UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ. VYUŽITÍ DSC KE STANOVENÍ OBSAHU LÉČIVÝCH LÁTEK ll.

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ Katedra farmaceutické technologie VYUŽITÍ DSC KE STANOVENÍ OBSAHU LÉČIVÝCH LÁTEK ll. Use of DSC to determinate volume of active substances ll. Rigorózní práce Vedoucí práce: RNDr. Marie Musilová, CSc. Hradec Králové 2013 Mgr. Eva Víchová 1

PROHLÁŠENÍ Prohlašuji, že tato práce je mým původním autorským dílem, které jsem vypracovala samostatně. Veškerá literatura a další zdroje, z nichž jsem při zpracování čerpala, jsou uvedeny v seznamu použité literatury a v práci řádně citovány. Práce nebyla využita k získání jiného nebo stejného titulu. Na tomto místě bych ráda poděkovala RNDr. Marii Musilové, CSc. za odborné vedení a pomoc při vypracování této práce. 2

ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Eva Víchová Konzultant RNDr. Marie Musilová, CSc. Název rigorózní práce Využití DSC ke stanovení obsahu léčivých látek ll Tato práce hodnotí komerčně vyráběné čípky Panadol Baby z hlediska obsahu paracetamolu. K hodnocení využívá diferenciální skenovací kalorimetrie. Při použití této metody se zjišťuje množství tepla potřebné na roztátí paracetamolu. Množství tepla je přímo úměrné množství léčiva ve vzorku. Obsah je potom vypočítáván z rovnice kalibrační křivky. V práci jsou uvedeny záznamy měření celkem dvaceti odebraných vzorků přípravku a záznamy vzorků ke kalibrační křivce. Ve špičkách čípků byl zjištěn vyšší obsah paracetamolu než v kruhových základnách. U všech vzorků byl zjištěn nižší obsah než deklarovaný. Doporučujeme porovnat výsledky získané pomocí DSC s jinou analytickou metodou. 3

ABSTRACT Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Department of Pharmaceutical Technology Candidate Mgr. Eva Víchová Consultant RNDr. Marie Musilová, CSc. Title of Thesis Use of DSC to determinate volume of active substances ll This thesis deals with the determination of paracetamol in commercially produced Panadol Baby suppositories. Differential scanning calorimetry was used for this evaluation. This method detects the amount of heat needed to melt paracetamol. The heat quantity is directly proportional to the amount of the drug in the sample. The content is then calculated from the equation of the calibration curve. The thesis includes the measurement record of total twenty samples and the samples deals with the calibration curve. There was found higher content of paracetamol in the tips than in the circular bases. For all samples there was found lower content of drug than was declared. We recommend to compare the results obtained by DSC with another analytical method. 4

OBSAH: 1 ZADÁNÍ PRÁCE 2 ÚVOD 3 TEORETICKÁ ČÁST 3.1 REKTÁLNÍ ČÍPKY (SUPPOSITORIA RECTALIA) 3.2 VÝROBA ČÍPKŮ 3.3 PŘÍPRAVA ČÍPKŮ 3.4 PRIMÁRNÍ OBALY 3.5 DIFERENČNÍ SKENOVACÍ KALORIMETRIE (DSC) 3.6 OBSAHOVÁ STEJNOMĚRNOST 3.7 STEJNOMĚRNOST DÁVKOVÝCH JEDNOTEK 4 EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST 4.1 SUROVINY 4.2 PŘÍSTROJE 4.3 PŘÍPRAVA VZORKŮ A PRACOVNÍ POSTUP 5 DISKUZE 6 ZÁVĚR 7 SEZNAM ZKRATEK 8 POUŽITÁ LITERATURA 5

1. Zadání práce V této práci bude využita diferenční skenovací kalorimetrie ke stanovení obsahu paracetamolu v komerčně vyráběném přípravku Panadol Baby. Jedná se o jednogramové čípky odlévané přímo do obalu z plastu. V předchozí práci Mgr. Pavly Melezínkové (1), která zjišťovala, jaká léčiva lze pomocí diferenční skenovací kalorimetrie stanovovat, byl u tohoto přípravku naměřen výrazně nižší obsah paracetamolu ve srovnání s deklarovanou hodnotou. Tato práce bude zaměřena na detailnější prozkoumání obsahu paracetamolu v uvedeném přípravku. K hodnocení bude vzato celé balení čípků. Z důvodu možné sedimentace budou z každého čípku odebrány dva vzorky, jeden z dolní části a jeden z horní části čípku. Metodou diferenční skenovací kalorimetrie se bude stanovovat množství tepla potřebného na roztátí paracetamolu. Množství tohoto tepla je přímo úměrné inkorporovanému množství paracetamolu. Množství paracetamolu v čípku pak bude odečteno z kalibrační křivky. Čípky budou hodnoceny z hlediska požadavku lékopisu na hmotnostní a obsahovou stejnoměrnost a stejnoměrnost dávkových jednotek. 6

2. Úvod Tato práce využívá diferenční skenovací kalorimetrii pro stanovení obsahu paracetamolu v přípravku Panadol Baby. Panadol Baby je komerčně vyráběný přípravek firmy GlaxoSmithKline s. r. o. Jedná se o jednogramové čípky obsahující jako léčivou látku paracetamol. V použitém čípkovém základě se paracetamol nerozpouští, je suspendován a proto při ohřevu vzorku na záznamu DSC je vidět pík tání této látky. Plocha pod píkem představuje teplo potřebné na roztátí. Množství tohoto tepla je přímo úměrné inkorporovanému množství léčiva. Pomocí kalibrační křivky se proto dá obsah léčiva stanovit. Většina vyráběných čípků tvoří čípky suspenzní, kdy léčivo není v čípkovém základě rozpuštěno. Teoreticky by tedy tyto látky měly být pomocí diferenční skenovací kalorimetrie stanovitelné. Problém představuje skutečnost, že většina používaných léčiv se za vysokých teplot, při kterých tají, již v čípkových základech rozpouští. Výjimku tvoří několik léčiv, mezi něž patří i paracetamol. Stanovení obsahu paracetamolu v čípcích pomocí diferenční skenovací kalorimetrie bylo v odborné literatuře již několikrát popsáno. Jako výhoda je považována rychlost stanovení, přesnost, a dále jako podstatná věc skutečnost, že není před vlastním stanovením nutno separovat léčivo od čípkového základu. Toto vše mluví ve prospěch využití diferenční skenovací kalorimetrie. Na druhé straně je ale nutné vidět i určité nevýhody této metody. Jedná se finančně o poměrně nákladné stanovení. Poněvadž se k analýze bere velmi malé množství vzorku (řádově mg), v případě nehomogenity může dojít ke zkreslení výsledných hodnot. Z tohoto důvodu je nutné provádět analýzu na větším množství vzorků. V této práci je provedeno hodnocení dětských čípků Panadol Baby. K analýze je vzato celé originální balení, z každého čípku jsou odebírány dva vzorky, jeden z části špička a jeden z části základna. Přípravek hodnotíme z hlediska požadavku lékopisu na hmotnostní a obsahovou stejnoměrnost a stejnoměrnost dávkových jednotek. 7

