Virus granulózy obaleče jablečného

Virus granulózy obaleče jablečného CpGV v integrované a organické produkci v integrované a organické produkci METODIKA PRO PRAXI Jitka Stará Vladan Falta Tereza Zichová Jana Ouředníčková František Kocourek Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2009 1

Metodika vznikla za finanční podpory MZe a je výstupem projektu NAZV č. 1G58081 Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. ISBN: 978-80-7427-021-5

Jitka Stará, Vladan Falta, Tereza Zichová, František Kocourek Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. Jana Ouředníčková Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský, s.r.o. Virus granulózy obaleče jablečného v integrované a organické produkci METODIKA PRO PRAXI Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i. 2009

Anotace: Virus granulózy obaleče jablečného, Cydia pomonella granulovirus (CpGV) je entomopatogenní mikroorganismus využívaný v moderním ovocnářství v zahraničí. Jedná se o velmi účinnou metodu biologické ochrany, srovnatelnou s běžně používanými insekticidy. Výhodou oproti chemickým přípravkům jsou příznivé ekotoxikologické vlastnosti a selektivita vůči necílovým organismům. Tyto atributy předurčují přípravky na bázi CpGV k zařazení do systémů integrovaného a organického režimu pěstování a také do produkce určené na dětskou výživu. Informace uvedené v metodice shrnují jak poznatky z dostupné vědecké literatury, tak údaje výrobců prostředků ochrany, i poznatky získané v průběhu řešení výzkumných projektů. Vzhledem k připravovanému uvedení přípravků na bázi CpGV na náš trh, je cílem metodiky přispět k jejich optimálnímu využívání, zejména ve vztahu k aplikačním termínům a prevenci vzniku rezistence. Předkládaná publikace je určena pro pěstitele, jejichž prioritou je minimalizace používání pesticidů, dále orgány státní správy (SRS), studenty a další potenciální uživatele. Annotation: The entomopatogenic microorganism Cydia pomonella granulovirus (CpGV) belongs to the most frequently used tools in modern pest control management abroad. It is a very effective method of biological control comparable with common insecticides. Environment friendly features and selectivity against non target organisms are very clear arguments for preferable use of CpGV products in integrated, organic and baby food growing systems. Information presented in the publication is resuming the literature resources, instruction of producers, and results obtained during realizing research projects. Considering the expected introduction of CpGV products to the Czech market the aim of the publication consists in their optimum use in praxis namely in the context of application scheduling and antiresistant strategy. The users of publication should involve all growers preferring minimum use of pesticides, workers of State Phytosanitary Administration, students and other readers interested in this theme. Dedikace: Metodika vznikla za finanční podpory MZe a je výstupem projektu NAZV č. 1G58081 Inovace ochrany jádrovin vůči škůdcům v systému integrované produkce a v organickém zemědělství. Jména oponentů a názvy jejich organizací: 1. Pavel Kašpárek, Ekofrukt Slaný spol. s r.o. 2. Ing. Mgr. Miloslava Navrátilová, Ph.D., Státní rostlinolékařská správa, odbor diagnostiky Olomouc Metodika byla schválena Odborem výzkumu a vývoje MZe ČR pod č.j. 39638/2005-13020 ze dne 22.12.2009 MZe ČR doporučuje tuto metodiku pro využití v praxi.

OBSAH 1 Cíl metodiky 6 2 Vlastní popis metodiky 8 2.1 Taxonomie a bionomie viru granulózy obaleče jablečného 8 2.2 Obaleč jablečný - bionomie 10 2.3 Přípravky na bázi CpGV - historie 12 2.4 Výsledky testování přípravků na bázi CpGV 14 2.5 Rezistence obaleče jablečného k CpGV 16 2.6 Způsob použití přípravků na bázi CpGV 20 4 Shrnutí a závěr 22 5 Srovnání novosti postupů 23 6 Popis uplatnění metodiky 23 7 Seznam použité související literatury 24 8 Seznam publikací, které předcházely metodice 26 PŘÍLOHY Slovník vybraných odborných termínů 27 PŘÍLOHY Insekticidy registrované proti obaleči jablečnému v roce 2009 28

6 CpGV v integrované a organické produkci 1 Cíl metodiky Pěstování ovoce v poslední době celosvětově směřuje k využívání postupů, u kterých je kladen důraz na ochranu životního prostředí a zdraví spotřebitelů. Významnou roli v tomto vývoji hraje forma regulace škodlivých organismů, jež zahrnuje celou řadu rizikových faktorů spojených s aplikacemi pesticidů, jako např. výskyt reziduí v plodech, selekci rezistentních populací organismů, redukci výskytu přirozených nepřátel, zátěž životního prostředí, aj. Ideálním nástrojem pro minimalizaci uvedených negativních dopadů je využívání účinných biopreparátů. Tímto způsobem nejen snížíme přísun cizorodých látek do prostředí a potravin, ale také můžeme při vhodném managementu přispět ke zvýšení výskytu přirozených nepřátel škůdců a posílení přírodní rovnováhy v sadech. Využívání biopreparátů je proto jedním ze základních prvků, které vytvářejí mozaiku integrované i organické produkce (obr. 1). Významné místo v insekticidních zásazích ve výsadbách jádrovin zaujímá obaleč jablečný (Cydia pomonella L.). V našich podmínkách je u tohoto škůdce při vyšší infestaci nutno počítat se 4-5 aplikacemi za sezónu, což mnohdy představuje více než polovinu veškerých insekticidních ošetření. Potřeba nahradit chemickou ochranu vhodnějšími prostředky je v tomto případě naléhavá, obzvláště na lokalitách, kde došlo k selekci populací obaleče jablečného rezistentních k řadě insekticidů. Obdobná je situace v sadech zaměřených na produkci určenou pro zpracování na dětskou výživu a v organické produkci. Ve světě se v průběhu posledních dvou desetiletí v přímé biologické ochraně proti obaleči jablečnému prosadily především dvě technologie: 1) využívání viru granulózy obaleče jablečného (Cydia pomonella granulovirus - CpGV), 2) metoda dezorientace. Předností přípravků na bázi CpGV je vynikající účinnost, dále selektivita a bezpečnost pro životní prostředí. Cílem předkládané publikace je přispět k optimálnímu využívání přípravků na bázi CpGV. Uživatel a další čtenáři budou kromě toho seznámeni s biologickým principem účinku a s historií vývoje přípravků na bázi CpGV, s výsledky pokusů prováděných v ČR a s dalšími informacemi.

CpGV v integrované a organické produkci 7 Obr. 1: Znázornění prvků integrované produkce významnou úlohu zde hrají biopreparáty Organická produkce: = systém, který účelně spojuje kulturní, biologické a technologické postupy podporující obnovu zdrojů, ekologickou rovnováhu a biodiverzitu Cíle integrované produkce: 1) Ekonomické systémy pěstování ovoce respektující ochranu životního prostředí, multifunkční úlohy zemědělství, zejména aspekty sociální, kulturní a rekreační 2) Zajištění trvale udržitelné produkce kvalitního ovoce s minimálním výskytem reziduí v plodech 3) Ochrana zdraví pěstitelů 4) Podpora biodiverzity ekosystému sadů a jejich okolí

