ELEKTROFORETICKÉ METODY
|
|
- Lukáš Veselý
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 ELEKTROFORETICKÉ METODY ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE AMINOKYSELIN NA PAPÍROVÉM NOSIČI Aminokyseliny lze rozdělit elektroforézou na papíře. Protože molekulová hmotnost jednotlivých aminokyselin není příliš odlišná, je hlavním důvodem jejich různé pohyblivosti v elektrickém poli odlišnost jejich náboje v použitém pufru. V neutrálním prostředí bude celkový náboj aminokyseliny, a tím i směr pohybu jejích molekul v elektrickém poli, záviset na přítomnosti disociovatelných skupin v postranním řetězci. Schématické znázornění elektroforézy na papíře. Po rozdělení ve stejnosměrném elektrickém poli na chromatografickém papíře se aminokyseliny detekují pomocí ninhydrinu, který při reakci s volnými aminoskupinami za tepla vytváří většinou fialově zbarvené produkty. Pouze iminokyselina Pro poskytuje žlutý produkt. Materiál a chemikálie: elektroforetická aparatura zdroj stejnosměrného napětí vysoušeč vlasů kapiláry k nanášení vzorků filtrační papír, nastříhaný na pásy 12,5 46 cm elektrodový pufr 0,1M fosfátový ph 6,8 0,2% ethanolový roztok ninhydrinu vzorky aminokyselin o koncentraci 1,6 mg/ml (Gly, Glu, Lys, Pro) Pracovní postup: Do obou elektrodových prostorů nalijte odměrným válcem cca 600 ml fosfátového pufru ph 6,8 tak, aby roztok přetékal přes ozubené přepážky dna elektrodových nádob. Na pásu filtračního papíru naznačte lehce měkkou tužkou středovou startovní čáru a na ní si označte 5 bodů, kam nanesete 4 standardy a 1 vzorek (směs dvou nebo tří aminokyselin). Vzorky (asi 20 l) nanášejte ve vzdálenosti asi 20 mm od sebe tak, aby skvrna vzorku byla co nejmenší. Jednotlivé kapky nanášeného vzorku vysoušejte vysoušečem vlasů. Při nanášení vzorků se nedotýkejte prsty papírového nosiče, zejména ne v oblasti, kde bude probíhat dělení.
2 Chromatografický papír s nanesenými a vysušenými vzorky vložte do elektroforetické aparatury tak, aby startovní linie se vzorky ležela právě nad středovou podpěrkou. Oba konce papíru ponořte do prostoru s elektrodovým pufrem. Filtační papír navlhčete pomocí Pasteurových pipet elektrodovým pufrem až 1 cm před startovní linii (aby nedošlo k rozmytí vzorků). Po té vyčkejte, až bude vzlínajícím pufrem navlhčena i startovní linie. Po kontrole správného zapojení přiklopte víkem a asistent zapne přístroj (napětí V, proud cca 5-10 ma na jeden elektroforeogram nebo ma na dva elektoroforeogramy). Elektroforetický experiment nechte probíhat po dobu 1,5 hod. Během této doby se věnujte druhé části této laboratorní úlohy ( Stanovení molekulové hmotnosti bílkovin elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsíranu sodného ) za občasného kontrolování chodu přístroje. Po skončení elektroforézy a vypnutí zdroje sejměte víko aparatury, vyjměte elektroforeogram a usušte jej ve vodorovné poloze na připravených stojáncích pomocí vysoušeče vlasů. Detekci aminokyselin proveďte protažením elektroforeogramu 0,2% ethanolovým roztokem ninhydrinu a vysušením proudem teplého vzduchu z vysoušeče. Vyhodnocení výsledků: Viditelné skvrny označte tužkou, porovnejte polohy skvrn jednotlivých standardů a vzorku na elektroforeogramu a určete složení vzorku. Výsledky uveďte v protokolu, k němuž též přiložíte elektroforeogram. Kontrolní otázky: 1. Nevýhodou klasické volné elektroforézy je rozmývání zón separovaných látek působením konvekčních proudů vznikajících Joulovým teplem. Jak lze tomuto rozmývání zón předejít? 2. Směs tří dipeptidů (struktura naznačena v obrázku) byla nanesena na proužek filtračního papíru (na startovní linii, svislá čárka uprostřed), který byl poté zvlhčen pufrem o ph 6,0. Pak na něj bylo vloženo stejnosměrné napětí (polarita vyznačena). Po hodině byl proužek vysušen a skvrny jednotlivých peptidů identifikovány reakcí s ninhydrinem. Vysvětlete rozložení skvrn. 3. Směs aminokyselin histidinu, kyseliny asparagové a glutaminu byla dělena elektroforézou na papíře. Vzorek byl nanesen na startovací čáru uprostřed papírového nosiče a dělení probíhalo v 0,1M acetátovém pufru ph 4,5. Načrtněte polohu skvrn jednotlivých aminokyselin po detekci ninhydrinem. 4. Po elektroforetickém dělení směsi aminokyselin lysinu a glycinu (1:1) byla detekována jediná skvrna v prostoru mezi startovní linií a anodou. V jakém ph elektroforéza probíhala?
