Laboratorní cvičení č. 6. Transformace rostlinného materiálu pomocí mikroprojektilového přenosu DNA a následná vizualizace chimerního proteinu
|
|
- Libuše Čechová
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Laboratorní cvičení č. 6 Transformace rostlinného materiálu pomocí mikroprojektilového přenosu DNA a následná vizualizace chimerního proteinu Teoretický úvod Metody transgenoze umožňují vnesení jednoho nebo skupiny dvou až tří genů do rostlinného genomu a následné sledování funkčních změn vyvolaných jednotlivými proteiny v hostitelské rostlině či buňce. Do rostliny je nejprve transformován gen pro studovaný protein v patřičném binárním vektoru pod vhodným promotorem [1]. Uvnitř rostlinných buněk dojde k inkorporaci vnesené DNA do vlastního genomu a k následné expresi rekombinantních proteinů. Během výzkumu transgenoze rostlin bylo vyvinuto několik typů transformačních metod, více či méně úspěšných. Těmito metodami lze navodit buď transientní (dočasnou) nebo stabilní expresi transgenu. Agrobacterium je jedním z nejpoužívanějších systémů umožňující transgenozi vnímavých rostlin. Jedná se o přirozeně patogenní bakterii většiny dvouděložných rostlin. Jednoděložné rostliny nepatří k typickým přirozeným hostitelům této bakterie a transformace je proto z těchto důvodů obtížná. Jednou ze základních metod transformace rostlin Agrobacteriem je metoda floral-dip ; kdy je rostlina transformována infekcí květů pomocí Agrobacterium thumefaciens. Další metodou transformace na principu infekce je transformace pomocí bakterií Agrobacterium rhizogenes. Tato bakterie indukuje v infikovaném pletivu růst transgenních kořínků tzv. hairy-roots. Nevýhodou obou transformačních metod je zdlouhavá a náročná doba přípravy rostlinného materiálu určeného k transformaci (řádově měsíce) a rozdílná vnímavost jednotlivých druhů rostlin k agrobakteriální infekci. U metody transformace květů bakterií A. thumefaciens jsou v první generaci selektováni heterozygoti s transgenem inkorporovaným na různých místech v genomu hostitelské rostliny, přičemž transgenní rostlina s aktivní formou vneseného transgenu musí být mezi ostatními transformanty nejprve selektována [2]. Není-li účelem transformace získání stabilní transgenní rostlinné linie, pak je žádoucí rychlejší metoda přípravy transgenního rostlinného materiálu. Rychlou a efektivní metodu transformace rostlin představuje metoda transformace pomocí mikroprojektilového přenosu DNA (particle bombardment), kdy je DNA vstřelována do rostlinného pletiva na nosičích v podobě mikročástiček zlata nebo wolframu za přetlaku helia [3]. Neocenitelnou výhodou této metody je možnost transformace téměř libovolného rostlinného materiálu [4]. Proto se transformace mikroprojektilovým přenosem DNA používá u rostlinných druhů, které je obtížné nebo nemožné transformovat jiným způsobem. K takovým rostlinným druhům patří pšenice, kukuřice, ječmen, rýže a jiné jednoděložné rostliny. První expresi rekombinantního proteinu v transgenním pletivu je možné pozorovat v řádu několika dnů. Nevýhodou této metody je poměrně nízká efektivita a dále také fakt, že mohou vznikat buňky s inzercí více kopií transgenu, přičemž může docházet k umlčení transgenu nebo případně k jinému ovlivňování aktivity exprimovaného transgenu [5]. Detekce takovýchto multi-inzercí je pak náročná. Pro studium subcelulární lokalizace chimerních proteinů v transgenním pletivu je však tato metoda pro svou rychlost a jednoduchost úspěšně využívaná u většiny druhů rostlin [6]. 1
2 Vizualizace rekombinantních proteinů na úrovni buňky umožňuje například značení protilátkou. Nevýhodou tohoto způsobu je však náročnost přípravy protilátky a případná nespecifita u podobných genů [7]. Další možností značení proteinů je fúze transgenu s reportérovým genem, např. pro β-glukuronidasu (GUS), případně pro zelený fluorescenční protein (GFP) a jeho varianty, nebo s genem pro červený fluorescenční protein (DsRed) apod. Transgen sfúzovaný s reportérovým genem je inkorporován do binárního vektoru pod patřičným promotorem a transformován do rostlinného pletiva. Následuje selekce a screening transgenních pletiv pod fluorescenčním nebo konfokálním mikroskopem. Je-li žádoucí pozorovat rekombinantní protein na úrovni buněčných kompartmentů, pak je konfokální mikroskopie fúzních proteinů s fluorescenčním reportérem vhodným řešením. V tomto cvičení se seznámíte s metodou transformace rostlinného pletiva mikroprojektilovým přenosem DNA. Tato metoda vyžaduje sterilní přípravu rostlinného materiálu, veškerá práce tedy probíhá ve sterilním prostředí laminárního boxu určeném pro manipulaci s rostlinami. Jako rostlinné pletivo pro transformaci poslouží kořeny kukuřice, do kterých bude