INSEMINACE KONÍ Multimediální učební pomůcka pro výuku reprodukce hospodářských zvířat II Řešitelé : prof. Ing. František Louda, DrSc. Ing. Alena Ježková, CSc. Doc. Ing. Luděk Stádník, Ph.D. Ing. Jan Navrátil, CSc. Ing. Jan Beran FOND ROZVOJE VYSOKÝCH ŠKOL č.projektu 2652 /2010 Katedra speciální zootechniky, FAPPZ, ČZU v Praze 1
Plemenný hřebec Typický představitel Českého teplokrevníka 2
Pohlavní vydražďování hřebce před odběrem ejakulátu koní 3
Odběr spermatu hřebce pomocí fantomu 4
Plodnost, pohlavní aktivita, puberta - Plodnost zahrnuje:kvalitu ejakulátu libido sexuális pohlav. aktiv. pohlavní aktivita je ovlivněna ročním obdobím,hladinou testosteronu v letě vyšší o více než 3ng/cm 3 - velikostí varlat, plemenem, věkem objem ejakulátu - kolísá od 50 do 200 cm 3 (prům. 120) - na podzim v zimě poloviční produkce spermií - Odhad celkové denní produkce spermií velikost varlat - Puberta definována věkem - 83 týdnů produkcí cca - 5O mil. spermií a aktivita 10% -Zařazení do plemenitby - chladnokrevná plemena ve věku 3 let - teplokrevná plemena ve věku nad 4 roky - po výkonnostních zkouškách nebo po výsledcích na dostihové dráze 5
Přednosti inseminace koní a- čerstvým semenem - hygiena,kontrola zdravot. stavu pohlavních orgánů - efektivní využití hřebců do vyššího věku - transport klisny zranění přepravou nebo hřebcem - zapuštění klisen, které nemohou být zapuštěny hřebcem - ověřená kvalita ID - vyšší % zabřezávání - rozvoj obchodu se spermatem b-mraženým spermatem - vytvoření banky semene - využití spermatu mimo sezónu mražení - mezinárodní výměna spermatu - využití spermatu nežijících hřebců 6
Pohlavní ústrojí hřebce v době klidu horizontální postavení varlat v šourku 7
Zatahování pyje po odběru ejakulátu 8
Vlastnosti hřebčího semene - spermatogenní cyklus trvá 12-13 dnů - objem želatinózní složky kolísá až 1/3 ejakulátu - fruktóza v semen. plazmě zanedbatelné množství - ergothionin a kys. citronová velké množství - málo fosfolipidů přímý vztah k citlivosti na chladový šok - u hřebců je třeba 1,5-2,2 skoků - na jednu ejakulaci do umělé vaginy 9
Frekvence odběru ejakulátu a vlastnosti hřebčího ejakulátu - Hřebci v inseminaci se odebírají 1 x za týden - Při zhoršení kvality ejakulátu prodloužit sexuální pauzu Vlastnosti ejakulátu : - Objem kolísá od 50do 200 cm 2 (chladnokr. -150, teplokr. 60) - hlenová složka ejakulátu baktericidní účinky - Barva - bílá až do šeda závisí na koncentraci spermií - Konzistence vodnatá - ph - 6,7-7,5 (pokud stoupne ph na 7,8 výrazně alkalické, - znamená, že nebyl získán celý ejakulát ) - Koncentrace od 0,1do 0,3x10 6 /mm 3 (spermiová frakce až 0,8) - Celkový počet spermií v ejakulátě kolísá od 6 do 48x10 9 - projevuje se vliv ročního období - Aktivita 60-80%, patologické do 30-35%, 10
Příprava umělé vagíny k odběru spermatu Nasazení jednorázové vložky vytvoření prostoru pro vodu 40-42 o C 11
Příprava vagíny k odběru vymazávání sterilní vazelínou 12
Krakovský typ vagíny pro odběr spermatu od hřebců 13
Sterilní sběrač semene se před odběrem překryje sterilní gázou, která slouží k filtraci želatinózní frakce a udržení sterility odebraného spermatu 14
