Aktualizace OZNÁMENÍ O UZAVŘENÉM NAKLÁDÁNÍ s GMO PRVNÍ A DRUHÉ KATEGORIE RIZIKA na VŠCHT Praha

Aktualizace OZNÁMENÍ O UZAVŘENÉM NAKLÁDÁNÍ s GMO PRVNÍ A DRUHÉ KATEGORIE RIZIKA na VŠCHT Praha. Odkaz na oznámení podané podle S 6 odst. 3 zákona.. Číslo jednací: 6446/ENV/6 a 23775/ENV/7.2. Datum podání: 2. 9. 206 a 5. 4. 207.3. Kategorie rizika:. a 2. kategorie rizika Rozšíření seznamu dárcovských organismů a plasmidů uvedených v oznámeních o uzavřeném č.j. 6446/ENV/6 a 23775/ENV/7. Dárcovské organismy: Houba Cystoderma carcharias (Fungi / Dikarya / Basidiomycota / Agaricomycotina / Agaricomycetes / Agaricomycetidae / Agaricales / Agaricaceae / Cystoderma). Houba rozšířená v jehličnatých lesích a pastvinách v Asii, Evropě, Severní Americe a ostrovech Antarktidy. Je charakterizována růžovou kloboukem šířky až 6 cm, dobře vyvinutým kroužkem na stonku a nepříjemným zápachem. Uvažované genetické modifikace: práce s cdna knihovnou tohoto organismu. Izolát VŠCHT, místo růstu organismu Lhota u Příbrami. Dárcovská houba Russula atropurpurea (holubinka černonachová; Fungi / Dikarya / Basidiomycota / Agaricomycotina / Agaricomycetes / Russulales / Russulaceae / Russula). Střední až velká holubinka. Uvažované genetické modifikace: práce s cdna knihovnou tohoto organismu. Místo růstu organismu Praha Kobylisy, sušený exemplář je ve sbírce Národního muzea pod číslem PRM 85809. Dárcovská houba Russula pumila (holubinka drobná; Fungi / Dikarya / Basidiomycota / Agaricomycotina / Agaricomycetes / Russulales / Russulaceae / Russula). Uvažované genetické modifikace: práce s cdna knihovnou tohoto organismu. Izolát VŠCHT, místo růstu organismu Chmelná, okr. Benešov. Dárcovská houba Russula ochroleuca (holubinka hlízožlutá; Fungi / Dikarya / Basidiomycota / Agaricomycotina / Agaricomycetes / Russulales / Russulaceae / Russula). Holubinka střední velikosti. Uvažované genetické modifikace: práce s genem RoZBP, kódujícím peptid vázající zinek. Izolát VŠCHT, místo růstu organismu Žofínský prales. Dárcovská houba Russula viscida (holubinka lepkavá; Fungi / Dikarya / Basidiomycota / Agaricomycotina / Agaricomycetes / Russulales / Russulaceae / Russula). Holubinka střední velikosti. Uvažované genetické modifikace: práce s geny RvZBP, RvZBP2, kódujícími peptidy vázající zinek. Izolát VŠCHT, místo růstu organismu Choceň. Dárcovská houba Thelephora terrestris Ehrh., Pl. crypt. exsicc. (plesňák zemní; Fungi / Dikarya / Basidiomycota / Agaricomycotina / Agaricomycetes / Thelephorales / Thelephoraceae / Thelephora). Houba rostoucí hojně v listnatých i jehličnatých lesích na chudých půdách, na holé zemi nebo v mechu, často na rostlinných zbytcích nebo u mladých stromků. Roste po celý rok, nejvíce od července do prosince. Používané vektory budou obsahovat gen kodující chitinasu tohoto organismu. Dárcovská rostlina Pteris cretica kultivar Albolineata (křídelnice krétská; Eukaryota / Viridiplantae / Streptophyta / Streptophytina / Embryophyta / Tracheophyta / Euphyllophyta /

Polypodiopsida / Polypodiidae / Polypodiales / Pteridineae / Pteridaceae / Pteridoideae / Pteris / Campteria / Pteris sect. Creticae / Pteris cretica). Stálezelená trsnatá kapradina, výšky do 40-60 cm; rostliny terestrické i epifytické. Uvažované genetické modifikace: práce s cdna knihovnou tohoto organismu. Koupeno v tržní síti ČR. Zika virus. Původ: RNA virus Čeleď: Flaviviridae, rod: Flavivirus. Genom viru Zika je tvořen jednořetězcovou RNA molekulou, kódující tři strukturní a sedm nestrukturních proteinů. Používané vektory budou obsahovat pouze geny kódující strukturní proteiny a jejich fragmenty, zejména kapsidový protein C. Fragmenty o této velikosti nemohou v žádném případě vytvářet jakékoli infekční částice, nejsou tedy infekční, patogenní ani toxické. Materiál byl získán od spolupracovníků z laboratoře Jihočeské univerzity v Českých Budějovicích a to v rámci výzkumné spolupráce při řešení projektu GA ČR. Virus klíšťové encefalitidy. Tick-borne encephalitis virus. Původ: RNA virus Čeleď: Flaviviridae, rod: Flavivirus. Genom viru klíšťové encefalitidy je tvořen jednořetězcovou RNA molekulou, kódující tři strukturní a sedm nestrukturních proteinů. Používané vektory budou obsahovat pouze geny kódující strukturní proteiny a jejich fragmenty, zejména kapsidový protein C. Fragmenty o této velikosti nemohou v žádném případě vytvářet jakékoli infekční částice, nejsou tedy infekční, patogenní ani toxické. Materiál byl získán od spolupracovníků z laboratoře Jihočeské univerzity v Českých Budějovicích a to v rámci výzkumné spolupráce při řešení projektu GA ČR. Virus žluté zimnice. Yellow fewer virus. Původ: RNA virus Čeleď: Flaviviridae, rod: Flavivirus. Genom viru žluté zimnice je tvořen jednořetězcovou RNA molekulou, kódující tři strukturní a sedm nestrukturních proteinů. Používané vektory budou obsahovat pouze geny kódující strukturní proteiny a jejich fragmenty, zejména kapsidový protein C. Fragmenty o této velikosti nemohou v žádném případě vytvářet jakékoli infekční částice, nejsou tedy infekční, patogenní ani toxické. Materiál byl získán od spolupracovníků z laboratoře Jihočeské univerzity v Českých Budějovicích a to v rámci výzkumné spolupráce při řešení projektu GA ČR. MLV Murine leukemia virus. Původ: RNA retrovirus Čeleď: Retroviridae, rod: Gammaretrovirus. Používané vektory budou obsahovat fragmenty genomu viru MLV tj. strukturní proteiny Gag a enzymatické a další proteiny Pol o velikosti maximálně 000 párů bází. Fragmenty o této velikosti nemohou v žádném případě vytvářet jakékoli infekční částice, nejsou tedy infekční ani patogenní. Materiál byl získán od spolupracovníků z laboratoře Jihočeské univerzity v Českých Budějovicích a to v rámci výzkumné spolupráce při řešení projektu GA ČR. Charakterizace plasmidů (vektorů): pry07 - kyvadlový vektor pro bakterie Escherichia coli a Campylobacter jejuni o velikosti 6.75 kb. Vektor obsahuje orit, lacza gen, MCS plasmidu pwsk29 obsahujícím 7 restrikčních míst ohraničených T7 a T3 promotorem, místa pro primery M3 a rezistenci ke kanamycinu (Km r ) prk203 ATCC 3759 ; konstrukt pprk22.2, pdf, rezistence kanr. pgex-4t -3 - GE Healthcare - Tac promotor, vysoká exprese GST-značených rekombinantních proteinů, interní laciq gen pro použití v jakémkoli hostitelské E. coli, PreScission Protease, Thrombin nebo Factor Xa rozpoznávací místa pro štěpení fúzního proteinu pmcherry-n Clontech (TaKaRa) - savčí expresní vektor, který kóduje mcherry, mutantní fluorescenční protein odvozený od červeného fluorescenčního proteinu DsRed Discosoma sp. pmcherry - Clontech (TaKaRa) - vektor, který kóduje mcherry, mutantní fluorescenční protein odvozený od červeného fluorescenčního proteinu DsRed Discosoma sp. o velikosti 3,3 kb nesoucí gen rezistence k antibiotiku ampicilinu. pmcardinal-c Addgene exprese v savčích buňkách, rezistence k neomycinu, velikost 4,75 kbp.