3 TEORTICKÁ ČÁST 3.1. Rektální čípky (Suppositoria rectalia) Rektální čípky jsou tuhé jednodávkové přípravky připravené litím nebo lisováním. Obsahují jednu nebo více léčivých látek dispergovaných nebo rozpuštěných v čípkovém základě a další pomocné látky (2). Tvar čípků může být torpédovitý, kuželovitý nebo válcovitý. Pro dospělé se vyrábí čípky o hmotnosti 2-3 g, pro děti o hmotnosti 1 g (3). Čípkový základ je při běžné teplotě v místnosti tuhý, při tělesné teplotě kolem 36 C taje, teplotní interval tání je malý nebo je základ rozpustný ve vodě. Charakteristické pro čípkový základ jsou vysoká viskozita taveniny, rychlé tuhnutí, kompatibilita s léčivou látkou, dobrá stabilita, snášenlivost a vhodné uvolňování (rychlost) léčivé látky. Pomocné látky jsou různá plniva, adsorbenty, tenzidy, klouzadla, protimikrobní látky a barviva. Tyto mohou zvyšovat teplotu tání, viskozitu, nebo usnadňující rozpouštění. Dále jsou to různá barviva a stabilizátory (4). Účinky čípků jsou lokální nebo celkové. Při celkovém účinku dochází z větší části k vstřebávání léčiva sliznicí konečníku do dolní duté žíly, léčivo obchází játra (došlo by k metabolické reakci léčivé látky) a dostává se do velkého krevního oběhu. To je výhodou u léčiv, které vykazují vysoký tzv. First pass effekt. (5). Léčivá látka dále není znehodnocována trávicími enzymy, nenarušuje žaludeční sliznici. Užití čípků je vhodnou volbou, má-li léčivá látka nepříjemnou chuť a nelze-li ji podat perorálně. 8

S výhodou lze čípky použít u malých dětí, pro zvracející pacienty, pro staré lidi, při bezvědomí, nebo je-li nutný rychlý účinek (6). V pediatrii podáváme čípky s obsahem paracetamolu a ibuprofenu (7). K léčbě pooperační bolesti jsou určeny čípky obsahující tramadol (8). K léčbě zvracení ondasetron (9). K léčbě migrén u žen v období menstruace se jeví výhodnější užití sumatriptanu v čípkové formě než ve formě tablet (10). 9

3.2. Výroba čípků Podle výroby lze čípky rozdělit na hromadně vyráběné či individuálně připravované V hromadné výrobě se čípky vyrábí odléváním nebo lisováním. Aby konečné produkty měly požadovanou jakost a odpovídaly požadavkům povolení k činnosti a rozhodnutí o registraci (registrační dokumentaci), musí jednotlivé výrobní operace probíhat ve shodě s jednoznačně definovanými postupy a musí být zachovány zásady správné výrobní praxe (11). ODLÉVÁNÍ DO TVAROVANÝCH FOLIÍ Výroba začíná přípravou čípkoviny. Homogenita čípkoviny je zajištěna přesným výrobním postupem správnou teplotou, tlakem, atd. Dále se čípkovina tvaruje a poté postupně chladí. Vyrobená balení rovněž prochází kontrolou. ODLÉVÁNÍ DO KOVOVÝCH FOREM Připravená čípkovina se odlévá do forem. Čípky se po ochlazení balí do teplem lepitelné celofánové nebo jiné fólie a vkládají se do kartonových skládacích obalů. Při odlévání se mohou objevit chyby. Jejich příčiny a možnosti odstranění jsou uvedeny dále v tab. Chyby při odlévání čípků (viz. Str. 13 ) LISOVÁNÍ Lisování se provádí na speciálních lisech pro výrobu čípků. Výhodou lisování je malá tepelná zátěž léčiva, malá pravděpodobnost interakce léčiva a základu i stejnoměrné rozdělení léčiva v čípku, protože odpadá jeho sedimentace v roztaveném základu. Lisováním lze připravit čípky s větším obsahem léčiva než metodou lití (12). Nevýhodou je potřeba jemně mletých základů a stroje na balení čípků, nutnost chlazení lisu a menší hodinový výkon než při lití. 10

3.3. Příprava čípků RUČNÍ FORMOVÁNÍ Jedná se o zastaralou metodu, kterou lze užít k přípravě malého počtu čípků. Dnes se již nepoužívá a možné využití by mohla najít v nouzových případech, nelze-li použít jiný způsob přípravy. Je to nejstarší a nejjednodušší metoda, kdy účinná látka je rozmělněna na jemný prášek a smísená s čípkovým základem v třecí misce. Vzniklá hmota se ručně válí do tvaru válečku. Ten je nakrájen na kousky a na jeho jednom konci se vytvoří špička. LISOVÁNÍ Sypká homogenní směs čípkového základu a účinné látky se tvaruje na ručním lisu. Je to jednoduchá metoda, kdy vznikající čípky jsou vizuálně vhodnější než ručně tvarované. Při této metodě nedochází k sedimentaci pevných látek v čípkovém základě a je vhodná pro tepelně labilní látky. LITÍ Používá se čípková forma, která je vyrobena z kovu, nebo plastu. Klasické kovové formy jsou rozděleny na dvě poloviny. Základ se roztaví, pozor musíme dávat na přehřátí základu. K účinné látce se po částech přidá roztavený základ, směs se homogenizuje a následuje odlévání krémovité hmoty do formy. K zamezení přilnutí čípkové hmoty k formě se užívají látky opačné polarity než je základ. Po ztuhnutí taveniny získáme čípky kuželovitého tvaru. Při výrobě čípků hrají důležitou roli čípkové základy, které tvoří podstatnou část čípkoviny, a proto jsou na ně kladeny velmi přísné požadavky (4). Užitím různých druhů základů při výrobě čípků lze docílit zlepšení 11

