Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková"

Transkript

1 Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce Bc. Kamila Šimánková Diplomová práce 006

2

3

4 ABSTRAKT Cílem této práce bylo vypracování vhodného extrakčního postupu k izolaci vitaminu C a současně zavedení optimálních chromatografických metod pro stanovení vitaminu C v ovoci a zelenině. Ke stanovení vitaminu C byla použita metoda HPLC-UV/VIS a HPLC-ECD. Jako optimální provozní metoda ke stanovení vitaminu C byla ověřena titrační metoda s,6-dichlorfenolindofenolem. Klíčová slova: vitamin C, kyselina askorbová, HPLC-UV/VIS, HPLC-ECD ABSTRACT This aim of this work was to develope a suitable procedure for extraction of the vitamin C and installation of optimal chromatographic metods for determination of vitamin C in fruit and vegetables. The HPLC-UV/VIS and the HPLC-ECD was used to determine vitamin C, in addition vitamin C was determined by,6-dichlorfenolindofenol. Keywords: vitamin C, ascorbic acid, HPLC-UV/VIS, HPLC-ECD

5 Poděkování: Nejprve bych chtěla touto formou poděkovat vedoucí diplomové práce Ing.Daniele Kramářové, Ph.D. a Ing. Soni Škrovánkové, Ph.D. za odborné vedení v celém průběhu diplomové práce. Také bych chtěla poděkovat své rodině za všestrannou podporu během studia.

6 OBSAH ÚVOD...8 I TEORETICKÁ ČÁST VITAMIN C HISTORIE VITAMINU C STRUKTURA A CHEMISMUS VITAMINU C REAKCE VITAMINU C S VOLNÝMI RADIKÁLY VZNIK KYSELINY ASKORBOVÉ STABILITA VITAMINU C FYZIOLOGIE VITAMINU C VÝSKYT AVITAMINOSA, HYPOVITAMINOSA A NEŽÁDOUCÍ ÚČINKY VITAMINU C Antivitaminy vitaminu C DOPORUČENÁ DENNÍ DÁVKA VITAMINU C...3 KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE PŘÍSTROJE A ZAŘÍZENÍ...7 HPLC 7 ESA Coulochem III multi - elektrodový detektor...9. STATISTICKÉ ZPRACOVÁNÍ VÝSLEDKŮ KVANTITATIVNÍCH ANALÝZ...30 II PRAKTICKÁ ČÁST METODIKA CHEMIKÁLIE...34 POUŽITÉ PŘÍSTROJE A POMŮCKY METODY Titrační stanovení vitaminu C Stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS Kalibrační křivka pro stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS Stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD Kalibrační křivka pro stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD VÝSLEDKY A DISKUSE TITRAČNÍ STANOVENÍ VITAMINU C,6 DICHLORFENOLINDOFENOLEM Titrační stanovení vitaminu C v ovoci Titrační stanovení vitaminu C v zelenině Celkové srovnání vitaminu C ve vzorcích ovoce a zeleniny titrační metodou STANOVENÍ VITAMINU C METODOU HPLC-UV/VIS Kalibrační křivka pro stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS Stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS v ovoci...48

7 4..3 Stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS v zelenině STANOVENÍ VITAMINU C METODOU HPLC-ECD Kalibrační křivka pro stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD Stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD v ovoci Stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD v zelenině Metoda standardního přídavku vitaminu C pro HPLC-ECD Celkové srovnání vitaminu C ve vzorcích ovoce a zeleniny...73 ZÁVĚR...76 SEZNAM POUŽITÉ LITERATURY... CHYBA! ZÁLOŽKA NENÍ DEFINOVÁNA. SEZNAM POUŽITÝCH SYMBOLŮ A ZKRATEK...81 SEZNAM OBRÁZKŮ...8 SEZNAM TABULEK...83 SEZNAM PŘÍLOH...88

8 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 8 ÚVOD Vitaminy jsou exogenní esenciální nízkomolekulární sloučeniny nezbytné pro život organismu, které si však heterotrofní organismus nedokáže sám syntetizovat a musí být dodávány zvnějšku. Vitamíny jsou organické molekuly, které plní úlohu katalyzátorů při biologických reakcích našeho těla. Velmi důležitou roli hrají antioxidanty, které jsou tzv. lapači volných radikálů. Při správné aplikaci mohou antioxidanty výrazně pomalit oxidační proces v biologickém objektu a tím prodloužit životnost citlivých organických sloučenin přítomných jako složky tkání. Jedním z těchto významných antioxidantů je vitamin C neboli kyselina L-askorbová. Vitamin C je nejrozšířenější ze všech vitaminů. Je to i nejhojněji používaný potravinový doplněk. Skutečný rozsah jeho příznivých účinků však může překvapit i ty, kteří se domnívají, že dobře znají jeho všestranné použití. Dnes je zájem o tento vitamin především soustředěn na jeho schopnost chránit tkáňové buňky. Vitamin C působí především uvnitř buněk. Kyselina askorbová je jedním z nejsilnějších biologických oxidačně-redukčních systémů a kromě schopností reagovat s volnými radikály je v organismu využívána i k regeneraci aktivních forem jiných antioxidantů. Brzdí tak řetězovou oxidační reakci. Jednou z hlavních biologických funkcí tohoto oxidačně redukčního systému je podíl na přenosu vodíku a elektronů z výchozích substrátů až na molekulární kyslík a potřeba pro lidský metabolismus je značná. Jelikož v dnešní době se nám dostává čím dál menší přísun vitaminu C a to má pak negativní důsledky na organismus, je nesmírně nutná prevence a to úpravou stravovacích návyků s cílem obohatit stravu o vhodné komplexní zdroje. Nezanedbatelný je rovněž životní styl s negativními návyky, poněvadž riziko poškození organismu stoupá zejména u kuřáků, alkoholiků a obézních jedinců a rovněž při nadměrném vystavování těla UV záření. V případě nedostatečného přísunu potřebného vitaminu C v potravě je možnost podávání výživových doplňků a vhodných kombinovaných preparátů obsahující vitamin C.

9 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 9 I. TEORETICKÁ ČÁST

10 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 10 1 VITAMIN C Biokatalyzátory jsou látky, které v organismu vykonávají předem dané řídící a regulační funkce. Vznikají-li přímo v živých objektech, pro něž jsou nezbytné, pak hovoříme o endogenních biokatalyzátorech. Mezi ně patří např. enzymy a hormony. Mnohé organismy však nedokáží veškeré biokatalyzátory syntetizovat a musí je přijímat zvnějšku, obvykle potravou. Jedná se o vitaminy, nezbytné pro živočichy, některé orgány rostlin a pro četná množství mikroorganismů. Takové biokatalyzátory nazýváme exogenní. Nejdůležitější biokatalyzátory můžeme rozdělit na: - Vitaminy - Hormony - Enzymy [1]. Vitaminy jsou exogenní esenciální nízkomolekulární sloučeniny nezbytné pro život organismu, které si však heterotrofní organismus nedokáže sám syntetizovat (někdy pouze v omezené míře) a musí být dodávány zvnějšku. Jako příklad vitaminu, který si lidský organismus může do jisté míry sám syntetizovat, můžeme uvést syntézu niacinu z tryptofanu. Vitamíny jsou organické molekuly, které plní úlohu katalyzátorů při biologických reakcích našeho těla. Katalyzátor je látka, která umožní proběhnutí chemické reakce za použití menší aktivační energie a kratšího času, než by to vyžadovaly standardní podmínky. Pokud tyto katalyzátory chybějí, pak mohou selhat normální tělesné funkce a tím může dojít k onemocnění. Vitamíny jsou tělem žádány v malých množstvích, řádově v mg nebo µg.den - 1 []. Vitaminy nejsou pro organismus ani zdrojem energie ani stavebními jednotkami tkání. Vykonávají v organismu několik funkcí. Plní v živých objektech významnou úlohu prekurzorů kofaktorů různých enzymů (vitaminy skupiny B), jiné se uplatňují v oxidačně redukčních systémech (vitamin C, vitamin E) apod. [1]. Potřeba jednotlivých vitaminů může být zásadně ovlivněna některou ze složek potravin, které zabrání plnému využití daného vitaminu nebo jej inhibují. Takovým látkám pak říká-

11 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 11 me antivitaminy. Jedná se o látky inhibující určitým mechanismem funkci daného vitaminu, což může vést až k projevům deficience. Nedostatek každého vitaminu se projevuje u živých objektů chorobnými příznaky, které v lehčích formách označujeme jako hypovitaminosa, v těžších jako avitaminosa. Přestože většina příznaků avitaminosy po dodání nedostatkového vitaminu rychle mizí, dlouhotrvající avitaminosa může vést až ke smrti organismu. Příčinou nedostatečné resorpce vitaminů bývá většinou onemocnění zažívací soustavy, např. zánětlivá a průjmová onemocnění. Při těchto chorobách je třeba dbát na dostatečný přísun vitaminů. Naopak nadbytek některých vitaminů se označuje jako hypervitaminosa. V našich klimatických podmínkách se s ní prakticky nesetkáváme, objeví se většinou ve spojitosti s nadměrným přísunem pomocí aditivních preparátů [3]. Mezi jednotlivými vitaminy neexistují po stránce chemické žádné strukturní vztahy, podle nichž by mohly být klasifikovány. Pro jejich označení se používají buď písmena abecedy, přičemž vitaminy s podobnými fyziologickými účinky jsou dále rozlišeny číselnými indexy, nebo názvy odvozenými od chemického složení vitaminů. Důležitým rozlišovacím znakem je jejich rozpustnost. O vitaminech rozpustných v tucích mluvíme jako o lipofilních vitaminech, tj. vitaminech nerozpustných ve vodě. Lipofilní vitaminy vykazují různé rozmanité funkce. Například vitamin A 1 (all-trans-retinol) se uplatňuje v biochemických reakcích zrakového vjemu. Ve vodě rozpustné vitaminy nazýváme hydrofilní. Funkce hydrofilních vitaminů spočívá v jejich katalytickém účinku, protože se uplatňují zejména jako kofaktory různých enzymů a to v metabolismu nukleových kyselin, proteinů, sacharidů, lipidů aj. Hydrofilní vitaminy nebývají v organismu zpravidla vůbec skladovány a jejich přebytek je vylučován močí, naopak lipofilní vitaminy jsou ukládány v játrech. Mezi vitaminy rozpustné ve vodě řadíme: Vitamin B 1 (thiamin) Vitamin B (riboflavin) Vitamin B 3 (kyselina nikotinová a její amid) Vitamin B 5 (kyselina pantothenová) Vitamin B 6 (pyridoxin)

12 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 1 Vitamin B 9 (kyselina listová) Vitamin B 1 (kyanokobalamin, dřívější název korinoidy) Kyselina lipová Biotin (dříve nazýván vitamin H) Bioflavonoidy (dříve řazeny jako vitamin P) Vitamin C (kyselina L-askorbová a L-dehydroaskorbová) Mezi vitaminy rozpustné v tucích patří: Vitamin A (retinol) a jeho provitaminy (karotenoidy) Vitaminy D (kalciferoly) Vitaminy E (tokoferoly a tokotrienoly) Vitaminy K (fylochinony, farnochinony) Vitamin F (esenciální mastné kyseliny) [1]. 1.1 Historie vitaminu C K jednomu z nejznámějších projevů avitaminosy vitamínu C patří kurděje (scorbut), jejichž následky byly pozorovány už na kosterních nálezech z doby kamenné a bronzové. V roce 1747 objevil skotský lékař James Lind "zázračnou moc" citrusových plodů. Trvalo to však ještě dalších 00 let, než se vědcům vitamín C podařilo izolovat [4]. Vitamín C poprvé izoloval v roce 196 maďarský vědec Albert Szent-Györgyi během jeho pobytu v cambridgské biochemické laboratoři. Nejprve získal necelý 1 g bělavé krystalické látky z hovězí nadledvinkové kůry, později další ze šťávy pomeranče a zelí. V roce 198 tuto látku přejmenoval na hexuronovou kyselinu. První krystalky vitamínu C se začaly vyrábět v roce 193. V následujícím roce Szent-Györgyi spolu s W. N. Haworthem přejmenovali vitamín na dnešní název kyselina askorbová. V roce 1937 obdržel Albert Szent- Györgyi za svoji práci za své objevy související s vitamínem C Nobelovu cenu [5].