pegfp-c2 Clontech - exprese v savčích buňkách, rezistence ke kanamycinu i neomycinu, velikost 4,7 kbp. pfastbac HT A ThermoFisher Scientific - rezistence k ampicilinu, velikost 4,856 kbp Plasmidy jsou používané k modifikaci bakterií E. coli DH5, E. coli Stellar, Saccharomyces cerevisiae, Rhizobium radiobacter, vyšších rostlin a buněčných linií řazených do první kategorie rizika, modifikace bakterie Campylobacter sp., S. aureus a buněčné linie ASC52telo (ATCC SCRC-4000 ) jsou řazené do druhé kategorie rizika. Změny v Příloze 2 - Provozní řád VŠCHT Praha pro práci s geneticky modifikovanými organismy (GMO) v uzavřeném prostoru: viz příloha 2 tohoto dokumentu (VSCHT_208_Priloha2_ProvozniRad.docx). Změna v Příloze 3 - Havarijní plán VŠCHT Praha pro práci s GMO v bodech d) Osoby odpovědné za likvidaci havárie: Seznam odpovědných osob je k dispozici u odborného poradce Prof. Ing. Kateřiny Demnerové, CSc. Dále v dokumentu je zpracováno HODNOCENÍ RIZIKA PRO UZAVŘENÉ NAKLÁDÁNÍ PRVNÍ A DRUHKATEGORIE RIZIKA PŘEDKLÁDANÉ PODLE 6a ODST. 4 ZÁKONA (K 6a odst. 4 zákona č. 37 / 206 Sb.)

2. Nově používané geneticky modifikované organismy rostlina lilek brambor rozšíření Tabulky 6: Údaje o plasmidech a insertech pro genetické modifikace rostlin oznámení č. j. 6446/ENV/6, rozšířeno o kukuřici setou a sóju luštinatou v oznámení č. j. 23775/ENV/7. Lilek brambor Solanum tuberosum L. Charakterizace recipientní organismu: Eukaryotní Čeleď: lilkovité (Solanaceae) Lilek brambor je víceletá hlíznatá rostlina z čeledi lilkovité, pěstovaná jako jednoletá plodina. Brambory jsou jednou z nejvýznamnějších zemědělských plodin. Lilek brambor je kulturní rostlina s tetraploidním genomem (4n = 48). Brambory tak mají v každém lokusu 4 nezávislé geny. Ze všech kulturních plodin má brambor nejbohatší genetické zdroje. Mnohé z divokých příbuzných lze s bramborem křížit a tak získávat požadované vlastnosti (ranost, odolnost k chorobám). Brambory se komerčně rozmnožují vegetativně z hlíz, pravé semeno se používá hlavně pro šlechtitelské účely. U mnohých kulturních odrůd však pylová sterilita představuje závažný problém pro šlechtění. Geneticky modifikovaný brambor byl v roce 200 jednou ze dvou GM plodin, které mohly být volně pěstovány i na území ČR. GM brambor byl pěstován na více než 50 ha a za tuto dobu nebyly prokázány žádné nepříznivé účinky tohoto rostlinného druhu na okolní krajinu ani zdraví člověka a zvířat. Charakterizace modifikace Geneticky modifikovaný brambor bude připraven agrobakteriální ko-kultivací s fragmenty listů. Vkládaná T-DNA bude obsahovat selekční gen (nptii), který byl do bramboru již několikrát vložen, tyto brambory jsou povoleny ve světě pro volné pěstování a nejsou u nich známy žádné vedlejší nepříznivé účinky v souvislosti s tímto transgenem (internetový zdroj ). Dále bude vkládán transgen osmotinu pocházejícího původně z rostliny tabáku. Tento gen se exprimuje jako odpověď rostliny na stres a v minulosti již byl mnohokrát klonován do komerčních plodin bez známých vedlejších účinků, nebyla u něj prokázána toxicita ani alergenicita (). Stejně jako transgen osmotinu, i transgen limenu je již povolen pro klonování v režimu uzavřeného Ústavu biochemie a mikrobiologie, VŠCHT Praha. Limen je zde veden jako gen PlDef. I přesto, že se jedná o nový peptid, který ještě nebyl v komerčním měřítku použit, jeho toxicita se nepředpokládá, jelikož je přirozeně exprimován v rostlinách fazole měsíční, která je běžnou součástí stravy lidí i zvířat (internetový zdroj 2). Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 2., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 2.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 2.3. Tabulka 2.: Příklady vektorů a do nich vkládaných insertů - akceptorový organismus: Lilek brambor. Název plasmidu (vektoru) Insert Zdroj Funkce Reference Příjemce plasmidu pgreen0029 OSM Rostlina Nicotiana tabacum Multifunkční stresový protein LIM (dříve uváděn jako PlDef) Rostlina Phaseolum lunatum Antimikrobiální peptid Internetové zdroje, 2; Viktorová et al. (202) Brambor