3 STANOVENÍ MOLEKULOVÉ HMOTNOSTI BÍLKOVIN ELEKTROFORÉZOU V POLYAKRYLAMIDOVÉM GELU V PŘÍTOMNOSTI DODECYLSÍRANU SODNÉHO (SDS-PAGE) Při elektroforéze se bílkoviny dělí podle náboje a velikosti svých molekul. Aniontový detergent dodecylsíran sodný (SDS) se váže na povrch proteinů, čímž je denaturuje a uděluje jim jednotný záporný náboj; proteiny tak získávají podobný tvar a analogickou hustotu náboje. Pomocí SDS - PAGE lze určit molekulovou hmotnost bílkovin srovnáním se bílkovinnými standardy o známých molekulových hmotnostech. Přidá-li se ke vzorku bílkovin merkaptoethanol nebo dithiothreitol, který redukuje disulfidové vazby, je možno stanovit molekulovou hmotnost jednotlivých polypeptidových řetězců. Detekci separovaných bílkovin v této úloze provedeme pomocí barvícího roztoku Coomassie Blue R-250. Vaším úkolem bude stanovit molekulovou hmotnost neznámých bílkovin ve vzorcích A, B a C podle standardu molekulových hmotností a následně podle přiložené tabulky určit, o jakou bílkovinu se v jednotlivých vzorcích jedná. Nákres aparatury pro diskontinuální polyakrylamidovou elektroforézu Materiál a chemikálie: aparatura pro diskontinuální elektroforézu mikropipety, pipety roztoky pro přípravu dělicího a zaostřovacího gelu: 30% směs akrylamidu a bisakrylamidu 1,5M Tris - HCl pufr ph 8,8 0,5M Tris - HCl pufr ph 6,8 10% roztok SDS v H 2 O 10% roztok peroxodisíranu amonného (připravuje se vždy čerstvý těsně před použitím) v H 2 O TEMED (N,N,N,N - tetramethylendiamin) elektrodový pufr: 0,025M Tris, 0,192M glycin s 0,1% SDS standardy molekulových hmotností (broad range) roztok na barvení gelu: 0,25% Coomassie Blue R-250, 45% methanol, 10% kys. octová vzorky A, B, C v redukujícím vzorkovém pufru
4 Pracovní postup: Sestavení aparatury Velké i malé sklo nejprve omyjte jarem, opláchněte destilovanou vodou a ethanolem a otřete buničinou. Menší sklo položte na větší tak, aby mezi skly vznikla mezera. Takto připravená skla vložte do zeleného stojánku, upevněte a vložte do nástavce na nalévání gelů. Příprava polyakrylamidových gelů: Dělící gel: Podle tabulky připravte 12% dělící gel do Erlenmeyerovy baňky (25 ml). Směs připravujte podle pořadí uvedeném v tabulce a důkladně promíchejte. S roztoky obsahujícími akrylamid pracujte opatrně, vyvarujte se jejich styku s pokožkou. POZOR! Akrylamid je neurotoxin! Pracujte v rukavicích a roztoky v žádném případě nepipetujte ústy! Připravenou směs napipetujte do prostoru mezi dvě skla cca 1,5-2 cm pod okraj kratšího skla a opatrně převrstvěte destilovanou vodou; pracujte rychle, neboť po přidání peroxodisíranu a TEMEDu směs začíná polymerovat. Během min dělicí gel zpolymeruje. Vytvoří se ostré rozhraní mezi gelem a vrstvou vody. Po skončené polymeraci destilovanou vodu slijte a nakonec odsajte proužkem filtračního papíru. Zaostřovací gel: Podle tabulky připravte 5% zaostřovací gel do Erlenmeyerovy baňky (25 ml). Směs připravujte podle pořadí uvedeném v tabulce a důkladně promíchejte. Směs napipetujte na vysušený dělící gel a zasuňte do něj zelený hřeben s 10 jamkami (pozor na bubliny). Zaostřovací gel polymeruje asi 15 minut. Po skončení polymerace vysuňte hřeben a vytvořené jamky propláchněte elektrodovým pufrem, jamky jím nechte naplněné. Příprava polyakrylamidových gelů pro SDS-PAGE 12% dělicí gel [ml] 5% zaostřovací gel [ml] Destilovaná voda 1,6 1,4 30% akrylamid/bisakrylamid 2,0 0,33 1,5M Tris/HCl (ph 8,8) 1,3-0,5M Tris/HCl (ph 6,8) - 0,25 10% SDS 0,05 0,02 10% APS 0,05 0,02 TEMED 0,004 0,004 Aplikace vzorků při diskontinuální SDS - PAGE Nejprve je třeba skla s připravenými zpolymerovanými gely uvolnit ze stojánku a vložit do elektroforetické aparatury. Pozor, skla musí být umístěna tak, aby krátké sklo bylo blíže ke středu, jamky zaostřovacího gelu byly uvnitř aparatury. Do spodního elektrodového prostoru nalijte cca 3 cm elektrodového pufru tak, aby byla zakryta spodní elektroda. Horní elektrodový prostor naplňte po okraj elektrodovým pufrem. Do jamky napipetujte pomocí pipety s dlouhými tenkými špičkami 10 l připravených vzorků nebo 5 l standardu molekulových hmotností. Vzorky nanášejte v pořadí dle pokynů asistenta. Vlastní elektroforetické dělení Elektrodovou nádobu zavřete víkem tak, aby anoda na elektroforetické aparatuře (označena červeně) byla spojena s červeným výstupem ze zdroje. Na zdroji nastavte konstantní napětí na hodnotu 180 V. Elektroforetické dělení nechte probíhat tak dlouho, až bromfenolová modř (čelo dělících se látek) doputuje téměř na úroveň dolního okraje skel (cca 45 min). Po skončení elektroforetického dělení vypněte zdroj napětí. Teprve potom sundejte víko, vylijte pufr a vyndejte aparaturu z nádoby. Barvení gelu