13 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Struktura a chemismus vitaminu C Obr.1 Vitamin C Komerční vitamin C je často směs kyseliny askorbové, askorbátu sodného nebo dalších askorbátů. Ze čtyř možných stereoisomerů vykazuje aktivitu vitaminu C pouze kyselina L-askorbová [6]. kys. L-askorbová L-askorbylradikál kys. L-dehydroaskorbová Obr. Oxidačně-redukční systém vitaminu C

14 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 14 Kyselina L-askorbová, obecně známá jako vitamin C, je γ-lakton hexonové kyseliny s endiolovou strukturou na druhém a třetím uhlíku. Lze ji odvodit od několika různých hexos. Názvem vitamin C se však označuje nejen kyselina L-askorbová, ale také celý její reverzibilní redoxní systém, který zahrnuje navíc její L-askorbylradikál (kyselinu L- monodehydro-askorbovou) a kyselinu L-dehydroaskorbovou [1]. Endiolový systém v konjugaci s karbonylovou skupinou uděluje kyselině L-askorbové dosti značnou kyselost. L-dehydroaskorbová kyselina může být zpětně redukována na kyselinu L-askorbovou, např. pomocí reduktantu glutathionu (GSH), který oxidací vytvoří zdvojenou molekulu s -S-S- můstkem (GSSG). L-askorbová kys. L-dehydroaskorbová kys. GSSG GSH Obr.3 Zpětná redukce L-dehydroaskorbové kyseliny Vitamin C je velmi dobře rozpustný ve vodě, v neutrálním, kyselém a alkalickém prostředí za katalytických účinků těžkých kovů (Cu, Fe) podléhá snadno oxidaci za vzniku již zmíněné kyseliny L-dehydroaskorbové. Tuto oxidaci katalyzují různé enzymy jako jsou peroxidasa, askorbasa nebo cytochromoxidasa. Přenos elektronů je reverzibilní, dokud není porušena kruhová struktura kyseliny L-dehydroaskorbové. Pokud dojde k jejímu hydrolytickému rozštěpení, vzniká kyselina,3-dioxo-l-gulonová [1]. 1.3 Reakce vitaminu C s volnými radikály Kyselina askorbová i její isomery a deriváty mohou reagovat s volnými radikály. Brzdí tak řetězovou oxidační reakci a účinně působí jako antioxidanty. Reakci kyseliny askorbové s peroxylovým radikálem mastné kyseliny (R-O-O ), případně s alkoxylovým radikálem

15 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 15 (RO ), lze schematicky znázornit následující rovnicí: H A + R-O-OH HA + R-O-OH, kde H A je kyselina L-askorbová. Vzniklý askorbylradikál (HA ) již není schopen vyvolat další řetězovou reakci a disproporcionuje na kyselinu askorbovou a dehydroaskorbovou. Kyselina askorbová je obecně účinnějším antioxidantem, použije-li se v kombinaci s tokoferoly. Ty potom přednostně reagují s volnými radikály lipidů, vzniklé radikály tokoferolů jsou na fázovém rozhraní tuk-voda redukovány zpět na tokoferoly kyselinou askorbovou. Askorbát reaguje podobně také s toxickými formami kyslíku, jako je hydroxylový radikál (HO ), anion superoxidového radikálu (O ) a singletový kyslík ( 1 O ). Všechny tyto reakce tak současně zpomalují oxidaci lipidů [6]. H A + HO HA + H O H A + O + H + HA + H O Obr.4 Oxidační proces

16 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Vznik kyseliny askorbové Potřeba vitaminu C pro lidský metabolismus je značná. Lidé, primáti, netopýři a morčata díky mutaci v genetickém kódu L-gulonolaktonoxidasy, enzymu nezbytného pro biosyntézu vitaminu C, ztratili schopnost tento vitamin ve svém organismu syntetizovat. Biosyntéza kyseliny L-askorbové postupuje přes kyselinu D-glukuronovou, její redukcí na kyselinu L-gulonovou, která vytvoří lakton. Ten je pak oxidován L-gulonlaktonoxidasou na 3-keto-L-gulonolakton, který se enolizuje na kyselinu L askorbovou [6]: NADH + H + -H O D-glukosa kys. D-glukuronová kys. L-gulonová L-gulonolakton L-gulonlaktonoxidasa 3-keto-L-gulonolakton kys. L-askorbová Obr.5 Vznik kyseliny L-askorbové 1.5 Stabilita vitaminu C Ztráty při skladování, transportu a při přípravě potravin jsou známy u všech vitamínů. Vitamín C reaguje na vzduch, teplo a vlhkost mimořádně citlivě. Jako obecné pravidlo platí, že ztráty vitamínu C jsou obecně o tolik vyšší, o kolik tepleji a déle se potraviny skladují. Je třeba mít přitom na mysli, že zelenina reaguje z hlediska ztráty vitamínu C různě citlivě. Hlávkové zelí lze uchovávat dokonce několik měsíců beze ztráty vitamínu C. Teplo však odbourávání vitamínu C urychluje. Tomu napomáhají speciální enzymy, které jsou zvlášť účinné při teplotách kolem 40 C, při 70 C dochází však k jejich inaktivaci. Proto by se měla

17 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 17 zelenina rychle přivést do vyšších teplot a pak pomalu připravovat. Přitom sice ztráta vitamínu pokračuje, ale značně pomaleji [7]. Při kuchyňské úpravě se může obsah vitaminu C v potravinách snížit o dalších 70 %. Vařením, např. oloupaných brambor, se sníží obsah vitaminu C o 30 až 50 %. Krátké omytí syrové nenakrájené zeleniny většinou nezpůsobuje žádné změny v obsahu vitamínu. Naproti tomu namáčení, které se často používá ve velkokapacitních kuchyních, vede ke ztrátám vitamínu C vyluhováním. Čím déle toto vyluhování trvá, tím jsou ztráty vitamínu C větší. Při rozmělňování, krájení, strouhání nebo mixování ovoce a zeleniny se díky takto zvýšenému množství ploch a zároveň díky porušení buněčné tkáně urychluje enzymatické odbourávání vitamínu C. Při rychlém a pečlivém zmrazení lze ztráty vitamínu udržet relativně nízké, takže hluboko zmrazená zelenina často vykazuje více vitamínu C než čerstvé ovoce a zelenina, které je skladováno mnohem kratší dobu [8]. Pro předejití ztrát je nutno dodržet alespoň tato kritéria: Podávat ovoce a zeleninu syrovou, kdykoli je to možné. Vařit v páře nebo pozvolně vařit jídlo ve velmi malém množství vody. Vařit brambory ve slupce. Chlazené připravené šťávy skladovat ne déle jak nebo 3 dny. Uchovávat syrové plody a zeleninu ve vzduchotěsné nádobě [9]. Kyselina L-askorbová se lehce oxiduje chinony a dalšími oxidačními látkami důsledkem reakcí neenzymového hnědnutí v potravinách. Kyselina L-dehydroaskorbová se zúčastňuje i na Streckeho degradaci. Těmito reakcemi se vysvětluje zapojení kyseliny L-dehydroaskorbové do reakcí neenzymového hnědnutí, hlavně při tepelné úpravě zeleniny a ovoce. Do potravin se na zpomalení autooxidace aplikuje jako antioxidant ve volné formě nebo ve formě sodné soli, do potravin tukového charakteru pak ve formě esteru s kyselinou palmitovou. Na retenci kyseliny L-askorbové má vliv celá řada vlivů jako je ph, způsob technologického opracování, skladování, teplota, množství kyslíku, přítomnost kovových kationů. Všeobecně platí, že čím jsou teplota a čas zpracování nižší, tím více kyseliny

18 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 18 L-askorbové se uchovává. Termodestrukce kyseliny L-askorbové nastává při teplotě nad 100 o C [10]. 1.6 Fyziologie vitaminu C Jednou z hlavních biologických funkcí tohoto oxidačně redukčního systému je podíl na přenosu vodíku a elektronů z výchozích substrátů až na molekulární kyslík. To platí zejména pro rostlinný materiál. Tento redukční systém bývá často podporován bioflavonoidovým oxidačně redukčním systémem. Vitamin C působí jako kofaktor hydroxylace při konverzi prolinu na hydroxyprolin. Uplatňuje se také při vzniku tyrosinu nebo nadledvinových steroidů. Extracelulární funkce vitaminu C by mohly především spočívat v ochraně LDL (Low Density Lipoprotein) proti oxidaci, v regeneraci tokoferolu (vitamin E) z tokoferoxylového radikálu a v regeneraci glutathionu z jeho oxidované formy. Působí do jisté míry příznivě na snižování sérové hladiny celkového cholesterolu a zvyšuje koncentraci HDL (High Density Lipoprotein) cholesterolu u začínající hypercholesterolemie. Dále redukuje železo z potravy a zvyšuje tak jeho intestinální absorpci nebo blokuje reakci, při které vznikají karcinogenní nitrosaminy. Vitamin C napomáhá opět do jisté míry obranyschopnosti organismu. Askorbát totiž zvyšuje aktivitu fagocytů a chrání jejich membrány před oxidačním poškozením, zvyšuje hladinu protilátek. Syntetická kyselina L-askorbová se používá v potravinářském průmyslu k obohacování nápojů, nálevů, ale také při konzervování rostlinných produktů a masa jako antioxidační prostředek [1]. Vitamin C je potřebný pro produkci kolagenu. Tato vlákna jsou v těle všudypřítomná, poskytují pevnost a zároveň flexibilní strukturu. Kolagen je hlavní složkou pojivových tkání a představuje ¼ všech bílkovin v organismu savců. Vitamin C je požadovaný pro syntézu dopaminu, noradrenalinu a adrenalinu v nervové soustavě nebo v nadledvinkách a je také potřebný k syntéze karnitinu a při transferu energie k buňce mitochondrii. Je to silný antioxidant, zlepšuje vstřebávání železa, působí při syntéze žlučových kyselin, udržuje ion železa a mědi v redukovaném stavu. Velké množství vitaminu C se vyskytuje v krevní plazmě, v množství asi 10 mg v 1 litru [11].