vnášen reportérový gen pro β-glukuronidasu (GUS) v binárním vektoru pahc25. Úspěšnost transformace bude ověřena na základě histochemické reakce, pozorování aktivity exprimované β-glukuronidasy, která po reakci se substrátem poskytuje snadno detekovatelné modré zbarvení. Jelikož gen pro β-glukuronidasu bude exprimován do cytosolu jednotlivých buněk, budou tyto modře zbarvené buňky pozorovány pod mikroskopem pod patřičným zvětšením. Materiál a chemikálie MS-médium tuhé (0,43% Murrashige and Skoogh Basal Salt Mix, 1% sacharosa, 1 mm MES, 0,4 % agar na rostliny, ph 6,1) Petriho misky Sterilní voda 70% sterilní ethanol 7% Sodium hypochlorid Míchačka s elektromagnetickým míchadlem Osmotické MS-médium s manitolem (58,3 g l -1 manitolu, 1% agar na rostliny) Semena kukuřice Zea mays, cv. Cellux 225 Sterilní pinzety, nůžky a skalpely Sterilní zkumavky 25 ml Laminární box (flowbox) Kultivační box pro pěstování explantátů (klimakomora) Sterilní Erlenmayerova baňka 500 ml, 100 ml, 1000 ml kádinka LB-médium s ampicilinem tekuté (1% pepton, 0,5% kvasnicový extrakt, 1% NaCl, 100 mg l -1 ampicilin) a tuhé (1,5% agar) Inkubovaná třepačka 37 C, laboratorní chlazená mikrocentrifuga Kultura E. coli nesoucí plasmid pahc25 Plasmid Mini Kit pro isolaci plasmidové DNA 2
3 Restrikční endonukleasy EcoRI, XbaI, KpnI s pufry Termoblok TE pufr (10 mm Tris-HCl, 1 mm EDTA, ph 8,0) 1% agarosa v 1x TAE pufru (0,4 M Tris-kyselina octová, 0,01 M EDTA, ph 8,0) Nanášecí pufr (50% glycerol, 50 mm EDTA, 0,125% bromfenolová modř, 0,125% xylenová violeť, ph 8,0) 10% ethidium bromid GeneRuler 1 kb DNA marker Elektroforéza, horizontální elektroforetická komůrka, zdroj AlphaDigiDoc, systém pro digitální fotodokumentaci gelů UV-spektrofotometr, křemenná kyveta Mikrozkumavky 1,5 ml Mikropipety a špičky Zařízení pro mikroprojektilový přenos DNA Biolistic BioRad PDS 1000/He Materiál pro mikroprojektilový přenos DNA: Rupture Disks 1100 PSI, Macrocarriers, Thungsten M 17 Microcarriers, Stopping Screens 96% ethanol, isopropanol Roztoky pro přípravu microcarrierů a směsi microcarrierů s DNA: 2,5 M CaCl 2, 0,1 M spermidin, absolutní ethanol Roztok pro barvení na GUS (0,1 M fosfátový pufr ph 7,2 s 10 mm EDTA, 0,5 mm K 3 Fe(CN) 6, 0,5 mm K 4 Fe(CN) 6, 0,1% Triton), substrát pro β-glukuronidasu (1 mm X- GlcA 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-glukuronid, 100 mg rozpustit v 0,5 ml dimethylformamidu) Petriho misky malé Parafilm 70% ethanol pro promytí explantátů Mikroskop Nikon SMZ 700 Materiál pro přípravu mikroskopických preparátů: podložní a krycí sklíčka, skalpel, kapátko, voda PC vybavené softwarem pro zpracování digitálního obrazu pořízeného kamerou mikroskopu 3
4 Experimentální postupy Veškerá manipulace s rostlinným materiálem probíhá po celou dobu ve sterilním prostředí laminárního boxu. Je třeba pracovat v rukavicích, používat desinfekce k udržování čistoty práce a prostředí a vyvarovat se případným kontaminacím. 1. DEN (provede vedoucí cvičení) a) Sterilizace semen kukuřice Semena kukuřice Zea mays cv. Cellux 225 nejprve promyjeme v 1000 ml kádince dostatečným množstvím vody tak, aby bylo odstraněno veškeré mořidlo. Poté k semenům přilijeme 500 ml 70% ethanolu a na míchačce promícháváme 10 min. Následuje samotná sterilizace semen chlornanem (7% sodium hypochlorid) 30 min za stálého míchání. Slijeme chlornan, 2x promyjeme sterilní vodou, přesypeme semena do 500 ml Erlenmayerovy baňky a ve flowboxu ještě 3x promyjeme sterilní vodou, každé promystí po dobu 3 min. Přebytečnou vodu slijeme a semena ponecháme bobtnat do dalšího dne. b) Napěstování bakteriální kultury nesoucí plasmid Do sterilní 100 ml baňky odměříme 20 ml LB media s ampicilinem a inokulujeme 5 µl zásobní kultury bakterií E. coli nesoucí plasmid pahc25. Kulturu necháme inkubovat přes noc při 37 C na třepačce. 2. DEN (provede vedoucí cvičení) c) Vysazení sterilizovaných semen kukuřice do zkumavek s MS-médiem Pracujeme ve flowboxu. Do 25 ml sterilních zkumavek s tuhým MS-médiem opatrně pinzetou přenášíme jednotlivá zrna kukuřice, do každé zkumavky vysadíme dvě zrna. Takto připravené zkumavky necháme kultivovat v klimakomoře (den - 16 h plné osvětlení, 28 C, noc 8 h tma, 24 C) po dobu 14 dní. d) Mikroizolace plasmidové DNA Postupujeme dle návodu laboratorního cvičení č.1 (2.den). Změříme koncentraci vyizolované DNA a koncentraci upravíme na 1 µg ml -1. Plasmidovou DNA zamrazíme na - 20 C. 16. DEN e) Příprava explantátů pro transformaci Ve flowboxu otevřeme zkumavky s narostenými semenáčky kukuřice, rostlinky opatrně vyjmeme sterilní pinzetou a serilním skalpelem z nich odřízneme kořínky, které pokládáme na připravené Petriho misky s osmotickým MS-médiem. Na jednu misku skládáme dle velikosti 5-10 kořínků těsně vedle sebe, na střed misky. Pro jednu transformaci připravíme vždy dvě misky. f) Příprava přístroje firmy BioRad PDS-1000/He pro transformaci Před samotnou transformací je třeba vysterilizovat ve flowboxu všechy potřebné součásti přístroje (nosiče, šroubení) v 96% ethanolu po dobu 30 min. Obě desky vyjmeme z přístroje, řádně navlhčíme 96% ethanolem a vše necháme volně na sterilních Petriho miskách 4
