RocоnУбk 1998 SBIбRKA ZAб KONUй Cо ESKEб REPUBLIKY Cо aбstka 88 Rozeslaбna dne 10. listopadu 1998 Cena Kcо 104, OBSAH: 251. Vyhlaбsо ka Ministerstva zdravotnictvуб, kterou se stanovуб metody pro zjisоt'ovaбnуб toxicity chemickyбch laбtek a prоубpravkuй
Strana 7826 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 /1998 Cо aбstka 88 251 VYHLAб Sо KA Ministerstva zdravotnictvуб ze dne 16. rоубjna 1998, kterou se stanovуб metody pro zjisоt'ovaбnуб toxicity chemickyбch laбtek a prоубpravkuй Ministerstvo zdravotnictvуб stanovуб podle ї 4 odst. 1 pубsm. c) zaбkona cо. 157/1998 Sb., o chemickyбch laбtkaбch a chemickyбch prоубpravcубch a o zmeоneо neоkteryбch dalsоубch zaбkonuй: ї1 Tato vyhlaбsоka stanovуб metody pro zjisоt'ovaбnуб nebezpecоnyбch vlastnostуб chemickyбch laбtek a chemickyбch prоубpravkuй vysoce toxickyбch, toxickyбch, zdravуб sоkodlivyбch, zоубravyбch, draбzоdivyбch, senzibilizujубcубch, karcinogennубch, mutagennубch a toxickyбch pro reprodukci (daбle jen toxicita chemickyбch laбtek a prоубpravkuй ). 1 ) ї2 (1) Toxicita chemickyбch laбtek a prоубpravkuй se zjisоt'uje zkousоkami provaбdeоnyбmi metodami uvedenyбmi v prоубloze teбto vyhlaбsоky. (2) Ke zjisоt'ovaбnуб toxicity chemickyбch laбtek a prоубpravkuй lze pouzоубt i jineб metody, pokud jsou prоinejmensоубm stejneо citliveб, prоesneб a reprodukovatelneб jako metody uvedeneб v odstavci 1, prоednostneо vsоak metody bez pouzоitуб pokusnyбch zvубrоat 2 ) a metody doporucоeneб OrganizacУб pro hospodaбrоskou spolupraбci a rozvoj (OECD). 3 ) ї3 Tato vyhlaбsоka nabyбvaб uбcоinnosti dnem 1. ledna 1999. Ministr: MUDr. David, CSc. v. r. 1 ) ї 2 odst. 8 pубsm. f) azо n) zaбkona cо. 157/1998 Sb., o chemickyбch laбtkaбch a chemickyбch prоубpravcубch a o zmeоneо neоkteryбch dalsоубch zaбkonuй. 2 ) Zaбkon cо. 246/1992 Sb., na ochranu zvубrоat proti tyбraбnуб, ve zneоnуб zaбkonuй cо. 162/1993 Sb., cо. 193/1994 Sb., cо. 243/1997 Sb. a cо. 30/1998 Sb. 3 ) Smeоrnice Organizace pro hospodaбrоskou spolupraбci a rozvoj pro zkousоenуб chemikaбliуб. OddУбl 4 vliv na zdravуб (OECD Guidelines for Testing of Chemicals. Section 4 Health Effects).
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7827 Metody pro zjisоt'ovaбnуб toxicity chemickyбch laбtek a prоубpravkuй PrоУбloha k vyhlaбsоce cо. 251/1998 Sb. B.1. AKUTNIб TOXICITA ORAб LNIб (PER OS) 1. METODA 1.1 Princip testovacуб metody Testovanaб laбtka se podaбvaб v odstupnо ovanyбch daбvkaбch neоkolika skupinaбm pokusnyбch zvубrоat oraбlneо sondou, a to kazоdeб skupineо jedna uб rovenо daбvky. Zvoleneб daбvky je mozоno stanovit podle vyбsledkuй orientacоnубho testu. RegistrujУб se pozorovaneб uбcоinky a uhynutуб. ZvУбrоata, kteraб uhynou beо hem pokusu, i zvубrоata, kteraб prоezоijуб konec pokusu, se pitvajуб. Tato metoda se pouzоубvaб prоedevsоубm prоi pokusech na hlodavcубch. ZvУбrоata se zaбvazоnyбmi a prоetrvaбvajубcубmi prоубznaky stresu a bolesti je trоeba humaбnnубm zpuй sobem utratit. Testovaneб laбtky se nesmeо jуб podaбvat v takovyбch daбvkaбch a takovyбm zpuй sobem, o kteryбch je znaбmo, zоe vyvolaбvajуб znacоnou bolest a stres naбsledkem svyбch leptavyбch nebo draбzоdivyбch vlastnostуб. 1.2 Popis metody 1.2.1 PrоУбprava Nejmeбneо 5 dnуб prоed testem jsou zvубrоata chovaбna v podmубnkaбch chovu a krmenуб, v jakyбch budou beо hem experimentu. Prоed testem se zdravaб mladaб dospeо laб zvубrоata naбhodneо prоirоadуб do jednotlivyбch experimentaбlnубch skupin. Pokud je trоeba, prоipravуб se roztok nebo suspenze testovaneб laбtky ve vhodneбm vehikulu. Doporucоuje se jako prvnуб uvaбzоit pouzоitуб vodneбho roztoku, dalsоуб volbou je roztok v rostlinneбm oleji, teprve potom jako dalsоуб mozоnost roztok v jinyбch vhodnyбch vehikulубch nebo suspenze. U nevodnyбch vehikulуб musуб byбt znaбmy nebo urcоeny prоed testem nebo beо hem neо ho jejich relevantnуб toxikologickeб vlastnosti. U hlodavcuй by objem nemeоl normaбlneо prоekrocоit 10 ml.kg -1 teо lesneб hmotnosti; vyбjimkou jsou vodneб roztoky, jichzо je mozоno podaбvat azо 20 ml.kg -1. Variabilita objemuй laбtky podaбvaneб v testech by se meо la minimalizovat takovou uб pravou koncentracуб, aby se zajistil konstantnуб objem na vsоech hladinaбch daбvek. Soucоasneо je trоeba zvolit vhodnou koncentraci laбtky ve vehikulu tak, aby bylo minimalizovaбno lokaбlnуб draбzоdiveб puйsobenуб. 1.2.2 ExperimentaбlnУб podmубnky 1.2.2.1 Pokusnaб zvубrоata Daбvaб se prоednost potkanuй m, pokud nejsou znaбmy duй vody proti tomu. Je trоeba pouzоубvat mladyбch zdravyбch zvубrоat z beо zоneо uzоубvanyбch pokusnyбch kmenuй. Na zacоaбtku
Strana 7828 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 testu by u obou pohlavуб nemeо lo variacоnуб rozpeо tуб hmotnosti zvубrоat (pro kazоdeб pohlavуб zvlaбsоt') prоekrocоit + 20 % strоednуб hodnoty. 1.2.2.2 Pocо et a pohlavуб Pro kazоdou hladinu daбvek pouzоубt nejmeбneо 5 hlodavcuй stejneбho pohlavуб. PouzоУбvaб-li se samic, musуб byбt nullipary a nesmуб byбt brоezуб. Pokud je k dispozici informace, zоe jedno z obou pohlavуб je vyбrazneо citliveо jsоуб, je trоeba pouzоубvat zvубrоata tohoto pohlavуб. Poznaбmka: PouzоУбvajУб-li se v akutnубch testech toxicity zvубrоata vysоsоубch druhuй, nezо jsou hlodavci, meо lo by se zvaбzоit pouzоitуб mensоубho pocоtu zvубrоat. Daбvky je trоeba pecоliveо zvolit a je trоeba zajistit, aby nebyla prоekrocоena uб rovenо strоedneо toxickeб daбvky. V takovyбch testech je trоeba se vyvarovat podaбnуб letaбlnубch daбvek testovaneб laбtky. 1.2.2.3 Volba daб vek Maб byбt dostatecоnyб pocоet hladin daбvek, nejmeбneо trоi, a majуб byбt vhodneо odstupnо ovaбny tak, aby byl u testovacубch skupin viditelnyб rozsah toxickyбch uб cоinkuй a mortality. ZУбskaneб uб daje musуб stacоit na znaбzorneо nуб vztahu mezi daбvkou a uб cоinkem, a pokud je to mozоneб, musуб umozоnit stanovenуб LD 50 s prоijatelnou spolehlivostуб. 1.2.2.4 LimitnУб test S pouzоitубm hlodavcuй lze proveбst limitnуб test jednou daбvkou nejmeбneо 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti na skupinaбch 5 samcuй a 5 samic s pouzоitубm vyбsоe popsanyбch postupuй. Pokud podanaб laбtka zpuй sobуб uhynutуб, je trоeba uvaбzоit provedenуб uб plneб studie. 1.2.2.5 Doba pozorovaб nуб Doba pozorovaбnуб by meо la cоinit nejmeбneо 14 dnуб. Nelze ji vsоak stanovit rigoroб zneо. Meо la by byбt urcоena podle obrazu otravy, rychlosti vyбvoje otravy a trvaбnуб faбze zotavenуб. Dobu pozorovaбnуб je mozоno podle potrоeby prodlouzоit. Duй lezоitaб je doba, kdy se projevy otravy objevуб a vymizуб, a doba do uhynutуб, zvlaбsоteо tam, kde je patrnaб tendence k zpozоdeо neб mortaliteо. 