19 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 19 Vitamin C je nejrozšířenější ze všech vitaminů. Je to i nejhojněji používaný potravinový doplněk. Skutečný rozsah jeho příznivých účinků však může překvapit i ty, kteří se domnívají, že dobře znají jeho všestranné použití. Dnes je zájem o tento vitamin především soustředěn na jeho schopnost chránit tkáňové buňky. Vitamin C působí především uvnitř buněk. Je nezbytný pro krvetvorbu a pružnost cévních stěn. Chrání oční čočku proti fotooxidačním účinkům a tak brání vzniku tzv. katarakty, neboli šedého zákalu [1]. Vitamin C je aktivní ve všech tělesných tkáních. Pomáhá posilovat vlásečnice a buněčné stěny. Podporuje hojení povrchových ran a tím snižuje riziko vzniku krevních sraženin a hematomů. Vitamin C zmírňuje následky nachlazení a zkracuje dobu léčby a napomáhá zvládat infekce dýchacích cest a je rovněž účinným prostředkem při léčení astmatu. Pomáhá ke vstřebávání určitých aminokyselin, větší množství jej proto potřebují lidé, kteří drží redukční diety. Vyšší dávky vitaminu C dokáží blokovat účinek látek, které vznikají v těle jako odpověď na podráždění alergeny. Ovlivňuje schopnost našeho organismu využít některé důležité živiny. Jedná se především o vápník a železo a napomáhá vylučovat z organizmu škodliviny. Jsou to zejména kadmium, měď a rtuť. Cigaretový kouř obsahuje vysoký podíl těžkých kovů. Jedním z těchto toxických kovů je olovo. Vitamín C může toto olovo vázat a usnadnit jeho vyloučení [13]. Zvýšený příjem vitamínu C podporuje v těle také vlastní tvorbu interferonů. Interferon je přírodní bílkovinná látka, která chrání nejen proti virovým infekcím, má ale také celkové ochranné účinky. Při pokusech na zvířatech bylo dokázáno, že podáváním vitamínu C se zvyšuje odolnost vůči chladu. To je významné zjištění, když pomyslíme na to, že nemoci z nachlazení jsou zapříčiněny většinou souběhem stresu z chladu a infekce. Stresové situace jsou spojeny s vyšší spotřebou a tím i s vyšší potřebou vitamínu C. To je částečně objasněno zvýšenou tvorbou stresových hormonů, které jsou závislé na vitamínu C [14].

20 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Výskyt Vitamin C se vyskytuje nejčastěji zejména v ovoci a zelenině. Hlavními zdroji vitaminu C jsou citrusové plody. Množství vitamínu C kolísá v závislosti na původu rostliny, původních podmínkách, klimatu, době slizni, uskladnění a metodě přípravy. Nejvíce vitaminu C najdeme v černém rybízu, kiwi, zelené paprice, kopru, šípcích. Snadno se ničí povařením, protože se rychle oxiduje na kyselinu L-dehydroaskorbovou, která snadno otevírá laktonový kruh, což má za následek ztrátu biologické aktivity. Rozklad vitaminu C urychlují i enzymy a stopy kovů z nářadí a nádobí, takže ztráty nastávají již při opracování rostlinného materiálu [15]. Tabulka 1: Množství vitaminu C v ovoci a zelenině Potravina Obsah (mg.kg -1 ) Potravina Obsah (mg.kg -1 ) Potravina Obsah (mg.kg -1 ) jablka grapefruity křen hrušky 0-40 ananas zelí švestky 5-45 banán brokolice broskve kiwi květák višně, třešně mango kedluben angrešt papája salát hlávkový rybíz červený šípky špenát rybíz černý mrkev rajčata hroznové víno 0-50 petržel kořenová 30 lilek 80 jahody petržel kadeřavá paprika borůvky 90 pažitka 430 okurka melouny pór chřest pomeranče cibule hrášek citrony česnek brambory

21 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Avitaminosa, hypovitaminosa a nežádoucí účinky vitaminu C Avitaminosa se projevuje onemocněním kurděje nebo též skorbut. Příznakem je krvácivost, uvolňování zubů, snadná lomivost kostí, špatné hojení ran. To vše souvisí se selháním tvorby biosyntézy kolagenu. Dlouhodobý nedostatečný příjem vitaminu C potravou vyvolává u dětí Moellerovu-Barlowovu nemoc, u dospělých kurděje. Vitamin C také zasahuje do biosyntézy katecholaminů a jeho nedostatek je v této oblasti spojován s výskytem depresí, hypochondrií a změnami nálad [16]. Kurděje (skorbut) je nemoc způsobená dlouhodobým nedostatkem vitamínu C ve stravě. Dnes už je tato choroba poměrně vzácná, vyskytuje se občas jen ve velmi chudých oblastech tzv. třetího světa. Dříve jí trpěli zejména chudí lidé, obzvláště v zimních měsících, nebo námořníci při dlouhých plavbách [17]. Horní příjmy pro vitamin C z dietních zdrojů a doplňků jsou následující: Ve věku 1-3: 400 mg.den -1 Ve věku 4-8: 650 mg.den -1 Ve věku 9 13: 100 mg.den -1 Ve věku 14 18: 1800 mg.den -1 Ve věku 19 +: 000 mg.den -1 [15]. Příjem vysokých dávek vitaminu C nad 1000 až 000 mg.den -1 může vést k dráždění sliznice žaludku a jícnu, což bývá doprovázené průjmy, bolestmi hlavy, slabostí, nespavostí, dále může docházet ke zvýšenému okyselení moči a ke tvorbě ledvinových oxalátových kaménků, k úbytku vitaminu B 1 v těle a ke zvýšení hladiny cholesterolu. U alergiků se ojediněle může objevit kopřivka. Vitamin C ve vyšších dávkách může ovlivnit správnost výsledků některých laboratorních testů (např. stanovení glukózy v moči), proto je vhodné případné vysazení před podobnými testy konzultovat s lékařem.

22 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Obr.6 Projevy avitaminosy Antivitaminy vitaminu C Vitamin C má i spoustu antivitaminů. Mezi ně se řadí hlavně aspirin, sirupy na vykašlávání, antihistamika, barbituráty, antikoncepční pilulky a prednisony. Vitamín C by se měl užívat s vitaminem B 6 a hořčíkem, aby se vyloučilo srážení kyseliny šťavelové [18].

23 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Doporučená denní dávka vitaminu C Denní příjem 100 mg vitaminu C je spojován s udržením maximální zásoby vitaminu C v lidském organismu, která činí 3 g. Při uvedeném příjmu činí poločas obratu přibližně 14 dní. Zásoby vitaminu C jsou v organismu nerovnoměrně rozloženy v tkáních s vysokou metabolickou aktivitou. Dříve se uvádělo, že snížení rizika kardiovaskulárních chorob a rakoviny je podmíněno minimálním denním příjmem 90 až 100 mg vitaminu C. Nicméně finští vědci potvrdili, že je to vitamin E, který snižuje oxidativní modifikaci lipoproteinů a zároveň neprokázali podobný pozitivní efekt ze strany askorbátu, ani při použití relativně vysoké dávky 500 mg.den -1. Další autoři také uvádějí, že užití vysokých dávek askorbátu nemá žádný znatelně pozitivní vliv na zlepšení funkce myokardu, který byl poškozen ischémií. Také nejrozšířenější mýtus o léčebném účinku askorbátu u běžného nachlazení nebyl dosud prokázán. Požadavek se zvyšuje při extrémní tělesné zátěži, trvalém psychickém stresu, alkoholismu apod. U kuřáků dochází ke snížení absorpce, takže denní doporučený příjem se pohybuje kolem 150 mg. Pro doporučený denní příjem vitaminu C pro muže i ženy v produktivním věku v ČR zatím platí hodnota 75 mg.den -1. Pro děti od 3-10 let se doporučuje dávka poloviční. Potřeba vitamínu C však výrazně stoupá při vyšší tělesné zátěži, infekčních onemocněních, stresu a při kouření. Denní doporučená dávka vitaminu C závisí na věku, pohlaví, na životním stylu a na mnoha dalších faktorech [19]. Podle francouzského Afssa (French Agency For Food Safety) potřebuje dospělý člověk denně 110 mg vitaminu C, děti 60 až 90 mg, těhotné a kojící matky 10 až 130 mg. Tým doktora Levina z Marylandu stanovil v roce 1996 denní dávku na celých 00 mg. Studie z roku 001 tuto hranici ještě zvýšila. Teprve 500 až 1000 mg vitaminu C denně prý účinně chrání tkáně před stárnutím. Pokud se konzumuje méně než 00 mg vitaminu C denně, vzrůstá podle epidemiologů riziko úmrtnosti. Stravovací režim našich paleolitických předků, který je prý nejlépe přizpůsobený genetické výbavě člověka, dodával asi 500 mg vitaminu C denně. Tabák ničí velice rychle zásoby vitaminu C v těle a znásobuje škody, které na tkáních a buňkách způsobují volné radikály [15]. Zajímavá je skutečnost, že při silných záporných emocích organismu dokážeme spálit až 3000 mg vitaminu C [0].

