Přehled stanovení lipofilních vitaminů v potravinách a krmivech

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "Přehled stanovení lipofilních vitaminů v potravinách a krmivech"

Transkript

1 Přehled stanovení lipofilních vitaminů v potravinách a krmivech Michal Douša, Ecochem a.s., Dolejškova 3, Praha, michal.dousa@ecochem.cz Summary The determination of fat-soluble vitamins (not counting vitamin K) in the animal feeds and foods includes several consecutive steps: sample preparation, alkaline hydrolysis of sample, extraction of vitamins from saponified matrix, cleanup of extract and HPLC separation. Vitamins are chemically unstable and its biological activity decreases in the presence of hydro peroxides, air, light, moisture, mineral acids, heavy metals and additional oxidants. All operations with vitamin solutions and vitamin-containing materials should be carried out in subdued light and as far as possible in low actinic amber glassware. All the above-mentioned factors are the reason of high value of interlaboratory standard deviation of determination of fat-soluble vitamins. The samples of animal feeds containing fat-soluble vitamins must be protected from direct sunlight, excessive heat, and too moisture during transport, storing and sample preparation in the laboratory. Distribution of the different forms of vitamins in feeds and foods is not uniform as for size and fortified feed has the tendency to separate or agglomerate during handling. In face of the present facts the sample procedure has to be modified - the size of aggregated sample would be greater than the usual. The analytical method would not miniaturize by using smaller sample weight and volumes. The saponification is routinely used to extract fat-soluble vitamins from feeds. The fatsoluble vitamins are not extracted quantitatively from fortified feed and food with only organic solvent. The coating must be firstly penetrated by treatment with alkali and this is one of the reasons for the use of alkaline hydrolysis in the analysis of feeds and foods. All vitamin esters and hydroxylated xanthophylls are converted to the alcohol (retinol, tocopherol), fats (lipids and phospholipids) are converted to salt of fat acids (soaps) and glycerol and a large number of nature pigments, antioxidants and others substances are converted to water-soluble substances. Soaps can be separated from the fat-soluble vitamins by extraction with organics solvent. Alkali hydrolysis is carried out by ethanolic KOH in presence of antioxidants under reflux in the special hydrolysis apparatus at 70 C and operating time is 30 minutes. The amount of alcoholic KOH solution required is dependent on the fat content in sample. A rough guide is to use 5 ml of 60 % aqueous KOH and 15 ml of alcohol per 1 g of fat in sample. During hydrolysis is introduced a slow stream of nitrogen into the saponification flask and so is the medium saturated and present vitamins are protected against aerial oxidation during boiling. Vitamin A and vitamin D are 1

2 stable in presence of alkali and conversely is unstable in presence of acids, which are promoters of its isomerization. ). This problem can be solved by cold saponification (overnight) at ambient temperature. The extraction with organic solvent is one of the larges sources of errors in fat-soluble vitamin analysis and also one of the most costly and laborious steps. The carotenoids, fat-soluble vitamins, sterols, etc., which constitute the unsaponifiable matter, are extractable from the saponification digest by liquid-liquid extraction using water-immiscible organics solvents. The fatty acids (exactly their salts) and glycerol are not extractable under alkaline conditions. Recently, fat-soluble vitamins are extracted with various hydrocarbon organics solvents, e.g. diethylether, petrol ether or hexane. Fat-soluble vitamins are readily extracted by hexane from aqueous ethanol on addition of water. The ethanol-water-soap mixture in the digest tends to behave similarly to a hydrocarbon solvent, decreasing the affinity of the fat-soluble vitamins to the organics phase (distribution constant is too much low). In the case, the addition of water has less effect and the efficiency of extraction with hexane is poor. The advantage of HPLC method is separation of fat-soluble vitamins from the other components of matrix which are extracted to non-polar solvents and therefore it is not necessary the clean up of crude extract. For the separation of fat-soluble vitamins can be used the normal and reverse phase. Advantages of reversed-phase systems to normal-phase chromatography include following: less sensitivity to changes in retention time due to presence of water; more stable to small changes in mobile phase composition; more quickly equilibrated to mobile phase composition changes, permitting use of gradients and capability of resolving compounds with a wide range of polarities. The sequence of separations of vitamins is depended on used stationary phase. The spectrofotometric, fluorimetric or electrochemical detector can be used for the detection of fat-soluble vitamins. 1. Úvod K lipofilním vitaminům se řadíme všechny účinné formy vitaminu A, vitaminu E, vitaminu D a vitaminu K. Fyzikálně chemické vlastnosti těchto vitaminů již byly dostatečně popsány a nejsou předmětem této přednášky. Za zmínku stojí jen jejich charakteristická vlastnost a to je rozpustnost v tucích a nepolárních (hexan, diethylether, chlorované uhlovodíky) a středně polárních rozpouštědlech (alkoholy, acetonitril, tetrahydrofuran). Analýze těchto látek 2

3 v potravinách a krmivech bylo věnováno stovky publikací ve vědeckých časopisech, přesto není analytika těchto vitaminů vůbec jednoduchá a neexistují zcela jednoznačné postupy stanovení. 2. Metody stanovení Mezi největší úskalí analytiky lipofilních vitaminů patří: a) distribuce vitaminů ve zkušebním vzorku (zejména u vitaminu A); b) přítomnost několika forem vitaminů (vitamerů) a previtaminů ve vzorku (zejména u vitaminu E, u kterých je možná tvorba až 8 polohových isomerů tokoferolů a tokotrienolů); c) nízké obsahy vitaminů ve vzorku (zejména u vitaminu D a K); d) chemická labilita všech těchto vitaminů (citlivé vůči vzdušné oxidaci, fotolabilita, teplota) 1, 2 a případné ztráty během analýzy (isomerace) a konečně nízká výtěžnost při extrakci těchto vitaminů. Vzhledem k výše uvedenému výčtu se používají v současné době v analytice vitaminů téměř výhradně separační metody, zejména technika HPLC. Proto dále budu diskutovat pouze možné zdroje chyb analytiky lipofilních vitaminů a jejich eliminace na co nejmenší míru. 2.1 Příprava extraktu Hydrolýza Při analýze vitaminu A,D a E se používá k převedení vitaminů do roztoku výhradně alkalická hydrolýza a to buď za tepla nebo za studena. Alkalickou hydrolýzou dochází k uvolnění vitaminů A z jeho obdukovaných forem, estery všech forem vitaminů jsou přeměněny na alkoholy, tuky (glyceridy a fosfolipidy) jsou hydrolyzovány na volné mastné kyseliny a glycerol, které mohou být separovány od vitaminů extrakcí organickými rozpouštědly. 3 Velké množství přítomných přírodních barviv (xanthofilly, karotenoidy) a steroly jsou převáděny na ve vodě rozpustné frakce těchto látek. Na druhé straně však hydrolýzou ztrácíme přehled o přítomnosti původních forem vitaminů a stanoví se pouze suma volných alkoholů. Byly učiněny pokusy o enzymatickou hydrolýzu, 4,5 alkoholýzu 6 nebo přímou extrakci, 7, 8,9 ale tyto postupy dosahují velmi malé výtěžnosti a nejsou obecně použitelné pro všechny vzorky. K zamezení ztrátám vitaminů během alkalické hydrolýzy se používají antioxidační činidla, 10, 11 nebo se reakční směs probublává dusíkem nebo kombinací obojího. Alternativou k hydrolýze za tepla je hydrolýza za studena. Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým nebo methanolickým roztokem hydroxidu draselného po dobu hodin za nepřístupu světla na rotační třepačce. Výhodou studené hydrolýzy je ta, že nedochází k isomeraci jednotlivých forem vitaminů (vitamin A a D) nebo je potlačena na minimum. Další výhodou je možnost použití větší navážky vzorku a tudíž snížit směrodatnou odchylku stanovení vlivem nehomogenity zkušebního vzorku. 3