5 Vyjměte skla z aparatury a skla opatrně oddělte od sebe. Gel přeneste do připravené Petriho misky s barvícím roztokem. Nechte barvit 20 minut. Potom barvící roztok slijte a odbarvěte v horké vodě (cca 3x10 minut). Po odbarvení gelu uvidíte modře obarvené proužky bílkovin. Vyhodnocení výsledků: Stanovte, jaký protein je obsažen ve vzorku A, B a C. K dispozici máte molekulové hmotnosti možných proteinů a molekulové hmotnosti standardů. Broad range standard Proteiny ve vzorcích protein molekulová hmotnost / kda hovězí sérový albumin 66,2 chymotrypsinogen 25,0 peroxidasa 41,0
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE)
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) Princip SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza slouží k separaci proteinů na základě jejich velikosti (molekulové hmotnosti). Zahřátím vzorku za
VíceElektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE
Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE je jednoduchá, rychlá a reprodukovatelná metoda pro kvalifikovanou charakterizaci a srovnání bílkovin.tato metoda separuje
VíceObsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování
Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Protein Gel Electrophoresis Kit obsahuje veškerý potřebný materiál provádění vertikální polyakrilamidové gelové elektroforézy. Experiment provádějí
VíceSDS-PAGE elektroforéza
SDS-PAGE elektroforéza Příprava gelu... 1 Recept na 0.75 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Recept na 1.5 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Příprava vzorku... 3 Elektroforéza... 3 Barvení gelů Blue Silver... 4 Chemikálie
VícePROTOKOL WESTERN BLOT
WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceInovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/
Dělení bílkovin pomocí diskontinuální elektroforézy v polyakrylamidovém gelu (PAGE) Při elektroforéze dochází k pohybu (migraci) iontů v elektrickém poli. Elektroforetické metody se tedy používají k separaci
VícePROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE)
PROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE) Denaturující proteinová elektroforéza (SDS PAGE - SDS Protein Acrylamide Gel Electrophoresis) je metoda, která se používá k separaci proteinů podle velikosti,
VíceSraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí PRINCIP. Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE)
PRINCIP Sraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE) SDS-PAGE slouží k separaci proteinů na základě jejich molekulové
VíceVýzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně. Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č. 0002700602. Autor: Ing.
Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika SDS-PAGE pro analýzu LMW podjednotek gluteninů pšenice Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č. 0002700602 Autor:
Vícelaktoferin BSA α S2 -CN α S1 -CN Popis: BSA bovinní sérový albumin, CN kasein, LG- laktoglobulin, LA- laktalbumin
Aktivita KA 2340/4-8up Stanovení bílkovin v mléce pomocí SDS PAGE (elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s přídavkem dodecyl sulfátu sodného) vypracovala: MVDr. Michaela Králová, Ph.D. Princip: Metoda
VíceElektromigrační metody
Elektromigrační metody Princip: molekuly nesoucí náboj se pohybují ve stejnosměrném elektrickém Arne Tiselius rozdělil proteiny krevního séra na základě jejich rozdílných rychlostí pohybu v elektrickém
VícePolymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP)
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Polymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP) Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2017/18 Obsah POLYMORFISMUS
VíceWestern blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
VícePolymorfismus délky restrikčních fragmentů
Polymorfismus délky restrikčních fragmentů Princip: Chemikálie: PCR produkt z předchozího praktického cvičení Endonukleáza KpnI 10 U μl -1 Pufr pro KpnI 10 koncentrovaný (Tris-HCl 100 mmol l -1 ph 7,5,
VíceTurnusové praktikum z biochemie
Turnusové praktikum z biochemie FÚ UK Turnusové praktikum z biochemie úloha název strana 1 Identifikace neznámého vzorku, aneb chemik detektivem 3-11 2 Izolace nukleových kyselin 12-13 3 Fluorescenční
VícePufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje.
