Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka)

Transkript

1 Březen 2015 Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) Verze 1 2 x 352 Pro diagnostické použití in vitro QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D Hilden, Německo R CS

2 Tato stránka byla úmyslně ponechána prázdná

3 Obsah Zamýšlené použití Souhrn a vysvětlení Princip metody Složení sady Požadované materiály, které nejsou součástí dodávky ě č ř Uchovávání a nakládání s reagenciemi Uchovávání a nakládání se vzorkem Postup Automatická purifikace virové RNA na přístroji QIAsymphony SP 11 Protokol: Zpracování vzorku 15 Řešení problémů Řízení jakosti Omezení Literatura Symboly Kontaktní informace Informace o způsobu objednávání Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015 3

4 Zamýšlené použití Sada QIAsymphony DSP HPV Media využívá technologii magnetických částic QIAsymphony pro automatickou izolaci lidských cervikálních buněk uložených v kapalném cytologickém médiu pro analýzu pomocí testu digene HC2 High- Risk HPV DNA Test zpracovávané na systému Rapid Capture System. Další informace o specifických lidských biologických vzorcích, se kterými byla sada validována viz příslušné protokoly, které jsou k dispozici online na adrese Tento produkt je určen pro použití profesionálními uživateli, např. techniky a lékaři školenými v technikách molekulární biologie. Sada QIAsymphony DSP HPV Media je určena pro diagnostické účely in vitro. Souhrn a vysvětlení Sada QIAsymphony DSP HPV Media je určena pro plně automatickou přípravu vzorku z humánních cervikálních buněk uložených v kapalném cytologickém médiu pomocí QIAsymphony SP. Sada QIAsymphony DSP HPV Media poskytuje extrakty vzorků, které jsou připraveny k přímému použití s testem digene HC2 High-Risk HPV DNA. Extrakty vzorků obsahují směs magnetických částic, buněčného materiálu, STM a DNR. Přístroj QIAsymphony SP provádí všechny kroky postupu pro přípravu vzorků. V jednom chodu se zpracovává až 88 vzorků v šaržích až po 24. Princip metody Přístroj QIAsymphony kombinuje rychlost a účinnost chromatografie výměny aniontů řízené ph a pohodlnou manipulaci s magnetickými částicemi (obrázek 1, strana 5). Purifikační postup je určen k zajištění bezpečné a reprodukovatelné manipulace s potenciálně infekčními vzorky. Postup zahrnuje vázání a uvolňování extraktů vzorků (viz vývojový diagram, stran 6). Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

5 Kryt tyčinky Magnetick á tyčinka Zpomaluje pohyb nahoru a dolů při shromažďování magnetických částic Zrychluje pohyb nahoru a dolů krytu tyčinky při uvolňování magnetických částic Magnetick á tyčinka Kryt tyčinky Přenos Reagencie 1 a magnetické částice Jamka 1 Jamka 2 Reagencie 2 a magnetické částice Obrázek 1. Schéma principu činnosti přístroje QIAsymphony SP. Přístroj QIAsymphony SP zpracovává vzorek obsahující magnetické částice následujícím způsobem: Magnetická tyčinka chráněná krytem tyčinky vstoupí do jamky obsahující vzorek a přitahuje magnetické částice. Kryt magnetické tyčinky se umístí nad jinou jamku a magnetické částice se uvolní. Přístroj QIAsymphony SP používá magnetickou hlavu obsahující soupravu 24 magnetických tyčinek, a může proto současně zpracovávat až 24 vzorků. Kroky 1 a 2 se během zpracování vzorku několikrát opakují. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015 5

6 Postup práce se sadou QIAsymphony DSP HPV Media Vzorek a magnetické částice přenášené do zásobníku pro stanovení vzorku Inkubace s magnetickými částicemi Magnetická separace Obnova extraktů vzorků Plně automatizovaná příprava vzorků na QIAsymphony SP Extrakt vzorku Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

7 Složení sady QIAsymphony DSP HPV Media Kit Katalogové č Počet stanovení 2 x 352 RC Reagent Cartridge (Zásobník reagencií) PL Piercing Lid (Děrovací víčko) 2 RSS Reuse Seal Set (Opětovně 2 použitelná uzavírací sada) (Návod k použití (příručka) 1 * Viz stranu 21, kde je seznam symbolů s definicemi. Opakovaně použitelná uzavírací sada (RSS) obsahuje 8 uzavíracích proužků pro opakované použití Požadované materiály, které nejsou součástí dodávky Při práci s chemikáliemi vždy používejte vhodný laboratorní plášť, rukavice na jedno použití a ochranné brýle. Další informace jsou uvedeny v příslušných bezpečnostních listech, které lze získat od dodavatele produktu. Sample Prep Cartridges, 8-well (8jamkové zásobníky na přípravu vzorku) (kat. čís ) 8-Rod Covers (kryty hrotů (po osmi)) (kat. čís ) Údaje o zkumavkách na vzorky naleznete v příslušném protokolu na kartě Resources (zdroje) sady QIAsymphony DSP HPV Media na adrese Pro obnovu extraktu vzorku používejte Hybridization Microplates (Hybridizační mikrodestičky) dodávané QIAGEN (katalogové číslo ). Microplate Lids (Víčka mikrodestiček) dodávaná QIAGEN (katalogové číslo ) Tip Disposal Bags (odpadní sáčky na špičky) (kat. čís ) Filter Tips (špičky s filtrem), 1500 µl (kat. čís ) Cooling Adapter, MTP, RB, Qsym chladicí adaptér pro mikrodestičky s kulatým dnem (MTP) pro použití v zásuvce QIAsymphony "Eluate" (Eluát) (katalogové číslo ) * 2 Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015 7

