Sérologický kardiolipinový a netreponemový test určený pro rychlou detekci Syphilisu KATALOGOVÉ ČÍSLO: RPRL-0100 (100 testů)

Transkript

1 RPRL VDRL Carbon Sérologický kardiolipinový a netreponemový test určený pro rychlou detekci Syphilisu KATALOGOVÉ ČÍSLO: RPRL-0100 (100 testů) (1, 2) KLINICKÝ VÝZNAM Syfilis je venerické onemocnění způsobené spirochétou Treponema pallidum. Toto onemocnění se rozvíjí během několika let ve 3 stádiích, oddělených asymptomatických stádiích, během kterých může být diagnóza stanovena pouze sérologickými testy. Vzhledem k tomu, že tento organismus není možno kultivovat na kultivačních půdách, závisí diagnostika syfilisu na korelaci klinických dat a výsledcích sérologických testů. Protilátky jsou detekovatelné asi 3-4 týdny po nakažení a na detekovatelné hladině se mohou udržet po dlouhé období po léčbě. Vznikají 2 skupiny protilátek: netreponemové protilátky (reaginy), které reagují s nespecifickými antigeny (VDRL nebo RPR test), a treponemové protilátky, které reagují se specifickými antigeny T. pallidum (TPHA test). Protilátky k netreponemovým antigenům se objevují (normálně) při aktivním onemocnění a jejich hladina klesá po úspěšné léčbě. Specifické protilátky přetrvávají dlouhou dobu potom, co byla infekce úspěšně léčena. Je nezbytně nutné testovat obě skupiny protilátek, protože netreponemové protilátky mohou stoupat i z jiných důvodů než je infekce syfilisu. Titr protilátek detekovaný RPR testem je přesnějším obrazem stáří nemoci a její odpovědi na léčbu. METODA (3-6) Kvalitativní nebo semikvantitativní aglutinační test. PRINCIP TESTU RPR test je sérologický kardiolipinový a netreponemový test určený pro rychlou detekci syfilisu. Činidla obsahují suspenzi kardiolipin/lecitin/cholesterol a uhlíkové částice pro zlepšení vizuálního odečtu. Kardiolipinové antigeny reagují s protilátkami (reaginem) přítomnými ve vzorku a dochází k formování makroskopicky viditelných černých shluků. SLOŽENÍ ČINIDEL A MATERIÁL, KTERÝ JE SOUČÁSTÍ SOUPRAVY Antigen suspenze kardiolipin/lecitin/cholesterol s uhlíkovými částicemi 1 x 2 ml Pozitivní kontrola sérum obsahující protilátky 1 x 0,5 ml Negativní kontrola sérum bez protilátek 1 x 0,5 ml Plastová míchadélka 100 ks Reakční destičky 10 ks Nádobka na činidla 1 ks Kapátko/jehla na nádobku 1 ks POTŘEBNÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ SOUČÁSTÍ SOUPRAVY Mikropipety Fyziologický roztok (0,9% NaCl) Rotátor schopný rotovat rychlostí 100 rpm

2 BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ - Činidla a kontroly obsahují méně jak 0,1% azidu sodného. Azid sodný reaguje s měděnými a olověnými instalačními trubkami za vzniku explozivních azidů kovů. Pokud vylíváte do kanalizace, splachujte zároveň velkým množstvím vody. - Kontroly obsahují materiál humánního původu. Dbejte běžných bezpečnostních opatření a správné laboratorní praxe. Všechny humánní materiály by měly být považovány za potencionálně infekční. Všechny výrobky odvozené z krve a jsou připravovány výhradně z krve individuálně testovaných dárců, která byla negativní na HbsAg a protilátky k HCV a HIV 1/ HIV 2. Nicméně, nakládejte s materiálem s jako potencionálně infekčním. - Zamezte působení příliš vysokých teplot a přímého slunečního svitu. - Pro eliminaci kontaminace používejte čisté laboratorní vybavení nebo materiál na jedno použití. - Doporučuje uchovávat lahvičky se suspenzí kardiolipinového antigenu ve vertikální poloze, aby se eliminovala možnost aglutinace. - Oblasti vlastní reakce se nedotýkejte prsty. Dotek by mohl zanechat mastné stopy, které mohou způsobit invaliditu testu. LIKVIDACE ODPADU Veškerý materiál likvidujte dle místních nařízení. SKLADOVÁNÍ ČINIDEL Činidla a kontroly skladované při 2-8 C a chráněné před světlem jsou stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu. Žádné z činidel nezmrazujte. Po otevření soupravy skladuje reakční destičky při pokojové teplotě. PŘÍPRAVA A STABILITY PRACOVNÍKU ROZTOKU Činidla jsou připravená k použití. Před použitím přizpůsobte všechna činidla pokojové teplotě (20-25 C) a promíchejte je převracením lahvičky, abyste zamezili vzniku pěny. Souprava obsahuje nádobku na antigen. Lahvičku obsahující suspenzi antigenu řádně protřepejte. Nasaďte kapátko na nádobku a nasajte do nádobky suspenzi antigenu. Při dlouhém skladování suspenze v nádobce může tato ztratit svoji stabilitu, proto se doporučuje na konci pracovního dne přenést suspenzi zpět do původní skleněné lahvičky. Vyprázdněnou nádobku pak opláchněte destilovanou vodou a nechte uschnout na vzduchu. VZORKY - Vzorek Čerstvé sérum nebo plazma. Nepoužívejte hemolyzované, kontaminované nebo lipemické sérum. Séra by měla být před provedením testu přizpůsobena pokojové teplotě a resuspendována. - Skladování Sérum může být před testováním uchováváno při teplotě 2-8 C po dobu 48 hodin. V případě dlouhodobějšího skladování je možné zamrazit na teplotu -20 C po dobu maximálně 1 měsíce. Rozmrazené vzorky musí být před testováním promíchány.