24 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 4 KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE Chromatografie je separační proces, při kterém se látky rozdělují mezi dvě nemísitelné fáze, jednou pohyblivou (mobilní) a druhou nepohyblivou (stacionární), na základě fyzikálně chemických interakcí, jako jsou adsorpce, rozpouštění, iontová výměna a podobně. Chromatografické metody rozdělujeme podle: [1] 1) Převažujícího mechanismu separace - rozdělovací - adsorpční - iontoměničová (iontová) - gelová permeační (separace podle velikosti molekul) ) Mobilní fáze - plynová (GC, Gas Chromatography) - kapalinová (LC, Liquid Chromatography) - chromatografie s mobilní fází v nadkritickém stavu (SFC, Supercritical Fluid Chromatography) [] 3) Stacionární fáze - tuhá látka - plynová adsorpční chromatografie (GSC, Gas Solid Chromatography) - kapalinová adsorpční chromatografie (LSC, Liquid Solid Chromatography) - kapalina - plynová rozdělovací chromatografie (GLC, Gas Liquid Chromatography) - kapalinová rozdělovací chromatografie (LLC, Liquid Liquid Chromatography) - zvláštní typy - gelová permeační chromatografie (GPC, Gel Permeatic Chromatography) - iontově výměnná chromatografie (IEC, Ion Exchange Chromatography)

25 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 5 Základní výhodou HPLC (High Performance Liquid Chromatografy) je široký rozsah použitelnosti. Lze analyzovat až 80 % veškerých látek, které se podstatně liší v chemických a fyzikálních vlastnostech. Další předností je možnost účinně ovlivňovat separaci nejenom volbou stacionární fáze, ale rovněž změnami složení mobilní fáze, protože kapalná mobilní fáze není pouze inertním nosičem vzorků, ale podílí se přímo na interakcích rozpuštěných látek se stacionární fází. Chromatografickou separaci látek v koloně lze provést třemi rozdílnými technikami [3] - frontální - vytěsňovací - eluční. Současná praxe využívá výhradně eluční chromatografii. Její princip spočívá v tom, že chromatografickým systémem protéká konstantní mobilní fáze o určitém složení a fyzikálních vlastnostech, jejíž složky neinteragují se stacionární fází v koloně. Do proudu této mobilní fáze se nastřikují směsi látek ve formě úzké symetrické zóny [4]. Zadržování látek rozpuštěných v mobilní fázi solutů kolonou se nazývá retence, zatímco vymývání solutů z kolony se nazývá eluce. Mobilní fázi se říká eluční činidlo a její schopnost vymývat látky z kolony se posuzuje relativním parametrem tzv. eluční silou. Mobilní fáze o vyšší eluční síle vymývá látky z kolony rychleji, než mobilní fáze o nižší eluční síle. Rozpouštědla, seřazená podle stoupající eluční síly, tvoří tzv. eluotropní řadu. Látky lze eluovat třemi způsoby [10]: - izokratická eluce - gradientová eluce - elucí skokem Pokud se celá chromatografická separace provádí s použitím mobilní fáze o konstantním složení, tedy o konstantní eluční síle jde o techniku izokratické eluce. Pokud se ovšem eluční síla mobilní fáze podle určitého programu mění v průběhu separace, pak jde o techniku gradientové eluce. Kolony se vybírají podle tří základních kritérií:

26 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 6 - požadovaného rozlišení - požadované rychlosti analýzy - potřebného zatížení kolony. Jako náplně do kolon se v současné době používají pórovité částice silikagelu o průměru 10 µm a méně. Umožňují separace s podstatně vyšší účinností, přičemž se dosahuje i vyšší kapacity kolony pro dávkované vzorky a zvyšuje se rychlost analýzy. Účinnost separace vzrůstá s klesajícím průměrem částic [5] Nejběžnějším absorbentem používaným v HPLC je silikagel. Silikagel je charakterizován průměrem pórů ( až mm), specifickým povrchem (od 100 do 860 m.g -1 ) a specifickým objemem (0,7 až 1, cm.g -1 ). Na povrchu silikagelu jsou volné silanolové Si-OH a siloxanové Si-O-Si skupiny. Koncentrace silanolových skupin je nejdůležitějším faktorem při separaci, naopak siloxanové jsou nežádoucí, neboť způsobují nespecifické interakce. V adsorpční chromatografii s polárními adsorbenty se používají nepolární rozpouštědla jako mobilní fáze. Postupem času převládají separace s fázemi méně polárními než fáze mobilní. Zatímco adsorpční chromatografie se hodí pro separace směsí látek nízkomolekulárních sloučenin lipofilního charakteru a geometrických isomerů, homologické řady látek se nejlépe dělí chromatografií s obrácenými fázemi. Reverzní fáze se nehodí pro separace silných kyselin a bází, neboť silikagel, který slouží jako nosič reverzní fáze, se rozkládá při extrémních hodnotách ph. Na povrchu silikagelu jsou už zmíněné volné hydroxylové (silanolové) skupiny Si-OH s aktivním vodíkovým atomem, který může být nahrazen různými organickými skupinami a tak mohou být připraveny stacionární fáze s různými vlastnostmi. V současné době je většina komerčně vyráběných stacionárních fází siloxanového typu Si-O-Si-R. Takto se vyrábějí například fáze se skupinami Si-O-Si-ethyl, -hexyl, -oktyl, -amino a další. Vysoce účinné kolony, naplněné částicemi o průměru menším než 10 µm, vyžadují k dosažení optimálních průtokových rychlostí vysokých tlaků (jednotky až desítky MPa) [10].

27 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 7 Obr.7 Schéma HPLC-UV/VIS.1 Přístroje a zařízení HPLC Mobilní fáze se přivádí ze zásobníku do vysokotlakého čerpadla, které ji přes dávkovací zařízení vzorku dopravuje do kolony. Na výstupu z kolony je připojen detektor, jehož signál se zpracovává na počítači. Pro gradientovou eluci je zapotřebí dvou nebo více zásobníků pro složky mobilní fáze a zařízení pro jejich směšování. Někdy je nezbytné převádět složky vzorku na deriváty, takže systém může obsahovat reaktory pro derivatizaci. Řada vzorků obsahuje balastní látky, proto se do systému zařazuje předkolona, ve které se tyto látky zachytí. Ze zásobníku se mobilní fáze čerpá přes filtr. Některé přístroje umožňují odplynění mobilní fáze. Čerpadlo musí zajistit definovaný a konstantní průtok mobilní fáze.

28 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 8 V současné době se používá dávkování pomocí dávkovacích ventilů, které umožňují podstatně přesnější dávkování a nevyžadují zastavení toku mobilní fáze. Dávkovací ventily jsou vícecestné ventily s vyměnitelnou dávkovací smyčkou. Smyčkové dávkovače umožňují dávkovat libovolný objem vzorku mikrostříkačkou do smyčky při atmosférickém tlaku. Po naplnění smyčky se její obsah vymyje pootočením ventilu mobilní fází do kolony. Předkolony bývají nejčastěji umístěny před chromatografickou kolonou. Jednotlivé části kapalinového chromatografu se nejčastěji spojují nerezovými kapilárami s minimálním mrtvým objemem. Termostatovat lze kolonu, detektor i celý okruh vedení mobilní fáze. Současně se tím sníží viskozita mobilní fáze. S chemicky vázanými fázemi se obvykle pracuje v rozsahu 0 až 65 o C [5]. Detektor by měl mít co nejvyšší citlivost detekce solutu a co nejnižší hodnotu meze detekce. Základní linie detektoru (tj. hodnota signálu za nepřítomnosti solutu) by měla mít co nejnižší hodnotu, co nejmenší šum a neměla by vykazovat drift (únik, tj. pomalý systematický posun). Je žádoucí, aby detektor byl stejně citlivý ke všem detekovaným solutům, a aby jeho signál co nejméně závisel od experimentálních podmínek. Nejvíce se v praxi používají spektrofotometrické detektory. Jsou selektivní, takže základním požadavkem je, aby při dané vlnové délce detekovaná látka absorbovala co nejvíce. Vlnovou délku lze programovat. Mezi další používané detektory pro HPLC patří fluorimetrické, refraktometrické, elektrochemické nebo kombinace s hmotnostní spektrometrií (LC-MS). Na analýzu řady vitamínových složek je dokonale využívána vysokoúčinná kapalinová chromatografie s použitím reverzní fáze (C8 nebo C18). Jako eluční způsob se nejčastěji používá izokratická nebo gradientová eluce. Jako mobilní fáze bývá nejvíce používán methanol, ethanol, acetonitril a voda v různých poměrech [6]

29 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 9 Obr.8 HPLC HP 1100 Obr.9 Kolona HPLC HP 1100 ESA Coulochem III multi - elektrodový detektor Tento detektor umožňuje měřit v tzv. DC-módu tzn., že aplikovaný potenciál je konstantní během celého analytického měření. V elektrochemickém detektoru eluent prochází skrz průtokovou kyvetu a poskytuje vhodné potenciály a kontroluje proudění. Citlivost ECD je významně lepší než pro mnoho jiných běžně užívaných režimů z detekce pro HPLC (například UV absorbance). Selektivita ECD spočívá v tom, že jestliže se z kolony vymývají dvě a více látek a mají-li různý oxidační nebo redukční potenciál, můžeme vybrat potenciál tak, že budeme selektivně detekovat pouze jednu z těch látek. ECD využívá dvou typů detekce. U amperometrického detektoru eluent teče po povrchu elektrody. Většina elektroaktivních prvků směsi teče na povrchu elektrody a nereaguje. Pouze 5-15 % elektroaktivních látek reaguje s touto elektrodou. U coulometrického detektoru eluent protéká pórovitou grafitovou elektrodou. Detektor tak může poskytnout zvýšenou citlivost. Proud je pak úměrný koncentraci vzorků [7] Elektrochemický detektor Coulochem III může obsahovat dvě cely. Standardní analytická cela model 5010A poskytne potenciál pro oxidaci nebo redukci vzorků. Cela obsahuje dvě sériově zapojené komory, každá komora obsahuje pórovitou grafitovou coulometrickou

30 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 30 elektrodu a dvojitou referenční elektrodu. Ochranná cela model 500 je užívaná pro oxidované nebo redukované elektrolyticky aktivní součásti vzorků, které by mohly být přítomny jako nečistoty v mobilní fázi. Ochranná cela je obvykle umístěna mezi čerpadlem a nástřikem. Elektrochemická cela je místo, kde nastane oxidace nebo redukce analytu a proud, který je tak vytvořen, je převedený na výstupní napětí potenciostatu, kde se tento signál zpracovává. Potenciál je po celou dobu měření konstantní (DC mód) a proud je měřený jako funkce času. Operační výhody coulometrického detektoru jsou takové, že signální odezva je velmi stabilní, signální rozsah může být maximální, plocha píku a výška píku pro vzorek jsou předvídatelné, coulometrická detekce může poskytnout navíc selektivitu a lepší odezvu pro nevratné analýzy [7]. Obr.10 Coulochem III Obr.11 Kolona Coulochemu III. Statistické zpracování výsledků kvantitativních analýz

31 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 31 Výsledky kvantitativní analýzy hodnotíme podle správnosti, tj. schopnosti metody kvantitativně určovat danou veličinu, dále podle přesnosti, tj. schopnosti metody poskytovat konzistentně stejné výsledky pro řadu opakovaných stanovení a podle reprodukovatelnosti, tj. schopnosti metody poskytovat konzistentně stejné výsledky pro nezávislá měření, prováděná se stejným vzorkem a stejným postupem různými pracovníky v různých laboratořích. Analytická chyba představuje rozdíl mezi nalezeným obsahem analytu (x) a jeho skutečným obsahem (µ) ve vzorku. Malé nepravidelné odchylky od skutečné hodnoty se určují statisticky ze souboru paralelních (opakovatelných) analýz. Ovlivňují přesnost (reprodukovatelnost) či opakovatelnost stanovení. Aritmetický průměr všech výsledků se zpravidla nejvíce blíží skutečné hodnotě: n x = n= 1 xi n (1) Základní charakteristikou nahodilých chyb je odhad směrodatné odchylky: 1 1 n s = ( x i ) n n 1 () s µ = x ± t (3) n Ve skutečnosti máme k dispozici jen omezený počet výsledků, který je podstatně menší než n a tudíž je směrodatná odchylka závislá na počtu paralelních výsledků. Byl definován Studentův koeficient t, který charakterizuje Studentovo rozložení náhodných odchylek pro daný stupeň volnosti (daný počet výsledků analýz a použitou hladinou významnosti 1- α). Studentovým koeficientem pak násobíme hodnotu směrodatné odchylky. Nejlepším vyjádřením pro průměrný výsledek se série paralelních stanovení je proto vztah [10].