4 Při hydrolýze vitaminu D je nutné řešit problém fotolability vitaminu D a jeho snadné oxidace vzdušným kyslíkem. Konečně je nutno uvést rovněž přechod vitaminu D na příslušný previtamin, kdy dochází k ustavení rovnováhy mezi cholekalciferolem a prekalciferolem 3, resp. ergokalciferolem a prekalciferolem 2 vlivem isomerace. Isomerace vitaminu D na jeho previtamin je katalyzována zejména zvýšenou teplotou při alkalické hydrolýze. 12 Aktuální obsah vitaminu D zůstává konstantní pouze v případě, že rovnováha mezi vitaminem D a prekalciferolem je ustálena a je-li teplota menší než 20 o C, kdy rychlost isomerace je zanedbatelná. Proto se tento problém řeší studenou alkalickou hydrolýzou po dobu 12 až 16 hodin (přes noc) za laboratorní teploty. 13 Vitamin K je velmi nestabilní v alkalickém prostředí a rychle se rozkládá a proto se alkalická hydrolýza při stanovení vitaminu K nepoužívá. Používá se většinou přímé extrakce nepolárními nebo středně polárními rozpouštědly. Výběr rozpouštědla závisí pak výhradně na matrici vzorku. Dobrou alternativou k alkalické hydrolýze je kyselá hydrolýza s následnou enzymatickou hydrolýzou triglyceridů lipásou, která byla při stanovení vitaminu K často aplikována. 14,15,16 Nejvíce se používá při stanovení vitaminu K přímá extrakce různými organickými rozpouštědly: petrolether diethylether (1+1) po předchozí srážení proteinů ethanolem, 17 dichlormethan isooktan (2+1) po předchozím promícháním matrice s koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného a methanolem, 18 nebo přímá extrakce roztokem chloroform methanol (2+1) 19 nebo chloroform 2-propanol 20 nebo směs 2-propanolu a n-hexanu. 21 Nejčastěji používaným rozpouštědlem pro přímou extrakci vitaminu K je n- hexan, který byl použit k extrakci vitaminu K z olejů a margarinů. 22 V případě zeleniny a obilovin se používá extrakce chloroformem a methanolem, 23 acetonem a n-hexanem. 24 Ke zvýšení polarity n-hexanu byl dále použit methanol, 2-propanol, aceton nebo ethanol. 25, Extrakce a přečištění extraktu Vitaminy jsou extrahovány ze zmýdelněných vzorků různými rozpouštědly, ale nejčastěji diethyletherem, petroletherem nebo uhlovodíky jako n-hexan. Extrakce vitaminů je jeden z nejdražších, nejpracnějších kroků a zdrojem největších chyb při analýzách lipofilních vitaminů. Ačkoli technika extrakce měla dlouhou historii, bylo vypracováno několik průkazných modelů k hledání optimálních poměrů při extrakci. Jako organická rozpouštědla se používají diethylether, 27 petrolether, 28 n-hexan, diisopropylether - petrolether, % octan ethylnatý v n- hexanu. 30 4

5 Z extrakčních pokusů vyplývá, že retinol je snadno extrahován do n-hexanu z vodnoethanolického roztoku s přídavky vody. V případě přítomnosti tuku dochází k hydrolýze tuku na soli mastných kyselin (mýdla) a pak směs voda-ethanol-mýdlo se chová jako uhlovodíkové rozpouštědlo a konkuruje tak organickému rozpouštědlu, dochází ke snížení výtěžku extrakce. Snižování obsahu ethanolu přídavkem vody do extrakčního prostředí není již tak účinné. Účinnost extrakce n-hexanem, zkoušena na modelových extrakčních podmínkách, je ovlivněna koncentrací mastných kyselin v hydrolyzátu, jejich obsah proto musí být kontrolován. Neúspěch v analýze vitaminů je tedy limitován obsahem mastných kyselin (obsahu tuku ve vzorku) a koncentrací ethanolu v hydrolyzátu pře vlastní extrakcí. 31 Vliv obsahu tuku v hydrolyzátu na výtěžek extrakce vitaminu A je ukázán na obrázku č.1 (cit. 32 ). Abychom dosáhly vysokých výtěžků vitaminu A a vitaminu E ze zmýdelněné matrice do organického rozpouštědla, je nutné dodržet přesně koncentraci ethanolu ve vodné fázi mezi 30 a 40 % (cit. 33 ). Pro vitamin D je optimální koncentrace ethanolu okolo 50 %, výtěžek extrakce pro vitamin K není příliš závislý na objemovém zlomku ethanolu. Závislost výtěžku extrakce vitaminu A, D, K a Edo n-hexanu na objemovém zlomku ethanolu v extrakční směsi je ukázána na obrázku č. 2, 3, 4 a 5. Za přítomnosti mýdel protřepáváním organické a vodno-ethanolické fáze dochází ke vzniku emulzí, zejména za absence alkoholu a pak jsou promývací kroky složité, 34 tvorba emulze se pak potlačuje přídavkem neutrálních solí do reakčního prostředí (chlorid sodný). Výtěžnost, % 0,85 0,75 0,65 0,55 0,45 0,05 0,25 0,45 0,65 0,85 1,05 1,25 obsah tuku v extraktu, g Obrázek č. 1 Závislost výtěžku extrakce retinolu na obsahu tuku v extrakčním prostředí do hexanu (pro dvě koncentrační hladiny retinolu; m.j./l, m.j./l ) 5

6 1 Výtěžnost, % 0,8 0,6 0,4 0,2 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 ϕ, ethanol Obrázek č. 2 Závislost výtěžku extrakce retinolu na objemovém zlomku ϕ ethanolu v extrakčním prostředí do hexanu (pro tři koncentrační hladiny vitaminu A; m.j./l, m.j./l, m.j./l) 1,00 Výtěžnost, % 0,90 0,80 0,70 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 ϕ, ΕtΟΗ Obrázek č. 3 Závislost výtěžku extrakce ergocalciferolu (0,5 mg/l) na objemovém zlomku ϕ ethanolu v extrakčním prostředí do hexanu. 6

7 1,05 Výtěžnost, % 1,00 0,95 0 0,1 0,2 0,3 ϕ, EtOH Obrázek č. 4 Závislost výtěžku extrakce vitaminu K1 (4,8 mg/l) na objemovém zlomku ϕ ethanolu v extrakčním prostředí do hexanu. Hrubý extrakt vitaminů K nemůže být použit k přímé analýze na HPLC protože obsahy vitaminů jsou mnohonásobně nižší než obsahy přítomných lipofilních sloučenin v extraktu. Proto se musí zařadit přečištění extraktu. Byly popsány metody SPE, semipreparativní HPLC 35 a enzymatická hydrolýza triglyceridů lipásou, 36, 37, 38 přičemž je za tento krok možné zařadit ještě jednu z předcházejících technik přečištění. Při SPE 39 i semipreparativní technice se většinou využívá kombinace normální a reverzní fáze, čímž je zaručeno dokonalé odstranění lipidů. 1,2 Výtěžnost, R 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 ϕ, ethanolu Obrázek č. 5 Závislost výtěžku extrakce α-tokoferolu na objemovém zlomku ϕ ethanolu v extrakčním prostředí do hexanu (pro dvě koncentrační hladiny α-tokoferolu; - 10,5 mg/l, - 22,2 mg/l) 7

8 2.1.3 Analytická koncovka stanovení Vitamin A K separaci vitamerů A se může použít jak separace na normální fázi tak separace na reverzní fázi. Separace na normální fázi, nejčastěji silikagelu, umožňuje separaci až šesti cis- trans - isomerů vitaminu A (11,13-di-cis-, 13-cis-, 11-cis-, 9,13-di-cis, 9-cis a all-trans-retinolu). 40 Jako mobilní fáze se používá nepolární rozpouštědlo, nejčastěji n-hexan nebo cyklohexan, s přídavkem polárního solventu (2-propanol, ethanol). Separace isomerů vitaminu A na silikagelu za použití mobilní fáze n-hexanu byla již optimalizována a k modifikaci mobilní fáze byly použity methylenchlorid, isopropylether a chloroform. 41 Silikagel jako sorbent neadsorbuje příliš silně glyceridy a mastné kyseliny a kolona může být po každé analýze promyta 25 % octanem ethylnatým v n-hexanu. 42 Problém deaktivace silikagelu, adsorpcí polárních látek z extraktu, se může úspěšně vyřešit předřazením předkolony se stejnou náplní jako má analytická kolona. Při separaci na reverzní fázi se používá jako stacionární fáze nejčastěji oktadecyl (C 18 ) a různě modifikované mobilní fáze methanol/voda nebo acetonitril/voda. Separace na reverzní fázi má určitá omezení - nedochází k separaci cis-trans - isomerů vitaminu A a stanoví se suma obsahu obou isomerů. Různé metody stanovení používají pouze různé rozměry analytických kolon a modifikované mobilní fáze. 43,44,45 K detekci retinolu mohou být použity všechny tři typy detekce v HPLC - spektrofotometrický, fluorescenční a elektrochemický detektor. Při spektrofotometrické detekci je absorpční maximum retinolu a jeho esterů 325 nm a mez detekce se pohybuje kolem 2 ng. 46 Většina lipidů mám maximum absorpce pod 220 nm, konjugované mastné kyseliny mají maximum absorpce nm (dieny) a nm (trieny). 47 Glyceridy a steroly mají maximum absorpce při nm, ale jejich absorpční koeficienty jsou poměrně nízké. Fluorescenční excitační spektra retinolu a jeho esterů korespondují s absorpčními spektry a maximum se pohybuje mezi nm; emisní maximum se pohybuje od 470 do 490 nm 48 a detekční limit je 0,5 ng. Elektrochemická amperometrická detekce retinolu je méně selektivní než detekce spektrofotometrická, detekční limity jsou srovnatelné Vitamin E K separaci vitaminů se může použít jak separace na normální fázi tak separace na reverzní fázi. Separace tokoferolů na reverzní fázi je limitována separací β a γ tokoferolů, kdy nedochází k jejich separaci. Při separaci na normální fázi může být separováno až 9 tokoferolů a 8