5 oschnout. Přístroj včetně dvířek několikrát vystříkame 96% ethanolem a necháme vyschnout při otevřených dvířkách. Podle počtu střel si připravíme Macrocarriers, Stopping Screens a podle požadovaného tlaku Rupture Disks (1100 psi). Vše samostatně vysterilizujeme Macrocarriers a Stopping Screens v 96% ethanolu po dobu 15 min. Rupture Disky v isopropanolu po dobu 5 min. Vše necháme volně vyschnout na sterilních Petriho miskách ve flowboxu. g) Příprava zlatých částic pro mikroprojektilový přenos DNA (provede vedoucí cvičení) Do mikrozkumavky navážíme 60 mg 1,0 µm částic zlata, nebo wolframu (Bio-Rad) a přidáme 1 ml 100% čistého ethanolu, vortexujeme 1-2 min, centrifugujeme 1 min rpm. Vzniklý supernatant odebereme pipetou a celý proces opakujeme ještě 2x. Přidáme 1 ml sterilní vody a obsah důkladně promícháme pomocí vortexu a centrifugujeme 2 minuty, opakujeme ještě jednou. Připravený roztok rozdělíme po 50 μl do 20 mikrozkumavek. Takto připravená zásobní suspenze zlata je uchovávána při 20 C. h) Příprava směsi zlatých částic s DNA 1. Do mikrozkumavky s 50 µl zlatých částic přidáme 5 µl plazmidové DNA o koncentraci 1µg.µl -1, přičemž DNA napipetujeme na stěnu mikrozkumavky. 2. Suspenzi zlata a DNA velmi krátce promícháme s plazmidovou DNA vortexováním. 3. Na stěnu mikrozkumavky napipetujeme 50 µl 2,5 M CaCl 2 (sráží DNA) a na opačnou stranu 20 µl 0,1 M roztoku spermidinu (chrání DNA před degradací a změnou její struktury). Mikrozkumavku uzavřeme a obsah promícháme pomocí vortexu. 4. Obsah inkubujeme 1 minutu na ledu, centrifugujeme při rpm s. 5. Opatrně odstraníme supernatant. 6. K peletu přidáme 250 µl absolutního ethanolu, opatrně promícháme pipetou, pak pomocí vortexu. 7. Centrifugujeme po dobu 30 sekund při rpm. 8. Opatrně odstraníme supernatant. 9. Ke zlatému peletu přidáme 60 µl absolutního ethanolu (je lépe přidat 65 µl, rychle se odpařuje) a obsah velmi opatrně promícháme pipetou. 10. Na sterilní macrocarrier, který je umístěn v kovovém nosiči rovnoměrně do jeho střední části napipetujeme 3,5 µl připravené suspenze (vystačí celkem na 12 střel). 11. Po zaschnutí suspenze (přibližně 10 min) je DNA zachycená na částicích připravena k transformaci. i) Vlastní transformace 1. Otevřeme přívodní ventil na bombě s heliem, nastavíme požadovaný tlak otáčením šroubení tak, aby odpovídal vybranému Rupture Disku (1100 psi). 2. Zapneme přistroj pro mikroprojektilový přenos DNA (indikace červenou kontrolkou). 3. Zavřeme dvířka, zapneme vývěvu centrálně a na přístroji, vypneme přibližně při tlaku 20 psi a několikrát naprázdno vyprázdníme komoru. 4. Vložíme všechny potřebné části do přístroje (ve správném pořadí a směru). 5. Petriho misku s rostlinným pletivem umístíme do komůrky ve výšce 6 cm od Rupture Disku a zavřeme dvířka. 6. Zapneme vývěvu, vypneme při tlaku 25 psi a stiskneme tlačítko Shot. 7. Po vystřelení vyrovnáme tlak v komoře, otevřeme dvířka a vyjmeme natransformovaný materiál. 8. Vyměníme potřebné terčíky, nezapomeňte pokaždé vyměnit Rupture Disk! 5
6 9. Po skončení zavřeme přívod helia, zapneme vývěvu, při tlaku 20 psi vypneme a několikrát stiskneme Shot a tak vyprázdníme zbytek helia z přístroje, povolíme šroubení a pokud oba ukazatele nejsou na nule, postup zopakujeme. 10. Vypneme vývěvu na přístroji i centrálně, vypneme přístroj. 20. DEN j) Barvení explantátů na GUS Transformované kořínky z každé transformace přemístíme do jedné malé Petriho misky a připipetujeme k nim roztok pro barvení na GUS, obsahující substrát pro β- glukuronidasu. Misky s kořínky umístíme do exikátoru, který připojíme k vývěvě. Vakuum necháme působit 2 min a poté ponecháme misky s kořínky v roztoku inkubovat při 37 C přes noc. 21. DEN k) Pozorování chimerního proteinu v transformovaném rostlinném pletivu Kořínky zbavíme roztoku pro barvení na GUS a promyjeme je 70% ethanolem. Kořínky pozorujeme nejprve ve vodě přímo na Petriho miskách. Vybereme ty kořínky, které exprimují GUS (modré tečky) a z nich připravíme pomocí skalpelu preparáty. Na podložním sklíčku překrytém krycím pozorujeme jednotlivé buňky kořínků kukuřice, které exprimují chimerní protein. Pomocí kamery připojené k mikroskopu pořídíme snímky pozorování. Vyhodnocení výsledků 1) Vyhodnoťte výsledek transformace (počet úspěšně transformovaných kořenů, popište polohu a množství buněk exprimujících β-glukuronidasu v kořeni). 