1.2.3 Popis postupu Prоed podaбnубm testovaneб laбtky majуб byбt zvубrоata hladovaб. Potkanuй m se potrava odebere vecоer prоed testem. U zvубrоat s vysоsоуб rychlostуб laбtkoveб vyбmeо ny postacоуб kratsоуб hladoveо nуб; prоубstup k pitneб vodeо nenуб omezen. V den pokusu se zvубrоata zvaбzоуб a testovanaб laбtka se podaб sondou oraбlneо v jedneб daбvce. NenУб-li mozоno podat daбvku najednou, lze podat aplikovanou daбvku po mensоубch mnozоstvубch beо hem nejvyбsоe 24 hodin. Po podaбnуб daбvky je trоeba zamezit prоубstup k potraveо jesоteо 3-4 hodiny. Podaбvaб-li se laбtka frakcionovaneо beо hem urcоiteбho obdobуб, muй zоe byбt zоaбdoucуб - podle deбlky tohoto obdobуб - potravu a vodu zvубrоatuй m poskytnout. Po podaбnуб laбtky se pozorovaбnуб provaбdeо jуб a zaznamenaбvajуб systematicky, pro kazоdeб zvубrоe se vedou samostatneб zaбznamy. Beо hem prvnубho dne je trоeba provaбdeо t cоastaб pozorovaбnуб. Je nezbytneб sledovat a zaznamenat mубstnуб uб cоinek aplikovaneб laбtky a bezprostrоednуб reakci zvубrоat na aplikaci.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7829 Nejmeбneо jednou beо hem kazоdeбho pracovnубho dne je trоeba provaбdeо t pecоlivaб klinickaб vysоetrоenуб. Jinaб pozorovaбnуб se provaбdeо jуб denneо s vhodnyбmi opatrоenубmi k minimalizaci ztraбt zvубrоat pro studii, naprо. pitva nebo zmrazenуб uhynulyбch zvубrоat, a izolace cоi usmrcenуб slabyбch nebo umубrajубcубch zvубrоat. PozorovaбnУб zahrnuje zmeо ny kuй zоe, srsti, ocоуб, sliznic, dyбchaбnуб a krevnубho obeо hu, zmeо ny funkce autonomnуб a centraбlnуб nervoveб soustavy, somatomotorickeб aktivity a chovaбnуб. ZvlaбsоtnУб pozornost je trоeba veо novat tremoru, krоecоovyбm jevuй m, slineо nуб, pruй jmu, letargii, spaбnku a komatu. Okamzоik uhynutуб je trоeba zaznamenat co nejprоesneо ji. ZvУбrоata, kteraб beо hem pokusu uhynou, i ta, kteraб prоezоijуб azо do konce pokusu, se pitvajуб. Vsоechny patologickeб naбlezy se zaznamenajуб. Je-li to indikovaбno, odeberou se tkaбneо pro histologickeб vysоetrоenуб. 1. 2. 4 H o d n o c e n Уб t o x i c i t y u d r u h eб h o p o h l a v Уб 2. Uб DAJE Po dokoncоenуб pokusu na jednom pohlavуб, podaб se laбtka nejmeбneо jedneб skupineо o peо ti zvубrоatech druheбho pohlavуб s cубlem zjistit, zda zvубrоata druheбho pohlavуб nejsou vyбrazneо citliveо jsоуб na testovanou laбtku. V jednotlivyбch prоубpadech muй zоe byбt oduй vodneо no pouzоitуб mensоубho pocоtu zvубrоat. Pokud je k dispozici spolehlivaб informace, zоe zvубrоata testovaneбho pohlavуб jsou vyбrazneо citliveо jsоуб, testovaбnуб na zvубrоatech druheбho pohlavуб je mozоno vynechat. Uб daje se sestavujуб do tabulky. Z nуб musуб byбt pro kazоdou experimentaбlnуб skupinu patrnyб pocоet z vубrоat na pocоaбtku pokusu, doba uhynutуб jednotlivyбch zvубrоat, pocоet zvубrоat s jinyбmi projevy otravy, popis toxickyбch uб cоinkuй a pitevnубch naбlezuй. StanovenУб hmotnosti jednotlivyбch zvубrоat se provede bezprostrоedneо prоed podaбnубm testovaneб laбtky, pak v tyбdennубch intervalech a v dobeо uhynutуб. Zmeо ny hmotnosti je trоeba stanovit a zaznamenat, prоezоубvajуб-li zvубrоata deбle nezо jeden den. ZvУбrоata, kteraб byla humaбnnубm zpuй sobem utracena s ohledem na stres a bolest vyvolaneб podanou laбtkou, se zaznamenaбvajуб jako uhynutуб vyvolaneб touto laбtkou. LD 50 se vypocоte uznaбvanou metodou. VyhodnocenУб uб dajuй by meо lo zahrnovat takeб vztah, pokud existuje, mezi expozicуб zvубrоat testovaneб laбtce a vyбskytem a stupneо m vsоech abnormalit vcоetneо zmeо n chovaбnуб, klinickyбch symptomuй, makroskopickyбch leбzуб, zmeо n teо lesneб hmotnosti, mortality a ostatnубch toxickyбch uбcоinkuй. 3. ZAб VEо RECо NAб ZPRAб VA 3. 1 Z p r aб v a o p r uй b eо h u p o k u s u Zpraбva o pruй beо hu pokusu maб pokud mozоno obsahovat tyto informace: - zоivocоisоnyб druh, kmen, puй vod, podmубnky chovu, potrava atd., - experimentaбlnуб podmубnky, - uбrovneо daбvek (vcоetneо vehikula, pokud se pouzоije) a koncentrace, - pohlavуб zvубrоat, - tabelaбrneо uб daje o odpoveо dубch podle pohlavуб a podle hladiny daбvek (pocоet uhynulyбch zvубrоat, pocоet zvубrоat s projevy otravy, pocоet exponovanyбch zvубrоat),
Strana 7830 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 - doba uhynutуб po podaбnуб testovaneб laбtky, duй vody a kriteria pro humaбnnуб utracenуб zvубrоat - vsоechna jinaб pozorovaбnуб, - hodnota LD 50 pro to pohlavуб, u ktereбho byl proveden uбplnyб pokus, a to pro 14dennУб pozorovaбnуб (s uvedenубm metody vyбpocоtu), - 95 %-nуб meze spolehlivosti pro LD 50, pokud je lze vypocоубtat, - krоivka zaбvislosti mortality na daбvce a jejуб smeо rnice, (pokud je stanovenуб danou metodou mozоneб), - pitevnуб naбlezy, - vsоechny histopatologickeб naбlezy, vyбsledky vsоech testuй na druheбm pohlavуб, - rozbor vyбsledkuй (zvlaбsоtnуб pozornost je trоeba veо novat uб cоinku, kteryб by mohlo mубt humaбnnуб utracenуб zvубrоat beо hem testu na vypocоtenou hodnotu LD 50 ), - interpretace vyбsledkuй.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7831 B.1.bis AKUTNIб TOXICITA ORAб LNIб (PER OS) - METODA FIXNIб DAб VKY 1. METODA 1. 1 P r i n c i p t e s t o v a c Уб m e t o d y Test akutnуб oraбlnуб toxicity poskytuje informace o neprоубznivyбch uб cоincубch, ktereб mohou naбsledovat beо hem kraбtkeб doby po oraбlnубm podaбnуб jedneб daбvky testovaneб laбtky. Metoda s fixnуб daбvkou se provaбdуб ve dvou etapaбch. V prоedbeо zоneб orientacоnуб studii se sekvencоnубm zpuй sobem sledujуб uб cоinky neо kolika daбvek prоi oraбlnуб aplikaci sondou u zvубrоat teбhozо pohlavуб, vzоdy jedno zvубrоe na daбvku. OrientacоnУб studie poskytuje informaci o vztahu daбvky a toxicity, vcоetneо odhadu minimaбlnуб letaбlnуб daбvky. Normaбlneо se v teбto prvnуб etapeо nepouzоije vубc nezо peо ti zvубrоat. V hlavnуб studii se laбtka podaбvaб oraбlneо sondou skupinaбm peо ti samcuй a peо ti samic v jedneб z teоchto fixnубch daбvek: 5, 50, 500 nebo 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti. Pouzоitaб daбvka se odvodуб z prоedbeо zоneб orientacоnуб studie, a to jako daбvka, kteraб pravdeо podobneо vyvolaб zrоejmou toxicitu (viz cоaбst B - Vsоeobecnyб uб vod bod 1.2), ale ne uhynutуб. Po podaбnуб se pozorujуб uб cоinky. Jestlizоe vybranaб vyбchozуб uб rovenо daбvky vyvolaб zrоejmou toxicitu, ale zоaбdnou mortalitu, nenуб trоeba zоaбdneб dalsоуб testovaбnуб. Kdyzо na zvoleneб uб rovni daбvky nenуб pozorovaбna zrоejmaб toxicita, laбtka se znova otestuje na nejblizоsоуб vysоsоуб uб rovni daбvky. Pokud zvубrоata uhynou nebo kdyzо zaбvazоnaб toxickaб reakce vyzоaduje humaбnnуб utracenуб, laбtka se znova otestuje na nejblizоsоуб nizоsоуб uб rovni daбvky. Tento postup umozоnо uje zjistit diskriminujубcуб daбvku (viz cоaбst B - Vsоeobecnyб uб vod bod 1.2), tj. nejvysоsоуб z prоedem stanovenyбch uб rovnуб daбvky, kterou je mozоno podat anizо by dosоlo k uбhynu (vcоetneо prоубpaduй humaбnnубho utracenуб). ZvУбrоata se zaбvazоnyбmi a prоetrvaбvajубcубmi prоубznaky stresu a bolesti je trоeba humaбnnубm zpuй sobem utratit. Testovaneб laбtky se nesmeо jуб podaбvat v takovyбch daбvkach a takovyбm zpuй sobem, o kteryбch je znaбmo, zоe vyvolaбvajуб znacоnou bolest a stres naбsledkem svyбch leptavyбch nebo draбzоdivyбch vlastnostуб. 1. 2 P o p i s m e t o d y 1. 2. 1 Prо Убprava 1.2.1.1 Pokusnaб zvубrо ata Daбvaб se prоednost potkanuй m, pokud nejsou znaбmy duй vody proti tomu. Je trоeba pouzоубvat beо zоneо uzоубvaneб kmeny pokusnyбch zvубrоat. Na zacоaбtku testu by u obou pohlavуб nemeо lo variacоnуб rozpeо tуб hmotnosti zvубrоat (pro kazоdeб pohlavуб zvlaбsоt') prоekrocоit + 20 % strоednуб hodnoty.