nptii Nevirulentní Escherichia coli Rezistence k antibiotiku - kanamycin Tabulka 2.2: Charakterizace předpokládaných rizik s hodnocenými GMO Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Příjemce brambor - Rodičovský organismus Dárce - Rostlina Nicotiana tabacum - Rostlina Phaseolum lunatum Nevirulentní Escherichia coli Vkládaný gen/inzert Klonovaný gen Alergická reakce Vyňatý gen - - - - Vektor - - Meziprodukt Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Plasmidová DNA GM brambora produkující protein/peptid přirozeného imunitního systému jiné rostliny Biologická laboratoř, uzavřené, rozsah malý - - Přenos do jiných než cílových mikroorganismů (minimální) Alergická reakce Tabulka 2.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO a Pravděpodobnost, že Vyhodnocení Identifikace škodlivý účinek jejich důsledků nastane produkty Cizorodé Přímé proteiny/peptidy - alergenní reakce nízká potenciální alergeny Horizontální přenos genů do jiných organismů Odhad rizika Zařazení do kategorie Nepřímé Potenciální alergeny alergenní reakce nízká Okamžité Potenciální alergeny alergenní reakce nízká Opožděné nebo kumulativní Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku Rozšíření v prostředí Usídlení v půdě Ovlivnění ekosystémů ovlivnění diverzity ovlivnění diverzity ovlivnění diverzity nepravděpodobné nepravděpodobné nebylo popsáno

populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Přirozený přenos Introdukce a vytlačování přirozené populace Stabilní exprese, začlenění transgenu do chromosomu ovlivnění diverzity ovlivnění diverzity Komerční odrůdy brambor jsou pylově sterilní. nebylo popsáno Nepředpokládá se ovlivnění nízká diverzity Přenos klonovaných ovlivnění nízká insertů/genů diverzity Výsledek hodnocení rizika Internetový zdroj : https://biotrackproductdatabase.oecd.org/search.aspx?kw=potato internetový zdroj 2:https://en.wikipedia.org/wiki/Lima_bean. Viktorova J, Krasny L, Kamlar M, Novakova M, Mackova M, Macek T. Osmotin, a Pathogenesis- Related Protein. Current Protein & Peptide Science. 202;3(7):672-8. ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze modifikace popsané v této kapitole zařadit do první kategorie rizika.

3. Nově používané geneticky modifikované organismy mikroorganismus E. coli rozšíření seznamu geneticky modifikovaných bakterií E. coli uvedených v 6446/ENV/6. Escherichia coli Charakterizace recipientního organismu: prokaryotní, gramnegativní fakultativně anaerobní tyčinka Čeleď: Enterobacteriaceae Přirozený výskyt: Jedná se o typického představitele střevní mikroflóry obratlovců, kde je užitečným komenzálem. Za určitých okolností může být nebezpečným patogenem, který může zachvátit apendix, žlučník, močové cesty i dutinu břišní. Některé biotypy E. coli mohou způsobovat závažná onemocnění člověka a zvířat. Může způsobovat akutní i chronické zánětlivé procesy Riziko podmíněné příjemcem: Používá se jen jako základní modelový mikroorganismus pro mikrobiologickou část práce v genovém inženýrství, nemá příjemce. Přímé účinky: Na ÚBM VŠCHT Praha jsou využívány kmeny, u kterých jsou patogenní vlivy na člověka minimalizovány. Předpokládá se, že pracovníci budou s E. coli nakládat v určených laboratořích a ve flow boxech, podle provozních řádu a veškeré kontaminace budou likvidovány použitím chloraminu nebo jiných antibakteriálních desinfekčních činidel. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 3., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 3.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 3.3. Geneticky modifikované bakterie bakteriální kmeny Escherichia coli JM0: rpsl thr leu thi lacy galk galt ara tona tsx dam dcm supe44 Δ(lac-proAB) e4- [F' trad36 proab laci q laczδm5] byl získán z DSMZ (DSM 539) HST08 Stellar: F, enda, supe44, thi-, reca, rela, gyra96, phoa, Φ80d laczδ M5, Δ (laczya - argf) U69, Δ (mrr - hsdrms - mcrbc), ΔmcrA, λ DH0 Bac: genotyp: F mcra Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80laczδm5 ΔlacX74 reca enda arad39 Δ(ara, leu)7697 galu galk λ rpsl nupg/bmon4272/pmon724, buňky pro přípravu bacmidu pro transfekci hmyzích buněk. Stbl3: genotyp: F - mcrb mrrhsds20(rb -, mb - ) reca3 supe44 ara-4 galk2 lacy proa2 rpsl20(str R ) xyl-5 λ - leumtl- avirulentní kmen CCM 4787

