UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA BIOLOGICKÝCH A LÉKAŘSKÝCH VĚD

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA BIOLOGICKÝCH A LÉKAŘSKÝCH VĚD"

Transkript

1 UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA BIOLOGICKÝCH A LÉKAŘSKÝCH VĚD D I P L O M O V Á P R Á C E SLEDOVÁNÍ KINETIKY INHIBITORŮ ACETYLCHOLINESTERASY IN VITRO Vedoucí diplomové práce: Doc. MUDr. Josef Herink, DrSc. Konzultant: PharmDr. Vendula Šepsová HRADEC KRÁLOVÉ, 2014 Kateřina Janská

2 Poděkování Velmi ráda bych poděkovala konzultantce mé práce PharmDr. Vendule Šepsové za odborné vedení a pomoc jak v laboratoři, tak při realizaci této diplomové práce. Mé díky patří také vedoucímu mojí práce Doc. MUDr. Josefu Herinkovi, DrSc. Ráda bych také poděkovala zaměstnancům katedry toxikologie Fakulty vojenského zdravotnictví Univerzity obrany v Brně, že mi umožnili realizovat tuto práci a dále Petru Matuškovi a všem, kteří přispěli k dokončení této práce. Nakonec bych ráda poděkovala mé rodině, která mi umožnila studium a podporovala mě. 2

3 Prohlašuji, že tato práce je mým původním autorských dílem. Veškerá literatura a další zdroje, z nichž jsem při zpracování čerpala, jsou uvedeny v seznamu použité literatury a v práci jsou řádně citovány. Práce nebyla použita k získání jiného nebo stejného titulu. V Hradci Králové Podpis: 3

4 1. Obsah 1. Obsah Úvod a zadání práce TEORETICKÁ ČÁST Význam a struktura enzymů Výskyt enzymů Struktura enzymů Vlastnosti enzymů Názvosloví a klasifikace enzymů Uplatnění enzymů v laboratořích Uplatnění enzymů v průmyslu Uplatnění v lékařství Kinetika enzymů Význam měření kinetiky enzymů Kinetika enzymové katalýzy Měření katalytické aktivity Esterasy Dělení cholinesteras Funkce cholinesteras Výskyt cholinesteras Struktura aktivního místa Inhibitory acetylcholinesteras jako součást terapií Terapie Alzheimerovy choroby Terapie mírných kognitivních poruch Demence s Lewyho tělísky Parkinsonova choroba Vaskulární demence Downův syndrom Traumatická poranění mozku Wernickeův- Korsakovův syndrom Delirium

5 Migréna Terapie myasthenia gravis Profylaxe před účinky nervově paralytických látek EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST Cíl práce Příprava základních roztoků Princip a postup měření inhibičního potenciálu inhibitorů Zpracování výsledků VÝSLEDKY Diskuse Závěr Abstrakt Abstract Použité zkratky Seznam tabulek Seznam obrázků Seznam grafů Použitá literatura

6 2. Úvod a zadání práce Acetylcholinesterasa (AChE) je enzym, který patří do rodiny serinových hydrolas. Vyskytuje se především v centrálním nervovém systému, kde hraje klíčovou roli při cholinergní transmisi, na nervosvalových spojeních a v hematopoetickém systému obratlovců. Jeho hlavní fyziologickou funkcí je rozklad neuromediátoru acetylcholinu, čímž ukončuje přenos nervového vzruchu. Pokud AChE neplní svoji fyziologickou funkci, dochází k hromadění a prodlouženému působení acetylcholinu na cholinergních receptorech. Tento stav může být navozen tzv. inhibitory acetylcholinesterasy. Inhibitory lze dělit z hlediska doby trvání vazby na ireverzibilní a reverzibilní. Mezi ireverzibilní inhibitory patří organofosfátové bojové chemické látky (tabun, sarin, soman) nebo látky využívající se k hubení hmyzu, tzv. insekticidy (paraoxon, parathion). Reverzibilní inhibitory se využívají k terapii některých onemocnění například: Alzheimerovy choroby a některých dalších typů demencí, dále k terapii myasthenie gravis či jako součást profylaktické terapie před účinky nervově paralytických látek. Inhibitory lze také dělit na základě mechanismu účinku. Z tohoto hlediska rozeznáváme čtyři typy inhibice, které lze odlišit na základě kinetického měření a porovnáváním kinetických parametrů. Z hlediska kinetiky tedy rozlišujeme inhibici kompetitivní, nekompetitivní, akompetitivní a smíšenou. V terapii Alzheimerovy choroby se uplatňují kompetitivní (galantamin), nekompetitivní (donepezil, rivastigmin) inhibitory AChE a také akompetitivní antagonista NMDA receptoru memantin. 6

7 Zadání práce: 1. Cíl práce 2. Úvod: Význam a struktura enzymů Kinetika enzymů Esterasy Inhibitory acetylcholinesterasy jako součást terapií 3. Metoda 4. Výsledky 5. Diskuze 6. Závěr 7. Literatura 7

8 3. TEORETICKÁ ČÁST 3.1 Význam a struktura enzymů Výskyt enzymů Enzymy jsou makromolekuly přítomné ve všech živých systémech, které urychlují a řídí chemické reakce a bez jejich existence by život, tak jak jej známe, nebyl možný. Kromě enzymů bílkovinné povahy jsou za vysoce aktivní enzymy považovány také molekuly RNA (např. RNA polymeráza nebo replikasa), kterým se dnes říká ribozymy. Enzymy jsou druhově specifické, to znamená, že každý biologický druh má své vlastní, od jiných druhů odlišné enzymy. Kromě ovlivňování dějů na molekulární úrovni se enzymy podílí i na formování naší planety. Dokumentují to tyto údaje: enzymovou katalysou bylo za dobu existence naší planety zpracováno množství hmoty přesahující hmotnost zeměkoule ( t). Důsledkem této činnosti jsou např. obrovské vápencové útvary, zásoby uhlí, ropy a zemního plynu a okolo 400 bilionů tun kyslíku uvolněného rostlinami do zemské atmosféry. (34) Enzymy mají uplatnění v celé škále oborů lidské činnosti. Neodmyslitelný význam zaujímají především ve vědě a výzkumu. (34) Struktura enzymů Po chemické stránce patří enzymy mezi jednoduché nebo složené bílkoviny. Enzymy ve formě jednoduchých bílkovin mají pouze část bílkovinnou, většina enzymů však patří mezi bílkoviny složené. Ty se skládají z bílkovinné části a části nebílkovinné, obecně označované jako kofaktor. Kofaktor se může k bílkovinné části připojit ve formě prostetické skupiny, čímž ho lze považovat za stabilní součást molekuly (např. riboflavinové struktury u flavinových transhydrogenas či pyridoxalfosfát u aminotransferas). Druhá varianta spočívá v tom, že se nebílkovinná část váže na enzym reversibilně. V takovém případě označujeme bílkovinnou část apoenzym a nebílkovinnou část koenzym. 8

9 Příkladem koenzymů jsou pyridinové (nikotinamidové) dinukleotidy. Komplex apoenzymu a koenzymu je označován holoenzym. (34, 14) Podobně jako u bílkovin, se také u enzymů vyskytuje polymorfismus, což znamená, že u jedinců jednoho biologického druhu se mohou vyskytovat dva či více enzymů, které mají stejnou katalytickou funkci, ale odlišnou strukturu. Na základě jejich různé struktury je lze oddělit metodami používanými k separaci bílkovin jako je chromatografie či elektroforéza. Tyto mnohočetné formy enzymů se označují isoenzymy. (34, 14) Vlastnosti enzymů Enzymy urychlují průběh reakce, aniž by při tom ovlivňovaly složení rovnovážné směsi. Rychlost reakce lze zvyšovat oběma směry. Směr průběhu reakce je dán energetickými a koncentračními poměry v reagujícím systému nikoliv katalyzátorem (enzymem). V lidském organismu probíhá každou vteřinu za přítomnosti enzymů (biokatalyzátorů) tisíce chemických reakcí. Obvykle jsou reakce uspořádány do vysoce organizovaných celků. Enzymy řídí rychlost reakcí, které probíhají cíleně na základě geneticky fixovaného plánu. Je nutné, aby umožnily specifický průběh těchto reakcí, bez vzniku vedlejších produktů a zajistily plynulou návaznost reakcí. Jejich aktivita musí být snadno regulovatelná dle neustále se měnících potřeb organismu. Enzymy fungují na stejném principu jako katalyzátory používané v chemii, ale jsou bezpochyby dokonalejší a předčí umělé katalyzátory v mnoha ohledech. Mezi přednosti enzymů patří vyšší účinnost (ve smyslu vyšší reakční rychlosti reakce), značná specifita enzymů (reakční a účinková specifita, týkající se typu katalyzované reakce i substrátová specifita, zaměřená na strukturu přeměňovaných substrátů). Důležitým rysem enzymů je jejich schopnost katalyzovat reakce za mírných podmínek (teplota C, tlak 0,1 MPa, ph kolem 7) a snadná regulace účinku enzymů, dokonce na několika úrovních. Nezanedbatelnou předností je jejich nulová toxicita, protože umělé katalyzátory jsou většinou toxické. Ale enzymy mají i své nevýhody. Jejich složité struktury 9

10 jsou velmi citlivé na různé vlivy a také se rychle opotřebovávají. Proto jsou v přírodě neustále odbourávány a znovu syntetizovány. (34, 35) Názvosloví a klasifikace enzymů Názvosloví enzymů Názvosloví enzymů je založeno na dvou kategoriích názvů: a) Systematický název. Přesně popisuje průběh katalyzové reakce: označení substrátu/ů + reakce + koncovka asa př.: L-alanin: 2 - oxoglutarát + aminotransfer + asa b) Triviální název (doporučený). Zachycuje obvykle označení substrátu a typu reakce, je kratší. Př.: alaninaminotransferasa. Některé triviální názvy přežívají z biologického bádání v minulosti (pepsin). (19) Klasifikace enzymů Mezinárodní biochemická unie (IUB) zavedla klasifikaci enzymů, kde každému prozkoumanému enzymu náleží čtyřmístný číselný kód. Čísla označují: třídu podtřídu podpodtřídu pořadové číslo v oficiálním seznamu (např. EC (= Enzym Commission) alkalická fosfatasa). Enzymy katalyzují šest základních reakcí, podle nichž zavedla IUB jejich rozčlenění do šesti tříd (Tabulka 1). Třídy se dle dalších kritérií dělí do podtříd a podpodtříd. (19) Tabulka 1: Klasifikace enzymů dle IUPAC (19) Třída Charakterizace Příklady 1. Oxidoreduktasy Katalýza redoxních reakcí Oxidoreduktasa, oxidasa, dehydrogenasa 2. Transferasy Katalýza přenosu skupin atomů z donoru na Aminotransferasa, transglykosylasa, 10

11 akceptor hexokinasa 3. Hydrolasy Katalýza hydrolytických reakcí, štěpení substrátu za vstupu vody Peptidasy, lipasy, esterasy 4. Lyasy Katalýza nehydrolytického rozkladu substrátů na dvě sloučeniny Aldolasa, dekarboxylasa, deaminasa 5. Isomerasy Katalýza izomeračních reakcí Cis-trans izomerasy, epimerasy, racemasy 6. Ligasy Katalýza syntézy různých sloučenin ze dvou molekul za současného rozkladu třetí látky jako zdroje energie Ligasy alternativně: synthetasy Uplatnění enzymů v laboratořích V analytické chemii se enzymy využívají jako vysoce specifická činidla pro stanovení nejrůznějších látek, hlavně ve složitých směsích. Důvodem je větší citlivost a specifita enzymových metod. Uplatňují se především v klinické biochemii a analýze potravin. (32) Uplatnění enzymů v průmyslu Podmínkou průmyslového uplatnění enzymů je možnost jejich výroby ve velkém množství a zároveň za ekonomicky přijatelnou cenu. Enzymy se připravují z rostlinných zdrojů (proteasy: papain, bromelain a ficin) nebo se izolují z živočišných materiálů (chymosin, trypsin, chymotrypsin, pepsin, pankreatické amylasy, lipasy atd.). 11

