Výsledky v roce 2017

Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský Oddělení mezilaboratorních porovnávacích zkoušek Poskytovatel zkoušení způsobilosti č.7005 akreditovaný ČIA podle ČSN EN ISO/IEC 17043 Mezilaboratorní porovnávací zkoušky ÚKZÚZ pro analytické laboratoře Výsledky v roce 2017 programu: MPZ ÚKZÚZ ELISA detekce virové infekce v rostlinném materiálu Osoba autorizující výsledkové přehledy: RNDr. Jaroslava Srnková, vedoucí oddělení Datum: 20. 4. 2017 Podpis: Kontaktní údaje: RNDr. Jaroslava Srnková ÚKZÚZ, Národní referenční laboratoř, Oddělení mezilaboratorních porovnávacích zkoušek Hroznová 2, 656 06 Brno tel.: 543 548 220, email: mpz@ukzuz.cz

Obsah Mezilaboratorní porovnávací zkoušky ÚKZÚZ ELISA detekce virové infekce v rostlinném materiálu (MPZ ÚKZÚZ ELISA) Str. 1 Stručné informace o MPZ ÚKZÚZ ELISA 1 1.1 Podmínky MPZ ÚKZÚZ ELISA 1 1.2 Příprava vzorků 1 1.3 Předávání výsledků výsledkové protokoly 2 2 Informace k MPZ ÚKZÚZ ELISA v roce 2017 3 2.1 Průvodní dopis účastníkům 3 2.2 Rozeslané vzorky 5 2.3 Seznam zúčastněných laboratoří 5 3 Výsledky MPZ ÚKZÚZ ELISA v roce 2017 5

Mezilaboratorní porovnávací zkoušky ÚKZÚZ detekce virové infekce v rostlinném materiálu (MPZ ÚKZÚZ ELISA) 1 Stručné informace o MPZ ÚKZÚZ ELISA 1.1 Podmínky MPZ ÚKZÚZ ELISA Náplň a organizace MPZ ÚKZÚZ vychází jednak z požadavků ČIA na akreditované poskytovatele programů zkoušení způsobilosti podle ČSN EN ISO/IEC 17043 Posuzování shody Všeobecné požadavky na zkoušení způsobilosti a jednak z požadavků účastníků. Účelem porovnávacích zkoušek je především zajistit externí kontrolu kvality analytické laboratoře, pomoc při validaci modifikovaných postupů apod. Cílem porovnávacích zkoušek je ukázat odchylky i rozptyl při standardní práci laboratoře, proto by i vzorky mezilaboratorního porovnání měly být zpracovávány zcela standardním postupem. V rámci MPZ ÚKZÚZ ELISA na kvalitativní detekci virové infekce v rostlinném materiálu jsou od roku 2012 rozesílány lyofilizované vzorky jádrovin a peckovin ke stanovení viru mozaiky jabloně (ApMV) a od roku 2017 lyofilizované vzorky tabáku Nicotiana clevelandii x glutinosa ke stanovení viru šarky švestky (PPV). Množství (0,40 g v každé zkumavce) je dostatečné pro provedení analýz. Termín pro zaslání výsledků je vždy uveden v průvodním dopise. Všechny došlé protokoly se archivují. V rámci MPZ ÚKZÚZ ELISA je zaručena úplná anonymita účastníků systémem číselného kódování. Přidělené kódové číslo je číslo laboratoře v databázi účastníků a slouží k předávání výsledků laboratoře k vyhodnocení a orientaci účastníků ve výsledkové tabulce. Pořadí laboratoří uvedených v seznamu účastníků nemá žádný vztah k přiděleným kódovým číslům. Zpracované výsledky MPZ ÚKZÚZ ELISA jsou rozesílány v pdf formátu pouze v digitální podobě a jsou předány účastníkům bez komentáře. Některé činnosti potřebné k realizaci MPZ ELISA mohou být zadány kompetentním subdodavatelům, za tyto práce odpovídá OMPZ. Konkrétně se jedná o provedení testů homogenity, subdodavatelsky zajištěných v Laboratoři virologie ODIA ÚKZÚZ č. 1512 akreditované ČIA podle ČSN EN ISO/IEC 17025. MPZ ÚKZÚZ ELISA není uveden ve výčtu programů v příloze k osvědčení o akreditaci č. 700/2016 akreditovaného subjektu č. 7005. 1.2 Příprava vzorků 1.2.1 Virus mozaiky jabloně (ApMV) Pro MPZ ÚKZÚZ ELISA byly použity listy jádrovin (jeden pozitivní vzorek na virus ApMV a jeden vzorek na tento virus negativní) a listy peckovin (dva vzorky pozitivní a jeden vzorek negativní na virus ApMV). 1

