Mikroskopické stanovení sinic

Mikroskopické stanovení sinic Státní zdravotní ústav, 28.6.2012 Petr Pumann

Státní zdravotní ústav Rozpoznat řasy od sinic

Woronichinia naegeliana Botryococcus (zelená řasa) Státní zdravotní ústav

Důležité skupiny planktonních sinic kokální vláknité Chroococcales Oscillatoriales Nostocales

Aerotopy, plynové měchýřky

http://www.amyhremleyfoundation.org/i mages/conservation/gasvesicles-07m.gif http://coel.ecgf.uakron.edu/~ju/images/gasvesicle-sem.jpg

heterocyt

heterocyty

akineta heterocyty

Kokální sinice Státní zdravotní ústav Vodních květů Microcystis M. wesenbergii M. aeruginosa M. viridis M. flos-aquae M. ichthyoblabe Woronichinia naegeliana Planktonní Pikoplanktonní Synechococcus Synechcystis Cyanobium Nanoplanktonní Aphanocapsa Aphanothece Snowella Coelomoron Coelosphaerium Cyanogranis

Microcystis Státní zdravotní ústav Foto: J.Duras

Microcystis spp., Woronichinia naegeliana,

Microcystis spp., Woronichinia naegeliana, zelené řasy

Microcystis aeruginosa 2A Microcystis viridis Microcystis viridis Microcystis aeruginosa Microcystis wesenbergii Microcystis aeruginosa Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav Planktolyngbya limnetica, Microcystis wesenbergii, Microcystis viridis

Microcystis wesenbergii Microcystis flos-aquae?

Microcystis sp. Microcystis viridis

Microcystis wesenbergii

Microcystis viridis M. aeruginosa M. flos-aquae M. ichthyoblabe Státní zdravotní ústav

Woronichinia naegeliana

Woronichinia naegeliana Botryococcus (zelená řasa)

Ceolemoron pusillum Snowella lacustris

Cyanogranis ferruginea Aphanocapsa Aphanocapsa Aphanocapsa

Aphanothece?

Aphanocapsa sp. Státní zdravotní ústav

Aphanothece stagnina sinice (spíše u dna) Foto: Jindřich Duras

Aphanothece stagnina spíše u dna Foto: Jindřich Duras

Vláknité sinice Státní zdravotní ústav Oscillatoriales Důležité taxony Vodní květy Planktothrix P. agardhii P. rubescens P. isothrix Nanoplankton Limnothrix Pseudanabaena Planktolyngya Nárosty (občas uvolňování do volné vody) Phormidium, Oscillatoria, Geitlerinema, Nostocales Důležité taxony Anabaena Aphanizomenon Anabaenopsis Cylindrospermopsis Raphidiopsis Gleotrichia echinulata Probíhají významné změny v taxomonii (rozsekání a přeskupení rodů Anabaena, Aphanizomenon)

Planktothrix agardhii

Planktothrix agardhii Trachelomonas Státní zdravotní ústav

Planktothrix agardhii

Planktolyngbya limnetica Státní zdravotní ústav

Pseudanabaena Limnothrix Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav Nárostové sinice - utržené

zelené nárosty

Stanovení živých organismů Utržené nárostové sinice tzv. oscilatorieta procházející světlo nahoře mrtvá Asterionella, dole mrtvá centrická rozsivka Stanovení živých organismů fluorescence nahoře mrtvá Asterionella, dole mrtvá centrická rozsivka

Utržené nárostové sinice tzv. oscilatorieta

Utržené nárostové sinice tzv. oscilatorieta detail Oscillatoria limosa

nárostové sinice rodu Pseudanabaena (ale to se pouhým okem nepozná)

Anabaena flos-aquae Komárek, J. (1996): Klíč k určování vodních květů sinic v České republice. - pp. 22-85 in Maršálek et al.: Vodní květy sinic. Nadatio Flos-aquae, Brno.

Anabaena flos-aquae - detail akinet Komárek, J. (1996): Klíč k určování vodních květů sinic v České republice. - pp. 22-85 in Maršálek et al.: Vodní květy sinic. Nadatio Flos-aquae, Brno.

Anabaena sp.

Aphanizomenon sp.

Aphanizomenon flos-aquae

Státní zdravotní ústav Aphanizomenon aphanizomenoides

Anabena spiroides Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav

Pseudanabaena limnetica Aphanizomenon gracile Anabaenopsis Státní zdravotní ústav

Planktothrix agardhii Aphanizomenon Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav příměs vláknitých sinic Raphidiopsis?; Planktothrix

Hostivař, 6.8.2007 12:00; šířka všech vláken kolem 2,5 µm Raphidiopsis mediterranea Aphanizomenon issatschenkoi

Anabaena bergii Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav Anabaena bergii

Znaky vlákno je zakončeno špičatou buňkou ke konci vlákna se buňky prodlužují Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav Anabaena tenericaulis

Anabaena tenericaulis Nygaard 1949 Tabule převzata od Elišky Zapomělové Máchovo fishpond, Czech Republic Trichome width 2-3 m Akinetes 13-40 x 5-6.7 m (Nygaard in Starmach 1966)

Gloeotrichia echinulata (vzácná sinice vodních květů - 3. potvrzený nález na území ČR po 2.světové válce) Foto: Jindřich Duras

Gloeotrichia echinulata Foto: Jindřich Duras

Gloeotrichia echinulata Foto: Josef Hess

Cylindrospermopsis raciborskii Planktothrix agardhii

Státní zdravotní ústav Kvantifikace

ČSN 75 7717 kokální sinice? Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav ČSN 75 7717 vláknité sinice