Strana 7832 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 Nejmeбneо 5 dnуб prоed testem jsou zvубrоata chovaбna v podmубnkaбch ustaбjenуб a krmenуб, v jakyбch budou beо hem experimentu. Prоed testem se zdravaб mladaб dospeо laб zvубrоata naбhodneо prоirоadуб do jednotlivyбch experimentaбlnубch skupin orientacоnуб studie a hlavnуб studie. Beоzоneо stacоуб pro hlavnуб studii jedna skupina kazоdeбho z obou pohlavуб. 1.2.1.2 Prо Убprava a podaб vaб nуб daб vky Pokud je trоeba, prоipravуб se roztok nebo suspenze testovaneб laбtky ve vhodneбm vehikulu. Doporucоuje se jako prvnуб uvaбzоit pouzоitуб vodneбho roztoku, dalsоуб volbou je roztok v rostlinneбm oleji, teprve potom jako dalsоуб mozоnost roztok v jinyбch vhodnyбch vehikulубch nebo suspenze. U nevodnyбch vehikulуб musуб byбt znaбmy nebo urcоeny prоed testem nebo beо hem neо ho jejich relevantnуб toxikologickeб vlastnosti. U hlodavcuй by objem nemeоl normaбlneо prоekrocоit 10 ml.kg -1 teо lesneб hmotnosti; vyбjimkou jsou vodneб roztoky, jichzо je mozоno podaбvat azо 20 ml.kg -1. Variabilita objemuй laбtky podaбvaneб v testech by se meо la minimalizovat takovou uб pravou koncentracуб, aby se zajistil konstantnуб objem na vsоech hladinaбch daбvek. Prоed podaбnубm testovaneб laбtky majуб byбt zvубrоata hladovaб. Potkanuй m se potrava odebere vecоer prоed testem; prоубstup k pitneб vodeо nenуб omezen. V den pokusu se zvубrоata zvaбzоуб a testovanaб laбtka se podaб sondou oraбlneо v jedineб daбvce. NenУб-li mozоno podat daбvku najednou, lze podat aplikovanou daбvku po mensоубch mnozоstvубch beо hem nejvyбsоe 24 hodin. Po podaбnуб daбvky je trоeba zamezit prоубstup k potraveо jesоteо 3-4 hodiny. Podaбvaб-li se laбtka frakcionovaneо beо hem urcоiteбho obdobуб, muй zоe byбt zоaбdoucуб - podle deбlky tohoto obdobуб - potravu a vodu zvубrоatuй m poskytnout. 1. 2. 2 P o p i s p o s t u p u 1.2.2.1 Orientacо nуб studie VysоetrоujУб se uб cоinky ruй znyбch daбvek na jednotlivaб zvубrоata. Normaбlneо se pouzоубvajуб samice, pokud nejsou k dipozici uб daje, zоe jsou samci citliveо jsоубm pohlavубm. Daбvky se podaбvajуб sekvencоneо, cоekaб se alesponо 24 hodin prоed podaбnубm daбvky dalsоубmu zvубrоeti. Vsоechna zvубrоata se pecоliveо pozorujуб s cубlem zjistit projevy otravy nejmeбneо po sedm dnуб; pokud prоetrvaбvajуб projevy mубrneб otravy sedmyб den, zvубrоe se musуб pozorovat jesоteо po dalsоубch sedm dnуб. PosuzujУб se naбsledujубcуб vyбchozуб hladiny daбvek: 5, 50, 500 a 2000 mg.kg -1. Jestlizоe zvolenaб vyбchozуб daбvka nevyvolaб teо zоkou otravu a prоitom nejblizоsоуб vysоsоуб vyvolaб uhynutуб, potom je nutneб podat podle potrоeby jednu nebo vубce vmezerоenyбch uб rovnуб daбvek. Tento zpuй sob by meо l poskytnout informace o uб rovni(убch) daбvek, kteraб(eб) vyvolaбvaб(vajуб) prоубznaky otravy a o nejmensоуб daбvce, kteraб vyvolaбvaб mortalitu. Je trоeba pokusit se vybrat vyбchozуб daбvku podle uб dajuй o prоубbuznyбch chemickyбch laбtkaбch. Pokud nejsou k dispozici, doporucоuje se pouzоубt jako prvnуб daбvky 500 mg.kg -1. Jeslizоe se po vyбchozуб daбvce nepozorujуб prоубznaky otravy, vysоetrоuje se dalsоуб vysоsоуб uбrovenо daбvky. Jestlizоe nedojde k uhynutуб prоi 2000 mg.kg -1, je orientacоnуб studie skoncоena a hlavnуб studii je trоeba proveбst na teбto uб rovni daбvky. Jestlizоe jsou prоi pouzоitуб vyбchozуб daбvky (naprо. 500 mg.kg -1 ) zjisоteо ny teо zоkeб uбcоinky, vyzоadujубcуб humaбnnуб utracenуб, je podaбna dalsоубmu zvубrоeti nejblizоsоуб nizоsоуб daбvka (naprо. 50 mg.kg - 1). Jestlizоe toto zvубrоe prоezоубvaб, mohou byбt pouzоity pro dalsоуб zvубrоata vhodneб daбvky mezi urcоenyбmi fixnубmi daбvkami. Za normaбlnубch podmубnek se neocоekaбvaб, zоe je prоi tomto postupu zapotrоebуб vубce nezо 5 zvубrоat.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7833 1.2.2.2 HlavnУб studie Pro kazоdou vysоetrоovanou daбvkovou hladinu by se meо lo pouzоубt nejmeбneо 10 zvубrоat (5 samic a 5 samcuй ). Samice by meо ly byбt nullipary a nemeо ly by byбt brоezуб. Principem metody fixnуб daбvky je pouzоitуб pouze mубrneо toxickyбch daбvek pro hlavnуб studii. Je trоeba se vyhnout podaбvaбnуб letaбlnубch daбvek testovaneб laбtky. Daбvka, kteraб bude uzоita v testu, maб byбt zvolena z jedneб ze 4 fixnубch uб rovnуб daбvek, jmenoviteо 5, 50, 500 nebo 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti. Zvolenaб vyбchozуб uбrovenо daбvky by meо la byбt ta, kteraб pravdeо podobneо vyvolaб zrоejmou toxicitu, avsоak nikoliv mortalitu (vcоetneо utracenуб z humaбnnубch duй voduй ); naбhodnaб uhynutуб nejsou zahrnuta, ale majуб byбt zaznamenaбna. Jestlizоe tato daбvka vyvolaб zrоejmou toxicitu, ale nevyvolaб mortalitu, nenуб zapotrоebуб dalsоубho testovaбnуб. Kdyzо podaбnуб zvoleneб daбvky nevyvolaб zrоejmou toxicitu, je nutneб laбtku znovu testovat na dalsоуб vysоsоуб uб rovni daбvek. ZvУбrоata by vsоak meо la byбt daбle pozorovaбna tak, aby pozorovacуб obdobуб bylo kompletnуб. Jestlizоe teо zоkaб toxickaб odpoveо d' vyzоaduje humaбnnуб utracenуб zvубrоat nebo kdyzо se projevуб mortalita vlivem laбtky, meо la by byбt laбtka znovu testovaбna na dalsоуб nizоsоуб uб rovni daбvek. Opeо t ta zvубrоata, kteraб nenуб nutneб humaбnneо utratit, by meоla byбt pozorovaбna po celeб pozorovacуб obdobуб. Po podaбnуб laбtky se pozorovaбnуб provaбdeо jуб a zaznamenaбvajуб systematicky. Pro kazоdeб zvубrоe se vedou samostatneб zaбznamy. Je nezbytneб sledovat a zaznamenat mубstnуб uбcоinek