32 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 3

33 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 33 II. PRAKTICKÁ ČÁST

34 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 34 3 METODIKA 3.1 Chemikálie kyselina šťavelová (dodavatel-chemapol Praha) kyselina m-fosforečná (dodavatel-dorapis Praha) kyselina askorbová (dodavatel-spofa Praha) kyselina octová 98% (dodavatel-lachema Brno) mořský písek (dodavatel-chemapol Praha) ethanol 96% (dodavatel- Ing. Petr Lukeš,Uherský Brod) methanol čistoty pro HPLC (dodavatel-sigma Aldrich) redestilovaná voda ZnSO 4 (dodavatel-chemapol Praha) K 4 [Fe(CN) 6 ] (dodavatel-chemapol Praha),6-dichlorfenolindofenol (dodavatel-loba, Chemie Wien, Fischamend) octan olovnatý (dodavatel-chemapol Praha) Použité přístroje a pomůcky Standardní laboratorní vybavení: předvážky (Kern, SRN) lednice (Samsung- Calex, CZ) temperovaná vodní lázeň ( Memmert, SRN) běžné laboratorní sklo a pomůcky

35 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 35 Aparatura pro HPLC-UV/VIS (Hewlett Packard 1100) - vakuovaný odplyňovací modul G13A - binární pumpy G131A - termostat kolon G1316A - detektor UV/VIS DAD G1315A - dávkovací ventil analytický smyčkový (dávkovací smyčka o objemu 0 µl) - kolona SUPELCOSIL - LC8 (15 cm x 4,6 mm; 5 µm, Supelco, USA) - PC s vyhodnocovacím programem ChemStation Instrument1 (Agilent, USA) Dávkovací stříkačka (Hamilton, USA) Mikrofiltry 0,45 µm, PTFE (Supelco, USA) Aparatura pro HPLC-ECD (ESA Coulochem III) - analytická cela 5010A - guard cela detektor Coulochem III - dávkovací ventil analytický smyčkový (dávkovací smyčka o objemu 0 µl) - kolona SUPELCOSIL - LC8 (15 cm x 4,6 mm; 5 µm, Supelco, USA) - PC s vyhodnocovacím programem ChemStation Instrument1 (Agilent, USA) Dávkovací stříkačka (Hamilton, USA) Mikrofiltry 0,45 µm, PTFE (Supelco, USA) 3. Metody 3..1 Titrační stanovení vitaminu C Principem stanovení vitaminu C je oxidace kyseliny L-askorbové,6-dichlorfenolidofenolem za vzniku kyseliny L-dehydroaskorbové a bezbarvé leukobáze indofenolu. Titrace,6-dichlorfenolindofenolem byla prováděna v prostředí % kyseliny šťavelové. Prvním přebytkem odměrného roztoku se vzorek zabarvil do růžova.

36 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 36 Před vlastním stanovením byly připraveny následující standardní roztoky: 1. Odměrný roztok,6-dichlorfenolindofenolu (c = 0,001 mol.l -1 ): 0,9008 g,6-dichlorfenolindofenolu bylo rozpuštěno v převařené destilované vodě a roztok byl kvantitativně doplněn destilovanou vodou po značku do 1000 ml odměrné baňky a byl přefiltrován přes filtrační papír. Odměrný roztok byl uchováván v tmavé lahvi při 4 0 C.. Kyselina šťavelová (% roztok): 5,00 g kyseliny šťavelové bylo rozpuštěno v destilované vodě a doplněno do 50 ml odměrné baňky po značku. 3. Standardní roztok kyseliny askorbové o koncentraci (c = 10 mg.ml -1 ): s přesností na 0,0001 g byl navážen 1,00 g standardního preparátu kyseliny L-askorbové a toto množství bylo rozpuštěno v 100 ml odměrné baňce v destilované vodě. V rámci titračního stanovení kyseliny askorbové byla nejprve provedena standardizace odměrným roztokem,6-dichlorfenolindofenolu. K 1 ml standardního roztoku kyseliny askorbové (c = 1 mg.ml -1 ) bylo přidáno 10 ml % roztoku kyseliny šťavelové a vše bylo titrováno odměrným roztokem,6-dichlorfenolindofenolu do růžového zbarvení, které se nesmí během 15 sekund měnit. Titrace byla provedena celkem pětkrát a byla vypočtena průměrná spotřeba odměrného roztoku V b. Zároveň byl proveden i slepý pokus pouze s 10 ml % roztoku kyseliny šťavelové. Výpočtem podle vzorce (4) byl stanoven faktor (f), který udává počet mg kyseliny askorbové a to odpovídajících 1 ml titračního činidla. f = V a / (V b - V c ), (4) kde V a je objem standardního roztoku kyseliny askorbové (ml), V b je spotřeba titračního činidla na standardní roztok kyseliny askorbové (ml) a V c je spotřeba titračního činidla na slepý pokus (ml). Na titrační stanovení vitaminu C bylo odváženo 10 g vzorku s přesností na 0,0001 g. Před vlastní titrací kyseliny askorbové v ovoci a zelenině byl vzorek ve třecí misce důkladně rozetřen s mořským pískem. K rozetřenému vzorku bylo přidáno 50 ml % kyseliny šťave-

37 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 37 lové a tato směs se nechala 15 minut odstát za nepřístupu světla. Získaný extrakt se pak přefiltroval a k titraci se pipetovala jeho alikvotní část (10 ml). Vznikly roztok byl titrován odměrným roztokem,6-dichlorfenolindofenolu o koncentraci c = 0,001 mol.l -1 do růžového zbarvení, které se alespoň 15 sekund nemění. Titrace byla provedena pro každý vzorek celkem pětkrát a k výpočtu byla použita průměrná hodnota objemu spotřebovaného odměrného roztoku. V počátečních fázích byla titrace prováděna po kapkách a z stálého míchání, čímž se do jisté míry eliminoval vliv reduktonů, které reagují pomaleji než kyselina askorbová. Zároveň byl proveden slepý pokus. Obsah kyseliny askorbové v navážce vzorku byl vypočítán podle vztahu: W = [(V x - V c ). f ] / m, (5) kde V x je spotřeba,6-dichlorfenolindofenolu na titraci vzorku (ml), V c je spotřeba,6-dichlorfenolindofenolu na slepý pokus (ml), f je přepočítávací faktor na mg kyseliny askorbové a m je hmotnost vzorku v alikvotní části. 3.. Stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS S přesností na 0,0001 g bylo naváženo 10 g vzorku. Ten byl důkladně rozetřen ve třecí misce s mořským pískem. K rozetřenému vzorku bylo přidáno 50 ml směsi (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 99:0,5:0,5) a nechal se 15 minut odstát. Získaný extrakt se poté přefiltroval a tím byl získán zásobní roztok pro další ředění. Z každého filtrátu bylo provedeno pět měření. Alikvotní část vzorku byla přefiltrována před vstřikem na kolonu přes mikrofiltr o velikosti póru 0,45 µm. Tímto postupem byly připraveny vzorky z ovoce a zeleniny. Rozdílným způsobem byl izolován vitamin C z brambor. Před vlastním stanovením kyseliny askorbové v bramboře metodou HPLC bylo ve třecí misce důkladně rozetřeno 10 g vzorku s mořským pískem. K rozetřenému vzorku bylo přidáno 50,0 ml směsi (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 99:0,5:0,5) a vzorek se nechal 15 minut extrahovat. Získaný extrakt se pak přefiltroval a do filtrátu bylo přidáno 15 ml 45% FeSO 4

38 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 38 a 15 ml 18,5% K 4 [Fe Cn 6 ], aby byly vysráženy škroby obsažené v bramboře a roztok byl opět přefiltrován. Do tohoto přefiltrovaného roztoku bylo poté přidáno 16,0 ml octanu olovnatého na konečné vysrážení škrobu a roztok byl opět přefiltrován. Z filtrátu bylo provedeno taktéž pět měření a vzorek byl přefiltrován před vstřikem na kolonu přes mikrofiltr o velikosti póru 0,45 µm. Chromatografická separace u vzorků ovoce a zeleniny probíhala na koloně SUPELCOSIL C8, 5 µm (15 cm x 4,6 mm). Eluce byla prováděna izokraticky methanolem při 30 O C a průtoku 1,1 ml.min -1. Detekce kyseliny askorbové byla prováděna spektrofotometricky v UV oblasti při vlnové délce 54 nm. Absorpční maximum bylo ověřeno stanovením absorpčního spektra standardního roztoku kyseliny L-askorbové Kalibrační křivka pro stanovení vitaminu C metodou HPLC-UV/VIS S přesností na 0,0001 g bylo naváženo 0,000 g kyseliny L-askorbové a byla rozpuštěna ve 50 ml odměrné baňce a doplněna po rysku směsí (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 99:0,5:0,5). Výchozí koncentrace zásobního roztoku tedy byla 8 µg.ml -1. Ze zásobního roztoku kyseliny L-askorbové byly připraveny dalším ředěním směsí (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 99:0,5:0,5) kalibrační roztoky o koncentraci 1; ; 4; 6; 8 µg.ml -1 a analyzovány metodou HPLC postupem popsaným v kapitole Kalibrační křivka byla sestrojena jako závislost plochy píku (mv.s -1 ) na koncentraci kyseliny askorbové (µg.ml -1 ) Stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD Izolace vitaminu C byla provedena stejným postupem uvedeným v kapitole 3... Chromatografická separace probíhala na koloně SUPELCOSIL C8, 5 µm (15 cm x 4,6 mm). Eluce byla prováděna izokraticky s mobilní fází (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 99:0,5:0,5) při 30 O C a průtoku 1,1 ml.min -1. Detekce kyseliny askorbové byla prováděna pomocí potenciálu na dvou kanálech s napětími K 1 = 600 mv a K = 650 mv.