Tab. 3.: Příklady vektorů a do nich vkládaných insertů - akceptorový organismus: E. coli (rozšíření Tab. 6446/ENV/6): název plasmidu insert Zdroj funkce Reference (vektoru) pfastbac HT A SERCA Oryctolagus SR Ca 2+ ATPasa Addgene 7440 (ATP2A) cuniculus příčně pruhového svalstva pry, pry07, ilov A. thaliana Chromoprotein VŠCHT (nepublikováno) prem, pgexilov, puc9, pgem-t, pgem-t easy, prk203 pgex-ilov ilov A. thaliana Chromoprotein VŠCHT (nepublikováno) pfpv25. - mcherry Chromoprotein mcherry plv pmtl83353, pmtl8225, pmtl83253, pmtl8425, pmtl8525 Vektor neobsahuje žádný další vložený insert. odvozen z DsRed izolovaného z Discosoma sp. - kyvadlové plasmidy pro E.coli/Clostridium p426gpd Knihovna cdna Cystoderma carcharias knihovna cdna z plodnice p426gpd, pgemt- Vybrané geny Cystoderma Metallothionein, Easy zodpovědné za carcharias metallothionein2 akumulaci těžkých kovů p46gpd Knihovna cdna Russula knihovna cdna atropurpurea z plodnice pgemt-easy Vybrané geny Russula geny vázající Zn zodpovědné za atropurpurea (RaZBP) a jejich akumulaci genové okolí, těžkých kovů transportéry Zn (RaZIP, RaCDF) a jejich netranslatované kódující sekvence p426gpd Knihovna cdna Russula pumila knihovna cdna z plodnice p426gpd, pgemt- Vybrané geny Russula pumila RpZBP, RpZBP2 Easy zodpovědné za geny vázající Zn, akumulaci potenciální geny těžkých kovů účastnící se metabolismu arsenu (zatím nejsou známé), a jejich genové okolí a jejich netranslatované p426gpd, pgemt- Easy RoZBP Russula ochroleuca kódující sekvence gen vázající Zn a jeho netranslatované kódující sekvence Makovcova J. et al. (207): doi: 0./75-795.2705 Heap et al.: A modular system for Clostridium shuttle plasmids. J Microbiol Meth. 2009. doi:0.06/j.mimet.2009.05.004. E. coli Stellar, VŠCHT (nepublikováno) E. coli DH5alfa, VŠCHT (nepublikováno) E. coli DH5alfa, VŠCHT (nepublikováno) E. coli DH5alfa, Leonhardt et al. (208) https://doi.org/0.007/s 0534-08-0085-7) E. coli Stellar, VŠCHT (nepublikováno) E. coli DH5alfa, VŠCHT (nepublikováno) VŠCHT (nepublikováno)

p426gpd, pgemt- Easy RvZBP, RvZBP2 Russula viscida geny vázající Zn a jejich netranslatované kódující sekvence p426gpd Knihovna cdna Pteris cretica knihovna cdna z listů rostliny, potenciální geny účastnící se metabolismu arsenu (zatím nejsou známé) a jejich netranslatované kódující sekvence p426gpd chitinasa Thelephora terrestris EC 3.2..4 VŠCHT (nepublikováno) E. coli Stellar, VŠCHT (nepublikováno) E. coli DH5alfa, VŠCHT (nepublikováno) Tab. 3.2: Charakterizace předpokládaných rizik s hodnocenými GMO Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Příjemce Laboratorní kmeny E. coli Ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu Rodičovský organismus - - Oryctolagus cuniculus - Cystoderma carcharias - Russula atropurpurea - Russula pumila - Dárci Russula ochroleuca - Russula viscida - Pteris cretica - Thelephora terrestris - Discosoma sp. - A. thaliana - Vkládaný gen/inzert Klonovaný gen Alergická reakce Vyňatý gen - - Vektor Geny pro rezistence vůči antibiotikům Horizontální přenos genu pro rezistenci Jiné geny obsažené ve vektoru Horizontální přenos genů Meziprodukt Plasmidová DNA Přenos do jiných než cílových mikroorganismů (je minimální) Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Vznik kmene rezistentního vůči antibiotiku Uzavřené v GMO laboratořích Rezistence vůči antibiotiku Horizontální přenos genů do jiných organismů

Tab. 3.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO a Pravděpodobnost, Vyhodnocení Identifikace že škodlivý účinek jejich důsledků nastane produkty cizorodé Přímé proteiny/peptidy - alergenní reakce nízká potenciální alergeny Odhad rizika Zařazení do kategorie potenciální alergeny alergenní reakce nízká Nepřímé rezistence na omezení možností nízká antibiotikum léčby Okamžité potenciální alergeny alergenní reakce nízká Opožděné nebo kumulativní Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Přirozený přenos rezistence na antibiotika ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu omezení možností léčby průjmová onemocnění rozšíření v prostředí nepravděpodobné usídlení ve vodě a půdě ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu introdukce a vytlačování přirozené populace ovlivnění kvality vody průjmová onemocnění ovlivnění ekosystémů ztráta a přestavba plazmidu přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů přenos plazmidů a klonovaných insertů/genů nízká nízká nepravděpodobné nebylo popsáno střední nízká nízká Výsledek hodnocení rizika ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze kmeny E. coli popsané v této kapitole zařadit do první kategorie rizika.

4. Rozšíření seznamu geneticky modifikovaných organismů o nový kmen mikroorganismu Rhizobium radiobacter. Rhizobium radiobacter Charakterizace recipientního organismu: prokaryotní, gramnegativní tyčinka Čeleď: Rhizobiaceae Přirozený výskyt: Druh půdních, gramnegativních, nesporulujících, pohyblivých tyčinkovitých bakterií, které jsou patogeny dvouděložných rostlin a způsobují tvorbu nádorů. Bakterie je využívána v biotechnologickém výzkumu. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 4., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 4.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 4.3. Geneticky modifikované bakterie bakteriální kmen Rhizobium radiobacter: z 6446/ENV/6 LBA 4404: kmen TiAch5, Ti plasmid pal4404 nově: EHA 05: kmen C58, markerový gen rif, Ti Plasmid: peha05 (= ptibo542dt-dna) AGL: kmen C58, RecA, plasmid ptibo542dt-dna (Beijerinck and van Delden, Young et al., ATCC BAA-0 ) Tab. 4.: Geneticky modifikovaní hostitelé s plasmidy založenými na nekomerčních vektorech (rozšíření Tab 5 6446/ENV/6): Název plasmidu (vektoru) Insert Dárce insertu Funkce Reference Příjemce plasmidu phg/psilba gamma RaZBP Russula atropurpurea Peptid vázající Zn Leonhardt et al., 204, Metallomics Rhizobium radiobacter a H. mesophaeum Tab. 4.2: Charakterizace rizik s hodnocenými GMO - možnosti Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Příjemce Oportunní patogen lidí, s nízkou virulencí Infekce Rodičovský organismus - - Dárce Russula atropurpurea - Vkládaný gen/inzert Klonovaný gen pro potenciální alergen Alergická reakce Vyňatý gen - - Geny pro rezistence vůči Horizontální přenos genu pro Vektor antibiotikům rezistenci