8 CpGV v integrované a organické produkci 2 Vlastní popis metodiky 2.1 Taxonomie a bionomie CpGV TAXONOMICKÉ ZAŘAZENÍ CPGV. Cydia pomonella granulovirus (CpGV), původce granulózy obaleče jablečného, patří do čeledi Baculoviridae (bakuloviry) a rodu Betabaculovirus (dříve Granulovirus). Podobně jako ostatní bakuloviry vyniká CpGV šetrností k životnímu prostředí a necílovým organizmům a hraje důležitou roli v integrované a oragnické produkci ovoce. (Jehle a kol., 2006). CHARAKTERISTIKA IZOLÁTŮ CPGV. Genom CpGV je tvořen cirkulární dvouřetězcovou DNA (123,5 kb) sbalenou do kapsidy tyčinkovitého tvaru. V roce 2001 byl osekvenován in vivo klonovaný M1 genotyp mexického izolátu (CpGV-M), který byl objeven v Mexiku v roce 1963 a o rok později ho popsal Y. Tanada (Tanada, 1964, Luque a kol., 2001). Přestože byly v 80. let 20. století popsány i další dva izoláty CpGV (CpGV-R z Ruska a CpGV-E z Anglie) do komerčně využívaných biopreparátů byl do nedávna používán jen CpGV-M (Crook a kol., 1985; Crook a kol., 1997). VirosoftCP4 (BioTEPP, Kanada) se stal roku 2000 prvním přípravkem na bázi jiného izolátu CpGV. Obsahuje CpGV z infikovaných housenek obaleče jablečného nalezených v Kanadě. Skutečný zájem o nové izoláty započal po roce 2003, kdy byly v Evropě zaznamenány první potíže s účinností CpGV-M (Jehle a kol., 2006; Fritsch a kol., 2005; Zingg a Kessler, 2007; Asser- Kaiser a kol., 2007). Později byla potvrzena rezistence lokálních populací obaleče jablečného k CpGV-M a byly nalezeny a popsány nové izoláty, které mají genetické i biologické odlišnosti od CpGV-M. HOSTITELSKÝ OKRUH CPGV. Nejvýznamnějším hostitelem CpGV je obaleč jablečný (Cydia pomonella L.). Pouze několik částic viru (3-17) pozřených housenkou prvního instaru (L1) stačí k tomu, aby započala infekce končící smrtí hostitele (Cossentine a kol., 2005). Jediným dalším citlivým hostitelem CpGV je Thaumatotibia (=Cryptophlebia) leucotreta (Meyrick) (anglicky false codling moth falešný obaleč jablečný ). C. leucotreta je významným škůdcem citrusů, bavlníku a dalších plodin.

CpGV v integrované a organické produkci 9 Obr. 2: Infekční cyklus CpGV PRIMÁRNÍ INFEKCE. Pro uskutečnění infekčního procesu je nutný příjem granulí s potravou. Po jejich transportu do středního střeva hostitele dochází vlivem alkalického ph k rozpouštění bílkovinného obalu (granulin), který chránil částici ve vnějším prostředí. Uvolněné infekční částice prvního typu (occlusion derived virus - ODV) procházejí peritrofickou membránou a pronikají až do buněčných jader buněk střevního epitelu, kde dochází k primární infekci. SEKUNDÁRNÍ INFEKCE. Sekundární infekci vyvolávají částice druhého typu, tzv. pučící částice (budded virus - BV), uvolňující se z napadených buněk. Při pučení modifikují BV svým obalovým fuzním proteinem cytoplazmatickou membránu buňky hostitele a využívají ji jako svůj obal. Poté se infekce za pomoci BV rozšiřuje do dalších tkání hostitele (hemocyty, vzdušnice, nervové buňky, tukové těleso a další). Průběh infekce lze rozdělit do 3 fází: 1) časná (do 6 h po infekci), 2) pozdní (6 24 h po infekci) a 3) velmi pozdní fáze (18 24 až 72 h po infekci). Zatímco BV se vytvářejí v pozdní fázi infekce, ve velmi pozdní fázi dochází opět k vytváření částic typu ODV, produkci bílkovinného obalu (granulin) a vzniku nových granulí. Infekční cyklus CpGV začíná přijetím granule - okluzního tělíska (occlusion body - OB) housenkou vnímavého hostitele. Ke kontaktu s virovými částicemi housenka přichází buď přímo, tj. v průběhu žíru, nebo nepřímo při pohybu po listech či plodech ošetřených viry. Infekce vznikne po pozření virových částic zachycených na těle housenky. Možný je také přenos viru z nemocných nebo již usmrcených housenek na nové jedince, ale tento způsob má pro účely praktické ochrany zřejmě menší význam (housenky se vyvíjejí uvnitř plodů). Většinu populace lze především zasáhnout krátce po vylíhnutí, kdy se housenky pohybují a vyhledávají vhodné místo k žíru. Virové proteinázy (chitináza a katepsin) se podílejí na degradaci chitinu exoskeletu a rozložení těla hostitele, při kterém se nově vytvořené granule uvolní do prostředí (Funk a kol., 1997; Luque a kol., 2001; Kalmakoff a Ward, 2003) Po vytvoření závrtku, aniž by předtím došlo k infekci, se pravděpodobnost příjmu virových částic minimalizuje. Z některých studií (Quénin & Laur 2003) vyplývá, že je možný i tzv. vertikální (tj. na následující generaci) přenos CpGV, což lze např. ověřit molekulární detekcí přítomnosti viru v přezimujících housenkách. Tento efekt je však slabší a pro účinnou ochranu v daném roce je třeba se zaměřit na líhnoucí se housenky.

10 CpGV v integrované a organické produkci 2.2 Obaleč jablečný bionomie a škodlivost BIONOMIE. Obaleč jablečný má u nás většinou jednu úplnou a druhou částečnou (obvykle početně menší) generaci. V polohách nad 250 m n.m. a v chladnějších letech má pouze jednu generaci za rok. Přezimují housenky 5. instaru v kokonech v borce, trhlinách, pod ochrannými pásy, v půdě pod stromy. Přezimující housenky se postupně kuklí od dubna až do začátku července. První motýli se líhnou při dosažení SET10(d)=80 C. Motýli jsou aktivní za soumraku, létají při teplotách nad 12 C a páří se, pokud teplota v 21h (SEČ) dosáhne alespoň 15 C. Hromadné kladení vajíček nastává za večerů, kdy teplota v 21h přesáhne 17 C. Samice kladou vajíčka většinou jednotlivě, zpočátku na listy, později na plody. Housenky vnikají do plodů, kde vyžírají chodbu až do jádřince. Část populace housenek této první generace po ukončení vývoje vstupuje do diapauzy, část dokončuje vývoj a dává vznik druhé generaci. V podmínkách ČR se motýli druhé generace líhnou jen z housenek, které k 21.7. dosáhly čtvrtého instaru. Jestliže bylo k tomuto datu dosaženo od prvního kladení vajíček SET nižší než 305 C, všechny housenky první generace vstupují do diapauzy. Začátek líhnutí a let motýlů druhé generace začíná v teplých oblastech nebo v teplých letech v polovině července a pokračuje podle teplotních podmínek do konce srpna, případně až do konce září (obr. 3). ŠKODLIVOST. Housenky obaleče jablečného způsobují obecně známou červivost plodů. Housenky krátce po vylíhnutí z vajíček vnikají do plodů, nejčastěji na zastíněném místě plodu, případně v místě dotyku dvou plodů, plodu a listu, apod. Chodba (závrtek) v jablku směřuje většinou přímo do jádřince a je vyplněná trusem housenky. Po ukončení žíru housenka opouští jablko buď vstupní chodbou, nebo vyhryže zvláštní chodbu. Napadené plody předčasně dozrávají, a pokud dojde k časnému poškození nebo pokud je poškozena větší část jádřince, plody opadávají. Vedle snížení výnosů dochází ke snížení kvality plodů. Závrtky po žíru housenek znehodnocují plody vzhledově i chuťově a jsou příčinou rozvoje skládkových chorob. Poškození při neúspěšné ochraně může dosahovat 35% v oblastech s 1 generací a 80% při dvou generacích. Rozsah škod způsobený housenkami 2. generace je obecně vyšší.

