3S-01 NOVÉ TYPY STŘÍBRNÝCH AMALGAMOVÝCH ELEKTROD A JEJICH VYUŽITÍ ALEŠ DAŇHEL Univerzit Krlov v Prze, Přírodovědecká fkult, Ktedr nlytické chemie, UNESCO Lbortoř elektrochemie životního prostředí, Hlvov 8, 128 43 Prh 2 dnhel@ntur.cuni.cz Stříbrné mlgmové elektrody poskytují široké možnosti využití při stnovení orgnických i norgnických elektrochemicky redukovtelných nlytů 1,2. V tomto příspěvku budou popsány nové možnosti stříbrného mlgmu jko elektrodového mteriálu použitého při konstrukci prcovních elektrod pro nové voltmetrické mperometrické metody stnovení vybrných nitrofenolů. Smísením jemného prášku stříbrného mlgmu s vhodnou pstovcí kplinou byl připrven stříbrná tuhá mlgmová pstová elektrod (AgSA-PE) podobná uhlíkovým pstovým elektrodám. Výhodou AgSA-PE, je jednoduše obnovitelný elektrodový povrch eliminující jeho přípdnou psivci, potenciálové okno sice užší v porovnání s rtuťovou elektrodou, le stále dosttečně široké, dosttečná velikost reprodukovtelnost měřeného signálu 3. Pro mperometrické stnovení směsi nitrofenolů po jejich seprci pomocí RP-HPLC byl porovnán klsický tužkový typ leštěné stříbrné tuhé mlgmové elektrody (p- AgSAE) ve wll-jet uspořádání s nově připrvenou prcovní p-agsae komptibilní s komerčně dostupným tenkovrstvým průtokovým detektorem (BAS, USA). Tenkovrstvé uspořádání poskytuje v porovnání s wll-jet uspořádáním stbilnější signál s vyšší hodnotou poměru signál/šum 4. Zcel nově byly připrveny prcovní elektrody využívjící jko elektrodový mteriál krystl stříbrného mlgmu. Z něj byly připrveny mikrocylindrické stříbrné mlgmové elektrody, vhodné pro vsádková voltmetrická měření i v mikroobjemu. Krystl stříbrného mlgmu byl dále použit při konstrukci mikrocylindrické průtokové detekční cely, která byl úspěšně použit při mperometrickém stnovení směsi nitrofenolů po jejich předchozí seprci pomocí RP- HPLC. Tto práce vznikl z finnční podpory MŠMT ČR (LC 06035 nd MSM 0021620857) GAČR (203/07/1195) Grntovou genturou Univerzity Krlovy (projekt SVV 261204). 1. Yosypchuk B., Brek J.: Crit. Rev. Anl. Chem. 39, 189 (2009). 2. Yosypchuk B., Nvrtil T., Brek J., Peckov K., Fischer J., v knize: Progress on Drinking Wter Reserch (LeFebvre M. H., Roux M. M., ed.), kp. 4, s. 143. Nov Science Publishers, New York 2008. 3. Brek J., Dnhel A., Kdlcikov A., Kotkov Z., Obsil T., Silhn J.: Chem. Listy 103, 331 (2009). 4. Dnhel A., Shiu K. K., Yosypchuk B., Brek J., Peckov K., Vyskocil V.: Electronlysis 21, 303 (2009). 3S-02 AUTOMATIZOVANÁ ANALÝZA V SPÁJANÍ IZOTACHOFORÉZA-ZÓNOVÁ ELEKTROFORÉZA V KAPILÁRACH MIROSLAVA HALAŠIOVÁ, RÓBERT BODOR DUŠAN KANIANSKY Univerzit Komenského v Brtislve, Prírodovedecká fkult, Ktedr nlytickej chémie, Mlynská dolin, 842 15 Brtislv miroslv.hlsiov@fns.unib.sk Prác pojednáv o utomtizácii dvojdimenzionálneho (2D) režimu seprácie n báze spájni kpilárnych kolón pre izotchoforézu (ITP) so zónovou elektroforézou (CZE). Toto spojenie (ITP-CZE), doplnené o použitie diskrétnych spcerov (DS) pridávných do nlyzovných