3 Vzorky séra opakovaně nezmrazujte, protože by došlo ke vzniku falešně pozitivních výsledků. KALIBRACE Test je kalibrován dle referenčního séra pro sérodiagnostické testy treponemálních infekcí Světové zdravotnické organizace (WHO) (ref ). KONTROLA KVALITY Doporučuje se testovat funkčnost test kontrolními séry pro každou sérii. PRACOVNÍ POSTUP Kvalitativní test Činidla přizpůsobte pokojové teplotě (20-25 C). - Do kroužku na reakční destičce naneste 1 kapku (50 µl) vzorku. - Pomocí plochého konce plastového míchadélka rozneste vzorek po celé oblasti testovacího kroužku. Pro každý vzorek použijte nové míchadélko. - Naneste jednu volně ukápnutou kapku (16 µl) suspenze antigenu pomocí přiložené nádobky nebo pipety. - Rotujte destičkou rychlostí 100 rpm na automatickém rotátoru po dobu 8 minut. - Pod dobrým světlem hledejte okamžitě přítomnost nebo absenci viditelné aglutinace. Poznámka: neodečítejte déle než po 8 minutách. Semikvantitativní test Činidla přizpůsobte pokojové teplotě (20-25 C). - Nařeďte vzorek (který byl již shledán pozitivním) ve fyziologickém roztoku (NaCl 0,9%): ½; ¼; 1/8; 1/16; atd. - Do kroužku na reakční destičce naneste 1 kapku (50 µl) každého ředění. - Pomocí plochého konce plastového míchadélka rozneste vzorek po celé oblasti testovacího kroužku. Pro každý vzorek použijte nové míchadélko. - Naneste jednu volně ukápnutou kapku (16 µl) suspenze antigenu pomocí přiložené nádobky nebo pipety. - Rotujte destičkou rychlostí 100 rpm na automatickém rotátoru po dobu 8 minut. - Pod dobrým světlem hledejte okamžitě přítomnost nebo absenci viditelné aglutinace. Poznámka: neodečítejte déle než po 8 minutách. ODEČET A INTERPRETACE Silně pozitivní: průměrné a velké černé shluky obecně rozprostřené po celém povrchu testovací kruhové oblasti. Slabě pozitivní: krásně rozptýlené černé shluky Negativní výsledek: homogenní uhlíkaté shluky v centru testovací oblasti nebo šedá suspenze na celém povrchu kruhové testovací oblasti. Negativní kontrola by neměla vykazovat po 8 minutách žádnou aglutinaci. Pozitivní kontrola by měla vykazovat po 8 minutách pozitivní výsledek.

4 Pokud kontroly a známé vzorky pacientů nevykazují po 8 minutách očekávané výsledky, test by měl být považován za invalidní. U semikvantitativního testu je titrem séra poslední ředění, které vykázalo pozitivní výsledek. Pozitivní kontrola by měla mít titr ¼ +/- jedno ředění. PROVÁDĚCÍ CHARAKTERISTIKY - Prozonový efekt Nebyl detekován žádný prozonový efekt (Hook) až do ředění 1/ Korelace RPR test byl vyhodnocen na 675 vzorcích v roce 1995 NRL pro Syfilis ve Velké Británii. Zde jsou výsledky: Výsledky RPR testu Pozitivní vzorky Negativní vzorky Celkem Syphilis pozitivní Syphilis negativní Celkem Senzitivita: > 99% Specificita: > 99% (1, 8, 9) LIMITACE 1- Výzkum syfilisu pro systémové testování musí být prováděn kardiolipinovou reakcí skupiny 1 (RPR-VDRL Carbon, VDRL latex, VDRL barvený) a reakcí skupiny 2 (TPHA. FTA Abs nebo EIA). Finální diagnóza může být stanoveny pouze při korelaci výsledků s klinickými příznaky. 2- Jako u jiných testů založených na determinaci reaginů, může RPR test produkovat falešně pozitivní výsledky díky biologickým důvodům: infekce (např.: lepra, jiné venerické onemocnění, mononukleóza), nebo neinfekční důvody (např.: autoimunitní onemocnění (lupus erythematodes revmatoidní horečka), drogová závislost, těhotenství, hepatitida, vyšší věk). 3- Vzorek pacienta, který byl shledán kvalitativně negativní, ale syfilis se předpokládá, musí být testován semikvantitativně, aby se eliminoval možný prozonový efekt. LITERATURA

5 Poslední revize: 10/2013 Poslední revize překladu do českého jazyka: 10/2014 ELITech MICROBIO Parc d activités du Plateau 19, allée d Athènes SIGNES FRANCE Tel.: 33 (0) Fax: 33 (0)