9 tokotrienolů v isokratickém módu n-hexan tetrahydrofuran (99,5+0,5), 50,51 n-hexan diethylether (95+5) 27 nebo n-hexan 1,4-dioxan (97+3). 52 Za běžných podmínek separace na normální fázi je pořadí separace následující: α-tokoferol, α-tokotrienol, β-tokoferol, γ-tokoferol, β-tokotrienol, γ-tokotrienol, δ-tokoferol a δ-tokotrienol. Na reverzní fázi se separují tokoferoly v pořadí: δ-tokotrienol, (γ+β)-tokotrienol, α- tokotrienol, δ-tokoferol, (γ+β)-tokoferol a α-tokoferol. Je zřejmé, že na reverzní fázi nedochází k separaci γ- a β- tokoferolu a γ- a β- tokotrienolu. Separace těchto kritických tokoferolů a tokotrienolů bylo pak dosaženo na polymerní koloně. 53 Absorpční maxima tokoferolů se pohybují od 292 do 298 nm a detekční limity se pohybují od 50 do 130 ng. 54 Fluorescenční detekce je ve srovnání se spektrofotometrickou detekcí citlivější a detekční limity jsou o jeden řád nižší. 27 Excitační a emisní maximum volného alkoholu tokoferolu je 295 nm respektive 330 nm. 55 Fluorescenční výtěžky analogů tokoferolů silně závisí na použitém solventu a polární solventy (methanol, acetonitril, diethylether) poskytují vyšší fluorescenční výtěžky ve srovnání s n-hexanem. Fluorescenční odezvy příslušných tokotrienolů jsou velmi podobné a ke kalibraci nejsou potřebné standardy a vyhodnocení se provádí na příslušné tokoferoly. V případě použití chlorovaných uhlovodíků je pak fluorescence zanedbatelná. 56 Fluorescenční výtěžky esterů analogů tokoferolů jsou velmi nízké a α-tokoferolacetát vykazuje 0,5 % hodnotu ve srovnání s α-tokoferolem. Tokoferol acetát vykazuje excitační a emisní maxima 285 nm resp. 310 nm. Elektrochemická detekce tokoferolu je 20 krát citlivější než fluorimetrická detekce, 57 ale nemůže být použita k detekci esterů tokoferolu z důvodu absence hydroxylové skupiny. Tokoferoly jsou oxidovatelné na uhlíkové elektrodě při potenciálu + 0,7 V (proti Ag/AgCl referenční elektrodě) a to v obou módech - v reverzním módu přímo, v normálním módu po přídavku soli do mobilní fáze nebo postkolonovém přídavku elektrolytu do mobilní fáze, nejčastěji 0,1 M chlorečnanu sodného v solventu ethanol methanol Vitamin D Stanovení vitaminu D představuje komplikovaný chromatografický problém, jehož podstata spočívá ve velmi nízkém obsahu tohoto vitaminu v potravinách a krmivech. Druhý problém stanovení vitaminu D v krmivech je nutnost separace vitaminu D od přítomných sterolů, karotenoidů, vitaminů a dalších přítomných látek, které jsou ve značném přebytku. Proto se používají různé předseparační techniky - srážení sterolů digitoninem, 59 adsorpční kolonová chromatografie na oxidu hlinitém, 60 technika SPE na silikagelu 61 nebo reverzní fázi. 28 9

10 Vlivem alkalické hydrolýzy dochází k isomeraci vitaminu D. Při separaci vitaminu D na normální i reverzní fázi dochází k separaci obou previtaminů od svých vitaminů, 62 ale na normální fázi nedochází k separaci vitaminu D 2 a vitaminu D 3. Pořadí separace previtaminů, vitaminů a provitaminů D na reverzní fázi C 18 je následující: previtamin D 2, vitamin D 2, previtamin D 3, vitamin D 2, provitamin D 2, provitamin D K vyřešení tohoto problému bylo navrženo přidávat aditiva (dusičnan stříbrný) do mobilní fáze 64 nebo jednoduše separovat oba vitaminy na reverzní fázi. Přestože dochází k separaci vitaminu a previtaminu D, celkový obsah vitaminu D nelze určit pouhým součtem obou obsahu vitaminu a previtaminu. Někteří autoři se pokoušeli exaktně popsat isomeraci vitaminu D na previtamin za podmínek teplé alkalické hydrolýzy a došli k závěru, že poměr previtaminu a vitaminu D zůstává konstantní za konstantních podmínek hydrolýzy, ale tento poměr se mění vlivem matrice a musí se zavádět určité korekční faktory. 65 Tento problém se obchází isomerací previtaminu D a vitaminu D na isotachysterol, který se pak separuje jako jediný pík příslušného vitaminu. Isomerace vitaminu D se provádí chloridem antimonitým. 66 Zvýšení účinnosti isomerace se dosáhne použitím nasyceného roztoku chlorovodíku v butanolu při teplotě 5 o C. 67 Isotachysterol je pak kvantifikován při vlnové délce 301 nm, což je výhodnější, protože ve většině případech odpadají spektrální interference na analytické koloně. Absorpční maximum isotachysterolu je 288 nm, ale přesto se volí vlnová délka detekce 301 nm právě kvůli již výš uvedeným spektrálním interferencím. Poměr hodnot absorbancí při 288 nm a 301 nm je 1,3, což se může s výhodou použít ke kontrole čistoty píku. Separace isotachysterolu vitaminu D 2 a isotachysterolu D 3 probíhá na koloně s reverzní fází C 18 (4,6 x 25 cm, 5 µm) s mobilní fází acetonitril methanol (90+10). Všechny výše uvedené problémy při analýze vitaminu D se řeší použitím off-line multidimensionální HPLC metody, kdy se použije semipreparativní kolona s normální fází k frakcionaci vitaminu D. Frakce vitaminu D je podrobena dalšímu přečištění na silikagelu a následně po odpaření k suchu, rozpuštění v příslušném rozpouštědle, separaci a kvantifikaci na reverzní fázi. 68 Off-line multidimensionální HPLC metody stanovení vitaminu D v různých matricích byly modifikovány mnoha autory. 33,69,70,71,72,73 Chromatogram separace vitaminu D 3 v premixech doplňkových látek je ukázán na obrázku č

11 Obrázek č. 6 Semipreparace vitaminu D 2 a D 3 na koloně Semiprep Silica 300x7,8 mm, mobilní fáze 1,5 % 2-propanolu v cyklohexanu. Analytická kolona - NovaPak C x4,6 mm, mobilní fáze acetonitril methanol (50+50). Vzorek premixu, obsah vitaminu D m.j./kg, vitamin D 2 použit jako vnitřní standard Vitamin K K separaci vitaminu K se používá jak normální tak reverzní fáze. Na normální fázi dochází k separaci cis- a trans-phylloquinonu od příslušných menaquinonů (MK-4 až MK-10), ale nedochází k separaci jednotlivých menaquinonů. 74,75 K separaci isomerů cis- a transphylloquinonu na silikagelu se musí zvolit poněkud odlišná mobilní fáze isooktan dichlormethan - 2-propanol ( ,02). 18 Vzhledem k silné retenci vitaminu K na reverzní fázi se musí používat jako mobilní fáze samotná organická rozpouštědla (methanol nebo acetonitril) nebo tato rozpouštědla s přídavkem dichlormethanu: methanol-dichlormethan (80+20), 76, 77 nebo methanol dichlormethan (90+10). 36,38 V případě elektrochemické detekce se musí zvýšit vodivost mobilní fáze přídavkem vody nebo pufru: methanol 2,5 mm octanový pufr (99+1). 78 UV detekce je použitelná při stanovení vitaminu K pouze v případě fortifikovaných matric vitaminem K při 248 nm nebo 270 nm, protože molární absorpční koeficient vitaminů K je nízký. Mez detekce se pohybuje pouze okolo 1 ng v nástřiku. 11

12 S úspěchem může být použita elektrochemická detekce, která je selektivnější proti UV detekci a rovněž mez stanovitelnosti je daleko nižší. První aplikace využívali redukce chinonu na hydrochinon, ale tento systém je velmi citlivý k přítomnému kyslíku v mobilní fázi. 21 Tento problém byl vyřešen zavedením tzv. duálního elektrodového systému. Na první elektrodě je chinon redukován na hydrochinon a tento hydrochinon je bezprostředně oxidován na chinon na druhé elektrodě a měří se výsledný proud. Hlavní výhodou tohoto systému je, že eliminuje vliv přítomného kyslíku v systému. Zvýšení citlivosti detekce se dosahuje zařazením guard cely za chromatografické čerpadlo, čímž dochází k odstranění kovových iontů jejich oxidací. 79 Mez detekce se pohybuje okolo 50 pg v nástřiku. Mobilní fáze musí obsahovat určité množství vody nebo alkoholu ke zvýšení vodivosti mobilní fáze jako elektrolytu, 16 nebo neutrální soli: acetonitril dichlormethan 25mM NaClO 4 (95+5+5). Jako pracovní elektroda k detekci byla použita argentchloridová elektroda při pracovním potenciálu - 1,1 V (proti SKE). Pro velmi nízké hladiny vitaminu K byla použita velmi selektivní fluorimetrická detekce hydronaphtochinonu po předchozí redukci chinonu. K redukci vitaminu K se používají tři způsoby redukce chemická redukce, 80 redukce elektrochemická 81,82 nebo fotochemická redukce. 83 Elektrochemická redukce se uskutečňuje zařazením elektrochemického detektoru jako postkolonový reaktor. Na fluorescenční výtěžky má malý vliv průtok mobilní fáze a koncentrace elektrolytu v mobilní fázi, naopak složení mobilní fáze ovlivňuje selektivitu i citlivost detekce. Mez detekce se pohybuje pod 25 pg v nástřiku. Tento způsob redukce není příliš reprodukovatelný z důvodu pasivace elektrody v systému. 84 Fotochemická degradace vitamerů K je založena na ozáření silným světlem, přičemž jedním z reakčních produktů je hydrochinon. Publikované hodnoty meze detekce jsou 150 pg vitaminu K v nástřiku Závěr Při stanovení lipofilních vitaminů můžeme identifikovat systematické pozitivní i negativní chyby, které je možno generalizovat bez ohledu na použitou analytickou koncovku. 86 Pozitivní chyby jsou spojené většinou s použitými standardy a to nízkou výtěžností při extrakci standardu do příslušného rozpouštědla (zejména vitamin A a vitamin E) a použití degradovaného standardu vitaminu (vitaminy K). Z těchto důvodů je nutné kontrolovat vždy kalibrační roztoky vitaminů, nejlépe spektrofotometricky na základě molárních absorpčních koeficientů vitaminů nebo 1 % A 1cm. Obsahy komerčně dodávaných standardů vitaminu A se pohybují od 50 % do 140 % rel. vzhledem k jejich aproximovaným hodnotám. Proto se přesná koncentrace roztoku standardu 12