2) Proč se rostlinný materiál po transformaci kultivuje na osmotickém médiu? 3) Jakým způsobem byste zesílili míru exprese transgenu v pletivu? 4) V případě, že byste vyzkoušenou metodou chtěli získat celou transgenní rostlinu, jak byste postupovali? 5) Popište princip GUS jako reportérového genu. Jak funguje barvení na GUS? Literatura 1) Horsch R., Fry J., Hoffmann N., Wallroth M., Eichholtz D., Rogers S., and Fraley R. (1985), Science 227, ) Bechtold N., Ellis J., and Pelletier G. (1993), C. R. Acad. Sci. Paris 316, ) Qui P., Ziegelhoffer P., Sun J., Yang N.S. (1996), Gene Therapy 3, ) Sanford J. C., Smith F.D. and Russel J.A. (1993), Meth. Enzymol. 217, ) Klein T.M., Arentzen R., Lewis P.A. and Fitzpatrick-McElligott S. (1992), Bio/Technology 10, ) Yansong M. and Liwen J. (2007), Nature protocol 2, ) Galuszka P., Frébortová J., Luhová L., Bilyeu K.D., English J.T., Frébort I. (2005), Plant Cell Physiol. 46,
7 Obrázek 1. Přístroj pro mikroprojektilový přenos DNA BioRad PDS 1000/He Obrázek 2. Průběh procesu mikroprojektilového přenosu DNA 7
Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:
Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)
VíceANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 O B S A H 1. Aplikace testovaných látek na buněčné kultury 2. Oxidační poškození DNA
VíceTESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin
Teoretický úvod: TESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin 1 Teoretický úvod: TESTOVÁNÍ GMO Obecně na úvod Určitě jste už slyšeli pojem geneticky modifikovaný organismus (GMO). Úprava vlastností přirozeně
VíceÚLOHA C Klonování PCR produktu do plasmidu
Jméno a učo: Datum: ÚLOHA C Klonování PCR produktu do plasmidu TEORETICKÝ ÚVOD Při klonování PCR produktů do plasmidů se využívá vlastnosti Taq polymerasy, a jiných non-proofreading polymeras, přidávat
Více1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
VíceNávod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie
Datum... Jméno... Kroužek... Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie Téma: Vybrané imunochemické metody 1. Úloha Imunoprecipitační křivka lidského albuminu a stanovení Princip: koncentrace
VíceS filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem.
Western Blotting Příprava blotovacího sendviče... 1 Blotování... 2 Kontrola přenesení proteinů na membránu... 2 Blokování membrány... 2 Aplikace protilátek... 2 Vizualizace... 3 Vyvolání filmu... 4 Chemikálie
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
VíceMendelova genetika v příkladech. Transgenoze rostlin. Ing. Petra VESELÁ, Ústav lesnické botaniky, dendrologie a geobiocenologie LDF MENDELU Brno
Mendelova genetika v příkladech Transgenoze rostlin Ing. Petra VESELÁ, Ústav lesnické botaniky, dendrologie a geobiocenologie LDF MENDELU Brno Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem
VícePROTOKOL WESTERN BLOT
WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají
VíceIzolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
VíceColumn DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202)
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202) Popis Column DNA Lego Kit je základ moderní stavebnicové (Lego) soupravy pro izolaci čisté DNA různého
VíceBakteriální bioluminiscenční test. Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu
Bakteriální bioluminiscenční test Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu BBTT Cíl: Stanovit účinek odpadních vod na bakterie Vibrio fischeri. Principem
VíceMolekulární biotechnologie č.12. Využití poznatků molekulární biotechnologie. Transgenní rostliny.
Molekulární biotechnologie č.12 Využití poznatků molekulární biotechnologie. Transgenní rostliny. Transgenní organismy Transgenní organismus: Organismus, jehož genom byl geneticky modifikován cizorodou
VíceMOLEKULÁRNÍ METODY V EKOLOGII MIKROORGANIZMŮ
MOLEKULÁRNÍ METODY V EKOLOGII MIKROORGANIZMŮ (EKO/MMEM) ÚPRAVA PŘÍRODNÍCH VZORKŮ A STANOVENÍ MIKROBIÁLNÍ ABUNDANCE (DAPI) Pro přímé stanovení celkových počtů mikrobiálních buněk (buněčné abundance) ve
VíceDIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální choroby
VíceSDS-PAGE elektroforéza
SDS-PAGE elektroforéza Příprava gelu... 1 Recept na 0.75 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Recept na 1.5 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Příprava vzorku... 3 Elektroforéza... 3 Barvení gelů Blue Silver... 4 Chemikálie
VícePraktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu
Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu Toto blokové praktické cvičení spočívá v teoretickém i praktickém seznámení s rekombinantními proteiny, jejich izolací, purifikací a využitím.
