Havarijní plán pro uzavřené nakládání s GMO



Podobné dokumenty
Školení GMO Ústav biochemie a mikrobiologie

Oznámení o uzavřeném nakládání s GMO 2011, MENDELU Brno Příloha č. 6. Provozní řád biotechnologického pracoviště

Havarijní plán pro práci s geneticky modifikovanými mikroorganismy Mikrobiologický ústav AV ČR

Informace o havarijním plánu

Havarijní plán PřF UP

Školení GMO Ústav biochemie a mikrobiologie

Školení GMO Ústav biochemie a mikrobiologie

Havarijní plán. (podle 2, vyhlášky č.399/2005 Z.z.)

Příloha č. 1 Žádosti

Školení o práci s GMO

Školení o práci s GMO

Metodika kontrol uzavřeného prostoru při nakládání s geneticky modifikovanými mikroorganismy. Školení pracovníků

1. Obecné informace Evropské číslo oznámení (viz databáze SNIF na B/CZ/09/ Oprávněná osoba: Ing.

Rizika přípravy GMO. B. Šíření GMO mimo vyhrazený prostor (laboratoř, životní prostředí pole, vodní plochy ) vliv na ekosystém, ovlivnění biodiverzity

Provozní řád firmy AGRITEC, výzkum, šlechtění a služby s.r.o. pro uvádění GM lnu FAD2-i do životního prostředí

ŽD M-Sm 1 HAVARIJNÍ PLÁN. Účinnost od Vypracoval / dne: Karel Mičunek / Podpis:

ZPRÁVA O VÝSLEDCÍCH UVÁDĚNÍ GENETICKY MODIFIKOVANÝCH VYŠŠÍCH ROSTLIN DO ŽIVOTNÍHO PROSTŘEDÍ podle 18 odst. 9 zákona č. 78/2004 Sb.

Klonování DNA a fyzikální mapování genomu

MASARYKOVA UNIVERZITA PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE

Smluvní podmínky k zajištění požární ochrany uživateli bytů.

VZOROVÉ OTÁZKY Otázka 1: Profesionálním uživatelem přípravků na ochranu rostlin je osoba, která:

Desinfekce a sterilizace. MUDr. Lenka Černohorská, Ph.D.

Mendelova genetika v příkladech. Transgenoze rostlin. Ing. Petra VESELÁ, Ústav lesnické botaniky, dendrologie a geobiocenologie LDF MENDELU Brno

Propojení výuky oborů Molekulární a buněčné biologie a Ochrany a tvorby životního prostředí. Reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/

V Praze dne 11. července 2008 K čj.: 24722/ENV/08 Čj.: 51699/ENV/08. R o z h o d n u t í

Molekulární biotechnologie č.12. Využití poznatků molekulární biotechnologie. Transgenní rostliny.

Oznámení o rozšíření uzavřeného nakládání s GMO první a druhé kategorie rizika. Díl 1 VŠEOBECNÉ NÁLEŽITOSTI OZNÁMENÍ

VZOROVÉ OTÁZKY Otázka 1: Profesionálním uživatelem přípravků na ochranu rostlin je osoba, která:

Geneticky modifikované potraviny a krmiva

GLOBALGAP- OVOCE A ZELENINA. (FV- FRUIT AND VEGETABLES ČESKÁ VERZE V 3.0-2_Sep07) část B

Bezpečnost a ochrana zdraví; Zdravotní pojištění, zdravotní péče Normy:

Pravidla o bezpečnosti, ochraně zdraví a ochraně životního prostředí při práci s vybranými chemickými látkami a chemickými přípravky

Optimalizace metody PCR pro její využití na vzorky KONTAMINOVANÝCH PITNÝCH VOD

GLOBALGAP - ROSTLINNÁ PRODUKCE (CB- CROP BASE ČESKÁ VERZE V 3.0-2_Sep07) část A

333/2004 Sb. VYHLÁŠKA ze dne 4. května o odborné způsobilosti na úseku rostlinolékařské péče

Hygiena a sanitace potravinářských výrob. Aneta Hniličková Tereza Matějcová

Omezení rizik přípravků na ochranu rostlin v povolovacím řízení Konference k problematice pesticidů Ministerstvo zemědělství

Dokumentace o začlenění do kategorie činností se zvýšeným požárním nebezpečím a s vysokým požárním nebezpečím obsahuje:

Škola jako centrum celoživotního učení další vzdělávání maloobchodních prodejců CZ.1.07/3.2.05/

OBECNÁ MIKROBIOLOGIE MIKROBIOLOGICKÁ LABORATOŘ. Petra Lysková [1]

s geneticky modifikovanými organismy a genetickými

Havarijní plánování. Přednáška (5/5) v rámci předmětu Havárie a životní prostředí

Sterilizace ve vojenských zdravotnických zařízeních legislativa versus realita

Použití transgenoze při šlechtění rostlinje třeba se obávat?

Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/

VÝMĚNA ROZVODŮ VODY A KANALIZAČNÍCH STOUPAČEK BUZULUCKÁ 2354 TÁBOR

Návod pro efektivní dekontaminaci pracovišť s cytotoxickými léčivy

TECHNIK OCHRANY OBYVATELSTVA STUDIJNÍ MATERIÁL: KRIZOVÉ ŘÍZENÍ

Národní norma zdravotní nezávadnosti potravin Správná výrobní praxe pro mléčné výrobky

ADRESÁT: V Praze dne Č.j.: Vyřizuje: Tel.:

Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení

ZÁKLADY BEZPEČNOSTI A OCHRANY ZDRAVÍ PŘI PRÁCI V LABORATOŘI

Požadavky mezinárodních norem na využití přídatných látek. Ing. N. Kulišťáková Cahlíková, Ph.D. Dr. Ing. Leona Petrová Ing.

Propojení výuky oborů Molekulární a buněčné biologie a Ochrany a tvorby životního prostředí. Reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/

Problematika dialyzovaných pacientů s MRSA

Čisté prostory ZZ aneb sledování kvality prostředí jako prevence infekcí spojených se zdravotní péči

PROBLÉMY ŽIVOTNÍHO PROSTŘEDÍ PŮDA

BIO-BEZPEČNOST při lovu prasete divokého v zamořené oblasti (zelená s nižším rizikem)

Krajská hygienická stanice Libereckého kraje se sídlem v Liberci Husova tř. 64, Liberec 1, P.O.Box 141

BIO-BEZPEČNOST při lovu prasete divokého v zamořené oblasti (zelená s nižším rizikem)

Příprava vektoru IZOLACE PLASMIDU ALKALICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLACE DNA GELOVÁ ELEKTROFORÉZA RESTRIKČNÍ ŠTĚPENÍ. E. coli. lyze buňky.

Zvládání radiační mimořádné události. Helena Chudá Odbor krizového řízení a informatiky

Sekce lesního hospodářství Odbor hospodářské úpravy a ochrany lesů

Organizace a kontrola pěstování GM plodin v ČR. Ing. Jana Trnková MZe, odbor rostlinných komodit

Nové směry v rostlinných biotechnologiích

Oznámení o uzavřeném nakládání s geneticky modifikovanými organismy první a druhé kategorie rizika

POKYNY BOZP a EMS pro PŘEPRAVNÍ SPOLEČNOSTI

Důležité upozornění! Přípravky na ochranu rostlin Vaztak Les a Vaztak Active patří mezi takové biocidy.

PROVOZNÍ ŘÁD. Zařízení ke sběru a výkupu odpadů. SBĚRNÝ DVŮR ODPADŮ Město Albrechtice, ul. Hašlerova, PSČ

Bariérová ošetřovatelská péče.

1. Indráková Vanda Změna č.1 na listech č. 1, 3, 4,

Microbiology of food and animal feeding stuffs - General rules for microbiological examinations

ADRESÁT: Křížkovského 8, Olomouc. R o z h o d n u t í. r o z h o d l o

Obecná legislativa k ochraně životního prostředí. Zákon č. 17 / 1992 Sb., o životním prostředí, ve znění zákona č. 123/1998 Sb.

Tkáňové kultury rostlin. Mikropropagace

Krajská hygienická stanice Pardubického kraje se sídlem v Pardubicích. Hygiena povrchů, předmětů, instalací a zařízení ve školních jídelnách

DYNEX nabízí komplexní řešení v oblasti zpracování a analýzy biologických materiálů pomocí molekulárně biologických metod.

TŘINECKÉ ŽELEZÁRNY,a.s. Vysoké pece Integrované povolení čj. MSK 97969/2006 ze dne , ve znění pozdějších změn

MINISTERSTVO ŽIVOTNÍHO PROSTŘEDÍ PRAHA 10 VRŠOVICE, Vršovická 65

Konečná zpráva hodnocení různých způsobů přípravy vzorků pro AMPLICOR HPV test firmy Roche

ÚLOHA HASIČSKÉHO ZÁCHRANNÉHO SBORU ČR PŘI LIKVIDACI HAVÁRIÍ

Bezpečnostní list pro CAST 2000 ELISA BH-EK-CAST, BH-EK-CAST5

Nebezpečí infekce. Zpracoval: Ondráček Zdeněk 2008

Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a Státním rozpočtem ČR InoBio CZ.1.07/2.2.00/

Bezpečnostní list Podle nařízení (ES) č. 1907/2006 Datum vydání: Strana 1 ze 5

Plán odstranění odpadů vzniklých při mimořádné události

Příloha č. 1 opatření děkana č. 21/ Hodnocení rizik

Mlýnská 930/8, Blansko. Návod k použití. Dezinfekční zařízení GERMID. Typy: V015, V025, V030, V055

A B C D nedefin. nedefin.

IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)

STUDIE GENOMON VÝSKYT GENETICKY MODIFIKOVANÝCH POTRAVIN V TRŽNÍ SÍTI V ČR V ROCE M. Mendlová, V. Ostrý, J. Ruprich

PRŮZKUM V OBLASTI PŘÍPRAVY CYTOSTATIK

Monitoring cizorodých látek

NÁVOD PRO STANOVENÍ ŽIVOTASCHOPNÝCH MIKROORGANISMŮ V BIOAEROSOLECH MONITORING VNITŘNÍHO PROSTŘEDÍ V MATEŘSKÝCH ŠKOLKÁCH 2016

čl. 1 Základní ustanovení

Datum: , revidováno , , , ,

P O H O T O V O S T N Í P L Á N pro případ vzniku nebezpečné nákazy (část II)

Nemocniční hygiena a kvalita. RNDr. Renata Podstatová Úsek hygieny FN Ostrava

PCR IN DETECTION OF FUNGAL CONTAMINATIONS IN POWDERED PEPPER

SRS - správní úřad rostlinolékařské péče s působností na území ČR

Transkript:

Havarijní plán pro uzavřené nakládání s GMO Název, právní forma sídlo a identifikační číslo uživatele: Mendelova univerzita v Brně Sídlo: Zemědělská 1, 613 00 Brno Právní forma: Veřejná vysoká škola IČO: 62156489 DIČ: CZ 62156489 Jméno, příjmení a trvalý pobyt statutárního zástupce: Prof. Ing. Jaroslav Hlušek, CSc. Nesvačilka 49, 664 54 Těšany Tel.: 545 135 004 Fax: 545 211 938 E-mail: rektor@mendelu.cz Odborný poradce Pavel Hanáček, ing., Ph.D.. Bydliště: Jasanová 34, 678 01 Blansko Tel.: 545 133 343 Adresa: MENDELU, Zemědělská 1, 61300 Brno e-mail: hanacek@mendelu.cz Osoby zodpovědné za likvidaci havárie: Ústav biologie rostlin ing. Pavel Hanáček, CSc. Jasanová 34, 678 01 Blansko tel.: 545 133 343 E-mail: hanacek@mendelu.cz Ústav molekulární biologie a radiobiologie Mgr. Přemysl Souček Vaculíkova 4 638 00 Brno E-mail: premas@sci.muni.cz Ústav pěstování, šlechtění rostlin a rostlinolékařství RNDr. Ludmila Holková Alšova 5, 679 61 Letovice Tel.: 545133136 E-mail: holkova@mendelu.cz Ústav morfologie, fyziologie a genetiky zvířat Mgr. Zuzana Vykoukalová, Ph.D. Klímova 20, 616 00 Brno tel.: 545 133 379 E-mail: zuzana.vykoukalova@mendelu.cz Ústav lesnické botaniky, dendrologie a geobiocenologie 1