39 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická Kalibrační křivka pro stanovení vitaminu C metodou HPLC-ECD S přesností na 0,0001 g bylo naváženo 0,000 g kyseliny L-askorbové. Navážka byla rozpuštěna ve 50 ml odměrné baňce a doplněna po rysku směsí (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 99:0,5:0,5). Výchozí koncentrace zásobního roztoku tedy byla 8 µg.ml -1. Ze zásobního roztoku kyseliny L-askorbové byly připraveny dalším ředěním směsí (CH 4 :H O:H 3 PO 4 v poměru 98,5:0,5:0,5) kalibrační roztoky o koncentraci 1; 1,5; ;,5; 3; 4; 4,5 µg.ml -1 a analyzovány metodou HPLC postupem popsaným v kapitole Kalibrační křivka byla měřena při vloženém napětí K 1 = 600 mv a K = 650 mv. Byla sestrojena jako závislost plochy píku (mv.s -1 ) na koncentraci kyseliny askorbové (µg.ml -1 ).

40 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 40 4 VÝSLEDKY A DISKUSE 4.1 Titrační stanovení vitaminu C,6 dichlorfenolindofenolem Titrační stanovení obsahu kyseliny L-askorbové pomocí 0,001 mol.l -1,6-dichlorfenolindofenolu bylo provedeno podle postupu uvedeného v kapitole Nejprve byl stanoven faktor (f), který udává počet mg kyseliny L-askorbové na jehož titraci se spotřebuje 1 ml odměrného roztoku. Titrace byla provedena pětkrát a průměrná spotřeba,6- dichlorfenolindofenolu byla 3,0 ml. Spotřeba titračního činidla na slepý pokus byla 0,10 ml. K výpočtu faktoru (f) byl použit vzorec uvedený v kapitole ml,6-dichlorfenolindofenolu (c = 0,001 mol.l -1 ) odpovídá 0,1567 mg kyseliny askorbové f = 0,1567 mg.ml -1 Pro vlastní titrační stanovení kyseliny askorbové v ovoci a v zelenině bylo použito 9 druhů ovoce a druhy zeleniny. Každý vzorek byl titrován pětkrát a průměrná spotřeba odměrného roztoku,6-dichlorfenolindofenolu o koncentraci (c = 0,001 mol.l -1 ) je uvedena v tabulce 16. Uvedené vzorky ovoce a zeleniny byly zváženy s přesností na 0,0001 g Titrační stanovení vitaminu C v ovoci Stanovení bylo provedeno ve vzorcích grepu, pomeranče, kiwi, citronu, mandarince, jahody, v hroznu červeném a bílém a v limetě. Průměrný obsah vitaminu C v ovoci byl vypočten pomocí statistického parametru vyjádřeného vzorcem (1) z kapitoly.. Dále byl vypočten podle vzorce () odhad směrodatné odchylky s, který je základní charakteristikou u nahodilých chyb. Skutečný obsah vitaminu C byl vypočten pomocí vzorce (3). Hodnota Studentova koeficientu t je při testované hladině významnosti α = 0,05 a při čtyřech stupních volnosti,776 [10].

41 UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 41 Tabulka : Přesnost stanovení vitaminu C v grepu V x (ml) Obsah vitaminu C (mg.100 g -1 ) x1 3,5 6,63 0,4 0,0576 3,5 6,63 0,4 0,0576 3,6 7,63 0,76 0,5776 3,6 6,63 0,4 0,0576 3,5 7,63 0,76 0,5776 x = 6,87 = 1,38 V x = spotřeba,6-dichlorfenolindofenolu Směrodatná odchylka s = 0,576 mg Průměrný obsah vitaminu C titrační metodou µ = 6,87 ± 0,41 mg.100 g -1 (α = 0,05) Tabulka 3: Přesnost stanovení vitaminu C v pomeranči V x (ml) Obsah vitaminu C (mg.100 g -1 ) x1 3,7 8,0 0,34 0,0547 3,7 8,0 0,34 0,0547 3,8 8,98 0,549 0,3014 3,8 8,98 0,549 0,3014 3,7 8,0 0,34 0,0547 x = 8,44 = 0,767 Směrodatná odchylka s = 0,437 mg Průměrný obsah vitaminu C titrační metodou µ = 8,44 ± 0,54 mg.100 g -1 (α = 0,05) Tabulka 4: Přesnost stanovení vitaminu C v kiwi V x (ml) Obsah vitaminu C (mg.100 g -1 ) x1 7,9 59,54 0,48 0,304 8,0 60,33 0,31 0,0961 8,0 60,33 0,31 0,0961 7,9 59,54 0,48 0,304 8,0 60,33 0,31 0,0961 x = 60,0 = 0,749

živé organismy získávají energii ze základních živin přeměnou látek v živinách si syntetizují potřebné sloučeniny, dochází k uvolňování energie některé látky organismy nedovedou syntetizovat, proto musí

Více

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován

Více

Významné skupiny organických sloučenin Vitamíny

Významné skupiny organických sloučenin Vitamíny Významné skupiny organických sloučenin Vitamíny Předmět Chemie Ročník a obor 1.ZA, 1.SC, 1.OS, 2.ZA Kód sady CHEM/ZA+SC+OS/02 Kód DUM CHEM/ZA+SC+OS/01+02/02/10-20 Autor Mgr. Alena Jirčáková Datum vzniku

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Více

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 8. Výsledky kruhových testů V rámci ES byly provedeny kruhové testy, při nichž až 13 laboratoří zkoušelo čtyři vzorky krmiva pro selata, včetně jednoho

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip

Více

Složky potravy a vitamíny

Složky potravy a vitamíny Složky potravy a vitamíny Potrava musí být pestrá a vyvážená. Měla by obsahovat: základní živiny cukry (60%), tuky (25%) a bílkoviny (15%) vodu, minerální látky, vitaminy. Metabolismus: souhrn chemických

Více

VLIV TECHNOLOGICKÉHO ZPRACOVÁNÍ NA OSUD NUTRIČNĚ VÝZNAMNÝCH LÁTEK OVOCE A ZELENINY

VLIV TECHNOLOGICKÉHO ZPRACOVÁNÍ NA OSUD NUTRIČNĚ VÝZNAMNÝCH LÁTEK OVOCE A ZELENINY VLIV TECHNOLOGICKÉHO ZPRACOVÁNÍ NA OSUD NUTRIČNĚ VÝZNAMNÝCH LÁTEK OVOCE A ZELENINY RUDOLF ŠEVČÍK, VÁCLAV POHŮNEK Vysoká škola chemicko-technologická v Praze Fakulta potravinářské a biochemické technologie

Více

CHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).

CHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní). CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou

Více

Separační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip

Separační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (Gas chromatography, zkratka GC) je typ separační metody, kdy se od sebe oddělují složky obsažené ve vzorku a které mohou být převedeny do plynné

Více

EU peníze středním školám

EU peníze středním školám EU peníze středním školám Název projektu Registrační číslo projektu Název aktivity Název vzdělávacího materiálu Číslo vzdělávacího materiálu Jméno autora Název školy Moderní škola CZ.1.07/1.5.00/34.0526

Více

Negativní katalyzátory. chemické děje. Vyjmenujte tři skupiny biokatalyzátorů: enzymy hormony vitamíny

Negativní katalyzátory. chemické děje. Vyjmenujte tři skupiny biokatalyzátorů: enzymy hormony vitamíny Funkce biokatalyzátorů Pozitivní katalyzátory. chemické děje Negativní katalyzátory. chemické děje Vyjmenujte tři skupiny biokatalyzátorů: Ovlivňují chemické děje v živém organismu zrychlují zpomalují

Více

Chromatografie. Petr Breinek

Chromatografie. Petr Breinek Chromatografie Petr Breinek Chromatografie-I 2012 Společným znakem všech chromatografických metod je kontinuální dělení složek analyzované směsi mezi dvěma fázemi. Pohyblivá fáze (mobilní), eluent Nepohyblivá

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 c) při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí spektrum vzestupné části, vrcholu a sestupné části píku zkoušeného vzorku lišit od ostatních částí spektra

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení nepovolených doplňkových látek Zn-bacitracinu,

Více

Označení materiálu: Název materiálu: Tematická oblast: Anotace: Očekávaný výstup: Klíčová slova: Metodika: Obor: Ročník: Autor: Zpracováno dne:

Označení materiálu: Název materiálu: Tematická oblast: Anotace: Očekávaný výstup: Klíčová slova: Metodika: Obor: Ročník: Autor: Zpracováno dne: ; Označení materiálu: VY_32_INOVACE_VEJPA_POTRAVINY1_03 Název materiálu: Vitamíny. Tematická oblast: Potraviny a výživa 1. ročník Anotace: Prezentace slouží k výkladu nového učiva na téma Vitamíny. Očekávaný

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Kapalinová chromatografie (LC) 1.1. Teorie kapalinové

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu A a vitamínu E v krmivech a premixech. 2 Princip

Více

SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá

SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá Extrakce na pevné fázi (SPE) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Extrakce na pevné fázi (SPE) (Solid Phase Extraction) SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků,

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických

Více

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD)

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) A) Ultrazvuková extrakce Ultrazvuková extrakce je významnou extrakční

Více

Jazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii

Jazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii Datum: Jazykové gymnázium Pavla Tigrida, Ostrava-Poruba Název projektu: Podpora rozvoje praktické výchovy ve fyzice a chemii Laboratorní cvičení č. Tlak vzduchu: Teplota vzduchu: Vitamíny Vlhkost vzduchu

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS 1 Účel a rozsah Tento postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D3 v krmivech metodou LC/MS. 2 Princip Zkušební

Více

Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková

Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce Bc. Kamila Šimánková Diplomová práce 2006 ABSTRAKT Cílem této práce bylo vypracování vhodného extrakčního postupu k izolaci vitaminu C a

Více

Vitamin C důkaz, vlastnosti

Vitamin C důkaz, vlastnosti Předmět: Doporučený ročník: 4. - 5. ročník Zařazení do ŠVP: biochemie, přírodní látky, vitaminy Doba trvání pokusu: 45 minut Seznam pomůcek: zkumavky, kádinky, pipety (automatické), míchací tyčinky, odměrné

Více

Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)

Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení vinylthiooxazolidonu (dále VOT) v krmivech.

Více

Vitaminy. Autorem přednášky je Mgr. Lucie Mandelová, Ph.D. Přednáška se prochází klikáním nebo klávesou Enter.