12 Nejvhodnějším zdrojem enzymů jsou mikroorganismy. Jejich buňky poskytují pestrou škálu enzymů a lze je vyrábět ve velkém množství, díky rychlému růstu a množení mikrobů. (35) Uplatňují se v kvasném průmyslu při výrobě etanolu, piva, vína, mléčných výrobků, některých antibiotik či steroidů apod. Mikrobiální metody mají také široké uplatnění při čištění odpadních vod. (32) Uplatnění v lékařství Pro správnou funkci organismu a zachování homeostázy vnitřního prostředí je nezbytné udržovat podmínky vnitřního prostředí v relativně úzkém rozmezí. Zdravý organismus vyžaduje vyvážený průběh stovek enzymově katalyzovaných reakcí současně, ještě k tomu danou rychlostí. Pokud tomu tak není, dochází k narušení homeostázy, což může vážně poškodit organismus. Lékař může cíleně využít určitých faktorů, ovlivňujících rychlost enzymově katalyzovaných reakcí (např. snížení tělesné teploty vede k poklesu aktivity všech enzymů a tím k snížení metabolických nároků během operací na otevřeném srdci.).(21) 3.2 Kinetika enzymů Význam měření kinetiky enzymů Měření kinetiky enzymů slouží ke stanovení katalytické účinnosti enzymu, zkoumání rychlosti chemických reakcí a dalších záležitostí s tím spojených, včetně určování optimálních podmínek pro účinnost enzymu. S využitím inhibitorů enzymů lze zjistit informace o specifitě enzymů, struktuře aktivního místa, mechanismu účinku apod. Inhibitory jsou důležitou diagnostickou metodou v enzymologii. Rychlost enzymově katalyzovaných reakcí je ovlivňována různými faktory, přičemž mezi hlavní patří koncentrace enzymu a substrátu, teplota, ph a přítomnost inhibitorů. Tyto faktory mají klinický význam. 12

13 3.2.2 Kinetika enzymové katalýzy Enzymy patří mezi pravé katalyzátory, katalyzují reakce, ale samy se při tom nemění. Při reakci dochází k tvorbě přechodných stavů enzym-substrát, které jsou na energeticky nižších (výhodnějších) hladinách, než přechodné stavy u reakcí bez účasti enzymů. Tím, že enzymy snižují aktivační energii, přispívají k urychlení průběhu reakce. Za katalytický účinek enzymu je zodpovědné katalytické místo, pro které existují dva modely. Jedním z nich je model dle Emila Fischera, který znázorňuje interakci mezi substrátem a enzymem jako analogii zámku a klíče. Druhý, obecnější, je Koshlandův model indukovaného přizpůsobení, který předpokládá, že substrát indukuje změnu konformace enzymu, čímž dojde ke změně prostorové orientace v katalytickém místě enzymu, které tak bude vhodné pro vazbu substrátu a následnou enzymovou katalýzu. Ačkoliv enzymy ovlivňují rychlost reakcí, nemají vliv na jejich rovnovážné konstanty ani na celkové změny volné energie. (21) Faktory ovlivňující rychlost enzymové katalýzy 1) Teplota Stoupající teplota zvyšuje rychlost enzymově katalyzované reakce, ale pouze v určitém rozsahu teplot (Obrázek 1). Enzymy mají své teplotní optimum, jehož hodnoty se rovnají, či jsou o trošku vyšší, než je teplota buněk, v nichž se vyskytují. 13

14 Obrázek 1: Graf závislosti enzymové aktivity na teplotě, ilustrační graf 2) Hodnota ph Dalším faktorem ovlivňujícím rychlost enzymové katalýzy je hodnota ph. Optimální je většinou rozmezí ph 5 9, ale existují i enzymy, jejichž ph-optimum je výrazně posunuté, například pepsin vyskytující se v žaludku, kde je ph blízké 1. 3) Koncentrace enzymu a substrátu Skoro ve všech fyziologicky významných případech je látková koncentrace enzymu o několik řádů nižší než látková koncentrace jeho substrátu. Následné zvýšení či snížení koncentrace produktu doprovází adekvátní zvýšení či snížení rychlosti reakce. Vliv změny koncentrace substrátu na rychlost enzymové reakce je možný v případě, že je v okolí dostatek volného enzymu, který je schopný s ním reagovat. Je-li však enzym nasycený substrátem nedochází k dalšímu zvýšení rychlosti reakce. Jedná se o tzv. saturační kinetiku. 14

15 Závislost aktivity mnoha enzymů na koncentraci substrátu lze vyjádřit graficky (Obrázek 3) a rovnicí Michaelise-Mentenové: Obrázek 2: Graf dle Michaelise-Mentenové, závislost rychlosti enzymové reakce na koncentraci substrátu, ilustrační graf Michaelisova konstanta K M je koncentrace substrátu, při níž je rychlost reakce rovna polovině maximální rychlosti, (polovina enzymu je přítomna jako enzym-substrát (EnzS)). (21) Hodnota Michaelisovy konstanty se může stanovovat graficky i výpočtem, má rozměr molární koncentrace. Pro usnadnění vyhodnocování grafů lze použít dvojitě reciproký graf dle Lineweavera-Burka (34), kde se na osu y vynáší převrácené hodnoty počáteční rychlosti reakce a na osu x převrácené hodnoty koncentrace substrátu. V tomto grafu nám udává průnik na ose y hodnotu a průnik na ose x hodnotu (Obrázek 4). 15

16 Obrázek 3: Graf dle Lineweavera-Burka, dvojitě reciproké zobrazení, ilustrační graf 4) Přítomnost aktivátorů a inhibitorů Katalytickou účinnost enzymů ovlivňují také aktivátory, látky zvyšující aktivitu enzymu, a inhibitory, látky, které ji naopak snižují. Aktivátory a inhibitory můžeme dělit na přirozené (složky buněk, např. koenzymy, metabolity, sloužící jako nástroje k regulaci metabolismu), a nepřirozené (modelové látky a některá léčiva). Řada enzymů potřebuje ke své aktivitě přítomnost aktivátorů. Tyto aktivátory se reverzibilně váží na molekulu enzymu (např. ionty kovů, organické látky, případně některé anionty). Rychlost enzymových reakcí snižují inhibitory (př. různé ionty, organické i anorganické látky nízkomolekulární, ale i vysokomolekulární povahy). Inhibice enzymové aktivity má velký význam v regulaci procesů v živých buňkách. Inhibitory jsou důležitou diagnostickou metodou v enzymologii, která poskytuje informace o specifitě enzymů, struktuře aktivního místa, mechanismu účinku atp. Mají široké uplatnění v medicíně, v hygieně v boji proti infekcím (sulfonamidy), nádorovém 16

17 bujení (cytostatika), dále při transplantacích jako immunosupresiva, ale také v zemědělství či zahradnictví (herbicidy, insekticidy). Inhibitory můžeme dělit podle původu (přirozené a umělé), podle specifity účinku (specifické a nespecifické). Nejužitečnější je však dělení podle mechanismu účinku. Z tohoto hlediska rozeznáváme již zmíněné čtyři typy inhibice. Jednotlivé typy lze dobře odlišit pomocí kinetického měření a porovnáváním kinetických parametrů jako je Michaelisova konstanta (K M ) a mezní rychlost reakce (V), bez přítomnosti inhibitoru (K M a V) a s jeho účastí (K M a V ). Hodnoty K M a V jsou zdánlivé veličiny, které jsou funkcí koncentrace inhibitoru a jeho afinity k enzymu. (34) Typy inhibitorů a mechanismus jejich účinku Typy inhibice, které lze kineticky odlišit: a) Kompetitivní (Obrázek 4) inhibitor neovlivňuje meznou rychlost (V=V ), ale zvyšuje Michaelisovu konstantu (K M >K M ). Mezi kompetitivní inhibitory patří látky strukturně podobné substrátu, ať už celé nebo jen zčásti. Enzym neidentifikuje, že se nejedná o substrát a vytvoří vazbu s inhibitorem, čímž vznikne inaktivní komplex. Ten se dále nepřemění na produkt a tím blokuje enzym. Tvorba komplexu enzym-inhibitor je vratná, pokud je zároveň přítomný substrát. Substrát a inhibitor soutěží o aktivní místo, míra inhibice je závislá na poměru koncentrací substrátu a inhibitoru a také na poměru jejich afinit k enzymu. Pokud bude koncentrace substrátu dostatečně vysoká, může dojít k potlačení inhibice. V živých systémech se využívají jako léčiva strukturní analoga metabolicky významných látek, označujeme je antimetabolity. Ty soutěží o aktivní místo s látkami tělu vlastními, čímž ruší jejich účinek. 17

18 Obrázek 4: Grafické znázornění kompetitivní inhibice dle Lineweavera-Burka, vytvořeno v programu Microsoft Excel b) Nekompetitivní (Obrázek 5) inhibitor nevyvolá změnu Michaelisovy konstanty (K M =K M ), ale snižuje meznou rychlost (V<V ). Zde inhibitor působí na základě alosterického efektu, kdy se váže mimo aktivní centrum, jeho vazba na enzym však vyvolává změnu konformace aktivního místa a tím ho inaktivuje. Inhibitor tedy nemá vliv na vazbu substrátu na enzym, ale snižuje rychlost jeho přeměny na produkt. Většina přirozených inhibitorů působí tímto mechanismem a reguluje tak metabolické pochody. 18

19 Obrázek 5: Grafické znázornění akompetitivní inhibice dle Lineweavera-Burka, vytvořeno v programu Microsoft Excel c) Akompetitivní (Obrázek 6) inhibitor snižuje meznou rychlost i Michaelisovu konstantu, ale tak, že se nemění jejich poměr (K M /K M =V /V). Akompetitivní inhibitory se mohou vázat až na komplex enzymsubstrát, protože teprve vazba substrátu na enzym vhodně pozmění jeho konformaci. S volným enzymem nemohou reagovat. Inhibitor vazbou na komplex enzym-substrát potlačuje jeho přeměnu na produkt a enzym. Tyto inhibitory snižují meznou rychlost i Michaelisovu konstantu ve stejné míře, proto zůstává jejich poměr zachován. Akompetitivní inhibice je typická pro dvousubstrátové reakce. 19

20 Obrázek 6: Grafické znázornění akompetitivní inhibice dle Lineweavera-Burka, vytvořeno v programu Microsoft Excel d) Smíšená poměr. inhibitor mění Michaelisovu konstantu, meznou rychlost i jejich Některé enzymy mohou být inhibované složkami reakce, např. produktem. Inhibice produktem může nastat tehdy, probíhá-li enzymatická reakce a dochází k hromadění produktů, které však nejsou využity v následné reakci a dosáhne se rovnovážného stavu. Inhibice produktem je velmi významným nástrojem k regulaci metabolických pochodů, na druhou stranu nedostatkem při využívání enzymů jako průmyslových katalyzátorů, protože brání dosažení vysokých výtěžků. (34) 20

21 3.2.3 Měření katalytické aktivity Vyjádření katalytické aktivity enzymů Dříve se vyjadřovala rychlost přeměny substrátu v mikromolech za 1 minutu (µmol/min), jednotka se označovala U (mezinárodní jednotka). Nyní je však definována nová jednotka nazývaná katal, udává přeměnu 1 molu substrátu za 1 sekundu (mol/s). Mezi těmito jednotkami platí vztah: 1U = 16, kat = 16,67 nkat. V tabulce 2 jsou uvedeny jednotky, které se mají používat k vyjadřování katalytických aktivit enzymů, dle poslední definice IUPAC z roku (34) Tabulka 2: Seznam jednotek a jejich veličin používaných v enzymové kinetice (34) Seznam veličin a jejich jednotek Rychlost přeměny substrátu mol.s -1 (kat) Reakční rychlost mol.l -1.s -1 Koncentrace katalytické aktivity kat.l -1 Specifická katalytická aktivita kat.kg -1 Molární katalytická aktivita kat.mol Metody měření katalytické aktivity Podle principu detekce substrátu nebo produktu můžeme rozdělit metody stanovení katalytické aktivity enzymů na optické (zahrnující spektrofotometrii, fluorimetrii, polarimetrii a luminiscenci), manometrické, elektrochemické (potenciometrické, ampérometrické, polarografické, konduktometrické, a jiné stanovení), dále radiometrické stanovení a ostatní, kam řadíme viskosimetrii, mikrokalorimetrii, titrace, technologické testy atd. V rámci této práce se podrobněji zmíním o fotometrických metodách z důvodu jejich využití při získávání výsledků v této práci. Fotometrické metody jsou nejrozšířenějšími metodami stanovení katalytické aktivity enzymů. Princip těchto metod spočívá v tom, že v určité oblasti koncentrací je změna koncentrace substrátu nebo produktu za jednotku času přímo úměrná změně 21