13 vitaminu A musí stanovit po jeho zmýdelnění a extrakci do organického rozpouštědla spektrofotometricky s maximem mezi 324 nm až 327 nm. Koncentrace retinolu c A v m.j./g se vypočítá podle vzorce: c A 7 AV.. R = 10. 1% 0,3. A. m 1cm Pro výpočet koncentrace tokoforelu c E platí obdobná rovnice: c E 3 AV.. R = 10. 1% A. m kde A absorbance roztoku retinolu resp. tokoferolu, V je objem extraktu v organickém rozpouštědle v l, m je navážka příslušného standardu v g. Hodnoty 1cm 1% A 1cm jsou tabelovány a závisí na použitém rozpouštědle. Obdobně je možné postupovat pro ostatní vitaminy. K negativním chybám přispívá zejména: úprava vzorku mletím, drcením nebo nedokonalou homogenizací, ztráty při alkalické hydrolýze (isomerace, rozklad), nízká výtěžnost při extrakci vitaminů kapalina-kapalina a rozklad vitaminů při dalších operacích odpařování k suchu, rozpouštění. Tabulka č. 1 Přehled stanovení vitaminu A a vitaminu E Analyt Matrice HPLC kolona Mobilní fáze Detekce Citace Retinol palmitát celkový vitamin A celkový vitamin A celkový vitamin A celkový vitamin A celkový vitamin A celkový vitamin A Palmitát a acetát retinolu mléko LiChrosorb Si-60 hexan-diethylether, (98+2) UV 325 nm 42 potraviny µbondapak C18 methanol-voda, (90+10); 1 ml/min potraviny, krmiva margarín, máslo µbondapak C18 Vydac 201 TP C18 acetonitril-methanol-octan ethylnatý, ( ); 1 ml/min acetonitril-voda, (65+35); 1 ml/min krmiva hexan-chloroform, (3+2); 1 ml/min krmiva methanol-voda, (98+2); 1 ml/min UV 325 nm 87 UV 313 nm 88 UV 328 nm 89 FLD 330/470 nm (exc./em.) 90 UV 325 nm 91 margarin LiChrosorb Si-60 hexan-dioxan, (92+8) FLD 330/480 nm (exc./em.) sušené mléko µporasil hexan-ch 2 Cl 3, (92+8) UV 313 nm nebo FLD 340/450 nm (exc./em.)

14 Tabulka č. 1 Přehled stanovení vitaminu A a vitaminu E - pokračování retinol, tokoferol krmiva pro hlodavce LC-CN hexan 2-PrOH octová kyselina (99+1+0,02) UV 325/292 nm 93 α-ta krmiva Nucleosil C18 methanol voda (96+4) FLD 290/330 nm (ex./em.) α-,β-,γ-,δtokoferol, α-,β-,γtokotrieno l α-,β-,γ-,δtokoferol α-,γ-,δtokoferol, α-ta celkový α- tokoferol α-,β-,γ-,δtokoferol, α-,β-,γtokotrieno l α-,(β +γ)-,δtokoferol potraviny LiChrosorb Si-60 0,2 % 2-PrOH nebo 5 % diethylether v 50 % hexanu nasyceném vodou krmiva Si-60 n-hexan s přídavkem 0,08 % 2-propanolu krmivo pro ryby FLD 290/330 nm (ex./em.) UV 250/284 nm 96 Hypersil ODS methanol voda (96+4) UV 292 nm FLD / nm (IS α-tokol) krmiva LiChrosorb Si-60 0,1 % 2-PrOH v hexanu FLD 296/326 nm (ex./em.) rýžové otruby Supelcosil LC-Si isooktan-octan ethylnatýkyselina octová-2,2- dimethoxypropan, (98,15+0,9+0,85+0,1) potraviny Zorbax ODS methanol-dichlormethan obsahující 0,001 % triethylaminu-methanol, ( ) Poznámka: IS interní standard, TA tokoferol acetát Tabulka č. 2 Přehled stanovení vitaminu D a vitaminu K FLD 290/330 nm (ex./em.) FLD 290/330 nm (ex./em.) Analyt Matrice Semipreparativní HPLC Analytická HPLC Citace Vitamin Krmivo SupelcoSil LC-18, 5µm, 25x0,46 cm; 67 D 2, D 3 Premixy převedení na isotachysterol acetonitril-methanol (90+10); UV 301 nm 10M HCl v butanolu (5 o C) Vitamin D 3, pre-d 3 Krmivo pro ryby Vitamin D 3 mléko Radial-Pak cartridge - Resolve Silica hexan-2-proh, (99+1); UV 265 nm Vitamin D 2 nebo D 3 margarin, tuky a oleje LiChrosorb Si-60 7µm, 25x0,46 cm; hexan-2-proh-tetrahydrofuran, (98+1+1); UV 264 nm dvě kolony v sérii: HC ODS/PAH; 25x0,46 cm LC-18, 5µm; 15x0,46 cm; acetonitril-methanol-voda ( ) Radial-Pak cartridge - Resolve C18 methanol-tetrahydrofuran-voda, (93+2+5); UV 265 nm ChromSphere C18 acetonitril-chcl 3 -methanol, (91+6+3); UV 264 nm

15 Tabulka č. 2 Přehled stanovení vitaminu D a vitaminu K - pokračování Vitamin D 3 margarin, olej, mléko Polygosil 60 5µm, 30x0,8 cm; isooktan-chloroformtetrahydrofuran - isobutanol, ( ); UV 254 nm Vydac 201 TP54 C18 acetonitril-methanol-chcl 3, ( ); UV 264 nm 103 Vitamin D 3 dětská výživa Polygosil 60 5µm, 25x0,8 cm; isooktan-isobutanol, (99+1); UV 265 nm Hypersil ODS (dvě kolony zapojené v sérii) methanol; UV 265 nm 104 Vitamin D 2 nebo D 3 dětská výživa Radial-Pak cartridge - Resolve C18 (dvě kolony zapojené v sérii) methanol-tetrahydrofuran-voda, (92+2+6); UV 254 a 280 nm (dual) 61 Vitamin D 2 nebo D 3 sušené odtučněné mléko Partisil PAC; CH 2 Cl 2 ; UV 254 nm LiChrosorb-NH2 CH 2 Cl 2 -hexan-2-proh, ( ,2); UV 264 nm 105 K 3 premixy a krmiva LiChrosorb Si 60 5 µm, 250x3,2 mm THF-hexan (5+95) nebo chloroform - hexan (4+96); UV 251 nm 106 K 3 premixy a krmiva ODS-Hypersil 5 µm, 250x4,6 mm Ethanol-voda (6+4) 107 FL: Ex.:325, Em.: 425 nm po postkolonové redukci borohydridem sodným K 3 premixy a krmiva LiChrosorb Si 60 5 µm, 250x4,0 mm CH 2 Cl 2 (1,8 ml/min); UV 251 nm 108 K 3 premixy a krmiva Supelcosil LC-18, 5 µm, 250x4,0 mm methanol - voda (75+25) 109 FL Ex.:325, Em.: 425 nm po postkolonové redukci K 1, K 2, K 3 premixy a krmiva LiChrosorb Si 60 5 µm, 250x4,0 mm hexan - CH 2 Cl 2 (1,0 ml/min); UV 264 nm 110 K 3 krmivo pro krysy µbondapak C18 10 µm, 150x3,9 mm acetonitril - 25 mm NaClO 4 (90+10); 111 Phylloquin on ECD, Ag -0,75 V (SKE) sojový olej Supelcosil LC-18 methanol-acetonitril-voda, ( ); UV 270 nm 15 Phylloquin on potraviny Partisil-5-Silica 50 % voda saturovaná CH 2 Cl 2 /hexan, (15+85); UV 254 nm Spherisorb-5 C8 methanol+50 mm octanový pufr ph 3,0 (97+3) obsahující 0,1 mm EDTA; coulometrická detekce (redoxní mód), porézní grafitová elektroda, - 1,5 V 112 Vysvětlivky: A - po převedení vitaminu D na isotachysterol Literatura 1 Steuerle H.: Z. Lebensmittel- Unters.u.-Forsch. 181, 400, (1985). 15