Dr. Ing. Jaroslav Mráček Soběšická 866, 66401 Bílovice nad Svitavou tel.: 545 134 053 E-mail: mracekj@seznam.cz Mendeleum - ústav genetiky, Valtická 337, Lednice Ing. Michal Jelínek 792 01 Razová 415, okr. Bruntál tel.: 519 367 318 E-mail: ing.michal.jelinek@seznam.cz a) Adresa pracoviště: Mendelova univerzita v Brně Zemědělská 1, 613 00 Brno v případě pracoviště Mendeleum - ústav genetiky Valtická 337, Lednice b) Přesné označení pozemků, prostor a zařízení, v němž se s geneticky modifikovanými organismy nakládá, spolu s přesným uvedením místa, kde se tyto pozemky, prostory nebo zařízení nacházejí: Pro uzavřené nakládání s GMO byly vyčleněny laboratoře C - P1057, P1057a, P1058, P1081, P1084, P1086, P1041, P1042, N5019, F - N2018, A N3058, N4115, B N6060, N6061, N6062, N6063, LD/N1002 přípravny C - P1042, P1003 (parní sterilizátory o obsahu 50, 80 a 100 l) a F - N2016 (parní sterilizátor), kultivační místnost pro kultivaci rostlinného materiálu in vitro a in vivo C - P1027, P1031, P1002 a F - N2019a a jedna skleníková kóje v LD01 a druhá v pavilonu F N2025 (plánek viz Příloha 8). Mikrobiologické a molekulárně biologické laboratoře, C - P1057, P1057a, P1058, P1081, P1084, P1086, N5019 a F - N2018, jsou určeny pro manipulace s bakteriemi a GM rostlinným materiálem k transformačním experimentům. Probíhá zde příprava a množení kmenů bakterií E. coli, A. tumefaciens nesoucích rekombinantní vektory pro přípravu transgenních rostlin, dále příprava rostlinných explantátů, transformace kokultivací s A. tumefaciens, pasážování, přesazování a likvidace GM rostlin. Izolace DNA a RNA pro analýzu transgenních rostlin. Pro tyto práce jsou místnosti vybaveny flow-boxem třídy Biohazard, spektrofotometrem, odstředivkou, temperovanou třepačkou, sterilizátorem. Dále jsou v místnostech C - P1027, P1031, P1002 a N5019 klimatizované skříně s řízenou vlhkostí Climacell a Percival, pro převod rostlin z in vitro do ex vitro podmínek. Laboratoře v pavilon A N3058, N4115 a B - N6060, N6061, N6062, N6063 jsou určeny převážně pro manipulace s bakteriemi. Probíhá zde příprava a množení kmenů bakterií E. coli, nesoucích rekombinantní plazmidy. Pro tyto práce jsou místnosti A N3058, N4115 vybaveny flow-boxem, spektrofotometrem, odstředivkou, temperovanou třepačkou, kultivačním boxem a parním sterilizátorem (pavilon A obsah 21 l, pavilon B obsah 120 l), v budově B je parní sterilizáor umístěn v místnosti N3011. V laboratoři pracoviště Mendeleum, Valtická 337, Lednice probíhají práce s GM révou v místnosti LD08/N1002 vybavené laminárním boxem, biohazard boxem, horkovzdušným sterilizátorem a kultivačním boxem. Parní sterilizátor se nachází v budově v místnosti N1021 (obsah 260 l). K inaktivaci GM materiálů slouží parní sterilizátory umístěné v místnostech F - N2016 a C - P1042, A N3058, B - N3011 a LD08/N1021. Materiály jsou do nich přenášeny v přepravních kontejnerech nebo pytlích v přepravních kontejnerech umístěných. Kapacity těchto parních sterilizátorů jsou dostatečné, aby v případě rozsáhlé havárie mohly inaktivovat 2

všechny GMO, které se aktuálně na pracovištích nacházejí (max. litry bakterálních kultur, max. tisíce rostlin huseníčku a max. stovky ostatních druhů rostlin). Pro kultivaci explantátů po transformaci jsou určeny kultivační místnosti C - P1027, P1031, P1002, N5019 a F - N2019a. V těchto samostatných uzamykatelných místnostech jsou klimatizační jednotky a řízení světelného režimu. Pro dopěstování aklimatizovaných GM rostlin jsou určeny skleníkové kóje LD01 a F N2025, oddělený prostor dle plánku, opatřená izolátory proti vniknutí hmyzu a hlodavců. Transport materiálu mezi jednotlivými místnostmi v rámci pavilonu F a LD na vzdálenosti do 50 m je prováděn ve speciálních uzavřených nádobách (kontejnerech) k tomu určených a označených. Plánky prostor a umístění nejdůležitějšího zařízení (Příloha 8). c) Plán pracoviště s označením míst významných pro omezení následků havárieovladače přívodu energií a bezpečnostní prvky uzavření prostoru: Je nedílnou součástí tohoto havarijního plánu - Příloha č. 8. Pavilon C Hlavní vypínače elektrické energie jsou na chodbě v suterénu jeden ve vstupním vestibulu ústavu a jeden v chodbě za zadní hygienickou smyčkou (místa vyznačena v plánku, Příloha 8.3a) a v 5. podlaží (4. poschodí) (plánek v Příloze 8.2d). Hlavní uzávěr vody je ve stejném podlaží jako laboratoře na opačném konci chodby před místností C-P1013 (místo vyznačeno v plánku, Příloha 8.3b). Hlavní uzávěr plynu je vně Pavilonu C v blízkosti zadního vchodu (Příloha 8.2f). Všechny prostory určené k práci s GMO jsou uzavřeny zámkem, klíče mají pouze osoby proškolené pro práci s GMO, většina laboratoří je na chodbě, která je oddělena hygienickou smyčkou. Pavilon F Hlavní vypínač elektrické energie je po pravé straně hned za vstupem do Pavilonu F (Příloha 8.2a). Hlavní uzávěr vody je v suterénu budovy pod stropem hlavní chodby (místo vyznačeno v plánku, Příloha 8.2a). Hlavní uzávěr plynu je zvenčí budovy a jeho umístění je vyznačeno na plánku (Příloha 8.2a). Všechny prostory určené k práci s GMO jsou uzavřeny zámkem bez kliky, klíče mají pouze osoby proškolené pro práci s GMO. Pavilon A Hlavní vypínač elektrické energie pro laboratoř N3058 v pavilonu A je umístěn na stejném patře na protější straně chodby asi 5 m vpravo od vstupu do laboratoře. Hlavní uzávěry vody a plynu se nacházejí ve vedlejší místnosti N3057. Místa jsou vyznačena v plánku (Příloha 8.4a). Laboratoř N4115 nemá přívod vody ani plynu. Hlavní uzávěr elektrické energie se nachází na chodbě (Příloha 8.4c). Všechny prostory určené k práci s GMO jsou uzavřeny zámkem, klíče mají pouze osoby proškolené pro práci s GMO. Pavilon B Hlavní vypínače elektrické energie pro laboratoře N6060, N6061, N6062 a N6063 se nacházejí na chodbě (Příloha 8.5b). Všechny prostory určené k práci s GMO jsou uzavřeny zámkem, klíče mají pouze osoby proškolené pro práci s GMO. Pracoviště Mendeleum, Valtická 337, Lednice Hlavní vypínače elektrické energie pro laboratoř se nachází na vně budovy (Příloha 8.6a). Všechny prostory určené k práci s GMO jsou uzavřeny zámkem, klíče mají pouze osoby proškolené pro práci s GMO. d) Popis havárie, která může vzniknout v prostorách nebo místě, kde probíhá uzavřené nakládání s geneticky modifikovanými organismy: Havárie je závažný neplánovaný únik GMO mimo bariéry. V takovém případě je třeba neprodleně učinit opatření k likvidaci havárie. Každé nakládání s GMO je zařazeno do určitého typu rizika a posouzení havárie závisí na tomto typu rizika. V případě nakládání 3