aplikovaneб laбtky a bezprostrоednуб reakci zvубrоat na aplikaci. Doba pozorovaбnуб by meо la byбt nejmeбneо 14 dnуб. Nelze ji vsоak stanovit rigorozneо. Meо la by byбt urcоena podle obrazu otravy, rychlosti vyбvoje otravy a trvaбnуб faбze zotavenуб. Dobu pozorovaбnуб je mozоno podle potrоeby prodlouzоit. Duй lezоitaб je doba, kdy se projevy otravy projevуб a vymizуб a doba do uhynutуб, zvlaбsоteо tam, kde je patrnaб tendence k pozdnубmu vzniku toxickyбch prоубznakuй. Pecоlivaб klinickaб vysоetrоenуб je trоeba provaбdeо t nejmeбneо dvakraбt prvnуб den po podaбnуб laбtky a nejmeбneо jedenkraбt za den dalsоуб dny. ZvУбrоata vykazujубcуб patrneб znaбmky bolesti nebo vyбrazneб prоубznaky stresu je trоeba humaбnneо utratit. Cо asteо jsоуб pozorovaбnуб jsou provaбdeо na beо hem neо kolika prvnубch dnуб po podaбnуб laбtky, jestlizоe zvубrоata daбle vykazujуб prоубznaky toxicity. Test muй zоe byбt ukoncоen v prоубpadeо, kdyzо je zrоejmeб, zоe byla zvolena prоубlisо vysokaб daбvka. PozorovaбnУб se zameо rоuje na zmeо ny kuй zоe, srsti, ocоуб, sliznic, dyбchaбnуб a krevnубho obeо hu, zmeо ny funkce autonomnуб a centraбlnуб nervoveб soustavy, somatomotorickeб aktivity a chovaбnуб. ZvlaбsоtnУб pozornost je trоeba veо novat tremoru, krоecоovyбm jevuй m, slineо nуб, pruй jmu, letargii, spaбnku a komatu. StanovenУб hmotnosti jednotlivyбch zvубrоat se provede bezprostrоedneо prоed podaбnубm testovaneб laбtky, denneо po dalsоуб 3 dny a potom jednou tyбdneо. ZvУбrоata, kteraб uhynou beо hem testu, i ta, kteraб prоezоубvajуб do konce testu, se zvaбzоуб a pitvajуб. Vsоechny makroskopickeб patologickeб zmeо ny se zaznamenaбvajуб. Je-li to indikovaбno, odeberou se tkaбneо pro histopatologickeб vysоetrоenуб. V zaбvislosti na uб cоincубch prоedchaбzejубcуб uб rovneо daбvky muй zоe byбt zapotrоebуб vysоetrоenуб druheб nebo vyбjimecоneб trоetуб hladiny daбvky. V prоубpadeо,zоe laбtka vyvolaбvaб mortalitu prоi daбvce 5 mg.kg -1 (nebo jestlizоe orientacоnуб studie naznacоuje mortalitu prоi teбto daбvce), je trоeba daбle vysоetrоovat akutnуб toxicitu testovaneб laбtky.
Strana 7834 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 2. Uб DAJE Uб daje z orientacоnуб i hlavnуб studie se sestavujуб do tabulky jednotliveо pro kazоdou testovanou uб rovenо daбvky. Z nуб musуб byбt patrnyб pocоet zvубrоat na pocоaбtku pokusu; pocоet zvубrоat s prоубznaky toxicity; pocоet zvубrоat uhynulyбch beо hem testu nebo utracenyбch z humaбnnубch duй voduй ; popis toxickyбch uб cоinkuй ; pro hlavnуб studii, zda byl pozorovaбn zrоejmyб toxickyб uб cоinek, kteryб lze prоipsat testovaneб laбtce; cоasovyб pruй beо h vsоech toxickyбch uб cоinkuй ; vyбsledky pitvy. V prоубpadeо, zоe zvубrоata prоezоубvajуб deбle nezо den, je trоeba vypocоубtat a zaznamenat zmeо ny hmotnosti. ZvУбrоata, kteraб jsou humaбnneо utracena vzhledem ke stresu nebo bolestem vyvolanyбm testovanou laбtkou, jsou zaznamenaбna jako uhynutуб vyvolanaб testovanou laбtkou. 3. ZAб VEо RECо NAб ZPRAб VA 3. 1 Z p r aб v a o p r uй b eо h u p o k u s u Zpraбva o pruй beо hu pokusu maб pokud mozоno obsahovat tyto informace pro orientacоnуб i hlavnуб studii: - zоivocоisоnyб druh, kmen, puй vod, podmубnky ustaбjenуб, krmenуб, atd., - experimentaбlnуб podmубnky, - uбrovneо daбvek (vcоetneо vehikula, pokud se pouzоije) a koncentrace, - kompletnуб vyбsledky vsоech vysоetrоovanyбch uбrovnуб daбvek, - ve formeо tabulky uбdaje o odpoveо dубch podle pohlavуб a podle uбrovnуб daбvek (pocоet pouzоityбch zvубrоat; zmeо ny teо lesneб hmotnosti; prоубpadneо pocоet uhynulyбch zvубrоat nebo zvубrоat utracenyбch beо hem testu; pocоet zvубrоat s prоубznaky toxicity; povaha, stupenо a trvaбnуб uб cоinkuй ), - cоasovyб pruй beоh naбstupu toxickyбch prоубznakuй a zda byly reversibilnуб, - pokud zvубrоata uhynula nebo byla utracena, doba uб hynu po podaбnуб laбtky, duй vody a kriteria pouzоitaб pro indikaci humaбnnубho utracenуб zvубrоat, - pitevnуб naбlezy, - vsоechny histopatologickeб naбlezy, - diskuse vyбsledkuй, - interpretace vyбsledkuй, vcоetneо prоубznakuй zrоejmeб toxicity a diskriminujубcуб daбvkoveб hladiny zjisоteо neб v testu.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7835 3. 2 H o d n o c e n Уб a i n t e r p r e t a c e Daбvka Vyбsledky Interpretace 5 mg.kg -1 teоlesneб hmotnosti Meбneо nezо 100% prоezоitуб Laбtky, ktereб jsou velmi jedovateб 100% prоezоitуб, ale zrоejmaб toxicita 100% prоezоitуб; nenуб zrоejmaб toxicita 50 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti Meбneо nezо 100% prоezоitуб 100% prоezоitуб, ale zrоejmaб toxicita 100% prоezоitуб, nenуб zrоejmaб toxicita 500 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti Meбneо nezо 100% prоezоitуб 100% prоezоitуб, ale zrоejmaб toxicita 100% prоezоitуб, nenуб zrоejmaб toxicita 2000 mg.kg -1 teоlesneб hmotnosti Meбneо nezо 100% prоezоitуб 100% prоezоitуб s nebo bez zrоejmeб toxicity Laбtky, ktereб jsou jedovateб Viz vyбsledky prоi 50 mg.kg -1 Laбtky, ktereб mohou byбt jedovateб nebo velmi jedovateб. Viz vyбsledky prоi 5 mg.kg -1 Laбtky, ktereб jsou zdravуб sоkodliveб Viz vyбsledky u 500 mg.kg -1 Laбtky, ktereб mohou byбt jedovateб nabo zdravуб sоkodliveб. Viz vyбsledky u 50 mg.kg -1 Laбtky, ktereб lze povazоovat za laбtky bez vyбznamneб akutnуб toxicity Viz vyбsledky u 2000 mg.kg -1 Viz vyбsledky u 500 mg.kg -1 Laбtky, ktereб nemajуб vyбznamnou akutnуб toxicitu