biodostupnosti a výhodnějšího uvolnění léčivé látky, které závisí na rozpustnosti léčivé látky v čípkovém základu, složení základu, velikosti částic léčivé látky (13). Reologické vlastnosti čípků jsou předurčeny množstvím účinné látky, pomocnými látkami a jejich povahou. Někdy přítomnost účinné látky může zvyšovat viskozitu základu a tím snižovat jeho biologickou dostupnost snížením absorpční plochy. Biologická dostupnost může být zvýšena přidáním emulgátorů (14). Emulgátory lze využít k emulgaci hydrofilních léčivých látek do hydrofobního základu. Hydrofilní základy mají omezené využití z důvodu dráždivosti způsobené absorpcí vody ze sliznice rekta a následného vyvolání defekačního reflexu (15). Dále bylo popsáno např. přidání Tweenu 80 k čípkové směsi, aby se zvýšila rychlost rozpouštění salbutamolu. Lineární závislost mezi rychlostí uvolňování salbutamolu a množstvím surfaktantu v čípkovitě byla prokázaná (16) Dalším příkladem je zvýšení viskozity pomocí včelího vosku. Takto je možno ovlivňovat rychlost uvolňování léčiv z mastných čípkových základů pro udržení koncentrace v plazmě po delší dobu (17). V dnešní době probíhá mnoho studií optimalizace výrobních postupů pro výrobu nových rektálních přípravků. Jednou z takových studií je navrhnout potenciální pediatrickou rektální formulaci azithromycinu jako alternativu k existujícím ústním nebo injekčním přípravkům pro (nouzové) využití v tropickém venkovském prostředí, zejména pro děti, které nemohou brát léky ústně. Požadavky na cílový produkt jsou snadné použití, nízká cena, stabilita v tropických podmínkách, biologická dostupnost srovnatelná s perorální formou, rychle dosažení a udržení baktericidní koncentrace (18). 12

Tab. č. 1 Chyby při odlévání čípků (4) Chyba Příčina Odstranění Znečištěniny v čípku Zbytky obalů a základů Kapalný roztavený základ filtrovat Nestejnorodost taveniny Odpaření vody, lihu nebo těkavých součástí, sedimentace, inkompatibility Intenzivněji mísit, snížit teplotu, léčiva rozdrobnit, zmenšit velikost šarže, směs homogenizovat, použít roztěry léčiv, přísada látek zabraňujících sedimentaci Zvýšená viskozita taveniny příliš velký podíl tuhých látek, nízká teplota tavení, interakce léčivo- základ zmenšit velikost šarže, použít látky bez krystalické vody, nemikronizovat, přidat tenzidy, použít základ s nízkým hydroxylovým číslem, zvětšit objem čípků Vmísení vzduchu příliš velká rychlost míchání, nevhodný typ míchadla, velký obsah tenzidu snížit rychlost mísení, opravit složení čípkoviny, použít evakuaci při mísení Vytváření trhlin a nálevkových otvorů Lepení čípků ve formách Lomivé čípky nevyhovující základ, vysoká teplota odlévání, rychlé a přílišné ochlazení, zkondenzovaná voda ve formách nevyhovující doba chlazení, chybné formy, nevhodný základ, malá objemová kontrakce čípkoviny velký podíl tuhé fáze, sedimentace, vzduchové bubliny, prudké ochlazení vybrat základ s vyšším hydroxylovým číslem, tavit jen do krémového stavu, vynechat chlazení prodloužit dobu chlazení, vyleštit formy, použít základ s vyšší objemovou kontrakci změnit poměr účinné látky a základu, upravit míchání, vybrat vhodný základ, upravit chlazení Snížení teploty tání čípkoviny léčivo je rozpustné v základě přidat základ s vyšší teplotou tání Sedimentace léčiva pomalé tuhnutí čípku, léčivo má velkou hustotu -použít základ s malým rozdílem mezi teplotou tání a tuhnutí, s vyšším hydroxylovým číslem Tabulka ukazuje na možné chyby, ke kterým dochází při výrobě čípků litím. Dále jsou zde zmíněny jejich příčiny a možnosti jejich odstranění 13

Příliš vysoká viskozita vede k obtížnému vylévání čípků. Naopak při nízké viskozitě u suspenzních čípků, kterých je převážná část, hrozí sedimentaci léčiva do špičky, a tím dochází k nerovnoměrnému rozdělení léčiva v čípku. Zvýšením viskozity čípkového základu dojde k snížení sedimentatce. K zvýšení viskozity slouží různé pomocné látky (19). Z důvodu nerovnoměrného rozptýlení léčivé látky v celém čípku k dosáhnutí optimální dávky, není vhodné podélné půlení, jak může být v pediatrické praxi doporučováno (20). Vysoké teploty při odlévání čípků mohou ovlivnit účinnou látku, není-li v těchto podmínkách stálá (21). 14

Obr. č. 1 Licí formy na čípky firmy Helago-cz s.r.o. (22) Obr. č. 2 Automatický stroj na výrobu čípků firmy Sarong (23) 15

3.4 Primární obaly pro čípky Primární obal musí pro čípky splňovat tyto požadavky: - dostatečná těsnost - nepropustnost pro kyslík a světlo - dostatečná mechanická ochrana proti tvarové deformaci Typy balení čípků: - odlévání do předem vytvarovaných obalů z teplem svařitelných fólií - obaly, které se formují přímo na balící lince z fólie plastu (jednoduché fólie z neměkčeného polyvinylchloridu a polystyrolu nebo vrstvené folie, např. polyvinylchlorid-polyetylén, polyvinylchlorid-polyvinylidenchlorid) Při výrobě čípků lze využít speciální postupy: čípky s obalem opatřeným tzv. V-násekem jsou vhodné vzhledem ke snazšímu otevírání, různé perforace slouží pro odtrhávání jednotlivých produktů, či otevíracím systémem tzv. peel-off, který napomáhá oddělit od sebe oba filmy. Lisberg a spol. (24) poukazují na problematické vyjímání čípků z obalů u lidí z revmatoidní artritidou. Vzhledem k pohybovému omezení pro ně může být vyjmutí čípku nesnadné. Obaly napomáhají při rozlišování síly léčivé látky u jednotlivých přípravků. Vhodné je čípky lišící se obsahem účinné látky navzájem odlišit např. velikostí obalu, velikostí písma, barvou, apod. (25). 16

Obr. č. 3 Film z PVC od firmy Sarong s.r.o. (26) Obr. č. 4 Předformované obaly na čípky firmy Sarong systém peel-off a v- násek (27) 17

3.5. Diferenční skenovací kalorimetrie (DSC) Diferenční skenovací kalorimetrie je jednou z metod termické analýzy. Pojem diferenční vyjadřuje to, že se měřená teplota vzorku plynule porovnává s teplotou referenčního materiálu. Kalorimetrie je zejména použita pro sledování změn fázových přechodů. (28; 29). Metoda se používá v chemii, biochemii, biotechnologii, farmakologii, buněčné biologii a v nanotechnologiích (30). DSC se běžně používá pro studium biochemických reakcí (28), v potravinářství, sklářství, kosmetice, elektronice, technologii polymerů, v chemickém a strojním průmyslu (31). Pro svou přesnost a spolehlivost bývá DSC také součástí výzkumných a vývojových laboratoří farmaceutického průmyslu (32). 18