CpGV v integrované a organické produkci 11 Obr. 3: Životní cyklus obaleče jablečného

12 CpGV v integrované a organické produkci 2.3 Přípravky na bázi CpGV- historie USA, KANADA. Izolát CpGV byl získán v Mexiku v roce 1963 (Tanada, 1964) z infikovaných housenek obaleče jablečného. Pak následoval výzkum zaměřený na umělou produkci viru a v letech 1965-1972 probíhaly polní pokusy (California, USA). První komerční formulaci (SAN 406) tohoto entomopatogenního mikroorganismu vyvinula společnost Sandoz Corporation, která v roce 1981 podpořila další experimenty. V dalších 3 letech byl SAN 406 testován v řadě dalších zemí. V roce 1984 firma Sandoz aktivity zaměřené na entomopatogenní viry ukončila a tím i práci na vývoji přípravku na bázi CpGV. Nyní jsou v USA registrovány přípravky: Cyd-X (1995) Certis USA, Virosoft CP4 (2000) Biotepp, a Carpovirusine (2001) Sumitomo Corporation (nyní Arysta LifeScience). S výjimkou přípravku VirosoftCP4 všechny uvedené preparáty obsahují mexický izolát. EVROPA. V Evropě byly první pokusy s CpGV zahájeny v roce 1970. V roce 1979 Komise evropského společenství (Commission of European Communities, zkr. CEC) iniciovala program Biologické ochrany výsadeb jabloní ( Biological Control in Apple Orchards ). CEC podpořila další výzkum za účelem využití CpGV v sadech v tehdejší vyspělé části Evropy. Po ukončení výzkumných aktivit firmy Sandoz zaměřených na přípravek SAN 406, evropské vládní agentury ve spolupráci s výrobci finalizovali tři komerční CpGV produkty: Madex (1988, Andermatt Biocontrol, Švýcarsko), Granupom (1991, Hoechst, Německo) a Carpovirusine (1993, Calliope, Francie). Podle posledních údajů činila v roce 2009 plocha ošetřená pomocí CpGV v Evropě 100 tis. ha. ČESKÁ REPUBLIKA. Vývoj probíhal také v dalších zemích, například v Rusku to byl preparát Virin-CyAP (Rohrmann, 2008). V České republice byl v první fázi testován preparát Biolavirus-CP firmy Biola Chelčice (Stará a Kocourek, 2003) v dalších letech pak došlo k testování přípravků Madex (2005-2009) a Carpovirusine (2006-2008). Pozn.: V letech 2004-2006 byl rovněž experimentálně testován proti obaleči zimolezovému přípravek Capex 2 na bázi viru granulózy obaleče zimolezového (AdorGV).

CpGV CPGV v V integrované INTEGROVANÉ a organické A ORGANICKÉ produkci PRODUKCI HISTORIE 13 Zdroj: Huber, 2006 Plocha ošetřená v roce 2009 přípravky na bázi CpGV činila v rámci Evropy 100 000 ha. Tabulka. 1: Vybrané přípravky na bázi CpGV s platnou registrací v roce 2009 Obchodní název Výrobce Izolát viru Registrováno v Cyd X Madex Thermo Trilogy, nyní Certis Andermatt Biocontrol Mexický původní Mexický původní Madex Max* Andermatt Biocontrol neuveden Madex Plus* Carpovirusine Granupom, Granupom N, Granupom Apfelmadenfrei Granupom Granupom neu Andermatt Biocontrol Calliope, nyní Arysta LifeScience Hoechst AgrEvo, nyní Probis a Neudorff Biobest OMYA Mexický selektovaný Mexický původní Mexický původní Mexický původní Mexický původní Kanada, USA Evropa, Nový Zéland a jiné Německo, Švýcarsko Švýcarsko Kanada, USA Německo Belgie Švýcarsko CARPOVIRUS Plus INTA, Agro Roca neuveden Argentina VIROSOFT CP4 BioTEPP Kanadský Kanada, USA */ přípravky účinné proti populacím obaleče jablečného rezistentním k CpGV M

14 CpGV v integrované a organické produkci 2.4 Výsledky testování přípravků na bázi CpGV ÚVOD. V rámci výzkumných projektů bylo v letech 2004-2008 na několika lokalitách (Velké Bílovice, Ruzyně, Holovousy) uskutečňováno testování přípravku Madex a v letech 2006-2008 byl testován přípravek Carpovirusine. Výsledky byly prezentovány v odborném tisku a na zahraničních konferencích a zároveň sloužily jako podklad pro registrační řízení. Graf 1 KOMENTÁŘ K VÝSLEDKŮM. Ve Velkých Bílovicích bylo v prvním roce pokusů (2005) dosaženo u druhé generace prostřednictvím přípravku Madex příznivějších výsledků než u varianty s chemickou ochranou. Výsledky byly ovlivněny značnou infestací ploch v daném roce a také rezistencí obaleče k používaným insekticidům. V následujících letech se však podařilo snížit populační hustotu škůdce jak pomocí CpGV, tak nových selektivních insekticidů. U obou variant byl v letech 2006 a 2007 zaznamenán srovnatelný efekt (graf 1). Graf 2 Průběh výsledků pokusů v Ruzyni (graf 2) ukazuje postupné snižování populační hustoty obaleče jablečného po aplikacích CpGV (Carpovirusine). Červivost postupně klesla z počátečních 8,5% (rok 2006) na 0,8% (rok 2008), což byl výsledek srovnatelný s insekticidy. SHRNUTÍ: Na základě prováděných pokusů lze konstatovat, že účinnost obou testovaných CpGV přípravků proti obaleči jablečnému byla srovnatelná s referenčními chemickými přípravky. Odlišnost oproti insekticidům spočívá v pomalejším snižování populační hustoty škůdce a v nižší perzistenci přípravků po aplikaci.

CPGV V INTEGROVANÉ A ORGANICKÉ PRODUKCI -VÝSLEDKY POKUSŮ CpGV v integrované a organické produkci 15 7 Na Na lokalitě lokalitě Holovousy 2006-2008 Holovousy bylo v průběhu Graf 3: Holovousy bylo 6 - červivost plodů (%) v průběhu 3 let 3 let (2006-2008) 5 (2006-2008) dosaženo dosaženo aplikacemi 4 přípravku aplikacemi Carpovirusine přípravku 3 výsledků srovnatelných Carpovirusine s chemickým 2 výsledků ošetřením. Napadení plodů většinou srovnatelných 1 s chemickým výrazně ošetřením. nepřesáhlo 0 1% Napadení (oproti kontrole plodů 1.generace 2.generace 1.generace 2.generace 1.generace 2.generace se většinou 4-5% červivosti výrazně v adekvátních nepřesáhlo termínech). 1% Kontrola Carpovirusine Insekticidy (oproti kontrole se 4-5% červivosti Graf 3 2006 2007 2008 v adekvátních termínech). Tabulka 2: Souhrnný přehled pokusů prováděných s přípravky na bázi CpGV v České republice v letech 2005-2008. A=Hodnocení červivosti, B=hodnocení housenek v pásech. A Napadení plodů (%) Rok Lokalita Přípravek Dávka/ha Kontrola CpGV Insekticidy I. II. I. II. I. II. 2005 V. Bílovice Madex 3 100 ml 66.4 58 6.4 6 4.8 9.8 V. Bílovice Madex 3 100 ml N 0.4 1.8 2.4 1 2.2 2006 Ruzyně Carpovirusine 1 litr 23.05 N 8.52 N 0.88 N Holovousy Carpovirusine 1 litr 1.25 5.2 0.25 1.25 0 1 V. Bílovice Madex 3 100 ml N N 3.2 1 1 2 2007 V. Bílovice Carpovirusine 1 litr N N 1.6 0.6 1 2 Ruzyně Carpovirusine 1 litr 9 2.84 2 0.67 0.67 0 Holovousy Carpovirusine 1 litr 1.62 4.5 0.19 0.49 0.12 0.56 2008 Ruzyně Carpovirusine 1 litr 10.17 10.3 0.84 3.5 0 0.17 Holovousy Carpovirusine 1 litr 3.75 2 1 0.25 0.5 0.25 B Rok Lokalita Přípravek Dávka/ha Počet housenek v pásech (ks/strom) Kontrola CpGV Insekticidy I. II. I. II. I. II. 2005 V. Bílovice Madex 3 100 ml 0.2 0 N 10.1 0 0 V. Bílovice Madex 3 100 ml 0.8 3.2 9.8 9.8 1.6 4.6 2006 Ruzyně Carpovirusine 1 litr N N N N N N Holovousy Carpovirusine 1 litr N N N N N N V. Bílovice Madex 3 100 ml 0.12 0.56 N N 0.02 0.96 2007 V. Bílovice Carpovirusine 1 litr 0.06 0.46 N N 0.02 0.96 Ruzyně Carpovirusine 1 litr 0.38 0.32 2 1.38 0.06 0.08 Holovousy Carpovirusine 1 litr N N N N N N 2008 Ruzyně Carpovirusine 1 litr 0.02 0.02 0.26 0.52 0.06 0 Holovousy Carpovirusine 1 litr N N N N N N Pozn.: N = hodnocení nebylo provedeno 13