Strana 7836 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 B.1 tris AKUTNIб TOXICITA (ORAб LNIб) METODA STANOVENIб TRо IбDY AKUTNIб TOXICITY 1. METODA 1. 1 Uб v o d Metoda stanovenуб trоубdy akutnуб toxicity poskytuje informace jak pro posuzovaбnуб rizika, tak pro uбcоely klasifikace rizika. Metoda pouzоубvaб trоуб pevneо stanovenyбch daбvek v prоimeо rоenyбch odstupech, tak aby bylo mozоno testovanou laбtku na zaбkladeо vyбsledkuй zarоadit. Kromeо toho postup popsanyб pro tuto testovacуб metodu umozоnо uje vyбbeо r trоуб doplnо kovyбch pevneо stanovenyбch daбvek, ktereб lze pouzоубt bud' jako alternativnуб daбvky pro urcоiteб body rozhodovacубho procesu, nebo pro dalsоуб testovaбnуб. PouzоitУб neо ktereб z teо chto doplnо kovyбch daбvek je mozоno uvaбzоit, pokud je zоaбdoucуб nebo nezbytneб dalsоуб zprоesneо nуб. Metoda pouzоубvaб pevneо stanoveneб pocоaбtecоnуб daбvky a nenуб urcоena pro vyбpocоet prоesneб LD 50. Umozоnо uje stanovenуб rozsahu expozic, ve ktereбm se ocоekaбvaб uб mrtnost, protozоe smrt cоaбsti zvубrоat je i u teбto metody hlavnубm kriteбriem uб cоinku. Vyбsledky testu majуб umozоnit klasifikaci laбtky. Vzhledem k sekvencоnубmu postupu by trvaбnуб testu mohlo byбt delsоуб nezо postup popsanyб v metodeо B.l. HlavnУб vyбhodou teбto metody je mensоуб spotrоeba zvубrоat nezо u metody akutnуб toxicity (oraбlnуб) (B. 1) i nezо u alternativnуб metody fixnуб daбvky (B. l bis). 1. 2 P r i n c i p t e s t o v a c Уб m e t o d y Laбtka se podaбvaб oraбlneо skupineо pokusnyбch zvубrоat v jedneб ze stanovenyбch daбvek. TestovaбnУб se provaбdуб postupneо, v kazоdeбm kroku se pouzоубvajуб trоi zvубrоata stejneбho pohlavуб. NenУб nutneб provaбdeо t prоedbeо zоnou studii. PrоУбtomnost nebo neprоубtomnost uбhynu zvубrоat ve vztahu k podaбvaneб laбtce rozhodne o dalsоубm kroku, t.j. п nenуб zapotrоebуб zоaбdneб dalsоуб testovaбnуб; п dalsоуб krok bude proveden se stejnou daбvkou, ale se zvубrоaty druheбho pohlavуб; п dalsоуб krok bude proveden s vysоsоуб nebo nizоsоуб uбrovnуб daбvky. 1. 3 P o p i s m e t o d y 1. 3. 1 P rо Уб p r a v a Zdravaб mladaб dospeо laб zvубrоata jsou naбhodneо vybraбna, oznacоena tak, aby byla mozоnaб identifikace jednotlivyбch zvубrоat, a chovaбna ve svyбch klecубch nejmeбneо 5 dnuй prоed zahaбjenубm testu, aby si mohla zvyknout na laboratornуб podmубnky. ZvУбrоata mohou byбt v klecубch ve skupinaбch podle pohlavуб a daбvky, ale pocоet zvубrоat v jedneб kleci musуб umozоnit jasneб pozorovaбnуб kazоdeбho zvубrоete. Testovanaб laбtka je aplikovaбna zvубrоatuй m v jedineб daбvce zоaludecоnуб sondou nebo vhodnou kanylou.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7837 Pokud je to trоeba, testovanaб laбtka se rozpustуб nebo suspenduje ve vhodneбm nosicоi. Doporucоuje se nejprve zvaбzоit pouzоitуб vodneбho roztoku/suspenze, pak pouzоitуб roztoku/emulze v jedleбm rostinneбm oleji (naprо. kukurоicоneбm) a pak roztoku v jinyбch nosicоубch. Pro nevodnaб vehikula musуб byбt znaбma jejich toxickaб charakteristika; pokud nenуб znaбma, musуб byбt stanovena jesоteо prоed testem. ZvУбrоata jsou prоed aplikovaбnубm laбtky po urcоitou dobu bez potravy (naprо. potkani prоes noc a mysоi 3-4 hodiny); prоубstup k vodeо se neomezuje. 1.3.2 Experimentaб lnуб podmубnky 1.3.2.1 P o k u s n aб z v Убrо a ta Daбvaб se prоednost potkanuй m, pokud nejsou znaбmy duй vody proti tomu. Samice musуб byбt nullipary a nesmуб byбt brоezуб. Na zacоaбtku studie by nemeоlo variacоnуб rozpeо tуб hmotnosti zvубrоat (pro kazоdeб pohlavуб zvlaбsоt') prоekrocоit + 20 % strоednуб hodnoty. 1.3.2.2 P o cо e t a p o h lavуб Pro kazоdyб krok se pouzоубvajуб trоi zvубrоata jednoho pohlavуб. V uб vodnубm kroku muй zоe byбt pouzоito ktereбkoli pohlavуб. 1.3.2.3 Uб r o vneо d aб v e k VyбchozУб daбvkovaб uбrovenо je vybraбna ze trоуб pevnyбch uбrovnуб, t. zn. 25, 200 a 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti. VyбchozУб uбrovenо daбvky by meо la byбt takovaб, aby s nejveо tsоуб pravdeо podobnostуб zpuй sobila uhynutуб alesponо neо kteryбch zvубrоat, jimzо byla laбtka podaбna. V zaбvislosti na vyбchozуб daбvce se pouzоije prоубslusоneбho diagramu postupu popsaneбho v Dodatku 1. Pro vyбbeо r pohlavуб a vyбchozуб daбvky je trоeba vyuzоубt vesоkereб dostupneб informace, vcоetneо informacуб o vztahu struktury a uбcоinku. Pokud tyto informace naznacоujуб, zоe uбmrtnost je nepravdeоpodobnaб i prоi nejvysоsоуб uбrovni daбvky (2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti), pak se provede limitnуб test. Kde nejsou zоaбdneб informace o testovaneб laбtce, doporucоuje se - s ohledem na pokusnaб zvубrоata - pouzоубt vyбchozуб daбvku 200 mg.kg -1 teоlesneб hmotnosti. V neо kteryбch prоубpadech je trоeba daбle zprоesnit zубskanou informaci, nezо jak to dovoluje test s trоemi pevnyбmi daбvkovyбmi uб rovneо mi ve vyбsоi 25, 200 a 2000 mg.kg -1 teоlesneб hmotnosti. V teо chto prоубpadech se muй zоe uvazоovat o dalsоубm testovaбnуб prоi doplnо kovyбch pevnyбch daбvkaбch ve vyбsоi 5, 50 nebo 500 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti. NemajУб se aplikovat daбvky, o kteryбch je znaбmo, zоe zpuй sobujуб svyбmi leptavyбmi nebo teо zоce draбzоdубcубmi uбcоinky znacоnou bolest a stres. Cо asovyб interval mezi aplikacоnубmi skupinami je zaбvislyб na rychlosti naбstupu, na trvaбnуб a zaбvazоnosti toxickyбch prоубznakuй. TestovaбnУб na zvубrоatech druheбho pohlavуб nebo prоi dalsоуб daбvce je trоeba odlozоit, dokud nenуб jisteб, zоe zvубrоata prоedchozуб daбvku prоezоila.