s GMO I. kategorie rizika při uniknutí GMO mimo bariéry nebezpečí nehrozí a uniklé GMO je možno likvidovat postupem v laboratoři běžným, jak je uvedeno níže. Každou havárii je nutné neprodleně oznámit rektorovi univerzity a odbornému poradci. Za havárie ve vlastním slova smyslu se nepovažují úniky GMO, při nichž je možné uniklé GMO spolehlivě likvidovat v rámci uzavřeného prostoru. Za obvyklých podmínek lze následky havárie v tomto uzavřeném prostoru zcela bezpečně zlikvidovat. Za havárii je však nutno považovat rozšíření GMO mimo prostory určené pro uzavřené nakládání. K havárii může dojít při přepravě GMO materiálu v rámci budov MENDELU Brno nebo při přepravě tohoto materiálu z jednoho prostoru uzavřeného nakládání s GMO do jiného. V prostorách pro uzavřené nakládání MENDELU Brno je možné rozeznávat tyto typy havárií: 1. Při rozlití mikrobiální kultury obsahující plazmidovou DNA: Zasažené místo je třeba s použitím ochranných rukavic vysušit, odpad zlikvidovat autoklávováním a místo ošetřit v dostatečném rozsahu dvěma typy desinfekčních roztoků: např. Ajatinem a následně roztokem SAVO (příp. chloraminem). 2. Při rozbití skleněné či jiné kultivační nádoby s kulturami in vitro obsahující transgenní rostliny a bakterie: Postup je stejný jako v předchozím případě. Riziko představují pouze bakterie, protože agarové aseptické kultury rostlin nejsou schopny okamžitého přechodu do nesterilních podmínek a hynou. Výjimku mohou tvořit rostliny nasazující semena. V těchto případech je nutná dekontaminace rostlinného materiálu dle návodu v odst. 3. 3. Při rozšíření semen nebo vegetativních částí schopných samostatného rozmnožování je především třeba zabránit možnosti odplavení nebo odnesení částí rostlin na obuvi, oděvu nebo nástrojích. Zemina u níž je podezření, že by mohla obsahovat části GMO rostlin schopných samostatného rozmnožování musí být vyautoklávována. Celý prostor musí být vyluxován a omyt desinfekčním roztokem. Květináče a ostatní potřeby pro kultivaci je třeba umývat v roztoku chlornanu v plastové vaně. Po 24 hodinách je možno roztok zlikvidovat vylitím do komunálního odpadu. Obsah sběračů nečistot (sítka ve výlevkách, prachový filtr) je nutno sterilizovat autoklávováním a vlastní tělesa a sifony ošetřit desinfekčním roztokem. Vždy je třeba zvážit vhodnost a účinnost použití roztoku herbicidu k asanaci celého kultivačního prostoru. V zasažené a fyzikálními bariérami oddělené sekci prostoru (skleníkové kóji) nesmí být po dobu 1 roku pěstovány rostliny druhu totožného s druhem, který je příčinou havárie. Prostor musí být po tuto dobu monitorován. V případě výskytu rostlin druhu totožného s uniklým je třeba v monitorování pokračovat po další rok. Nelze předem vyčerpávajícím způsobem uvést všechny možnosti typů havárií. V případě typů odlišných od zde popsaných je nutno postupovat podle pokynů odborného poradce. e) Přehled možných následků havárie na zdraví lidí, zvířat, životní prostředí a biologickou rozmanitost, včetně způsobů zjišťování těchto následků a účinné ochrany před nimi: Vědecká práce na MENDELU Brno je prováděna se signálními geny GUS a GFP, o kterých je známo, že nemají nepříznivé následky na zdraví lidí či zvířat ani na biologickou diverzitu. Používají se selekční geny pro rezistenci k antibiotikům, které se projevují v rostlinách. Ani u těch nebyly prokázány škodlivé účinky na zdraví lidí, zvířat ani na biologickou diverzitu či přírodní prostředí. Přesto však je nezbytné dodržovat zásady předběžné opatrnosti v příslušných laboratořích a prostorách. Účinnou ochranou může být dodržování ochranných pomůcek (rukavice, pracovní oděv a obuv). Tím se zamezí vynášení transgenního materiálu z pracovního prostředí. Určité nebezpečí představuje teoretická možnost úniku transgenních rostlin do přírody a jejich šíření, které by vedlo k obohacování přírodního prostředí transgeny. To by mohlo být způsobeno např. havárií dopravního prostředku převážejícího GM rostliny. Vědečtí pracovníci 4