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Pufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje. Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka, Tomáš Navrátil
Více1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I
1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I Vazba bromfenolové modři na sérový albumin Princip úlohy Albumin má unikátní vlastnost vázat menší molekuly mnoha typů. Díky struktuře, tvořené
VíceIdentifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna
Praktická úloha Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna Pro spolehlivou identifikaci mikroorganismů pomocí genetických metod se velmi často využívá stanovení nukleotidové sekvence
VíceVýzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně
Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika PAGE pro analýzu peroxidáz v hlízách brambor (Solanum tuberosum L.) Vypracovaná jako výstup projektu 1B 44011 VÝVOJ A TESTOVÁNÍ SYSTÉMU
Více2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
VíceÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK. Bílkoviny. Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Bílkoviny Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka, Jan Pláteník, Lenka Fialová 2018/19 Obsah ÚLOHA 1 NATIVNÍ
VíceVybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1.
VíceIZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
Víceα-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C
α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C Popis stripů: Pracovní postup Izolace DNA Doporučujeme použít následující kit pro izolaci DNA z plné krve nebo jiných typů vzorků: Spin Micro DNA Extraction
VícePufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje.
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Pufry, pufrační kapacita. Oxidoredukce, elektrodové děje. Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19
VíceELEKTROFORETICKÁ SEPARACE NUKLEOVÝCH KYSELIN
ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE NUKLEOVÝCH KYSELIN Fragmenty nukleových kyselin lze dle jejich velikosti rozdělit elektroforézou. Elektroforéza využívá rozdílné pohyblivosti jednotlivých fragmentů, danou právě
VíceBraf V600E StripAssay
Braf V600E StripAssay Kat. číslo 5-570 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci čerstvých nebo mražených biopsií použijte soupravy Qiagen QIAmp DNA Mini nebo Micro. Pro izolaci
VíceNRAS StripAssay. Kat. číslo 5-610. 20 testů 2-8 C
NRAS StripAssay Kat. číslo 5-610 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA musí být použita vhodná metoda vzhledem k typu tkáně vzorku. Pro doporučení vhodné metody kontaktujte
Více2) Připravte si 7 sad po pěti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
VíceS filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem.
Western Blotting Příprava blotovacího sendviče... 1 Blotování... 2 Kontrola přenesení proteinů na membránu... 2 Blokování membrány... 2 Aplikace protilátek... 2 Vizualizace... 3 Vyvolání filmu... 4 Chemikálie
VíceTECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K část B
TECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K část B OBSAH Sestava pro vertikální elektroforézu... 2 Jednotka pro elektroforézu... 3 Termocykler... 4 Elektrický zdroj pro elektroforézu...
VíceSLEDOVÁNÍ VZTAHU MEZI OBSAHEM ENZYMU RUBISCO A KONCENTRACÍ CO 2 V CHLOROPLASTU
SLEDOVÁNÍ VZTAHU MEZI OBSAHEM ENZYMU RUBISCO A KONCENTRACÍ CO 2 V CHLOROPLASTU Nikola Burianová Experimentální biologie 2.ročník navazujícího studia Katedra Fyziky Ostravská univerzita v Ostravě OBSAH
VíceAPLIKOVANÉ ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
APLIKOVANÉ ELEKTROMIGRAČNÍ METODY Princip: migrace elektricky nabitých částic v elektrickém poli Druhy iontů: +, -, obojaký (zwitterion), vícenásobný Typy migrace: a) přímá migrují ionty analytů b) nepřímá
VíceInovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/15.0247
Papírová a tenkovrstvá chromatografie Jednou z nejrozšířenějších analytických metod je bezesporu chromatografie, umožňující účinnou separaci látek nutnou pro spolehlivou identifikaci a kvantifikaci složek
VíceVzdělávání středoškolských pedagogů a studentů středních škol jako nástroj ke zvyšování kvality výuky přírodovědných předmětů CZ.1.07/1.1.00/14.