Meziprodukt Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Jiné geny obsažené ve vektoru Geny pro rezistence vůči antibiotikům Shotgun klonování z genomu neznámých organismů Vznik kmene rezistentního vůči antibiotiku Uzavřené v GMO laboratořích Horizontální přenos genů Horizontální přenos genu pro rezistenci Možnost vzniku toxigenních a virulentních kmenů Rezistence vůči antibiotikům nebo jiným léčivům Horizontální přenos genů do jiných organismů Tab. 4.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO Pravděpodobnost, Vyhodnocení a jejich Identifikace že škodlivý důsledků produkty účinek nastane Potenciální Přímé alergen Nepřímé Okamžité Opožděné nebo kumulativní Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Odhad rizika Zařazení do kategorie Alergenní reakce nízká Infekční agens Infekce nízká nízká Potenciální alergen Rezistence na antibiotika Potenciální alergen Rezistence na antibiotika Rozšíření v prostředí Usídlení ve vodě a půdě Introdukce a vytlačování přirozené populace Ovlivnění ekosystémů Ztráta a přestavba plazmidu Přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů Alergenní reakce Omezení možností léčby nízká Alergenní reakce nízká Omezení možností léčby Ovlivnění kvality vody nízká nízká nepravděpodobné nebylo popsáno střední nízká

Přirozený přenos Přenos plazmidů a klonovaných insertů/genů nízká Výsledek hodnocení rizika ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze kmeny Rhizobium radiobacter popsané v této kapitole zařadit do první kategorie rizika.

5. Nově používané geneticky modifikované organismy S. cerevisiae rozšíření seznamu geneticky modifikovaných kvasinek uvedených v Oznámení o uzavřeném 6446/ENV/6. Příjemci plasmidu: kmeny kvasinek S. cerevisiae uvedené v Oznámení o uzavřeném 6446/ENV/6. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 5., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 5.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 5.3. Tab. 5.: Příklady vektorů a do nich vkládaných insertů - akceptorový organismus: S. cerevisiae (rozšíření Tab. 6446/ENV/6): název plasmidu insert Zdroj funkce Reference (vektoru) p426gpd Knihovna Cystoderma knihovna cdna VŠCHT (nepublikováno) cdna carcharias z plodnice p46gpd, Knihovna Russula knihovna cdna VŠCHT (nepublikováno) p426gpd cdna atropurpurea z plodnice p426gpd Knihovna Russula pumila knihovna cdna VŠCHT (nepublikováno) cdna z plodnice p426gpd RoZBP Russula Peptid vázající Zn VŠCHT (nepublikováno) ochroleuca p426gpd RvZBP, Russula viscida Peptidy vázající Zn VŠCHT (nepublikováno) RvZBP2 p426gpd Knihovna cdna Pteris cretica knihovna cdna z listů rostliny VŠCHT (nepublikováno) Tab. 5.2: Charakterizace předpokládaných rizik s hodnocenými GMO Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Příjemce Laboratorní kmen S. cerevisiae Ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu Rodičovský organismus - - Cystoderma carcharias - Russula atropurpurea - Dárce Russula pumila - Russula ochroleuca - Russula viscida - Pteris cretica - Vkládaný gen/inzert Klonovaný gen Alergická reakce Vyňatý gen - -

Vektor Meziprodukt Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Geny pro rezistence vůči antibiotikům Jiné geny obsažené ve vektoru Plasmidová DNA Vznik kmene rezistentního vůči antibiotiku Uzavřené v GMO laboratořích Horizontální přenos genu pro rezistenci Horizontální přenos genů Přenos do jiných než cílových mikroorganismů (je minimální) Rezistence vůči antibiotiku Horizontální přenos genů do jiných organismů Tab. 5.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO a Pravděpodobnost, Vyhodnocení Identifikace že škodlivý účinek jejich důsledků nastane produkty cizorodé Přímé proteiny/peptidy - potenciální alergenní reakce nízká alergeny potenciální Nepřímé Okamžité Opožděné nebo kumulativní Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost alergeny rezistence na antibiotikum potenciální alergeny rezistence na antibiotika ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu rozšíření v prostředí usídlení ve vodě a půdě ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu introdukce a vytlačování přirozené populace ovlivnění ekosystémů Odhad rizika Zařazení do kategorie alergenní reakce nízká omezení možností léčby alergenní reakce omezení možností léčby průjmová onemocnění ovlivnění kvality vody, ovlivnění diverzity průjmová onemocnění nízká nízká nízká nízká nepravděpodobné nepravděpodobné nebylo popsáno

Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Přirozený přenos ztráta a přestavba plazmidu přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů přenos plazmidů a klonovaných insertů/genů střední nízká nízká Výsledek hodnocení rizika ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze kmeny S. cerevisiae popsané v této kapitole zařadit do první kategorie rizika.