16 CpGV v integrované a organické produkci 2.5 Rezistence obaleče jablečného k CpGV ÚVOD. Podle zkušeností z řady jiných situací v ochraně (mera skvrnitá, svilušky, strupovitost) vede intenzivní a opakované používání stejných účinných látek dříve či později k selekci rezistentních populací cílených organismů. Obdobná rizika lze očekávat i u biopreparátů, včetně CpGV. Ačkoli se podle experimentů prováděných laboratorně původně předpokládalo, že zde ke vzniku rezistence dojít nemůže (Quénin a Laur,2003), praxe tyto úvahy vyvrátila. Vysoká účinnost, jednoduchost použití (v zásadě obdobná jako u chemických insekticidů) a příznivé ekotoxikologické vlastnosti učinily z CpGV klíčový přípravek v ochraně proti obaleči jablečnému. Důsledkem však bylo jeho nadměrné používání v průběhu sezóny, zejména v organické produkci. První případy snížení vnímavosti obaleče jablečného k preparátům na bázi mexického izolátu CpGV (CpGV-M) pak byly zaznamenány v roce 2002 ekologickým pěstitelem v jižním Badenu v Německu. CpGV zde byl aplikován od roku 1996 (Fritsch a kol., 2005). O rok později byly objeveny další lokální populace se sníženou citlivostí k CpGV-M v několika sadech v Německu a ve Francii, u kterých byla laboratorně potvrzena rezistence k CpGV-M. Do roku 2008 byly hlášeny rezistentní populace také ve Švýcarsku, Itálii, Holandsku a Rakousku (Fritsch a kol., 2005; Sauphanor a kol., 2006; Jehle a kol., 2006; Zingg a Kessler, 2007; Asser-Kaiser a kol., 2007, Jehle a Schmitt, 2009). Obrázek 4: Příklad výskytu rezistence o. jablečného k CpGV - přípravek Carpovirusine, Francie + Švýcarsko (zdroj: Legros et al. 2006) V tabulce uvedeny lokality s výskytem rezistentních (R) a senzitivních (S) populací v sadech s různým režimem ochrany a délkou historie používání CpGV. Na mapce znázorněno geografické rozmístění populací. SHRNUTÍ: Na základě zahraničních zkušeností lze konstatovat, že k rozvoji rezistence došlo lokálně, v závislosti na frekvenci a počtu let používání CpGV. Jako optimální se pro antirezistentní strategii jeví kombinace s dalšímy metodami ochrany (insekticidy, dezorientace).

CpGV v integrované a organické produkci 17 TESTY REZISTENCE. Změny v reakci populací housenek na ošetření CpGV-M byly v řadě případů dramatické: u vybraných sledovaných přírodních populací (jižní regiony Německa) 1000x a ve dvou případech dokonce 10 000x méně citlivé než housenky citlivých populací a laboratorního kmene (Asser-Kaiser a kol., 2007). Graf 4: Příklad snížení citlivosti populací obaleče jablečného k CpGV v Německu. Osa x= lokality, osa Y=logaritmus LC50 (zdroj: Huber, 2006). MONITORING REZISTENCE. Vzhledem k problémům, které se vznikem rezistence některých populací obaleče jablečného proti CpGV nastaly (zejména v organickém pěstování), nabývá v současné době na významu monitoring citlivosti populací škůdce k izolátům CpGV. Kvantifikace citlivosti/rezistence je prováděna v laboratorních podmínkách na prvním instaru housenek, získaných z párů odebraných na vytipovaných lokalitách. V sadech s podezřením na přítomnost rezistence je proveden na podzim odběr reprezentativního množství housenek. Přezimující housenky jsou uchovávány minimálně 3 měsíce v diapauze a poté umístěny do klimaboxu s teplotami optimálními pro dokončení vývoje.

18 CpGV v integrované a organické produkci ÚVOD. Po zakuklení, vylíhnutí dospělců a páření jsou čerstvě vylíhlé housenky F1 generace umístěny na umělou dietu obsahující odstupňovanou koncentraci virových částic. K tomuto účelu je využíván purifikovaný a kvantifikovaný izolát viru. Matematické hodnocení citlivosti housenek se provádí pomocí probitové analýzy (Stará & Kocourek 2007). Cílem těchto testů je včas podchytit případný výskyt rezistence a podle dané situace navrhnout vhodný management ochrany. V současnosti jsou také hledány tzv. molekulární markery rezistence, které by usnadnily a také zrychlily hledání rezistentních jedinců obaleče jablečného v populaci. (Cheney a kol., 2008). DĚDIČNOST REZISTENCE obaleče jablečného k CpGV. Bylo zjištěno, že rezistence k CpGV-M je založena dominantně na pohlavním chromozomu Z. Obaleč jablečný, stejně jako ostatní motýli patří mezi organismy, kde mají homogameticky založené pohlaví: samci ZZ (dvě verze stejného chromozomu), zatímco samice jsou pohlaví heterogametického ZW. Samičky v potomstvu proto mohou být pouze plně citlivé ( Z S W), nebo na druhé straně plně rezistentní ( Z R W). U samců vznikají 3 možnosti: Z S Z S (citlivý homozygot), Z R Z R (rezistentní homozygot), Z S Z R (heterozygot) obr. 5. Jedinci posledně jmenované kombinace jsou rezistentní, avšak v laboratorních podmínkách nepřežívají extrémně vysoké dávky viru. Při těchto dávkách přežijí samičky Z R W a samci Z R Z R, ale heterozygotní samci Z S Z R hynou v posledním instaru housenky (tabulka 3). NOVÉ IZOLÁTY CpGV. Poté, co byla prokázána rezistence k CpGV-M, započalo hledání nových účinnějších izolátů viru. V laboratořích firmy Andermatt Biocontrol AG pasážovali izolát CpGV-M přes rezistentní housenky s cílem vyselektovat nový účinný izolát (Zingg a Kessler, 2007; Jehle a Schmitt, 2009). Účinnost přípravku byla vysoká na rezistentní i citlivé populace obaleče jablečného (Zingg a Kessler, 2007). Obchodní název nového biopreparátu je Madex Plus a v roce 2008 došlo k jeho registraci ve Švýcarsku (Jehle a Schmitt, 2009). V současné době jsou studovány další izoláty CpGV (např. I12 původem z Íránu), které se od CpGV-M liší geneticky i biologickou aktivitou a mohou být významné v antirezistentní strategii (Jehle a Schmitt, 2009). Výzkum spojený s hledáním účinných izolátů CpGV a otázky prevence vzniku rezistence obaleče jablečného proti CpGV byly v letech 2006-2008 také řešeny v rámci evropského projektu Sustain CpGV. Obrázek 5: Genotypy obaleče jablečného dle rezistence k CpGV-M SHRNUTÍ: Přenos rezistence na potomstvo je u obaleče jablečného odlišný podle pohlaví. Míra snížení citlivosti populace k CpGV je výsledkem zastoupení jednotlivých genotypů. Pro praktickou ochranu zůstává rozhodujícím hlediskem omezení počtu aplikací v 1 sezóně.

CPGV CpGV V v INTEGROVANÉ integrované a organické A ORGANICKÉ produkci PRODUKCI REZISTENCE K CPGV 19 Tabulka 3: Různé kombinace genotypů obaleče jablečného v souvislosti s dědičností rezistence s Tabulka uvedeným 3: Různé maximálním kombinace přežíváním genotypů potomstva obaleče při jablečného běžných dávkách v souvislosti CpGV-M s v dědičností sadech a při rezistence vysokých dávkách za laboratorních podmínek. s uvedeným maximálním přežíváním potomstva při běžných dávkách CpGV M v sadech a při vysokých dávkách za laboratorních podmínek.