mají k dispozici řádnou dokumentaci, fyzikální mapy a genové sekvence insertů s nimiž pracují, stejně jako přístrojové vybavení a dovednosti k analýze rostlin, která umožňuje mapovat a následně eliminovat jejich rozšíření a posléze tuto eliminaci také zkontrolovat. V případě úniku transgenních rostlin nebo vektorů mimo hranice pro uzavřené nakládání je třeba využít uvedených možností k monitorování případného úniku transgenu a následné likvidaci transgenních rostlin. Je nezbytné informovat rektora MENDELU Brno a odborného poradce a podle pokynů přistoupit k asanaci kontaminovaného místa dle bodů g) a i). Možnost úniku mimo uzavřený prostor je zvýšena zejména při přepravě materiálu uvnitř objektu a při jeho převážení autem. V obou případech je třeba, aby byl materiál neprodyšně uzavřen v plastových nebo plechových obalech s víkem zajištěným proti otevření. Obaly musí být označeny značkou BIOHAZARD. Velikost značky, která může být jak v černobílém tak i barevném provedení, musí být nejméně 5 cm. Každý předmět musí být opatřen nejméně dvěma na protilehlých stranách umístěnými značkami. Pokud je materiál přepravován mimo budovu autem, musí být v neprodyšně uzavřených přepravních kontejnerech. Auto musí mít označení BIOHAZARD a musí zde být umístěn popis přepravovaného transgenního materiálu a obecné instrukce. Na kontejneru musí být instrukce, jak postupovat s uzavřeným kontejnerem s transgenním materiálem (neotvírat, dopravit na MENDELU Brno). Mimo budovu není dovoleno přepravovat rostliny s květy nebo plody se semeny. V případě, že při dopravní nehodě došlo k otevření kontejneru, musí být o tom uvědomeni pracovníci policie, kteří dopravní nehodu vyšetřují. Pro případ, že by při havárii došlo k otevření kontejneru, musí být v autě k dispozici asanační prostředky k ošetření kontaminovaného místa a igelitové pytle, do kterých se obsah kontejneru po otevření přemístí. f) Postupy detekce přítomnosti geneticky modifikovaných organismů: Základní metodou je amplifikace úseku transgenu nebo regulačních oblastí ohraničených zvolenými oligonukleotidovými primery. Detekce transgenů je prováděno po extrakci DNA z rostlinného nebo mikrobiologického materiálu pomocí vhodných standardizovaných metod. V případě analýzy bakteriálních kmenů je vhodné použití Plasmid Miniprep Kit (Fermentas) pro izolaci z bakteriální kultury v tekutém médiu. V případě analýzy rostlinného materiálu nehraje roli jaké pletivo bude pro analýzu použito (vzhledem k titopotenci rostlinných buněk), doporučuje se však použití pletiv mladých, která zpravidla obsahují nižší množství kontaminujících látek. Vlastní izolace rostlinné DNA je prováděna například pomocí kitu DNeasy Plant Mini Kit, Qiagen. Polymerázová řetězová reakce (PCR) probíhá podle standarních protokolů se specifickými primery designovanými a otestovanými pro detekci některého z genů obsažených v sekvenci DNA, která je sledována. V případě pochybností se provádí sekvencování amplifikovaného úseku a porovnání se známou sekvencí transgenu. Podmínky PCR: Počáteční denaturace 95 C, 3 min 1 cyklus Denaturace Hybridizace primerů (annealing) 95 C, 1 min 55 C, 1 min Prodlužování primerů (extension) 72 C, 1 min Finální extension 72 C, 10 min 1 cyklus 35 cyklů Metoda jednoznačné detekce GUS GATCGCGAAAACTGTGGAAT TCTGCCAGTTCAGTTCGTTG 5