Strana 7838 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 1.3.2.4 L i m i t n Уб test LimitnУб test s jedinou uбrovnуб daбvky ve vyбsоi 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti se provaбdуб na trоech zvубrоatech kazоdeбho pohlavуб. Pokud dojde k uhynutуб souvisejубcубm s podaбnубm laбtky, lze dalsоуб testovaбnуб proveбst prоi daбvkaбch 200 mg.kg -1 (nebo 500 mg.kg -1 ) teоlesneб hmotnosti. 1.3.2.5 D o b a p o zorovaб n Уб PrоezоУбvajУбcУб zvубrоata je trоeba pozorovat obvykle po dobu 14 dnuй, kromeо prоубpaduй, kdy musуб byбt zvубrоata vyloucоena z dalsоубho pozorovaбnуб a humaбnneо utracena z duй voduй ochrany zvубrоat. TrvaбnУб pozorovaбnуб by vsоak nemeо lo byбt stanoveno prоedem pevneо; muй zоe byбt prodlouzоeno podle toxickyбch reakcуб, doby jejich naбstupu a deбlky zotavovacубho obdobуб. Je duй lezоiteб zaznamenaбvat dobu, kdy se objevуб a mizуб prоубznaky toxicity, zvlaбsоteо jde-li o zpozоdeо neб toxickeб prоубznaky. Vesоkeraб pozorovaбnуб jsou systematicky zaznamenaбvaбna: zaбznamy jsou vedeny pro kazоdeб jednotliveб zvубrоe. 1.3.3 Popis postupu Po obdobуб hladoveо nуб jsou zvубrоata prоed podaбnубm zkusоebnуб laбtky zvaбzоena. Po aplikaci laбtky jsou zvубrоata bez potravy po dobu dalsоубch 3-4 hodin. Kde je daбvka podaбvaбna po cоaбstech beо hem urcоiteб doby, muй zоe byбt - v zaбvislosti na deбlce teбto doby - nezbytneб poskytnout zvубrоatuй m potravu i vodu. MaximaбlnУб objem tekutiny, kteryб muй zоe byбt podaбn najednou, zaбvisуб na velikosti zvубrоete. U hlodavcuй by objem nemeо l normaбlneо prоesaбhnout 1 ml na 100 g teо lesneб hmotnosti, v prоубpadeо vodnyбch roztokuй lze podat i 2 ml na 100 g teо lesneб hmotnosti. RozdУбly v podaбvaneбm objemu je trоeba minimalizovat upravenубm koncentrace tak, aby byl podaбvaбn tyбzо objem na vsоech uб rovnубch daбvky. Jestlizоe nenуб mozоneб podat daбvku celou najednou, je mozоneб ji aplikovat po cоaбstech po dobu neprоekracоujубcуб 24 hodin. Podrobnosti postupu testovaбnуб jsou popsaбny v Dodatku 1. 1.3.3.1 V sо eobecneб p o z o r o vaб n Уб Pecоliveб klinickeб pozorovaбnуб se provaбdуб dvakraбt za prvnуб den (den aplikace) nebo cоasteо ji, pokud to vyzоaduje reakce zvубrоat na podaбnуб laбtky, a daбle nejmeбneо jednou denneо. ZvУбrоata, kteraб jsou nalezena v agonaбlnубm stavu, nebo zvубrоata vykazujубcуб prоубznaky silneб bolesti a prоetrvaбvajубcубho silneбho stresu, je trоeba humaбnneо utratit: tato zvубrоata jsou hodnocena stejneо jako jako zvубrоata uhynulaб. At' uzо byla zvубrоata utracena z humaбnnубch duй voduй nebo byla nalezena mrtvaб, dobu smrti je trоeba zaznamenat co nejprоesneо ji. DalsоУб pozorovaбnуб se provaбdуб, dokud zvубrоata vykazujуб prоубznaky toxicity. PozorovaбnУб zahrnuje zmeо ny na kuй zоi a srsti, na ocоубch a sliznicубch, a takeб na dyбchacубm, obeо hoveбm, vegetativnубm a centraбlnубm nervoveбm systeбmu, motorickeб aktiviteо a chovaбnуб. Pozornost je trоeba veо novat vyбskytu trоesu, krоecоуб, slineоnуб, pruй jmu, letargie, spaбnku a koбmatu. Vesоkeraб pozorovaбnуб jsou systematicky zaznamenaбvaбna: zaбznamy jsou vedeny pro kazоdeб jednotliveб zvубrоe.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7839 1.3.3.2 T eо l esnaб h m o tnost Vsоechna zvубrоata jsou zvaбzоena kraбtce prоed podaбnубm testovaneб laбtky a pak nejmeбneо jednou tyбdneо. PocоУбtajУб se a zaznamenaбvajуб zmeо ny hmotnosti. Na konci testu jsou prоezоубvajубcуб zvубrоata zvaбzоena prоed tубm, nezо budou humaбnneо utracena. 1.3.3.3 P i t v a U vsоech zvубrоat pouzоityбch ve studii, vcоetneо uhynulyбch a utracenyбch beо hem testu, se provede pitva. Vsоechny makroskopickeб patologickeб zmeо ny jsou zaznamenaбny pro kazоdeб zvубrоe zvlaбsоt'. Pro zубskaбnуб dalsоубch uzоitecоnyбch informacуб je mozоno uvaбzоit mikroskopickeб vysоetrоenуб orgaбnuй vykazujубcубch znaбmky makroskopickeб patologie u zvубrоat prоezоубvajубcубch 24 a vубce hodin. 2. SBEо R A ZAб ZNAM Uб DAJUй K dispozici musуб byбt uб daje o kazоdeбm jednotliveбm zvубrоeti. NavУбc jsou vsоechny uб daje shrnuty do tabulkoveб formy, uvaбdeо jубcуб u kazоdeб testovaneб skupiny pocоet pouzоityбch zvубrоat, pocоet zvубrоat vykazujубcубch prоубznaky toxicity, pocоet zvубrоat uhynulyбch v pruй beоhu testu nebo utracenyбch z humaбnnубch duй voduй, dobu uбmrtуб jednotlivyбch zvубrоat, popis, cоasovyб pruй beо h a vratnost toxickyбch uб cоinkuй, a pitevnуб naбlezy. Vsоeobecneб poucоenуб o interpretaci vyбsledkuй pro klasifikaci je uvedeno v Dodatku 2. 3. ZAб VEо RCо NAб ZPRAб VA Zpraбva o pruй beоhu pokusu Zpraбva o pokusu obsahuje tyto informace, pokud mohly byбt zубskaбny : Pokusnaб zvубrоata: п zоivocоisоnyб druh/kmen; п mikrobiologickyб stav zvубrоat, je-li znaбm; п pocоet, staбrоуб a pohlavуб zvубrоat; п zdroj, podmубnky chovu, potrava atd.; п hmotnost jednotlivyбch zvубrоat na zacоaбtku testu, daбle v tyбdennубch intervalech a na konci testu. PodmУбnky testovaбnуб: п zduй vodneо nуб vyбbeо ru vehikula, pokud je jineб nezо voda; п podrobneб uб daje o zpuй sobu aplikace testovaneб laбtky vcоetneо podaбvanyбch objemuй a doby aplikace; п podrobneб uбdaje o potraveо a kvaliteо vody (vcоetneо druhu a zdroje); п zduй vodneо nуб vyбbeо ru pocоaбtecоnуб daбvky. Vyбsledky: п sestavenуб uб dajuй o reakcубch kazоdeбho zvубrоete do tabulek podle pohlavуб a daбvkoveб uб rovneо (t. zn. zvубrоata vykazujубcуб prоубznaky toxicity vcоetneо uб mrtуб, charakter, zaбvazоnost a trvaбnуб uбcоinkuй ); п naбstup a cоasovyб pruй beо h prоубznakuй toxicity a jejich reverzibilita u kazоdeбho zvубrоete;
Strana 7840 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 п pitevnуб naбlezy a histopatologickeб naбlezy u kazоdeбho zvубrоete, jsou-li dispozici. Diskuse vyбsledkuй : HodnocenУб a interpretace: 4. LITERATURA Tato metoda je analogickaб s metodou OECD TG 423.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7841 DODATEK 1 POSTUP TESTOVAб NIб 1. Jak bylo uvedeno v bodu 1.4.2.3, vyбchozуб daбvka by meо la byбt ta ze trоуб pevneо stanovenyбch daбvkovyбch uб rovnуб, kteraб pravdeо podobneо zpuй sobуб uhynutуб asponо u neо kteryбch zvубrоat. Pro vyбbeоr vyбchozуб daбvky lze pouzоубt naбsledujубcуб informace: п uбdaje o fyzikaбlneо-chemickyбch vlastnostech, п vztah struktury a uбcоinku, п vsоechny uбdaje z jinyбch testuй toxicity a п prоedpoklaбdaneб pouzоitуб testovaneб laбtky. 2. PrоУбslusоneб vyбvojoveб diagramy uvedeneб v tomto dodatku stanovujуб postup pro kazоdou vyбchozуб daбvku. V zaбvislosti na pocоtu humaбnneо utracenyбch nebo uhynulyбch zvубrоat postupuje testovaбnуб tak, jak naznacоujуб sоipky. 3. Pokud po aplikaci vyбchozуб daбvky 25 nebo 200 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti uhyne pouze jedno zvубrоe druheбho pohlavуб, obvykle se jizо daбle netestuje. Pokud vsоak prоitom nejsou u ostatnубch 5 zvубrоat zоaбdneб toxickeб prоубznaky, je trоeba pitvou oveо rоit mozоnost, zоe uб mrtуб nesouviselo s podaбnou laбtkou. Jestlizоe se tato mozоnost potvrdуб, je trоeba pokracоovat v testovaбnуб na vysоsоуб uбrovni daбvky. 4. Pokud po daбvce 2000 mg.kg -1 teоlesneб hmotnosti uhyne jedno zvубrоe kazоdeбho pohlavуб, daб se prоedpoklaбdat, zоe hodnota LD 50 prоekrocоуб daбvku 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti. Protozоe je to vsоak jen hranicоnуб vyбsledek, je trоeba pecоliveо posoudit reakce zbyбvajубcубch dvou zvубrоat kazоdeбho pohlavуб: zrоetelneб, vyбrazneб toxickeб prоубznaky u teо chto zvубrоat mohou byбt duй vodem pro klasifikaci odpovубdajубcуб hodnoteо LD 50 ve vyбsоi 2000 mg.kg -1 teо lesneб hnotnosti nebo mensоуб, nebo mohou byбt podneоtem pro dalsоуб testovaбnуб na stejneб uбrovni daбvky. 5. Postup umozоnо uje testovaбnуб s trоemi doplnо kovyбmi pevneо stanovenyбmi daбvkami (varianta 2). Teбto varianty je mozоno pouzоубt bud' k vyбbeо ru alternativnуб daбvky v daneбm bodu rozhodovacубm procesu, nebo pro dalsоуб testovaбnуб po dokoncоenуб testovaбnуб podle varianty 1. Postup testovaбnуб s vyбchozуб daбvkou 25 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti V raбmecоcубch je udaбna daбvka, pocоet zvубrоat a pohlavуб (1 - pohlavуб zvoleneб jako prvnуб, 2 - pohlavуб zvoleneб jako druheб). Pod raбmecоky je pocоet uhynulyбch nebo utracenyбch zvубrоat (0, 1, 2, 3). Podle pocоtu uhynulyбch zvубrоat se v testovaбnуб pokracоuje ve smeо ru sоipek azо do dosazоenуб sоedeбho raбmecоku. Varianta 1 - UkoncоenУб testu: Klasifikace se provede na zaбkladeо konecоnyбch hodnot uvedenyбch v prоубslusоneбm sоedeбm raбmecоku nebo podle zpuй sobu vyhodnocenуб uvedeneбho v Dodatku 2. Varianta 2 - PokracоovaбnУб testu s prоубslusоnou doplnо kovou daбvkou.