Fantom obalený sterilní folií připravený k odběru. Přítomnost klisny stimuluje pohlavní aktivitu odebíraného hřebce 15
Technika odběru pomocí zkrácené vagíny - asistentka zachycuje ejakulát do sběrače 16
17
Odebraný ejakulát ve sběrači 18
Mikroskopické hodnocení spermatu 19
Stanovení objemu získaného ejakulátu vážením a ekvilibrace naředěného 20
Inseminační dávka - Značení jméno a registr, laboratoř, den odběru Ins. dávky pro krátkodobou konzervaci - objem - 10 cm 3-300x10 6 spermií - aktivita 60% - Ins. dávka dlouhodobě konzervovaného spermatu - objem 10 cm 3-300 až 400x10 6 spermií - aktivita nejméně 30% - do 10 000 nepatogenních mikroorg. v 1 cm 3 21
Příprava inseminační dávky a její kompletace + inseminační pipeta a rukavice 22
Chladící box (+4 0 C) - pro krátkodobou konzervaci spermatu, ID, ředidel, chladových akumulátorů 23
ID připravená k odeslání 24
Dlouhodobá konzervace spermatu U hřebců jsou výrazné rozdíly v mrazitelnosti spermatu a jeho následné oplozovací schopnosti - projevuje se vliv individuál. složení semenné plazmy - vliv individuálního porušení akrozomu mražením Forma mražení ID - v peletách 0,1-0,5 1 cm 3 - Nagase (1996) - v pejetách objem 5-6 cm 3 - Martin (1979) - glycerin individuální citlivost semene Rozmrazování ID ve vodě zahřáté na 45-50 0 C - po dobu 10-20 sec. 25
Kontejner na uchovávání ID v tekutém dusíku 26
INSEMINACE KLISNY II. část 27
Faktory ovlivňující pohlavní aktivitu klisen 28
Anatomické zvláštnosti pohlavního ústrojí klisny - děložní krček - větší průměr - na pohmat měkký - růžice krčku - vystupuje 2,5 cm do vagíny - délka krčku - 5-15 cm - vulva - délka 10-13 cm - vagína - délka 15-22 cm - děloha - tělo délka17-20 cm, přechází neznatelně v rohy - jejich délka 26 cm a více - tělo dělohy - má značnou kapacitu (objem) - stěny dělohy na pohmat tuhé a tenké - - chybí tonus - dělohy 29
Fixace klisny před inseminací 30
Délka říje připouštěcí období Říje u klisny - trvá 5-7 dnů, - kolísá od 3do 13 dnů, opakuje se po 21 dnech - nejvýraznější říje - od února do června, též - (po celý rok) - na podzim-horší výsledky zabřez. - prodlužování noci v 11.-12. měs.- na 20 hod. a následně -prodlužování dne v lednu urychlí nástup říje o 1. měsíc - připouštěcí období - od ledna do června 31
Nástup říje a ovulace - Po porodu 4.-7. den a trvá do 10. -13. dne, - zapouštění hřebcem - 9. den po porodu - Ovulace variabilní zpravidla ke konci říje - Ovulace též v druhé polovině říje 24-28 hod. před koncem říje - Zrání graaf. Folikulů - probíhá v ovulační jamce - V době říje se krček otevře na - 2-4 prsty - Začátek říje u klisny náhlý - konec pozvolný - Neexistuje korelace mezi intenzitou říje a stupněm vývoje folikulů 32
Zjišťování říje - hřebcem - Po porodu 4.-7. den a trvá do 10. -13. dne, - přirozené zapouštění hřebcem - 9. den po porodu - ovulace - variabilní zpravidla ke konci říje - ovulace - též v druhé polovině říje 24-28 hod. před koncem říje - zrání graaf. folikulů probíhá v ovulační jamce - V době říje se krček otevře na 2-4 prsty - Začátek říje u klisny náhlý - konec pozvolný - Neexistuje korelace mezi intenzitou říje a stupněm vývoje folikulů 33