8 ě č ř Pro diagnostické použití in vitro. Při práci s chemikáliemi vždy používejte vhodný laboratorní plášť, rukavice na jedno použití a ochranné brýle. Další informace jsou uvedeny v odpovídajících bezpečnostních listech (BL). Bezpečnostní listy jsou k dispozici online v pohodlném a kompaktním formátu PDF na stránkách kde můžete nalézt, zobrazit a vytisknout BL pro každou sadu QIAGEN a pro každou komponentu těchto sad. POZOR: NEPŘIDÁVEJTE roztoky bělících prostředků nebo kyselin přímo do odpadních materiálů z přípravy vzorků. V případě rozlití pufru vyčistěte kontaminované místo vhodným laboratorním detergentem a vodou. Pokud rozlitá tekutina obsahuje potenciálně infekční látky, vyčistěte zasaženou oblast nejprve laboratorním detergentem a vodou a poté 1 % (obj.) roztokem chlornanu sodného. Na komponenty soupravy QIAsymphony DSP HPV Media se vztahují následující bezpečnostní věty a bezpečnostní opatření. AXpHdirect Beads Obsahuje kyselinu boritou. Nebezpečí! Může poškodit plodnost nebo nenarozené dítě. Obsah/nádobu likvidujte ve schváleném zařízení na likvidaci odpadu. POKUD dojde k zasažení nebo důvodné obavě, že došlo k zasažení: Vyhledejte lékařskou pomoc. Před použitím získejte zvláštní pokyny. Uchovávejte v uzamčeném prostoru. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv, ochranné brýle nebo obličejový štít.. Buffer DNR Obsahuje kyselinu sírovou. Nebezpečí! Způsobuje závažné popáleniny pokožky a poškození očí. Může způsobovat korozi kovů. Obsah/nádobu likvidujte ve schváleném zařízení na likvidaci odpadu. V PŘÍPADĚ ZASAŽENÍ OČÍ: Opatrně oplachujte vodou po dobu několika minut. Pokud zasažená osoba používá kontaktní čočky, vyjměte je (pokud je to možné). Pokračujte v oplachování. V PŘÍPADĚ ZASAŽENÍ POKOŽKY (nebo vlasů): Okamžitě odstraňte/vysvlečte kontaminovaný oděv. Opláchněte pokožku vodou/sprchou. Ihned kontaktujte TOXIKOLOGICKÉ STŘEDISKO nebo lékaře. Uchovávejte v uzamčeném prostoru. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv, ochranné brýle nebo obličejový štít. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

9 Buffer STM Varování! Způsobuje mírné podráždění pokožky. V případě, že dojde k podráždění pokožky: Vyhledejte lékařskou pomoc. Uchovávání a nakládání s reagenciemi Sada QIAsymphony DSP HPV Media se musí uchovávat ve svislé poloze při pokojové teplotě (15 25 C). Zásobníky s reagenciemi (RC) neuchovávejte při teplotách pod 15 C. Magnetické částice v zásobnících s reagenciemi (RC) zůstávají při uchovávání za této teploty aktivní. Při správném uchovávání je sada stabilní až do doby použitelnosti uvedené na krabici sady. Částečně použité zásobníky s reagenciemi (RC) lze uchovávat maximálně po 4 týdny, což umožňuje úsporné opakované použití reagencií a pružnější zpracovávání vzorků. Pokud se zásobník s reagenciemi (RC) použije částečně, vyměňte kryt vaničky obsahující magnetické částice a uzavřete zásobník s reagenciemi (RC) dodávanými opětovně použitelnými uzavíracími proužky bezprostředně po skončení chodu protokolu, aby nedošlo k odpařování. Pokud se má zabránit odpařování reagencie, je nutné otevírat zásobník s reagenciemi (RC) maximálně na 30 hodin (včetně doby chodu) při maximální teplotě prostředí 30 C. Zpracování šarží s nízkým počtem vzorků (<24) zvyšuje jak dobu, po níž je zásobník s reagenciemi (RC) otevřený, tak požadované objemy pufru, což potenciálně snižuje celkový počet možných stanovení vzorků na zásobník. Chraňte zásobník na reagencie před působením UV záření (např. použité pro dekontaminaci), protože expozice může způsobit zrychlené stárnutí zásobníků s reagenciemi (RC) a pufrů. Poznámka: Štítky na sadě QIAsymphony DSP HPV Media udávají dobu použitelnosti sady. Soubor s výsledky dokumentuje doby použitelnosti pouze pro zásobník s reagenciemi (RC). Uchovávání a nakládání se vzorkem Vzorky je nutné uchovávat podle pokynů výrobce pro příslušný typ médií a vzorků. Vzorky se musí vytemperovat na teplotu místnosti (15 25 C) a převést do zkumavek pro vzorky těsně před zahájením chodu. Při manipulace se vzorky zabraňte vzniku mlhy. Další informace o automatickém postupu (včetně informací o zkumavkách na vzorky a objemech specifických pro protokol) naleznete v příslušném protokolu Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015 9