vzoriek, ponúk sepráciu detekciu nlytov obsihnutých v mnohozložkových zmesí látok. Súčsnou úlohou je tiež sprcovť väčší počet vzoriek pokryť prcovnú škálu pre c. 24 hodín denne. V nšej práci bol použitý prototyp utomtizovného elektroforetického nlyzátor so seprčnou jednotkou usporidnou pre techniku spájni kolón 1. V experimentoch bol použitá niónická modelová zmes (50 UV bsorbujúcich nlytov) vzorky moču. V 2D ITP(DS)-CZE seprácich sme študovli úlohu prostriedkov zvyšujúcich CZE rozlíšenie nlytov vrátne zbytkových zložiek mtrice. Ukázli sme, že pre 50 nlytov bolo rozpoznných 35 36 nlytov. Riziko tkéhoto prekryvu bolo eliminovné využitím 4 DS (vytvorenie 5 frkcií). Dobrá reprodukovteľnosť tohto prístupu bol opkovne preukázná. Tento prístup, využitie 2D seprácií, s dá povžovť z význmný nlytický nástroj pre sepráciu mnohozložkových zmesí v kpilárnej elektroforéze. Prirodzene, experimenty študovné pre 2D ITP(DS)-CZE sepárciu vzoriek moču vykzujú možnosti, ktoré boli typické pre seprácie modelovývh zmesí. Z nšej práce je logické konšttovť, že 2D ITP(DS)- CZE prístup je kľúčovým prostriedkom n zníženie rizik prekryvu seprovných látok (zníženie tzv. sturčného fktor, definovného Giddingsom). Inými slovmi, je to nástroj vhodný n sepráciu biologických vzoriek komplexného chrkteru. Dá s poznmenť, že prístup uvedený v tejto práci nebol doterz prezentovný. Prác bol podporená Slovenskou grntovou gentúrou VEGA (1/0672/09 1/0882/09), Slovenskou gentúrou pre výskum vývoj (VVCE-0070-07) Grntom Univerzity Komenského číslo UK/329/2009. LITERATÚRA 1. Kninsky D., Mrák J., Vváková V., Msár M., v knihe: Automted Cpillry Electrophoresis Anlyzer. Omeg Info, Brtislv 2004. 464
3S-03 ELEKTROFORETICKÉ STANOVENIE DUSIČNANOV A DUSITANOV V MOZGOVOMIECHOVOM MOKU NA ČIPE S VODIVOSTNOU DETEKCIOU MICHAL HORČIČIAK, RICHARD CHUDOBA b, MARIÁN MASÁR DUŠAN KANIANSKY Univerzit Komenského v Brtislve, Prírodovedecká fkult, Ktedr nlytickej chémie, Mlynská Dolin CH-2, 842 15 Brtislv, b Univerzit Krlov v Prze, Přírodoveděcká fkult, Ktedr fyzikální mkromolekulové chemie, Hlvov 8, 128 40 Prh 2 michl.horcicik@fns.unib.sk Cieľom práce bolo súčsné stnovenie dusičnnov dusitnov, produktov oxidácie oxidu dusntého, v mozgovomiechovom moku (CSF) metódou zónovej elektroforézy (CZE) n čipe s vodivostnou detekciou. Elektroforetické seprácie dusičnnov dusitnov boli vykonné n polymetylmetkrylátovom (PMMA) čipe so systémom spájni seprčných knálikov (CC) v hydrodynmicky uztvorenom seprčnom systéme s potlčením elektroosmózy. Seprácie boli uskutočnené v nosnom elektrolyte (ph 3,8 s prídvkom dodecyldimetylmmoniopropánsulfonátu, DDAPS), ktorý umožnil sepráciu dusičnnov dusitnov, zároveň dusičnnov chloridov, ktoré sú typickou mkrozložkou v CSF.. Použitím dávkovč o objeme 1 l boli získné detekčné limity pre dusičnny dusitny n úrovni 5-6 g l 1. Chloridy nchádzjúce s vo vzorkách CSF n veľmi vysokých koncentrčných úrovnich (cc 4500 mg l 1 ) znemožňovli stnovenie dusičnnov dusitnov (prekryv