KOMBINACE PEPTIDŮ BRÁNÍCÍCH STÁRNUTÍ GMP PEPTIDY PRO KOSMETICKÉ PŘÍPRAVKY NOVÁ SYNTETICKÁ SLOŽKA KOSMETICKÝCH PŘÍPRAVKŮ
PŘEHLED Výzkum základních biochemických mechanismů působení proti vráskám vedl k objevu revolučních peptidů, které ohromily celý kosmetický svět. Byla objevena látka s účinkem proti vráskám, jejíž působení je možné přirovnat k botulotoxinu, ale na rozdíl od něj, není spojená s žádným rizikem, nutností aplikovat injekce a vysokými náklady. Nové peptidy proti mimickým vráskám mají dvě výhody: - Nový mechanismus boje proti mimickým vráskám - Synergický efekt, který je výsledkem kombinace působení několika peptidů OBECNÝ POPIS: Jedním z nejviditelnějších příznaků stárnutí kůže je zvýšená tvorba vrásek na tváři. Stárnutí je přirozený jev, pojící se s určitými biochemickými, histologickými a fyziologickými změnami, které ještě podporuje vystavení pokožky vnějšímu prostředí. Existují i další sekundární faktory, které mohou způsobit vznik charakteristických rýh a vrásek na tváři. K nim patří zemská přitažlivost, častý a nepřetržitý poziční tlak na pokožku tváře (např. v době spánku), nebo opakované pohyby tváře, způsobované kontrakcemi mimických svalů. V každém případě a nezávisle na základních fyziologických procesech jsou molekulární mechanismy, podílející se na stárnutí pokožky, přímo spojené se změnami ve struktuře kolagenu, vytvářejícího trojitý helix, degenerací elastinových polypeptidů a určitými poruchami v obalu lipidové části pokožky. Bylo jasně prokázáno, že těmto změnám struktury a narušení obalu lipidové hmoty je možné do značné míry zabránit modulováním svalových stahů. Ke stahování svalů dochází tehdy, když přijmou neurotransmiter, uvolněný ze zakončení nervů. Při vylučování neurotransmiteru ze synaptických váčků v nervových výběžcích sehrává důležitou roli komplex SNARE (SNAp Receptor - receptor impulzu) (A. Ferrer Montiel et al, The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272, 2634-2638). Je to komplex, složený ze třech složek - proteinů VAMP, syntaxinu a SNAP-25 (SyNaptosomal Associated Protein synaptický protein). Tento komplex se chová jako buněčné síto, které zachytává nervové výběžky a spojuje je s membránou a způsobuje tak vylučování neurotransmiteru. Peptidy jsou látky, připomínající N-terminální zakončení proteinu SNAP-25, které se snaží převzít jeho pozici v komplexu SNARE. Tím dochází ke změně ve složení komplexu. Když dojde k mírné destabilizaci komplexu SNARE, synaptické váčky nemohou uvolnit neurotransmitery a dochází k utlumení svalové kontrakce. Tím se zabraňuje tvorbě rýh a vrásek (viz. Obr. 1).
Obr. 1. Biochemický mechanismus peptidů VLASTNOSTI A POUŽITÍ - Peptidy redukují hloubku obličejových vrásek, které vznikly následkem kontrakce svalů při mimických pohybech, a to zejména na čele a okolo očí. - Peptidy jsou bezpečnější, méně nákladnou a jemnější alternativou botulotoxinu, který ovlivňuje stejné mechanismy tvorby vrásek, ale odlišným způsobem.
ÚČINNOST In vitro" testy Modulace tvorby SNARE komplexu pomocí peptidů Test nám umožňuje sledovat tvorbu a termální stabilitu rekonstruovaného komplexu SNARE. Peptidy jsou podobné N-terminální oblasti proteinu SNAP 25 a tudíž s nimi může soupeřit o místo ve SNARE komplexu. Tento test hodnotí antagonistickou konkurenční výkonnost peptidů v porovnání s neupraveným SNAP-25 ve smyslu schopnosti spojovat se se syntaxinem a synaptobrevinem v komplexu SNARE. Koncentrace SNAP-25 je hraniční, aby bylo možné účinné srovnání peptidu a SNAP-25. Metoda se výrazně zkvalitnila použitím in vitro transformovaného [ 35 S]-SNAP-25, čímž se výrazně zvýšila úroveň citlivosti vzorku. Součástí in vitro rekonstrukce a modulace komplexu SNARE je objev a čištění rekombinovaných proteinů syntaxinu a synaptobrevinu, transformace [ 35 S]-SNAP-25, vytvoření komplexu SNARE a jeho modulace peptidy. Ekvimolová množství rekombinovaného syntaxinu a synaptobrevinu se inkubovala v nepřítomnosti i v přítomnosti peptidů při 4 C v průběhu 2 hodin. Potom se přidaly 4 µl [ 35 S]- SNAP-25 a směs se dále inkubovala při 4 C po dobu 12 hodin. SNARE komplex byl analyzován pomocí SDS-PAGE na 12%-ních gelech a poté se provedla rengenografická detekce na rentgenových filmech Kodak X-OMAT AR. Identifikace rekombinovaného SNARE komplexu se realizovala pomocí jeho rozkladu závislého na teplotě. Peptidy se testovaly při mm koncentracích. Elektroforéza na Obr. 2 znázorňuje v horní skupině vytvoření komplexu SNARE a ve spodní skupině přítomnost SNAP-25. Levý pruh znázorňuje kontrolní vzorek s neporušeným komplexem SNARE, druhý pruh znázorňuje narušení SNARE komplexu teplem, takže komplex není zastoupen žádným zbarvením, přítomen je jen SNAP-25. Zbývající pruhy znázorňují narušení SNARE komplexu pomocí peptidů. HEXAPEPTID Obr.2 Moduláce tvorby komplexu SNARE pomocí peptidů
In vivo" testy Test působení proti vráskám na zdravých dobrovolnících Byla provedena analýza topografie kůže za účelem posouzení účinnosti peptidů, v jejímž průběhu byly získány otisky kůže v okolí očí od 17 zdravých žen. Tyto silikonové otisky se odebraly před provedením testu a následně po 28 dnech aplikace dvakrát denně. Analýzy otisků se provedly konfokální mikroskopií a laserovým skenováním, aby se posoudily změny na kůže během a po léčbě. Tyto záběry, podrobené třídimenzionální rekonstrukci optických částí, se nacházejí na Obr. 3. Je evidentní, že hloubka vrásek se po 28 dnech léčby značně zredukovala, což prokazuje platnost hypotézy o biochemickém mechanismu. Vzorek 1 Vzorek 2 Den 0 Den 28 Obr. 4 Záběry topografie kůže před (vlevo) a po 28 dnech (vpravo) ošetřování peptidy. Horní záběry znázorňují pokožku jedné z dobrovolnic a spodní obrázky znázorňují pokožku další z dobrovolnic.
Účinnost peptidů Účinnost peptidů 0-10 -2,99 Redukce vrásek % -20-30 -40-34,98-50 -60-70 -63,13 Placebo Účinek jednoho peptidu Účinek kombinace peptidů Maximálního účinku - 63,13% - se dosáhlo kombinací několika peptidů. Na závěr můžeme konstatovat, že testy in vivo i in vitro prokazují, že kombinace peptidů je přibližně o 30% účinnější, než účinek jediného peptidu.