Představa o přítomných sinicích údaje z odběrového protokolu (pozorování typických kolonií ve vodním sloupci, průhlednost,..) smyslové posouzení vzorku v laboratoři taxonomická determinace (většinou nutné zahustit - membránová filtrace) Státní zdravotní ústav

Postup pro stanovení kokálních sinic - podrobně Státní zdravotní ústav

Dezintegrace přidání KOH mechanicky standardně 5 ml vzorku, ale někdy nemusí být dostatečné Státní zdravotní ústav

Státní zdravotní ústav Alternativy homogenizátor Převzato z literatury Potter-Evehjem Bernard C, Monis P, Baker P (2004): Disaggregation of colonies of Microcystis (Cyanobacteria): efficiency of two techniques assessed using an image analysis system. Journal of Applied Phycology 16(2): 117-123. ALE dělali jen na dobře dezintegravtelných taxonech na M.viridis a M. wesenbergii moc nefunguje

Ultrazvukový homogenizátor Dobrý ale drahý (ve srovnání s injekční stříkačkou) Je nutné větší množství vzorku (což je však spíš výhoda) Státní zdravotní ústav http://www.maneko.cz/images/karta/stredni/v211_maneko.jpg

Státní zdravotní ústav Zahušťování

Odstřeďování před po Státní zdravotní ústav

Zahušťování - ultrafiltrace snadno přenosné, rychlé, nemusí se rozbíjet aerotopy ALE při vyšším oživení se ucpává ztráty (alespoň u mě ) není možno koupit Státní zdravotní ústav

Počítání v Cyrusově, Burkrově komůrce je možno využít fluorescenci kontrolovat dezintegraci kontrolovat, zda se nevznáší část buněk u krycího skla Státní zdravotní ústav

Dělící se buňky A B C D E 1 buňka 1 buňka 1 buňka 2 buňky 2 buňky Státní zdravotní ústav Cyanobakterie, 21.1.2004, Brno

Metodické problémy - velmi malé buňky Státní zdravotní ústav

Cyanogranis Romeria Koloniální sinice s drobnými buňkami Merismopedia Aphanothece Merismopedia Cyanodictyon Cyanocatena Aphanocapsa Státní zdravotní ústav

Velmi malé buňky pro koupací vody nepočítají se buňky menší než 2µm Planktolyngbya??????? Státní zdravotní ústav

Možnost využít tenké sklo a/nebo fluorescenci využít lepších optických vlastností tenkého krycího skla není dodržena standardní výška komůrky stanovení pouze orientační (cca 90% původního objemu) Státní zdravotní ústav

Vláknité sinice - podrobně Státní zdravotní ústav

Lugol! Problém - lyze buněk při přepravě a zpracování Státní zdravotní ústav

Zahuštění nutno častěji zahušťovat než kokální sinice při zahušťování centrifugací Lugolem fixovaných vzorků nebývá problém s velkými ztrátami ALE... Státní zdravotní ústav

Problém nezřetelné buňky především pro Planktothrix a Aphanizomenon 1 buňka = 5 µm Státní zdravotní ústav

počítání 250µm Státní zdravotní ústav

Taxon 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20? Aphanizomenon gracile 250

Státní zdravotní ústav 200µm

Taxon 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20? Aphanizomenon gracile 250 Planktothrix agardhii 200

Státní zdravotní ústav 180µm

Taxon 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20? Aphanizomenon gracile 250 Planktothrix agardhii 200 Aphanizomenon flos-aquae 180

Problém Planktothrix nehomogenita při plnění komůrky Státní zdravotní ústav

Výpočet Počet buněk/ml = B Pk Vz (Vd+VKOH) Pp Vp Vk Vd B počet napočítaných buněk Pp propočítaná plocha komůrky vyjádřená v mm2, počtem polí, pásů, aj. Pk celková plocha komůrky uvedená ve stejných jednotkách jako Pp Vd objem vzorku použitý k dezintegraci v ml VKOH objem přidaného dezintegračního činidla v ml (KOH, formalín, Lugolovo činidlo, HCl*) Vp objem vzorku použitého ke koncentraci v ml Vz objem zahuštěného vzorku v ml Vk objem komůrky v ml** *V případě Lugolova činidla nebo formalínu většinou můžeme zanedbat. ** Pro komůrku Cyrus I je objem 0,01ml. Státní zdravotní ústav

Případ Pseudanabaena mucicola podle ČSN 75 7717 se nepočítá, protože bývá vzhledem k biomase Microcystis zanedbatelná Státní zdravotní ústav

Zabezpečování kvality (Příloha C) Státní zdravotní ústav Interní kontrola ověření výtěžnosti zahuštění podchycení ztrát při dezintegraci Externí kontrola zpracovávat část vzorků společně s další laboratoří vhodné především pro vzorky, které se nevydávají pro MPZ (Anabaena, Aphanizomenon) Kvalifikace pracovníků determinace alespoň 20 vzorků s různým složením pod dohledem zkušeného pracovníka kvantifikace alespoň 5 různých vzorků sinic pod dohledem

Objemová biomasa Státní zdravotní ústav u přírodních koupacích vod je výrazně lepší jen pro některé taxony měřit nebo tabelované hodnoty? neměřit je rychlejší a vede k větší shodě mezi laboratořemi zvláště pro některé taxony mohou být údaje velmi proměnlivé MPZ zatím docela tragédie změny objemu po přidání Lugolu (Hawkins et al (2005). Harmful Algae 4: 1033-1043