10 pro sadu QIAsymphony DSP HPV Media na adrese Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

11 Postup Automatická purifikace virové RNA na přístroji QIAsymphony SP Přístroj QIAsymphony SP usnadňuje automatickou přípravu vzorků a zvyšuje pohodlí přípravy. Vzorky, reagencie, spotřební materiál a extrakty vzorků jsou odděleně uchovávány v různých zásuvkách. Před vlastní analýzou jednoduše založte vzorky, zásobníky s reagenciemi a spotřební materiál předem umístěný ve stojánku do příslušné zásuvky. Spusťte protokol a po zpracování vyjměte extrakty vzorků ze zásuvky "Eluate". Instrukce naleznete v uživatelském manuálu dodávaném s Vašimi přístroji. Poznámka: Volitelná údržba není pro funkci přístroje povinná, ale velmi ji doporučujeme pro snížení rizika kontaminace. Poznámka: Pro postup QIAsymphony DSP HPV Media se požaduje software QIAsymphony verze 4.0 nebo vyšší Vkládání zásobníků s reagenciemi (RC) do zásuvky Reagents and Consumables (Reagencie a spotřební materiál). Reagencie pro přípravu vzorku jsou obsaženy v zásobníku s reagenciemi (RC) (viz obrázek 2 níže). Vaničky zásobníku s reagenciemi (RC) obsahují speciální reagencie jako např. magnetické částice nebo pufr extraktu vzorku. Jen částečně použité zásobníky s reagenciemi (RC) lze znovu uzavřít pomocí opětovně použitelných uzavíracích proužků, čímž se předchází vytváření odpadu v důsledku zbylých reagencií na konci purifikační procedury. Děrovací víčko (PL) Enzymový stojánek* Vanička s magnetickými částicemi Mřížka s vaničkami obsahujícími reagencie Držák na zásobník s reagenciemi Obrázek 2. Zásobník s reagenciemi (RC) QIAsymphony. Zásobník s reagenciemi (RC) obsahuje všechny reagencie potřebné pro chod protokolu. *Sada QIAsymphony DSP HPV Media neobsahuje a ani nevyžaduje enzymový stojánek. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

12 Před začátkem procedury se ujistěte, že jsou magnetické částice plně resuspendovány. Před prvním použitím vyjměte vaničku s magnetickými částicemi z podstavce zásobníku s reagenciemi, otočte ji dnem vzhůru, dokud se homogenně neresuspendují všechny magnetické částice (nevortexujte) a vložte ji zpátky do podstavce zásobníku s reagenciemi. Vložte zásobník s reagenciemi (RC) do držáku zásobníků s reagenciemi. Před prvním použitím zásobníku s reagenciemi (RC) umístěte děrovací víčko (PL) navrch zásobníku s reagenciemi (RC) (obrázek 3). Poznámka: Děrovací víčko je. Buďte opatrní při jeho umístění navrch zásobníku s reagenciemi (RC). Ujistěte se, že jste umístili děrovací víčko (PL) na zásobník s reagenciemi (RC) ve správném směru. Poznámka: Vaničku s magnetickými částicemi nevortexujte. Suspenzi magnetických částic pouze jemně promíchejte otočení vaničky s magnetickými částicemi dnem vzhůru, aby nedošlo ke vzniku pěny. K resuspenzi magnetických částic je možné rovněž použít pipetu. Po úplném odstranění vaničky s magnetickými částicemi se následně do zásuvky Reagents and Consumables (Reagencie a spotřební materiál) vloží zásobník s reagenciemi (RC). Děrovací víčko (PL) Enzymový stojánek* Obrázek 3. Jednoduché nastavení pracovní plochy pomocí zásobníků s reagenciemi (RC). *Sada QIAsymphony DSP HPV Media neobsahuje a ani nevyžaduje enzymový stojánek. Částečně použité zásobníky s reagenciemi (RC) lze uchovávat, dokud jich nebude znovu zapotřebí, viz AXpHdirect Beads Obsahuje kyselinu boritou. Nebezpečí! Může poškodit plodnost nebo nenarozené dítě. Obsah/nádobu likvidujte ve schváleném zařízení na likvidaci odpadu. POKUD dojde k zasažení nebo důvodné obavě, že došlo k zasažení: Vyhledejte lékařskou pomoc. Před použitím získejte zvláštní pokyny. Uchovávejte v uzamčeném prostoru. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv, ochranné brýle nebo obličejový štít.. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

