V NABÍDCE KONTROLNÍCH KMENŮ ČESKÉ SBÍRKY MIKROORGANISMŮ držitel certifikátu Kompletní nabídku referenčních mikroorganizmů tvoří 157 kontrolních kmenů bakterií vláknitých hub kvasinek

Více

Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii. Sabina Purkrtová

Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii. Sabina Purkrtová Kultivační metody v potravinářské mikrobiologii Sabina Purkrtová VYŠETŘOVACÍ METODY Metody průkazu ( kvalita ) zjištění přítomnosti cílového mikroorganismu v testované potravině přítomen/nepřítomen Metody

Více

MIKROBIOLOGICKÝ ATLAS UKÁZKY RŮSTU VYBRANÝCH PŮVODCŮ ALIMENTÁRNÍCH ONEMOCNĚNÍ

MIKROBIOLOGICKÝ ATLAS UKÁZKY RŮSTU VYBRANÝCH PŮVODCŮ ALIMENTÁRNÍCH ONEMOCNĚNÍ VETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE Ústav hygieny a technologie mléka MIKROBIOLOGICKÝ ATLAS UKÁZKY RŮSTU VYBRANÝCH PŮVODCŮ ALIMENTÁRNÍCH ONEMOCNĚNÍ Petra

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS 1 Rozsah a účel Postup slouží ke stanovení počtu probiotických bakterií v doplňkových látkách, premixech

Více

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE DOPORUČENÉ KONTROLNÍ KMENY PRO TESTOVÁNÍ MÉDIÍ Vzhledem ke standardizaci práce v mikrobiologických laboratořích hrají důležitou roli použitá média a jejich kvalita. Česká sbírka mikroorganismů vám nabízí

Více

Metabolismus, taxonomie a identifikace bakterií. Karel Holada khola@lf1.cuni.cz

Metabolismus, taxonomie a identifikace bakterií. Karel Holada khola@lf1.cuni.cz Metabolismus, taxonomie a identifikace bakterií Karel Holada khola@lf1.cuni.cz Klíčová slova Obligátní aeroby Obligátní anaeroby Aerotolerantní b. Fakultativní anaeroby Mikroaerofilní b. Kapnofilní bakterie

Více

Diagnostické metody v lékařské mikrobiologii

Diagnostické metody v lékařské mikrobiologii Diagnostické metody v lékařské mikrobiologii Výuková prezentace z: Lékařské mikrobiologie Jan Smíšek ÚLM 3. LF UK 2009 Princip identifikace Soubor znaků s rozdílnou diskriminační hodnotou Základní problémy

Více

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE DOPORUČENÉ KONTROLNÍ KMENY PRO TESTOVÁNÍ MÉDIÍ V KLINICKÉ MIKROBIOLOGII - Bakteriologie Vzhledem ke standardizaci práce v mikrobiologických laboratořích hrají důležitou roli použitá média a jejich kvalita.

Více

ČSN EN ISO ČSN ISO ČSN EN ISO 6579, kromě bodu

ČSN EN ISO ČSN ISO ČSN EN ISO 6579, kromě bodu Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy. Laboratoř poskytuje odborná stanoviska a interpretace výsledků zkoušek. Zkoušky: 1. Stanovení celkového počtu mikroorganismů.

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES 1 Rozsah a účel Metodika slouží ke stanovení počtu probiotických kvasinek v doplňkových látkách, premixech a krmivech.

Více

Cíle: Obecné zásady při odběru vzorků pro bakteriologické vyšetření

Cíle: Obecné zásady při odběru vzorků pro bakteriologické vyšetření Praktikum č. 8: Diagnostika ve veterinární mikrobiologii (odběr, zasílání a zpracování vzorků určených k bakteriologickému vyšetření. Metody kultivačního stanovení koncentrace bakterií. Cíle: 1. Seznámit

Více

DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH CHOROB KULTIVACE V LABORATORNÍCH PODMÍNKÁCH

DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH CHOROB KULTIVACE V LABORATORNÍCH PODMÍNKÁCH STŘEDNÍ ZDRAVOTNICKÁ ŠKOLA A VYŠŠÍ ODBORNÁ ŠKOLA ZDRAVOTNICKÁ ŽĎÁR NAD SÁZAVOU DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH CHOROB KULTIVACE V LABORATORNÍCH PODMÍNKÁCH MGR. IVA COUFALOVÁ DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH CHOROB KULTIVACE

Více

MTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk / Jana Horáková

MTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk / Jana Horáková MTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk 15.11./16.11.2016 Jana Horáková Doporučená literatura M. Vejražka: Buněčné kultury http://bioprojekty.lf1.cuni.cz/3381/sylabyprednasek/textova-verze-prednasek/bunecnekultury-vejrazka.pdf