3.6. Obsahová stejnoměrnost Zkouška na obsahovou stejnoměrnost jednodávkových lékových forem je založena na stanovení jednotlivých obsahů léčivé látka v předepsaném počtu jednotek zkoušeného přípravku a určení, zda jednotlivé obsahy jsou v povolených mezích vzhledem k průměrné hodnotě obsahu. Tato zkouška se provádí u všech jednodávkových forem. Postup zkoušky: Za použití vhodné analytické metody se stanoví jednotlivě obsahy léčivé látky u deseti namátkově vybraných jednotek zkoušeného přípravku. V roce 2004 bylo zjištěno, že ve srovnání se spektrofotometrii, byly i metodou DSC získány statisticky shodné výsledky při hodnocení paracetamolu. Vzorky k analýze byly odebrány z báze, špičky a středu čípků a hodnoceno bylo množství obsahu paracetamolu v jednotlivých částech čípků (33). Lineární závislost mezi obsahem léčivé látky a její teplotou tání byla potvrzena i dalšími autory (34). Ke zhodnocení se dle lékopisu se používají tato kritéria: Přípravek vyhovuje zkoušce, jestliže nejvýše jeden jednotlivý obsah účinné látky je mimo rozmezí 85% až 115% průměrného obsahu a žádný není mimo rozmezí 75% až 125% průměrného obsahu účinné látky. Přípravek nevyhovuje zkoušce, jestliže více než tři jednotlivé obsahy jsou mimo rozmezí 85% až 115% průměrného obsahu nebo jestliže je jeden nebo více jednotlivých obsahů mimo rozmezí 75% až 125% průměrného obsahu. Jestliže dva nebo tři jednotlivé obsahy účinné látky jsou mimo rozmezí 85% až 115% a žádný není mimo rozmezí 75 až 125%, stanoví se jednotlivě obsah účinné látky u náhodně vybraných dalších 20 jednotek zkoušeného přípravku. Přípravek vyhovuje zkoušce, jestliže nejvýše tři jednotlivé obsahy z 30 jednotek zkoušeného přípravku jsou mimo rozmezí 85% až 115% průměrného obsahu a žádný jednotlivý obsah účinné látky není mimo rozmezí 75% až 125% průměrného obsahu účinné látky (2). 19

3.7. Stejnoměrnost dávkových jednotek V lékopisné zkoušce na Obsahovou stejnoměrnost se hodnotí, zda se obsahy v jednotlivých přípravcích liší od průměrné zjištěné hodnoty. Vyhovovat mohou všechny přípravky, u nichž je rozdíl v povoleném limitu, bez ohledu na to, zda obsah je nebo není v deklarované hodnotě. Z tohoto důvodu uvádí lékopis ještě zkoušku Stanovení stejnoměrnosti dávkových jednotek. Tato zkouška již bere do úvahy deklarovanou hodnotu léčiva a hodnotí, zda obsahy v jednotlivých přípravcích se liší od deklarovaného jen v povoleném rozmezí. Při této zkoušce se vypočítává hodnota přijatelnosti, při níž ještě přípravky vyhovují. Přesný popis postupu zkoušky je uveden v lékopise (2). 20

4 EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST 4.1 Použité suroviny Adeps solidus Ph. Eur. 7.0 Šarže: 011125 Atest: 0018/0111/538 Dodavatel:Dr. Kulich Pharma s.r.o., Hradec Králové, ČR Paracetamol Ph. Eur. 7.0 Šarže:0611195 RR Atest:0421/1011/538 Dodavatel: Dr. Kulich Pharma s.r.o., Hradec Králové,ČR Panadol Baby čípky -registrační číslo Súkl:07/606/96-C -výrobce GlaxoSmithKline -expirace:01/2017 -šarže:k005 Složení: -paracetamol -ztužený tuk -10 čípků v bílém neprůhledném PVC/PE stripu 21

4.2 Přístroje název typ výrobce Diferenční skenovací kalorimetr DSC 200 F3 Maia NETZSCH Geratebau GmbH, Selb, Německo Digitální analytické váhy CAHN 26 CAHN Instruments, USA Váhy OHAUS Discovery Ohaus Corporation, Pine Brook, USA Lékárenská infralampa IL 1 HEROS Výrobna lékárenské techniky, Olomouc, ČR 22

4.3 Příprava vzorků a pracovní postup Příprava vzorků na kalibrační křivku: -vzorky byly zhotoveny roztavením čípkového základu pod infralampou a v nataveném základu byla dispergována LL -po homogenizaci byla směs odlita na hliníkovou folii -vzorky byly odebrány po ztuhnutí ze středu směsi -celkem bylo připraveno devět koncentrací paracetamolu -vyhodnocování a určování píků pro paracetamol na kalibrační křivku -kalibrační křivka slouží k učení množství paracetamolu v měřených čípcích Příprava vzorků z přípravku Panadol Baby: -čípky byly vyndány z obalu a každý byl zvážen na analytických vahách -z obou konců každého čípku byla odstraněna část čípkoviny -zbyla hmota zhruba v délce 2/3 původní délky čípku -z každého konce byl odebrán jeden vzorek dále značený jako špička nebo základna Měření DSC -vzorky o hmotnosti cca 10 mg byly vloženy do hliníkových kelímků s víčkem o objemu 25 mg. Vzorek byl na ručním lisu uzavřen a zvážen. - měření na diferenčním skenovacím kalorimetru DSC 200 F3 Maia probíhalo za následujících podmínek: -zchlazení na 20 C, -izoterma při teplotě 20 C po dobu 5 minut -zahřívání na teplotu 195 C rychlostí 10,00K/min -chlazení na teplotu 25 C rychlostí 10,00K/min 23

Vyhodnocení záznamu měření: Podle software firmy Netsch se ze záznamu DSC určí plocha pod křivkou ( píkem tání paracetamolu). Tato plocha ΔH představuje množství tepla potřebného na roztátí paracetamolu. Z kalibrační křivky představující závislost mezi množstvím paracetamolu a množstvím tepla potřebného na jeho roztátí se potom určí množství paracetamolu v měřeném vzorku. Dále se určovala teplota T max a T onset 24

Graf č.1 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 6,91044% Složení vzorku: paracetamol-0,06966g, čípkový základ-0,93838g navážka na měření-9,556mg paracetamol v navážce-0,6603mg a)záznam měření b)detail píku paracetamolu Odečtené hodnoty: H (J/g) 10.82, 10.84, 10.74, 10.78 H=10,795J/g Navážce vzorku 9,556mg odpovídá H 10,795J/g Navážce vzorku 9,556mg odpovídá H 0,103157J Navážce paracetamolu 0,6603mg odpovídá H 0,103157J 25

Graf č.2 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 8,0496% Složení vzorku: paracetamol-0,08013g, čípkový základ-0,91532g navážka na měření-9,348mg paracetamol v navážce-0,7524mg a)záznam měření b)detail píku pro paracetamol Odečtené hodnoty: H(J/g) 11.48, 11.29, 11.29, 11.02 H=11.27J/g Navážce vzorku 9,348mg odpovídá H 11,27J/g Navážce vzorku 9,348mg odpovídá H 0,1053519J Navážce paracetamolu 0,7524mg odpovídá H 0,1053519J 26