13 Buffer DNR Obsahuje kyselinu sírovou. Nebezpečí! Způsobuje závažné popáleniny pokožky a poškození očí. Může způsobovat korozi kovů. Obsah/nádobu likvidujte ve schváleném zařízení na likvidaci odpadu. V PŘÍPADĚ ZASAŽENÍ OČÍ: Opatrně oplachujte vodou po dobu několika minut. Pokud zasažená osoba používá kontaktní čočky, vyjměte je (pokud je to možné). Pokračujte v oplachování. V PŘÍPADĚ ZASAŽENÍ POKOŽKY (nebo vlasů): Okamžitě odstraňte/vysvlečte kontaminovaný oděv. Opláchněte pokožku vodou/sprchou. Ihned kontaktujte TOXIKOLOGICKÉ STŘEDISKO nebo lékaře. Uchovávejte v uzamčeném prostoru. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv, ochranné brýle nebo obličejový štít. Buffer STM Varování! Způsobuje mírné podráždění pokožky. V případě, že dojde k podráždění pokožky: Vyhledejte lékařskou pomoc. Uchovávání a nakládání s reagenciemi strana 8. Vkládání umělohmotného materiálu do zásuvky Reagents and Consumables Zásobníky pro přípravu vzorků, 8hrotové kryty (oboje je seskládáno do boxů na jednotky) a jednorázové špičky s filtrem (1500µl špičky v šedých stojáncích) se vkládají do zásuvky "Reagents and Consumables". Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

14 Informace o požadovaném spotřebním materiálu naleznete v příslušném protokolu pro sadu QIAsymphony DSP HPV Media, který je dostupný na adrese Informace o objednávání plastových materiálů viz "Informace o způsobu objednávání" (Informace o objednávání), strana 23. Poznámka: Špičky mají filtry jako prevenci křížových kontaminací. Poznámka: Nedoplňujte stojánky na špičky ani boxy se zásobníky pro přípravu vzorků nebo 8hrotové kryty před spuštěním dalšího běhu. QIAsymphony SP umí použít částečně užité stojánky na špičky a boxy s jednotkami. Plnění zásuvky "Waste" (Odpad) Zásobníky pro přípravu vzorků a kryty hrotů použité během běhu se seskládají zpět do prázdných boxů v zásuvce "Waste". Ujistěte se, že zásuvka "Waste" obsahuje dostatečné množství prázdných boxů pro plastový odpad generovaný při běhu. Poznámka: Ujistěte se, že jsou víka boxů s jednotkami před vložením boxů do zásuvky Waste odstraněna. Používáte-li boxy pro kryty hrotů pro sběr použitých zásobníků pro přípravu vzorků a kryty hrotů, ujistěte se, že z nich byla odstraněna distanční vložka. Sáček na likvidaci použitých špiček s filtrem musí být připevněn k přední straně zásuvky "Waste". Poznámka: Přítomnost odpadního sáčku na špičky není systémem kontrolována. Před začátkem běhu se ujistěte, že je odpadní sáček správně připevněn. Více informací naleznete v uživatelských manuálech dodávaných s Vaším přístrojem. Vyprázdněte odpadní sáček po zpracování maximálně 88 vzorků, aby se zamezilo nakupení špiček. Odpadní kontejner sbírá tekutý odpad generovaný během purifikační procedury. Zásuvku Waste lze zavřít jen tehdy, pokud je odpadní kontejner na místě. Tekutý odpad likvidujte podle místních bezpečnostních a ekologických předpisů. Naplněné odpadní nádoby neautoklávujte. Vyprázdněte odpadní nádoby po zpracování maximálně 88 vzorků. Plnění zásuvky "Eluate" Vložte požadovanou hybridizační mikrodestičku do zásuvky Eluate. Použijte pouze drážku Elution slot 1 s odpovídajícími chladicími adaptéry. Kontrola vloženého obsahu Před spuštěním běhu přístroj zkontroluje, zda bylo do příslušných zásuvek vloženo pro testované sady dostatečné množství spotřebního materiálu. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

15 Příprava materiálu vzorků Sady QIAsymphony DSP HPV Media jsou vhodné pro vzorky odebrané v kapalných cytologických médiích. Zamezte vytvoření pěny na nebo ve vzorcích. Vzorky je nutné uchovávat podle pokynů výrobce pro příslušný typ médií a vzorků. Vzorky je nutné vytemperovat na teplotu místnosti (15 25 C) a převést do zkumavek pro vzorky těsně před zahájením chodu. Podrobný popis uchovávání materiálu vzorků a manipulaci s ním naleznete v příslušném protokolu pro sadu QIAsymphony DSP HPV Media, který je dostupný na adrese Přeneste vzorky do doporučených sekundárních zkumavek na vzorky a vzorky umístěte do nosiče zkumavek. Dbejte na vložení dostatečného objemu vzorků do přístroje QIAsymphony. Více informací o požadavcích na objem vzorků a schválené laboratorní zařízení naleznete v příslušném protokolu pro sadu QIAsymphony DSP HPV Media, který je dostupný na adresewww.qiagen.com/goto/dsphpvmedia. Uchovávání extraktů vzorků Extrakty vzorků v hybridizačních mikrodestičkách od QIAGEN (katalogové číslo ) lze uchovávat při 2 8 C po dobu popsanou v příslušném protokolu. Během uchovávání zakryjte desky víkem mikrodestičky od QIAGEN (katalogové číslo ). Více informací o automatizovaném postupu a specifických doporučeních pro uchovávání extraktů vzorků naleznete v příslušném protokolu pro aplikace QIAsymphony DSP HPV Media, který je dostupný na adresewww.qiagen.com/goto/dsphpvmedia. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