Více

DOPORUČENÉ KONTROLNÍ KMENY PRO TESTOVÁNÍ MÉDIÍ

DOPORUČENÉ KONTROLNÍ KMENY PRO TESTOVÁNÍ MÉDIÍ MASARYKOVA UNIVERZITA Přírodovědecká fakulta ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ (CCM) Tvrdého 14, 602 00 Brno Tel. 549 491 430, Fax 543 247 339, E-mail: ccm@sci.muni.cz http://www.sci.muni.cz/ccm/ DOPORUČENÉ

Více

Laboratorní testování na přítomnost koliformních bakterií, psychrotrofních a termorezistentních mikroorganismů a sporotvorných anaerobních bakterií

Laboratorní testování na přítomnost koliformních bakterií, psychrotrofních a termorezistentních mikroorganismů a sporotvorných anaerobních bakterií Laboratorní testování na přítomnost koliformních bakterií, psychrotrofních a termorezistentních mikroorganismů a sporotvorných anaerobních bakterií Ing. Pavel Kopunecz, ČMSCH a.s. Přehled metod hodnocení

Více

Základní mikrobiologický rozbor vody

Základní mikrobiologický rozbor vody Základní mikrobiologický rozbor vody Cíl: Stanovit celkový počet psychrofilních a mezofilních bakterií univerzální médium Stanovit indikátorové skupiny bakterií selektivní média (Endo agar, SB agar, mfc

Více

Využití antibakteriálních testů v textilním průmyslu Mgr. Irena Šlamborová, Ph.D.

Využití antibakteriálních testů v textilním průmyslu Mgr. Irena Šlamborová, Ph.D. Využití antibakteriálních testů v textilním průmyslu Mgr. Irena Šlamborová, Ph.D. Fakulta Přírodovědně-humanitní a pedagogická, katedra chemie OBSAH: 1. Stavba a fyziologie bakterií. 2. Kultivace bakterií,

Více

Enterobacter. Salmonella spp. Agro-Food Diagnostics AUSTRIA BULGARIA CROATIA CZECH REPUBLIC HUNGARY POLAND ROMANIA SERBIA SLOVAKIA SLOVENIA

Enterobacter. Salmonella spp. Agro-Food Diagnostics AUSTRIA BULGARIA CROATIA CZECH REPUBLIC HUNGARY POLAND ROMANIA SERBIA SLOVAKIA SLOVENIA Enterobacter Salmonella spp. Salmonella ISO 6579 - MSRV Agar ISO 6579 Vysoká selektivita Snadná příprava Cenově efektivní Sušené i hotové medium bez přídavku suplementů ISO metoda stanovení Listeria monocytogenes

Více

Ukázky: CCM katalog Anaerostat + generátor anaerobní atmosféry Plastové kličky Termostat se třepačkou. Očkovánía kultivace

Ukázky: CCM katalog Anaerostat + generátor anaerobní atmosféry Plastové kličky Termostat se třepačkou. Očkovánía kultivace Ukázky: CCM katalog Anaerostat + generátor anaerobní atmosféry Plastové kličky Termostat se třepačkou Očkovánía kultivace Bakteriálnídruh = jasněvymezenáskupina navzájem příbuzných kmenů, zahrnujících

Více

Dana Baudišová. Novinky v mikrobiologii vody 2016

Dana Baudišová. Novinky v mikrobiologii vody 2016 Dana Baudišová Novinky v mikrobiologii vody 2016 Nová Směrnice EU o pitné vodě Vyšla na podzim 2015, do 2 let nutná implementace v České republice (tzn. bude nová vyhláška ) Hlavní změny (pro mikrobiology):

Více

ČSN EN ISO ČSN ISO 4832

ČSN EN ISO ČSN ISO 4832 Pracoviště zkušební laboratoře: 1. Praha 2. Brno Areál Slatina, Tuřanka 115, 627 00 Brno Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy. Laboratoř poskytuje odborná stanoviska

Více

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE Česká sbírka mikroorganismů (CCM) tel.: +420 549 491 430 fax +420 549 498 289 e-mail: ccm@sci.muni.cz http://www.sci.muni.cz/ccm

Více

ČSN EN ISO ČSN ISO 4832

ČSN EN ISO ČSN ISO 4832 Pracoviště zkušební laboratoře: 1. Praha Poděbradská 186/56, 198 00 Praha 9-Hloubětín 2. Brno Areál Slatina, Tuřanka 115, 627 00 Brno Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy.

Více

Základní mikrobiologický rozbor vody (povrchové nebo pitné) Cíl cvičení doplňte prosím individuálně dle svého vzorku:

Základní mikrobiologický rozbor vody (povrchové nebo pitné) Cíl cvičení doplňte prosím individuálně dle svého vzorku: Základní mikrobiologický rozbor vody (povrchové nebo pitné) Cíl cvičení doplňte prosím individuálně dle svého vzorku: Jedna skupinka bude pracovat s pitnou (studniční, kohoutek, balená..) vodou, zbylé

Více

Příloha je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 647/2014 ze dne: 13.10.2014

Příloha je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 647/2014 ze dne: 13.10.2014 Pracoviště zkušební laboratoře: 1 Praha 2 Plzeň Pod Vrchem 51, 312 80 Plzeň 3 Brno Areál Slatina, Tuřanka 115, 627 00 Brno Laboratoř je způsobilá poskytovat odborná stanoviska a interpretace výsledků zkoušek.