20 3 Způsob použití přípravků na bázi CpGV CpGV v integrované a organické produkci SIGNALIZACE OŠETŘENÍ proti obaleči jablečnému pomocí CpGV vychází z obdobných pravidel, jako při používání insekticidů. Ideální je zasáhnout populaci obaleče v době, kdy se líhne většina housenek anebo těsně před líhnutím, tj. na vajíčka ve stádiu šedé až černé hlavičky nebo dle teplotních sum při BSET 10 (h)=1800-2000 C) od počátku letové vlny (obrázek 6). Volba termínu ošetření je obdobná, jako u přípravků s larvicidním účinkem (Reldan 40 EC, Trebon 30 EC, Trebon 10 F). U CpGV však nelze počítat s hloubkovým účinkem a díky degradaci bioagens vlivem UV je u CpGV kratší reziduální účinek. Interval mezi 2 ošetřeními činí maximálně 7 dnů. Základem je proto přesná a včasná signalizace. Rozhodující je, aby housenky přišly do kontaktu s virovými částicemi v době, kdy hledají vhodné místo pro zahájení žíru. U aplikací provedených později, tj. v době kdy již housenky vytvořily závrtky, se účinnost výrazně snižuje a v této fázi je rozumnější použít některý razantnější insekticid. Obrázek 6: Signalizace ošetření pomocí CpGV proti obaleči jablečnému. 3) APLIKACE líhnutí Čerstvé závrtky CpGV již není účinný černá hlavička BSET 10 h=1900-2000 C BSET 10 d=80-85 C Signalizace ošetření přípravky na bázi CpGV 2) Vizuální kontrola kladení 1) První úlovky v lapácích - počátek letové vlny

CpGV v integrované a organické produkci CPGV V INTEGROVANÉ A ORGANICKÉ PRODUKCI -ZPŮSOB POUŽITÍ CPGV ZAŘAZENÍ CPGV DO SYSTÉMU OCHRANY. Výrobci PREVENCE VZNIKU REZISTENCE. Vzhledem k ZAŘAZENÍ CpGV DO nebo dodavatelé přípravků zahraničním PREVENCE zkušenostem VZNIKU REZISTENCE. se vznikem Vzhledem rezistence k nelze doporučují SYSTÉMU využít OCHRANY. virus především doporučit zahraničním systém zkušenostem ochrany se zcela vznikem postavený rezistence na CpGV nelze na Výrobci 1. generaci nebo obaleče dodavatelé jablečného, řípravků přípravcích. doporučit systém Rozumnou ochrany volbou zcela budou postavený maximálně na CpGV 2-3 kde doporučují se předpokládá využít virus vyšší především účinnost. ošetření přípravcích. za Rozumnou sezónu, ať volbou už na budou 1. či 2. maximálně generaci. 2- Výhodou na 1. generaci je také obaleče skutečnost, že do jablečného, sklizně se lépe kde se mohou předpokládá 3 ošetření za sezónu, ať už na 1. či 2. generaci. zahojit povrchová vyšší účinnost. V integrované ochraně existuje možnost střídání s insekticidy; V integrované doplňkovými ochraně přípravky existuje k CpGV možnost mohou střídání být též Biobit XL a poškození Výhodou plodů, je také která ještě skutečnost, před úhynem že do sklizně mohou se způsobit lépe infikované mohou zahojit housenky. povrchová Podle pokusů Biobit s insekticidy; WP na doplňkovým bázi Bacillus přípravkem thuringiensis. k CpGV Při nízké může populační být prováděných poškození plodů, v našich která sadech ještě byl před hustotě též Biobit škůdce XL (WP). je možné Při nízké do populační systému ochrany hustotě zařadit škůdce metodu je možné dezorientace. do systému V režimu ochrany ekologického zařadit metodu pěstování možnost účinek úhynem velmi mohou dobrý způsobit i při aplikacích na infikované druhou generaci housenky. a proto Podle i tuto alternace dezorientace. s insekticidy V režimu neexistuje. ekologického V tomto pěstování případě lze o. jablečnému možnost čelit alternace vhodným s insekticidy kombinováním neexistuje. CpGV, V tomto metody dezo- variantu pokusů lze prováděných považovat v za našich vhodnou. To sadech platí především byl účinek v velmi sadech, dobrý kde i rientace a přípravku Biobit XL (WP). je při produkce aplikacích určena druhou na zpracování generaci případě lze o. jablečnému čelit vhodným na a dětskou proto i tuto výživu. variantu V pozdějších lze kombinováním CpGV, metody dezorientace a fázích považovat sezóny za zde vhodnou. totiž není To mnoho platí přípravku KOMPATIBILTA Biobit S PESTICIDY. XL (WP). CpGV přípravky jsou kompatibilní s možností, především jak v výskyt sadech, škůdce kde je většinou insekticidů a fungicidů. Výjimkou jsou přípravky Mycoregulovat, produkce zejména určena na při zpracování jeho vyšší Sin, KOMPATIBILTA Myco-San, přípravky S PESTICIDY. obsahující CpGV Cu přípravky a všechny jsou vysoce alkalické kompatibilní formulace. s Rozmezí většinou ph: insekticidů 5-8 (Andermatt a fungicidů. Biocontrol AG). populační na dětskou hustotě. výživu. V pozdějších fázích sezóny zde totiž není Výjimkou jsou přípravky Myco-Sin, Myco-San, přípravky mnoho možností, jak výskyt obsahující Cu a všechny vysoce alkalické formulace. Obrázek škůdce regulovat, 7: Zařazení zejména přípravků při na bázi CpGV Rozmezí v průběhu ph: 5-8 sezóny (Andermatt s ohledem Biocontrol na prevenci AG). vzniku rezistence. jeho vyšší populační hustotě. 21 Obrázek 7: Zařazení přípravků na bázi CpGV v průběhu sezóny s ohledem na prevenci vzniku rezistence. 19

22 CpGV v integrované a organické produkci 4 Shrnutí a závěr Přípravky na bázi CpGV patří v zahraničí k stěžejním biologickým metodám využívaných v sadech. Vysoká účinnost ověřená v řadě pokusů uskutečněných i v podmínkách ČR, snadnost aplikace a příznivé ekotoxikologické vlastnosti předpokládají jejich bezproblémové přijetí pěstiteli. Zařazením přípravků na bázi CpGV do ochrany sadů bude velmi významně podpořena snaha akcentovat trendy současného moderního zemědělství. K nim patří především důraz na bezpečnost potravin, ochranu zdraví a životního prostředí. Pružné zavádění kvalitních biologických metod, k nimž přípravky na bázi CpGV bezesporu patří, je v tomto kontextu vysoce aktuální. Potřebnost uvedení těchto přípravků do praxe podtrhuje skutečnost, že se jedná asi o to nejlepší, co se kdy v nabídce biopreparátů pro ovocnáře objevilo. Je pozitivní zprávou, že i u nás, stejně jako v západní Evropě, bude mít ovocnářská veřejnost v dohledné době možnost některý z přípravků na bázi entomopatogenních virů zařadit do systému integrované ochrany. V kontextu prezentovaných zkušeností a informací je nezbytné respektovat pravidla související s prevencí vzniku rezistence, způsobem signalizace a provádění aplikací. Jde především o následující pravidla: 1) Přesná signalizace. Ošetření provádíme těsně před líhnutím housenek dle vizuálních kontrol nebo teplotních sum. 2) Nižší perzistence oproti insekticidům. Intervaly mezi aplikacemi musí být proto kratší (max. 7 dnů). 3) Antirezistetntí strategie. Vhodná je kombinace se selektivními insekticidy, metodou dezorientace event. B. thuringiensis. Maximální počet aplikací za sezónu=2 až 3 4) V tankmixech respektovat rozmezí ph=5-8