16 Protokol: Zpracování vzorku Sada QIAsymphony DSP HPV Media byla validována pro automatickou extrakci lidských cervikálních buněk uložených v kapalném cytologickém médiu pro analýzu pomocí testu digene HC2 High-Risk HPV DNA na systému Rapid Capture System. Následující popis je obecný protokol pro používání sady QIAsymphony DSP HPV Media. Podrobné informace o každém protokolu včetně vstupních objemů vzorků a požadavků na přípravu jsou uvedeny v protokolech, které lze stáhnout ze stránek Důležité body před zahájením Nejnovější verze Bioscript pro použití se sadou QIAsymphony DSP HPV Media lze stáhnout z karty "Resources" na adrese Ujistěte se, že jste dobře obeznámeni s obsluhou přístroje QIAsymphony SP. Instrukce naleznete v uživatelském manuálu dodávaném s Vašimi přístroji. Volitelná údržba není pro funkci přístroje povinná, ale velmi ji doporučujeme pro snížení rizika kontaminace. Dbejte na to, abyste se seznámili s protokolem příslušným k danému postupu, který se má použít (k dispozici na stránce Před zahájením postupu si přečtěte "Postup, který začíná na straně 11. Vyhněte se prudkému třepání zásobníkem s reagenciemi (RC), jinak by se mohla vytvořit pěna, která může vést k problémům s detekcí hladiny tekutiny. Vyhněte se prudkému třepání se vzorky, jinak by se mohla vytvořit pěna, která může vést k problémům s detekcí hladiny tekutiny. Jako zkumavky na vzorek používejte stanovené zkumavky podle materiálu vzorku, používejte pouze schválené laboratorní vybavení. Pokud zahájíte chod s novým zásobníkem s reagenciemi (RC) a dojde k úniku části suspenze magnetických částic při odstraňování víčka, zastavte chod po propíchnutí zásobníku s reagenciemi (RC) a chod znovu spusťte. Zastavení chodu a opakované spuštění znamená, že přístroj QIAsymphony SP provede detekci hladiny kapaliny na propíchnutém zásobníku s reagenciemi (RC) a změří zbývající objem ve vaničce s magnetickými částicemi. Pokud se to neprovede, může být napipetován nedostatečný objem magnetických částic, protože detekce hladiny kapaliny na novém zásobníku s reagenciemi (RC) nebyla provedena. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

17 Věci, které je nutné udělat před zahájením Ujistěte se, že je děrovací víčko (PL) umístěno na zásobníku s reagenciemi (RC) a že víčko vaničky s magnetickými částicemi bylo odstraněno nebo - pokud používáte částečně použitý zásobník s reagenciemi (RC) - se ujistěte, že byly odstraněny opětovně použitelné uzavírací proužky. Promíchejte magnetické částice ve vaničce jemným otočením dnem vzhůru, dokud se všechny magnetické částice homogenně neresuspendují. Zabraňte vzniku pěny, což může vést k problémům s detekcí hladiny kapaliny. K resuspenzi magnetických částic je povoleno rovněž použít pipetu. Pokud jsou vzorky označeny čárovým kódem, vložte je do nosiče zkumavky nasměrované tak, aby čárové kódy ležely čelem ke čtečce čárových kódů na levé straně přístroje QIAsymphony SP. Další informace o minimálních objemech vzorků požadovaných pro vzorky ve zkumavkách se vzorky pro určitý protokol naleznete v příslušném protokolu (dostupné na adrese Postup 1. Zavřete všechny zásuvky a víko. 2. Zapněte přístroj QIAsymphony SP a počkejte, dokud neskončí proces inicializace. Vypínač je umístěn v levém spodním rohu přístroje QIAsymphony SP. 3. Přihlaste se do přístroje. 4. Ujistěte se, že je zásuvka Waste správně připravená a proveďte kontrolu vloženého obsahu, včetně žlábku na špičky a na tekutý odpad. V případě potřeby vyměňte odpadní sáček. 5. Vložte požadované zásobníky s reagenciemi (RC) a spotřební materiál do zásuvky Reagents and Consumables (Reagencie a spotřební materiál). 6. Proveďte kontrolu vloženého obsahu zásuvky Reagents and Consumables. Poznámka: Po zpracování 88 vzorků zahajte novou kontrolu zásobníku s reagenciemi. Poznámka: Neprovádějte kontrolu zásobníku s reagenciemi v krátkých intervalech (např. po dodatečném zavedení spotřebního materiálu a po proběhnutí šarže 24 vzorků). 7. Vložte požadovanou hybridizační mikrodestičku do zásuvky Eluate. Použijte pouze drážku Elution slot 1 s odpovídajícími chladicími adaptéry. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