Více

ČSN EN ISO ČSN ISO 4832

ČSN EN ISO ČSN ISO 4832 Pracoviště zkušební laboratoře: 1. Praha Poděbradská 186/56, 198 00 Praha 9 Hloubětín 2. Brno Areál Slatina, Tuřanka 115, 627 00 Brno Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy.

Více

DYNAMIKA BAKTERIÁLNÍHO RŮSTU

DYNAMIKA BAKTERIÁLNÍHO RŮSTU Úvod DYNAMIKA BAKTERIÁLNÍHO RŮSTU Bakterie mohou přežívat za velice rozdílných podmínek prostředí Jednotlivé druhy však rostou za limitovaných podmínek prostředí Bakteriální kolonie V přírodě existují

Více

Metody sterilní práce. Očkování a uchovávání mikroorganismů.

Metody sterilní práce. Očkování a uchovávání mikroorganismů. Metody sterilní práce. Očkování a uchovávání mikroorganismů. Základní pojmy Bakteriální druh jasně vymezená skupina navzájem příbuzných kmenů, zahrnujících typový kmen sdílí 70% a vyšší DNA-DNA homologii

Více

LABORATOŘ OBORU MIKROBIOLOGIE ÚLOHA Č. 11 MIKROBIOLOGICKÝ ROZBOR POTRAVINÁŘSKÉHO VÝROBKU PLOTNOVOU METODOU MIKROBIOLOGICKÁ KONTROLA PROSTŘEDÍ

LABORATOŘ OBORU MIKROBIOLOGIE ÚLOHA Č. 11 MIKROBIOLOGICKÝ ROZBOR POTRAVINÁŘSKÉHO VÝROBKU PLOTNOVOU METODOU MIKROBIOLOGICKÁ KONTROLA PROSTŘEDÍ LABORATOŘ OBORU MIKROBIOLOGIE ÚLOHA Č. 11 MIKROBIOLOGICKÝ ROZBOR POTRAVINÁŘSKÉHO VÝROBKU PLOTNOVOU METODOU MIKROBIOLOGICKÁ KONTROLA PROSTŘEDÍ Vedoucí práce: Ing. Šárka Horáčková, CSc. (sarka.horackova@vscht.cz)

Více

HOTOVÁ KULTIVAČNÍ MÉDIA. Katalog 2012/2013

HOTOVÁ KULTIVAČNÍ MÉDIA. Katalog 2012/2013 HOTOVÁ KULTIVAČNÍ MÉDIA Katalog 2012/2013 Obsah Hotová kultivační média na Petriho miskách...3 Hotová kultivační média na půlených miskách...27 Hotová kultivační média ve zkumavkách...33 Hotová kultivační

Více

Optimalizace metody PCR pro její využití na vzorky KONTAMINOVANÝCH PITNÝCH VOD

Optimalizace metody PCR pro její využití na vzorky KONTAMINOVANÝCH PITNÝCH VOD Optimalizace metody PCR pro její využití na vzorky KONTAMINOVANÝCH PITNÝCH VOD Dana Vejmelková, Milan Šída, Kateřina Jarošová, Jana Říhová Ambrožová VODÁRENSKÁ BIOLOGIE, 1. 2. 2017 ÚVOD Sledované parametry,

Více

Funkční vzorek 5452/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u gramnegativních bakterií II.

Funkční vzorek 5452/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u gramnegativních bakterií II. Funkční vzorek 5452/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u gramnegativních bakterií II. řada Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního

Více

Využití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách

Využití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách Využití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách Chemie a mikrobiologie potravin, III. ročník Ústav hygieny a technologie mléka, FVHE, VFU Brno Říjen 2013 Technika ELFA Enzyme Linked

Více

Identifikace bakterií (biochemické testy, standardizované identifikační systémy)

Identifikace bakterií (biochemické testy, standardizované identifikační systémy) Identifikace bakterií (biochemické testy, standardizované identifikační systémy) Cíl: Identifikace neznámého izolátu Identifikace MO stanovení příslušnosti k určité taxonomické skupině - čistá kultura!!!!