Vzorky jádrovin dodala Ing. Jana Suchá z VŠÚO Holovousy. Ing. Věra Holleinová ze Zahradnické fakulty Mendlovy univerzity v Lednici poskytla vzorky peckovin. Listy jádrovin i peckovin byly upraveny v lyofilizátoru. Bez předchozího zamražení byly listy umístěny do otevřených mikrotenových sáčků tak, aby jejich vrstva byla přibližně 1,5 cm. Teplota poliček v lyofilizátoru byla nastavena na 20 C, tlak 0,1 mba, doba lyofilizace 24 hodin. K lyofilizaci byl použit lyofilizátor ALPHA 1. Po skončení lyofilizace byly listy zhomogenizovány v celém objemu na homogenizátoru RETCH GM 200 a následně byly provedeny testy homogenity. Po provedení testů homogenity byly vzorky rozváženy po 0,40 g do mikrozkumavek Eppendorf a takto uchovávány v mrazničce při teplotě 80 o C. Před rozesláním účastníkům byly vzorky přetestovány podle SOPM01 ELISA za použití diagnostického kitu Bioreba. Lyofilizát byl zpracován za podmínek shodných s pokyny pro MPZ. 1.2.2 Virus šarky švestky (PPV) Pro MPZ ÚKZÚZ ELISA byly použity listy tabáku Nicotiana clevelandii x glutinosa (2 vzorky negativní na PPV a 3 vzorky pozitivní na PPV). Vzorky pro MPZ ÚKZÚZ ELISA byly připraveny z izolátů PPV virologické kolekce Laboratoře virologie ODIA ÚKZÚZ. Vybraný izolát PPV byl přenesen mechanickou inokulací na indikátorové rostliny Nicotiana clevelandii x glutinosa. Po objevení se příznaků (cca za 3 týdny) byly rostliny přetestovány ELISA testem (komerční kit Bioreba), zlyofilizovány a rozmělněny. Současně byly pěstovány a následně zlyofilizovány zdravé indikátorové rostliny Nicotiana clevelandii x glutinosa. Všechny rostliny použité pro přípravu MPZ byly vypěstovány ze semen z kolekce indikátorových rostlin Laboratoře virologie. Po důkladném promísení zlyofilizovaných listů byl materiál rozdělen na vzorky o navážce 0,6 g, každý vzorek byl označen a umístěn v hlubokomrazícím boxu. Před odesláním účastníkům byl každý vzorek přetestován metodou ELISA podle SOPM01 ELISA (komerční kit Bioreba). Lyofilizát byl zpracován za podmínek shodných s pokyny pro MPZ. Zbylých 0,4 g bylo odesláno účastníkům MPZ. 1.3 Předávání výsledků výsledkové protokoly Vzorek pro stanovení ApMV je označen vždy číslem a písmenem J (jádrovina) nebo P (peckovina), pro stanovení PPV číslem. Po analýze vzorků je nutno vyplnit výsledkový protokol následujícím způsobem: pozitivní nález, negativní nález. Při předávání výsledků prostřednictvím elektronické pošty je nezbytné zaslat organizátorovi vyplněné a naskenované výsledkové formuláře opatřené razítkem laboratoře a podpisem odpovědného pracovníka. Tyto formuláře slouží pro případné reklamace ze strany účastníka a pro účely archivace. Literatura: Bartušková I., Ryšavý P., Kopotová J., Suchomelová M., Stehlíková J.: Jednotné pracovní postupy ÚKZÚZ Stanovení rostlinných viróz metodou DAS ELISA a stanovení přítomnosti GMO metodou PCR, ÚKZÚZ, Brno 2007 2