CpGV v integrované a organické produkci 5 Srovnání novosti postupů Využívání účinných biopreparátů v regulaci škodlivých činitelů v zemědělské prvovýrobě je jedním z klíčových předpokladů pro naplnění cílů integrované i organické produkce. K těm kromě výroby kvalitního ovoce patří další hlediska, jako ochrana životního prostředí, multifunkční úlohy zemědělství, ochrana zdraví konzumentů i pěstitelů a podpora biodiverzity. Nebývá pravidlem, že prostřednictvím biopreparátů lze dosáhnout výsledků, jež mohou konkurovat chemickým přípravkům. Mezi výjimky patří přípravky obsahující jako bioagens entomopatogenní organismus, virus granulózy obaleče jablečného (Cydia pomonella granulovirus - CpGV). Žádný z doposud používaných biologických přípravků proti obaleči jablečnému nebyl schopen v dostatečně krátké době po aplikaci účinkovat tak efektivně a rychle, aby poškození plodů housenkami bylo ekonomicky přijatelné. Biologický mechanismus účinku CpGV, spočívající v rychlém průběhu jednotlivých infekčních fází a rychlém šíření virových částic v těle hostitele, takové podmínky splňuje. Svou účinností jsou proto přípravky na bázi CpGV srovnatelné s insekticidy používanými v ochraně proti obaleči jablečnému. Zároveň disponují všemi vlastnostmi pro zařazení do integrované nebo biologické ochrany, tj. selektivitou vůči necílovým organismům, bezpečností vůči životnímu prostředí, konzumentům, atd. Díky všem uvedeným vlastnostem jsou CpGV preparáty v sortimentu přípravků pro naše ovocnáře zcela novým fenoménem a bezpochyby budou v plné míře pěstiteli přijímány a využívány. V České republice a dle dostupných pramenů ani v evropském měřítku, nebyly informace na dané téma (CpGV) ve formě určené pro ovocnářskou veřejnost doposud zpracovány tak komplexně a přehledně, jako nabízí tato publikace. Srovnání novosti postupů oproti dříve prezentovaným příspěvkům není v tomto případě možné. 23 6 Popis uplatnění metodiky Metodika Virus granulózy obaleče jablečného v integrované a organické produkci je určena všem pěstitelům ČR, jejichž prioritou je minimalizace používání pesticidů v integrované ochraně a zároveň uživatelům zahrnutým v produkci organické. Publikace bude vítanou pomůckou také v případech, kde v posledních letech dochází k významnému nárůstu škod způsobených obalečem jablečným, ať už vlivem snížené účinnosti insekticidů nebo průběhem počasí příznivým pro vývoj škůdce. Své uplatnění najde také mezi uživateli, kteří jsou zaměřeni na výrobu jablek určených pro dětskou výživu. Možnost využít přípravky na bázi CpGV je v posledním jmenovaném případě mimořádně důležitá, neboť u pěstitelů zaměřených na dětskou výživu je velmi omezena možnost aplikovat řadu insekticidů v pozdějších fázích vegetace. Metodika bude předána jak členům Svazu pro integrované systémy pěstování ovoce (SISPO), tak pěstitelům v režimu organické produkce. Smlouva o uplatnění metodiky byla uzavřena s jedním ze soukromých pěstitelů, uplatňujícím řadu let principy integrované ochrany a který v daném regionu (královéhradecký), patří ke špičkovým producentům ovoce.

24 CpGV v integrované a organické produkci 7 Seznam použité související literatury ASSER-KAISER S., FRITSCH E., UNDORF-SPAHN K., KIENZLE J., EBERLE K.E., GUND N.A., REINEKE A., ZEBITZ C.P.W., HECKEL D.G., HUBER J., JEHLE J.A. (2007): Rapid emergence of baculovirus resistance in codling moth due to dominant, sex-linked inheritance. Science 317, 1916-1918. ASSER-KAISER S., JEHLE J.A. (2009): Investigations on the mechanism of CpGV resistence in Cydia pomonella. IOBC/wprs Bulletin 45, 79-81. COSSENTINEA J.E, JENSENA L.B.M., EASTWELL K.C. (2005): Incidence and transmission of a granulovirus in a large codling moth [Cydia pomonella L. (Lepidoptera: Tortricidae)] rearing facility. J. Invertebr. Pathol. 90, 187 192. CROOK N.E., SPENCER R.A., PAYNE C.C., LEISY D.J. (1985): Variation in Cydia pomonella granulosis virus isolates and physical maps of the DNA from three variants. J. Gen. Virol. 66, 2423-2430. CROOK N.E., JAMES J.D., SMITH I.R., WINSTANLEY D. (1997): Comprehensive physical map of the Cydia pomonella granulovirus genome and sequence analysis of the granulin gene region. J. Gen. Virol. 78, 965 974. EBERLE K.E., JEHLE J.A. (2006): Field resistance of codling moth against Cydia pomonella granulovirus (CpGV) is autosomal and incompletely dominant inherited. J. Invertebr. Pathol. 93, 201-206. EASTWELL K.C., COSSENTINE J.E., BERNARDY M.G. (1999): Characterisation of Cydia pomonella granulovirus from codling moths in a laboratory colony and in orchards of British Columbia. Ann. appl. Biol. 134, 285-291. FRITSCH E., UNDORF-SPAHN K., KIENZLE J., ZEBITZ C.P.W., HUBER J. (2005): Apfelwickler-Granulovirus: Erste Hinweise auf Unterschiede in der Empfindlichkeit lokaler Apfelwickler-Populationen. Nachrichtenbl. Deut. Pflanzenschutzd. 57, 29-34. FUNK C.J., BRAUNAGEL S.C., ROHRMANN G.F. (1997): Baculovirus structure. In: The Baculoviruses. Ed. L.K. Miller, Plenum Press, New York, pp. 7-27. HUBER J. (2006): History and new developments of codling moth granulovirus. Conference in Lutzern 2006. [online] (cit. 27.7.2009). Dostupné z http://www.abim-lucerne.ch/archive/documents/ presentations2006/auditorium/huber_cpgv.pdf HULL L.A. (2009): Managing codling moth with a granulovirus. Fruit Growers News. Pensylvania State University Fruit Research and Extension Center. [online] (cit. 30.10.2009). Dostupné z http:// www.certisusa.com/pdf-technical/managing_codling_moth_with_granulovirus_04_09f.pdf CHENEY S., HADAPAD A., ZEBITZ C. P. W. (2008): AFLP analysis of genetic differentiation in CpGV resistant and susceptible Cydia pomonella (L.) populations. Mitt. Dtsch. Ges. allg. angew. Entomol. 16: 117-120. JEHLE J.A., SAYED S.M., WAHL-ERMEL B. (2006): What do we (need to) know about low-susceptibility of codling moth against Cydia pomonella granulovirus (CpGV). In: Proceedings of the 12 International Conference on Cultivation Technique and Phytopathological Problems in Organic Fruit- Growing, Ed. Foerdergemeinschaft Oekologischer Obstbau e. V. Weinsberg, pp. 14-18. JEHLE J.A. (2008): The Future of Cydia pomonella Granulovirus in Biological Control of Codling

CpGV v integrované a organické produkci 25 Moth. Published in Boos, Markus, Eds. Ecofruit - 13th International Conference on Cultivation Technique and Phytopathological Problems in Organic Fruit-Growing, pp. 265-270. JEHLE J.A. SCHMITT A. (2009): Resistance to baculoviruses new answers to an old question. Insect Pathogens and Insect Parasitic Nematodes IOBC/wprs Bulletin 45, 125-127. KALMAKOFF J. WARD V.K. (2003): Baculoviruses. [online] (cit. 27.7.2009). Dostupné z http://www. microbiologybytes.com/virology/kalmakoff/baculo/baculo.html KUMAR J., STARÁ J., KOCOUREK F., PULTAR O. 2003. Polymerase chain reaction assay for Cydia pomonella granulovirus detection in Cydia pomonella population, Acta virologica 47: 153-157. LACEY, L.A., THOMSON, D.R. 2004. Codling moth granulovirus: its history and mode of action. Western Orchard Pest and Disease Management Conference. p. 18. LANGE M., JEHLE J.A. (2003): The genome of the Cryptophlebia leucotreta granulovirus. Virology 317, 220 236. LUQUE T., FINCH R., CROOK N., O REILLY D.R., WINSTANLEY D. (2001): The complete sequence of the Cydia pomonella granulovirus genom. J. Gen.Virol. 82, 2531-2547. PULTAR O., KOCOUREK F., BERÁNKOVÁ J., STARÁ J., KULDOVÁ J., HRDÝ I., 2000, Codling moth management by means of pheromone stations with Cydia pomonella granulosis virus. In: Proceedings of the International Conference on Integrated Fruit Production, Verheyden, Webster, (Acta Horticulturae 525), p. 477-480 QUÉNIN H., LAUR P. (2003): Carpovirusine granulosis virus formulation: control of resistant strain of codling moth and study of the vertical transmission of the virus. Proceedings of the 77th Annual Western Orchard Pest & Disease Management Conference. [online] (cit.27.7.2009). Dostupné z http://entomology.tfrec.wsu.edu/wopdmc/2003pdfs/rep03%20biocontrol%20quenin.pdf REISER M., GRONER A., SANDER E. (1993): Cryptophlebia leucotreta (Lep.: Tortricidae) a promising alternate host for mass-production of the Cydia pomonella granulosis virus (CpGV) for biological pest control. J. Plant. Dis. Protect 100, 586 598. ROHRMANN G.F. (2008): Baculovirus molecular biology. Bethesda (MD): National Library of Medicine (US), National Center for Biotechnology Information; November. [online] (cit.27.7.2009). Dostupné z http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=bacvir SAUPHANOR B., BERLING M., TOUBON J.F., REYES M., DELNATTE J. (2006): Carpocapse des pommes cas de résistance aux virus de la granulose dans le Sud-Est. Phytoma 590, 24-27. TANADA Y. (1964): A granulosis virus of the codling moth, Carpocapsa pomonella (Linnaeus) (Olethreutidae, Lepidoptera). J. Insect Pathol. 6, 378-380. ZINGG D., KESSLER P. (2007): MADEX Plus - a solution to the problem codling moth granulovirus resistence. AG Journal, 14, 3-7.