Vitaminy. Autorem přednášky je Mgr. Lucie Mandelová, Ph.D. Přednáška se prochází klikáním nebo klávesou Enter. Vitaminy Tato přednáška pochází z informačního systému Masarykovy univerzity v Brně, kde byla zveřejněna jako studijní materiál pro studenty předmětu Fyziologie výživy. Autorem přednášky je Mgr. Lucie

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 v krmivech. 2 Princip

Více

NERO. ZPOŤ SE! MÁKNI! DOBIJ SE!

NERO. ZPOŤ SE! MÁKNI! DOBIJ SE! Pot je dobrý. Pot je společníkem dříčů, pro které není první krůpěj důvodem přestat, ale důkazem, že jsme ze sebe něco vydali a blahodárným povzbuzením. Povzbuzením, jenž se stalo tělesnou rozkoší, která

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení maduramicinu a semduramicinu v krmivech a premixech.

Více

Vitaminy. lidský organismus si je většinou v vytvořit. Hlavní funkce vitaminů: Prekurzory biokatalyzátor hormonů kových. Hypovitaminóza Avitaminóza

Vitaminy. lidský organismus si je většinou v vytvořit. Hlavní funkce vitaminů: Prekurzory biokatalyzátor hormonů kových. Hypovitaminóza Avitaminóza Vitaminy Vitaminy lidský organismus si je většinou v nedovede sám s vytvořit musí být přijp ijímány stravou Hlavní funkce vitaminů: Prekurzory biokatalyzátor torů - součásti sti koenzymů, hormonů Antioxidační

Více

Metody separace. přírodních látek

Metody separace. přírodních látek Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897

Více

Úvod k biochemickému praktiku. Pavel Jirásek

Úvod k biochemickému praktiku. Pavel Jirásek Úvod k biochemickému praktiku Pavel Jirásek Úvodní informace 4 praktika B1 B2 B3 B4 4 týdny 8 pracovních stolů rozdělení kruhu do 8 pracovních skupin (v každé 2-3 studenti) Co s sebou na praktika plášť

Více

ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN

ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 220 443 185; jana.hajslova@vscht.cz LABORATOŘ Z ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Více

Separační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip

Separační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (Liquid chromatography, zkratka LC) je typ separační metody, založené na rozdílné distribuci dělených látek ve směsi mezi dvě různé nemísitelné

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny

Více

Superkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce

Superkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce Superkritická fluidní extrakce (zkráceně SFE, z angl. Supercritical Fluid Extraction) = extrakce, kde extrakčním činidlem je tekutina v superkritickém stavu, tzv. superkritická (nadkritická) tekutina (zkráceně

Více

Autor: Mgr. Lucie Baliharová. Téma: Vitamíny a minerální látky

Autor: Mgr. Lucie Baliharová. Téma: Vitamíny a minerální látky Název školy: Základní škola Dukelských bojovníků a mateřská škola, Dubenec Autor: Mgr. Lucie Baliharová Název: VY_32_INOVACE_20/09_Zdravý životní styl Téma: Vitamíny a minerální látky Číslo projektu: CZ.1.07/1.4.00/21.1355

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 F. STANOVENÍ DICLAZURILU 2,6-dichlor-alfa-(4-chlorofenyl)-4-(4,5-dihydro-3,5-dioxo-1,2,4-triazin-2-(3-H)yl)benzenacetonitril 1. Účel a rozsah Tato metoda

Více

Stanovení vitaminu C v zelenině po tepelné úpravě. Bc. Zuzana Martinková

Stanovení vitaminu C v zelenině po tepelné úpravě. Bc. Zuzana Martinková Stanovení vitaminu C v zelenině po tepelné úpravě Bc. Zuzana Martinková Diplomová práce 2010 ABSTRAKT V diplomové práci je charakterizován vitamin C a kyselina askorbová, jeho vlastnosti, reaktivita,

Více

COULOMETRICKÉ STANOVENÍ ASKORBOVÉ KYSELINY V POTRAVINÁCH

COULOMETRICKÉ STANOVENÍ ASKORBOVÉ KYSELINY V POTRAVINÁCH Úvod Úkol COULOMETRICKÉ STANOVENÍ ASKORBOVÉ KYSELINY V POTRAVINÁCH Princip L-askorbová kyselina neboli vitamín C je látkou nezbytnou pro život a zdraví člověka. Je důležitá pro metabolismus aminokyselin

Více

Vliv kulinární úpravy potravin na jejich nutriční hodnotu

Vliv kulinární úpravy potravin na jejich nutriční hodnotu Vliv kulinární úpravy potravin na jejich nutriční hodnotu rychle se kazící potraviny, zejména živočišného původu (maso, mléko a výrobky z nich, různé lahůdkářské a cukrářské výrobky a další), konzumovány

Více

Za závažnou dehydrataci se považuje úbytek tekutin kolem 6%. Dehydratace se dá rozdělit na:

Za závažnou dehydrataci se považuje úbytek tekutin kolem 6%. Dehydratace se dá rozdělit na: Pitný režim Lidské tělo obsahuje 50-65% vody, samotné svaly obsahují až 70%. Už jen tento fakt snad dostatečně vypovídá o důležitosti vody v těle. Obyčejný pracující a nesportující člověk by měl přijmout

Více

Principy chromatografie v analýze potravin

Principy chromatografie v analýze potravin Principy chromatografie v analýze potravin živočišného původu p Ivana Borkovcová Ústav hygieny a technologie mléka FVHE VFU Brno, borkovcovai@vfu.cz Úvod, základní pojmy chromatografické systémy dělení

Více

Úvod do koroze. (kapitola, která bude společná všem korozním laboratorním pracím a kterou studenti musí znát bez ohledu na to, jakou práci dělají)

Úvod do koroze. (kapitola, která bude společná všem korozním laboratorním pracím a kterou studenti musí znát bez ohledu na to, jakou práci dělají) Úvod do koroze (kapitola, která bude společná všem korozním laboratorním pracím a kterou studenti musí znát bez ohledu na to, jakou práci dělají) Koroze je proces degradace kovu nebo slitiny kovů působením

Více

V organismu se bílkoviny nedají nahradit žádnými jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy.

V organismu se bílkoviny nedají nahradit žádnými jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy. BÍLKOVINY Bílkoviny jsou biomakromolekulární látky, které se skládají z velkého počtu aminokyselinových zbytků. Vytvářejí látkový základ života všech organismů. V tkáních vyšších organismů a člověka je

Více

Návod k laboratornímu cvičení. Vitamíny

Návod k laboratornímu cvičení. Vitamíny Úkol č. 1: Přítomnost vitaminu C v ovoci a zelenině Návod k laboratornímu cvičení Vitamíny Pomůcky: třecí miska s tloučkem, filtrační kruh, nálevka, filtrační papír, zkumavky, stojan na zkumavky Chemikálie:

Více

Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory

Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory Titrace je spolehlivý a celkem nenáročný postup, jak zjistit koncentraci analytu, její

Více

Úvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová

Úvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová Úvod k biochemickému mu praktiku Vladimíra Kvasnicová organizace praktik pravidla bezpečné práce v laboratoři laboratorní vybavení práce s automatickou pipetou návody: viz. aplikace Výuka automatická pipeta

Více

Chelatometrie. Stanovení tvrdosti vody

Chelatometrie. Stanovení tvrdosti vody Chelatometrie Stanovení tvrdosti vody CHELATOMETRIE Cheláty (vnitřně komplexní sloučeniny; řecky chelé = klepeto) jsou komplexní sloučeniny, kde centrální ion je členem jednoho nebo více vznikajících kruhů.

Více

Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC)

Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) V Brně dne 20. 11. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Hydroxymethylfurfural

Více

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7.1.2 Detektor diodového pole Výsledky jsou posuzovány podle následujících kritérií: a) při vlnové délce maximální absorpce vzorku i standardu musí být

Více

Pracovní listy pro žáky

Pracovní listy pro žáky Pracovní listy pro žáky : Ušlech lý pan Beketov Kovy a potraviny Úkol 1: S pomocí nápovědy odhadněte správný kov, který je v dané potravině obsažen. Nápověda: MANGAN (Mn), ŽELEZO (Fe), CHROM (Cr), VÁPNÍK

Více

Důvody pro stanovení vody v potravinách

Důvody pro stanovení vody v potravinách Voda Důvody pro stanovení vody v potravinách vliv vody na údržnost a funkční vlastnosti potravin ekonomická hlediska vyjádření obsahu jiných složek potravin v sušině Obsah vody v potravinách a potravinových

Více

CUKROVKA /diabetes mellitus/

CUKROVKA /diabetes mellitus/ CUKROVKA /diabetes mellitus/ CUKROVKA /diabetes mellitus/ Řadíme ji mezi neinfekční chronická onemocnění Na jejím vzniku se podílí nezdravý způsob života Významnou úlohu sehrává dědičnost Významným rizikovým

Více

Inhibitory koroze kovů

Inhibitory koroze kovů Inhibitory koroze kovů Úvod Korozní rychlost kovových materiálů lze ovlivnit úpravou prostředí, ve kterém korozní děj probíhá. Mezi tyto úpravy patří i použití inhibitorů koroze kovů. Inhibitor je látka,

Více

Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních metod v rámci analytické chemie Význam chromatografie a

Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních metod v rámci analytické chemie Význam chromatografie a Úvod do separačních metod pro analýzu léčiv Příprava předmětu byla podpořena projektem OPP č. CZ..7/3..00/3353 Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních

Více

Laboratorní práce č. 8: Elektrochemické metody stanovení korozní rychlosti

Laboratorní práce č. 8: Elektrochemické metody stanovení korozní rychlosti Laboratorní práce č. 8: Elektrochemické metody stanovení korozní rychlosti Cíl práce: Cílem laboratorní úlohy Elektrochemické metody stanovení korozní rychlosti je stanovení korozní rychlosti oceli v prostředí

Více

Kloubní výživa Ecce Vita s hydrolizovaným Kolagenem

Kloubní výživa Ecce Vita s hydrolizovaným Kolagenem Kloubní výživa Ecce Vita s hydrolizovaným Kolagenem Tento produkt byl vyvinut ve spolupráci Mudr. Davida Freje, Ing. Ivety Jecmik Skuherské a odborníků z Japonska. Funkční a dobře vstřebatelná kombinace

Více

Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma fázemi První ucelená teorie respektující uvedenou skutečnost byla

Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma fázemi První ucelená teorie respektující uvedenou skutečnost byla Teorie chromatografie - III Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 4.3.3 Teorie dynamická Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma

Více

Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací

Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací Princip metody U acidobazických titrací se využívají dva druhy indikace bodu ekvivalence - vizuální a instrumentální. K vizuální indikaci bodu

Více

- nejdůležitější zdroj E biologická oxidace (= štěpení cukrů, mastných kyselin a aminokyselin za spotřebování kyslíku)

- nejdůležitější zdroj E biologická oxidace (= štěpení cukrů, mastných kyselin a aminokyselin za spotřebování kyslíku) / přeměna látek spočívá v těchto dějích: 1. z jednoduchých látek - látky tělu vlastní vznik stavebních součástí buněk a tkání 2. vytváření látek biologického významu hormony, enzymy, krevní barvivo. 3.