22 absorbance za stejný časový interval. Lineární závislost platí v oblastech nízkých koncentrací a lze ji popsat Labert-Beerovým zákonem. Změnu koncentrace můžeme pozorovat buď přímo, pokud sledovaný substrát či produkt absorbuje záření ve viditelné nebo ultrafialové části spektra anebo nepřímo, s využitím vhodných chemických reakcí, které způsobí, že výsledný produkt je barevný nebo absorbuje v UV části spektra. Lambert-Beerův zákon definuje vztah mezi absorbancí a stanovovanou koncentrací: A = ɛ λ c d, kde symbol A označuje bezrozměrnou absorbanci, ɛ λ je molární absorpční koeficient (cm 2 mmol -1 ), c je koncentrace (mol l -1 ) a d je tloušťka absorbující vrstvy (cm). Měření absorbance probíhá při vlnové délce, při které sledovaný substrát či produkt pohlcuje záření nejvíce. Tato technika je velmi rozšířená a oblíbená zejména proto, že k měření absorbance lze použít libovolný fotometr. Pokud jsou kladeny větší nároky na přesnost a rychlost stanovení, lze použít dvoupaprskové spektrofotometry, jimiž lze zároveň měřit průběh reakce v pokusné kyvetě a v kyvetě se slepým vzorkem. (34) 3.3 Esterasy Dělení cholinesteras Cholinesterasy patří do proteinové nadrodiny α/β hydrolas, skupiny charakterizované běžnou strukturní homologií a zahrnující cholinesterasy, karboxylesterasy a lipasy. Cholinesterasy jsou enzymy, které patří mezi serinové hydrolasy, přednostně hydrolyzující estery cholinu. Obratlovci jsou známí tím, že se u nich vyskytují dva druhy cholinesteras, acetylcholinesterasa (AChE; EC ) a butyrylcholinesterasa (BChE; EC ). Tyto dvě cholinesterasy se liší substrátovou specifitou. AChE hydrolyzuje rychleji acetylcholin (ACh) než butyrylcholin či propionylcholin, zatímco BChE metabolizuje rychleji butyrylcholin, propionylcholin či benzoylcholin (Obrázek 7). Rozdíl v substrátové specifitě je dán strukturní odlišností uspořádání acylů v aktivním místě, kdy v případě BChE toto uspořádání dovoluje přijetí většího substrátu aktivním místem. (31) 22

23 Obrázek 7: Některé substráty cholinesteras (17) Obrázek 8: Hydrolýza ACh katalyzovaná AChE nebo BChE (17) Funkce cholinesteras AChE hraje rozhodující roli v ukončení působení ACh na synapsích a neuromuskulárních spojeních, tento enzym účinně hydrolyzuje ACh a tím dojde k ukončení nervového impulzu (Obrázek 8). Přesná funkce BChE však dosud nebyla popsána. Existují mnohé náznaky, že BChE hraje roli v metabolismu lipoproteinů, buněčné adhezi a také v etiologii určitých neurodegenerativních onemocněních. (31) Výskyt cholinesteras Výskyt obou enzymů v tkáních a jejich fyziologická funkce se u vyšších organismů liší. AChE se nachází zejména v centrálním nervovém systému, kde hraje klíčovou roli při cholinergní neurotransmisi, na nervosvalových spojeních a v hematopoetickém systému obratlovců. BChE se vyskytuje v ledvinách, krevním séru a játrech. (26) Struktura aktivního místa AChE a BChE sdílejí přibližně 54% shodu aminokyselinové sekvence, avšak liší se ve své specifičnosti vůči různým substrátům a inhibitorům. (28) Jejich krystalické struktury ukázaly, že mají podobnou architekturu. Oba 23

24 enzymy mají aktivní místo tvořené třemi základními uskupeními, tzv. acylačním, kation-π a periferním anionickým (aromatickým) místem, uložené na dně hluboké kavity. Hydrolýza substrátu obou enzymů probíhá přes transacylační krok, který zahrnuje nukleofilní a obecné acidobazické prvky, odehrává se v acylačním místě tvořeném katalytickou triádou aminokyselin. Místo vstupu do aktivního místa je lemováno několika aromatickými residui, přičemž u BChE je kavita lemována aromatickými zbytky šesti aminokyselin, kdežto u AChE jich bylo nalezeno čtrnáct. Kromě toho se liší přítomností fenylalaninových zbytků v acylové kapse AChE (Phe-295, Phe-297), které jsou v BChE nahrazeny přítomností Lys-286 a Val-228, z čehož vyplývá, že acylová kapsa BChE je větší a může pojmout větší substráty, z čehož se odvíjí i již zmíněná substrátová specifita. Při okraji kavity se nachází periferní anionické místo. U AChE jsou v tomto místě klíčovými zbytky Tyr72, Tyr124 a Trp286, kdežto u BChE jsou to Asp70 a Tyr332. Předpokládá se, že vazbou k perifernímu místu mohou některé látky způsobit konformační změny v aktivním místě a tím způsobit inhibici enzymu. (4,17) 3.4 Inhibitory acetylcholinesteras jako součást terapií Inhibitory acetylcholinesteras snižují, až blokují, fyziologickou funkci AChE. Podle mechanismu účinku rozdělujeme inhibitory na kompetitivní, nekompetitivní, akompetitivní a smíšené. Na základě doby trvání vazby dělíme inhibitory na ireverzibilní a reverzibilní. Ireverzibilní AChEI se však v terapii nevyužívají, jsou používané jako insekticidy k hubení hmyzu či jako nervově paralytické látky (bojové plyny: tabun, sarin a soman). V terapii se využívají reverzibilní AChEI a to zejména k léčbě Alzheimerovy choroby (AD), Parkinsonovy choroby (PD), některých dalších typů demencí, k léčbě Myasthenie gravis (MG), ale také jako součást profylaktické terapie před účinky nervově paralytických látek (NPL) Terapie Alzheimerovy choroby Alzheimerova choroba je jednou z nejčastějších příčin demence. Je to neurodegenerativní onemocnění, které se na molekulární úrovni vyznačuje 24

25 hromaděním amyloid beta a tau proteinů v oblasti nervových buněk, dále oxidačním stresem, mitochondriálními odchylkami a neurozánětlivými procesy. (29) Je charakterizována pozvolným vývojem a nástupem deficitů v oblasti poznávání, pozorování, paměti a častou změnou nálad. Nejběžnějším časným symptomem je obtížné zapamatování si nově naučených informací. Přesná příčina AD je stále nejasná, ale bylo předloženo několik hypotéz vycházejících z různých faktorů. Nejčastěji zmiňovanými teoriemi jsou cholinergní hypotéza, amyloidní hypotéza, tau hypotéza či hypotéza isoprenoidních změn. (29) V roce 1976 bylo zjištěno dvěma nezávislými výzkumnými týmy, že AD je spojena s těžkou ztrátou cholinergních markerů v mozkové kůře. (24) Objevy, které následovaly (snížení funkce cholinacetyltransferasy (ChAT) a ztráta cholinergních neuronů, v určitých oblastech mozku pacientů s pokročilou AD) vedly k cholinergní hypotéze vysvětlující příčinu vzniku AD. Tento jev je detekovatelný jak histopatologicky ztrátou neuronů, tak neurochemicky ztrátou enzymových markerů pro syntézu a degradaci acetylcholinu. Výsledný cholinergní deficit v mozku vede ke ztrátě paměti a dalším kognitivním příznakům charakteristickým pro AD. To bylo důvodem pro rozvoj inhibitorů cholinesteras (ChEI), které prokázaly konzistentní, ale skromnou účinnost proti úbytku kognitivních funkcí. (24) Terapie mírných kognitivních poruch V současnosti je zkoumáno, zda včasné zahájení léčby inhibitory ChE může ovlivnit průběh mírných kognitivních poruch (MCI) a oddálit jejich klinický nástup. Výzkumní pracovníci se zaměřili na dosud zdravé osoby s Alzheimerovou chorobou v rodokmenu či na osoby s mírnou kognitivní poruchou. V současnosti jsou k dispozici výsledky malých studií, které prokázaly opožděný nástup Alzheimerovy demence či vaskulární demence při včasné léčbě ChEI jako je donepezil. (9) Demence s Lewyho tělísky Demence s Lewyho tělísky (DLB) je charakterizována progresivně nastupujícími fluktuujícími kognitivními poruchami, zrakovými halucinacemi a spontánními motorickými příznaky parkinsonismu. Nemoc se manifestuje 25

26 demencí s následným parkinsonickým syndromem a inklinuje k parkinsonickému syndromu s demencí (PD). Pacienti s DLB mají méně příznivý průběh nemoci ve srovnání s pacienty s PD. (27) Léčba neuroleptiky I. generace je u pacientů s DLB kontraindikována, protože mohou vyvolat nebo zhoršit parkinsonské příznaky a přivodit tak nemocnému komplikace nebo i smrt. Cholinergní léčba s rivastigminem byla zkoumána v multicentrické studii u 120 pacientů se statisticky a klinicky významnými účinky na jejich chování. Příznivý účinek terapie inhibitory cholinesteras (ChEI) u pacientů s DLB podporují i výsledky z 10 dalších menších studií probíhajících v letech Klinické studie dokazují, že snášenlivost terapie ChEI je podobná jako u AD s nějakými gastrointestinálními příznaky a svalovými křečemi. Třes se může vyskytovat po podání vyšších dávek. Na léčbu ChEI jsou zvlášť citlivé halucinace a bludy. (9) Parkinsonova choroba Parkinsonova choroba je neurodegenerativní onemocnění, které postihuje především dopaminergní buňky substantia nigra mesencephali. Nemoc způsobuje hlavně poruchy hybnosti, které se projevují motorickými příznaky (třes, svalová ztuhlost, poruchy rovnováhy atd.). Současně se mohou objevit i poruchy kognitivních funkcí, které jsou obvykle lehkého stupně. Porucha se týká především exekutivních funkcí (plánování, provádění složitějších aktivit). (13) V současnosti není doporučená terapie pro léčbu demence PD (PDD). Rozsáhlý cholinergní deficit u pacientů s PDD vedl k hypotéze, že terapie s ChEI může být pro pacienty s tímto onemocněním prospěšná. Léčba ChEI (donepezilem a rivastigminem) ukázala variabilní výsledky na celkové zlepšení kognitivních funkcí, žádnou změnu co se týče psychotických symptomů nebo dokonce zhoršením motorických funkcí. Ačkoliv někteří autoři došli k závěru, že léčba ChEI má příznivý vliv na kognitivní stav pacientů s PDD a nezhoršuje motorické funkce, je potřebné provést větší studie s cílem prokázat jednoznačný přínos této terapie. (9) 26