Více

ROZDĚLENÍ A POŽADAVKY NA KATEGORIE FUNKCE VÝROBKU, KATEGORIE SLOŽKOVÝCH MATERIÁLŮ. Jana Meitská Sekce zemědělských vstupů ÚKZÚZ Brno

ROZDĚLENÍ A POŽADAVKY NA KATEGORIE FUNKCE VÝROBKU, KATEGORIE SLOŽKOVÝCH MATERIÁLŮ. Jana Meitská Sekce zemědělských vstupů ÚKZÚZ Brno ROZDĚLENÍ A POŽADAVKY NA KATEGORIE FUNKCE VÝROBKU, KATEGORIE SLOŽKOVÝCH MATERIÁLŮ Jana Meitská Sekce zemědělských vstupů ÚKZÚZ Brno KATEGORIE HNOJIVÝCH VÝROBKŮ (DLE FUNKCE) 1. Hnojivo 2. Materiál k vápnění

Více

VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ PLOTNOVÝCH METOD

VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ PLOTNOVÝCH METOD VETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE Ústav hygieny a technologie mléka VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ PLOTNOVÝCH METOD Petra Tylšová Karolína Hásková MVDr. Šárka Bursová,

Více

Baudišová D. Metody analýz koupacích vod v České republice

Baudišová D. Metody analýz koupacích vod v České republice Baudišová D. Metody analýz koupacích vod v České republice Hlavní problémy V České republice bylo v roce 2011 evidováno 264 přírodních koupacích vod, z toho 183 koupacích míst, které byly reportovány Evropské

Více

NÁVOD PRO STANOVENÍ ŽIVOTASCHOPNÝCH MIKROORGANISMŮ V BIOAEROSOLECH MONITORING VNITŘNÍHO PROSTŘEDÍ V MATEŘSKÝCH ŠKOLKÁCH 2016

NÁVOD PRO STANOVENÍ ŽIVOTASCHOPNÝCH MIKROORGANISMŮ V BIOAEROSOLECH MONITORING VNITŘNÍHO PROSTŘEDÍ V MATEŘSKÝCH ŠKOLKÁCH 2016 NÁVOD PRO STANOVENÍ ŽIVOTASCHOPNÝCH MIKROORGANISMŮ V BIOAEROSOLECH MONITORING VNITŘNÍHO PROSTŘEDÍ V MATEŘSKÝCH ŠKOLKÁCH 016 1 Úvod 1.1 Předmět a vymezení působnosti Tento postup je určen pouze pro projekt

Více

Společnost pro lékařskou mikrobiologii ČLS JEP

Společnost pro lékařskou mikrobiologii ČLS JEP Platné od: 1.7.2014 NÁRODNÍ STANDARDNÍ VYŠETŘOVACÍ POSTUP - ZÁKLADNÍ MIKROBIOLOGICKÉ VYŠETŘENÍ KOMPLEXNÍHO VZORKU STOLICE A VÝTĚRU Z REKTA METODOU MIKROSKOPICKOU A KULTIVAČNÍ Příloha 1 KULTIVAČNÍ MÉDIA,

Více

Příloha č.: 1 ze dne: 29.5.2007 je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 416/2007 ze dne: 29.5.2007

Příloha č.: 1 ze dne: 29.5.2007 je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 416/2007 ze dne: 29.5.2007 je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 416/2007 ze dne: 29.5.2007 Akreditovaný subjekt: List 1 z 9, Laboratoř pro vyšetřování potravin Protokoly o zkouškách podepisuje: RNDr. Mojmír Gánoczy vedoucí

Více

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie ÚSTAV TECHNOLOGIE VODY A PROSTŘEDÍ N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie Název úlohy: Kultivační stanovení: Stanovení intestinálních enterokoků Vypracováno v rámci projektu: Inovace a restrukturalizace

Více

MIKROBIOLOGIE. Grampozitivní kokovitá bakterie STAPHYLOCOCCUS AUREUS bakteriální kmen dle ATCC 1260 (CCM 888).

MIKROBIOLOGIE. Grampozitivní kokovitá bakterie STAPHYLOCOCCUS AUREUS bakteriální kmen dle ATCC 1260 (CCM 888). MIKROBIOLOGIE Veškeré testy jsou prováděny s těmito bakteriálními kmeny: Gramnegativní tyčinkovitá bakterie ESCHERICHIA COLI bakteriální kmen dle ATCC 9637 (CCM 2024). Grampozitivní kokovitá bakterie STAPHYLOCOCCUS

Více

Dana Baudišová. Novinky v mikrobiologii vody 2014

Dana Baudišová. Novinky v mikrobiologii vody 2014 Dana Baudišová Novinky v mikrobiologii vody 2014 Heterotrofní mikroorganismy Počty kolonií při 36 a 22 C kultivovatelné mikroorganismy Dominantními taxony tohoto spektra jsou Acinetobacter spp., Aeromonas

Více

Výskyt a typizace mléčných bakterií v baleném mase

Výskyt a typizace mléčných bakterií v baleném mase Výskyt a typizace mléčných bakterií v baleném mase 1 Štegnerová, H., 2 Nápravníková, E., 2 Steinhauserová, I., 1 Švec, P. 1 MU PřF, Česká sbírka mikroorganismů (CCM) 2 VFU, FVHE, Ústav hygieny a technologie