VíceTransformace ptdna tabáku genem E7/GUS a eliminace selekčního genu za využití homologní rekombinace
Transformace ptdna tabáku fúzním genem E7/GUS a eliminace selekčního genu za využití homologní rekombinace Jiřich ich BřízaB 1,, Josef Vlasák 1, Štěpán n Ryba, Viera Ludvíkov ková 3, Hana Niedermeierová
VíceMODERNÍ BIOFYZIKÁLNÍ METODY:
MODERNÍ BIOFYZIKÁLNÍ METODY: POKROČILÉ PRAKTICKÉ VZDĚLÁVÁNÍ V EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGII Operační program Vzdělávání pro konkurenceschopnost Číslo projektu: CZ.1.07/2.3.00/09.0046 Praktický kurz pokročilých
VíceCOMET ASSAY (SINGLE CELL GEL ELECTROPHORESIS)
COMET ASSAY (SINGLE CELL GEL ELECTROPHORESIS) OBSAH 1. Princip metody 2. Přístroje a zařízení 3. Příprava vzorků 3.1 Kultivace a sklízení buněk A549 3.2 Výpočet koncentrace buněk 3.3 Hodnocení viability
VíceLRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 3. TESTY ŽIVOTASCHOPNOSTI A POČÍTÁNÍ BUNĚK
LRR/BUBCV CVIČEÍ Z BUĚČÉ BILGIE 3. TESTY ŽIVTASCHPSTI A PČÍTÁÍ BUĚK TERETICKÝ ÚVD: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability). Tímto
VíceRNA Blue REAGENS PRO RYCHLOU PŘÍPRAVU ČISTÉ A NEDEGRADOVANÉ RNA (katalogové číslo R011, R012, R013)
RNA Blue REAGENS PRO RYCHLOU PŘÍPRAVU ČISTÉ A NEDEGRADOVANÉ RNA (katalogové číslo R011, R012, R013) Upozornění: RNA Blue obsahuje fenol a další toxické komponenty. Při kontaktu s kůží je nutné omytí velkým
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Investice do rozvoje vzdělávání Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Investice do rozvoje vzdělávání
VíceBAKTERIÁLNÍ REZISTENCE
BAKTERIÁLNÍ REZISTENCE Petr Zouhar, Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.; UK v Praze, PřF, Katedra fyziologie V této úloze se v hrubých rysech seznámíte s některými metodami používanými v běžné molekulárně
Víceanalýza dat a interpretace výsledků
Genetická transformace bakterií III analýza dat a interpretace výsledků Předmět: Biologie ŠVP: Prokaryotní organismy, genetika Doporučený věk žáků: 16-18 let Doba trvání: 45 minut Specifické cíle: analyzovat
VíceProtokol č. 7 Pozorování živých a mrtvých buněk kvasinek Vitální test
Protokol č. 7 Pozorování živých a mrtvých buněk kvasinek Vitální test Cíl cvičení: Bude se jednat o přímé nebo nepřímé stanovení počtu buněk? Stanovujeme počet živých nebo mrtvých buněk? Jak odlišíme živé
VícePřímé stanovení celkového počtu buněk kvasinek pomocí Bürkerovy komůrky Provedení vitálního testu
Přímé stanovení celkového počtu buněk kvasinek pomocí Bürkerovy komůrky Provedení vitálního testu Otázky k zamyšlení: Bude se jednat o přímé nebo nepřímé stanovení počtu buněk? Stanovujeme počet živých
Více167 ml Folinova činidla doplníme do 500 ml destilovanou vodou. Toto činidlo je nestabilní, je nutné připravit vždy čerstvé a uložit při 4 C.
ROZTOKY 1. Činidlo A 12,5 g (NH 4 ) 6 MO 7 O 4. 4H 2 O rozpustíme ve 125 ml bidestilované vody; 0,5 g K(SbO)C 4 H 4 O 6. 0,5 H 2 O rozpustíme ve 20 ml bidestilované vody; Oba tyto roztoky důkladně promícháme
VíceInovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/
Dělení bílkovin pomocí diskontinuální elektroforézy v polyakrylamidovém gelu (PAGE) Při elektroforéze dochází k pohybu (migraci) iontů v elektrickém poli. Elektroforetické metody se tedy používají k separaci
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/
Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Genomika (KBB/GENOM) Fyzické mapování Fyzické cytogenetické a fyzické molekulární mapy Ing. Hana Šimková, CSc. Cíl přednášky
VícePříprava vektoru IZOLACE PLASMIDU ALKALICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLACE DNA GELOVÁ ELEKTROFORÉZA RESTRIKČNÍ ŠTĚPENÍ. E. coli. lyze buňky.
Příprava vektoru IZOLCE PLSMIDU LKLICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLCE DN E. coli plasmidová DN proteiny proteiny + + vysrážená plasmidová lyze buňky + snížení ph chromosomální DN centrifugace DN chromosomální
VíceWestern blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
VíceVAKUOLY - voda v rostlinné buňce
VAKUOLY - voda v rostlinné buňce Úvod: O vakuole: Vakuola je membránová struktura, která je součástí většiny rostlinných buněk. Může zaujímat 30-90% objemu buňky. Vakuola plní v rostlinné buňce mnoho důležitých
VíceIZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)
17.1 Izolace DNA (kit DNeasy Plant Mini) Strana 1 IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini) 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorku pomocí komerčního kitu DNeasy Plant
VíceIzolace RNA. doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD..
Izolace RNA doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD.. Metodiky izolace RNA celková buněčná RNA ( total RNA) zahrnuje řadu typů RNA, které se mohou lišit svými fyzikálněchemickými vlastnostmi a tedy i nároky na jejich
VíceTeoretický úvod: FOTOTROPISMUS. Praktikum fyziologie rostlin
Teoretický úvod: FOTOTROPISMUS Praktikum fyziologie rostlin 1 Teoretický úvod: FOTOTROPISMUS Fototropismus náleží mezi vitální ohybové pohyby rostlin. Řadí se mezi pohyby paratonické povahy, tj. je vyvolán
VícePO STOPÁCH BAKTERIÍ V/KOLEM NÁS
PO STOPÁCH BAKTERIÍ V/KOLEM NÁS Jana Spáčilová, UK v Praze, PřF, Katedra buněčné biologie Svět bakterií je nesmírně druhově bohatý a máme ho blíž než před očima. Mikroskopickými metodami můžeme obdivovat
VíceTéma: Testy životaschopnosti a Počítání buněk
LRR/BUBV vičení z buněčné biologie Úloha č. 3 Téma: Testy životaschopnosti a Počítání Úvod: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability).
VíceRůst a vývoj rostlin - praktikum
Růst a vývoj rostlin - praktikum Blok II Úlohy 1. Lokalizace aktivity promotorů gametofytických genů 2. Gametofytické mutace 3. Umlčování mrna v pylových láčkách Teoretický úvod Samčí gametofyt krytosemenných
VíceVybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1.