Strana 7842 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 UkoncоenУб testu: Klasifikace se provede na zaбkladeо konecоnyбch hodnot uvedenyбch v prоубslusоneбm sоedeбm raбmecоku. Postup testovaбnуб s vyбchozуб daбvkou 200 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti V raбmecоcубch je udaбna daбvka, pocоet zvубrоat a pohlavуб (1 - pohlavуб zvoleneб jako prvnуб, 2 - pohlavуб zvoleneб jako druheб). Pod raбmecоky je pocоet uhynulyбch nebo utracenyбch zvубrоat (0, 1, 2, 3). Podle pocоtu uhynulyбch zvубrоat se v testovaбnуб pokracоuje ve smeо ru sоipek azо do dosazоenуб sоedeбho raбmecоku. Varianta 1 - UkoncоenУб testu: Klasifikace se provede na zaбkladeо konecоnyбch hodnot uvedenyбch v prоубslusоneбm sоedeбm raбmecоku nebo podle zpuй sobu vyhodnocenуб uvedeneбho v Dodatku 2. Varianta 2 - PokracоovaбnУб testu s prоубslusоnou doplnо kovou daбvkou. UkoncоenУб testu: Klasifikace se provede na zaбkladeо konecоnyбch hodnot uvedenyбch v prоубslusоneбm sоedeбm raбmecоku. Postup testovaбnуб s vyбchozуб daбvkou 2000 mg.kg -1 teо lesneб hmotnosti V raбmecоcубch je udaбna daбvka, pocоet zvубrоat a pohlavуб (1 - pohlavуб zvoleneб jako prvnуб, 2 - pohlavуб zvoleneб jako druheб). Pod raбmecоky je pocоet uhynulyбch nebo utracenyбch zvубrоat (0, 1, 2, 3). Podle pocоtu uhynulyбch zvубrоat se v testovaбnуб pokracоuje ve smeо ru sоipek azо do dosazоenуб sоedeбho raбmecоku. Varianta 1 - UkoncоenУб testu: Klasifikace se provede na zaбkladeо konecоnyбch hodnot uvedenyбch v prоубslusоneбm sоedeбm raбmecоku nebo podle zpuй sobu vyhodnocenуб uvedeneбho v Dodatku 2. Varianta 2 - PokracоovaбnУб testu s prоубslusоnou doplnо kovou daбvkou. UkoncоenУб testu: Klasifikace se provede na zaбkladeо konecоnyбch hodnot uvedenyбch v prоубslusоneбm sоedeбm raбmecоku.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7843 DODATEK 2 Interpretace vyбsledkuй zalozоenyбch na testovacуб varianteо 1 V raбmecоcубch je udaбna daбvka, pocоet zvубrоat a pohlavуб (1 - pohlavуб zvoleneб jako prvnуб, 2 - pohlavуб zvoleneб jako druheб). Pod raбmecоky je pocоet uhynulyбch nebo utracenyбch zvубrоat (0, l, 2, 3). Sо edeб raбmecоky pod raбmecоkem Zо Aб DNEб DALSо Iб TESTOVAб NIб v diagramech tohoto dodatku obsahujуб konecоneб hodnoty pro klasifikaci. Po testovaбnуб podle varianty 1 se prоубslusоnaб sоipka sleduje dokud se nedosaбhne prоубslusоneбho raбmecоku. (Hodnoty v raбmecоcубch vyznacоujуб hornуб hranice pro prоубslusоnyб zpuй sob klasifikace. Lezоataб osmicоka znamenaб, zоe LD 50 je veоtsоуб nezо hodnota v nejblizоsоубm raбmecоku vlevo.)
Strana 7844 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 ( a ) TestovacУб postup s vyбchozуб daбvkou 25 mg/kg teоlesneб hmotnosti Start 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 1 0 2-3 1 0 2-3 0-1 25 mg/kg VARIANTA 1 : UKONCо ENIб TESTU 200 mg/kg 2000 mg/kg 8 VARIANTA 2 : POKRACо OVAб NIб TESTU 5 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 50 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 500 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 5 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 50 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 500 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 UKONCо ENIб TESTU 5 mg/kg 50 mg/kg 500 mg/kg 8
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7845 ( b ) TestovacУб postup s vyбchozуб daбvkou 200 mg/kg teоlesneб hmotnosti Start 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 0-1 2-3 1 0 2-3 0-1 25 mg/kg VARIANTA 1.: UKONCо ENIб TESTU 200 mg/kg 2000 mg/kg 8 VARIANTA 2.: POKRACо OVAб NIб TESTU 5 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 50 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 500 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 5 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 50 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 500 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 UKONCо ENIб TESTU 5 mg/kg 50 mg/kg 500 mg/kg 8
Strana 7846 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 ( c ) TestovacУб postup s vyбchozуб daбvkou 2000 mg/kg teоlesneб hmotnosti Start 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg VARIANTA 1.: UKONCо ENIб TESTU 200 mg/kg 2000 mg/kg 8 VARIANTA 2.: POKRACо OVAб NIб TESTU 5 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 50 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 500 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 5 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 50 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 500 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 UKONCо ENIб TESTU 5 mg/kg 50 mg/kg 500 mg/kg 8
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7847 Interpretace vyбsledkuй zalozоenyбch na testovacуб varianteо 1 a) VyбchozУб daбvka 25 mg/kg teоlesneб hmotnosti Start 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 1 0 2-3 1 0 2-3 1 Zо Aб DNEб DALSо Iб TESTOVAб NIб 3 2 3 2 LD 50 mg/kg hmotnosti 25 50 200 500 1000 2000 30 300 2500 25 mg/kg 8 25 mg/kg 200 mg/kg 2000 mg/kg 8 30 mg/kg 300 mg/kg 8 50 mg/kg 500 mg/kg 8 500 mg/kg 1000 mg/kg 2500 mg/kg 8
Strana 7848 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 b) VyбchozУб daбvka 200 mg/kg teоlesneб hmotnosti Start 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 0-1 2-3 1 0 2-3 0-1 Zо Aб DNEб DALSо Iб TESTOVAб NIб 3 (prоi 200 u pohl.1) jineб 3 2 LD 50 mg/kg hmotnosti 25 50 200 500 1000 2000 30 300 2500 25 mg/kg 8 25 mg/kg 200 mg/kg 2000 mg/kg 8 30 mg/kg 300 mg/kg 8 50 mg/kg 500 mg/kg 8 500 mg/kg 1000 mg/kg 2500 mg/kg 8
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7849 c) VyбchozУб daбvka 2000 mg/kg teоlesneб hmotnosti Start 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 1 2-3 0-1 2-3 0-1 2-3 0-1 25 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 200 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2000 mg/kg 3 zvубrоata pohlavуб 2 2-3 2-3 2-3 0-1 0-1 0-1 Zо Aб DNEб DALSо Iб TESTOVAб NIб 3 (prоi 200 u pohl.1) jineб 3 ( prоi 200 u pohl.1) jineб prоi 2000 u pohl.1) LD 50 mg/kg hmotnosti 25 50 200 500 1000 2000 30 300 2500 25 mg/kg 8 25 mg/kg 200 mg/kg 2000 mg/kg 8 30 mg/kg 300 mg/kg 8 50 mg/kg 500 mg/kg 8 500 mg/kg 1000 mg/kg 2500 mg/kg 8