27 3.4.5 Vaskulární demence Vaskulární demence (VD) tvoří přibližně % případů demence. (9) Klinické a patologické aspekty VD se do vysoké míry překrývají s AD. Cholinergní deficit přítomný u VD je podobný deficitu pozorovanému u AD snížením množství cholinergních markerů. Snaha zvýšit dostupnost endogenního acetylcholinu inhibicí cholinesteras zvyšuje průtok krve mozkem. V klinické studii se všemi třemi inhibitory (rivastigmin, donepezil, galantamin) se ukázalo, že je tento efekt možný. První pokus o léčbu VD s ChEI rivastigminem byl publikován s povzbudivými výsledky. Nedávno byly hlášeny pozitivní nálezy při léčení VD a smíšené demence galantaminem, donepezilem a rivastigminem po dobu dvanácti měsíců. Nicméně klinické hodnocení těchto případů zůstává obtížné, protože neexistuje konsensus o platných kritériích pro diagnostiku vaskulární demence. (9) Downův syndrom Downův syndrom (DS) je jednou z nejčastějších chromozomálních abnormalit. Incidence je přibližně jeden případ na 600 až 800 živých porodů. (20) DS je vrozená vada, projevuje se různým stupněm mentální retardace a nejrůznějšími tělesnými poruchami. I u DS může být indikována terapie ChEI. Genetické, neuropatologické a neurochemické podobnosti DS s AD stejně jako přítomnost kognitivních poruch vedla k používání terapie ChEI i u DS. Čtyři publikované studie na malém počtu pacientů po dobu 8-40 týdnů prokázaly snížení zmatenosti a zlepšení kognitivních funkcí. (9) Traumatická poranění mozku Traumatické poranění mozku je jednou z nejčastějších příčin úmrtí u osob mladších 40 let. (9) Ztráta buněk hippokampu a snížení hladiny ACh a muskarinových receptorů lze zmírnit u pokusných zvířat s použitím ChEI jako je rivastigmin. Ten zlepšuje krevní perfúzi v ischemických oblastech a cholinergní přenos v kůře a hippokampu zvýšením cholinergní aktivity v mozkových cévách. Vyvolává stejný mechanismus jako u léčby VD. Několik malých studií s akutní léčbou fyzostigminem a chronickou léčbou (3 týdny 27

28 2 roky) donepezilem prokázaly zlepšení pozornosti, verbální paměti, obecného poznávání a chování. (9) Wernickeův- Korsakovův syndrom Wernickeův- Korsakovův syndrom (WKD) se vyznačuje amnestickým stavem plynoucím ze selektivních lézí v limbickém systému s poruchou epizodické paměti. Etiologie spočívá v nedostatku thiaminu, vitamínu B 1, u pacientů alkoholiků. Ve dvou ze tří studií prováděných s donepezilem bylo hlášeno zlepšení paměti. (9) Nicméně počet léčených pacientů je příliš malý, aby byla dokázána klinická účinnost Delirium Delirium je kvalitativní porucha vědomí. Bývá častou komplikací demence s kolísáním pozornosti a vědomí. Není vždy vratné a neexistuje specifická léčba. Nejčastěji je delirium důsledkem obecného zdravotního stavu a přesná příčina tohoto syndromu není známá. Případy post-narkotického deliria, ospalosti nebo komatu byly vykládány jako centrální cholinergní syndrom, který lze zvrátit podáním fysostigminu. V poslední době se podařilo odvrátit deliria různého původu (demence, opioidy, lithium, atd.) použitím látek typu inhibitorů cholinesteras (ChEI) jako je donepezil nebo rivastigmin. (9) Z těchto výsledků plyne, že by bylo velmi zajímavé testovat účinek ChEI jejich podáváním před celkovou anestezií, aby se zabránilo vzniku deliria u starších, rizikových pacientů Migréna Antinociceptivní (schopnost snížit citlivost na bolestivé stimuly) aktivita donepezilu byla demonstrována v experimentu na zvířatech. Analgetický účinek donepezilu byl sledován i u pacientů trpících migrénou. Donepezil prokázal účinnost ve snižování počtu atak a závažnosti bolesti. (9) Terapie myasthenie gravis Inhibitory AChE jsou klinicky využívány v terapii myasthenie gravis (MG). Jedná se o neurologické onemocnění charakterizované nadměrnou svalovou 28

29 únavou vedoucí od umírněné k hluboké slabosti po námaze. Základní neurofyziologické a farmakologické studie ukazují, že příčinou tohoto stavu je porucha v oblasti neuromuskulárního spojení (NMJ). (5) Na NMJ je z nervového zakončení přenášen vzruch přes cholinergní synapsi na postsynaptickou membránu svalové ploténky. Prokázalo se, že příčinou svalové slabosti u MG je protilátkami zprostředkovaná autoimunita proti svalovým nikotinovým receptorům na NMJ. Tyto protilátky napadají NMJ a ruší přirozeně se vyskytující synaptický přenos. Protilátky vyvolávají snížení počtu dostupných acetylcholinových receptorů vzájemným propojením a zrychlenou degradací a snad i komplementem zprostředkovanou membránovou destrukcí. Tyto mechanismy vedou k poruše sekundární aktivace napěťově závislých sodíkových kanálů, které normálně fungují jako převodníky ploténkového potenciálů na zahájení procesu svalové kontrakce. Je evidentní, že MG a s ní spojená porucha cholinergní rovnováhy je poruchou nikotinové synapse NMJ. Diagnóza a symptomatická léčba MG jsou založeny na cholinergní modulaci, a to na částečném obnovení cholinergní rovnováhy prodlouženou stimulací postsynaptických receptorů prostřednictvím inhibitorů AChE. Krátkodobě působící inhibitory AchE, jako je např. edrophonium, se používají k diagnostice MG. (5) Profylaxe před účinky nervově paralytických látek Nervově paralytické látky jsou látky, které inhibují AChE, čímž dochází k narušení fyziologické funkce AChE, tedy k inhibici rozkladu ACh. ACh se následně hromadí na receptorech a způsobuje nadměrné dráždění cholinergních receptorů. Výsledkem intoxikace NPL je soubor klinických příznaků, který se označuje jako akutní cholinergní krize. V závislosti na druhu a lokalizaci nadměrně drážděných cholinergních receptorů rozeznáváme muskarinové, nikotinové a centrální příznaky (Tabulka 3). 29

30 Tabulka 3 Klinický obraz akutní intoxikace NPL (22) Druh a lokalizace příznaků Muskarinové příznaky Nikotinové příznaky Centrální příznaky Klinické příznaky zúžení zornic (mióza); porucha akomodace; překrvení a otok ve spojivkách a nosní sliznici; zvýšené slinění, slzení, pocení; zvýšená sekrece bronchiálních žlázek, zúžení bronchů; zvýšená střevní peristaltika; bradykardie, snížení tlaku krve svalová ochablost, třes a záškuby jednotlivých příčně pruhovaných svalů, postupné rozšíření na všechny kosterní svaly těla, přechází až v intenzivní tonicko-klonické křeče, ty mohou vyústit až v ochrnutí kosterního svalstva, velké nebezpečí hrozí zejména v případě paralýzy dýchacího svalstva, které způsobí výrazné omezení dýchání deprese kardiovaskulárního a dechového centra v prodloužené míše, bolesti hlavy, úzkost, nadměrná emoční labilita, napětí, neklid, závratě, depresivní stavy, zmatenost, poruchy hybnosti, bezvědomí; v důsledku poruchy funkce dechových center a paralýzy dýchacích svalů včetně bránice může u těžkých až smrtelných intoxikací dojít k těžké dechové nedostatečnosti, která vede k zástavě dechu a následné zástavě srdce 30

31 Terapie otravy NPL je založena na včasném podání antidot. Antidotní terapie spočívá v podávání anticholinergik společně s reaktivátory ChE. Anticholinergní látky, které se označují také jako funkční antidota, zabraňují účinku nahromaděného ACh blokádou cholinergních receptorů (např.: atropin, benactyzin, biperiden nebo skopolamin). Kauzálními antidoty jsou označovány reaktivátory ChE, které obnovují aktivitu inhibované AChE, čímž umožní její přirozenou fyziologickou funkci. Mezi nejúčinnější reaktivátory cholinesteras patří některé oximy odvozené od pyridinu (např.: pralidoxim, obidoxim, methoxim a HI-6). Vysoká toxicita a rychlost účinku NPL si žádá řádnou ochranu. Armáda České republiky zajišťuje ochranu protichemickými a zdravotnickými opatřeními. K nejdůležitějším opatřením patří prostředky individuální ochrany, dekontaminace zasažené kůže a farmakologická profylaxe. Právě ve farmakologické profylaxi nalézají uplatnění inhibitory cholinesteras. Farmakologická profylaxe je založena na zvýšení odolnosti organismu vůči NPL a současně na zvýšení účinnosti následné antidotní terapie. Většina armád světa používá k farmakologické profylaxi proti NPL reverzibilní inhibitor ChE karbamát pyridostigmin, a to za účelem dočasné ochrany části AChE před následným účinkem NPL především na periferii. (22) Armáda ČR je vybavena směsným profylaktickým antidotem PANPAL, které kromě reverzibilního ChEI pyridostigminu obsahuje ještě anticholinergní látky benactyzin a trihexyfenidyl, které účinkují především centrálně. Tato kombinace byla zvolena s cílem odstranit riziko nežádoucích účinků pyridostigminu a umožňuje podat vyšší dávky této látky. Benactyzin a trihexyfenidyl působí antagonisticky vůči ACh na cholinergních receptorech, zejména v oblasti CNS a tím oslabují centrální účinek NPL (ochrana ACh receptorů jejich obsazením) (22). V ČR bylo vyvinuto také transdermální profylaktické antidotum TRANSANT, s reaktivátorem AChE HI-6 (3). 31

32 4. EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST 4.1 Cíl práce Cílem této diplomové práce bylo definovat typ inhibice nově syntetizovaných inhibitorů acetylcholinesterasy (AChEI). Úkolem bylo otestovat 5 7-metoxytakrin-donepezilových derivátů a 7 derivátů takrinu. Spektrofotometrickou Ellmanovou metodou byly naměřeny aktivity lidské rekombinantní acetylcholinesterasy (AChE) při různých koncentracích substrátu acetylthiocholin jodidu a při různých koncentracích testovaných AChEI. Z naměřených dat pak byly statisticky vypočteny kinetické konstanty a vyhodnoceny typy inhibice AChE. Dále bylo naším cílem zjistit, zda změna struktury AChEI ovlivňuje typ inhibice AChE. 4.2 Příprava základních roztoků a) Fosfátový pufr Vyráběn dle pokynů výrobce (Sigma Aldrich), 1 tableta byla rozpuštěna v 200 ml destilované vody. Výsledné ph 7,6. b) 5,5 dithio - (2 - nitro) benzoová kyselina (DTNB) 50 mg DTNB bylo rozpuštěno v 50 ml fosfátového pufru. c) Lidská rekombinantní acetylcholinesterasa (AChE) Do fosfátového pufru bylo přidáno 10 mg albuminu a AChE, tak aby výsledná absorbance roztoku enzymu byla 350. d) Acetylthiocholin jodid (ATChJ) M r (ATChJ) = 197,7. Dle vzorce: m = c M V, bylo vypočítáno, že je potřeba navážit 0,1977 g ATChJ, vložit do odměrné baňky a dolít 10 ml destilované vody. Tímto způsobem se získal roztok ATChJ o koncentraci 10-1 M. Tento roztok byl rozdělen po 1 ml do mikrozkumavek a zamrazen. 1 ml tohoto roztoku byl následně ředěn v poměru 1:1 až k přípravě koncentrací 6, M, 3, M, 1, M, 7, M, které byly využity jako substráty reakce. 32

33 e) Inhibitory: EN 1-7, PC ; 25; 33; 37; 48, 49 Inhibitory EN jsou deriváty takrinu. Jednotlivé látky se od sebe liší délkou alkylového řetězce napojeného na aminoskupinu takrinu (Tabulka 5). Inhibitory PC jsou 7-metoxytakrin-donepezilové deriváty. Jednotlivé PC látky se od sebe liší substituenty v poloze 4 na piperazinovém kruhu (Tabulka 4). Vždy byla připravena koncentrační řada AChEI 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7 a 10-8 M. V oblastech větších skoků byly připraveny ještě mezikoncentrace. Např. EN-1, M r (EN-1) = 318,88 dle vzorce m = c M V, bylo vypočteno, že je potřeba navážit 3,2 mg látky, jež se rozpustilo v 0,5 ml fosfátového pufru a 0,5 ml 2-propanolu (byla získána koncentrace 10-2 M). 2-propanol byl přidáván z důvodu špatné rozpustnosti látek. Z tohoto roztoku odpipetováno 0,1 ml a přidáno 0,9 ml fosfátového pufru (získána koncentrace 10-3 M). Následovalo stejné ředění až do koncentrace 10-8 M. Např. PC-37, M r (PC-37) = 583,19 5,5 mg látky bylo rozpuštěno v 1 ml fosfátového pufru (získána koncentrace 10-2 M). Z tohoto roztoku odpipetováno 0,1 ml a přidáno 0,9 ml fosfátového pufru (byla získána koncentrace 10-3 M). Následovalo stejné ředění až do koncentrace 10-8 M. Tabulka 4: Označení, struktura a relativní molekulová hmotnost testovaných inhibitorů Označení Struktura M r PC ,86 PC ,19 33