Praktické cvičení z chemie 1) Stanovení lipofilních listových barviv pomocí adsorpční chromatografie. 2) Stanovení proteinů v roztoku. 3) Homogenizace rostlinného materiálu pomocí tekutého dusíku a stanovení
VíceAplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy
Laboratorní úlohy Výukový materiál vznikl za finanční podpory Fondu rozvoje vysokých škol v rámci řešení projektu č. 1377/2013 Vytvoření demonstračních úloh sloužících k inovaci předmětu Aplikace elektromigračních
VíceNEUTRALIZAČNÍ ODMĚRNÁ ANALÝZA (TITRACE)
NEUTRALIZAČNÍ ODMĚRNÁ ANALÝZA (TITRACE) Cíle a princip: Stanovit TITR (přesnou koncentraci) odměrného roztoku kyseliny nebo zásady pomocí známé přesné koncentrace již stanoveného odměrného roztoku. Podstatou
VíceInovace výuky chemie. ph a neutralizace. Ch 8/09
Inovace výuky chemie ph a neutralizace Ch 8/09 Vzdělávací oblast: Vzdělávací obor: Tematický okruh: Cílová skupina: Klíčová slova: Očekávaný výstup: Člověk a příroda Chemie Anorganické sloučeniny 8. ročník
VíceP + D PRVKY Laboratorní práce
Téma: Reakce sloučenin zinku P + D PRVKY Laboratorní práce Pozn: Výsledky úkolu 1 zapisujte až po 14 dnech. Úkol 4 provádějte pouze pod dohledem učitele. Úkol 1: Připravte 5 gramů bílé skalice. Bílá skalice
VíceObr. 1. Schematické znázornění 2D-PAGE (převzato z Lodish, H. a kol.: Molecular Cell Biology, 3. vyd., Freeman 1996)
Dvourozměrná elektroforéza (2D-PAGE) 2D-PAGE je vysoce efektivní separační metodou umožňující rozdělení komplikovaných směsí stovek různých bílkovin a představuje základní nástroj v novém rozvíjejícím
VíceDovednosti/Schopnosti. - orientuje se v ČL, který vychází z Evropského lékopisu;
Jednotka učení 4a: Stanovení obsahu Ibuprofenu 1. diferencování pracovního úkolu Handlungswissen Charakteristika pracovní činnosti Pracovní postup 2. HINTERFRAGEN 3. PŘIŘAZENÍ... Sachwissen Charakteristika
VíceÚstřední komise Chemické olympiády. 53. ročník 2016/2017. KRAJSKÉ KOLO kategorie C. ZADÁNÍ PRAKTICKÉ ČÁSTI (40 BODŮ) časová náročnost: 120 minut
Ústřední komise Chemické olympiády 53. ročník 2016/2017 KRAJSKÉ KOLO kategorie C ZADÁNÍ PRAKTICKÉ ČÁSTI (40 BODŮ) časová náročnost: 120 minut Zadání praktické části krajského kola ChO kat. C 2016/2017
VíceEGFR XL StripAssay. Kat. číslo 5-630. 20 testů 2-8 C
EGFR XL StripAssay Kat. číslo 5-630 20 testů 2-8 C Popis stripu Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA použijte vhodný izolační kit. Doporučené kity jsou následující: Pro izolaci čerstvých nebo
Více1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
VíceÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE 1.LF UK. Elektroforesa. v biochemii. Jan Pláteník. (grafická úprava obrázků Richard Buchal)
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE 1.LF UK Elektroforesa v biochemii Jan Pláteník (grafická úprava obrázků Richard Buchal) 2007/2008 Pojem elektroforesa znamená jakoukoliv experimentální techniku, založenou na pohybu
Více215.2.17 HODNOCENÍ ASFALTŮ
215.2.17 HODNOCENÍ ASFALTŮ ÚVOD Asfalty jsou tmavé plastické až tuhé podíly z ropy koloidního charakteru. Obsahují především asfalteny, ropné pryskyřice a nejtěžší ropné olejové podíly. Nejjednodušším
VíceÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK. Vyšetření moči
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vyšetření moči močový sediment, stanovení sodíku, opakování Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka, Lenka
VíceJazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii
Datum: Jazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii Laboratorní cvičení č. Tlak vzduchu: Teplota vzduchu: Vitamíny Vlhkost vzduchu
VíceUrčení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho
VíceNávod k laboratornímu cvičení. Vitamíny
Úkol č. 1: Přítomnost vitaminu C v ovoci a zelenině Návod k laboratornímu cvičení Vitamíny Pomůcky: třecí miska s tloučkem, filtrační kruh, nálevka, filtrační papír, zkumavky, stojan na zkumavky Chemikálie:
VíceMOLEKULÁRNÍ METODY V EKOLOGII MIKROORGANIZMŮ
MOLEKULÁRNÍ METODY V EKOLOGII MIKROORGANIZMŮ (EKO/MMEM) DENATURAČNÍ GRADIENTOVÁ GELOVÁ ELEKTROFORÉZA Denaturační gradientová gelová elektroforéza (DGGE) je technologie umožňující separaci molekul DNA v
VíceElektroforéza - I (v klasickém provedení)
Elektroforéza - I (v klasickém provedení) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Elektroforéza B.D.Hames, D.Rickwood - Gel electrophoresis of proteins, Practical approach,
VíceVšeobecné lékařství 2014/15
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Úvod do práce v laboratoři Měření objemů, filtrace, centrifugace, rozpustnost, dělení směsí Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné
VíceÚstřední komise Chemické olympiády. 55. ročník 2018/2019 KRAJSKÉ KOLO. Kategorie E ZADÁNÍ PRAKTICKÉ ČÁSTI (50 BODŮ)
Ústřední komise Chemické olympiády 55. ročník 2018/2019 KRAJSKÉ KOLO Kategorie E ZADÁNÍ PRAKTICKÉ ČÁSTI (50 BODŮ) Úloha 1 Stanovení Bi 3+ a Zn 2+ ve směsi 50 bodů Chelatometricky lze stanovit ionty samostatně,