18 Dbejte na správnou orientaci hybridizační mikrodestičky, protože nesprávné umístění může způsobit smíchání vzorků v dalších krocích analýzy. Pro sadu QIAsymphony DSP HPV Media používejte pouze schválené laboratorní vybavení. Poznámka: Test digene HC2 HPV High-Risk DNA vyžaduje, aby první sloupec 96jamkové desky zůstal prázdný pro následný přenos kalibrátorů a kontrol 8. Umístěte vzorky do správného nosiče vzorků a vložte je do zásuvky Sample. 9. Pomocí dotekové obrazovky zadejte požadované informace o každé zpracovávané sadě vzorků. Zadejte následující informace: Informace o vzorku (v závislosti na použitých stojáncích na vzorky) Protokol, který bude spuštěn Výstupní poloha (používejte pouze "Elution slot 1" (Eluční štěrbina 1)) Po zadání informací o sadě se status změní z "LOADED" (NAPLNĚNO) na QUEUED (ZAŘAZENO). Jakmile je jedna sada zařazena, objeví se tlačítko "Run" (Spustit). 10. Stiskněte tlačítko Run pro spuštění purifikační procedury. Všechny kroky zpracování jsou plně automatizované. Na konci protokolu se status změní z RUNNING (ZPRACOVÁVÁ SE) na COMPLETED (DOKONČENO). 11. Vytáhněte hybridizační mikrodestičku obsahující extrakty vzorku ze zásuvky Eluate. Poznámka: Je nutno vyjmout hybridizační mikrodestičky ze zásuvky "Eluate" ihned poté, co protokol skončil. V závislosti na teplotě a vlhkosti mohou hybridizační mikrodestičky ponechané v QIAsymphony SP po dokončení běhu podlehnout kondenzaci nebo evaporaci. Další informace o uchovávání extraktu vzorků naleznete v příslušných protokolech na adrese Poznámka: Extrakty vzorků QIAsymphony DSP HPV Media obsahují magnetické částice. Vizuálně ověřte přítomnost magnetických částic. Extrakty vzorků bez viditelných množství magnetických částic musí být vyloučeny z dalších analýz. Pokud se během zpracovávání šarže (např. pokud se odstraní hybridizační mikrodestička, která obsahuje extrakty vzorku) otevře zásuvka Eluate, chod se pozastaví a musí se provést kontrola inventáře v zásuvce Eluate. Dbejte na to, aby proběhla úplná kontrola zásuvky Eluate před pokračováním v protokolu. Pro každou hybridizační mikrodestičku je generován soubor s výsledky. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

19 Poznámka: Při pohybech s hybridizační mikrodestičkou nesmí dojít k žádnému rozstřikování extraktů vzorků. Zakryjte desku uzávěrem mikrodestičky poté, co jste ji vyjmuli ze zásuvky "Eluate", a uchovávejte desku zakrytou, jak to jen bude možné. 12. Pokud byly zásobníky s reagenciemi (RC) použité pouze částečně, zapečeťte je ihned po skončení běhu protokolu pomocí dodávaných opětovně použitelných uzavíracích proužků (RSS), aby se zamezilo vypařovaní. Poznámka: Další informace o uchovávání částečně použitých zásobníků s reagenciemi (RC) naleznete v AXpHdirect Beads Obsahuje kyselinu boritou. Nebezpečí! Může poškodit plodnost nebo nenarozené dítě. Obsah/nádobu likvidujte ve schváleném zařízení na likvidaci odpadu. POKUD dojde k zasažení nebo důvodné obavě, že došlo k zasažení: Vyhledejte lékařskou pomoc. Před použitím získejte zvláštní pokyny. Uchovávejte v uzamčeném prostoru. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv, ochranné brýle nebo obličejový štít.. Buffer DNR Obsahuje kyselinu sírovou. Nebezpečí! Způsobuje závažné popáleniny pokožky a poškození očí. Může způsobovat korozi kovů. Obsah/nádobu likvidujte ve schváleném zařízení na likvidaci odpadu. V PŘÍPADĚ ZASAŽENÍ OČÍ: Opatrně oplachujte vodou po dobu několika minut. Pokud zasažená osoba používá kontaktní čočky, vyjměte je (pokud je to možné). Pokračujte v oplachování. V PŘÍPADĚ ZASAŽENÍ POKOŽKY (nebo vlasů): Okamžitě odstraňte/vysvlečte kontaminovaný oděv. Opláchněte pokožku vodou/sprchou. Ihned kontaktujte TOXIKOLOGICKÉ STŘEDISKO nebo lékaře. Uchovávejte v uzamčeném prostoru. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv, ochranné brýle nebo obličejový štít. Buffer STM Varování! Způsobuje mírné podráždění pokožky. V případě, že dojde k podráždění pokožky: Vyhledejte lékařskou pomoc. Uchovávání a nakládání s reagenciemi, strana 8 a v příslušných protokolech na adrese Použité zkumavky na vzorky, destičky a odpad likvidujte podle místních bezpečnostních předpisů. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

20 Varování a bezpečnostní opatření viz strana Fehler! Textmarke nicht definiert.. Poznámka: Vizuálně zkontrolujte všechny zkumavky vzorků, zda byl proveden správný přenos objemu vzorku. Pokud nebyl vzorek přenesen, vzorek je pro další analýzy nepřijatelný. 14. Vyčistěte QIAsymphony SP Postupujte podle pokynů pro údržbu v příručkách uživatele dodávaných s přístrojem. Zajistěte čistění lapače kapek, aby se minimalizovalo riziko křížových kontaminací. 15. Uzavřete zásuvky přístroje a vypněte přívod proudu k QIAsymphony SP. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