Více

Přístroje na doúpravu pitné vody z hlediska mikrobiologie MUDr. Markéta Chlupáčová Státní zdravotní ústav, Praha

Přístroje na doúpravu pitné vody z hlediska mikrobiologie MUDr. Markéta Chlupáčová Státní zdravotní ústav, Praha Přístroje na doúpravu pitné vody z hlediska mikrobiologie MUDr. Markéta Chlupáčová Státní zdravotní ústav, Praha Konzultační den SZÚ Problematika vodních filtrů a úpravy pitné vody v místě spotřeby 15.11.2005

Více

DYNAMIKA BAKTERIÁLNÍHO RŮSTU

DYNAMIKA BAKTERIÁLNÍHO RŮSTU Úvod DYNAMIKA BAKTERIÁLNÍHO RŮSTU Bakterie mohou přežívat za velice rozdílných podmínek prostředí Jednotlivé druhy však rostou za limitovaných podmínek prostředí Bakteriální kolonie V přírodě existují

Více

VÚVeL Brno Kontrola hygieny prostředí a bezpečnosti výrobků v mlékárenských provozech

VÚVeL Brno Kontrola hygieny prostředí a bezpečnosti výrobků v mlékárenských provozech 13. 6. 2019 VÚVeL Brno Kontrola hygieny prostředí a bezpečnosti výrobků v mlékárenských provozech Obsah: o Zapeklitosti odběru vzorků pro mikrobiologický monitoring o Norma ČSN EN ISO 18593:2018 Mikrobiologie

Více

Bakteriologická analýza potravin

Bakteriologická analýza potravin Bakteriologická analýza potravin a. Souhrn Ve studii zaměřené na bakteriologickou analýzu potravin jsme sledovali výskyt vybraných patogenních agens v potravinách z tržní sítě. Výběr vyšetřovaných komodit

Více

Obecné zásady interpretace výsledků - mikrobiologie vody

Obecné zásady interpretace výsledků - mikrobiologie vody Obecné zásady interpretace výsledků - mikrobiologie vody Hodnocení rozborů vody Konzultační den RNDr. Jaroslav Šašek ČSN P ENV ISO 13843: 2002 Jakost vod - Pokyny pro validaci mikrobiologických metod Mez

Více

PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD

PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD 1* P. Mikula, 1 B. Maršálek 1 Botanický ústav Akademie věd ČR, Oddělení experimentální fykologie a ekotoxikologie,

Více

Chemila, spol. s r.o. Chemická a mikrobiologická laboratoř Za Dráhou 4386/3, Hodonín

Chemila, spol. s r.o. Chemická a mikrobiologická laboratoř Za Dráhou 4386/3, Hodonín Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy. Laboratoř poskytuje odborná stanoviska a interpretace výsledků zkoušek. Zkoušky: 1.* Stanovení teploty SOP-CH-01-00 (ČSN 75 7342)

Více

BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar Improved II with 5% Sheep Blood (Biplate)

BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar Improved II with 5% Sheep Blood (Biplate) NÁVOD K POUŽITÍ MÉDIA NA MISCE URČENÁ K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ PA-257574.02 Rev.: Sept. 2015 BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar Improved II with 5% Sheep Blood (Biplate) ÚČEL POUŽITÍ Médium BD MacConkey

Více

Dana Baudišová. Doporučené metody ke stanovení E. coli a intestinálních enterokoků v povrchových vodách ke koupání v České republice

Dana Baudišová. Doporučené metody ke stanovení E. coli a intestinálních enterokoků v povrchových vodách ke koupání v České republice Dana Baudišová Doporučené metody ke stanovení E. coli a intestinálních enterokoků v povrchových vodách ke koupání v České republice Úvod V letech 2011-2013 byl řešen projekt Technologické agentury České

Více

Vyšetřování vody před 100 lety a dnes. RNDr. Jaroslav Šašek Státní zdravotní ústav

Vyšetřování vody před 100 lety a dnes. RNDr. Jaroslav Šašek Státní zdravotní ústav Vyšetřování vody před 100 lety a dnes RNDr. Jaroslav Šašek Státní zdravotní ústav Milníky mikrobiologie vody dávno před objevem mikroskopu je předpokládán výskyt mikrobů v prostředí podezření na vznik

Více

Úvod do identifikace bakterií

Úvod do identifikace bakterií Úvod do identifikace bakterií Základní biochemické testy Průvodce do cvičení Salmonella typhi Proteus Yersinia pestis 1 Identifikační testy Zkumavkové Mikrotesty v 1 soupravě je 10-20 biochem. testů ENTEROtest,