VíceBUNĚČNÁ STĚNA - struktura a role v rostlinné buňce
BUNĚČNÁ STĚNA - struktura a role v rostlinné buňce Buněčná stěna O buněčné stěně: Buněčná stěna je nedílnou součástí každé rostlinné buňky a je jednou z charakteristických struktur odlišujících buňku rostlinnou
VíceZákladní praktická cvičení z molekulární biologie
Univerzita Palackého Přírodovědecká fakulta Základní praktická cvičení z molekulární biologie Kolektiv autorů: Doc. RNDr. Milan Navrátil, CSc. RNDr. Lenka Uvírová Mgr. Petr Nádvorník, Ph.D. Ing. Marie
VíceVzdělávání středoškolských pedagogů a studentů středních škol jako nástroj ke zvyšování kvality výuky přírodovědných předmětů CZ.1.07/1.1.00/14.
Praktické cvičení z chemie 1) Stanovení lipofilních listových barviv pomocí adsorpční chromatografie. 2) Stanovení proteinů v roztoku. 3) Homogenizace rostlinného materiálu pomocí tekutého dusíku a stanovení
VíceTEORETICKÝ ÚVOD. Počítání buněk
Jméno: Obor: Datum provedení: TEORETICKÝ ÚVOD Počítání buněk Jednou z nezbytných dovedností při práci s biologickým materiálemk je stanovení počtu buněk ve vzorku. V současné době se v praxi k počítání
VícePOSTUPY PRÁCE. 1.1 Stanovení počtu erytrocytů
POSTUPY PRÁCE 1.1 Stanovení počtu erytrocytů Potřeby: banička, Hayemův roztok, mikropipety 25 l a 4 950 l, kapátka, podložní sklíčko, Bürkerova komůrka, krev, emetní miska, čtverečky buničité vaty. Postup
VíceMICRONUKLEUS TEST MODIFIKACE S CYTOCHALASINEM B
MICRONUKLEUS TEST MODIFIKACE S CYTOCHALASINEM B O B S A H: 1. Princip Micronucleus testu 2. Chemikálie a spotřební materiál 3. Přístroje a pomocná zařízení 4. Pracovní postup 4.1 Kultivace buněk 4.2 Zpracování
VíceMendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin Inovace praktických cvičení molekulárně-biologických předmětů o sekvenční úlohy PRACOVNÍ PROTOKOL PRO PŘEDMĚT METODY MOLEKULÁRNÍ A
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES 1 Rozsah a účel Metodika slouží ke stanovení počtu probiotických kvasinek v doplňkových látkách, premixech a krmivech.
VíceELFO: DNA testovaných vzorků společně se značeným velikostním markerem je separovaná standardně použitím agarosové elektroforézy.
SOUTHERNOVA HYBRIDIZACE Existuje celá řada protokolů pro Southernovu hybridizaci. Tyto protokoly se do značné míry totožné co se týče úvodních fází, jako je příprava vzorků elektroforetickou separací,
VíceCvičení ke kurzu Obecná ekotoxikologie. Úloha A - Stanovení ekotoxicity v testu klíčení rostlin
Cvičení ke kurzu Obecná ekotoxikologie Nutné potřeby, které studenti přinesou s sebou do cvičení: - Tento návod - Poznámkový sešit, psací potřeby - Nůžky - Pravítko (s milimetrovým rozlišením) - Přezůvky
VíceTECHNIKY EXPLANTÁTOVÝCH KULTUR
UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA KATEDRA BOTANIKY NÁVODY KE CVIČENÍM TECHNIKY EXPLANTÁTOVÝCH KULTUR BOT/TEKSB Studijní předmět: volitelný LS Garant RNDr. Božena Navrátilová, PhD.
VíceŘasový test ekotoxicity na mikrotitračních destičkách
Řasový test ekotoxicity na mikrotitračních destičkách 1 Účel Řasové testy toxicity slouží k testování možných toxických účinků látek a vzorků na vodní producenty. Zelené řasy patří do skupiny necévnatých
VíceSure-MeDIP I. with magnetic beads and MNase. www.krd.cz
Sure-MeDIP I with magnetic beads and MNase www.krd.cz 1 Obsah soupravy a skladování MeDIP souprava obsahuje reagencie na provedení 25 reakcí. Souprava je rozdělen do dvou částí, jedna je distribuována
VíceBakalářské práce. Magisterské práce. PhD práce
Bakalářské práce Magisterské práce PhD práce Témata bakalářských prací na školní rok 2015-2016 1 Název Funkční analýza jaderných proteinů fosforylovaných pomocí mitogenaktivovaných proteinkináz. Školitel
VícePRÁCE S MIKROSKOPEM Praktická příprava mikroskopického preparátu
PRÁCE S MIKROSKOPEM 1. Praktická příprava mikroskopického preparátu 2. a) Z objektu, jehož část, chceme pozorovat pomocí mikroskopu, musíme nejprve vytvořit mikroskopický preparát. Obr. č. 1 b) Pozorovaný
VíceŠkolení GMO Ústav biochemie a mikrobiologie
Školení GMO Ústav biochemie a mikrobiologie 2.2.2018 Agrobacterium tumefaciens OZNÁMENÍ o uzavřeném nakládání první a druhé kategorie rizika na Ústavu biochemie a mikrobiologie VŠCHT a Ústavu biotechnologie
VíceVybrané úlohy z toxikologie
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybrané úlohy z toxikologie Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1. TENKOVRSTEVNÁ CHROMATOGRAFIE
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv
Národní referenční laboratoř Strana KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ GENETICKÝCH MODIFIKACÍ METODOU qpcr POMOCÍ ROTOR-GENE PROBE PCR KITU Účel a rozsah Postup slouží ke kvantitativnímu stanovení genetických modifikací
VíceCvičení 4: CHEMICKÉ SLOŽENÍ BUŇKY, PROKARYOTA Jméno: PROKARYOTA PŘÍPRAVA TRVALÉHO PREPARÁTU SUCHOU CESTOU ROZTĚR BAKTERIÍ
Cvičení 4: CHEMICKÉ SLOŽENÍ BUŇKY, PROKARYOTA Jméno: Skupina: PROKARYOTA PŘÍPRAVA TRVALÉHO PREPARÁTU SUCHOU CESTOU ROZTĚR BAKTERIÍ Praktický úkol: bakterie (koky, tyčky) vyžíhejte bakteriologickou kličku