34 PC ,99 PC ,86 PC ,79 Tabulka 5: Označení, struktura a relativní molekulová hmotnost inhibitorů EN" Označení Struktura M r 1-EN-1 318,88 1-EN-2 332,91 1-EN-3 346,94 1-EN-4 360,96 34

35 1-EN-5 374,99 1-EN-6 389,02 1-EN-7 403, Princip a postup měření inhibičního potenciálu inhibitorů K měření byla použita standardní Ellmanova metoda (7) modifikovaná dle Bajgara (2). Principem této metody je rozložení substrátu ATChJ enzymem AChE na thiocholin a kyselinu octovou. Thiocholin reaguje s DTNB, kde rozštěpí disulfidický můstek a naváže se na thiolovou skupinu. V druhé části molekuly DTNB dojde ke konjugaci vazeb a tento produkt je stanovován fotometricky. Do jednorázové plastové kyvety o objemu 1 ml bylo napipetováno 650 µl fosfátového pufru, poté bylo přidáno 25 µl lidské rekombinantní AChE, 200 µl DTNB a 25 µl inhibitoru (o zvolené koncentraci M). Vše bylo 5 minut inkubováno při laboratorní teplotě (22 ± 2 C). Poté bylo přidáno 100 µl ATChJ (o zvolené koncentraci 6, M; 3, M; 1, M a 7, M), který působí jako substrát reakce a tím došlo ke spuštění reakce. Obsah kyvety byl přikryt parafilmem a promíchán. Následovalo vložení kyvety do spektrofotometru, kde byla změřena hodnota absorbance při standardní vlnové délce 412 nm. Na začátku měření a pravidelně v jeho průběhu (po proměření všech koncentrací inhibitorů s jednou koncentrací substrátu) byl proměřován slepý vzorek, kde bylo 25 µl inhibitoru nahrazeno 25 µl fosfátového pufru. Tím byla změřena aktuální aktivita enzymu, která odpovídala 100% aktivitě enzymu. 35

36 4.4 Zpracování výsledků Výsledky jednotlivých měření byly průběžně zapisovány do tabulek v počítačovém programu Microsoft Excel. Tato data byla na závěr přenesena do standardního statistického programu GraphPad Prism 5.0 (San Diego, CA, USA). Pomocí funkce nelineární regrese byly vypočteny hodnoty K M, V max, K i, vyhodnocen typ inhibice. Dále byly vytvořeny grafy podle Lineweavera-Burka pro jednotlivé AChEI. 36

37 5. VÝSLEDKY V této práci bylo testováno 12 inhibitorů. 5 látek s označením PC jsou deriváty 7-methoxytakrin-donepezilu, jejichž rozdíl spočívá v substituci parapolohy piperazinového kruhu (Tabulka 4). Dalších 7 látek s označením EN jsou deriváty takrinu, které se strukturně liší délkou alkylace spojovacího řetězce vázaného přes aminoskupinu k takrinu v poloze 9 (Tabulka 5). Vyhodnocení testovaných inhibitorů ukázalo, že látky EN 1-5 inhibují AChE nekompetitivně (Graf 1), stejně tak i látky PC-25 a PC-33 (Graf 4). Mechanismem působení EN-6 a EN-7 je akompetitivní inhibice (Graf 2). U látek PC-48 a PC-49 byl z hodnot stanoven smíšený typ inhibice (Graf 5). PC-37 je jedinou z testovaných látek, která inhibovala AChE kompetitivně. Z hodnot K M (Tabulka 6) jednotlivých látek je patrné, že největší afinitu k enzymu má látka PC-37 s hodnotou K M = 0,43 mm, pak následuje PC-48 a EN-2. Naopak nejnižší afinitu k AChE má látka PC-33 s hodnotou K M = 3,49 mm. V tabulce 6 jsou shrnuty hodnoty inhibičních konstant (K i ) pro jednotlivé látky. Z těchto hodnot lze vyčíst, jak silným inhibitorem látka je. Největším inhibičním potenciálem se vyznačuje látka EN-7 s hodnotou K i = 12,10 nm, následují ji PC-37 a EN-3. Nejslabším inhibitorem je látka PC-49, jejíž hodnota K i = 4621nM). Tabulka 6: Hodnoty kinetických parametrů (K M, V max ), inhibiční konstanty (K i ) inhibitorů Látka Ki ± SE [nm] K M ± SE [mm] V max ± SE [kat] Typ inhibice 1-EN-1 87,47 ±14,10 2,09 ± 0,39 0,52 ± 0,04 Nekompetitivní 1-EN-2 54,63 ±10,66 1,55 ± 0,39 0,40 ± 0,04 Nekompetitivní 1-EN-3 19,30 ± 2,939 1,60 ± 0,32 0,46 ± 0,04 Nekompetitivní 1-EN-4 104,2 ± 10,75 2,64 ±0,29 0,52 ± 0,03 Nekompetitivní 1-EN-5 77,78 ± 7,413 1,78 ±0,19 0,34 ± 0,01 Nekompetitivní 1-EN-6 103,6 ± 13,18 2,01 ± 0,24 0,32 ± 0,02 Akompetitivní 37

38 1-EN-7 12,10 ± 1,720 2,43 ± 0,42 0,67 ± 0,05 Akompetitivní 1-PC-37 13,64 ± 5,338 0,43 ± 0,16 0,26 ± 0,02 Kompetitivní 1-PC ± 93,38 2,00 ± 0,22 0,54 ± 0,02 Nekompetitivní 1-PC ± 72,52 3,49 ± 0,25 0,40 ± 0,01 Nekompetitivní 1-PC ,3 ± 50,92 1,08 ± 0,10 0,37 ± 0,01 Smíšená 1-PC ± 741,7 2,46 ± 0, ± 0,01 Smíšená Nekompetitivní inhibitory EN 1-5 Hodnoty K i (Tabulka 6) ukazují, že z látek EN 1-5 má nejvyšší inhibiční potenciál látka EN-3, naopak nejnižší EN-4. Míra afinity k enzymu je z těchto látek nejvyšší u EN-2 a nejnižší u EN-4. Akompetitivní inhibitory EN-6 a EN-7 Dle hodnot z tabulky 6 lze říci, že EN-7 má skoro 8násobně vyšší inhibiční potenciál než EN-6. Míra afinity k AChE je mírně vyšší u EN-6. Kompetitivní inhibitor PC-37 Hodnoty v tabulce 6 ukazují, že ze všech testovaných látek má PC-37 největší afinitu k AChE (K M = 0,43 mm) a zároveň je druhým nejsilnějším inhibitorem (K i = 13,64 nm). Nekompetitivní inhibitory PC-25 a PC-33 Porovnáme-li hodnoty (Tabulka 6) látek PC-25 a PC-33, zjistíme, že obě látky jsou slabými inhibitory AChE v porovnání s ostatními testovanými látkami. Hodnota K M ukazuje, že PC-25 má přibližně 1,7krát vyšší afinitu k AChE. Smíšené inhibitory PC-48 a PC-49 Na základě hodnot z tabulky 6 lze říci, že látka PC-48 je silnějším inhibitorem AChE než PC-49. Dle hodnoty K M, respektive dle míry afinity k AChE, se řadí PC-48 na druhé místo v rámci všech testovaných inhibitorů. PC-49 má slabou afinitu k AChE, poloviční ve srovnání s PC

39 v -1 (kat -1 ) Graf 1: Nekompetitivní inhibice, graf dle Lineweavera-Burka (EN-5) Lineweaver-Burk Plot EN-5 EN-5 (M) E E E E E E E E E [ATCh] -1 (M -1 ) Graf 1 znázorňuje nekompetitivní inhibici látky EN-5, nekompetitivně působí i látky EN 1-4, jejich grafické znázornění je obdobné. 39

40 v -1 (kat -1 ) Graf 2: Akompetitivní inhibice, graf dle Lineweavera-Burka (EN-6) Lineweaver-Burk Plot EN-6 EN-6 (M) E E E E E E E E E [ATCh] -1 (M -1 ) Graf 2 znázorňuje akompetitivní inhibici EN-6, obdobně platí i pro EN-7, která má stejný mechanismus účinku. 40

41 v -1 (kat -1 ) Graf 3: Kompetitivní inhibice, graf dle Lineweavera-Burka (PC-37) Lineweaver-Burk Plot PC-37 PC-37 (M) E E E E E E E E E [ATCh] -1 (M -1 ) Graf 3, ukazuje kompetitivní inhibici AChE inhibitorem PC-37. Přestože se přímky dvou koncentrací protínají mimo osu y, počítačový program srovnal výsledky s ostatními modely inhibic a vyhodnotil tuto jako kompetitivní. Většina přímek se protíná na ose y. 41

42 v -1 (kat -1 ) Graf 4: Nekompetitivní inhibice, graf dle Lineweavera-Burka (PC-33) Lineweaver-Burk Plot PC-33 PC-33 (M) E E E E E E E E E E [ATCh] -1 (M -1 ) Graf 4 znázorňuje nekompetitivní inhibici PC-33, obdobně platí i pro PC-25, která má stejný mechanismus působení. 42

ENZYMY. RNDr. Lucie Koláčná, Ph.D.

ENZYMY. RNDr. Lucie Koláčná, Ph.D. ENZYMY RNDr. Lucie Koláčná, Ph.D. Enzymy: katalyzátory živé buňky jednoduché nebo složené proteiny Apoenzym: proteinová část Kofaktor: nízkomolekulová neaminokyselinová struktura nezbytně nutná pro funkci

Více

Enzymologie. Věda ležící na pomezí fyz. ch. a bioch. Zabývá se problematikou biokatalyzátorů.

Enzymologie. Věda ležící na pomezí fyz. ch. a bioch. Zabývá se problematikou biokatalyzátorů. ENZYMOLOGIE 1 Enzymologie Věda ležící na pomezí fyz. ch. a bioch. Zabývá se problematikou biokatalyzátorů. Jak je možné, že buňka dokáže utřídit hrozivou změť chemických procesů, které v ní v každém okamžiku

Více

Text zpracovala Mgr. Taťána Štosová, Ph.D PŘÍRODNÍ LÁTKY

Text zpracovala Mgr. Taťána Štosová, Ph.D PŘÍRODNÍ LÁTKY Inovace profesní přípravy budoucích učitelů chemie CZ.1.07/2.2.00/15.0324 Text zpracovala Mgr. Taťána Štosová, Ph.D PŘÍRODNÍ LÁTKY Obsah 1 Úvod do problematiky přírodních látek... 2 2 Vitamíny... 2 2.