6. Baculovirus: obsahující SERCA (Oryctolagus cuniculus), polyhedrinový promotor Baculovirus Charakterizace recipientního organismu: virus Čeleď: Baculoviridae Bakuloviry jsou viry tvořené obdélníkovými částicemi, které obsahují kruhovou dvojřetězcovou DNA o velikosti 80-80 kda. Tyto v přírodě běžné viry přirozeně infikují larvy řádu Lepidoptera (motýli) a je jich patrně několik stovek druhů rozdělitelných do několika skupin podle svých hostitelů, kterými jsou výhradně bezobratlí. V molekulárně biologickém výzkumu jsou bakuloviry již třicet let úspěšně využívány pro expresi proteinů a mají řadu výhod. Především je do nich možno vložit velké inserty a získat virové částice ve vysokých titrech pro následnou produkci proteinu/ů, které lze získat ve větším množství než v savčích expresních systémech a s podobnou biologickou aktivitou. Bakuloviry nejsou schopny se replikovat v savčích buňkách, ač do nich mohou vstoupit. V současnosti se bakulovirový expresní systém využívá i např. pro výrobu složek vakcíny Cervarix. Charakterizace modifikace Bakulovirový expresní systém je komerčně dostupný (Bac-to-Bac TM, ThermoFisher Scientific, USA). V první fázi se gen pro protein zvolený k expresi vnese do speciálního plazmidu, který je transformován do kompetentních bakterií E. coli DH0 Bac, kde je gen pro protein rekombinován a tak zapojen do linearizované DNA bakuloviru. Rekombinovaný cyklický produkt bacmid je následně izolován a transfekován do hmyzích buněk Sf9, kde jsou syntetizovány virové částice. Ty jsou poté použity pro infekci expresní kultury hmyzích buněk Sf9. Jako promotor pro expresi vneseného genu ve hmyzích buňkách slouží bakulovirový promotor pro polyhedrin. Tento protein je v hmyzích buňkách infikovaných divokou formou bakuloviru exprimován jako pozdní a pro samotnou tvorbu virových částic nemá žádný význam; lze ho proto nahradit studovaným genem. Vytvořené rekombinantní polyhedrin-negativní bakulovirové částice jsou navíc díky absenci polyhedrinu méně stabilní v prostředí. V laboratoři připravené viriony jsou také pro běžný hmyz neinfekční. V našem případě je do bakuloviru vnášeným genem gen ATP2A z králíka divokého (Oryctolagus cuniculus), kódující sarko-/endoplasmatickou retikulární Ca 2+ ATPasu specifickou pro příčně pruhovanou svalovinu. Tento protein je jedním z klíčových enzymů zabezpečujících hospodaření svalů s vápenatými ionty. Geny pro lidské isoformy SERCA jsou již povoleny pro uzavřené Ústavu biochemie a mikrobiologie, VŠCHT. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 6., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 6.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 6.3.

Tab. 6.: Příklady vektorů a do nich vkládaných insertů - Baculovirus Název plasmidu (vektoru) Insert Zdroj Funkce Reference Příjemce plasmidu pfastbac HT A ATP2A králík Ca2+ ATPasa Addgene E. coli (Oryctolagus sarkoplasmatického 7440 DH0Bac, po cuniculus) retikula rekombinaci příčně expresní pruhového svalstva kultury hmyzích buněk Sf9 Tab. 6.2: Charakterizace rizik s hodnocenými GMO. Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek expresní kultury hmyzích buněk - Vznik funkčního viru, který neinfikuje jiné organismy než členovce a vzhledem k ponechanému polyhedrinovému promotoru Příjemce Přítomnost virových genů není v i v případě transdukce schopen protein produkovat jinde než v členovcích. Pravděpodobnost je však nízká, protože je používána lab. forma. Rodičovský organismus - - Dárce - - Vkládaný gen/inzert Klonovaný gen pro potenciální alergen Alergická reakce Vyňatý gen - - Vektor Geny pro rezistence vůči antibiotikům Horizontální přenos genu pro rezistenci Meziprodukt Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Jiné geny obsažené ve vektoru E. coli DH0 Bac Geny pro rezistence vůči antibiotikům Kultury hmyzích buněk s viriony Uzavřené v GMO laboratořích Horizontální přenos genů Ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu Horizontální přenos genu pro rezistenci V laboratoři připravené viriony jsou neinfekční pro běžný hmyz a v prostředí jsou málo stabilní. Horizontální přenos genů do jiných organismů

Tab. 6.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO Pravděpodobnost, Vyhodnocení a jejich Identifikace že škodlivý účinek důsledků produkty nastane Odhad rizika Přímé Potenciální alergen Alergenní reakce nízká Potenciální alergen Alergenní reakce Nepřímé Rezistence na antibiotika Omezení možností léčby Okamžité Potenciální alergen Alergenní reakce nízká Rezistence na antibiotika Omezení možností léčby Opožděné nebo Ovlivnění přirozené mikroflóry lidského Průjmová onemocnění nízká kumulativní organismu Rozšíření v prostředí nízká Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Přirozený přenos Usídlení ve vodě a půdě Ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu Ovlivnění ekosystémů Ztráta a přestavba plazmidu Přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů Přenos plasmidů a klonovaných insertů/genů Ovlivnění kvality vody Průjmová onemocnění nepravděpodobné nebylo popsáno Zařaze ní do kategorie střední nízká nízká Výsledek hodnocení rizika ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze modifikace popsané v této kapitole zařadit do první kategorie rizika.

7. Rozšíření používaných buněčných linií uvedených v ch 6446/ENV/6 a 23775/ENV/7 první kategorie rizika. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 7., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 7.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 7.3. Geneticky modifikované buněčné linie (rozšíření předchozích 6446/ENV/6 a 23775/ENV/7): Buněčná linie MG-63 (ATCC CRL-427 ) - lidský kostní osteosarkom Buněčná linie Saos-2 (ATCC HTB-85 ) - lidský kostní osteosarkom Buněčná linie OMK 637-69 (ATCC CRL-556) epiteliální opičí buňky Tab. 7.: Příklady vektorů a do nich vkládaných insertů - akceptorový organismus: buněčné linie. název vektoru insert Zdroj funkce Reference pgex-4t-3 pmcherry pmcardinal-c pegfp-c2 pet22b cell division cycle 27 homolog (CDC27) ER signální peptid /Calreticulin (CALR) Histon 2B (HISTH2BJ) PMCA4x/b (ATP2B4) Kapsidový C protein Homo sapiens Homo sapiens Homo sapiens Homo sapiens Virus zika součást cyklosomu /komplexu podporujícího anafázi protein přítomný v ER lidský histon 2B Ca 2+ ATPasa plasmatické membrány Strukturní protein Addgene 3673, Banko et al Mol Cell. 20 Dec 23;44(6):878-92. Epub 20 Dec. Addgene 5504, Addgene 5662, Chu et al Nat Methods. 204 Mar 6. doi: 0.038/nmeth.2888. Addgene 47589, Chicka et al J Biol Chem. 2003 May 6;278(20):8464-70. Epub 2003 Mar 6. VŠCHT (nepublikováno) pet22b Kapsidový C protein Virus klíšťové encefalitidy Strukturní protein VŠCHT (nepublikováno) pet22b Kapsidový C protein Virus žluté zimnice Strukturní protein VŠCHT (nepublikováno) pet22b Kapsidový C protein MLV - Murine leukemia virus Strukturní protein VŠCHT (nepublikováno)