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceVETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE ÚSTAV EKOLOGIE A CHOROB ZVĚŘE, RYB A VČEL
VETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE ÚSTAV EKOLOGIE A CHOROB ZVĚŘE, RYB A VČEL Standardní operační postup - SOP 03 Terestrické testy ekotoxicity Stanovení
VíceTento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a Státním rozpočtem ČR InoBio CZ.1.07/2.2.00/28.0018
Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a Státním rozpočtem ČR InoBio CZ.1.07/2.2.00/28.0018 2.4 GENETICKÉ MANIPULACE in vitro - nekonvenční techniky, kterými lze modifikovat rostlinný
VíceVÝVOJ DNA ČIPŮ PRO DETEKCI GENETICKY MODIFIKOVANÝCH ORGANISMŮ
VÝVOJ DNA ČIPŮ PRO DETEKCI GENETICKY MODIFIKOVANÝCH ORGANISMŮ Lucie Vištejnová 2, Jan Hodek 1, Patrik Sekerka 2, Jaroslava Ovesná 1, Kateřina Demnerová 2 1. Výzkumný ústav rostlinné výroby, Drnovská 507,
VíceIZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS 1 Rozsah a účel Postup slouží ke stanovení počtu probiotických bakterií v doplňkových látkách, premixech
VíceCvičení č. 2: Pasážování buněk. 1) Teoretický základ
Cvičení č. 2: Pasážování buněk 1) Teoretický základ Kultivace buněk in vitro (ve zkumavce) - Snaha o napodobení podmínek v organismu - Používání jednorázového spotřebního materiálu a speciálních chemikálií
VíceSDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE)
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) Princip SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza slouží k separaci proteinů na základě jejich velikosti (molekulové hmotnosti). Zahřátím vzorku za
VícePraktický kurz Praktický kurz monitorování apoptózy a autofágie u nádorových prostatických buněk pomocí průtokové cytometrie
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Praktický kurz Praktický kurz monitorování apoptózy a autofágie u nádorových prostatických buněk pomocí průtokové cytometrie Nastavení průtokového cytometru a jeho
VíceProtokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze
1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,
VíceOBECNÁ MIKROBIOLOGIE MIKROBIOLOGICKÁ LABORATOŘ. Petra Lysková [1]
OBECNÁ MIKROBIOLOGIE MIKROBIOLOGICKÁ LABORATOŘ Petra Lysková [1] BEZPEČNOST PRÁCE tašky zamknout ve skříňce vstup do laboratoře pouze v plášti a přezůvkách bez prstýnků a sepnuté vlasy dochvilnost! vstup
VícePříprava GFP pro molekulárně biologické aplikace 1.část: Biosyntéza GFP
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Příprava GFP pro molekulárně biologické aplikace 1.část: Biosyntéza GFP Anotace Zelený fluorescenční protein (GFP), který lze vnést do všech možných buněk a organismů.
VícePolymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP)
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Polymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP) Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2017/18 Obsah POLYMORFISMUS
VíceMagPurix Bacterial DNA Extraction Kit
MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit Kat. č. ZP02006 Doba zpracování: 55-65 minut pro MagPurix 12S 55-75 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit je určena pro izolátor
VíceMTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk / Jana Horáková
MTI Cvičení č. 2 Pasážování buněk 15.11./16.11.2016 Jana Horáková Doporučená literatura M. Vejražka: Buněčné kultury http://bioprojekty.lf1.cuni.cz/3381/sylabyprednasek/textova-verze-prednasek/bunecnekultury-vejrazka.pdf
VíceTkáňové kultury rostlin. Mikropropagace
Tkáňové kultury rostlin Mikropropagace IN VITRO KULTURY (EXPLANTÁTOVÉ KUTLURY, ROSTLINNÉ EXPLANTÁTY) Izolované rostliny, jejich orgány, pletiva či buňky pěstované in vitro ve sterilních podmínkách Na kultivačních
VíceLRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 2. PLASMATICKÁ MEMBRÁNA
LRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 2. PLASMATICKÁ MEMBRÁNA TEORETICKÝ ÚVOD: Cytoplasmatická membrána je lipidová dvouvrstva o tloušťce asi 5 nm oddělující buňku od okolního prostředí. Nejvíce jsou v
VíceVážení, odměřování objemů
Vážení, odměřování objemů Vážení K nezbytnému vybavení každé laboratoře patří váhy, pomocí kterých určujeme množství dané látky. Princip vážení je znám po staletí. Jde o srovnávací metodu, kdy se srovnává
VíceExprese rekombinantních proteinů
Exprese rekombinantních proteinů Exprese rekombinantních proteinů je proces, při kterém můžeme pomocí různých expresních systémů vytvořit protein odvozený od konkrétního genu, nebo části genu. Tento protein
VíceCVIČENÍ IV. IZOLACE PLAZMIDOVÉ DNA, ELEKTROFORÉZA PLAZMIDOVÉ DNA, TRANSFORMACE
CVIČENÍ IV. IZOLACE PLAZMIDOVÉ DNA, ELEKTROFORÉZA PLAZMIDOVÉ DNA, TRANSFORMACE Rychlé šíření antimikrobiální rezistence mezi bakteriemi odlišných druhů nebo rodů se uskutečňuje především horizontálním
VíceVitální barvení, rostlinná buňka, buněčné organely