Více

Enzymologie. Ústav lékařské chemie a klinické biochemie 2.LF UK a FN Motol Matej Kohutiar. akad. rok 2017/2018

Enzymologie. Ústav lékařské chemie a klinické biochemie 2.LF UK a FN Motol Matej Kohutiar. akad. rok 2017/2018 Enzymologie Ústav lékařské chemie a klinické biochemie 2.LF UK a FN Motol Matej Kohutiar akad. rok 2017/2018 Osnova I. Základní principy enzymových reakcí II. Termodynamické a kinetické aspekty enzymové

Více

Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996

Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996 Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996 Šablona: III/2 č. materiálu: VY_32_INOVACE_CHE_419 Jméno autora: Třída/ročník: Mgr. Alena

Více

Enzymy. aneb. Není umění dělat co tě baví, ale najít zalíbení v tom, co udělati musíš. Luboš Paznocht

Enzymy. aneb. Není umění dělat co tě baví, ale najít zalíbení v tom, co udělati musíš. Luboš Paznocht Enzymy aneb Není umění dělat co tě baví, ale najít zalíbení v tom, co udělati musíš. Luboš Paznocht Umožňují rychlý a koordinovaný průběh chemických přeměn v organismu Kinetika biochemických reakcí řád

Více

ENZYMY. Klasifikace enzymů

ENZYMY. Klasifikace enzymů ENZYMY Enzymy jsou bílkoviny, které katalyzují chemické reakce probíhající v živých organismech. Byly identifikovány tisíce enzymů, mnohé z nich byly izolovány čisté. Klasifikace enzymů Vzhledem k tomu,

Více

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti. ENZYMY I úvod, názvosloví, rozdělení do tříd

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti. ENZYMY I úvod, názvosloví, rozdělení do tříd Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ENZYMY I úvod, názvosloví, rozdělení do tříd Úvod z řeckého EN ZYME (v kvasinkách) biologický katalyzátor, protein (RNA) liší se od chemických

Více

Redoxní děj v neživých a živých soustavách

Redoxní děj v neživých a živých soustavách Enzymy Enzymy Katalyzují chemické reakce, kdy se mění substrát na produkt Katalytickým působením se snižuje aktivační energie reagujících molekul substrátu, tím se reakce urychlí Za přítomnosti enzymu

Více

HISTORIE ENZYMOLOGIE

HISTORIE ENZYMOLOGIE ENZYMY HISTORIE ENZYMOLOGIE 1. Berzelius (18.stol.) v rostlinách i živočiších probíhají tisíce katalyzovaných reakcí FERMENTY fermentace (Fabrony) 2. W.Kühne en zýme = v kvasnicích enzymy 3. J. Sumner

Více

Kombinovaná poškození při použití chemických zbraní

Kombinovaná poškození při použití chemických zbraní Kombinovaná poškození při použití chemických zbraní plk. prof. MUDr. Jiří Kassa, CSc. prof. RNDr. Jiří Patočka, DrSc. Katedra toxikologie Fakulta vojenského zdravotnictví UO Hradec Králové Úvod Poškození

Více

Enzymy charakteristika a katalytický účinek

Enzymy charakteristika a katalytický účinek Enzymy charakteristika a katalytický účinek Tematická oblast Datum vytvoření Ročník Stručný obsah Způsob využití Autor Kód Chemie přírodních látek enzymy 28.7.2012 3. ročník čtyřletého G Charakteristika

Více

POLYPEPTIDY. Provitaminy = organické sloučeniny bez vitaminózního účinku, které se v živočišném těle mění působením ÚV záření nebo enzymů na vitaminy.

POLYPEPTIDY. Provitaminy = organické sloučeniny bez vitaminózního účinku, které se v živočišném těle mění působením ÚV záření nebo enzymů na vitaminy. POLYPEPTIDY Provitaminy = organické sloučeniny bez vitaminózního účinku, které se v živočišném těle mění působením ÚV záření nebo enzymů na vitaminy. Hormony = katalyzátory v živočišných organismech (jsou

Více

Aspartátaminotransferáza (AST)

Aspartátaminotransferáza (AST) 1 Aspartátaminotransferáza (AST) AST je buněčný enzym přítomný v řadě tkání, jako jsou srdce, kosterní svaly, ledviny, mozek, játra, pankreas či erytrocyty. Vyskytuje se ve dvou izoformách, cytoplazmatické

Více

Aminokyseliny, proteiny, enzymologie

Aminokyseliny, proteiny, enzymologie Aminokyseliny, proteiny, enzymologie Aminokyseliny Co to je? Organické látky karboxylové kyseliny, které mají na sousedním uhlíku navázanou aminoskupinu Jak to vypadá? K čemu je to dobré? AK jsou stavební

Více

Toxikologie II. Kamil KUČA a Daniel JUN

Toxikologie II. Kamil KUČA a Daniel JUN Toxikologie II Kamil KUČA a Daniel JUN Kontakt: Mgr. Daniel JUN, PhD. Ing. Kamil KUČA, PhD. ********************** Centrum pokročilých studií Fakulta vojenského zdravotnictví Univerzita obrany Třebešská

Více

Enzymy faktory ovlivňující jejich účinek

Enzymy faktory ovlivňující jejich účinek Enzymy faktory ovlivňující jejich účinek Tematická oblast Datum vytvoření Ročník Stručný obsah Způsob využití Autor Kód Chemie přírodních látek enzymy 10.8.2012 3. ročník čtyřletého G Faktory ovlivňující

Více

Enzymy. Prof. MUDr. Jiří Kraml, DrSc.

Enzymy. Prof. MUDr. Jiří Kraml, DrSc. Enzymy Prof. MUDr. Jiří Kraml, DrSc. ENZYMY JAKO HOMOGENNÍ BIOKATALYZÁTORY 1. Bílkovinná povaha ( + některé RNA-enzymy - ribozymy) 2. Větší účinnost (faktor minimálně 10 6 ) 3. Specifičnost - substrátová

Více

>>> E A1 + E A2. . aktivační energie potřebná k reakci bez přítomnosti katalyzátoru E A E A1. energie potřebná ke vzniku enzym-substrátového komplexu

>>> E A1 + E A2. . aktivační energie potřebná k reakci bez přítomnosti katalyzátoru E A E A1. energie potřebná ke vzniku enzym-substrátového komplexu Enzymy Charakteristika enzymů- fermentů katalyzátory biochem. reakcí biokatalyzátory umožňují a urychlují průběh rcí v organismu nachází se ve všech živých systémech z chemického hlediska jednoduché nebo

Více

2) Připravte si 7 sad po pěti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.

2) Připravte si 7 sad po pěti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky. CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)

Více

Tabulace učebního plánu. Obecná chemie. Vzdělávací obsah pro vyučovací předmět : Ročník: 1.ročník a kvinta

Tabulace učebního plánu. Obecná chemie. Vzdělávací obsah pro vyučovací předmět : Ročník: 1.ročník a kvinta Tabulace učebního plánu Vzdělávací obsah pro vyučovací předmět : CHEMIE Ročník: 1.ročník a kvinta Obecná Bezpečnost práce Názvosloví anorganických sloučenin Zná pravidla bezpečnosti práce a dodržuje je.

Více

Historie. Pozor! né vždy jen bílkovinná část

Historie. Pozor! né vždy jen bílkovinná část Enzymy a hormony Enzymy = biokatalyzátory jejich působení je umožněn souhrn chemických přeměn v organismu (metabolismus) jednoduché, složené bílkoviny globulární v porovnání s katalyzátory účinnější, netoxické,

Více

ENZYMOLOGIE. Pracovní sešit k přednáškám z biochemie pro studenty biologických kombinací ZDENĚK GLATZ

ENZYMOLOGIE. Pracovní sešit k přednáškám z biochemie pro studenty biologických kombinací ZDENĚK GLATZ EZYMLGIE Pracovní sešit k přednáškám z biochemie pro studenty biologických kombinací II ZDEĚK GLATZ 2004 Katalýza - Berzelius 1838 2 EZYMLGIE katalyzátor - látky urychlující chemické reakce - nemění rovnováhu

Více

živé organismy získávají energii ze základních živin přeměnou látek v živinách si syntetizují potřebné sloučeniny, dochází k uvolňování energie některé látky organismy nedovedou syntetizovat, proto musí

Více

Urychlení úpravy krvetvorby poškozené cytostatickou terapií (5-fluorouracil a cisplatina) p.o. aplikací IMUNORu

Urychlení úpravy krvetvorby poškozené cytostatickou terapií (5-fluorouracil a cisplatina) p.o. aplikací IMUNORu Urychlení úpravy krvetvorby poškozené cytostatickou terapií (5-fluorouracil a cisplatina) p.o. aplikací IMUNORu Úvod Myelosuprese (poškození krvetvorby) patří mezi nejčastější vedlejší účinky chemoterapie.

Více

2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.

2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky. CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)

Více

Regulace enzymové aktivity

Regulace enzymové aktivity Regulace enzymové aktivity MUDR. MARTIN VEJRAŽKA, PHD. Regulace enzymové aktivity Organismus NENÍ rovnovážná soustava Rovnováha = smrt Život: homeostáza, ustálený stav Katalýza v uzavřené soustavě bez

Více

Stanovení vybraných enzymů. Roman Kanďár

Stanovení vybraných enzymů. Roman Kanďár Stanovení vybraných enzymů Roman Kanďár Takže prvně malé opakování ENZYM Protein (RNA) s katalytickou aktivitou Protein (RNA) kofaktor (prosthetická skupina, koenzym) Jaký je vlastně rozdíl mezi prosthetickou

Více

Enzymy: Struktura a mechanismus působení. Prof. MUDr. Jiří Kraml, DrSc. Ústav lékařské biochemie 1.LF UK

Enzymy: Struktura a mechanismus působení. Prof. MUDr. Jiří Kraml, DrSc. Ústav lékařské biochemie 1.LF UK Enzymy: Struktura a mechanismus působení Prof. MUDr. Jiří Kraml, DrSc. Ústav lékařské biochemie 1.LF UK 1 ENZYMY JAKO HOMOGENNÍ BIOKATALYZÁTORY 1. Bílkovinná povaha ( + některé RNA-enzymy - ribozymy) 2.

Více

VEGETATIVNÍ NERVOVÝ SYSTÉM

VEGETATIVNÍ NERVOVÝ SYSTÉM VEGETATIVNÍ NERVOVÝ SYSTÉM Vegetativní nervový systém = autonomní (nezávislý na vůli) Udržuje základní životní funkce, řídí a kontroluje tělo, orgány Řídí hladké svaly (cévní i mimocévní), exokrinní sekreci

Více

1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I

1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I 1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I Vazba bromfenolové modři na sérový albumin Princip úlohy Albumin má unikátní vlastnost vázat menší molekuly mnoha typů. Díky struktuře, tvořené

Více

Toxikologie PřF UK, ZS 2016/ Toxikodynamika I.

Toxikologie PřF UK, ZS 2016/ Toxikodynamika I. Toxikodynamika toxikodynamika (řec. δίνευω = pohánět, točit) interakce xenobiotika s cílovým místem (buňkou, receptorem) biologická odpověď jak xenobiotikum působí na organismus toxický účinek nespecifický

Více

První testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti

První testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti První testový úkol aminokyseliny a jejich vlastnosti Vysvětlete co znamená pojem α-aminokyselina Jaký je rozdíl mezi D a L řadou aminokyselin Kolik je základních stavebních aminokyselin a z čeho jsou odvozeny

Více

Mgr. Šárka Vopěnková Gymnázium, SOŠ a VOŠ Ledeč nad Sázavou VY_32_INOVACE_02_3_20_BI2 HORMONÁLNÍ SOUSTAVA

Mgr. Šárka Vopěnková Gymnázium, SOŠ a VOŠ Ledeč nad Sázavou VY_32_INOVACE_02_3_20_BI2 HORMONÁLNÍ SOUSTAVA Mgr. Šárka Vopěnková Gymnázium, SOŠ a VOŠ Ledeč nad Sázavou VY_32_INOVACE_02_3_20_BI2 HORMONÁLNÍ SOUSTAVA NADLEDVINY dvojjediná žláza párově endokrinní žlázy uložené při horním pólu ledvin obaleny tukovým

Více

Chemie - 5. ročník. přesahy, vazby, mezipředmětové vztahy průřezová témata. očekávané výstupy RVP. témata / učivo. očekávané výstupy ŠVP.