píkov), preto n ich odstránenie z finálneho seprčného systému pred nlýzou boli zvolené dv prístupy: (1) on-line ZE predúprv n CC čipe prcujúceho v CS režime (2) extrkčná predúprv (SPE) n báze IC-Ag mikrokolónok. Ob uvedené prístupy umožnili odstrániť cc 80 % chloridov z dávkovnej vzorky umožnili rýchle, reprodukovteľné citlivé stnovenie dusičnnov vo vzorkách CSF. Vzhľdom n veľmi nízke koncentrčné úrovne dusitnov v CSF (jednotky g l 1 ) je všk potrebné použiť vhodnú on-line lebo off-line prekoncentrčnú techniku n ich stnovenie (npr. izotchoréz v kombinácii so zónovou elektroforézou n CC čipe). Prác bol podporená grntovými gentúrmi VEGA (č. 1/0672/09) APVV (VVCE-0070-07). LITERATÚRA 1. Kninsky D., Msár M., Bodor R., Žúborová M., Ölvecká E., Jöhnck M., Stnislwski B.: Electrophoresis 24, 2208 (2003). 3S-04 ANALÝZA BIOLOGICÝCH VZORKŮ POMOCÍ LASEROVÉ DESORPCE ZA ÚČASTI SUBSTRÁTU VE SPOJENÍ S HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ S INDUKČNĚ VÁZANÝM PLAZMATEM PAVLA JUNGOVÁ, ONDŘEJ PEŠ, TOMÁŠ VACULOVIČ, JARMILA NAVRÁTILOVÁ b, JAN ŠMARDA b, VIKTOR KANICKÝ JAN PREISLER,b Ústv chemie, b Ústv experimentální biologie, Přírodovědecká fkult, Msrykov Univerzit, Kotlářská 267/2, 611 37 Brno pvl.jungov@gmil.com Lserová desorpce z účsti substrátu ve spojení s hmotnostní spektrometrií s indukčně vázným plzmtem (substrte-ssited lser desorption inductively-coupled plsm mss spectrometry, SALD ICP-MS) 1 je nová metod umožňující stnovení stopových ultrstopových prvků v submikrolitrových objemech biologických vzorků. N rozdíl od běžně používné metody lserové blce ICP-MS, SALD ICP-MS umožňuje kvntittivní nlýzu kovů v kplných vzorcích to díky kompletní desorpci vzorků o přesně definovném objemu (typicky 200 nl) nnesených n silně bsorbující substrát odpřených několik pulsy lserového záření o vlnové délce 213 nm při reltivně nízké hustotě zářivého výkonu lseru (10 100 MW cm 2 ). Byl proveden detilní chrkteristik metody n modelových vzorcích Cu zjištěn nezávislost ICP-MS signálu n hustotě zářivého výkonu lseru, n velikosti typu rstru, lineární rozsh přes 6 řádů nízké limity detekce (0,1 14 fmol pro Cr, Cu, Ni, Sn Zn). SALD ICP-MS byl úspěšně plikován n stnovení koncentrce měďntých iontů, které ovlivňují cytotoxicitu disulfirmu vůči buňkám myeloidní leukémie 2. Správnost SALD ICP-MS byl ověřen stnovením mědi v buňkách pomocí ICP-MS se zmlžováním, tto konvenční metod ovšem vyždovl příprvu řádově většího množství vzorku. Kromě toho mohou biologické vzorky jko jsou metlothioneiny být po přidání mtrice nlyzovány ze stejného substrátu pomocí hmotnostní spektrometrie s lserovou desorpcí/ionizcí z účsti mtrice (MALDI MS). Kombince technik SALD ICP-MS MALDI MS tk poskytne kompletní informce jk o obshu kovu tk o hmotnosti proteinu s minimální spotřebou vzorku. Tto práce vznikl z podpory Grntové gentury České republiky (grnt č. 203/09/1025) grntů Ministerstv školství, mládeže tělovýchovy (MSM0021622411, MSM0021622412 MSM0021622415). 1. Peš O., Jungová P., Vyhnánek R., Vculovič T., Knický V., Preisler J.: Anl. Chem. 80, 8720 (2008). 2. Nvrátilová J., Jungová P., Vňhr P., Preisler J., Knický V., Šmrd J.: Int. J. Mol. Med. 24, 661 (2009). 465