Graf č.3 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 9,07211% Složení vzorku: paracetamol-0,09041g, čípkový základ-0,90616g navážka na měření-8,581mg paracetamol v navážce-0,7784mg a)záznam měření b)detail píku paracetamolu Odečtené hodnoty: H(J/g) 16.54, 16.54, 16.82, 17.32 H=16,805J/g Navážce vzorku 8,581mg odpovídá H 16,805/g Navážce vzorku 8,581mg odpovídá H 0,1442037J Navážce paracetamolu 0,7784mg odpovídá H 0,1442037J 27

Graf č.4 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 10,06438% Složení vzorku: paracetamol-0,10066g, čípkový základ-0,8995g navážka na měření-9,427mg paracetamol v navážce-0,9487mg a)záznam měření b)detail píku paracetamolu Odečtené hodnoty: H(J/g) 16.03,15.87,15.41,16.39 H=15,925J/g Navážce vzorku 9,427mg odpovídá H 15,925J/g Navážce vzorku 9,427mg odpovídá H 0,151249J Navážce paracetamolu 0,9487mg odpovídá H 0,151249J 28

Graf č.5 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 11,0384% Složení vzorku: paracetamol-0,11045g, čípkový základ-0,89329g navážka na měření-9,530mg paracetamol v navážce-1,0486mg a)záznam měření b)detail píku paracetamolu Odečtené hodnoty: H(J/g) 18.95,19.75,19.27,18.99 H=19,075J/g Navážce vzorku 9,530mg odpovídá H 19,075J/g Navážce vzorku 9,530mg odpovídá H 0,1817847J Navážce paracetamolu 1,0486mg odpovídá H 0,1817847J 29

Graf č.6 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 12% Složení vzorku: paracetamol-0,1200g, čípkový základ-0,8800g navážka na měření-10,074mg paracetamol v navážce-1,2088mg a)záznam měření b) Detail píku pro paracetamol Odečtené hodnoty: H(J/g) 16.61, 17.27, 16.57, 16.73 H=16,795J/g Navážce vzorku 10,074 mg odpovídá H 16,795J/g Navážce vzorku 10,074 mg odpovídá H 0,1691928J Navážce paracetamolu 1,2088mg odpovídá H 0,1691928J 30

Graf č.7 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 13,06906% Složení vzorku: paracetamol-0,13105g, čípkový základ-0,8717g navážka na měření-9,01mg paracetamol v navážce-1,1775mg a)záznam měření b) Detail píku pro paracetamol Odečtené hodnoty: H(J/g) 20.6, 20.45, 20.65, 20.02 H=20,43J/g Navážce vzorku 9,01 mg odpovídá H 20,43J/g Navážce vzorku 9,01 mg odpovídá H 0,1840743J Navážce paracetamolu 1,1775mg odpovídá H 0,1840743J 31

Graf č.8 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 13,93745% Složení vzorku: paracetamol-0,1395g, čípkový základ-0,8614g navážka na měření-10,703mg paracetamol v navážce-1,4917mg a)záznam měření b)detail píku pro paracetamol Odečtené hodnoty: H(J/g) 25.44, 24.73, 25.01, 25.09 H=25,068J/g Navážce vzorku 10,703mg odpovídá H 25,068J/g Navážce vzorku 10,703 mg odpovídá H 0,2682706J Navážce paracetamolu 1,4917mg odpovídá H 0,2682706J 32

Graf č.9 Kalibrační vzorek s obsahem paracetamolu 14,99304% Složení vzorku: paracetamol-0,1508g, čípkový základ-0,8550g navážka na měření-8,983mg paracetamol v navážce-1,3468mg a)záznam měření b)detail píku pro paracetamol Odečtené hodnoty: H(J/g) 24.33, 24.23, 23.68, 24.31 H=24,1375J/g Navážce vzorku 8,983mg odpovídá H 24,1375J/g Navážce vzorku 8,983 mg odpovídá H 0,2168271J Navážce paracetamolu 1,3468mg odpovídá H 0,2168271J 33

Tab č.2 Teplotní charakteristiky kalibračních vzorků vzorek Množství paracetamolu v navážce(mg) H (J) Obsah paracetamolu (%) Tmax ( C) Onset ( C) 7% 0,6603 0,103157 6,91044 169,0 166,8 8% 0,7524 0,1053519 8,04962 169,1 167,0 9% 0,7784 0,1442037 9,07211 169,6 167,1 10% 0,9487 0,1501249 10,06438 169,5 167,2 11% 1,0486 0,1817847 11,00384 169,2 166,9 12% 1,2088 0,1691928 12,00000 169,5 166,9 13% 1,1775 0,1840743 13,06906 169,6 166,8 14% 1,4917 0,2682706 13,93745 169,5 166,5 15% 1,3469 0,2168271 14,99304 169,7 167,2 34

Graf č.10 Kalibrační křivka pro paracetamol 0,3 0,25 Kalibrační křivka pro paracetamol y = 174,47x - 0,0133 R² = 0,9026 0,2 H (J) 0,15 0,1 0,05 0 0 0,0005 0,001 0,0015 0,002 množství paracetamolu ve vzorku (g) 35

Panadol Baby čípek 1-základna Celková hmotnost čípku 1,01872g Hmotnost navážky 12,073mg Graf. č. 11 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 12,0 2 12,0 3 11,92 4 12,1 12,005 0,144936365 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,000906954 0,076528798 7,512250476 36

Panadol Baby čípek 1-špička Celková hmotnost čípku 1,01872g Hmotnost navážky 10,118mg Graf. č.12 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 20,51 2 20,52 3 20,43 4 20,66 20,53 0,20772254 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,001266822 0,127548617 12,52047835 37

Panadol Baby čípek 2-špička Celková hmotnost čípku 1,01643g Hmotnost navážky 8,269mg Graf. č.14 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 20,33 2 20,43 3 20,43 4 20,4 20,3975 0,168666927 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,001042969 0,128202319 12,6130003 39

Panadol Baby čípek 3-špička Celková hmotnost čípku 1,02326g Hmotnost navážky 6,608mg Graf. č. 16 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 16,39 2 16,54 3 16,21 4 16,37 16,3775 0,10822252 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,000696523 0,107857767 10,5406023 41

Panadol Baby čípek 4-základna Celková hmotnost čípku 1,01627g Hmotnost navážky 8,277g Graf. č. 17 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 9,719 2 9,669 3 9,645 4 9,826 9,71475 0,080408985 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,000537106 0,065947168 6,489138577 42

Panadol Baby čípek 7-základna Celková hmotnost čípku 0,99644g Hmotnost navážky 10,403mg Graf. č. 23 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 17,05 2 17,02 3 17,08 4 17,04 17,0475 0,177345142 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,0O109271 0,104664034 10,50379698 48