Více

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA PODLE ČSN EN ISO/IEC 17043, REG. Č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 Vinohrady Závěrečná

Více

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA PODLE ČSN EN ISO/IEC 17043, REG. Č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 Vinohrady Závěrečná

Více

VYUŽITÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE PRO DETEKCI ÚČINNOSTI FILTRACE BAKTERIÍ V PROCESECH ČIŠTĚNÍ ODPADNÍCH VOD

VYUŽITÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE PRO DETEKCI ÚČINNOSTI FILTRACE BAKTERIÍ V PROCESECH ČIŠTĚNÍ ODPADNÍCH VOD VYUŽITÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE PRO DETEKCI ÚČINNOSTI FILTRACE BAKTERIÍ V PROCESECH ČIŠTĚNÍ ODPADNÍCH VOD P. Mikula a*, J. Lev b,c, L. Kalhotka b, M. Holba a,c, D. Kimmer d, B. Maršálek a, M. Vítězová b a)

Více

Nutriční aspekty konzumace mléčných výrobků

Nutriční aspekty konzumace mléčných výrobků Nutriční aspekty konzumace mléčných výrobků Prof. MVDr. Lenka VORLOVÁ, Ph.D. a kolektiv FVHE VFU Brno Zlín, 2012 Mléčné výrobky mají excelentní postavení mezi výrobky živočišného původu - vyšší biologická

Více

Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze

Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze 1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,

Více

Bakteriologická analýza potravin

Bakteriologická analýza potravin a. Souhrn Bakteriologická analýza potravin Ve studii zaměřené na bakteriologickou analýzu potravin jsme sledovali výskyt vybraných patogenních agens v potravinách z tržní sítě. Výběr vyšetřovaných komodit

Více

Funkční vzorek 5454/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Pseudomonas spp.

Funkční vzorek 5454/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Pseudomonas spp. Funkční vzorek 5454/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Pseudomonas spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,

Více

Acta hygienica, epidemiologica et microbiologica Číslo 1/2008

Acta hygienica, epidemiologica et microbiologica Číslo 1/2008 Acta hygienica, epidemiologica et microbiologica Číslo 1/2008 Metodický návod pro stanovení indikátorových organismů v bioodpadech, upravených bioodpadech, kalech z čistíren odpadních vod, digestátech,

Více

Úvod do potravinářské legislativy Lekce 7-1: mikrobiologické požadavky na potraviny

Úvod do potravinářské legislativy Lekce 7-1: mikrobiologické požadavky na potraviny Úvod do potravinářské legislativy Lekce 7-1: mikrobiologické požadavky na potraviny Ústav analýzy potravin a výživy prof. ing. Vladimír Kocourek, CSc. a doc. ing. Kamila Míková, CSc. a ing. Jana Kohoutková,

Více

ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN

ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN Možnosti stanovení Listeria monocytogenes popis metod a jejich princip Mária Strážiková Aleš Holfeld Obsah Charakteristika Listeria monocytogenes Listerióza Metody detekce

Více

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA PODLE ČSN EN ISO/IEC 17043, REG. Č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 Vinohrady Závěrečná

Více

NÁVRH A PŘÍPRAVA PEPTIDŮ A LIPOPEPTIDŮ S ANTIMIKROBIÁLNÍM ÚČINKEM A STUDIUM JEJICH BIOLOGICKÝCH VLASTNOSTÍ

NÁVRH A PŘÍPRAVA PEPTIDŮ A LIPOPEPTIDŮ S ANTIMIKROBIÁLNÍM ÚČINKEM A STUDIUM JEJICH BIOLOGICKÝCH VLASTNOSTÍ NÁVRH A PŘÍPRAVA PEPTIDŮ A LIPOPEPTIDŮ S ANTIMIKROBIÁLNÍM ÚČINKEM A STUDIUM JEJICH BIOLOGICKÝCH VLASTNOSTÍ A. Macůrková R. Ježek P. Lovecká V. Spiwok P. Ulbrich T. Macek Antimikrobiální peptidy přírodní

Více

Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem

Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem Centrum imunologie a mikrobiologie, odd.přípravných provozů Návod k použití - testovací organismy pro kontrolu kvality kultivačních médií Strana 1 z 5 Označení:

Více

PT#M/5-4/2018 (č.1045v) Bakteriologická diagnostika

PT#M/5-4/2018 (č.1045v) Bakteriologická diagnostika Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti Poskytovatel zkoušení způsobilosti akreditovaný ČIA podle ČSN EN ISO/IEC 17043, reg. č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 Vinohrady Zkoušení

Více

ODSTRAŇOVÁNÍ KYANIDŮ Z MODELOVÝCH VOD

ODSTRAŇOVÁNÍ KYANIDŮ Z MODELOVÝCH VOD ODSTRAŇOVÁNÍ KYANIDŮ Z MODELOVÝCH VOD Jana Muselíková 1, Jiří Palarčík 1, Eva Slehová 1, Zuzana Blažková 1, Vojtěch Trousil 1, Sylva Janovská 2 1 Ústav environmentálního a chemického inženýrství, Fakulta