16 2 Dann W.J.: Biochem.J. 26, 666 (1932). 3 Coley M.L.:J. Agric. 37, 742 (1954). 4 Bui M.H.: J.Assoc.Off. Anal.Chem. 70, 802 (1987). 5 Barnett S.A., Frick L.W., Baine H.M.: Anal. Chem. 52, 610 (1980). 6 Glass R.L.: Lipids 6, 919 (1971). 7 Desai I.D.: Vitamin E. A Comprehensive Treatise (L.J. Machlin ed.), strana 67, Marcel Dekker, New York Woollard D.C., Woollard G.A.: N.Z.J. Dairy Sci. Technol. 16, 99 (1981). 9 Blott A. D., Woollard D. C.: J. Micronutr. Anal. 2, 259 (1986). 10 DeVries J.W., Egberg D.C., Heroff J.C.: Liquid Chromatographic Analysis of Food and Beverages, strana 477, Vol.2 (G.Charalambous, edice.) Academic Press, New York (1979). 11 VDLUFA (Verband Deutscher Landwirtschaftlicher Untersuchungs und Forschungsanstalten), kapitola , Methodenbuch Band III, 2.Erg Hanewald K.H., Mulder F.J., Keuning K.J.: J. Pharm. Sci. 57, 1308 (1968). 13 Thompson J.N., Maxwell W.B., Abbe M.L.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 60, 998 (1977). 14 Bueno M.P., Villalobos M.C.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 66, 1063 (1983). 15 Zonta F., Stancher B.: J. Chromatogr. 329, 257 (1985). 16 Isshiki H., Suzuki Y., Yonekubo A., Hasegawa H., Yamamoto Y.: J. Dairy Sci. 71, 627 (1988). 17 Manes J.D., Fluckiger H.B., Schneider D.L.: J. Agric. Food Chem. 20, 1130 (1972). 18 Hwang S.-M.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 68, 684 (1985). 19 Haroon Y., Shearer M.J., Rahim S., Gunn W.G., McEnery G., Barkhan P.: J. Nutr. 112, 1105 (1982). 20 Landen W.O., Eitenmiller R.R., Soliman A.M.: J. Food Comp. Anal. 2, 140 (1989). 21 Canfield L.M., Hopkinson J.M.: J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 8, 430 (1989). 22 Ferland G.: Nutr. Rev. 56, 223 (1998). 23 Jakob E., Elmadfa I.: Food Chem. 56, 87 (1996). 24 Gijsbers B.L.M.G., Jie K.-S. G., Vermeer C.: Br. J. Nutr. 76, 223 (1996). 25 Schurgers L.J., Geleijnse J.M., Grobbee D.E., Pols H.A.P., Hofman A., Witteman J.C.M., Vermeer C.: Journal of Nutritional and Environmental Medicine 9, 115 (1999). 26 Udagawa M., Nakazoe J.-I., Murai T.: Comp. Biochem. Physiol. 106B, 297 (1993). 27 Thompson J.N., Hatina G.: J.Liquid Chromatogr. 2, 237 (1979). 28 Reynolds S.L., Judd H.J.: Analyst 109, 489 (1984). 29 Indyk H.E.: Analyst 113, 1217 (1988). 30 Ueda T., Igarashi O.: J. Micronut. Anal. 3, 185 (1987). 31 Thompson J.N.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 69, 728 (1986). 32 Nepublikované výsledky autora. 33 Thompson J.N., Hatina G., Maxwell W.B., Duval S.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 65, 624 (1982). 34 Mulder F.J.: Recl.Trav. Chim. Pays Bas 73, 626 (1954). 35 Haroon Y., Shearer M.J., Rahim S., Gunn W.G., McEnery G., Barkhan P.: J. Nutr. 112, 1105 (1982). 36 Cook K.K., Mitchell G.V., Grundel E., Rader J.I.: Food Chem. 67, 79 (1999). 37 Indyk H.E., Woollard D.C.: Analyst. 122, 465 (1997). 38 Indyk H.E., Woollard D.C.: J. AOAC Int. 83, 121 (2000). 39 Davidson K.W., Booth S.L., Dolinokowski G.G., Sadowski J.A.: J. Agric. Food Chem. 44, 980 (1996). 16

17 40 Stancher B., Zonta F.: J. Chromatogr. 287, 353 (1984). 41 Landers G.M., Olson J.A.: J. Chromatogr. 291, 51 (1984). 42 Thompson J.N., Hatina G., Maxwell W.B.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 63, 894 (1980). 43 Santoro M.I.R.M, Magalhaes J.F., Hackmann E.R.M.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 65, 619 (1982). 44 Rueckemann H.: Z. Lebensm.-Unters. -Forsch. 173, 113 (1981). 45 Faugere J. G.: Ann. Falsif. Expert. Chim. Toxicol. 79, 293 (1986). 46 Bhat P.V., Sunderesan P.R.: CRC Crit. Rev. Anal. Chem. 20, 197 (1988). 47 Gunstone F.D., Norris F.A.: Lipids in Foods. Chemistry, Biochemistry and Technology, Pergamon Press, Oxford Collins C.A., Chow C.K.: J. Chromatogr. 317, 349 (1984). 49 MacCrehan W.A., Schönberger E.: Clin. Chem. 33, 1585 (1987). 50 Cavins J.F., Inglett G.E.: Cereal Chem. 51, 605 (1974). 51 Taylor P., Barnes P.: Chem. Ind. 20, 722 (1981). 52 Anal. Methods-Comm. Analyst. 116, 421 (1991). 53 Strohschein S., Pursch M., Lubda D., Albert K.: Anal. Chem. 70, 13 (1998). 54 Abe K., Yuguchi Y., Katsui G.: J. Nutr. Sci. Vitaminol 21, 183 (1975). 55 Duggan D.E., Bowman R.L., Brodie B.B., Udenfriend S.: Archs Biochem. Biophys. 68, 1 (1957). 56 Thompson J.N., Erdody P., Maxwell W.B.: Anal. Biochem. 50, 267 (1972). 57 Ueda T., Igarashi O.: J. Micronut. Anal. 1, 31 (1985). 58 Hiroshima O., Ikenoya S., Ohmae M., Kawabe K.: Chem. Pharm. Bull. 29, 451 (1981). 59 Muniz J.F., Wehr C.T., Wehr H.M.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 65, 791 (1982). 60 Wickroski A.F., McLean L.A.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 67, 62 (1984). 61 Indyk H., Woollard D.C.: J. Micronut. Anal. 1, 121 (1985). 62 DeVries J.W., Zeeman J., Esser R.J.E., Borsje B., Mulder F.J.: J.Assoc.Off.Anal.Chem. 62, 129 (1989). 63 Zonta F., Stancher B., Bielawny J.: J. Chromatogr. 246, 105 (1982). 64 Tscherne R.J., Capitano G.: J. Chromatogr. 136, 337 (1977). 65 Vanhaelen-Fastre R., Vanhaelen M.: Steroid Analysis by HPLC. Recent Aplications, Marcel Dekker, New York Agarwal V.K.: J.Assoc.Off.Anal.Chem. 71, 19 (1988). 67 Agarwal V.K.: J.Assoc.Off.Anal.Chem. 75, 812 (1992). 68 Takeuchi A., Okano T., Tsugama N., Katayama M., Mimura Y., Kobayashi T.: Micronut. Anal. 4, 193 (1988). 69 Takeuchi A., Okano T., Teraoka S, Murakami Y., Kobayashi T.: J. Nutr. Sci. Vitaminol 30, 11 (1984). 70 Okano T., Takeuchi A., Kobayashi T.: J. Nutr. Sci. Vitaminol 27, 539 (1981). 71 Sertl D.C., Molitor B.E.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 68, 177 (1985). 72 van Niekerk P.J., Smit S.C.C.: J. Amer. Oil. Chem. Soc. 57, 417 (1980). 73 Rychener M., Walter P.: Mitt. Gebiete Lebensm. Hyg. 76, 112 (1985). 74 Haroon Y., Shearer M.J., Barkhan P.: J. Chromatogr. 200, 293 (1980). 75 Haroon Y., Shearer M.J., Barkhan P.: J. Chromatogr. 206, 333 (1981). 76 Ferland G., Sadowski J.A.: J. Agric. Food. Chem. 40, 1869 (1992). 77 Ferland G., Sadowski J.A.: J. Agric. Food. Chem. 40,1874 (1992). 78 Zamarreno M.M.D., Perez A.S., Perez M.C.G., Moro M.A.F., Mendez J.H.: Analyst. 120, 2489 (1995). 79 Hart J.P., Shearer M.J., McCarthy P.T.: Analyst. 110, 1181 (1985). 17