21 Řešení problémů V této kapitole naleznete užitečné informace, které Vám mohou pomoci při řešení případných problémů. Více informací lze získat také na internetové stránce naší technické podpory: Vědci z technické podpory QIAGEN vždy rádi zodpoví Vaše otázky ohledně údajů a protokolu v tomto manuálu i obecně k technologiím pro přípravu vzorků a jejich rozbory (možnosti navázání kontaktu viz zadní strana nebo navštivte Obecná manipulace a) Chybová zpráva na dotykové obrazovce Komentáře a návrhy Pokud se objevila chybová zpráva během běhu protokolu, nahlédněte do uživatelské příručky dodávané s Vaším přístrojem. b) Vzorek nebyl přenesen Vzorek byl vyloučen z analýzy kvůli nedostatečnému objemu vzorku. c) Individuální extrakty vzorků neobsahují magnetické částice a) Vzorek byl vyloučen ze zpracování (návěští neplatný) b) Nedostatečná homogenizace suspenze magnetických částic před vložením vaničky s magnetickými částicemi. c) Bylo objednáno a zpracováno více než 88 vzorků bez provedení povinné inventární kontroly. Vznik sraženiny ve vaničce reagenciemi u otevřeného zásobníku a) Odpařování pufru Rozsáhlé vypařování může vést ke zvýšené koncentraci soli v pufrech. Zlikvidujte zásobník s reagenciemi (RC). Pokud je nepoužíváte pro přípravu vzorků, ujistěte se, že jste uzavřeli vaničky s pufry částečně použitých zásobníků s reagenciemi (RC) pomocí opětovně použitelných uzavíracích proužků (RSS). Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

22 b) Uchovávání zásobníků s reagenciemi (RC) Komentáře a návrhy Skladování zásobníků s reagenciemi (RC) při teplotách pod 15 C může vést k tvorbě precipitátů. V případě potřeby vyjměte dotčenou vaničku ze zásobníku s reagenciemi (RC) a inkubujte je po dobu 30 minut ve vodní lázni* při teplotě 37 C za občasného třepání, aby se precipitát rozpustil. Ujistěte se, že je vanička znovu umístěna v správné poloze. Pokud je zásobník s reagenciemi (RC) již propíchnut, ujistěte se, že je vanička zapečetěna pomocí opětovně použitelného uzavíracího proužku (RSS) a inkubujte celý zásobník s reagenciemi (RC) po dobu 30 minut ve vodní lázni* při teplotě 37 C za občasného třepání. Řízení jakosti V souladu se systémem řízení kvality QIAGEN certifikovaným ISO se testuje každá šarže sady QIAsymphony DSP HPV Media vůči předem stanoveným specifikacím, aby se zajistila konzistentní kvalita výrobku. Omezení Chování systému bylo ověřeno v rámci hodnotících studií chování při izolaci buněk z lidských cervikálních vzorků uložených v kapalném cytologickém médiu popsaném v příslušných protokolech v kombinaci s testem digene HC2 High-Risk HPV DNA zpracovaným na systému Rapid Capture. Literatura QIAGEN udržuje rozsáhlou aktuální online databázi vědeckých publikací, které hodnotí produkty QIAGEN. Podrobné volby hledání umožňují nalezení potřebných článků, buďto jednoduchým zadáním klíčových slov nebo upřesněním druhu aplikace, oboru výzkumu, názvu, atd. Úplný seznam literatury naleznete v databance "QIAGEN Reference Database" (Databáze odkazů QIAGEN) na stránce nebo kontaktujte technický servis QIAGEN nebo Vašeho místního distributora. Ujistěte se, že byly přístroje kontrolovány, udržovány a pravidelně kalibrovány podle doporučení výrobce. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

23 Symboly <N> Obsahuje dostatek reagencií pro <N> příprav vzorků Použijte do Prostředek zdravotnické techniky pro in vitro diagnostiku Katalogové číslo Číslo šarže Číslo materiálu (tj. označení dílu) Díly Počet (tj. injekční lahvičky, lahvičky) Objem Teplotní rozmezí Výrobce Pouze pro použití s: Další informace viz návod k použití Obsahuje Hydroxid sodný Číslo jamky Prázdná jamka reagencií Zásobník s reagenciemi Mezinárodní číslo obchodní položky GTIN Upozornění Ostrý okraj Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

24 Kontaktní informace V QIAGEN jsme hrdí na kvalitu a dostupnost naší technické podpory. V našich odděleních technické podpory pracují zkušení vědci s rozsáhlými praktickými a teoretickými zkušenostmi s technologiemi pro přípravu vzorků a jejich analýzu a s použitím produktů QIAGEN. Pokud budete mít jakékoliv dotazy či narazíte na jakékoliv obtíže v souvislosti se sadou QIAsymphony DSP HPV Media nebo výrobky QIAGEN obecně, neváhejte a kontaktujte nás. Zákazníci společnosti QIAGEN jsou hlavním zdrojem informací pro pokročilé a specializované použití našich produktů. Tyto informace jsou velmi užitečné pro ostatní vědce i výzkumníky u společnosti QIAGEN. Proto bychom Vás rádi vyzvali k tomu, abyste nás kontaktovali, pokud máte připomínky k účinnosti produktu nebo návrhy pro nové aplikace a techniky. Pro technickou podporu a více informací navštivte náš technický servis na zavolejte nebo kontaktujte Vašeho místního distributora (viz zadní strana nebo Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

