KREV. Krev, krevní elementy Zhotovení, barvení a hodnocení krevního nátěru Leukogram, jeho diagnostický význam. Ústav histologie a embryologie

Transkript

1 KREV Krev, krevní elementy Zhotovení, barvení a hodnocení krevního nátěru Leukogram, jeho diagnostický význam Ústav histologie a embryologie MUDr. Filip Wagner Předmět: Obecná histologie a obecná embryologie B

2 plasma formované elementy červené krvinky (bezjaderné) (méněnež1 % jsou retikulocyty) bílé krvinky agranulocyty (lymfocyty a monocyty) granulocyty KREV (eosinofilní, basofilní a neutrofilní) krevní destičky (nebuněčné elementy)

3 Funkce krve přenos kyslíku a oxidu uhličitého stálá výměna vody a iontů mezi krví a intersticiální tekutinou udržování acidobazické rovnováhy účast na imunitních reakcích, zánětových reakcích a na hojení ran transportní funkce výměna informacía komunikace mezi tkáněmi a orgány organismu (hormony, růstové faktory, cytokiny) schopnost setrvat v tekutém stavu a udržovat reologické vlastnosti, schopnost koagulace a zpětného zkapalnění

4

5 Periferníkrevníobraz Parametry krevního obrazu - analyzátor jednotka ženy muži Leukocyty - počet (WBC) 10 9 /l 4,0-10,0 4,0-10,0 Erytrocyty - počet (RBC) /l 3,80-5,20 4,00-5,80 Hemoglobin - koncentrace (HGB) g/l Hematokrit (HCT) l/l 0,350-0,470 0,400-0,500 Střední objem erytrocytů (MCV) fl 82,0-98,0 82,0-98,0 Střední množství hemoglobinu v erytrocytu (MCH) pg Střední koncentrace hemoglobinu v erytrocytech (MCHC) g/l Šíře distribuce erytrocytů - směrodatná odchylka (RDW-SD) fl 37,0-54,0 37,0-54,0 Šíře distribuce erytrocytů - variační koeficient (RDW-CV) % 10,0-15,2 10,0-15,2 Trombocyty - počet (PLT) 10 9 /l Střední objem trombocytů (MPV) fl 7,8-11,0 7,8-11,0 Šíře distribuce trombocytů - směrodatná odchylka (PDW-SD) fl 9,0-17,0 9,0-17,0 Šíře distribuce trombocytů - variační koeficient (PDW-CV) % 12,0-18,0 12,0-18,0 Šíře distribuce trombocytů - variační koeficient - ADVIA (PDW-CV) % 25,0-65,0 25,0-65,0 Destičkový hematokrit (PCT) ml/l 1,2-3,5 1,2-3,5 Retikulocyty - relativní počet (RET) % 0,5-2,5 0,5-2,5 Retikulocyty - absolutní počet (RET#) 10 9 /l

6 Krevnínátěr Odběr a manipulace s biologickým materiálem: periferníkrev odebranádo K 3 EDTA stabilita vzorku do zhotovení nátěru: max. 5 hodin (při laboratorní teplotě) uchování nátěru na skle do doby vyšetření: fixovaný nenabarvený nátěr lze skladovat ažněkolik týdnůpřed vlastním barvením (při laboratorní teplotě) fixovaný a nabarvený nátěr vydrží až několik let (při laboratorní teplotě) nefixovaný nátěr nelze dlouhodobě skladovat Fixace nátěrů je nezbytná v případě uchovávání nenabarvených skel, pro rutinní barvení nátěrů se nevyžaduje rovnoměrnénátěry krve na skle je nutnénechat minimálně10 minut zaschnout při laboratorní teplotě v kyvetě fixovat nátěry 5 minut metanolem, nátěry nechat zaschnout

7 Zhotoveníkrevního nátěru

8 Barvenídle Pappenheima panoptickébarvení roztoky: May Grünwald Giemsa Romanovski klasický postup: neředěné May-Grünwaldovo barvivo (3 minuty) následněse barvivo na preparátu zředístejným dílem destilované vody a nechá se působit 1 minutu barvivo se slije a bez oplachu se převrství Giemsovým roztokem /1 díl barviva na 10 dílůredestilovanévody/ (15 minut)

9 periferní krev

10 Laboratornípostup barvenínátěru 1. Pracovní roztoky fixační roztok 1: pracovní čistý roztok May-Grünwald promývacíroztok 2: fosfátový pufrph6,7 6,8 barvicíroztok 3: ředit 1 díl roztoku Giemsa-Romanowski(před použitím přefiltrovat) s9 díly fosfátového pufruph6,7 6,8 promývacíroztok 4: čistý fosfátový pufrph6,7 6,8 promývacíroztok 5: čistý fosfátový pufrph6,7 6,8 2. Fixace a barvení nátěrů rovnoměrnénátěry krve na skle je nutnénechat minimálně10 minut zaschnout při laboratorní teplotě. v první kyvetě nátěry fixovat 10 minut fixačním roztokem 1 (fixační roztok nesmí přijít do kontaktu s vodou) ve druhé kyvetě nátěry oplachovat roztokem 2 ve třetí kyvetě nátěry barvit 10 minut barvicím roztokem 3 ve čtvrté kyvetě nátěry opláchnout roztokem 4 v páté kyvetě nátěry opláchnout roztokem 5 nátěry řádně opláchnout pod tekoucí vodou a nechat zaschnout