2 Informace k MPZ ÚKZÚZ ELISA 2017 2.1 Průvodní dopis účastníkům MPZ ÚKZÚZ ELISA 3

4

2.2 Rozeslané vzorky Pro stanovení obou virů byly použity vzorky, které byly upraveny lyofilizací. Pro virus ApMV v roce 2014, pro virus PPV v roce 2017. Lyofilizované vzorky byly uchovány po celou dobu v mrazničce při teplotě 80 C. V měsíci lednu 2017 byly vzorky opětovně otestovány v Laboratoři virologie ODIA ÚKZÚZ. Vzorky na testování viru ApMV vzorek J jádrovina pozitivní na virus ApMV vzorek J jádrovina negativní na virus ApMV vzorek P1 peckovina pozitivní na virus ApMV vzorek P2 peckovina pozitivní na virus ApMV vzorek P peckovina negativní na virus ApMV Vzorky na testování viru PPV vzorek pozitivní na virus PPV vzorek negativní na virus PPV 2.3 Seznam zúčastněných laboratoří Chmelařská výzkumná laboratoř Dr. Osvalda, V. F. Humulus, s.r.o., Žatec, ČR Chmelařský institut s.r.o., Žatec, ČR Mendelova univerzita V Brně, Zahradnická fakulta, Ústav ovocnictví, Lednice, ČR Plant Health and Molecular Biology Laboratory, Budapešť, Maďarsko ÚKZÚZ Olomouc, odbor diagnostiky, referát virologie, ČR Výzkumný a šlechtitelský ústav ovocnářský Holovousy s.r.o., ČR 3 Výsledky MPZ ÚKZÚZ ELISA Výsledky pro virus ApMV jsou zpracovány v tabulce č.1, výsledky pro virus PPV v tabulce č.2. Pracoviště jsou uvedena pod kódovými čísly, pod kterými se porovnání zúčastnila. V tabulkách výsledků je na prvním řádku vyznačen druh a přítomnost či nepřítomnost stanovovaného viru ve, který byl laboratoři zaslán, ve druhém řádku je zjištění laboratoře. 5

Tabulka č.1: Výsledková tabulka MPZ ÚKZÚZ ELISA 2017 stanovení viru ApMV Kódové číslo Vzorek č. 1 laboratoře Vzorek č. 2 Vzorek č. 3 01 P1 J P P J P 02 J J P1 P J J 03 J J P2 P J J 04 P P J J P2 P 05 P2 P J J P1 P Legenda vzorek J jádrovina pozitivní vzorek J jádrovina negativní vzorek P1 peckovina pozitivní vzorek P2 peckovina pozitivní vzorek P peckovina negativní Vzorek č. 4 P2 P P P P1 P P1 P J J Vzorek č. 5 J J P2 P P P J J P P 6

Tabulka č. 2: Výsledková tabulka MPZ ÚKZÚZ ELISA 2017 stanovení viru PPV Kódové číslo Vzorek č. 1 laboratoře Vzorek č. 2 Vzorek č. 3 01 02 03 06 Legenda vzorek pozitivní na virus PPV vzorek negativní na virus PPV Vzorek č. 4 Vzorek č. 5 7

Mezilaboratorní porovnávací zkoušky ÚKZÚZ ELISA Výsledky v roce 2017 Vydal : Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský v roce 2017 Odpovědný redaktor : RNDr. Jaroslava Srnková Odborná spolupráce : Mgr. Šárka Linhartová, Ph. D. Technická spolupráce: Hana Srbová Počet stran: 7 Texty neprošly jazykovou úpravou.