Chemie - 5. ročník. přesahy, vazby, mezipředmětové vztahy průřezová témata. očekávané výstupy RVP. témata / učivo. očekávané výstupy ŠVP. očekávané výstupy RVP témata / učivo Chemie - 5. ročník Žák: očekávané výstupy ŠVP přesahy, vazby, mezipředmětové vztahy průřezová témata 1.2., 2.1., 2.2., 2.4., 3.3. 1. Přeměny chemických soustav chemická

Více

Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce

Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce Lékařská chemie a biochemie modelový vstupní test ke zkoušce 1. Máte pufr připravený smísením 150 ml CH3COOH o c = 0,2 mol/l a 100 ml CH3COONa o c = 0,25 mol/l. Jaké bude ph pufru, pokud přidáme 10 ml

Více

Reakční kinetika enzymových reakcí

Reakční kinetika enzymových reakcí Reakční kinetika enzymových reakcí studuje časový průběh enzymových reakcí za různých reakčních podmínek zabývá se faktory, které ovlivňují rychlost reakcí katalyzovaných enzymy - uvažujme monomolekulární

Více

*Mléko a mléčné výrobky obsahují řadu bioaktivních

*Mléko a mléčné výrobky obsahují řadu bioaktivních www.bileplus.cz Mléko a mléčné výrobky obsahují řadu bioaktivních látek (vápník, mastné kyseliny, syrovátka, větvené aminokyseliny) ovlivňující metabolismus tuků spalování tuků Mléčné výrobky a mléčné

Více

NERVOVĚ PARALYTICKÉ LÁTKY. plk. prof. MUDr. Jiří Kassa, CSc. Katedra toxikologie Fakulta vojenského zdravotnictví Hradec Králové

NERVOVĚ PARALYTICKÉ LÁTKY. plk. prof. MUDr. Jiří Kassa, CSc. Katedra toxikologie Fakulta vojenského zdravotnictví Hradec Králové NERVOVĚ PARALYTICKÉ LÁTKY plk. prof. MUDr. Jiří Kassa, CSc. Katedra toxikologie Fakulta vojenského zdravotnictví Hradec Králové ZÁKLADNÍ CHARAKTERISTIKA kapalné, vysoce toxické organofosforové sloučeniny,

Více

Biochemie. ochrana životního prostředí analytická chemie chemická technologie Forma vzdělávání: Platnost: od 1. 9. 2009 do 31. 8.

Biochemie. ochrana životního prostředí analytická chemie chemická technologie Forma vzdělávání: Platnost: od 1. 9. 2009 do 31. 8. Studijní obor: Aplikovaná chemie Učební osnova předmětu Biochemie Zaměření: ochrana životního prostředí analytická chemie chemická technologie Forma vzdělávání: denní Celkový počet vyučovacích hodin za

Více

BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ

BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ BIOMEMRÁNA BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA - všechny buňky na povrchu plazmatickou membránu - Prokaryontní buňky (viry, bakterie, sinice) - Eukaryontní buňky vnitřní členění do soustavy membrán KOMPARTMENTŮ - za

Více

Enzymy v diagnostice Enzymy v plazm Bun né enzymy a sekre ní enzymy iny zvýšené aktivity bun ných enzym v plazm asový pr h nár

Enzymy v diagnostice Enzymy v plazm Bun né enzymy a sekre ní enzymy iny zvýšené aktivity bun ných enzym v plazm asový pr h nár Enzymy v diagnostice Enzymy v plazmě Enzymy nalézané v plazmě lze rozdělit do dvou typů. Jsou to jednak enzymy normálně přítomné v plazmě a mající zde svou úlohu (např. enzymy kaskády krevního srážení

Více

Základy fotometrie, využití v klinické biochemii

Základy fotometrie, využití v klinické biochemii Základy fotometrie, využití v klinické biochemii Základní vztahy ve fotometrii transmitance (propustnost): T = I / I 0 absorbance: A = log (I 0 / I) = log (1 / T) = log T Lambertův-Beerův zákon A l = e

Více

Sekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch

Sekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch Sekunda (2 hodiny týdně) Chemické látky a jejich vlastnosti Směsi a jejich dělení Voda, vzduch Atom, složení a struktura Chemické prvky-názvosloví, slučivost Chemické sloučeniny, molekuly Chemická vazba

Více

SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE)

SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) Elektromagnetické vlnění SVĚTLO Charakterizace záření Vlnová délka - (λ) : jednotky: m (obvykle nm) λ Souvisí s povahou fotonu Charakterizace záření

Více

Léčiva užíváná k terapii kognitivních poruch

Léčiva užíváná k terapii kognitivních poruch Léčiva užíváná k terapii kognitivních poruch Ústav farmakologie LF UP a FN Olomouc 15. června 2005 Obsah Úvod Cholinomimetika Ergotalkaloidy Ca blokátory Nootropika Ostatní Úvod Léčiva ovlivňující pozitivně

Více

Vrozené trombofilní stavy

Vrozené trombofilní stavy Vrozené trombofilní stavy MUDr. Dagmar Riegrová, CSc. Název projektu: Tvorba a ověření e-learningového prostředí pro integraci výuky preklinických a klinických předmětů na Lékařské fakultě a Fakultě zdravotnických

Více

ALZHEIMEROVA CHOROBA. Hana Bibrlová 3.B

ALZHEIMEROVA CHOROBA. Hana Bibrlová 3.B ALZHEIMEROVA CHOROBA Hana Bibrlová 3.B Alzheimerova choroba -neurodegenerativní onemocnění mozku, při kterém dochází k postupné demenci -změny postupně působí rozpad nervových vláken a nervových buněk

Více

METABOLISMUS SACHARIDŮ

METABOLISMUS SACHARIDŮ METABOLISMUS SACHARIDŮ PRINCIP Rozštěpené sacharidy vstřebávání střevní sliznicí do krevního oběhu dopraveny vrátnicovou žílou do jater. V játrech enzymaticky hexózy štěpeny na GLUKÓZU vyplavována do krve

Více

Obsah. 1. Gerontopsychiatrie - historie, osobnosti, současnost (Roman Jirák) 2. Nejčastější psychické poruchy v seniorském věku (Roman Jirák)

Obsah. 1. Gerontopsychiatrie - historie, osobnosti, současnost (Roman Jirák) 2. Nejčastější psychické poruchy v seniorském věku (Roman Jirák) Obsah 1. Gerontopsychiatrie - historie, osobnosti, současnost (Roman Jirák) 2. Nejčastější psychické poruchy v seniorském věku (Roman Jirák) 3. Změny psychiky ve stáří (Tamara Tošnerová) Ztráta nezávislosti

Více

ENZYMY. Charakteristika enzymaticky katalyzovaných reakcí:

ENZYMY. Charakteristika enzymaticky katalyzovaných reakcí: ENZYMY Definice: Enzymy (biokatalyzátory) jsou jednoduché či složené makromolekulární bílkoviny s katalytickou aktivitou. Urychlují reakce v organismech tím, že snižují aktivační energii (Ea) potřebnou

Více

Obr. 1 Vzorec adrenalinu

Obr. 1 Vzorec adrenalinu Feochromocytom, nádor nadledvin Autor: Antonín Zdráhal Výskyt Obecně nádorové onemocnění vzniká následkem nekontrolovatelného množení buněk, k němuž dochází mnoha různými mechanismy, někdy tyto příčiny

Více

Reakční kinetika. Nauka zabývající se rychlostí chemických reakcí a ovlivněním rychlosti těchto reakcí

Reakční kinetika. Nauka zabývající se rychlostí chemických reakcí a ovlivněním rychlosti těchto reakcí Nauka zabývající se rychlostí chemických reakcí a ovlivněním rychlosti těchto reakcí Vymezení pojmů : chemická reakce je děj, při kterém zanikají výchozí látky a vznikají látky nové reakční mechanismus

Více

Gymnázium Jiřího Ortena, Kutná Hora

Gymnázium Jiřího Ortena, Kutná Hora Předmět: Náplň: Třída: Počet hodin: Pomůcky: Chemie (CHE) Organická chemie, biochemie 3. ročník a septima 2 hodiny týdně Školní tabule, interaktivní tabule, tyčinkové a kalotové modely molekul, zpětný

Více

Xenobiotika a jejich analýza v klinických laboratořích

Xenobiotika a jejich analýza v klinických laboratořích Xenobiotika a jejich analýza v klinických laboratořích BERÁNEK M., BORSKÁ L., KREMLÁČEK J., FIALA Z., MÁLKOVÁ A., VOŘÍŠEK V., PALIČKA V. Lékařská fakulta UK a FN Hradec Králové Finančně podporováno programy

Více

Oligobiogenní prvky bývají běžnou součástí organismů, ale v těle jich již podstatně méně (do 1%) než prvků makrobiogenních.

Oligobiogenní prvky bývají běžnou součástí organismů, ale v těle jich již podstatně méně (do 1%) než prvků makrobiogenních. 1 (3) CHEMICKÉ SLOŢENÍ ORGANISMŮ Prvky Stejné prvky a sloučeniny se opakují ve všech formách života, protože mají shodné principy stavby těla i metabolismu. Např. chemické děje při dýchání jsou stejné

Více

KONTROLNÍ A ŘÍDÍCÍ SOUSTAVY. kontrolu a řízení organismu zajišťují 2 soustavy: o nervová soustava o hormonální soustava

KONTROLNÍ A ŘÍDÍCÍ SOUSTAVY. kontrolu a řízení organismu zajišťují 2 soustavy: o nervová soustava o hormonální soustava KONTROLNÍ A ŘÍDÍCÍ SOUSTAVY kontrolu a řízení organismu zajišťují 2 soustavy: o nervová soustava o hormonální soustava NERVOVÁ SOUSTAVA základní stavební jednotkou je. neuron Funkce.. řídí a koordinuje

Více

běh zpomalit stárnutí? Dokáže pravidelný ZDRAVÍ

běh zpomalit stárnutí? Dokáže pravidelný ZDRAVÍ Dokáže pravidelný běh zpomalit stárnutí? SPORTEM KU ZDRAVÍ, NEBO TRVALÉ INVALIDITĚ? MÁ SE ČLOVĚK ZAČÍT HÝBAT, KDYŽ PŮL ŽIVOTA PROSEDĚL ČI DOKONCE PROLEŽEL NA GAUČI? DOKÁŽE PRAVIDELNÝ POHYB ZPOMALIT PROCES

Více

BrainVitality. Stárnoucí mozek prochází postupnými strukturálnímí a funkčními změnami.

BrainVitality. Stárnoucí mozek prochází postupnými strukturálnímí a funkčními změnami. Stárnoucí mozek prochází postupnými strukturálnímí a funkčními změnami. Mozek se začíná zmenšovat od 25 let a v 70 letech ztratil už 25 % své velikosti. Mozková činnost spotřebuje 20-25 % veškerého kyslíku,

Více

Organické duševní poruchy

Organické duševní poruchy PZTV021,022 Psychiatrie Učební text 1 Organické (organicky podmíněné) duševní poruchy Projev: přímého postižení CNS chorobným procesem Primární atroficko-degenerativní postižení, nádor, trauma, zánět celkového

Více

Aminokyseliny, proteiny, enzymy Základy lékařské chemie a biochemie 2014/2015 Ing. Jarmila Krotká Metabolismus základní projev života látková přeměna souhrn veškerých dějů, které probíhají uvnitř organismu

Více

Rychlost chemické reakce je dána změnou Gibbsovy energie a aktivační energií: Tudíž zrychlení reakce pomocí katalýzy může být vyjádřeno:

Rychlost chemické reakce je dána změnou Gibbsovy energie a aktivační energií: Tudíž zrychlení reakce pomocí katalýzy může být vyjádřeno: Bruno Sopko Rychlost chemické reakce je dána změnou Gibbsovy energie a aktivační energií: Tudíž zrychlení reakce pomocí katalýzy může být vyjádřeno: Z předchozí rovnice vyplývá: Pokud katalýza při 25

Více

Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory

Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory Titrace je spolehlivý a celkem nenáročný postup, jak zjistit koncentraci analytu, její

Více

Seminář z chemie. Charakteristika vyučovacího předmětu

Seminář z chemie. Charakteristika vyučovacího předmětu Seminář z chemie Časová dotace: 2 hodiny ve 3. ročníku, 4 hodiny ve 4. Ročníku Charakteristika vyučovacího předmětu Seminář je zaměřený na přípravu ke školní maturitě z chemie a k přijímacím zkouškám na

Více

Prof. MUDr. Jiří Vorlíček, CSc. Prof. MUDr. Jitka Abrahámová, DrSc. MUDr. Tomáš Büchler, PhD.