VíceElektrolytické vylučování mědi (galvanoplastika)
Elektrolytické vylučování mědi (galvanoplastika) 1. Úvod Často se setkáváme s požadavkem na zhotovení kopie uměleckého nebo muzejního sbírkového předmětu. Jednou z možností je použití galvanoplastické
VíceNeutralizace, měření senzorem ph Vernier Laboratorní práce
Neutralizace, měření senzorem ph Vernier Laboratorní práce VY_52_INOVACE_209 Vzdělávací oblast: Člověk a příroda Vzdělávací obor: Chemie Ročník: 8.,9. Neutralizace, měření senzorem ph Vernier Laboratorní
VíceWESTERN BLOT. Velikost signálu je vyhodnocována srovnáním s naneseným proteinovým markerem, což je komerčně dostupná směs proteinů o známé velikosti.
WESTERN BLOT Western blot je metoda používaná pro kvalitativní nebo semikvantitativní detekci určitého proteinu ve vzorku. Metoda je tvořena třemi základními kroky: 1. elektroforetickou separací proteinů,
VíceProteinový fingerprinting vaječného bílku
Proteinový fingerprinting vaječného bílku Proteinový fingerprinting je technika studia populací organizmů založená na izoelektrické fokuzaci (IEF). IEF spočívá v elektroforetickém dělení proteinů podle
VíceIMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody. 3. ročník Klinická biologie a chemie
IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody 3. ročník Klinická biologie a chemie Princip elektroforézy I. Separační metoda využívající různé pohyblivosti různých iontů (složek směsi) ve stejnosměrném
VíceÚstřední komise Chemické olympiády. 55. ročník 2018/2019 ŠKOLNÍ KOLO. Kategorie C ZADÁNÍ PRAKTICKÉ ČÁSTI (40 BODŮ)
Ústřední komise Chemické olympiády 55. ročník 2018/2019 ŠKOLNÍ KOLO Kategorie C ZADÁNÍ PRAKTICKÉ ČÁSTI (40 BODŮ) PRAKTICKÁ ČÁST 40 BODŮ Autor RNDr. Jan Břížďala Gymnázium Třebíč RNDr. Jan Havlík, Ph.D.
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceAnalýza aniontových tenzidů v čisticích prostředcích kapilární elektroforézou
Analýza aniontových tenzidů v čisticích prostředcích kapilární elektroforézou Úkol: Pomocí kapilární elektroforézy v nevodném prostředí semikvantitativně stanovte vybrané aniontové tenzidy v čisticím prostředku.
VíceElektroforéza. Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
Elektroforéza Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli K realizaci je nutné mít: Stejnosměrný el. proud Speciální elektroforetické vany Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar)
VíceStanovení korozní rychlosti elektrochemickými polarizačními metodami
Stanovení korozní rychlosti elektrochemickými polarizačními metodami Úvod Měření polarizačního odporu Dílčí děje elektrochemického korozního procesu anodická oxidace kovu a katodická redukce složky prostředí
VíceVýzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně
Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika PAGE pro analýzu esteráz v hlízách brambor (Solanum tuberosum L.) Vypracovaná jako výstup projektu 1B 44011 VÝVOJ A TESTOVÁNÍ SYSTÉMU
VíceHbA1c. Axis - Shield. Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299
Lékařská technika a speciální zdravotní materiál Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299 Obchodní 110, 251 70 Praha Čestlice Tel. +420 296 328 300 Fax. +420
VíceZáklady laboratorní techniky
Předmět: Biologie ŠVP: prokaryotní organismy, genetika Doporučený věk žáků: 16 18 let Doba trvání: 2 x 45 min. Specifické cíle: naučit studenty pracovat s laboratorními pomůckami a přístroji Seznam pomůcek:
VíceORGANICKÁ CHEMIE Laboratorní práce č. 3
Téma: Hydroxyderiváty uhlovodíků ORGANICKÁ CHEMIE Laboratorní práce č. 3 Úkol 1: Dokažte přítomnost ethanolu ve víně. Ethanol bezbarvá kapalina, která je základní součástí alkoholických nápojů. Ethanol
Více215.1.19 ČÍSLO KYSELOSTI
215.1.19 ČÍSLO KYSELOSTI ÚVOD Stanovení čísla kyselosti patří k základním normovaným metodám hodnocení ropných produktů. Tento návod je vytvořen podle norem IP 177/96 a ASTM D66489. Tyto normy specifikují
VíceUNIVERZITA KARLOVA V PRAZE Přírodovědecká fakulta
Červené zelí jako acidobazický indikátor Zdroj: http://www.scifun.org/homeexpts/homeexpts.html [34] Didaktický záměr: Objasnění pojmu ph a acidobazický indikátor. Popis: Žáci si připraví roztok acidobazického
VíceStanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou
Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Úkol Stanovte obsah cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce pomocí kapilární elektroforézy. Teoretická část Cholesterol je steroidní
VíceVizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN
ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání
VíceCHARAKTERIZACE GENOTYPŮ OVSA S VYUŽITÍM ELEKTROFORÉZY AVENINŮ V POLYAKRYLAMIDOVÉM GELU (A-PAGE)
Zemědělský výzkumný ústav Kroměříž, s.r.o. Agrotest fyto, s.r.o. CHARAKTERIZACE GENOTYPŮ OVSA S VYUŽITÍM ELEKTROFORÉZY AVENINŮ V POLYAKRYLAMIDOVÉM GELU (A-PAGE) Metodika Kroměříž, 2010 I. Polišenská, L.