V případě použití GUS-intron dává produkt velikosti 483 bp, v případě GUS bez intronu a RT PCR s GUSintron pak dává produkt 355 bp Metoda jednoznačné detekce PEMV 58 CP ATGCCGACTAGATCGAGA TCAGAGGGCATTCATT dává produkt o velikosti 570 bp Metoda jednoznačné detekce PSbMV 204 CP ACAAGGGTGGAGTAGCA GCGCCATTATCTGTCTGAA dává produkt o velikosti 309 bp Metoda jednoznačné detekce SPI-2 AGAACAATGGTTTGCACA ACATTCACCTTCATGATC dává produkt o velikosti 117 bp Metoda jednoznačné detekce CaMV35S CATGGTGGAGCACGACACTCTCG CCTCTCCAAATGAAATGAACTTCC poskytuje produkt o velikosti 415 bp. Metoda jednoznačné detekce inzertu ve vektoru pgem-t nebo pgem-t Easy T7: TAATACGACTCACTATAGGG SP6: ATTTAGGTGACACTATAG poskytuje produkt o velikosti 160 bp v případě prázdného vektoru. V případě úspěšně začleněného inzertu je produkt větší než 160 pb. Metoda jednoznačné detekce inzertu ve vektoru pbluescript II T3: TAACCCTCACTAAAGGGA T7: TAATACGACTCACTATAGGG poskytuje produkt o velikosti 165 bp v případě prázdného vektoru. případě úspěšně začleněného inzertu je produkt větší než 165 pb. Metoda jednoznačné detekce inzertu ve vektoru pdrive Cloning Vector. M13 F: GTAAAACGACGGCCAGT M13R: CAGGAAACAGCTATGAC poskytuje produkt o velikosti 207 bp v případě prázdného vektoru. případě úspěšně začleněného inzertu je produkt větší než 207 pb. g) Metody a postupy použitelné k likvidaci geneticky modifikovaných organismů a k dekontaminaci zasaženého prostoru: 1. Odpad vzniklý při manipulaci s geneticky modifikovaným organismem a geneticky modifikované rostliny dáme do autoklávovatelných plastových pytlů, které ihned 6

autoklávujeme (min. 20 minut). V případě přenášení do místnosti s autoklávem v rámci budovy je nutné pytle vložit do přepravních kontejnerů k tomu určených. 2. Sklo a nástroje použité při manipulaci s GMO a nádoby s vektorovými bakteriemi nejprve autoklávujeme a poté omyjeme v detergenčním roztoku. 3. Při kontaminaci pracovních ploch GMO je ihned několikrát omyjeme vhodným asanačním prostředkem a utřeme do sucha. Veškeré použité tampony, vatu, kontaminované nástroje apod. potom autoklávujeme. 4. V případě úniku transgenních rostlin, jejich částí nebo vektorů mimo hranice pro uzavřené nakládání je třeba neprodleně učinit opatření k dekontaminaci zasažených prostor a k zamezení šíření GMO. Veškeré manipulace je nutné provádět v jednorázových rukavicích. Uniklé GMO je třeba přenést do autoklávovatelných plastových pytlů, dle možností provést i smetení kontaminované plochy (směrem k místu prvotního úniku) či seškrábnutí nejvíce kontaminované zeminy. Zasažené místo je třeba ošetřit v dostatečném rozsahu dvěma typy desinfekčních roztoků: např. Ajatinem a následně chloraminem (příp. roztokem SAVO). Místo úniku je nutné vymezit vhodným způsobem tak, aby bylo možné provádět následný monitoring. Veškerý odpad včetně rukavic, tamponů apod. se zlikviduje autoklávováním, použité pomůcky se dekontaminují dezinfekčními roztoky nebo autoklávováním. Nepřítomnost geneticky modifikovaných mikroorganismů bude dokumentována odebráním vzorků (stěrů) z původně zasaženého místa a pomocí PCR bude proveden průkaz nepřítomnosti některého z transgenů NPTII, GUS, příp. některého z dalších genů geneticky modifikovaného organismu. h) Metody izolace prostor a zařízení zasažených havárií, včetně metod kontroly účinnosti izolace: Všechny místnosti pro manipulaci s GMO jsou opatřeny funkčními uzamykatelnými dveřmi. Okna v těchto místnostech jsou rovněž funkční, nejsou však otevírána při manipulaci s GMO. Místnosti jsou označeny viditelným označením Práce s GMO a přístup do těchto místností je dovolen jen oprávněným osobám v pracovním oděvu (pracovní plášť, pracovní obuv). Cedulky a pásky na označení místa havárie budou umístěny spolu s asanačními prostředky, viz Příloha č. 8 uložení asanačních prostředků. i) Popis a nákres uložení asanačních prostředků použitelných k likvidaci geneticky modifikovaných organismů a dekontaminaci zasaženého prostoru: Asanační prostředky: roztok chlornanu sodného, Ajatin, chloramin, SAVO. Asanační prostředky budou umístěny v označených a snadno přístupných skříňkách v prostorách pro práci s GMO - viz Příloha č. 8 uložení asanačních prostředků. j) Postupy na ochranu zdraví lidí, zvířat, životního prostředí a biologické rozmanitosti v případě nežádoucího ovlivnění vzniklou havárií; popřípadě metody na zneškodnění nebo sanaci rostlin a zvířat, které se nacházely v oblasti v době havárie, v souladu se zvláštními právními předpisy: Transgenní rostliny, které by unikly mimo vymezené bariéry, budou ručně posbírány, případně ručně vytrhány a vyautoklávovány v igelitových pytlích. Pokud by k úniku došlo ve vnějším otevřeném prostoru, tento prostor bude ošetřen totálním herbicidem s účinnou látkou glyfosát (N-fosfometylglycin, komerční produkt Roudup-Ready ). Únik bakterií E. coli nebo A. tumefaciens za hranice prostoru pro uzavřené nakládání je třeba likvidovat desinfekčními prostředky (chlornanem sodným nebo chloraminem či Ajatinem). 7