25 Informace o způsobu objednávání Produkt Obsah Kat. č. QIAsymphony DSP HPV Media Kit (2 x 352) Související výrobky QIAsymphony SP Test digene HC2 High- Risk HPV DNA Sample Prep Cartridges, 8-well (336) 8-Rod Covers (144) Reagent Cartridge Holder (2) Tip Disposal Bags (15) Cooling Adapter, MTP, RB, Qsym Filter-Tips, 1500 µl (1024) Hybridization Microplate Microplate Lids Pro 2 x 352 extrakcí vzorků Zahrnuje 2 zásobníky s reagenciemi a příslušenství QIAsymphony sample prep module (Modul pro stanovení vzorků QIAsymphony) Pro 88 cervikálních vzorků (96 testů) jamkové zásobníky pro přípravu vzorků pro použití s přístrojem QIAsymphony SP 8hrotové kryty pro použití s přístrojem QIAsymphony SP Držák zásobníku s reagenciemi pro použití s přístrojem QIAsymphony SP Odpadní sáčky na špičky pro použití s přístrojem QIAsymphony SP/AS Chladicí adaptér pro mikrodestičky s kulatým dnem (MTP) Pro použití se zásuvkou QIAsymphony "Eluate" Jednorázové špičky s filtrem, seskládané; (8 x 128). Pro použití s přístroji QIAcube a QIAsymphony SP Průhledné polystyrénové 96jamkové mikrodestičky (100) Průhledná polystyrénová víka mikrodestiček (100) Aktuální licenční informace a odmítnutí odpovědnosti specifická pro výrobek jsou uvedeny v příručce pro sadu QIAGEN nebo příručce uživatele. Manuály k produktům QIAGEN jsou dostupné na nebo na požádání u technického servisu QIAGEN nebo lokálního distributora. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/

26

27 Tato stránka byla úmyslně ponechána prázdná

28 Tato stránka byla úmyslně ponechána prázdná Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

29 Tato stránka byla úmyslně ponechána prázdná

30 Ochranné známky: QIAGEN, QIAcube, QIAsymphony digene, Rapid Capture, HC2 High-Risk HPV DNA Test (QIAGEN Group). Registrované názvy, ochranné známky atd. použité v tomto dokumentu, a to i v případě, že takto nejsou výslovně označeny, nejsou považovány za zákonem nechráněné. Omezená licenční smlouva pro sadu QIAsymphony DSP HPV Media Použití tohoto výrobku znamená, že jakýkoliv kupující či uživatele sady QIAsymphony DSP HPV Media souhlasí s následujícími podmínkami: 1. Sada QIAsymphony DSP HPV Media smí být používána výlučně v souladu s protokoly dodávanými s výrobkem a Návodem k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) a je určena výlučně pro použití s díly obsaženými v této sadě. QIAGEN neuděluje žádnou licenci k žádnému ze svých práv k duševnímu majetku pro použití nebo začlenění přiložených komponent této sady k jakýmkoliv komponentám nezahrnutým do této sady s výjimkou případů popsaných v protokolech dodávaných s přípravkem, touto brožurou a souvisejícími protokoly, které jsou k dispozici na adresewww.qiagen.com. Některé z dalších protokolů byly poskytnuty uživateli QIAGEN dalším uživatelům QIAGEN. Tyto protokoly nebyly společností QIAGEN podrobně testovány ani optimalizovány. Společnost za ně neručí ani neposkytuje záruky za to, že nebudou porušovat práva třetích stran. 2. QIAGEN neposkytuje žádnou jinou záruku než výslovně stanovené licence v tom smyslu, že tato sada a/nebo její použití nenarušuje práva třetích stran. 3. Tato sada a její díly jsou licencovány k jednorázovému použití a nesmí se používat opakovaně, přepracována ani opakovaně prodávat. 4. QIAGEN specificky odmítá jakékoliv další výslovné nebo nepřímé licence s výjimkou těch, které jsou uvedeny výslovně. 5. Kupující a uživatel této sady souhlasí s tím, že neposkytne a nepovolí nikomu jinému provádět žádné kroky, které by mohly vést nebo by usnadnily jakékoliv shora zakázané činnosti. QIAGEN může zákazy tohoto Omezeného licenčního ujednání prosadit u každého soudu a vyžadovat úhradu všech vyšetřovacích a soudních poplatků, vč. poplatků za advokáta, v rámci jakéhokoliv postupu k prosazení tohoto Omezeného licenčního ujednání nebo jakýchkoliv jiných práv duševního vlastnictví vztahujících se na tuto soupravu a/nebo její komponenty. Pro aktualizovaná licenční ustanovení viz QIAGEN, všechna práva vyhrazena. Návod k použití sady QIAsymphony DSP HPV Media (příručka) 03/2015

31

32 Austria Belgium Denmark Finland France Germany Ireland Italy Luxembourg The Netherlands Norway Sweden Switzerland UK CS