Panadol Baby čípek 8-základna Celková hmotnost čípku 1,00826g Hmotnost navážky 10,138 Graf. č. 25 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 17 2 17,19 3 16,98 4 17 17,0425 0,172776865 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,001066526 0,106069787 10,52008286 50

Panadol Baby čípek 9-základna Celková hmotnost čípku 1,0400 Hmotnost navážky 9,664 mg Graf. č.27 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 14,06 2 14,07 3 14,04 4 14,01 14,045 0,13573088 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,000854192 0,091924635 8,838907212 52

Panadol Baby čípek 9-špička Celková hmotnost čípku 1,04008 g Hmotnost navážky 8,366 mg Graf. č.28 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 21,33 2 21,39 3 21,39 4 21,32 X 21,3575 0,178676845 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,001100343 0,136797125 13,15255797 53

Panadol Baby čípek 10-špička Celková hmotnost čípku 1,04235g Hmotnost navážky 12,052 mg Graf. č.30 Detail záznamu měření -pík pro paracetamol Parametry píku Odečtené hodnoty ΔH / J/g) ΔH (J) 1 21,82 2 21,82 3 21,79 4 21,84 21,8175 0,26294451 Zjištěné množství paracetamolu v navážce (g) V celém čípku (g) % obsah v čípku 0,001583335 0,136939034 13,13752904 55

Tab.č. 3 Přehledná tabulka (navážky a zjištěná množství paracetamolu v měřených vzorcích) Čípek č. m(g) celý čípek Navážka z. (mg) Navážka šp. (mg) Součet navážek (mg) m(mg) parac.v nav. šp. m(mg) parac.v nav. z. m(mg) parac.v nav. Šp+z 1 1,01872 12,073 10,118 22,191 1,266822 0,906954 2,173776 2 1,01643 11,017 8,269 19,286 1,042969 1,236687 2,279656 3 1,02326 8,615 6,608 15,223 0,696523 0,954173 1,650696 4 1,01627 8,277 7,930 16,207 0,95618 0,537106 1,493286 5 1,01242 8,164 12,218 20,382 1,497474 0,755082 2,252556 6 1,01321 11,256 8,714 19,97 0,913568 1,161863 2,075431 7 0,99644 10,403 9,913 20,316 1,211592 1,09271 2,304302 8 1,00826 10,757 10,138 20,895 1,242882 1,066526 2,309408 9 1,04008 9,664 8,366 18,03 1,100343 0,854192 1,954535 10 1,04235 11,981 12,052 24,033 1,583335 1,010669 2,594004 z-základna š-špička 56

Tab. č. 4 Hmotnostní proměnlivost Čípek č. zjištěná hmotnost čípku(g) průměrná hmotnost 5% -5% 1 1,01872 1,018742 1,0696791 0,9678049 2 1,01643 1,018742 1,0696791 0,9678049 3 1,02326 1,018742 1,0696791 0,9678049 4 1,01627 1,018742 1,0696791 0,9678049 5 1,01242 1,018742 1,0696791 0,9678049 6 1,01321 1,018742 1,0696791 0,9678049 7 0,99644 1,018742 1,0696791 0,9678049 8 1,00826 1,018742 1,0696791 0,9678049 9 1,04008 1,018742 1,0696791 0,9678049 10 1,04235 1,018742 1,0696791 0,9678049 Graf č.31 hmotnost čípku 1,08 1,06 1,04 1,02 1 0,98 0,96 0,94 0,92 0,9 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 číslo čípku průměrná hmotnost odchylka "5%" odchylka "-5%" hmotnost čípku 57

Tab č.5 Charakteristika proměřovaných čípků Panadol Baby Čípek č. Zjištěná hmotnost čípku (g) Výrobcem deklarovaný obsah (g) Množství paracetamolu odpovídající hmotnosti čípku(g) 1 1,01872 0,125 0,1249973 2 1,01643 0,125 0,124716316 3 1,02326 0,125 0,12555436 4 1,01627 0,125 0,124696684 5 1,01242 0,125 0,124224288 6 1,01321 0,125 0,124321221 7 0,99644 0,125 0,122263536 8 1,00826 0,125 0,123713854 9 1,04008 0,125 0,12761818 10 1,04235 0,125 0,127896709 průměr 1,018742 0,125 0,125000244 R 0,04591 R-rozdíl mezi nejvyšší a nejnižší hodnotou Graf č. 32 Množství paracetamolu v závislosti na hmotnosti čípku 0,135 0,13 množství paracetamolu (g) 0,125 0,12 0,115 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 číslo čípku jednotlivé čípky průměrný obsah 5% -5% 58

Tab č.6 Teoretické množství paracetamolu v čípku určené podle zjištěných hodnot ve špičce Čípek č. navážka špička (mg) Zjištěné množství parac.v navážce (mg) Množství parac.v celém čípku(mg) 1 10,118 1,266822 127,548617 12,52 2 8,269 1,042969 128,202319 12,61 3 6,608 0,696523 107,857767 10,54 4 7,930 0,95618 122,53935 12,06 5 12,218 1,497474 124,085171 12,26 6 8,714 0,913568 106,224034 10,48 7 9,913 1,211592 121,787423 12,22 8 10,138 1,242882 132,72283 12,26 9 8,366 1,100343 136,797125 13,15 10 12,052 1,583335 136,939034 13,14 Teoretické množství parac.v celém čípku (%) Tab.č.7 Obsahová stejnosměrnost- špička Množství paracetamolu Čípek č. v čípku(mg) průměr 125% 115% 85% 75% 1 127,548617 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 2 128,202319 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 3 107,857767 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 4 122,53935 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 5 124,085171 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 6 106,224034 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 7 121,787423 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 8 132,72283 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 9 136,797125 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 10 136,939034 124,470367 155,5879588 143,1409221 105,799812 93,35277525 59

Graf č.33 množství paracetamolu 170 150 130 110 90 70 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 číslo čípku průměrný obsah odchylka 125% odchylka 115% odchylka 85% odchylka 75% množství paracetamolu Tab. č. 8 Teoretické množství paracetamolu v čípku vypočítané podle zjištěných hodnot v základně Čípek č. navážka základna (mg) Zjištěné množství parac.v navážce (mg) Množství parac.v celém čípku(mg) 1 12,073 0,906954 76,528798 7,51 2 11,017 1,236687 114,09692 11,23 3 8,615 0,954173 113,333379 11,08 4 8,277 0,537106 65,947168 6,49 5 8,164 0,755082 93,637937 9,25 6 11,256 1,161863 104,5852177 10,32 7 10,403 1,09271 104,664034 10,50 8 10,757 1,066526 106,069787 10,52 9 9,664 0,854192 91,924635 8,84 10 11,981 1,010669 87,928456 8,44 Teoretické množství parac.v celém čípku (%) 60

