Generated by Foxit PDF Creator Foxit Software For evaluation only.

Transkript

1 Generated by Foxit PDF Creator Foxit Software

2 Odebíráme plnou žilní krev U ovcí na krku z vena jugularis U skotu z ocasní žíly (vena coccigica) U drůbeže se provádí odběr z povrchových žil na křídlech Odběr krve se u psa a kočky provádí z velkých povrchových cév např.: z vena jugularis na krku, z vena cephalica na přední končetině nebo z vena saphena na pánevní končetině. Postup odběru krve: Krev odebíráme nesrážlivě do připravených nádobek s protisrážlivým prostředkem (heparin, EDTA= kys. Ethylendiamintetraoctová) Dostačující množství je takové, kolik si přejeme vyšetřit jednotlivých parametrů (1 ml plné krve na DNA, ml na metabolické profilové testy). Zkumavkou netřeseme, ale jemně ji překlápíme nebo kroužíme obsahem, aby se krev promísila s antikoagulantem. Zkumavku označíme jednoznačnou identifikací, tak aby nešlo k záměně vzorků.

3 Výkaly odebíráme buď jako směsný vzorek z podlahy stáje nebo od jednotlivých zvířat. Odběr je prováděn z rekta zvířete do připravené uzavíratelné nádobky. Několik gramů (velikost ořechu). Nádobku dobře označit.

4 Odebrané krevní vzorky jsou obvykle vyšetřovány pomocí hematologických analyzátorů různých firem (MDC a Dialab). Nejčastěji stanovované parametry: Hemoglobin (Hb) Hematokrit (Hk) Erytrocyty (Er) Leukocyty (Le) Glukóza (Glu) Močovina (Moč) Alkalická fosfatáza (AF) Glutamyltransferáza (GMT) Celkové množství plazmatických bílkovin (CB)

5 Cholesterol (Chol) Triglyceridy (Tri) Makroprvky: Vápník (Ca), Fosfor (P), Hořčík (Mg), Sodík (Na), Draslík (K) Mikroprvky: Železo (Fe), Měď (Cu), Zinek (Zn), Selen (Se), Jód (I), Mangan (Mn).

6 Metabolické profilové testy jsou soubory laboratorních vyšetření, které umožňují posoudit částečné a celkové metabolické procesy v organismu zvířat. Mezi nejčastěji stanovované profily v rámci metabolických testů patří: hematologický profil (Hb, Hk, Er, Le), dusíkato-bílkovinný profil (mj. močovina, CB), energetický profil (mj. glukóza, cholesterol, TAG), enzymatický profil (mj. AF, GMT), makrominerální a mikrominerální profil (mj. Ca, Mg, P, Cu, Zn).

7 Diferenciální rozpočet leukocytů je prováděn mikroskopicky analýzou obarvených krevních nátěrů. Princip je, že se na odmaštěná a hlavně suchá podložní sklíčka se zabroušenými okraji roztěrovými sklíčky rozetře kapka krve, která se nechá minimálně 20 minut zaschnout při laboratorní teplotě. Při roztírání je vhodnější položit sklíčko na stůl. Rukou, kterou budeme sklíčko přidržovat, se snažíme nedotýkat se plochy sklíčka, ale držet ho pouze ze stran. Na kraj podložního sklíčka kápneme kapku krve, přibližně 0,5-1 cm od okraje. Pro praváky je lepší udělat kapku na pravém okraji a nátěr táhnout směrem doleva. Roztěrové sklíčko přiložíme před kapku (pokud je na pravém okraji, tak sklíčko přikládáme z levé strany kapky), posuneme ho ke kapce až se celá nasákne podél hrany roztěrového sklíčka. Poté sklíčkem roztíráme krev rovnoměrným, plynulým pohybem v postupně více ostrém úhlu od 45 do 30. Čím je úhel ostřejší (a pomalejší doba roztěru), tím je nátěr tenčí. Nikdy neroztíráme krev před sklíčkem, ale jakoby ji táhneme za roztěrovým sklíčkem. V opačném případě se krevní buňky ničí. Ideální nátěr je rovnoměrně se ztenčující a přibližně 3 6 cm dlouhý.

8 Poté co krevní nátěr dobře zaschne, je nabarven standardně dle Pappenheima pomocí barvicího setu Hemacolor fy MERCK. Postupujeme tak, že první kyvetě s fixačním roztokem jsou nátěry 5x ponořeny na jednu sekundu, poté osušíme okraje a nátěry jsou v tuto chvíli fixovány. Ve druhé kyvetě jsou nátěry třikrát ponořeny na 1 s do červeného barvícího roztoku, osušeny a bezprostředně poté 6x ponořeny do modrého barvícího roztoku. Nabarvená sklíčka s krevními nátěry opláchneme dvakrát po sobě v dostatku čisté destilované vody, osušíme okraje a necháme volně uschnout. Postup barvení je touto fází ukončen. Sklíčka se prohlížejí tak, že je na krevní nátěr kápnuta kapka imerzního oleje a poté jsou pozorovány pod mikroskopem imerzním objektivem za použití tohoto objektivu a imerzního oleje při násobném zvětšení. Při prohlížení musíme preparát posunován meandrovitě, abychom stejné leukocyty nepočítali opakovaně! Určujeme jednotlivé druhy leukocytů a zaznamenáváme jejich počty do tabulek. Celkem spočítáme 100 buněk, protože určujeme procentuální zastoupení jednotlivých leukocytů. Zároveň zaznamenáváme i všechny

9

10 Výskyt parazitů je nejčastěji sledován formou flotace, díky této metody je možné zjistit výskyt, jak protozoálních, tak helmintózních nákaz. Princip koprologického vyšetření je takový, že z každého vzorku odebreme asi 1 g výkalů, což odpovídá přibližně velikosti lískového oříšku. Tento vzorek se rozetřeme s trochou vody v keramické třecí misce a přecediíme přes sítko do tlustostěnné centrifugační zkumavky. Zkumavka s připraveným roztokem odstředíme 5 minut při 2500 otáčkách. Po vyjmutí zkumavek z odstředivky opatrně slijeme supernatant nad sedimentem a do zkumavky střičkou přidáme připravený Sheatherův cukerný roztok (nasycený roztok cukru o hustotě 1,26 g.cm - ³) do výše několika cm a vše se důkladně promíchá. Po doplnění zkumavek roztokem jsou opět odstředěny 5 minut při 2500 otáčkách. Poté zkumavky vyjmeme z odstředivky a drátěnou koprologickou kličkou z povrchu odebreme několik kapek na čisté podložní sklíčko. Po přikrytí krycím sklíčkem preparát prohlížíme pomocí světelného mikroskopu při 100 až 200 násobném zvětšení a zároveň určujeme přítomné endoparaziti. Do tabulek zaznamenáváme počty a jednotlivé druhy parazitů.

11 Generated by Foxit PDF Creator Foxit Software

12