26 CpGV v integrované a organické produkci 8 Seznam publikací, které předcházely metodice FALTA V., STARÁ J., KOCOUREK, F. (2007): The use of CpGV and mating disruption against Cydia pomonella (L.) in the organic apple production. Proceedings of IOBC/WPRS Conference held in Allés, France, June 8-11, p.68. FALTA, V., ZICHOVÁ T. (2008). Entomopatogenní viry v ochraně sadů proti obaleči jablečnému a perspektiva jejich využití v našem ovocnářství. Zahradnictví 9/2008, s. 12-14. FALTA, V., ZICHOVÁ T. (2009). Entomopatogenní viry v ochraně sadů proti obaleči jablečnému. Sadařvinař 2: 54-56. KUMAR J., STARÁ J., KOCOUREK F., PULTAR O. (2003). Polymerase chain reaction assay for Cydia pomonella granulovirus detection in Cydia pomonella population, Acta virologica 47: 153-157. PULTAR O., KOCOUREK F., BERÁNKOVÁ J., STARÁ J., KULDOVÁ J., HRDÝ I. (2000): Codling moth management by means of pheromone stations with Cydia pomonella granulosis virus. In: Proceedings of the International Conference on Integrated Fruit Production, Verheyden, Webster, (Acta Horticulturae 525), p. 477-480 STARÁ J., KOCOUREK F. (2003): Evaluation efficacy o Cydia pomonella granulovirus (CpGV) to control codling moth (Cydia pomonella L., Lep.: Tortricidae) in field trials. Plant Protect. Sci. 39(4): 117-125 STARÁ J., KOCOUREK F., FALTA V. (2006): Using of baculoviruses and mating disruption method in control of lepidopteran pests in orchards, In: Plenary papers of the Conference Biotechnology 2006, 15th-16th February 2006, University of South Bohemia, České Budějovice, 730-732, ISBN 8085645-53-X, CD-ROM. ZICHOVÁ T., STARÁ J., KOCOUREK F., RYŠÁNEK P., KUMAR J. (2007). Vývoj metodiky pro biologické testování citlivosti přírodních populací obaleče jablečného (Cydia pomonella) k bakuloviru Cydia pomonella granulovirus, In: Sborník příspěvků z konference doktorandů oboru ochrana rostlin, 26. září 2007, ČZU Praha, pp. 123-130 ZICHOVÁ T., STARÁ J., FALTA V., RYŠÁNEK P., KUMAR J. (2008). Citlivost přírodních populací obaleče jablečného (Cydia pomonella) k bakuloviru Cydia pomonella granulovirus (CpGV). In: Sborník příspěvků ze třetího ročníku konference doktorandů oboru ochrana rostlin 2008, 24.9.2008, ČZU Praha, pp. 71-77

CpGV v integrované a organické produkci 27 PŘÍLOHY - slovník vybraných odborných termínů TERMÍN alela bakuloviry budded virus (BV) diapauza F1 generace genotyp granulin hemocyty heterozygot homozygot vě specifickým atraktantem, hycují je obvykle na lepivém tek. K tomuto účelu in vivo obvykle logy látek produkovanými jí pro monitorování Instar letové oubnou a další druhy izolát hmyzu. bo v kombinaci s dalšími rmín ošetření. Významnou klimabox roli azný nárůst úlovků v lapácích, ozích úlovků. Podle odchytu do ro určitý druh škůdce je třeba kce lapáku, zejména v těch x (viz kapitola 2.1.5). kb feromonových odparníků: kmen přírodního kaučuku e syntet. kaučuku ( rubber ) lastová ampulka ( septum ) esmí se otvírat!) outovitý oclusion body (OB) pasážování Fnálevkovitý (funnel) populace probitová analýza, v ochraně ovoce převáţně řízení ochrany zejména proti obalečům, o. švestkovému, ejvíce reprezentativní data z roţeny. Způsob pouţívání letáku výrobce, přesto však purifikace rezistence organismů ejich hustoty zohledňujeme u a sousedství zdrojů náletu naše časové a technické lapáků čítající 1ks/1-3 ha, celé ploše. U homogenních ks napříč parcelou, SETpřičemţ 10 (h) být 50m. Lapáky umisťujeme napříč řadou. Hustší obrost tace) tak, aby byl umoţněn vzduchu. Řady i jednotlivé cí páskou), u větších ploch sekvenování (sekvencování) před začátkem významného ch druhů, avšak je praktické ásledující: Po ošetření proti lní monitoring letu obaleče álového i ovocného. V tomto větu jabloní a ošetření proti kost lískového oříšku) pak imolézového. DEFINICE Konkrétní forma genu Čeleď entomopatogenních DNA virů Sekundární forma částice bakulovirů. Slouží k šíření viru do dalších tkání (sekundární infekce) Zadržení vývoje hmyzu, ke kterému dojde v určitém stádiu vývoje. U obaleče jablečného je to pátý instar housenky První generace potomků (první Filiální generace) Soubor genů v organismu, celková genetická skladba organismu exprimovaná (projevená) i latentní (skrytá) Bílkovina tvořící hmotu okluzních tělísek (OB) chránící virové částice Buňky v hemolymfě (obdoba krve u bezobratlých živočichů), které pohlcují mikroby fagocytózou Heterozygot je jedinec, jehož genotyp je ve sledovaném znaku tvořen odlišnými alelami. Homozygot Při kompletaci je jedinec, feromonových jehož genotyp lapáků se je řídíme ve sledovaném pokyny výrobce. znaku Feromonový tvořen jediným typem lapák se alel. skládá z těchto částí: vlastní lapák (různě tvarovaná papírová či plastová krabice), vyměnitelný feromonový odparník ( kapsle ) a vyměnitelná papírová lepová V deska živém, slouţící v tomto k samotnému případě odchytu se jedná dospělců o množení přilákaných viru feromonem přímo v hostiteli v odparníku. Údrţba lapáků spočívá v pravidelné výměně feromonových odparníků a výměně Vývojové lepivých desek. stádium Výrobci členovců, doporučují jednotlivé výměnu 1xinstary za (5)6-8jsou týdnů ohraničené (kratší interval svlékáním volíme Vzorek během organismu teplých letních z definovaného měsíců), avšak zdroje z praktického hlediska je snadnější zkrátit interval na 4 týdny a odparníky měnit v pevně stanovený den v měsíci. Výměnu Také lepivých klimatizovaný desek na dněbox. lapáku Je přizpůsobujeme obdobou růstové mnoţství komory. chycených Jedná motýlů se o přizařízení v laboratoři, intenzivním letu které je vrstva lepu umožňuje brzy znečištěna definovat zbytky tělkultivační hmyzu a ztrácí podmínky účinnost. pro Obdobně je nutno výměnu lepivých desek (nebo i celých lapáků, pokud jsou papírové) vzorky/organismy provést i po déletrvajících v něm silných umístěné. deštích. Jedná se o regulaci teploty, osvětlení a Kontrolu úlovků v lapácích provádíme alespoň 2x týdně (např. PO + ČT). V době případně i dalších charakteristik. předpokládané letové vlny (dle přítomnosti kukel a např. vzhledem k očekávanému zkr. oteplení) kilobáze se u(jednotka klíčových škůdců vyjadřující v kritických počet obdobích bází DNA) vyplatí kontroly provádět denně, coţ platí zejména tehdy, chceme-li při ošetření pouţít ovicidy (např. Insegar 25 WP). Evidenci zjištěných dat provádíme co nejpřehledněji, záznamy z terénu je vhodné Organismus, který je definován na základě rozdílů v daných biologických pravidelně převádět do podoby grafu v někt. tabulkovém procesoru. Z vytvořeného vlastnostech. grafu je velice dobře patrný průběh letových vln, coţ umoţňuje rychlejší rozhodování o termínu zásahu. Údaje křivky vţdy představují průměrnou hodnotu úlovků námi Okluzní zvoleného tělísko. souboruposkytuje lapáků (např. ochranu z 1 lokality). virovým částicím Metoda používaná k oddělení specifického viru či jeho kmenu ze směsi. Pozn.: 1) Garantem správného fungování lapáků je výrobce. Při jejich používání proto Pasážovaný doporučujemedruh podrobně je opakovaně číst příbalové přenášen letáky. 2) na Monitoring kultivačním letu škůdců médiu prováděný (zpravidla jím je pomocí přirozený feromonových hostitel) lapáků za neustálé je v řadě kontroly případůjeho vhodné biologických (obaleč jablečný, vlastností. obaleč švestkový) nebo i nezbytné (obaleč zimolézový) doplňovat dalšími monitorovacími Soubor metodami jedinců (např. téhož vizuální druhu kontrolou v daném kladení, prostoru výskytu (stanovišti) čerstvých závrtků, a čase požerků, housenek apod.). Metoda stanovení teoretické úmrtnosti vztažené k dané dávce toxické látky. Dávky Příklady vyjádřeny úlovků ve feromonových v logaritmických lapácích: A-obaleč jednotkách zimolézový a vyneseny C-obaleč jablečný proti počtu usmrcených jedinců převedených na B-obaleč probity jabloňový (jednotky pravděpodobnosti). Mortalita se zjišťuje proložením přímky body, kde se protínají hodnoty mortalit a dávek Čištění 1) Odolnost, opak náchylnosti, schopnost hostitele potlačit nebo oddálit aktivitu patogenního agens. 2) Dědičně podmíněná, přirozeně se vyskytující schopnost jedinců v populaci přežít aplikaci pesticidů. Čtení A DNA, molekulárně genetická B analýza biologického C materiálu pomocí které se stanovuje přesné pořadí nukleotidů (stavební kameny nukleových kyselin) v molekule DNA 1.2.5 Teplotní modely vývoje sumy efektivních teplot Hodinová suma efektivních teplot při uvažovaném spodním prahu vývoje Suma Efektivních Teplot - SET (SPV) =10 C, měřená od SPV ( C) je součet efektivních teplot nad spodním prahem vývoje (SPV) za určité období (např.od začátku 1. ledna roku. nebobset 1. března SPV (h) daného je suma roku). Vypočte vztažené se ke stanovené podle vzorce: vývojové fázi (biofix). Výpočet dle vzorce: SET SPV = n i 1 (T i - SPV) Kde: SPV = spodní práh vývoje, T i = průměrná teplota. Pozn.: Záporné hodnoty rozdílu se nepočítají. Obdobně Pokud se se místo provádí průměrné výpočet denní teploty denních pouţijí sum průměrné SET SPV hodinové (d), BSET teploty SPV (d). označují se tak Biologicky datované Sumy Efektivních Teplot - modifikace předchozí metody, ve které se efektivní teploty začínají sčítat od termínu dosaţení určitého fenologického úkazu (tzv. BIOFIX), např. prvním úlovkem do feromonového lapáku, nakladením vajíček, zakuklením housenek atd.).