3S-05 MULTIMARKEROVÝ SCREENING TĚLNÍCH TEKUTIN PRO STANOVENÍ NEMOCÍ OXIDATIVNÍHO STRESU ADÉLA PANKRÁCOVÁ, KAMILA SYSLOVÁ PETR KAČER Ústv orgnické technologie, Vysoká škol chemickotechnologická, Technická 5, 166 28 Prh 6 del.pnkrcov@vscht.cz Sledování specifických molekul, tzv. biomrkerů produkovných orgnismem při ptologických procesech, je v dnešní době součástí moderní lékřské dignostiky. Běžně se setkáváme s nlýzou látek v krevní plzmě moči, méně čsto pk v mozkomíšním moku kondenzátu vydechovného vzduchu. Biomrkery oxidtivního stresu obsžené v těchto mtricích vznikjí neenzymtickou peroxidcí zákldních stvebních jedno-tek orgnismu rektivními kyslíkovými částicemi (ROS rective oxygen species). Mezi biomrkery poškození nukleových kyselin se řdí 8- hydroxygunosin, 8-hydroxy-2 -deoxygunosin 8-hydroxygunin, poškození bílkovin signlizují o-tyrosin nitrotyrosin. Biomrkery poškození fosfolipidových membrán (zejmén - 3-6 nensycených mstných kyselin) jsou 8-isoprostn ldehydy (mlondildehyd, 4-hydroxynonenl, 4-hydroxyhexenl C6-C13 ldehydy). Bylo zjištěno, že hldiny výše uvedených biomrkerů jsou oproti hldině fyziologické význmně zvýšeny v souvislosti s řdou závžných chorob. Mezi ně ptří npř. plicní onemocnění (chronická obstrukční plicní nemoc, rkovin plic, zbestóz, silikóz), neurodegenertivní onemocnění (Alzheimerov Prkinsonov chorob) onemocnění krdiovskulárního systému (infrkt myokrdu teroskleróz). Ačkoliv byl v nedávné době vyvinut řd metod pro stnovení biomrkerů oxidtivního stresu v tělních tekutinách byl prokázán možnost diferenciální dignostiky oxidtivního stresu, neexistuje do součsnosti stndrdizovný postup pro stnovení jejich koncentrčních hldin výsledky z různých prcovišť vykzují znčnou nesourodost. Mezi možné zdroje chyb při nlýze zmíněných biomrkerů lze zřdit jejich velice rychlou teplotní degrdci. Cílem předkládné zcel originální metody bylo postihnout kvntifikovt prmetry, které mohou být zdrojem v litertuře uváděných rozporuplných výsledků, vyprcovt protokol zprcování tělních tekutin pro stnovení biomrkerů oxidtivního stresu. K tomu byly použity metody n bázi stble-isotope dilution ssy hmotnostní spektrometrie kombinovné s předseprčními metodmi (SPE, přípdně imunofinitní extrkce). Vyvinutou metodu multimrkerového screeningu oxidtivního stresu lze chrkterizovt nízkým limitem detekce kvntifikce vysokou přesností, správností selektivitou. Vyvinutá metod byl testován v klinické studii, ve které byly sledovány hldiny biomrkerů u pcientů s nemocemi oxidtivního stresu kontrolní skupinou zdrvých osob. 3S-06 ANALÝZA SILIC V BYLINNÝCH NÁPOJÍCH S VYUŽITÍM TECHNIKY MIKROEXTRAKCE JEDNOU KAPKOU PETRA PAVLÍKOVÁ*, PETR DOBIÁŠ, MARTIN ADAM KAREL VENTURA Ktedr nlytické chemie, Fkult chemicko-technologická, Univerzit Prdubice, Studentská 573, 532 10 