Tab. č.9 Obsahová stejnoměrnost - základna čípek č. Množství paracetamolu v čípku(mg) průměr 125% 115% 85% 75% 1 76,528798 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 2 114,09692 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 3 113,333379 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 4 65,947168 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 5 93,637937 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 6 104,5852177 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 7 104,664034 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 8 106,069787 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 9 91,924635 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 10 87,928456 95,87163317 119,8395415 110,2523781 81,4908882 71,90372488 Graf č.34 množství paracetamolu 130 120 110 100 90 80 70 60 50 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 číslo čípku průměrný obsah odchylka 125% odchylka 115% odchylka 85% odchylka 75% mn žství paracetamolu 61

Tab č.10 Souhrnná tabulka (teoreticky vypočítané hodnoty obsahů podle zjištěných množství paracetamolu ve špičkách a základnách) Čípek č. Špičky (%) Základny (%) Celý čípek Rozdíl šp.a zákl.(%) 1 12,52 7,51 9,80 5,01 2 12,61 11,23 11,82 1,38 3 10,54 11,08 10,84-0,54 4 12,06 6,49 9,19 5,57 5 12,26 9,25 11,05 3,01 6 10,48 10,32 10,39 0,16 7 12,22 10,50 11,32 1,72 8 12,26 10,52 11,32 1,74 9 13,15 8,84 10,82 4,31 10 13,14 8,44 10,79 4,70 X 12,124 9,418 10,734 R= 2,67 R=4,74 R (rozdíl mezi nejvyšší a nejnižší hodnotou) 62

Graf č.35 Porovnání obsahu ve špičkách a základnách 14 12 10 % obsah paracetamolu 8 6 4 špička základna 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 číslo čípku Hodnocení čípků z hlediska disperze účinné látky Československý lékopis 3 povoluje odchylku obsahu účinné látky v částech čípku se špičkou od průměrného obsahu účinné látky v čípcích maximálně ± 10 % Pro hodnotu 10,734% jsou limitní meze v částech čípku se špičkou: +10%...11,8074%. -10%...9,6606%. Čípky nevyhovují lékopisné zkoušce na stanovení disperze účinné látky. 63

Tab.č.11 Teoretická množství paracetamolu v celých čípcích Čípek č. navážek(šp+z) (mg) paracetamolu v navážkách(mg) Hmotnost čípku(g) Množství paracetamolu v čípku( mg) 1 22,191 2,173776 1,01872 99,791315 9,80 2 19,286 2,279656 1,01643 120,144703 11,82 3 15,223 1,650696 1,02326 110,956525 10,84 4 16,207 1,493286 1,01627 93,4125 9,19 5 20,382 2,252556 1,01242 111,889546 11,05 6 19,97 2,075431 1,01321 105,300322 10,39 7 20,316 2,304302 0,99644 113,01923 11,32 8 20,895 2,309408 1,00826 111,437363 11,32 9 18,03 1,954535 1,04008 112,749459 10,82 10 24,033 2,594004 1,04235 112,50614 10,79 % paracetamolu v čípku Tab č.12 Obsahová stejnosměrnost celý čípek Množství Čípek paracetamolu č. v čípku(mg) průměr 125% 115% 85% 75% 1 99,791315 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 2 120,144703 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 3 110,956525 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 4 93,4125 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 5 111,889546 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 6 105,300322 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 7 113,01923 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 8 111,437363 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 9 112,749459 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 10 112,50614 109,12071 136,4008879 125,4888168 92,7526038 81,84053273 64

Graf č.36 množství paracetamolu 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 číslo čípku obsah v čípku odchylka 125% průměrný obsah odchylka 115% odchylka 85% odchylka 75% Tab č.13 Porovnání deklarovaných a teoreticky zjištěných hodnot Čípek č. Deklarované množství paracetamolu(g) Zjištěné množství(g) Rozdíl mezi deklarovaným a zjištěným(%) 1 0,125 0,099791315-20,1720,17 2 0,125 0,120144703-3,88 3 0,125 0,110956525-11,23 4 0,125 0,0934125-25,27 5 0,125 0,111889546-10,49 6 0,125 0,105300322-15,76 7 0,125 0,11301923-9,58 8 0,125 0,111437363-10,85 9 0,125 0.112749459-9,80 10 0,125 0,11250614-10,00 0,125 0,108717516 65

Tab č.14 Deklarované množstvím paracetamolu a teoreticky zjištěné Čípek č. Deklarované množství paracetamolu podle hmotnosti čípků( %) 1 12,27 9,80 2 12,30 11,82 3 12,21 10,84 4 12,30 9,19 5 12,35 11,05 6 12,34 10,39 7 12,54 11,32 8 12,40 11,32 9 12,02 10,82 10 12,00 10,79 Teoreticky zjištěné množství paracetamolu ( %) 66

Hodnocení čípků: Stejnoměrnost dávkových jednotek Tab.č.15 Souhrnná tabulka pro hodnocení stejnoměrnosti dávkových jednotek Číslo čípku Zjištěné množství paracetamolu v čípku Deklarované množství paracetamolu v čípku Obsah dávkových jednotek v % hodnoty v označení na obalu 1 0,099791315 0,125 79,833052 2 0,120144703 0,125 96,1157624 3 0,110956525 0,125 88,76522 4 0,0934125 0,125 74,73 5 0,111889546 0,125 89,5116368 6 0,105300322 0,125 84,2402576 7 0,11301923 0,125 90,415384 8 0,111437363 0,125 89,1498904 9 0.112749459 0,125 90,1995672 10 0,11250614 0,125 90,004912 průměr 0,108717516 0,125 87,29656824 s 5,802841913 67

Výpočet hodnoty přijatelnosti dle ČL 2009 AV lm-xl + ks X - průměr jednotlivých obsahů (x₁, x₂, x₃, ) vyjádřený v procentech hodnoty v označení na obalu x₁, x₂, x₃ -jednotlivé obsahy zkoušených dávkových jednotek, vyjádřené v procentech hodnoty v označení na obalu M referenční hodnota M= 98,5% k konstanta přijatelnosti je-li n=10, pak k=2,4 s směrodatná odchylka vzorku L1 nejvyšší přípustná hodnota přijatelnosti jinak L1 = 15,0, není-li uvedeno AV=l98,5%- 87,29656824%l+2,4 5,802841913 AV=25,13025235 Čípky nevyhovují požadavkům lékopisu na stejnoměrnost dávkových jednotek. 68