11 Erytrocyty bezjaderné, tvar bikonkávního disku v izotonickém prostředí průměr 7,5 µm v zaschlém krevním nátěru průměr 7,2 µm makrocyty (nad 9µm) a mikrocyty (pod 6µm) retikulocyty mladá forma, obsahují rrna

12 Trombocyty krevní destičky bezjaderné diskoidní buněčné fragmenty vznikají fragmentací magakaryocytů denzní tělíska (δ granula), α granula, λ granula úloha krevních destiček ve srážení

13 Diferenciálnírozpočet -analyzátor Parametry diferenciálu - analyzátor jednotka ženy muži Neutrofily % 45,0-70,0 45,0-70,0 Lymfocyty % 20,0-45,0 20,0-45,0 Monocyty % 2,0-12,0 2,0-12,0 Eozinofily % 0,0-5,0 0,0-5,0 Bazofily % 0,0-2,0 0,0-2,0 Neutrofily 10 9 /l 2,00-7,00 2,00-7,00 Lymfocyty 10 9 /l 0,80-4,00 0,80-4,00 Monocyty 10 9 /l 0,08-1,20 0,08-1,20 Eozinofily 10 9 /l 0,00-0,50 0,00-0,50 Bazofily 10 9 /l 0,00-0,20 0,00-0,20

14 Diferenciálnírozpočetbílých krvinekmanuální Parametry diferenciálu - mikroskop jednotky ženy muži Neutrofilní segmenty % Neutrofilní tyče % Lymfocyty % Monocyty % Eozinofily % Bazofily %

15 Neutrofilnígranulocyty neutrofilní tyčka a neutrofilní segment granula specifická a azurofilní v cytoplasmě obsahují glykogen mikrofágy aktivně pohlcují malé částice terminální stadium diferenciace poločas v krvi 6-7 hodin přežitíve vazivovétkáni 1-4 dny

16 Elektronogram lidského neutrofilního granulocytu. Cytoplasma obsahuje dva typy granul: malá (peroxidáza-negativní) specifická granula a větší (peroxidáza-pozitivní) azurofilní granula. Jádro je laločnaté, Golgiho komplex je malý. Drsné endoplasmatické retikulum je nepočetné, obdobně mitochondrie. x27,000.

17

18 Eosinofilnígranulocyty charakteristická dvojlaločná jádra hojné částice glykogenu velkémnožstvísvětlolomných specifických granul barvících se eosinem

19 Elektronogram eosinofilního granulocytu. EG, eozinofilní granula N, jádro M, mitochondrie x20,000.

20

21 Basofilnígranulocyty jádro rozděleno na nepravidelnélaloky zpravidla ale zastřeno specifickými granuly méněspecifických granul nežv jiných granulocytech, variabilnější co do tvaru a velikosti specifická granula obsahují heparin a histamin specifická granula se barví metachromaticky bazofilními složkami Romanovského směsí

22 Elektronogram králičího bazofilního granulocytu. Laločnaté jádro (N), bazofilní granula (B), mitochondrie (M), Golgiho komplex (G). x16,000.

23

24 Lymfocyty malé, střední a velké lymfocyty buňky efektorové a paměťové T-lymfocyty supresorové, pomocné, cytotoxické B-lymfocyty terminálně plasmatické buňky NK buňky

25 Elektronogram lidskéh lymfocytu jádro (N) jadérko (Nu) mitochondrie (M) x22,000.

26 Plasmatická buňka (EM 10000)

27

28 Monocyty oválné, podkovovité nebo ledvinovité jádro jádro uloženo obvykle excentricky cytoplasma obsahuje jemná azurofilní granula azurofilní granula monocytů jsou lyzosomy poločas monocytův krvi je hodin

29 Elektronogram lidského monocytu. Golgiho komplex (G) mitochondrie (M) azurofilní granula (A) volné ribosomy (R) x22,000

30

31 Sedimentace rychlost poklesu erytrocytůje dána rychlostítvorby agregátůerytrocytů, kterésedimentujímnohem rychleji, než samostatné erytrocyty rychlost tvorby agregátůzávisína koncentraci fibrinogenu, imunoglobulinů, proteinů akutní fáze sedimentaci zrychluje anémie, naopak vysoký hematokrit(polycytémie) sedimentaci zvyšuje stejně jako vysoký albumin defibrinovaná krev téměř nesedimentuje

32 sedimentace stoupámírněs věkem rychlost sedimentace závisí na pohlaví muži ženy let do 10 mm/hod do 12 mm/hod let do 12 mm/hod do 19 mm/hod nad 60 let do 24 mm/hod do 20 mm/hod

33 Punkce kostnídřeně(aspirací) odběr materiálu pro morfologické(cytologické), cytochemické, imuno(cyto)logické a cytogenetické vyšetření aspirace ze spina iliacasuperior posteriornebo ze sterna v žádném případě není možné provést histologické vyšetření kostní dřeně z aspiraca sternální punkcí

34 Trepanobiopsiekostnídřeně vzorek se odebírátrepanobioptickoujehlou (např. Jamshidiho) lze získat materiál pro histologickévyšetřenía současně i materiál pro cytologii a cytogenetiku

35

36 Úvod do terminologie pancytopenie anémie leukopenie, neutropenie, lymfopenie trombocytopenie polycytémie polycytémie(erytrocytóza, polyglobulie) luekocytóza, neutrofilie, eosinofilie, basofilie, lymfocytóza, monocytóza trombocytémie(trombocytóza) leukemoidní reakce, leukémie