18 80 Haroon Y., Bacon D.S., Sadowski J.A.: J. Chromatogr. 384, 383 (1987). 81 Langenberg J.P., Tjaden U.R.: J. Chromatogr. 305, 61 (1984). 82 Haroon Y., Schubert C.A.W., Hauschka P.V.: J. Chromatogr. Sci. 22, 89 (1984). 83 Indyk H.: J. Micronutr. Anal. 4, 61 (1988). 84 Moussa F., Dufour L., Didry J.R., Aymard P.: Clin. Chem. 35, 874 (1989). 85 Lefevere M.F., Frei R.W., Scholten A.H.M.T., Brinkman U.A.Th.: Chromatographia. 15, 459 (1982). 86 Thiex N., Smallidge R., Beine R.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 79, 1269 (1996). 87 Brubacher G., Müller-Mulot W., Southgate A.T.: Methods for Determination of Vitamins in Food, Elsevier, Londýn, Velká Británie Tee E.-S., Lim C.-L.: Food Chem. 45, 289 (1992). 89 Egberg D.C., Heroff J.C., Potter R.H.: J. Agric. Food Chem. 25, 1127 (1977). 90 Thorpe V. A.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 73, 463 (1990). 91 VDLUFA (Verband Deutscher Landwirtschaftlicher Untersuchungs und Forschungsanstalten), kapitola , Methodenbuch Band III, 2.Erg van Niekerk P.J., Smit S.C.C.: J. Amer. Oil. Chem. Soc. 57, 417 (1980). 93 Rushing L. G., Cooper W. M., Thompson H. C.: J. Agric. Food Chem. 39, 296 (1991). 94 Ruperez F. J., Barbas C., Castro M., Herrera E.: J. Chromatogr. 839, 93 (1999). 95 Thompson J.N., Hatina G.: J.Liquid Chromatogr. 2, 237 (1979). 96 Blott A. D., Woollard D. C.: J. Micronutr. Anal. 2, 259 (1986). 97 Huo J.Z., Nelis H.J., Lavens P., Sorgeloos P., De Leenheer A.P.: J. Chromatogr. B 724, 249 (1999). 98 Manz U., Philipp K.: Int. J. Vitam. Nutr.Res. 51, 342 (1981). 99 Shin T.-S., Godber J.S.: J. Am. Oil Chem. Soc. 70, 1289 (1993). 100 Hogarty C.J., Ang C., Eitenmiller R.R.: J. Food Comp. Anal. 2, 200 (1989). 101 Scott K.C., Latshaw J.D.: Anim. Feed. Sci. Tech. 47, 99 (1994). 102 Kurmann A., Indyk H.: Food Chem. 50, 75 (1994). 103 Johnsson H., Halén B., Hessel H., Nyman A., Thorzell K.: Int. J. Vitam. Nutr. Res. 59, 262 (1989). 104 Konings E.J.M.: Neth. Milk. Dairy J. 48, 31 (1994). 105 Cohen H., Wakeford B.: J.Assoc.Off.Anal.Chem. 63, 1163 (1980). 106 Manz U., Maurer R.: Int. J. Vit. Nutr. Res. 52, 248 (1982). 107 Speek A.J., Schrijver J., Schreurs W.H.P.: J. Chromatogr. 301, 441 (1984). 108 Laffi R., Marchetti S., Marchetti M.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 71, 826 (1988). 109 Billedeau S.M.: J. Chromatogr. 472, 371 (1989). 110 White S.: Anal. Proc. 30, 266 (1993). 111 Schneiderman M.A., Sharma A.K., Locke D.C.: J. Chromatogr. Sci. 26, 458 (1988). 112 Shearer M.J., v knize Encyclopaedia of Food Science, Food Technology and Nutrition, Vol. 7, Academic Press, Londýn, Velká Británie

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu A a vitamínu E v krmivech a premixech. 2 Princip

Více

VITAMÍNY ROZPUSTNÉ V TUCÍCH. Retinoidy (vitamin A) A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá

VITAMÍNY ROZPUSTNÉ V TUCÍCH. Retinoidy (vitamin A) A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá VITAMÍNY ZPUSTNÉ V TUCÍCH A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá etinoidy (vitamin A) Účinná forma vitaminu A: retinol (all trans-), neoretinal ( 13-cis, trans-), retinal H 3 C = CH2 H = HCH

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D v premixech pro výrobu krmných směsí metodou HPLC.

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení maduramicinu a semduramicinu v krmivech a premixech.

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS 1 Účel a rozsah Tento postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D3 v krmivech metodou LC/MS. 2 Princip Zkušební

Více

Stanovení vit. A a vit. E metodou HPLC v krmivech a premixech dopl ňkových látek

Stanovení vit. A a vit. E metodou HPLC v krmivech a premixech dopl ňkových látek STANOVENÍ VITAMINU A (RETINOLU) A VITAMINU E (a-tocopherolu) METODOU HPLC V KRMIVECH A PREMIXECH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK. 1. Definice Účinnou formou vitaminu A obecného vzorce C 16 H 23 - R je retinol a neoretinol

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Více

SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá

SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá Extrakce na pevné fázi (SPE) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Extrakce na pevné fázi (SPE) (Solid Phase Extraction) SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků,

Více

HPLC STANOVENÍ OBSAHU VITAMINU E V KRMNÝCH SUROVINÁCH, KRMIVECH A POTRAVINÁCH. ROMANA HOSMANOVÁ a. a MICHAL DOUŠA b. Experimentální část

HPLC STANOVENÍ OBSAHU VITAMINU E V KRMNÝCH SUROVINÁCH, KRMIVECH A POTRAVINÁCH. ROMANA HOSMANOVÁ a. a MICHAL DOUŠA b. Experimentální část HPLC STANOVENÍ OBSAHU VITAMINU E V KRMNÝCH SUROVINÁCH, KRMIVECH A POTRAVINÁCH ROMANA HOSMANOVÁ a a MICHAL DOUŠA b a Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský Brno, Národní referenční laboratoř Plzeň,

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 F. STANOVENÍ DICLAZURILU 2,6-dichlor-alfa-(4-chlorofenyl)-4-(4,5-dihydro-3,5-dioxo-1,2,4-triazin-2-(3-H)yl)benzenacetonitril 1. Účel a rozsah Tato metoda

Více

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 8. Výsledky kruhových testů V rámci ES byly provedeny kruhové testy, při nichž až 13 laboratoří zkoušelo čtyři vzorky krmiva pro selata, včetně jednoho

Více

Inovace bakalářského a navazujícího magisterského studijního programu v oboru Bezpečnost a kvalita potravin (reg. č. CZ.1.07/2.2.00/28.

Inovace bakalářského a navazujícího magisterského studijního programu v oboru Bezpečnost a kvalita potravin (reg. č. CZ.1.07/2.2.00/28. Inovace bakalářského a navazujícího magisterského studijního programu v oboru Bezpečnost a kvalita potravin (reg. č. CZ.1.07/2.2.00/28.0287) EXTRAKČNÍ METODY Mgr. Romana Kostrhounová, Ph. D. RNDr. Ivana

Více

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 c) při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí spektrum vzestupné části, vrcholu a sestupné části píku zkoušeného vzorku lišit od ostatních částí spektra

Více

EXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza

EXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza Studijní materiál EXTRAKČNÍ METODY 1. Obecná charakteristika extrakce 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE 3. Alkalická hydrolýza 4. Soxhletova extrakce 5. Extrakce za zvýšené teploty a tlaku PLE, ASE, PSE

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení nepovolených doplňkových látek Zn-bacitracinu,

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz 1 Sylabus přednášky: Praxe v HPLC Mobilní fáze Chromatografická kolona Spoje v HPLC Vývoj chromatografické

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 v krmivech. 2 Princip

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz 1 Aplikace HPLC Analýza složek životního prostředí Toxikologie Potravinářská analýza Farmaceutická

Více

L 54/66 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/66 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/66 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 B. STANOVENÍ OBSAHU VITAMINU E 1. Účel a rozsah Tato metoda umožňuje stanovení obsahu vitaminu E v krmivech a premixech. Obsah vitaminu E se vyjadřuje

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU CELKOVÉHO A VOLNÉHO TRYPTOFANU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7. Opakovatelnost Rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení provedených na stejném vzorku týmž laborantem nesmí překročit: 5 mg/kg v absolutní hodnotě

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Teorie HPLC Praktické

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním

Více

EXTRAKČNÍ METODY používané pro stanovení lipofilních a hydrofilních látek. Mgr. Romana Kostrhounová, Ph. D. RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D.

EXTRAKČNÍ METODY používané pro stanovení lipofilních a hydrofilních látek. Mgr. Romana Kostrhounová, Ph. D. RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. EXTRAKČNÍ METODY používané pro stanovení lipofilních a hydrofilních látek Mgr. Romana Kostrhounová, Ph. D. RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. EXTRAKČNÍ METODY Úvod rozdělení látek podle polarity extrakce lipofilních

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC S UV DETEKCÍ

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC S UV DETEKCÍ Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOENÍ OBSAHU ITAMÍNU A A ITAMÍNU E METODOU HPLC S U DETEKCÍ 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení vitamínu A a vitamínu E v kompletních krmivech i premixech

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU -KAROTENU METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového -karotenu v krmivech a premixech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/59

26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/59 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/59 PŘÍLOHA IV METODY ZKOUŠENÍ PRO KONTROLU OBSAHU POVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK V KRMIVECH A. STANOVENÍ OBSAHU VITAMINU A 1. Účel a rozsah Tato metoda umožňuje

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 9 Adsorpční chromatografie: Chromatografie v normálním módu Tento chromatografický mód je vysvětlen na silikagelu jako nejdůležitějším

Více

Pentachlorfenol (PCP)

Pentachlorfenol (PCP) Zpracováno podle Raclavská, H. Kuchařová, J. Plachá, D.: Podklady k provádění Protokolu o PRTR Přehled metod a identifikace látek sledovaných podle Protokolu o registrech úniků a přenosů znečišťujících

Více

L 54/32 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/32 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/32 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 Lineární rozsah přístroje je nutno zkontrolovat pro všechny aminokyseliny. Standardní roztok se ředí citrátovým tlumivým roztokem tak, aby se dosáhlo ploch

Více

UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE

UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE 2009 Ing. David Kahoun UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ ANALÝZA BIOLOGICKY AKTIVNÍCH LÁTEK V MEDOVINÁCH METODOU HPLC

Více

HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth edition, Blackie Academic & Professional 1996 Colin F. Poole and Salwa K.

HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth edition, Blackie Academic & Professional 1996 Colin F. Poole and Salwa K. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie - Detektory - I Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení ochratoxinu A v krmivech. 1 Ochratoxin A patří mezi

Více

DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018

DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018 DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii Izolační a separační metody, 2018 Detektory v kapalinové chromatografii Typ detektoru Zkratka Měřená veličina Refraktometrický detektor RID index lomu Spektrofotometrický

Více

UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie. Nám. Čs. Legií 565, Pardubice.

UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie. Nám. Čs. Legií 565, Pardubice. UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie Nám. Čs. Legií 565, 532 10 Pardubice 15. licenční studium INTERAKTIVNÍ STATISTICKÁ ANALÝZA DAT Semestrální práce VYUŽITÍ TABULKOVÉHO

Více

Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu

Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu Š.Dušková, I.Šperlingová, L. Dabrowská, M. Tvrdíková, M. Šubrtová duskova@szu.cz sperling@szu.cz Oddělení pro hodnocení expozice chemickým látkám

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu, narasinu, nikarbazinu, robenidinu,

Více

Standardní operační postup

Standardní operační postup Standardní operační postup CHOL_1 Stanovení cholesterolu v potravinách metodou HPLC V Brně dne 20. 3. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Princip Po alkalické hydrolýze (saponifikaci, zmýdelnění)

Více

Acta fytotechnica et zootechnica Mimoriadne číslo Nitra, Slovaca Universitas Agriculturae Nitriae, 2009, s. 64-68

Acta fytotechnica et zootechnica Mimoriadne číslo Nitra, Slovaca Universitas Agriculturae Nitriae, 2009, s. 64-68 Acta fytotechnica et zootechnica Mimoriadne číslo Nitra, Slovaca Universitas Agriculturae Nitriae, 2009, s. 64-68 MOŽNOST STANOVENÍ CHOLESTEROLU, STIGMASTEROLU A SITOSTEROLU V ROSTLINNÝCH A ŽIVOČIŠNÝCH

Více

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7.1.2 Detektor diodového pole Výsledky jsou posuzovány podle následujících kritérií: a) při vlnové délce maximální absorpce vzorku i standardu musí být

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení maduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). 1 Pro účely

Více

Mobilní fáze. HPLC mobilní fáze 1

Mobilní fáze. HPLC mobilní fáze 1 Mobilní fáze 1 VLIV CHROMATOGRAFICKÝCH PODMÍNEK NA ELUČNÍ CHARAKTERISTIKY SEPAROVANÝCH LÁTEK - SLOŽENÍ MOBILNÍ FÁZE Složení mobilní fáze má vliv na eluční charakteristiky : účinnost kolony; kapacitní poměr;

Více

Problémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting

Problémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting Problémy v kapalinové chromatografii Troubleshooting Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již z pouhého průběhu základní linie,

Více

Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)

Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.

Více

LANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE

LANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE LANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE Pavel Kocurek, Martin Kubal Vysoká škola chemicko-technologická v Praze,

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie HPLC High Performance Liquid Chromatography Vysokoúčinná...X... Vysoceúčinná kapalinová chromatografie RRLC Rapid Resolution Liquid Chromatography Rychle rozlišovací

Více

Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu

Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu,

Více

Uvod. Chem. Listy 91, 871-876 (1997) STANOVENI 1-HYDROXYPYRENU VYSOKOÚČINNOU KAPALINOVOU CHROMATOGRAFIÍ S ELEKTROCHEMICKOU DETEKCÍ

Uvod. Chem. Listy 91, 871-876 (1997) STANOVENI 1-HYDROXYPYRENU VYSOKOÚČINNOU KAPALINOVOU CHROMATOGRAFIÍ S ELEKTROCHEMICKOU DETEKCÍ Chem. Listy 91, 871 876 (1997) STANOVENI 1HYDROXYPYRENU VYSOKOÚČINNOU KAPALINOVOU CHROMATOGRAFIÍ S ELEKTROCHEMICKOU DETEKCÍ JIŘÍ BAREK a, VLADIMÍR BENCKO b, JOSEF CVAČKA 3, VIKTOR MEJSTŘÍK C, ALENA SLÁMOVÁ

Více

VYUŽITÍ MODERNÍ SEPARAČNÍ TECHNIKY UPLC KE STANOVENÍ VITAMINU E V ZRNU JEČMENE

VYUŽITÍ MODERNÍ SEPARAČNÍ TECHNIKY UPLC KE STANOVENÍ VITAMINU E V ZRNU JEČMENE VYUŽITÍ MODERNÍ SEPARAČNÍ TECHNIKY UPLC KE STANOVENÍ VITAMINU E V ZRNU JEČMENE KAROLÍNA BENEŠOVÁ a, HELENA PLUHÁČKOVÁ b, SYLVIE BĚLÁKOVÁ a, KATEŘINA VACULOVÁ c, RENATA MIKULÍKOVÁ a, JAROSLAVA EHRENBERGEROVÁ

Více

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA RŮZNÝCH DRUHŮ MASA (drůbeží, rybí) Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení

Více

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Pavla Balínová http://vyuka.lf3.cuni.cz/ Důležité informace Kroužkový asistent: RNDr. Pavla Balínová e-mailová adresa: pavla.balinova@lf3.cuni.cz místnost: 410 studijní

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení zearalenonu v krmivech. 1 Zearalenon (ZON) je charakterizován

Více

Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů

Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,

Více

Konfirmace HPLC systému

Konfirmace HPLC systému Mgr. Michal Douša, Ph.D. Obsah 1. Měření modulové... 2 1.1 Těsnost pístů tlakový test... 2 1.2 Teplota autosampleru (správnost a přesnost)... 2 1.3 Teplota kolonového termostatu... 2 1.3.1 Absolutní hodnota...

Více

Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu

Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 42 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza

Více

Superkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce

Superkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce Superkritická fluidní extrakce (zkráceně SFE, z angl. Supercritical Fluid Extraction) = extrakce, kde extrakčním činidlem je tekutina v superkritickém stavu, tzv. superkritická (nadkritická) tekutina (zkráceně

Více

No. 1- určete MW, vysvětlení izotopů

No. 1- určete MW, vysvětlení izotopů No. 1- určete MW, vysvětlení izotopů ESI/APCI + 325 () 102 (35) 327 (33) 326 (15) 328 (5) 150 200 250 300 350 400 450 500 ESI/APCI - 323 () 97 (51) 325 (32) 324 (13) 326 (6) 150 200 250 300 350 400 450

Více

Trendy v moderní HPLC

Trendy v moderní HPLC Trendy v moderní HPLC Josef Cvačka, 5.1.2011 CHROMATOGRAFIE NA ČIPECH Miniaturizace separačních systémů Mikrofluidní čipy Mikrofabrikace Chromatografické mikrofluidní čipy s MS detekcí Praktické využití

Více

Separační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip

Separační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (Liquid chromatography, zkratka LC) je typ separační metody, založené na rozdílné distribuci dělených látek ve směsi mezi dvě různé nemísitelné

Více

Optimalizace metody stanovení volných mastných kyselin v reálných systémech. Bc. Lenka Hasoňová

Optimalizace metody stanovení volných mastných kyselin v reálných systémech. Bc. Lenka Hasoňová Optimalizace metody stanovení volných mastných kyselin v reálných systémech Bc. Lenka Hasoňová Diplomová práce 2015 ABSTRAKT Předkládaná diplomová práce se zabývá optimalizací metody stanovení volných

Více

ADSORPČNÍ CHROMATOGRAFIE (LSC)

ADSORPČNÍ CHROMATOGRAFIE (LSC) EXTRAKCE TUHOU FÁZÍ ADSORPČNÍ CHROMATOGRAFIE (LSC) -rozdělení směsi látek (primární extrakt) na sloupci sorbentu ve skleněné koloně s fritou (cca 50 cm x 1 cm) -obvykle jde o selektivní adsorpci nežádoucích

Více

Stanovení fenolických látek pomocí kapalinové chromatografie

Stanovení fenolických látek pomocí kapalinové chromatografie Stanovení fenolických látek pomocí kapalinové chromatografie A) Princip extrakce podle Randalla Extrakci provádíme ve třech krocích: 1. Vaření V první fázi je extrakční prst obsahující vzorek ponořen do

Více

Gelová permeační chromatografie

Gelová permeační chromatografie Gelová permeační chromatografie (Gel Permeation Chromatography - GPC) - separační a čisticí metoda - umožňuje separaci skupin sloučenin s podobnou molekulovou hmotností (frakcionace) - analyty jsou po

Více

Studijní materiál. Úvod do problematiky extrakčních metod. Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D.