Více

Jméno a příjmení: Datum odevzdání protokolu:

Jméno a příjmení: Datum odevzdání protokolu: Jméno a příjmení: Datum odevzdání protokolu: Seznam odevzdaných úloh: Číslo úlohy Název úlohy 1. Biologický rozbor vzorku studny (včetně posouzení jejího charakteru dle platné legislativy) 2. Stanovení

Více

Kultivace bakterií na

Kultivace bakterií na Kultivace bakterií na pevných půdáchp Prezentace pro obor: Všeobecná sestra Jan Smíšek ÚLM 3. LF UK 2008 Základy kultivace Bakterie v mikrobiologii kultivujeme (pěstujeme) na tekutých a pevných živných

Více

J02 Kultivace bakterií a kvasinek

J02 Kultivace bakterií a kvasinek VLLM0421c (jaro 2016) J02 Kultivace bakterií a kvasinek Osnova množení mikrobů, růstová křivka výživa mikrobů a podmínky kultivace kultivace tekuté půdy pevné půdy očkování na pevné půdy 2/38 Množení bakterií

Více

Příprava půd pro diskovou difuzní metodu EUCAST a pro vyšetření hodnot MIC bujonovou mikrodiluční metodou. Změny proti předchozí verzi (v. 4.

Příprava půd pro diskovou difuzní metodu EUCAST a pro vyšetření hodnot MIC bujonovou mikrodiluční metodou. Změny proti předchozí verzi (v. 4. Version 5.0 January 2017 Příprava půd pro diskovou difuzní metodu EUCAST a pro vyšetření hodnot MIC bujonovou mikrodiluční metodou. Změny proti předchozí verzi (v. 4.0) A. Půdy pro diskovou difuzní metodu

Více

Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem

Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem Centrum imunologie a mikrobiologie, odd. přípravných provozů Informace poskytované výrobcem - kultivační půdy Strana 1 z 4 16.2.-SOPn-2-VKP Název média Klasifikace

Více

KONTROLA HYGIENY VÝROBNÍHO PROCESU

KONTROLA HYGIENY VÝROBNÍHO PROCESU Aktivita Název inovace Inovace předmětu Registrační číslo projektu Název projektu Název příjemce podpory KA 2350/4-10up KONTROLA HYGIENY VÝROBNÍHO PROCESU H1DKZ - Hygiena a technologie drůbeže, králíků

Více

Základy kultivace. Kolonie

Základy kultivace. Kolonie Kultivace bakterií na pevných půdách Bakterie v mikrobiologii kultivujeme (pěstujeme) na tekutých a pevných živných půdách Tekuté půdy se skládají ze směsi živin rozpuštěných ve vodě Pevné půdy se skládají

Více

POROVNÁNÍ METOD STANOVENÍ INDIKÁTORVÝCH ORGANISMŮ V ČISTÍRENSKÝCH KALECH

POROVNÁNÍ METOD STANOVENÍ INDIKÁTORVÝCH ORGANISMŮ V ČISTÍRENSKÝCH KALECH POROVNÁNÍ METOD STANOVENÍ INDIKÁTORVÝCH ORGANISMŮ V ČISTÍRENSKÝCH KALECH lmateju@szu.cz Vodárenská biologie 2009 Státní zdravotní ústav Šrobárova 47, Praha 10 Indikátorové organismy V členských zemích

Více

14. Biotechnologie. 14.4 Výroba kvasné kyseliny octové. 14.6 Výroba kyseliny citronové. 14.2 Výroba kvasného etanolu. 14.1 Výroba sladu a piva

14. Biotechnologie. 14.4 Výroba kvasné kyseliny octové. 14.6 Výroba kyseliny citronové. 14.2 Výroba kvasného etanolu. 14.1 Výroba sladu a piva 14. Biotechnologie 14.1 Výroba sladu a piva 14.2 Výroba kvasného etanolu 14.3 Výroba droždí 14.4 Výroba kvasné kyseliny octové 14.5 Výroba kyseliny mléčné 14.6 Výroba kyseliny citronové 14.7 Výroba antibiotik

Více

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA PODLE ČSN EN ISO/IEC 17043, REG. Č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 Vinohrady Závěrečná

Více

OBOROVÁ SPECIFIKACE Březen 2010

OBOROVÁ SPECIFIKACE Březen 2010 OBOROVÁ SPECIFIKACE Březen 2010 Praní Hygienicko-epidemiologické kontroly v prádelně OS 80-05 Předmluva Vydávání oborových specifikací Textilním zkušebním ústavem (Centrum technické normalizace) bylo odsouhlaseno