5. Diskuze V této práci je hodnocen přípravek Panadol Baby z hlediska obsahu paracetamolu. Pro stanovení obsahu je použita metoda diferenciální skenovací kalorimetrie. Bylo prokázáno, že množství tepla potřebného na roztátí je přímo úměrné inkorporovanému množství paracetamolu (33; 34). Množství paracetamolu ve vzorcích proto můžeme odečíst z kalibrační křivky představující závislost tepla tání na obsahu paracetamolu. V práci tedy nejprve uvádíme parametry potřebné na sestrojení kalibrační křivky. Bylo zjištěno, že paracetamol se v roztaveném základě při vyšších teplotách v nepatrném množství rozpouští. Naměřené hodnoty jsou proto o něco nižší, než by odpovídalo navážce paracetamolu. Z tohoto důvodu bylo doporučeno použít na kalibrační křivku údaje z tání paracetamolu inkorporovaného do čípkového základu (1). Připravili jsme si proto devět různých koncentrací paracetamolu v čípkovém základě. Z každé odlité směsi jsme potom odebrali vzorek, který jsme podrobili ohřevu. Záznamy měření jsou uvedeny na grafech č. 1-9. Teplotní charakteristiky kalibračních vzorků jsou uvedeny v tabulce č. 2. Z uvedených údajů je potom sestrojena kalibrační křivka graf. č. 10. Na grafu je zároveň uvedena rovnice pro výpočet množství paracetamolu v dále měřených vzorcích. Koeficient korelace pro tuto rovnici je 0,962289. Jedná se tedy o lineární závislost a rovnici lze pro stanovení obsahu použít. V další části práce je uvedeno hodnocení přípravku Panadol Baby. U přípravku Ben-U-Ron se stejnou účinnou látkou byl v předchozí práci (35) zaznamenám velký rozdíl mezi naměřenou a deklarovanou hodnotou paracetamolu. Vzali jsme tedy celé originální balení (10 čípků) a proměřili jsme jednotlivé kusy na obsah paracetamolu. Pro měření se odebírají velmi malá množství vzorků. Je zde tedy určité riziko nehomogenity. Z toho důvodu bylo doporučeno (35) odebírat k analýze více vzorků. Z důvodu finanční nákladnost ale není možné počet vzorků zvyšovat neomezeně. Rozhodli jsme tedy o odběru dvou vzorků z každého čípku, přičemž jeden byl z části se špičkou a 69

druhý z části s kruhovou základnou. Záznamy jsou uvedeny na grafech č. 11-30. U těchto grafů jsou uvedeny i výsledky vyhodnocení zaznamenané křivky. Zjištěná množství paracetamolu jsou pro všechny vzorky uvedeny v přehledné tabulce č. 3 Dále v práci následuje hodnocení údajů deklarovaných výrobcem. Čípky se nepatrně liší jeden od druhého ve své hmotnosti (tab. č. 4). Povolené rozmezí je ±5%. Z tohoto hlediska tedy čípky požadavku lékopisu vyhovují (graf č. 31). Dále výrobce uvádí obsah paracetamolu 0,125 na jeden přípravek. Poněvadž se čípky liší hmotností, budou se lišit i obsahem paracetamolu. Přepočítané hodnoty jsou uvedeny v tabulce č. 5 a graficky znázorněny na grafu č. 32. Pokud čípky obsahují uvedené množství paracetamolu, pak vyhovují stanoveným mezím. Dále v práci uvádíme hodnocení námi zjištěných údajů. Nejdříve hodnotíme čípky z hlediska obsahové stejnoměrnosti. Hodnoty paracetamolu v čípku vypočítáváme podle zjištěných údajů ve špičkách (tabulka č. 6 a 7) v základnách (tabulka č. 8 a 9). Grafické znázornění je na grafech č. 33 a 34. Z hlediska požadavku lékopisu by vyhovovaly čípky, u nichž byl obsah stanoven z části špičky. Podle obsahu vypočítaného z údajů naměřených ze základen by čípky nevyhovovaly. V tabulce č.10 je přehledně uvedeno množství paracetamolu v% v jednotlivých částech. Grafické znázornění je na grafu č. 35. Ve všech případech (krom čípku č.3 ) bylo zjištěno ve špičkách vyšší množství než v základnách. Je tedy zřejmé, že dochází k sedimentaci léčiva po odlití. To komplikuje použití DSC pro stanovení, protože je nutné odebírat vzorky z různých částí. Není jisté, zda by při tak nízkých navážkách stačilo rozdrtit čípek a odebrat jeden vzorek. Pravděpodobně by nedošlo k homogenizaci, protože by se nepodařilo rozdrtit hmotu na tak malé kousky (řádově mg) Za tabulkou následuje hodnocení čípků z hlediska disperze účinné látky. V tabulce č. 11 jsou uvedeny výsledky, tak jak by vypadaly, pokud by se k analýze odebíraly z každého čípku dva vzorky (špička+ základna) Výsledky obsahové stejnoměrnosti jsou v tab. č. 12 a grafu č. 36 Z hlediska obsahové stejnoměrnosti by čípky požadavku lékopisu nyní odpovídaly. 70

V tabulce č. 13 jsou uvedeny hodnoty deklarované a námi zjištěné. Konstatujeme, že ve všech případech je deklarovaný obsah vyšší než námi zjištěný. Nemáme srovnání analýzy obsahu jinou metodou a z toho důvodu nemůžeme vyloučit nevhodnost použité metody. V literatuře č. 33 je ovšem uvedeno, že výsledky zjištěné pomocí DSC byly shodné s výsledky analýzy vzorku pomocí UV spektroskopie. V tabulce č. 14 jsou uvedeny hodnoty deklarované ( přepočítané podle hmotnosti čípku) v % a teoreticky zjištěné v % V závěru práce hodnotíme přípravek z hlediska stejnoměrnosti dávkových jednotek (tab. č. 15). V této zkoušce se hodnotí, zda obsahy v jednotlivých přípravcích se liší od deklarované hodnoty pouze o povolené množství. Postup pro výpočet je uveden v lékopise. Vypočítává se hodnota přijatelnosti, a ta se potom porovnává s hodnotou uvedenou v lékopise. Podklady pro výpočet jsou uvedeny v tabulce č. 14. Následuje výpočet, ze kterého vyplývá, že čípky požadavkům lékopisu nevyhovují. Závěrem je nutné konstatovat, že všechny v práci uvedené závěry jsou dělány na základě analýzy vzorku pomocí metody DSC. Mimo literárních údajů nemáme žádné srovnání hodnot získaných pomocí DSC a jiné analytické metody. Pro definitivní závěr by toto srovnání bylo potřebné. 71

6. Závěr Obsah paracetamolu ve všech čípcích Panadol Baby z jednoho originálního balení zjištěný metodou DSC byl nižší než deklarovaný. Byly zjištěny vyšší obsahy ve špičkách čípků než v základnách. To ukazuje na problém v sedimentaci léčiva po odlití do formy, v tomto případě obalu. Přípravek z hlediska stanovení obsahu pomocí DSC nevyhověl lékopisné zkoušce Stanovení stejnoměrnosti dávkových jednotek. Před použitím metody DSC pro stanovení obsahu paracetamolu v čípcích doporučujeme ověřit rozpustnost léčivé látky v čípkovém základě za vyšší teploty. Doporučujeme i porovnat stanovení obsahu pomocí DSC a jinou analytickou metodou. 72