Prdubice pet.pvlikov@gmil.com Silice jsou složité směsi orgnických sloučenin obsžených v rostlinách. Vyskytují se prkticky ve všech částech (květy, plody, listy, stonky, kořeny...). Hlvní složkou silic jsou terpenové sloučeniny (monoterpeny seskviterpeny), které le většinou nemjí velký vliv n vůni chuť silic, protože nositelem těchto vlstností jsou hlvně kyslíkté sloučeniny (lkoholy, ldehydy, ketony, estery td.) 1,2. Silice jsou význmné především pro jejich pozitivní vliv n lidský orgnismus. Lidé využívli mnoho druhů bylin koření k léčení různých nemocí (npř. mát pro zžívání bolest hlvy, levndule má protizánětlivý nlgetický účinek, meduňk proti kšli, pelyněk pro zžívání, td.) 3. Nejčstěji používnými metodmi pro izolci silic z rostlin jsou destilce s vodní prou, lisování či extrkční metody. Avšk vzhledem k tomu, že silice jsou těkvé sloučeniny, je možné je nlyzovt po zkoncentrování nejen přímo z roztoku (DI), le tké z plynného prostoru nd vzorkem, tzv. hedspce (HS) technikou. K tomuto účelu se jko perspektivní jeví metod mikroextrkce jednou kpkou (SDME single-drop microextrction). SDME je proces zložený n ustvování rovnováhy mezi vzorkem, hedspce prostorem kpkou vhodného extrkčního rozpouštědl. Získný extrkt obshující zchycené sloučeniny je pk přímo nstříknut do nástřikového prostoru plynového chromtogrfu bez nutnosti zřzení desorpčního kroku 4. Práce se zbývá nlezením vhodných extrkčních podmínek, jko jsou dob extrkce, vhodné rozpouštědlo jeho objem, způsob vzorkování množství vzorku, pro izolci silic z bylinných nápojů. Pro nlýzu získných extrktů byl použit plynová chromtogrfie s plmenovým ionizčním detektorem. Dosžené výsledky byly porovnány s hodnotmi získnými nlýzou původních bylin metodou HS-SDME ve sttickém uspořádání. Projekt byl relizován díky finnční podpoře grntového projektu MŠMT ČR (projekt MSM 002162750). 1. Velíšek J.: Chemie potrvin 2. Osssis, Tábor 2002. 2. Hálková J., Rumíšková M., Riedlová J.: Anlýz potrvin. vydvtel RNDr. Ivn Strk, Újezd u Brn 2000. 3. Hjhshemi V., Sdrei H., Ghnndi A. R., Mohseni M.: J. Ethnophrmcol. 71, 187 (2000). 4. Zho E., Hn L., Juny S., Wng Q., Zhou Z.: J. Chromtogr., A 1114, 269 (2006). Tto práce vznikl z podpory Ministerstv zdrvotnictví ČR (Grnt NS 10298-3/2009). 466
3S-07 SEPARACE METALOPROTEINŮ V NATIVNÍM STAVU METODOU RP-HPLC SE STACIONÁRNÍ FÁZÍ NA BÁZI MONOLITU MARKÉTA PROCHÁZKOVÁ, JAN HAVLIŠ VIKTOR KANICKÝ Ústv chemie, Msrykov univerzit, Kotlářská 2, 611 37 Brno mrky.prochzkov@centrum.cz Metloproteiny kov vážící proteiny jsou důležitou součástí velkého množství biochemických procesů, jko jsou npříkld trnsport kyslíku, fotosyntéz, respirční procesy (redoxní rekce), jsou známé jko kofktory DNA RNA polymers fungují i jko metbolické enzymy (P450) 1. Díky rozmnité struktuře velkému množství funkcí těchto látek jsou tyto proteiny jejich nlýz stále v popředí zájmu bionlytiky. Jednou z podmínek úspěšného studi těchto proteinů je jejich seprce. Denturce struktury během seprce je většinou