28 CpGV v integrované a organické produkci PŘÍLOHY - Insekticidy registrované proti obaleči jablečnému v roce 2009 OBECNÉ ÚDAJE ÚDAJE K APLIKACI Přípravek (obch. název) Účinek Účinná látka nebo agens Obsah úč. složky Toxicita včely Povolený obsah reziduí (mg/kg) Dávka (kg, l/ha) OL (dny) Toxicita 1) k přiroz. nepřátelům (1-4) Alsystin 480 SC 2) O, L triflumuron 480 g/l J 1,0 0,25 28 2 Dimilin 48 SC O, L diflubenzuron 480 g/l PR 1,0 0,25 28 2,5 Nomolt 15 SC O, L teflubenzuron 150 g/l Vč4 0,5 1,0 28 2,5 Insegar 25 WP O, L fenoxycarb 250 g/l J 0,05 0,3 60 2 Integro L metoxyfenozide 240 g/l - 2,0 0,4-0,5 14 1,3 Steward L indoxacarb 300 g/l NK 0,5 0,17 7 1,3 Reldan 40 EC L chlorpyrifos-m 400 g/l Š 0,5 1,25 28 3,5 Calypso 480 SC L thiacloprid 480 g/l Vč3 0,3 0,20 14 3,3 Mospilan 20 SP L acetamiprid 200 g/l N 0,05 0,25 28 2,4 SpinTor L spinosad 240 g/l NK 1,0 0,60 7 2,6 Trebon 30 EC L, A etofenprox 300 g/l Š 1,0 0,5 28 2,4 Trebon 10 F L, A etofenprox 100g/l Š 1,0 0,2 28 2,4 Biobit XL (WP) L B. thuringiensis >12.700 jednotek/mg PR - 1,5 AT 1 Carpovirusine 3) L CpGV 10 13 částic/l - - 1,0-1 Madex 3) L CpGV 3.10 13 částic/l - - 100 ml - 1 Isomate C Plus - Feromon 4) 4) - - 500-1000 ks - 1 Isomate CLR - Feromony 5) 5) - - 500-1000 ks - 1 Legenda: L=larvicid, O=ovicid, A=adulticid, F=feromon Barevně rozlišeny přípravky do skupin dle mechanismu účinku. 1 ) Uvedena průměrná hodnota vedlejších účinků na následující organismy (dle www.koppert.com, www.agriculture.gouv.fr ): Chrysoperla carnea, Orius sp., Trichogramma sp., Coccinelidae, Dermaptera, Syrphidae, Arachnida, T. pyri. Klasifikace: 1=netoxický, 2=mírně toxický, 3=středně toxický, 4=vysoce toxický. 2 ) Uvádění přípravku Alsystin 480 SC na trh ukončeno k 16.3.2010, použití do 16.9.2010. 3 ) Registrace přípravků Madex a Carpovirusine v ČR předpokládána v roce 2010 4 ) Samičí feromon obaleče jablečného: Dodekan 1 ol (49 68 mg/ks), Tetradecan 1 ol (15 25,8 mg/ks), (E,E) 8,10 dodekadien 1 ol (95 114 mg/ks) 5 ) Feromony obaleče jablečného, o. zimolezového a o. zahradního: Dodekan 1 ol (12 16,8 mg/ks), Tetradecan 1 ol, (E,E) 8,10 dodekadien 1 ol (98,4 103,2 mg/ks), (Z) 11 tetradecenyl acetát (96 103,2 mg/ks), (Z) 9 tetradecenyl acetát (16,8 21,6 mg/kg)

Autoři fotografií a obrázků: J. DUŠEK: schéma str. 7 V. FALTA: obálka, obrázky str. 6-7, 10-11, 17-22 K. HOLÝ: str. 30 T. ZICHOVÁ: str. 8-9 Název publikace: Autoři: Grafická úprava a sazba: Virus granulózy obaleče jablečného v integrované a organické produkci Ing. Jitka Stará, Ph.D. Ing. Vladan Falta, PhD. Ing. Tereza Zichová Ing. Jana Ouředníčková Prof. RNDr. Ing. František Kocourek, CSc. Vladan Falta Vydal: Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i.drnovská 507, 161 06 Praha 6 - Ruzyně Tisk: power print s.r.o. Náklad: 200 ks, 20 CD Počet stran: 30 Vydání: 1. Rok vydání: 2009 ISBN: 978-80-7427-021-5 Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i., 2009