Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky.
MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky.
Struktura nukleových kyselin Struktura a biologický význam nukleových kyselin Prof. RNDr. Milan Navrátil, CSc. Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky.
Obecná struktura nukleotidů/nk BIOCHEMIE: MODUL 09 Adenosin 5 -trifosfát (ATP) Adenin Tri-fosfát Ribosa
Báze N-glykosidická vazba pentóza = nukleosid + fosfát = nukleotid Adenin Adenozin Adenozinmonofosfát (AMP) Adenozindifosfát (ADP) Adenozintrifosfát (ATP) Guanin Cytosin Tymin Uracil
Fosfodiesterická vazba 5 - konec Polarita řetězce!!! 5 ----------------------------------- 3 Fosfodiesterová vazba Fosfodiesterová vazba 3 - konec
PÁROVÁNÍ BAZÍ! POLARITA DNA/RNA! ANTIPARALELNÍ VLÁKNA 5 ---------------------------------------------------- 3 3 ---------------------------------------------------- 5
dsdna je komplementární, antiparalelní Vodíkové můstky (A-T or G-C) Hydrofobní interakce Denaturace: vysoká teplota 94 C formamid vysoké ph (NaOH) Wikipedia
Denaturace x renaturace (antiparalelní, polarita) A - T A - T C - G G - C T - A C - G C - G A - T T - A G - C t C OH - A A C G T T T G C A C C A T G G G T A C A - T A - T C - G G - C T - A C - G C - G A - T T - A G - C Nativní DNA Denaturovaná DNA Renaturovaná DNA
Denaturační křivka dsdna a ssdna T m = teplota, při které je polovina dsdna denaturována na ssdna
Typy DNA Biochem.arizona arizona.edu
DNA syntéza DNA Syntéza DNA in vitro: PCR pufr (Mg 2+ ) nukleotidy (3P) termosatbilní polymeráza templátová DNA H H H cdna syntéza (RT) pufr (Mg2+) nukleotidy (3P) reverzní transkriptasa templátová RNA H Incoming dntp PPi 2 P
Polymerázová řetězová reakce (PCR) 95 C/60 s 55 C/60 s 72 C/60 s ObdynAcademy.com
Sekvencování
Automatické sekvencování
Streptococcus pneumoniae Frederick Griffith, 1928 Smooth hladké, sekrece polysacharidů, původce pneumonie Rough drsné, sekrece chybí, nevyvolává pneumonii
Polysacharidy nejsou genetický materiál. Živý S-kmen usmrtil myš, tepelně inaktivovaný S-kmen ne. Směsná infekce R-kmen x tepelně inaktivovaný S-kmen usmrtila myš a z mrtvé myši byl izolován infekční S- kmen. Transformace. Proteiny nemohou být genetickým materiálem dají se reverzibilně teplem inaktivovat.
Alfred Hershey a Martha Chase, 1952
Hybridizace nukleových kyselin Fingerprinting (animace) Southern blotting (animace) Northern blotting
Centrální dogma molekulární biologie Replikace DNA Transkripce Zpracování mrna Translace protein trna, mrna buněčný aparát
Centrální dogma molekulární biologie Replikace DNA Transkripce Zpracování mrna Translace protein trna, mrna Genetická informace, dědičnost, proměnlivost buněčný aparát
Centrální dogma molekulární biologie Replikace DNA Transkripce Zpracování mrna Translace protein trna, mrna Exprese genů, regulace buněčný aparát
Centrální dogma molekulární biologie Replikace DNA Transkripce Zpracování mrna Translace protein trna, mrna RNA závislé procesy buněčný aparát
Centrální dogma molekulární biologie Replikace DNA Transkripční a translační regulace - pozitivní negativní regulace, atenuace Regulace pomocí RNA Transkripce Zpracování mrna Translace protein Nové druhy RNA trna, mrna RNA závislé procesy buněčný aparát Funkční RNA
Funkce DNA Nositelka genetické informace
Funkce RNA mrna kóduje proteiny rrna základní struktura ribozómu a katalýza syntézy proteinů trna syntéza proteinů, adaptor mezi mrna a AK snrna např. sestřih pre-mrna v jádře snorna zpracování a chemické modifikace rrna Ribozymy katalytické funkce (RNA štěpení a ligace, DNA štěpení, RNA auto-sestřih mirna translační regulace ncrna buněčné procesy, syntéza telomery, inaktivace X- chromozómu, transport proteinů v ER sirna RNA interference degradace cílové mrna
Lokalizace RNA Jádro mrna, snrna, ncrna Jadérko snorna mrna, trna, rrna, snrna, ncrna, ribozymy, sirna, mirna Cytoplazma