nežádoucí, neboť dochází k uvolňování kovové specie, proto se stále hledjí vhodné stcionární fáze. Nově se upltňuje využití monolitických stcionárních fází 2. Byl nvržen metod seprce směsi metloproteinů pomocí techniky HPLC s reverzní (RP) monolitickou (MP) stcionární fází (C8). Nvrženou metodou byl úspěšně nlyzován modelová směs dvou metloproteinů (cytochrom c, myoglobin) ve směsi s kov vážícím proteinem BSA (hovězí sérový lbumin). Metod poskytuje vysokou účinnost seprce jednotlivých složek směsi (viz obr.) reprodukovtelné výsledky, n rozdíl od metod s použitím reverzní částicové stcionární fáze C8. Součsně jsou prováděny pokusy pro offline spojení této metody seprce s metodou ICP-MS, sloužící k detekci kovů obsžených ve struktuře metloproteinů. Výzkum by měl vést k nvržení on-line spojení RP-HPLC(ML)- ICP-MS jko nové metodiky studi komplexů kov-protein. 1. Wörle D., Pomogilo A. D.: Metl complexes nd metls in mcromolecules. Wiley, 2003. 2. Švec F., Tennikov T. B., Deyl Z.: Monolithic mterils, preprtion, properties nd pplictions. Elsevier, 2003. 3S-08 ÚLOHA MATRICE PRI ANALÝZE ORGANICKÝCH LÁTOK V HMOTNOSTNEJ SPEKTROMETRII SEKUNDÁRNYCH IÓNOV MONIKA STUPAVSKÁ, MONIKA ARANYOSIOVÁ,b DUŠAN VELIČ,b Ktedr fyzikálnej teoretickej chémie, Prírodovedecká fkult Univerzit Komenského, Mlynská dolin, 842 15 Brtislv, b Medzinárodné lserové centrum, Ilkovičov 3, 841 04 Brtislv stupvsk@fns.unib.sk Hmotnostná spektrometri sekundárnych iónov (SIMS) je nlytická technik používná n určenie chemického zloženi povrchov mteriálov, pričom nároky n druh chrkter týchto mteriálov sú minimálne. Pôvodne bol táto technik koncipovná pre potreby polovodičového priemyslu, všk v súčsnej dobe možno sledovť obrovský progres SIMS plikácií v oblsti orgnických biologických mteriálov. SIMS metód je zložená n procese, kde sekundárne ióny, vzniknuté pri bombrdovní povrchu pevnej látky primárnymi iónmi, sú extrhovné jednotným npätím, s rovnkou kinetickou energiou seprovné podľ doby letu ToF SIMS (Time of Flight). Tvorb tkýchto čstíc je všk zložitý proces už v prípde tomárnych sekundárnych iónov, tým vic v prípde veľkých orgnických sekundárnych iónov. Z tohto dôvodu predstvuje množstvo emitovných sekundárnych iónov iónový výťžok kľúčový prmeter SIMS nlýzy. Ten závisí od vicerých fktorov, všk njväčší vplyv má mtricový efekt, čo je závislosť iónového výťžku od chemického prostredi, z ktorého sú ióny vyrážné. Tento fktor výrzne zváži predovšetkým pri nlýze orgnických biologických mteriálov, kde mjú prejvy mtricového efektu oveľ komplexnejší chrkter ko pri polovodičových vzorkách. A práve z týchto dôvodov je mtricový efekt veľmi pálčivou témou, nkoľko súčsné BIO zmernie SIMS nlýz (BIO-SIMS) si vyžduje citlivú odozvu n veľké mkromolekulové systémy. Mtricový efekt bude demonštrovný n mtricich n báze uhlík, norgnických solí nnočstíc, pričom dôrz s kldie n topogrfiu mtrice geometrický fktor n smotnú chemickú povhu týchto látok. Mtrice budú diskutovné z hľdisk efektivity