Studijní materiál. Úvod do problematiky extrakčních metod. Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. Studijní materiál Úvod do problematiky extrakčních metod Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. Úvod do problematiky extrakčních metod Definice, co je to extrakce separační proces v kontaktu jsou dvě

Více

PLANÁRNÍ (PLOŠNÁ) CHROMATOGRAFIE

PLANÁRNÍ (PLOŠNÁ) CHROMATOGRAFIE PLANÁRNÍ (PLOŠNÁ) CHROMATOGRAFIE Tenkovrstvá chromatografie je technika pro identifikaci a separaci směsi organických látek Identifikace složek směsi (nutné použít standard) analysa frakcí sbíraných během

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení vinylthiooxazolidonu (dále VOT) v krmivech.

Více

Jednotné pracovní postupy analýza půd STANOVENÍ OBSAHU PERFLUOROALKYLOVÝCH SLOUČENIN (PFAS) METODOU LC-MS/MS

Jednotné pracovní postupy analýza půd STANOVENÍ OBSAHU PERFLUOROALKYLOVÝCH SLOUČENIN (PFAS) METODOU LC-MS/MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU PERFLUOROALKYLOVÝCH SLOUČENIN (PFAS) METODOU LC-MS/MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro analýzu perfluoroalkylových sloučenin v půdách, sedimentech,

Více

HPLC STANOVENÍ ROBENIDINU V KRMIVECH

HPLC STANOVENÍ ROBENIDINU V KRMIVECH HPLC STANOVENÍ ROBENIDINU V KRMIVECH MICHAL DOUŠA Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský Brno, Regionální laboratorní oddělení Plzeň, Slovanská alej 20, 317 60 Plzeň hplc@seznam.cz Došlo 18.7.03,

Více

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY CHARAKTERISTIKA JEČNÉHO SLADU POMOCÍ HPLC KAROLÍNA BENEŠOVÁ, IVO HARTMAN, SYLVIE BĚLÁKOVÁ a RENATA MIKULÍKOVÁ Výzkumný ústav pivovarský a sladařský, a. s., Sladařský ústav

Více

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD)

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) A) Ultrazvuková extrakce Ultrazvuková extrakce je významnou extrakční

Více

ROLE SEPARAČNÍCH METOD

ROLE SEPARAČNÍCH METOD ROLE SEPARAČNÍCH METOD Redukce nežádoucích složek - ruší analýzu, poškozují přístroj Rozdělení - frakcionace vzorku podle zvolené charakteristiky Cílená analýza - vysoce selektivní postup Necílená analýza

Více

Inovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/15.0247

Inovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/15.0247 Papírová a tenkovrstvá chromatografie Jednou z nejrozšířenějších analytických metod je bezesporu chromatografie, umožňující účinnou separaci látek nutnou pro spolehlivou identifikaci a kvantifikaci složek

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda je určena pro kvantitativní a kvalitativní určení složení směsi methylesterů

Více

Principy chromatografie v analýze potravin

Principy chromatografie v analýze potravin Principy chromatografie v analýze potravin živočišného původu p Ivana Borkovcová Ústav hygieny a technologie mléka FVHE VFU Brno, borkovcovai@vfu.cz Úvod, základní pojmy chromatografické systémy dělení

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu selenu v minerálních krmivech a premixech metodou optické emisní spektrometrie

Více

Chromatografie polymerů III.: IC+LC CC+LC LC. FFF-Field flow fractionation (Frakcionace tokem v silovém poli)

Chromatografie polymerů III.: IC+LC CC+LC LC. FFF-Field flow fractionation (Frakcionace tokem v silovém poli) Přednáška 3 Chromatografie polymerů III.: IC+LC CC+LC LC FFF-Field flow fractionation (Frakcionace tokem v silovém poli) Studijní opora pro studenty registrované v akademickém roce 2013/2014 na předmět:

Více

TECHNOLOGIE OLEJŮ A TUKŮ V POTRAVINÁŘSKÉM PRŮMYSLU

TECHNOLOGIE OLEJŮ A TUKŮ V POTRAVINÁŘSKÉM PRŮMYSLU TECHNOLOGIE OLEJŮ A TUKŮ V POTRAVINÁŘSKÉM PRŮMYSLU Autor: Ing. Jan Kyselka, Ph.D. Konference: Potraviny, zdraví a výživa Podtitul: Tuky taky, aneb v čem se mnozí mýlí milionů tun/rok ÚSTAV MLÉKA, TUKŮ

Více

OPTIMALIZACE METODY ANODICKÉ ROZPOUŠTĚCÍ VOLTAMETRIE PRO ANALÝZU BIOLOGICKÝCH VZORKŮ S OBSAHEM RTUTI

OPTIMALIZACE METODY ANODICKÉ ROZPOUŠTĚCÍ VOLTAMETRIE PRO ANALÝZU BIOLOGICKÝCH VZORKŮ S OBSAHEM RTUTI Středoškolská technika 212 Setkání a prezentace prací středoškolských studentů na ČVUT OPTIMALIZACE METODY ANODICKÉ ROZPOUŠTĚCÍ VOLTAMETRIE PRO ANALÝZU BIOLOGICKÝCH VZORKŮ S OBSAHEM RTUTI Eliška Marková

Více

Inovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/ Výpočty z chemických vzorců

Inovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/ Výpočty z chemických vzorců Výpočty z chemických vzorců 1. Hmotnost kyslíku je 80 g. Vypočítejte : a) počet atomů kyslíku ( 3,011 10 atomů) b) počet molů kyslíku (2,5 mol) c) počet molekul kyslíku (1,505 10 24 molekul) d) objem (dm

Více

isolace analytu oddělení analytu od matrice (přečištění) zakoncentrování analytu stanovení analytu (analytů) ve vícesložkové směsi

isolace analytu oddělení analytu od matrice (přečištění) zakoncentrování analytu stanovení analytu (analytů) ve vícesložkové směsi SEPARAČNÍ METODY Využití separačních metod isolace analytu oddělení analytu od matrice (přečištění) zakoncentrování analytu stanovení analytu (analytů) ve vícesložkové směsi Druhy separačních metod Srážení

Více

P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech

P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech Perfluorované a polyfluorované uhlovodíky (PFC,PFAS) Perfluorované - všechny vodíky

Více

Litosil - application

Litosil - application Litosil - application The series of Litosil is primarily determined for cut polished floors. The cut polished floors are supplied by some specialized firms which are fitted with the appropriate technical

Více

Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková

Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce Bc. Kamila Šimánková Diplomová práce 2006 ABSTRAKT Cílem této práce bylo vypracování vhodného extrakčního postupu k izolaci vitaminu C a

Více

ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC)

ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC) ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC) Pokroky v moderních separačních metodách, 2012 Eva Háková CHARAKTERISTIKA UPLC Nová, velmi účinná separační

Více

P. Martinková, R. Jobánek, D. Pospíchalová. Stanovení vybraných léčiv v čistírenském kalu

P. Martinková, R. Jobánek, D. Pospíchalová. Stanovení vybraných léčiv v čistírenském kalu P. Martinková, R. Jobánek, D. Pospíchalová Stanovení vybraných léčiv v čistírenském kalu PPCP Pharmaceutical and Personal Care Products (farmaka a produkty osobní potřeby) Do životního prostředí se dostávají

Více

Izolace nukleových kyselin

Izolace nukleových kyselin Izolace nukleových kyselin Požadavky na izolaci nukleových kyselin V nativním stavu z přirozeného materiálu v dostatečném množství požadované čistotě. Nukleové kyseliny je třeba zbavit všech látek, které

Více

KATALOG DIAGNOSTICKÝCH SETŮ S K A L A B 2018

KATALOG DIAGNOSTICKÝCH SETŮ S K A L A B 2018 KATALOG DIAGNOSTICKÝCH SETŮ S K A L A B 2018 set Princip Objem Cena Hořčík 600 A (Mg 600 A) 104 Hořečnaté ionty reagují v prostředí trisového pufru při ph = 8,8 s arsenazem III za vzniku stabilního modrého

Více

Úvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová

Úvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová Úvod k biochemickému mu praktiku Vladimíra Kvasnicová organizace praktik pravidla bezpečné práce v laboratoři laboratorní vybavení práce s automatickou pipetou návody: viz. aplikace Výuka automatická pipeta

Více

Tomáš Roušar, Pavla Žáková, Roman Kanďár, Vladimíra Mužáková, Jana Křenková

Tomáš Roušar, Pavla Žáková, Roman Kanďár, Vladimíra Mužáková, Jana Křenková STUDIE VITAMINY Tomáš Roušar, Pavla Žáková, Roman Kanďár, Vladimíra Mužáková, Jana Křenková Katedra biologických a biochemických věd, Fakulta chemicko-technologická, Univerzita Pardubice, Štrossova 239,

Více

Chromatofokusace. separace proteinů na základě jejich pi vysoké rozlišení. není potřeba připravovat ph gradient zaostřovací efekt jednoduchost

Chromatofokusace. separace proteinů na základě jejich pi vysoké rozlišení. není potřeba připravovat ph gradient zaostřovací efekt jednoduchost Chromatofokusace separace proteinů na základě jejich pi vysoké rozlišení není potřeba připravovat ph gradient zaostřovací efekt jednoduchost Polypufry - amfolyty Stacionární fáze Polybuffer 96 - ph 9-6

Více

ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM

ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM Analytický systém Photochem (firmy Analytik Jena, Německo) je vhodný pro stanovení celkové antioxidační kapacity (tj. celkové schopnosti vzorku vychytávat volné radikály) různých

Více