Vitální barvení, rostlinná buňka, buněčné organely Vitální barvení používá se u nativních preparátů a rozumíme tím zvýšení kontrastu určitých buněčných složek v živých buňkách, nebo tkáních pomocí barvení
VíceTerapeutické klonování, náhrada tkání a orgánů
Transfekce, elektroporace, retrovirová infekce Vnesení genů Vrstva fibroblastů, LIF Terapeutické klonování, náhrada tkání a orgánů Selekce ES buněk, v nichž došlo k začlenění vneseného genu homologní rekombinací
VíceNávody pro praktikum Analýza struktury chromatinu Petra Procházková Schrumpfová, Miloslava Fojtová
Návody pro praktikum Analýza struktury chromatinu Petra Procházková Schrumpfová, Miloslava Fojtová 1. Izolace buněčných jader z rostlinných tkání Před začátkem práce je nutno si připravit: Pracovní roztoky
VíceJednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY
5321.1 Stanovení obsahu taninů v čiroku Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY 1 Účel a rozsah Postup je určen pro stanovení obsahu taninů v zrnech čiroku. 2 Princip Taniny se ze
VíceIZOLACE DNA POMOCÍ CTAB PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR
1253.1 Izolace DNA pomocí CTAB pro stanovení GMO Strana 1 IZOLACE DNA POMOCÍ CTAB PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorků krmiv
Více1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků
1 Popis vzorku Podle tohoto postupu se vyšetřují vzorky různých druhů masných výrobků. Pomocí histochemického barvení lze prokázat přítomnost škrobových zrn a na jejich základě vyslovit podezření o použití
VíceSYLABY VZDĚLÁVACÍCH MODULŮ A JEJICH PŘEDMĚTŮ
SYLABY VZDĚLÁVACÍCH MODULŮ A JEJICH PŘEDMĚTŮ EKOTECH Multidisciplinární výchova odborníků pro využití biotechnologií v ekologických oblastech 1) Název modulu: Transgenoze rostlin a její využití Garant:
VíceMendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin Inovace laboratorních úloh genetických předmětů metodikami pracujícími s ribonukleovými kyselinami pšenice Metodické návody pro laboratorní
VíceMODERNÍ BIOFYZIKÁLNÍ METODY:
- 1 - MODERNÍ BIOFYZIKÁLNÍ METODY: POKROČILÉ PRAKTICKÉ VZDĚLÁVÁNÍ V EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGII Operační program Vzdělávání pro konkurenceschopnost Číslo projektu: CZ.1.07/2.3.00/09.0046 Praktický kurz základních
VíceMIKROBIOLOGIE V BIOTECHNOLOGII
Biotechnologie MIKROBIOLOGIE V BIOTECHNOLOGII Využití živých organismů pro uskutečňování definovaných chemických procesů pro průmyslové nebo komerční aplikace Organismus je geneticky upraven metodami genetického
VíceKURZ ZÁKLADNÍCH METOD MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE
EKOTECH KURZ ZÁKLADNÍCH METOD MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE Biologické centrum AV ČR, České Budějovice Lektoři: Radmila Čapková Frydrychová Miroslava Sýkorová Jindra Šíchová Václav Brož OBSAH STR. PŘÍPRAVA ROZTOKŮ.
VíceI N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í
I N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í TENTO PROJEKT JE SPOLUFINANCOVÁN EVROPSKÝM SOCIÁLNÍM FONDEM A STÁTNÍM ROZPOČTEM ČESKÉ REPUBLIKY Laboratorní práce č. 8 Sacharidy Pro potřeby projektu
VíceVETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE ÚSTAV EKOLOGIE A CHOROB ZVĚŘE, RYB A VČEL
VETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍ HYGIENY A EKOLOGIE ÚSTAV EKOLOGIE A CHOROB ZVĚŘE, RYB A VČEL Standardní operační postup - SOP 02 Terestrické testy ekotoxicity Stanovení
VíceStanovení izoelektrického bodu kaseinu
Stanovení izoelektrického bodu kaseinu Shlukování koloidních částic do větších celků makroskopických rozměrů nazýváme koagulací. Ke koagulaci koloidních roztoků bílkovin dochází porušením solvatačního
VíceTermochemie. Úkol: A. Určete změnu teploty při rozpouštění hydroxidu sodného B. Určete reakční teplo reakce zinku s roztokem měďnaté soli
1. Termochemie Úkol: Určete změnu teploty při rozpouštění hydroxidu sodného B. Určete reakční teplo reakce zinku s roztokem měďnaté soli Pomůcky : a) kádinky, teploměr, odměrný válec, váženka, váhy, kalorimetr,
VíceMikroskopické preparační techniky pro analýzu rostlinných stonků
Mikroskopické preparační techniky pro analýzu rostlinných stonků Cílem cvičení je demonstrace rychlé a efektivní mikroskopické preparační metody, která byla vyvinuta na základě letitých zkušeností v laboratořích
VíceLABORATORNÍ PRÁCE KLUB PAMPELIŠKA
LABORATORNÍ PRÁCE KLUB PAMPELIŠKA Denisa Štohanzlová VII.C ZŠ POLNÁ, PODĚBRADOVA 79 2006/2007 Laboratorní práce č. 1 Jméno: Téma: Bludiště pro fazoli Pomůcky: nůžky, lepící lásku, lepidlo květináč, zem,
VícePROTOKOL NORTHERNOVA HYBRIDIZACE
! NORTHERNOVA HYBRIDIZACE Vzhledem k tomu, že se při Northern hybridizaci pracuje s RNA a RNA je extrémně citlivá na působení RNáz, je zapotřebí se vyvarovat jakékoliv kontaminace RNázami. Pro snížení
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Investice do rozvoje vzdělávání Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Investice do rozvoje vzdělávání
Více