IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY

Transkript

1 INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM v lidském séru, plazmě nebo mozkomíšním moku Souprava EIA TBEV Ig je určena ke stanovení protilátek všech tříd v lidském a zvířecím séru (kromě myší)

2 Úvod Klíšťová encefalitida je infekční virové onemocnění, jehož původce řadíme mezi arboviry do čeledi Flaviviridae. Jedná se o nákazu s přírodní ohniskovostí. Rezervoárem viru jsou drobná i větší lesní zvířata a přenašečem různá vývojová stádia klíšťat. Člověk se nejčastěji nakazí po přisátí (i krátkodobém) infikovaného klíštěte, výjimečně požitím tepelně nezpracovaného infikovaného mléka. Nejvíce hlášených případů klíšťové encefalitidy je v létě a na podzim. Manifestní onemocnění mívá často dvoufázový průběh. Po inkubační době (3-14 dní) nastupují nespecifické chřipkové příznaky (horečka, bolesti hlavy a svalů, malátnost). Následuje několikadenní zlepšení stavu a poté dochází k rozvoji neurální fáze nemoci (prudké bolesti hlavy, poruchy vidění, zvracení, malátnost, meningeální příznaky, postižení hlavových nervů, parézy končetin). Akutní fáze klíšťové encefalitidy trvá 1-3 týdny. Těžší průběh, často i s trvalými následky, lze pozorovat u seniorů. Diagnostika onemocnění: Pro diagnostiku onemocnění je důležitá anamnéza, klinický obraz a výsledky laboratorních testů. Vzhledem ke krátkému trvání viremické fáze není přímý průkaz antigenu pro diagnostiku onemocnění vhodný. Sérologie, spolu s biochemickým a cytologickým vyšetření likvoru jsou v laboratorní diagnostice klíšťové encefalitidy klíčové. Diagnostický význam jednotlivých tříd protilátek IgM: Marker akutní infekce Mohou přetrvávat až 10 měsíců : Anamnestické nebo postvakcinační protilátky Přetrvávají dlouhodobě (několik let), zajišťují ochranu vůči další infekci Stanovení avidity umožňuje přesnější určení fáze onemocnění

3 Protilátková odpověď Infekční a postinfekční protilátková odpověď Akutní infekce Prodromální stádium Inkubační doba Titr protilátek avidita IgM Hraniční Čas Dny Měsíce Roky Protilátky třídy IgM lze detekovat počátkem neurální fáze onemocnění. Nejvyšších titrů dosahují po 2-6 týdnech. Mohou přetrvávat až 10 měsíců. Nástup tvorby protilátek třídy je paralelní s tvorbou IgM nebo může být o několik dnů opožděn. Postvakcinační protilátková odpověď Titr protilátek AU/ml avidita Měsíce Roky 1. dávka 2. dávka 3. dávka Hraniční Čas Použití souprav Průkaz onemocnění klíšťovou encefalitidou Kontrola účinnosti očkování proti klíšťové encefalitidě

4 Princip testu Pracovní postup Soupravy EIA TBE Virus a IgM jsou založeny na sendvičovém typu ELISA metody. Krok č. 1 Kroky testu Ředění vzorků séra/plazmy (1+100) Sandwich ELISA 2 Inkubace 10 min. při 37 C HRP HRP 3 Dávkování kontrol a ředěných vzorků 100 µl blank = 100 µl Ředicího roztoku vzorků Anti-Hu Anti-Hu IgM 4 Inkubace 30 min. při 37 C 5 Odsátí a promytí jamek 5 krát IgM 6 Dávkování Konjugátu 100 μl včetně blanku 7 Inkubace 30 min. při 37 C 8 Odsátí a promytí jamek 5 krát Ag Ag 9 Dávkování substrátu (TMB-Complete) 100 μl včetně blanku Mikrotitrační destička Souprava EIA TBEV Ig je založena na kompetitivním typu ELISA metody. 10 Inkubace 15 min. při 37 C 11 Dávkování Zastavovacího roztoku 100 μl včetně blanku Kompetitivní ELISA HRP Anti-Mouse Ig 12 Fotometrické měření při 450 nm EIA TBEV Ig má jiný EIA protokol (celkový čas testu 2,5 hodiny). Antigeny IgM Myší Anti-TBEV Purifikovaný a inaktivovaný nativní antigen viru klíšťové encefalitidy Ag Ag Ag Ag Mikrotitrační destička Uživatelský komfort Komponenty v pracovním ředění Barevně odlišené reagencie Zaměnitelnost komponent Barevně značené stripy s odlamovacími jamkami CUT-OFF kontrola Semikvantitativní hodnocení výsledků (Index pozitivity-ip) Kvantitativní hodnocení protilátek (U/ml) Možnost převodu na VIEU/ml (Institut virologie Vídeň)

5 Výhody souprav Interpretace výsledků Vysoká diagnostická účinnost Dobrá reprodukovatelnost Vysoká dynamika testů Identický pracovní postup Celková doba vyšetření 1,5 hodiny Možnost kvantitativního stanovení (EIA TBE Virus ) Aviditní test (EIA TBE Virus + avidity) Ředící roztok vzorků obsahuje RF sorb (EIA TBE Virus IgM) Vhodné pro otevřené automatické systémy Možnost nezávislé verifikace (CKS) Komplexní zákaznický servis IgM Hodnocení + akutní infekce (velmi časné stádium) + + akutní infekce + anamnestické nebo postvakcinační protilátky negativní výsledek ELISA Charakteristiky souprav Diagnostická citlivost Diagnostická specifita EIA TBE Virus 98,7 % 97,7 % EIA TBE Virus IgM 96,6 % 98,9 % EIA TBEV Ig 95,7 % 95,7 % Klinická data Akutní infekce titr protilátek IgM a, avidita IgM titr protilátek titr protilátek avidita Index pozitivity (IP) 3 Index pozitivity (IP) 3 Index avidity (IA) % vzorky (n=47) vzorky (n=47) vzorky (n=47)

6 INFEKČNÍ SÉROLOGIE Objednací údaje ELISA Kód Název soupravy Počet testů TBG096 EIA TBE Virus 96 TBM096 EIA TBE Virus IgM 96 TBE096 EIA TBEV Ig 96 CFT Kód TBEKF1 KFAs00 KFAs01 Název soupravy TBEV CF Ag lyophil. (1 ml) CF AMBOCEPTORset (0,5 ml) CF AMBOCEPTORset (1 ml) xxxtln xxxtlp CKS negativní (dle seznamu na CKS pozitivní (dle seznamu na 3,5 ml 3,5 ml KFC001 CF- COMPLEMENT (1 ml) Kontakt TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. Křižíkova Brno, Česká republika Tel.: (237, 238) Fax: TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. je držitelem certifikátů ISO 9001:2008 a ISO 13485:2003.