tvorby orgnických sekundárnych iónov. Optimlizáci mtríc z chemického geometrického hľdisk predstvuje koncepčne nový prístup, ktorý poskytuje elegntné komplexné riešenie otázky zvyšovni citlivosti BIO- SIMS nlýz, nkoľko získné pozntky sú zužitkovné pri vývoji nového typu mtrice vhodnej pre SIMS nlýzy látok s vysokou molekulovou hmotnosťou. Táto prác bol vytvorená relizáciou projektu "met-qute: Centrum excelentnosti kvntových technológií", n záklde podpory operčného progrmu Výskum vývoj finncovného z Európskeho fondu regionálneho rozvoj tiež grntu APVV-0491-07. 467
3S-09 PŘÍPRAVA MAGNETICKÝCH ČÁSTIC PRO SEPARACI BIOMARKERŮ Z TĚLNÍCH TEKUTIN KATEŘINA ŠIMKOVÁ, KAMILA SYSLOVÁ PETR KAČER Ústv orgnické technologie, Vysoká škol chemickotechnologická Prh, Technická 5, 166 28 Prh 6 kterin.simkov@vscht.cz Včsná dignostik onemocnění hrje důležitou roli z hledisk zhájení terpie minimlizce poškození orgnismu pcient. Moderní medicín využívá k dignostice pcientů měření hldin látek, které jsou pro dné procesy chrkteristické (tzv. biomrkery ). Nejčstěji se provádí rozbor krve moči, výjimečný není ni rozbor mozkomíšního moku. Poměrně novou vyšetřovcí metodu plicních onemocnění předstvuje nlýz kondenzátu vydechovného vzduchu (KVV), jehož složení koresponduje s ději odehrávjícími se bezprostředně v plicích dýchcích cestách. Velkou výhodou odběru KVV je, že je zcel neinvzivní pro pcient neztěžující, neboť dosvdní metody vyšetření jsou velmi čsto invzivní (bronchiální biopsie, broncholveolární lváž) nebo semiinvzivní povhy (metod indukovného sput) mohou být pro pcient ztěžující nepříjemné, u dětí seniorů mohou předstvovt ž stresovou záležitost. Princip nlýzy kondenzátu vydechovného vzduchu spočívá v kvntifikci látek specifických pro určitá konkrétní onemocnění, jejichž koncentrční hldin je v důsledku probíhjícího ptologického procesu v dýchcích cestách plicích význmně zvýšen. Předkládná práce se zbývá vývojem dignostické molekulární sondy, jejímž principem je mgnetická nnočástice s nváznou monoklonální protilátkou proti cysteinylovným leukotrienům (cyslts = LTC 4, LTD 4, LTE 4 ). Cysteinylovné leukotrieny vznikjí v těle enzymtickými pochody z kyseliny rchidonové, přičemž jedinci s onemocněním Asthm bronchile mjí jejich hodnoty výrzně zvýšeny oproti jejich fyziologickým koncentrčním hldinám, což umožňuje jejich využití pro účely diferenciální dignostiky uvedeného onemocnění. Principem seprce z komplexní biologické mtrice (KVV, moč, krevní plzm d.) je vysoce specifická tvorb komplexu ntigen-protilátk n povrchu připrvené mgnetické nnočástice. Pro seprci n povrchu nnočástice vytvořeného komplexu ntigen-protilátk je využito externího mgnetického pole. Byl vyprcován protokol příprvy, chrkterizce (TEM, XRD, AFM d.) klinického využití mgnetických nno-částic pro rychlou dignostiku monitoring průběhu bronchiálního záchvtu, přípdně pro sledování účinnosti frmkoterpie. Uvedená seprční metod byl použit v kombinci s vysoce selektivní citlivou metodou LC-ESI- MS/MS (MRM mód, izotopické ředění). Vyvinutá metod je chrkterizovtelná vysokou citlivostí, nízkou chybou stnovení (< 9 %) možností vícenásobného použití připrvené molekulární sondy. Tto práce vznikl z podpory Ministerstv zdrvotnictví ČR (Grnt NS 10298-3/2009). 