Více

Úloha č. 9 Stanovení hydroxidu a uhličitanu vedle sebe dle Winklera

Úloha č. 9 Stanovení hydroxidu a uhličitanu vedle sebe dle Winklera Úloha č. 9 Stanovení hydroxidu a uhličitanu vedle sebe dle Winklera Princip Jde o klasickou metodu kvantitativní chemické analýzy. Uhličitan vedle hydroxidu se stanoví ve dvou alikvotních podílech zásobního

Více

EU peníze středním školám

EU peníze středním školám EU peníze středním školám Název projektu Registrační číslo projektu Název aktivity Název vzdělávacího materiálu Číslo vzdělávacího materiálu Jméno autora Název školy Moderní škola CZ.1.07/1.5.00/34.0526

Více

Gymnázium Jiřího Ortena, Kutná Hora

Gymnázium Jiřího Ortena, Kutná Hora Předmět: Náplň: Třída: Počet hodin: Pomůcky: Chemie (CHE) Obecná chemie, organická chemie, biochemie, chemické výpočty Kvarta 2 hodiny týdně + 1x za 14 dní 1 hod laboratorní práce Školní tabule, interaktivní

Více

SKLADOVÁNÍ OVOCE A ZELENINY. Zdroj: VŠCHT Praha, Ústav konzervace potravin a technologie masa

SKLADOVÁNÍ OVOCE A ZELENINY. Zdroj: VŠCHT Praha, Ústav konzervace potravin a technologie masa SKLADOVÁNÍ OVOCE A ZELENINY Zdroj: VŠCHT Praha, Ústav konzervace potravin a technologie masa ČERSTVÉ OVOCE A ZELENINA ŽIVÝ DÝCHAJÍCÍ MATERIÁL SPOTŘEBA KYSLÍKU A ZÁSOBNÍCH LÁTEK UVOLŇOVÁNÍ CO 2, TEPLA,

Více

Renaissance Triple Set. Formula 3 KOMPLEX S ANTIOXIDANTY PRODLUŽTE SI MLÁDÍ!

Renaissance Triple Set. Formula 3 KOMPLEX S ANTIOXIDANTY PRODLUŽTE SI MLÁDÍ! Renaissance Triple Set. Formula 3 KOMPLEX S ANTIOXIDANTY PRODLUŽTE SI MLÁDÍ! CO JSOU VOLNÉ RADIKÁLY? VOLNÉ RADIKÁLY jsou reaktivní formy kyslíku, obvykle toxického charakteru. PROČ POVAŽUJEME VOLNÉ RADIKÁLY

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu, narasinu, nikarbazinu, robenidinu,

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie HPLC High Performance Liquid Chromatography Vysokoúčinná...X... Vysoceúčinná kapalinová chromatografie RRLC Rapid Resolution Liquid Chromatography Rychle rozlišovací

Více

Teorie chromatografie - I

Teorie chromatografie - I Teorie chromatografie - I Veronika R. Meyer Practical High-Performance Liquid Chromatography, Wiley, 2010 http://onlinelibrary.wiley.com/book/10.1002/9780470688427 Příprava předmětu byla podpořena projektem

Více

Gymnázium Jiřího Ortena, Kutná Hora

Gymnázium Jiřího Ortena, Kutná Hora Předmět: Náplň: Třída: Počet hodin: Pomůcky: Chemie (CHE) Obecná chemie, organická chemie, biochemie, chemické výpočty Kvarta 2 hodiny týdně + 1x za 14 dní 1 hod laboratorní práce Školní tabule, interaktivní

Více

autoři a obrázky: Mgr. Hana a Radovan Sloupovi

autoři a obrázky: Mgr. Hana a Radovan Sloupovi VITAMÍNY autoři a obrázky: Mgr. Hana a Radovan Sloupovi 1. Nejznámějším vitamínem je určitě, kyselina L askorbová. Porovnej její strukturu s glukózou (glukofuranozou). Čím se obě struktury liší a v čem

Více

Příčina Smrtí ve Světě

Příčina Smrtí ve Světě Příčina Smrtí ve Světě Sebevrařda MVA Vrařda Játra Venkovní Dýchací Mrtvice Infekce Zažívání Kardiovaskulární Rakovi na Data: World Health Organization PROČ SE O TO ZAJÍMAT? DNES SE TO TÝKÁ 5TI VĚCÍ Srdce

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu,

Více

Nutria. Unikátní směs výtažků z ovoce a zeleniny doplněných o SelenoExcel a další nezbytné látky.

Nutria. Unikátní směs výtažků z ovoce a zeleniny doplněných o SelenoExcel a další nezbytné látky. Nutria Unikátní směs výtažků z ovoce a zeleniny doplněných o SelenoExcel a další nezbytné látky. Název produktu: Nutria Složení: Využití jako prevence: Využití jako podpora léčby: Definice působení v organizmu:

Více

Odměrná analýza, volumetrie

Odměrná analýza, volumetrie Odměrná analýza, volumetrie metoda založená na měření objemu metoda absolutní: stanovení analytu ze změřeného objemu roztoku činidla o přesně známé koncentraci, který je zapotřebí k úplné a stechiometricky

Více

Abiotický stres - sucho

Abiotický stres - sucho FYZIOLOGIE STRESU Typy stresů Abiotický (vliv vnějších podmínek) sucho, zamokření, zasolení půd, kontaminace prostředí toxickými látkami, chlad, mráz, vysoké teploty... Biotický (způsobený jiným druhem

Více

ÚPRAVA VODY V ENERGETICE. Ing. Jiří Tomčala

ÚPRAVA VODY V ENERGETICE. Ing. Jiří Tomčala ÚPRAVA VODY V ENERGETICE Ing. Jiří Tomčala Úvod Voda je v elektrárnách po palivu nejdůležitější surovinou Její množství v provozních systémech elektráren je mnohonásobně větší než množství spotřebovaného

Více

Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce

Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce 1. Máte pufr připravený smísením 150 ml CH3COOH o c = 0,2 mol/l a 100 ml CH3COONa o c = 0,25 mol/l. Jaké bude ph pufru, pokud přidáme 10 ml

Více

BÍLKOVINY. V organismu se nedají nahradit jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy.

BÍLKOVINY. V organismu se nedají nahradit jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy. BÍLKOVINY o makromolekulární látky, z velkého počtu AMK zbytků o základ všech organismů o rostliny je vytvářejí z anorganických sloučenin (dusičnanů) o živočichové je musejí přijímat v potravě, v trávicím

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Teorie HPLC Praktické

Více

DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018

DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018 DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii Izolační a separační metody, 2018 Detektory v kapalinové chromatografii Typ detektoru Zkratka Měřená veličina Refraktometrický detektor RID index lomu Spektrofotometrický

Více

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA ČAJŮ Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení antioxidační kapacity vybraných

Více

Na sodík Ca vápník K draslík P fosfor

Na sodík Ca vápník K draslík P fosfor Složení potravy Bílkoviny 15% denní dávky = 1-1,5 g/24 hod. Význam - obnova a tvorba vlastních bílkovin - obranyschopnost organizmu Jsou nenahraditelné nelze je vytvořit z cukrů ani tuků. Plnohodnotné

Více

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ RIGORÓZNÍ PRÁCE

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ RIGORÓZNÍ PRÁCE UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMACEUTICKÉ CHEMIE A KONTROLY LÉČIV RIGORÓZNÍ PRÁCE HPLC stanovení obsahu amlodipinu a perindoprilu v kombinovaném léčivém přípravku

Více

mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární fázi.

mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární fázi. separační metody Chromatografické metody Distribuce látky mezi dvě fáze: stacionární fáze nepohyblivá - ukotvený materiál mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární

Více

Úvod do biochemie. Vypracoval: RNDr. Milan Zimpl, Ph.D.

Úvod do biochemie. Vypracoval: RNDr. Milan Zimpl, Ph.D. Úvod do biochemie Vypracoval: RNDr. Milan Zimpl, Ph.D. TENTO PROJEKT JE SPOLUFINANCOVÁN EVROPSKÝM SOCIÁLNÍM FONDEM A STÁTNÍM ROZPOČTEM ČESKÉ REPUBLIKY Co je to biochemie? Biochemie je chemií živých soustav.

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU CELKOVÉHO A VOLNÉHO TRYPTOFANU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

ZHODNOCENÍ STÁVAJÍCÍHO JÍDELNÍČKU

ZHODNOCENÍ STÁVAJÍCÍHO JÍDELNÍČKU ZHODNOCENÍ STÁVAJÍCÍHO JÍDELNÍČKU Příjem - Potraviny jednotlivě 10.4.2011-16.4.2011 Datum Název Množství Energetický Sacharidy Jednoduché Vláknina (g) Bílkoviny Živočišné Rostlinné Tuky Živočišné Rostlinné

Více

VÝŽIVA. Živiny: bílkoviny tuky cukry esenciální látky: vitamíny, minerální soli, některé MK a AMK voda nestravitelné látky (hrubá vláknina)

VÝŽIVA. Živiny: bílkoviny tuky cukry esenciální látky: vitamíny, minerální soli, některé MK a AMK voda nestravitelné látky (hrubá vláknina) základní význam pro zdravý vývoj člověka krytí energetického výdeje stavební materiál pro naše tělo a neustálá obměna veškeré tělní hmoty = > potrava energetická hodnota: množství E, které potrava tělu

Více

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Pavla Balínová http://vyuka.lf3.cuni.cz/ Důležité informace Kroužkový asistent: RNDr. Pavla Balínová e-mailová adresa: pavla.balinova@lf3.cuni.cz místnost: 410 studijní

Více

Praktické ukázky analytických metod ve vinařství

Praktické ukázky analytických metod ve vinařství Praktické ukázky analytických metod ve vinařství Ing. Mojmír Baroň Stanovení v moštu Stanovení ph a veškerých titrovatelných kyselin Stanovení ph Princip: Hodnota ph je záporný dekadický logaritmus aktivity

Více

BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ

BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ BIOMEMRÁNA BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA - všechny buňky na povrchu plazmatickou membránu - Prokaryontní buňky (viry, bakterie, sinice) - Eukaryontní buňky vnitřní členění do soustavy membrán KOMPARTMENTŮ - za

Více

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA RŮZNÝCH DRUHŮ MASA (drůbeží, rybí) Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení

Více