Tab. 7.2: Charakterizace předpokládaných rizik s hodnocenými GMO Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Příjemce Rodičovský organismus Dárce Vkládaný gen/inzert Vektor Vektor Meziprodukt Meziprodukt Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Přítomnost virových genů - - Patogenní mikroorganismus, souvislost funkce klonovaného genu s toxicitou, patogenitou nebo virulencí Klonovaný gen pro potenciální alergen Klonovaný gen, jehož funkce souvisí s patogenitou nebo virulencí Geny pro rezistence vůči antibiotikům Jiné geny obsažené ve vektoru Plasmidová DNA Vznik kmene rezistentního vůči antibiotiku Uzavřené v GMO laboratořích Vznik funkčního viru, nádorová transformace Infekce, zvýšená virulence Alergická reakce Patogenní účinek, zvýšená virulence Horizontální přenos genu pro rezistenci Horizontální přenos genů Přenos do jiných než cílových organismů (minimální) Rezistence vůči antibiotikům nebo jiným léčivům -

Tab. 7.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO Pravděpodobn a jejich Identifikace Vyhodnocení důsledků ost, že škodlivý produkty účinek nastane Odhad rizika Přímé Potenciální alergen Alergenní reakce nízká Infekční agens Infekce střední Nepřímé Potenciální alergen Alergenní reakce Rezistence na antibiotika Omezení možností léčby Okamžité Potenciální alergen Alergenní reakce nízká Opožděné Rezistence na antibiotika Omezení možností léčby nízká nebo Rozšíření v prostředí nízká kumulativní Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Přirozený přenos Usídlení ve vodě a půdě Introdukce a vytlačování přirozené populace Ovlivnění ekosystémů Ztráta a přestavba plazmidu Komplementace delece Přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů Přenos plazmidů a klonovaných insertů/genů Ovlivnění kvality vody Vznik divokého kmenu nepravděpodobn é nebylo popsáno Zařaze ní do kategorie střední nízká nízká Výsledek hodnocení rizika ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze buněčné linie popsané v této kapitole zařadit do první kategorie rizika.

8. Buněčná linie ASC52telo druhá kategorie rizika. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 8., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 8.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 8.3. Geneticky modifikované buněčné linie: Buněčná linie ASC52telo (ATCC SCRC-4000 ) lidské mezenchymální kmenové buňky z adipózní tkáně ASC52telo tato linie je ATCC zařazena do Biosafety level 2, protože buňky obsahují SV40 virové DNA sekvence, SV40 je lidský a opičí polyomavirus. Tab. 8.: Příklady vektorů a do nich vkládaných insertů - akceptorový organismus: buněčné linie. název vektoru insert Zdroj funkce Reference pmcherry- N Vinkulin (VCL) Homo sapiens protein přítomný ve fokálních adhezních kontaktech pegfp-c Talin (TLN) Mus musculus protein přítomný ve fokálních adhezních kontaktech pegfp Paxilin Mus musculus protein přítomný ve fokálních adhezních kontaktech Addgene 5560, Burnette et al Nat Cell Biol. 20 Apr;3(4):37-8. doi: 0.038/ncb2205. Addgene 26724 Addgene 80023 Tab. 8.2: Charakterizace předpokládaných rizik s hodnocenými GMO Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Buněčná linie obsahující SV40 virové DNA sekvence - Příjemce Rodičovský organismus Dárce Vkládaný gen/inzert Vektor Přítomnost virových genů - - Patogenní mikroorganismus, souvislost funkce klonovaného genu s toxicitou, patogenitou nebo virulencí Klonovaný gen pro potenciální alergen Geny pro rezistence vůči antibiotikům Vznik funkčního viru, nádorová transformace Infekce, zvýšená virulence Alergická reakce Horizontální přenos genu pro rezistenci Vektor Jiné geny obsažené ve vektoru Horizontální přenos genů

Meziprodukt Meziprodukt Výsledný geneticky modifikovaný organismus Místo a rozsah Pseudovirová částice (při použití retrovirových vektorů) Vznik kmene rezistentního vůči antibiotiku Uzavřené v GMO laboratořích Transdukce do lidského genomu, nádorová transformace buněk Rezistence vůči antibiotikům nebo jiným léčivům - Tab. 8.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky s GMO Pravděpodobnost, Vyhodnocení a jejich Identifikace že škodlivý účinek důsledků produkty nastane Přímé Nepřímé Odhad rizika Zařaze ní do kategorie Potenciální alergen Alergenní reakce nízká Infekční agens Infekce střední Transdukce pseudovirovou částicí, Potenciální maligní nebylo 2 integrace genu do transformace nízká popsáno genomu (retrovirové somatické buňky vektory) Potenciální alergen Rezistence na antibiotika Alergenní reakce Omezení možností léčby Okamžité Potenciální alergen Alergenní reakce nízká Opožděné nebo kumulativní Usídlení v prostředí Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Rezistence na antibiotika Omezení možností léčby Rozšíření v prostředí nízká Transdukce pseudovirovou částicí Transfekce adenovirovou DNA, rekombinace s latentním adenovirem Usídlení ve vodě a půdě Introdukce a vytlačování přirozené populace Ovlivnění ekosystémů Ztráta a přestavba plazmidu Komplementace delece Potenciální maligní transformace somatické buňky Ovlivnění kvality vody, ovlivnění diverzity Vznik divokého kmenu nízká nízká nepravděpodobné nebylo popsáno nebylo popsáno střední 2

Interakce s organismy Přirozený přenos Přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů Přenos plazmidů a klonovaných insertů/genů nízká nízká Výsledek hodnocení rizika 2 ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze buněčné linie popsané v této kapitole zařadit do druhé kategorie rizika.