Více

ONLINE BIOSENZORY PŘI HLEDÁNÍ KONTAMINACE PITNÉ VODY

ONLINE BIOSENZORY PŘI HLEDÁNÍ KONTAMINACE PITNÉ VODY ONLINE BIOSENZORY PŘI HLEDÁNÍ KONTAMINACE PITNÉ VODY Ing. Jana Zuzáková Ing. Jana Zuzáková, Doc. RNDr. Jana Říhová Ambrožová, PhD., Ing. Dana Vejmelková, PhD., Ing. Roman Effenberg, RNDr. Miroslav Ledvina

Více

Ověřená technologie 4782/2017

Ověřená technologie 4782/2017 Ověřená technologie 4782/2017 Výroba setu ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Enterococcus spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního

Více

PT#M/5-1/2018 (č.1004v) Bakteriologická diagnostika

PT#M/5-1/2018 (č.1004v) Bakteriologická diagnostika Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti Poskytovatel zkoušení způsobilosti akreditovaný ČIA podle ČSN EN ISO/IEC 17043, reg. č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 Vinohrady Zkoušení

Více

Bakteriologická analýza potravin

Bakteriologická analýza potravin Bakteriologická analýza potravin a. Souhrn Ve studii zaměřené na bakteriologickou analýzu potravin jsme sledovali výskyt vybraných patogenních agens v potravinách z tržní sítě. Výběr vyšetřovaných komodit

Více

Státní veterinární ústav Praha Zkušební laboratoř hygieny potravin a krmiv Sídlištní 136/24, 165 03 Praha 6 Lysolaje

Státní veterinární ústav Praha Zkušební laboratoř hygieny potravin a krmiv Sídlištní 136/24, 165 03 Praha 6 Lysolaje List 1 z 5 Protokoly o zkouškách podepisuje: Zkoušky: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 MVDr. Jan Kučera vedoucí ZLHPK (1 47) MVDr. Stanislava Herčíková zástupce vedoucího ZLHPK (1 40, 44 47) MVDr. Ivana Chytilová

Více

Monitoring mikrobiologického oživení v provozu demineralizační linky na elektrárně Ledvice

Monitoring mikrobiologického oživení v provozu demineralizační linky na elektrárně Ledvice Monitoring mikrobiologického oživení v provozu demineralizační linky na elektrárně Ledvice VODÁRENSKÁ BIOLOGIE 2019 L. Baumruková, M. Skala, J. Říhová Ambrožová, P. Kůs, R. Seydl VŠCHT Praha Centrum výzkum

Více

Funkční vzorek 5456/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Enterococcus spp.

Funkční vzorek 5456/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Enterococcus spp. Funkční vzorek 5456/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Enterococcus spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,

Více

KATALOG produktů firmy Biolife Srl Živné půdy

KATALOG produktů firmy Biolife Srl Živné půdy KATALOG 2013 Srl Živné půdy Katalogové číslo 4010012 4010202 4010192 4010142 40101412 4010322 4016052 4016054 4010342 4010492 4010502 4010652 4010752 4010852 4010902 40109511 40109512 4011002 KATALOG produktů

Více

Mikrobiologické požadavky. Kamila Míková

Mikrobiologické požadavky. Kamila Míková Mikrobiologické požadavky Kamila Míková Mikrobiologické požadavky Do r. 2006 národní legislativy (Vyhláška č. 294/1997 Sb. ve znění novely č. 132/2004 Sb.) dnes ČSN 56 9609 Dnes Nařízení komise o mikrobiologických

Více

Mikroorganismy v potravinách

Mikroorganismy v potravinách Přírodní mikroflora Mikroorganismy do prostředí uvedené Mikroorganismy v potravinách Kažení potravin Fermentační procesy Otravy z potravin Potraviny nejsou sterilní!!!! Kontaminace člověkem Vzduch, půda,

Více

Funkční vzorek 4595/2018. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Streptococcus suis

Funkční vzorek 4595/2018. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Streptococcus suis Funkční vzorek 4595/2018 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Streptococcus suis Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,

Více

Ing. Josef Němec Chemická a mikrobiologická laboratoř U Ovčína 53, Nový Dvůr, Písek

Ing. Josef Němec Chemická a mikrobiologická laboratoř U Ovčína 53, Nový Dvůr, Písek Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy. Zkoušky: 1 Stanovení celkového počtu mikroorganismů 2 Stanovení počtu koliformních bakterií 3 Stanovení počtu kvasinek a plísní

Více

Ing. Josef Němec Chemická a mikrobiologická laboratoř U Ovčína 53, Nový Dvůr, Písek

Ing. Josef Němec Chemická a mikrobiologická laboratoř U Ovčína 53, Nový Dvůr, Písek Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy. Zkoušky: 1 Stanovení celkového počtu mikroorganismů 2 Stanovení počtu koliformních bakterií 3 Stanovení počtu kvasinek a plísní

Více