k) Popis postupu zajištění následného monitoringu prostor a pozemků po ukončení asanace: V následujícím roce bude asanovaný prostor monitorován na výskyt případného potomstva uniklých transgenních rostlin. V pozitivním případě bude postup opakován. V případě úniku mikroorganismů bude zasažené místo nutno monitorovat mikrobiologickou kultivací a detekcí přítomnosti či nepřítomnosti vektorových plazmidů. V případě detekce vektorových plazmidů je nutno desinfekci provádět na větší ploše alternativním desinfekčním prostředkem. l) Obce, příp. osoby, kterým je havarijní plán předkládán podle par. 20, odst. 3 zákona: Kopie havarijního plánu včetně Přílohy 8 oznámení o nakládání s GMO byla předána Úřad městské části Brno-sever, Odbor životního prostředí a místního hospodářství, Bratislavská 70, 601 47 Brno, Hasičskému záchrannému sboru Jihomoravského kraje, Územní odbor Brno, Lidická 61, 602 00 Brno, a Krajskému úřadu v Brně, Odbor životního prostředí a zemědělství, Žerotínovo nám. 3/5. m) Způsob vyrozumění správních orgánů uvedených v 27 zákona v případě havárie, jakož i způsob varování občanů, v závislosti na místě havárie a jejich možných následcích: V případě havárie budou uvědomeny tyto instituce státní správy: Ministerstvo životního prostředí, Ministerstvo zdravotnictví, Ministerstvo zemědělství, Česká inspekce životního prostředí, Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský, Státní rostlinolékařská správa a Státní zemědělská a potravinářská inspekce. Vyrozumění se bude dít e-mailem s následným písemným potvrzením. Vzhledem k tomu, že se na MENDELU pracuje s transgenními rostlinami určenými k vědeckým účelům, jejichž případné rozšíření nemá škodlivý vliv na lidskou populaci, varování občanů nebude prováděno. n) Vyjádření odborného poradce: Způsob používání a charakter GMO zařazují laboratoře Mendelovy univerzity v Brně k pracovištím s výhradně uzavřeným nakládáním s GMO kategorie 1. Přímý kontakt člověka a zvířat s GMO a jejich únik do životního prostředí je omezen v laboratořích pomocí fyzických, chemických nebo biologických bariér, případně jejich kombinacemi. Tento Havarijní plán mění původní Havarijní plán v rámci Oznámení o uzavřeném nakládání s geneticky modifikovanými organismy první kategorie rizika Mendelovy zemědělské a lesnické univerzity v Brně č.j. 41271/ENV/06 (rozhodnutí uděleno dne 21. srpna 2006) a je platný pro všechny pracoviště MENDELU v uzavřeném nakládání s GMO. V Brně dne 1. 2. 2011 Ing. Pavel Hanáček, Ph.D. odborný poradce 8