VíceCvičení 4: CHEMICKÉ SLOŽENÍ BUŇKY, PROKARYOTA Jméno: PROKARYOTA PŘÍPRAVA TRVALÉHO PREPARÁTU SUCHOU CESTOU ROZTĚR BAKTERIÍ
Cvičení 4: CHEMICKÉ SLOŽENÍ BUŇKY, PROKARYOTA Jméno: Skupina: PROKARYOTA PŘÍPRAVA TRVALÉHO PREPARÁTU SUCHOU CESTOU ROZTĚR BAKTERIÍ Praktický úkol: bakterie (koky, tyčky) vyžíhejte bakteriologickou kličku
VíceÚloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1. Úkol 1. Ředění roztoků. Teoretický úvod - viz návod
Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1 Teoretický úvod Uveďte vzorec pro: výpočet směrodatné odchylky výpočet relativní chyby měření [%] Použitý materiál, pomůcky a přístroje Úkol 1. Ředění
VíceProjekt Pospolu. Stanovení jílovitých podílů podle ČSN EN A1 Zkouška s methylenovou modří
Projekt Pospolu Stanovení jílovitých podílů podle ČSN EN 933-9+A1 Zkouška s methylenovou modří Autorem materiálu a všech jeho částí, není-li uvedeno jinak, je Tomáš Táborský. Jako jedna z hlavních složek
VíceVPHP - dekontaminační metoda na bázi par peroxidu vodíku pro aseptickou produkci léčiv
Laboratoř oboru Výroba léčiv (N111049) a Organická technologie (N111025) E VPHP - dekontaminační metoda na bázi par peroxidu vodíku pro aseptickou produkci léčiv Vedoucí práce: Umístění práce: Ing. Jiří
VíceStruktura proteinů. - testík na procvičení. Vladimíra Kvasnicová
Struktura proteinů - testík na procvičení Vladimíra Kvasnicová Mezi proteinogenní aminokyseliny patří a) kyselina asparagová b) kyselina glutarová c) kyselina acetoctová d) kyselina glutamová Mezi proteinogenní
VíceBraf 600/601 StripAssay
Braf 600/601 StripAssay Kat. číslo 5-560 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup Kit umožňuje detekci 9 mutací v genu BRAF (kodón 600 a 601) Další informace najdete v OMIM Online Mendelian Inheritance
VíceSešit pro laboratorní práci z chemie
Sešit pro laboratorní práci z chemie téma: Standardizace. Alkalimetrie. autor: ing. Alena Dvořáková vytvořeno při realizaci projektu: Inovace školního vzdělávacího programu biologie a chemie registrační
VíceP + D PRVKY Laboratorní práce Téma: Reakce mědi, stříbra a jejich sloučenin
P + D PRVKY Laboratorní práce Téma: Reakce mědi, stříbra a jejich sloučenin Úkol 1: Stanovte obsah vody v modré skalici. Modrá skalice patří mezi hydrát, což jsou látky, nejčastěji soli, s krystalicky
VíceStanovení α-amylázy v moči
Stanovení α-amylázy v moči α-amyláza je produkována především pankreatem a také ve slinných žlázách a normálně je odváděna do zažívacího traktu. Do krve se dostává fyziologicky jen nepatrné množství. Vzhledem
VíceLaboratorní práce č. 1
23. 7. 28. 7. 2013 Laboratorní práce č. 1 Vítáme vás v laboratorním cvičení Letního chemického soustředění (LCHS). Během celého soutředění bychom měli dodržovat bezpečnostní předpisy. Zejména mít nasazené
Více215.1.3 NÍZKOTEPLOTNÍ VLASTNOSTI PALIV A MAZIV ÚVOD
215.1.3 NÍZKOTEPLOTNÍ VLASTNOSTI PALIV A MAZIV ÚVOD Pro bezproblémový chod spalovacích zařízení, motorů a dalších strojních zařízení při nízkých teplotách jsou důležité nízkoteplotní vlastnosti používaných
VíceÚstřední komise Chemické olympiády. 55. ročník 2018/2019 NÁRODNÍ KOLO. Kategorie E. Zadání praktické části Úloha 2 (30 bodů)