Strana 7850 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Cо aбstka 88 B.2. AKUTNIб TOXICITA (INHALACо NIб) 1. METODA 1. 1 Uб v o d Je uzоitecоneб prоed pokusem zубskat uб daje o rozdeо lenуб velikostуб cоaбstic, tenzi par, teploteо taбnуб, teploteо varu, teploteо vzplanutуб a vyбbusоnosti (jsou-li stanovitelneб) testovaneб laбtky 1. 2 P r i n c i p m e t o d y Neо kolik skupin pokusnyбch zvубrоat je exponovaбno studovaneб laбtce po urcоenou dobu v odstupnо ovanyбch koncentracубch, a to jedneб koncentraci v kazоdeб skupineо. Potom se zvубrоata pozorujуб a zjisоt'ujуб se uб cоinky a prоубpady uhynutуб. ZvУбrоata, kteraб beо hem pokusu uhynou, i ta, kteraб prоezоijуб do konce pokusu, se pitvajуб. ZvУбrоata se zaбvazоnyбmi a prоetrvaбvajубcубmi prоубznaky stresu a bolesti je trоeba humaбnnубm zpuй sobem utratit. Testovaneб laбtky se nemajуб podaбvat v takovyбch koncentracубch a takovyбm zpuй sobem, o kteryбch je znaбmo, zоe vyvolaбvajуб znacоnou bolest a stres naбsledkem svyбch leptavyбch nebo draбzоdivyбch vlastnostуб. 1. 3 P o p i s m e t o d y 1. 3. 1 Prо Убprava Nejmeбneо 5 dnуб prоed testem jsou zvубrоata chovaбna v podmубnkaбch ustaбjenуб a krmenуб, v jakyбch budou beо hem experimentu. Prоed testem se zdravaб mladaб zvубrоata naбhodneо prоirоadуб do potrоebneбho pocоtu experimentaбlnубch skupin. Pokud to nevyzоaduje typ pouzоубvaneбho expozicоnубho zarоубzenуб, nenуб trоeba podrobit zvубrоata simulovaneб expozici. Pevneб testovaneб laбtky je trоeba rozmeо lnit na cоaбstice prоубslusоneб velikosti. Pokud je trоeba, prоidaб se k testovaneб laбtce vhodneб vehikulum tak, aby v ovzdusоуб vznikla prоубslusоnaб koncentrace testovaneб laбtky; v tom prоубpadeо se zarоadуб takeб kontrolnуб skupina s vehikulem. Pokud se uzоije pro usnadneо nуб aplikace vehikulum nebo jinaб aditiva, musуб byбt o nich znaбmo, zоe nemajуб toxickyб uб cоinek. ExistujУб-li vhodnaб historickaб data, je mozоno je vyuzоубt. 1. 3. 2 E x p e r i m e n t aб l n Уб p o d m Уб n k y 1.3.2.1 Pokusnaб zvубrо ata Daбvaб se prоednost potkanuй m, pokud nejsou znaбmy duй vody proti tomu. PouzоУбvaб se beо zоneо uzоубvanyбch pokusnyбch kmenuй. Na zacоaбtku studie nemaб variacоnуб rozpeо tуб hmotnosti zvубrоat prоekrocоit + 20 % strоednуб hodnoty (pro kazоdeб pohlavуб zvlaбsоt'). 1.3.2.2 Pocо et a pohlavуб Pro kazоdou daбvkovou hladinu je trоeba pouzоубt nejmeбneо 10 hlodavcuй (5 samic a 5 samcuй ). Samice musуб byбt nullipary a nesmуб byбt brоezуб.
Cо aбstka 88 SbУбrka zaбkonuй cо. 251 / 1998 Strana 7851 Poznaбmka: PouzоУбvajУб-li se v akutnубch testech toxicity zvубrоata vysоsоубch druhuй, nezо jsou hlodavci, meо lo by se zvaбzоit pouzоitуб mensоубho pocоtu zvубrоat. Daбvky je trоeba pecоliveо volit a je trоeba zarucоit, aby nebyly prоekrocоeny mубrneо toxickeб daбvky. V teо chto testech je trоeba vyhnout se podaбvaбnуб letaбlnубch daбvek testovaneб laбtky. 1.3.2.3 Expozicо nуб koncentrace Maб byбt dostatecоnyб pocоet uб rovnуб daбvek, nejmeбneо trоi, a majуб byбt vhodneо odstupnо ovaбny tak, aby byl u testovacубch skupin viditelnyб rozsah toxickyбch uб cоinkuй a mortality. ZУбskaneб uбdaje musуб stacоit na znaбzorneо nуб vztahu mezi daбvkou a mortalitou a, pokud je to mozоneб, musуб umozоnit stanovenуб LC 50 s prоijatelnou spolehlivostуб. 1.3.2.4 LimitnУб test Nedojde-li po 4 hodinoveб expozici 5 samcuй a 5 samic plynu v koncentraci 20 mg.l -1 nebo paraбm cоi aerosolu tekuteб nebo pevneб laбtky v koncentraci 5 mg.l -1 (nebo - v prоубpadech, kdy tuto koncentraci nenуб mozоneб pouzоубt v duй sledku fyzikaбlnубch nebo chemickyбch vlastnostуб sledovaneб laбtky vcоetneо rizika vyбbuchu - prоi expozici maximaбlnуб dosazоitelneб koncentraci) beо hem 14 dnuй k zоaбdneб mortaliteо vyvolaneб sledovanou laбtkou, povazоujуб se dalsоуб pokusy za zbytecоneб. 1.3.2.5 Doba expozice 1.3.2.6 VybavenУб NejkratsоУб doba expozice maб byбt 4 hodiny. Pro pokusy se zvубrоaty je trоeba pouzоубt inhalacоnуб zarоубzenуб, ktereб umozоnо uje dynamickeб proudeо nуб vzduchu s vyбmeо nou vzduchu nejmeбneо l2kraбt za hodinu, aby byl zarucоen prоimeо rоenyб obsah kyslубku a rovnomeо rneб rozdeо lenуб laбtky v expozicоnуб atmosfeбrоe. Pouzоije-li se expozicоnуб box, je trоeba ho konstruovat tak, aby se co nejvубce omezovalo shlukovaбnуб zvубrоat a aby inhalacоnуб expozice testovaneб laбtce byla maximaбlnуб. Pro zajisоteо nуб stability atmosfeбry v inhalacоnубm boxu by nemeо l v zaбsadeо celkovyб objem pokusnyбch zvубrоat prоesaбhnout 5 % objemu boxu. Je takeб mozоneб pouzоубt inhalacоnуб expozice oraбlneо -nasaбlnуб, samotneб hlavy nebo individuaбlnуб celoteо loveб expozice; prvnуб dva zpuй soby expozice minimalizujуб prоубjem laбtky jinyбmi cestami. 1.3.2.7 Doba pozorovaб nуб Doba pozorovaбnуб by meо la trvat nejmeбneо 14 dnуб. Nelze ji vsоak stanovit rigoroб zneо. Muй zоe zaбviset na toxickyбch reakcубch, na rychlosti jejich vzniku a na trvaбnуб faбze zotavenуб. Dobu pozorovaбnуб je mozоno podle potrоeby prodlouzоit. RozhodujУбcУб je doba, kdy se objevуб a opeо t odeznуб projevy otravy, stejneо jako doba do uhynutуб, zvlaбsоteо tam, kde je patrna tendence ke zpozоdeоneб mortaliteо. 1. 3. 3 P o p i s p o s t u p u ZvУбrоata se bezprostrоedneо prоed expozicуб zvaбzоуб. ExponujУб se po dobu 4 hodin od ustavenуб rovnovaбhy koncentrace studovaneб laбtky. NastavenУб rovnovaбhy by meо lo byбt rychleб. Teplota beо hem pokusu maб byбt 22 8C + 3 8C. RelativnУб vlhkost maб byбt ideaбlneо mezi 30 % a 70 %, s vyбjimkou prоубpaduй, kde to nenуб mozоneб (naprо. experimenty s aerosoly). UdrzоovaбnУб mубrneо negativnубho tlaku uvnitrо komory (ё 5 mm