3S-10 VÝVOJ METODY UHPLC-MS/MS A MIKRO- EXTRAKCE NA TUHÉ FÁZI PRO STANOVENÍ ATORVASTATINU A JEHO DERIVÁTŮ V BIOLOGICKÉM MATERIÁLU HANA VLČKOVÁ, MILAN BLÁHA b PETR SOLICH Ktedr nlytické chemie, Frmceutická fkult, Univerzit Krlov, Heyrovského 1203, 500 05 Hrdec Králové, b 2. Interní klinik, Univerzit Krlov Fkultní nemocnice, Sokolská 408, 500 05 Hrdec Králové hn.vlckov@ff.cuni.cz Atorvsttin ptří do skupiny hypolipidemik, které se nzývjí sttiny. Snižují hldinu celkového cholesterolu, triglyceridů LDL (low density lipoprotein) cholesterolu. Cílem bylo vyvinout vlidovt UHPLC-MS/MS metodu pro stnovení torvsttinu jeho derivátů v biologickém mteriálu zároveň nlézt optimální postup úprvy vzorků. Vyvinutá metod bude používán pro rutinní hodnocení velkého množství vzorků, proto jedním z hlvních poždvků je čsová nenáročnost. Jko příprv vzorků byl zvolen mikroextrkce n tuhé fázi, MEPS (microextrction by pcked sorbent). Jedná se o novou miniturizovnou extrkci n tuhé fázi pomocí jehly stříkčky. Mezi jehlou stříkčkou je umístěn zásobník s 1 2 mg sorbentu. V součsné době jsou komerčně dostupné sorbenty n zákldě modifikovného silikgelu C2, C8, C18 sorbent M1 (směs C8 SCX). Byly nlezeny vhodné podmínky UHPLC-MS/MS MEPS metody příprvy vzorků pro stnovení torvsttinu jeho derivátů. Byl zvolen nlytická kolon Acquity UPLC BEH C18 (1.7 m, 2.1 100 mm), mobilní fáze směs cetonitrilu 0,5 mm pufru octnu monného ph 4,0 s průtokem 0,25 ml min 1 grdientovou elucí. Jko ionizční technik byl užit ionizce elektrosprejem v pozitivním módu. Byly optimlizovány jednotlivé prmetry ESI trojitého kvdrupólu. Pro dosttečnou spolehlivost dné metody byly nlyty měřeny n dvou SRM (selected rection monitoring) přechodech. Mikroextrkce byl proveden pomocí sorbentu C8. Bylo nsáto 50 l vzorku eluce nlytů byl proveden 100 l směsi cetonitril: 0,1 M pufr octnu monného ph 4,5 (95: 5, v: v). Vyvinutá metod byl vlidován. Výsledky vlidce jsou: linerit (r 2 > 0.9990), přesnost (RSD= 1,43 9,78 %), správnost (87 118 %), LOD (0,03 0,19) LOQ (0,15 0,57). Celkový čs příprvy vzorku se snížil třikrát, to n 7 min, což už je dob srovntelná s délkou vlstní UHPLC- MS/MS nlýzy. Použitý objem vzorku byl snížen dvcetkrát množství rozpouštědel desetkrát. Z těchto důvodů MEPS nhrdil dříve používnou čsově náročnou SPE metodu jeví se jko vhodná pro úprvu biologického mteriálu. Nově vyvinutá metod bude používán zejmén pro monitorování hldin torvsttinu jeho derivátů u pcientů s fmiliární hypercholesterolémií lečených vysokými dávkmi torvsttinu součsně pomocí extrkorporálních eliminčních procedur budou stnoveny celkové ztráty sttinu během procedůry, což umožní individuální úprvu frmkoterpeutického režimu. Poděkování IGA NR/9103-4 MSM 0021620822. 468