Ústřední komise Chemické olympiády 55. ročník 2018/2019 NÁRODNÍ KOLO Kategorie E Zadání praktické části Úloha 2 (30 bodů) PRAKTICKÁ ČÁST 30 BODŮ Úloha 2 Stanovení Cu 2+ spektrofotometricky 30 bodů Cu 2+
VíceODDĚLOVÁNÍ SLOŽEK SMĚSÍ, PŘÍPRAVA ROZTOKU URČITÉHO SLOŽENÍ
ODDĚLOVÁNÍ SLOŽEK SMĚSÍ, PŘÍPRAVA ROZTOKU URČITÉHO SLOŽENÍ PaedDr. Ivana Töpferová Střední průmyslová škola, Mladá Boleslav, Havlíčkova 456 CZ.1.07/1.5.00/34.0861 MODERNIZACE VÝUKY Anotace: laboratorní
VíceORGANICKÁ CHEMIE Laboratorní práce č. 4 Téma: Karbonylové sloučeniny, karboxylové kyseliny
ORGANICKÁ CHEMIE Laboratorní práce č. 4 Téma: Karbonylové sloučeniny, karboxylové kyseliny Úkol 1: Připravte acetaldehyd. Karbonylová skupina aldehydů podléhá velmi snadno oxidaci až na skupinu karboxylovou.
VíceTéma: Testy životaschopnosti a Počítání buněk
LRR/BUBV vičení z buněčné biologie Úloha č. 3 Téma: Testy životaschopnosti a Počítání Úvod: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability).
VíceCVD-T StripAssay. Kat. číslo 4-360. 20 testů 2-8 C
CVD-T StripAssay Kat. číslo 4-360 20 testů 2-8 C Popis stripu Pracovní postup Izolace DNA Použijte čerstvou nebo zmraženou krev s EDTA nebo citrátem, jako antikoagulans, vyhněte se krvi s obsahem heparinu.
VíceVýukový materiál zpracován v rámci projektu. EU peníze školám. Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996
Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996 Šablona: III/2 č. materiálu: VY_INOVACE_CHE_417 Jméno autora: Třída/ročník: Mgr. Alena Krejčíková
VíceReakce kyselin a zásad
seminář 6. 1. 2011 Chemie Reakce kyselin a zásad Známe několik teorií, které charakterizují definují kyseliny a zásady. Nejstarší je Arrheniova teorie, která je platná pro vodné prostředí, podle které
VíceSada Látky kolem nás Kat. číslo 104.0020
Sada Kat. číslo 104.0020 Strana 1 z 68 Strana 2 z 68 Sada pomůcek Obsah Pokyny k uspořádání pokusu... 4 Plán uspořádání... 5 Přehled jednotlivých součástí... 6, 7 Přehled drobných součástí... 8, 9 Popisy
VíceJODOMETRICKÉ STANOVENÍ ROZPUŠTĚNÉHO KYSLÍKU
JODOMETRICKÉ STANOVENÍ ROZPUŠTĚNÉHO KYSLÍKU (dle Winklera v Alsterbergově modifikaci) Cílem je stanovení rozpuštěného kyslíku v pitné vodě z vodovodního řádu. Protokol musí osahovat veškeré potřebné hodnoty
VíceStanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů
Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,
VícePodklady pro cvičení: USEŇ A PERGAMEN. Určení živočišného původu kolagenového materiálu. Úkol č. 1
Podklady pro cvičení: USEŇ A PERGAMEN Úkol č. 1 Určení živočišného původu kolagenového materiálu Během technologického zpracování surové kůže na useň nebo pergamen jsou odstraňovány podkožní vrstvy kůže
VíceUrčení molekulové hmotnosti: ESI a nanoesi
Cvičení Určení molekulové hmotnosti: ESI a nanoesi ) 1)( ( ) ( H m z H m z M k j j j m z z zh M Molekula o hmotnosti M se nabije z-krát protonem, pík iontu ve spektru je na m z : ) ( H m z M z Pro dva
VíceP + D PRVKY Laboratorní práce
Téma: Reakce sloučenin železa a kobaltu P + D PRVKY Laboratorní práce Úkol 1: Určete, které vlivy se podílí na korozi železa. Koroze je označení pro děj probíhající na povrchu některých kovů. Na jejím
Více