Zjišťování říje technikem Musí být tři příznaky: 1- vnější projevy říje 2- otevření dělož. krčku na 3 prsty 3- palpací - rektálně sledovat velikost folikulů stupně 1 až 6 největší Vaječník klisny tvar ledviny, povrch hladký,( 4x2x2 cm) Na vaječníku klisny dozrává jeden folikul v tzv.- ovulační jamce V průběhu říje se folikuly intenzívně zvětšují 34
Stanovení příznaků říje přivedením klisny k hřebci Zjišťování říje zkušebním hřebcem 4 stádia : 1- příznaky nevýrazné neklid 2- příznaky zřetelnější zvedání ocasu, blýská, stojí klidně 3- příznaky říje sama jde k hřebci 4- příznaky velmi zřetelné je obtížné ji odvést od hřebce - toto je nejvhodnější doba pro IA, AI se opakuje po 36-48 hod. do konce říje -po skončení říje - klisna hřebce odbíjí -po zapuštění za 16.-21. dnů se klisna vede k hřebci zkouška zabřeznutí 35
Příprava klisny na vyšetření a inseminaci 36
Vyšetření stádia říjového cyklu u klisny pomocí sonografu 37
Klisna připravená k vyšetření a posouzení poševních hlenů 38
Rektální vyšetření pohlavního ústrojí klisny před inseminací 39
Dynamika vývoje folikulů v době říje 40
Stupně růstu folikulů v době říje: 1. stupeň- do 3 dnů po začátku říje 5x3x2 cm 2. stupeň zvětšení časti vaječníku stává se asimetrický trvá další 1 až 3 dny-6x4x3 3. stupeň vaječník hruškovitý tvar- trvá 1-3 dny u folikulu patrná fluktuace a vystupuje z vaj. 4. stupeň citlivost vaječníku a f. zřetelná 7x6x6 - folikul vystouplý, naplněný tekutinou, uvnitř silný tlak fluktuace - není patrná - začít inseminovat 5. stupeň dochází k ovulaci- vaječník ztrácí kulatou formu, stádium trvá 1-3 hodiny 6. stupeň tvorba ŽT v místě prasklého folikulu Optimální doba pro AI - 4.-5 stupeň- dále reinseminovat pokud nedojde k ovulaci do 24-48 hod. 41
Terciální folikul klisny před ovulací 42
Inseminace klisny - schéma 43
Způsoby inseminace Vaginální metodou do dělohy - Otevřený krček - Ampule se semenem zahřátým na 35 0 C- svisle držet flakon s ID - pozor na vzduchovou bublinu při AI, též pod rukou vniká vzduch - Zasunout inseminační pipetu 10-15 cm do krčku - Sevřít děložní krček po zasunutí pipety - Inseminace 15.sec. reinseminace nutná - Dodržovat hygienu a sterilitu provedení AI - Velikost ID - 10 ml čerstvé, mražené 5-25 ml - Po AI klisnu provádět vypuzení vzduchu z dělohy 44
Napojení inseminační pipety na inseminační dávku 45
Kontrola vzduchové bubliny při plnění pipety spermatem 46
Navlečení jednorázové rukavice 47
Vložení inseminační pipety do dlaně 48
Dlaň chrání konec inseminační pipety při jejím zavedení do vagíny 49
Potření rukavice vazelínou 50
Zavedení inseminační pipety pod ochranou dlaně 51
Vytlačení ID na konec děložního krčku do dělohy 52
Masáž dělohy s cílem vytlačení vzduchu, který zhoršuje postup spermií 53
Vliv světelného dne na pohlavní aktivitu klisen 54
Hormonální profil v průběhu říjového cyklu klisny 55
Uzavřené typy vagín v ČR se nepoužívají Missouri Colorado 56
Každý plemenný hřebec musí být licentován obdrží Registr plemeníka 57
Poděkování za spolupráci rodině Ing.Zdeňka Mullera, CSc. - z Mnětic u Pardubic 58