9. Rozšíření seznamu geneticky modifikovaných organismů o nový mikroorganismus Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus Charakterizace recipientního organismu: prokaryotní, grampozitivní fakultativně anaerobní kok Čeleď: Staphylococcaceae Bakterie rodu Staphylococcus jsou grampozitivní fakultativně anaerobní koky, rod čítá více než 40 druhů s následujícím taxonomickým zařazením, kmen Firmicutes, třída Bacilli, řád Bacillales a čeleď Staphylococcaceae. Byl objeven v roce 880 v hnisu z abscesu skotským doktorem Alexanderem Ogstonem, který zkoumal důvod vzniku zánětu a tvorby hnisu po operačním zákroku. Buňky mají tvar sférických koků, netvoří spóry a jsou nepohyblivé. Většina zástupců produkuje katalasu, mezi další typické znaky patří schopnost kvasit cukry za tvorby kyselin ale ne plynů. Díky schopnosti výborně kolonizovat povrch pokožky, kožní žlázy a sliznice patří mezi nejčastější původce intoxikací teplokrevných obratlovců, včetně člověka. Vzhledem k jejich odolnosti vůči vnějšímu prostředí mohou být izolovány z různých potravin živočišného původu, ale i z půdy, vody, písku a prachu. Přežívají v suchém prostředí, a pokud jsou přítomny bílkoviny, přežijí i týdny např. v zaschlém hnisu. Jsou tolerantní k vyšším koncentracím NaCl, mohou tedy osidlovat kůži a kožní žlázy, vyskytují se i v potu. Díky této vlastnosti mohou být selektivně kultivovány na půdách s NaCl o koncentraci 0 %. Jsou také odolné k vyšším koncentracím žluči. Podle produkce koagulasy se dělí na koagulasa pozitivní, mezi nejznámější patří S. aureus a S. intermedius, a koagulasa negativní S. epidermidis, S. saprophyticus, S. haemolyticus. Z rodu Staphylococcus je klinicky a mikrobiologicky nejvýznamnější druh S. aureus, který se dále dělí na S. aureus subsp. aureus a S. aureus subsp. anaerobius. Přehled vektorů a do nich vkládaných insertů je uveden v Tab. 9., charakterizace předpokládaných rizik s hodnoceným GMO je uvedena v Tab. 9.2 a dokumentace postupu hodnocení rizika v Tab. 9.3. Geneticky modifikované bakterie bakteriální kmeny Staphylococcus aureus z České sbírky mikroorganismů (CCM) Tab. 9.: Charakterizace modifikace Název plasmidu (vektoru) pfpv25. - mcherry plv Insert Zdroj Funkce Reference Příjemce plasmidu mcherry odvozen z DsRed izolovaného z Discosoma sp. Chromoprotein Makovcova J. et al. (207): doi: 0./75-795.2705 E. coli a Staphylococcus aureus

Tab. 9.2: Charakterizace předpokládaných rizik s hodnocenými GMO Zdroj rizika Podstata rizika Potenciální škodlivý účinek Příjemce Patogenní bakterie Infekce člověka Rodičovský organismus - Dárce Discosoma sp. - Vkládaný gen/inzert Klonovaný gen Alergická reakce Gen pro rezistenci k antibiotiku Přenos genu pro rezistenci vůči antibiotiku Vyňatý gen - - Vektor Geny pro rezistence vůči antibiotikům Horizontální přenos genu pro rezistenci Jiné geny obsažené ve vektoru Horizontální přenos genů Meziprodukt - - Vznik kmene rezistentního Výsledný geneticky Rezistence vůči antibiotiku vůči antibiotiku modifikovaný organismus Patogenní bakterie Infekce člověka Místo a rozsah Uzavřené v GMO laboratořích - - Tab. 9.3: Dokumentace postupu hodnocení rizika a shrnutí jeho výsledků Účinky Potenciální škodlivé účinky Pravděpodobnos s GMO a Vyhodnocení Identifikace t, že škodlivý jejich důsledků produkty účinek nastane Odhad rizika Zařazení do kategorie Přímé Patogenní bakterie Infekce a toxikózy 2 Cizorodé proteiny - alergenní reakce nízká potenciální alergeny Potenciální alergen alergenní reakce Nepřímé Rezistence na antibiotikum 2 omezení možností léčby střední Okamžité Patogenní bakterie Infekce a toxikózy 2 Potenciální alergen alergenní reakce nízká Rezistence na omezení možností antibiotika léčby Opožděné Ovlivnění přirozené nízká nebo průjmová mikroflóry lidského kumulativní onemocnění organismu Rozšíření v prostředí nepravděpodobné 2 Patogenní bakterie Infekce a toxikózy 2 Usídlení Usídlení ve vodě a nepravděpodobné v prostředí půdě 2 Vliv na dynamiku populací a Ovlivnění přirozené mikroflóry lidského organismu Infekce a toxikózy střední 2

genetickou rozmanitost Vliv na dynamiku populací a genetickou rozmanitost Fenotypová a genetická nestabilita Interakce s organismy Přirozený přenos Introdukce a vytlačování přirozené populace Ovlivnění ekosystémů Introdukce a vytlačování přirozené populace Ztráta a přestavba plazmidu Přenos plazmidu a klonovaných insertů/genů Přenos plazmidů a klonovaných insertů/genů nebylo popsáno nebylo popsáno střední nízká nízká Výsledek hodnocení rizika 2 2 bakterie Staphylococcus aureus jsou podle Přehledu biologických činitelů zařazeny do skupiny rizika 2. Předpokládáme, že kmeny GMO po delecích genů ani po vložení klonovaných genů nemohou mít zvýšenou patogenitu proti výchozím kmenům. 2 geny pro rezistence vůči antibiotikům z vektorů, např. rezistence vůči ampicilinu ZÁVĚR: Na základě rozboru všech faktorů ovlivňujících rizika vzniku škodlivých účinků lze kmeny Staphylococcus aureus popsané v této kapitole zařadit do druhé kategorie rizika.

Vypracovala: Ing. Kamila Zdeňková, Ph.D. Vyjádření odborného poradce: Uzavřené s GMM, BL a s GMVR specifikovanými v návrhu a pro účely uvedené pro pracoviště Ústavu biochemie a mikrobiologie VŠCHT Praha spadá podle 7 zákona 78/2004 Sb. do prvé "I" a druhé II kategorie rizika. Uzavřené s GMO specifikovanými v návrhu a pro účely uvedené pro pracoviště Ústavu biotechnologie VŠCHT Praha spadá podle 7 zákona 78/2004 Sb. do prvé "I" kategorie rizika. Datum a podpis odborného poradce. Datum, podpis a razítko oznamovatele