Prof. MUDr. Jiří Vorlíček, CSc. Prof. MUDr. Jitka Abrahámová, DrSc. MUDr. Tomáš Büchler, PhD. Promítnutí pokroků lékařské vědy do funkčního hodnocení zdravotního stavu a pracovní schopnosti ve vztahu k mezinárodní klasifikaci nemocí a s přihlédnutím k Mezinárodní klasifikaci funkčních schopností

Více

Možnosti biologického monitorování expozice pesticidům

Možnosti biologického monitorování expozice pesticidům Možnosti biologického monitorování expozice pesticidům Jaroslav Mráz Státní zdravotní ústav Praha Centrum hygieny práce a pracovního lékařství NRL pro biologické monitorování expozice chemickým látkám

Více

3. Výdaje zdravotních pojišťoven

3. Výdaje zdravotních pojišťoven 3. Výdaje zdravotních pojišťoven Náklady sedmi zdravotních pojišťoven, které působí v současné době v České republice, tvořily v roce 2013 více než tři čtvrtiny všech výdajů na zdravotní péči. Z pohledu

Více

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Pavla Balínová http://vyuka.lf3.cuni.cz/ Důležité informace Kroužkový asistent: RNDr. Pavla Balínová e-mailová adresa: pavla.balinova@lf3.cuni.cz místnost: 410 studijní

Více

METABOLISMUS SACHARIDŮ

METABOLISMUS SACHARIDŮ METABOLISMUS SAHARIDŮ A. Odbourávání sacharidů - nejdůležitější zdroj energie pro heterotrofy - oxidací sacharidů až na. získávají aerobní organismy energii ve formě. - úplná oxidace glukosy: složitý proces

Více

Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996

Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996 Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0996 Šablona: III/2 č. materiálu: VY_32_INOVACE_CHE_412 Jméno autora: Třída/ročník: Mgr. Alena

Více

Globální problémy Civilizační choroby. Dominika Fábryová Oktáva 17/

Globální problémy Civilizační choroby. Dominika Fábryová Oktáva 17/ Globální problémy Civilizační choroby Dominika Fábryová Oktáva 17/18 18.3.2018 Co jsou civilizační choroby nemoci, které jsou způsobeny špatným životním stylem můžeme označit za nemoci moderní doby hlavní

Více

Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech

Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech Organismy se skládají z molekul rozličných látek Jednotlivé látky si organismus vytváří sám z jiných látek,

Více

Proč biokatalýza? Vyšší reakční rychlost Vyšší specificita reakce Mírnější reakční podmínky Možnost regulace

Proč biokatalýza? Vyšší reakční rychlost Vyšší specificita reakce Mírnější reakční podmínky Možnost regulace Enzymy Proč biokatalýza? Vyšší reakční rychlost Vyšší specificita reakce Mírnější reakční podmínky Možnost regulace COO - - COO NH 2 OH - COO NH 2 - COO O OH - COO Chorismate mutase - OOC O OH - COO -

Více

Bunka a bunecné interakce v patogeneze tkánového poškození

Bunka a bunecné interakce v patogeneze tkánového poškození Bunka a bunecné interakce v patogeneze tkánového poškození bunka - stejná genetická výbava - funkce (proliferace, produkce látek atd.) závisí na diferenciaci diferenciace tkán - specializovaná produkce

Více

Cévní mozková příhoda. Petr Včelák

Cévní mozková příhoda. Petr Včelák Cévní mozková příhoda Petr Včelák 12. 2. 2015 Obsah 1 Cévní mozková příhoda... 1 1.1 Příčiny mrtvice... 1 1.2 Projevy CMP... 1 1.3 Případy mrtvice... 1 1.3.1 Česko... 1 1.4 Diagnóza a léčba... 2 1.5 Test

Více

Jak na mozek, aby fungoval aneb. PaedDr. Mgr. Hana Čechová

Jak na mozek, aby fungoval aneb. PaedDr. Mgr. Hana Čechová Jak na mozek, aby fungoval aneb pohyb a myšlení PaedDr. Mgr. Hana Čechová Mozek nám jasně říká: Hýbej se, běhej, cvič. neboť Vhodně strukturovaná pohybová aktivita jednoznačně zpomaluje proces stárnutí

Více

FARMAKODYNAMIKA. Doc. PharmDr. František Štaud, Ph.D.

FARMAKODYNAMIKA. Doc. PharmDr. František Štaud, Ph.D. FARMAKODYNAMIKA Doc. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Katedra farmakologie a toxikologie Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové FARMAKODYNAMIKA studuje účinky léčiv a jejich mechanizmy

Více

Kinetika enzymově katalysovaných reakcí

Kinetika enzymově katalysovaných reakcí Kinetika enzymově katalysovaných reakcí Rychlost reakce aa + bb + c C + d D +... dn A d [ A] d [ B ] d [C ] v= = = = av d τ ad τ bd τ cd τ Počáteční rychlost reakce aa + bb + konc. c C + d D +... d [ A]

Více

BIOKATALYZÁTORY I. ENZYMY

BIOKATALYZÁTORY I. ENZYMY BIOKATALYZÁTORY I. Obecné pojmy - opakování: Katalyzátory látky, které ovlivňují průběh katalyzované reakce a samy se přitom nemění. Dělíme je na: pozitivní (aktivátory) urychlující reakce negativní (inhibitory)

Více

ATOMOVÁ FYZIKA JADERNÁ FYZIKA

ATOMOVÁ FYZIKA JADERNÁ FYZIKA ATOMOVÁ FYZIKA JADERNÁ FYZIKA 17. OCHRANA PŘED JADERNÝM ZÁŘENÍM Autor: Ing. Eva Jančová DESS SOŠ a SOU spol. s r. o. OCHRANA PŘED JADERNÝM ZÁŘENÍM VLIV RADIACE NA LIDSKÝ ORGANISMUS. 1. Buňka poškození

Více

1. ročník Počet hodin

1. ročník Počet hodin SOUSTAVY LÁTEK A JEJICH SLOŽENÍ rozdělení přírodních látek a vlastnosti chemických látek soustavy látek a jejich složení STAVBA ATOMU historie pohledu na atom složení a struktura atomu stavba atomu VELIČINY

Více

Chemická kinetika. Chemické změny probíhající na úrovni atomárně molekulové nazýváme reakční mechanismus.

Chemická kinetika. Chemické změny probíhající na úrovni atomárně molekulové nazýváme reakční mechanismus. Chemická kinetika Chemická reakce: děj mezi jednotlivými atomy a molekulami, při kterých zanikají některé vazby v molekulách výchozích látek a jsou nahrazovány vazbami v molekulách nově vznikajících látek.

Více

KA 2340/4-8up Chemické laboratorní metody v analýze potravin H1CL. Studijní podklady

KA 2340/4-8up Chemické laboratorní metody v analýze potravin H1CL. Studijní podklady KA 2340/4-8up Chemické laboratorní metody v analýze potravin H1CL Studijní podklady Téma: Principy enzymových metod v analýze potravin živočišného původu Vypracovala Prof. MVDr. Lenka Vorlová, Ph.D. Úvod:

Více

Metabolismus bílkovin. Václav Pelouch

Metabolismus bílkovin. Václav Pelouch ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Metabolismus bílkovin Václav Pelouch kapitola ve skriptech - 3.2 Výživa Vyvážená strava člověka musí obsahovat: cukry (50 55 %) tuky (30 %) bílkoviny (15 20 %)

Více

SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU

SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU Příloha č. 2 ke sdělení sp.zn.sukls188660/2011 SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU 1. NÁZEV PŘÍPRAVKU Milgamma N 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Thiamini hydrochloridum 100 mg Pyridoxini hydrochloridum 100

Více

STŘEDNÍ ŠKOLA INFORMATIKY A SLUŽEB ELIŠKY KRÁSNOHORSKÉ 2069 DVŮR KRÁLOVÉ N. L.

STŘEDNÍ ŠKOLA INFORMATIKY A SLUŽEB ELIŠKY KRÁSNOHORSKÉ 2069 DVŮR KRÁLOVÉ N. L. STŘEDNÍ ŠKOLA INFORMATIKY A SLUŽEB ELIŠKY KRÁSNOHORSKÉ 2069 DVŮR KRÁLOVÉ N. L. Obor Aplikovaná chemie: 28 44- M/01 ŠVP Aplikovaná chemie, ochrana životní prostředí, farmaceutické substance Maturitní témata

Více

NAŘÍZENÍ KOMISE (EU) /... ze dne , kterým se mění nařízení (ES) č. 847/2000, pokud jde o definici pojmu podobný léčivý přípravek

NAŘÍZENÍ KOMISE (EU) /... ze dne , kterým se mění nařízení (ES) č. 847/2000, pokud jde o definici pojmu podobný léčivý přípravek EVROPSKÁ KOMISE V Bruselu dne 29.5.2018 C(2018) 3193 final NAŘÍZENÍ KOMISE (EU) /... ze dne 29.5.2018, kterým se mění nařízení (ES) č. 847/2000, pokud jde o definici pojmu podobný léčivý přípravek (Text

Více

Katedra chemie FP TUL www.kch.tul.cz

Katedra chemie FP TUL www.kch.tul.cz - poruchy trávení a metabolismu - poruchy způsobené nevhodnou výživou - poruchy způsobené nedostatečnou pohybovou aktivitou nepoměr energetického příjmu a výdeje 1. Příjem energie (určité živiny nebo skupiny

Více

Učební texty Univerzity Karlovy v Praze. Jana SlavíKová JitKa Švíglerová. Fyziologie DÝCHÁNÍ. Karolinum

Učební texty Univerzity Karlovy v Praze. Jana SlavíKová JitKa Švíglerová. Fyziologie DÝCHÁNÍ. Karolinum Učební texty Univerzity Karlovy v Praze Jana SlavíKová JitKa Švíglerová Fyziologie DÝCHÁNÍ Karolinum Fyziologie dýchání doc. MUDr. Jana Slavíková, CSc. MUDr. Jitka Švíglerová, Ph.D. Recenzovali: prof.

Více

Farmakoterapie Alzheimerovy nemoci

Farmakoterapie Alzheimerovy nemoci Farmakoterapie Alzheimerovy nemoci Osnova Úvod Cholinergní mechanismy u Alzheimerovy nemoci Inhibitory acetylcholinesterázy Memantin Výhledy do budoucna Původ názvu Alzheimerova nemoc AD je pojmenována

Více

HEMOFILIE - DIAGNOSTIKA A LÉČBA V SOUČASNOSTI

HEMOFILIE - DIAGNOSTIKA A LÉČBA V SOUČASNOSTI HEMOFILIE - DIAGNOSTIKA A LÉČBA V SOUČASNOSTI Patofyziologie hemofilie Deficit koagulačního faktoru VIII (hemofilie A) nebo IX (hemofilie B), jeho dysfunkce nebo přítomnost jeho inhibitorů vede k poruše

Více

ENZYMY. Enzymy - jednoduché nebo složené proteiny, které katalyzují chemické přeměny v organismech

ENZYMY. Enzymy - jednoduché nebo složené proteiny, které katalyzují chemické přeměny v organismech ENZYMY Enzymy - jednoduché nebo složené proteiny, které katalyzují chemické přeměny v organismech Šest hlavních kategorií enzymů: EC 1 Oxidoreduktasy: katalyzují oxidačně/redukční reakce EC 2 Transferasy:

Více

Chelatometrie. Stanovení tvrdosti vody

Chelatometrie. Stanovení tvrdosti vody Chelatometrie Stanovení tvrdosti vody CHELATOMETRIE Cheláty (vnitřně komplexní sloučeniny; řecky chelé = klepeto) jsou komplexní sloučeniny, kde centrální ion je členem jednoho nebo více vznikajících kruhů.

Více

Ústřední komise Chemické olympiády. 55. ročník 2018/2019 NÁRODNÍ KOLO. Kategorie E. Řešení praktických částí

Ústřední komise Chemické olympiády. 55. ročník 2018/2019 NÁRODNÍ KOLO. Kategorie E. Řešení praktických částí Ústřední komise Chemické olympiády 55. ročník 2018/2019 NÁRODNÍ KOLO Kategorie E Řešení praktických částí PRAKTICKÁ ČÁST 50 BODŮ Úloha 1 Stanovení Ni 2+ a Ca 2+ ve směsi konduktometricky 20 bodů 1) Chemické

Více

UNIVERZITA PARDUBICE

UNIVERZITA PARDUBICE UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko technologická Katedra analytické chemie Licenční studium chemometrie na téma Využití tabulkového procesoru jako laboratorního deníku Vedoucí licenčního studia Prof.

Více

SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU

SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU Příloha č. 2 k rozhodnutí o prodloužení registrace sp.zn. sukls17735/2009 SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU 1. NÁZEV PŘÍPRAVKU GUAJACURAN 5% injekční roztok 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Guaifenesinum

Více