Česká zemědělská univerzita v Praze Vysoká škola chemicko-technologická v Praze OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. Redakčně upravená závěrečná zpráva

1. Titulní list Česká zemědělská univerzita v Praze Vysoká škola chemicko-technologická v Praze OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. Redakčně upravená závěrečná zpráva ČÍSLO A NÁZEV PROJEKTU: QH 92106 Pěstitelské systémy u máku se zaměřením na kvalitu a bezpečnost ekologické a integrované produkce. PROGRAM: PP2 Ochranné a šetrné postupy hospodaření TÉMA: Přírodě blízké hospodaření - welfare a permakultura PRIORITA DOBA ŘEŠENÍ: 1. 1. 2009-31. 12. 2011 ODPOVĚDNÝ ŘEŠITEL: Ing. Perla Kuchtová, Ph.D. PŘÍJEMCE KOORDINÁTOR: Česká zemědělská univerzita v Praze (60460709) Kamýcká 129, 16521 Praha 6 - Suchdol Řešitel:.. Ing. Miroslava Hájková Odpovědný řešitel:. Ing. Perla Kuchtová, Ph.D. Řešitel: Prof.Ing. Jana Hajšlová, CSc. Statutární zástupce příjemce koordinátora:. Praha, leden, 2012 Prof. Ing. Jiří Balík, CSc., rektor 1

2. Osnova zprávy 1. Titulní list... 1 2.Osnova zprávy... 2 3.Organizace účastnící se projektu... 3 4.Řešitelský tým v roce 2011... 3 5. Náklady na projekt celkem... 4 6.Zhodnocení průběhu řešení... 4 6.1. Zhodnocení průběhu řešení 2011... 4 6.2. Zhodnocení průběhu řešení 2009-2011... 6 7.Přílohy... 10 7.1.Přehled schválených aktivit... 10 7.2. Komentář k vybraným uskutečněným aktivitám (tab. 1) v průběhu řešení (2009-2011)... 13 7.3. Evidence výstupů plánovaných a schválených v návrhu projektu a k nim náležejících výsledků uplatněných v průběhu řešení projektu... 18 7.4. Evidence výsledků, které jsou předmětem PUV (plánovaného uplatnění výsledků) 21 7.5. Roční technická zpráva OSEVA VaV... 22 7.6. Roční technická zpráva VŠCHT... 44 7.7. Roční technická zpráva ČZU... 54 8.Dosažené výsledky... 63 9.Popis uplatnění... 64 9.1. Odborné články... 64 9.2. Prezentace pokusů a jejich výsledků... 66 9.3. Závěrečné práce studentů... 67 2

3. Organizace účastnící se projektu 60460709 Česká zemědělská univerzita v Praze 60461373 Vysoká škola chemicko-technologická v Praze 26791251 OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. 4. Řešitelský tým v roce 2011 Honsová Hana Ing. Ph.D. Bečka David Ing. Ph.D Budaiová Marcela Dvořák Petr Ing. Ph.D. Erhartová Daniela Bc. Hájek Martin Ing. Hájková Miroslava Ing. Hajšlová Jana Prof. Ing. CSc. Havel Jiří Ing. CSc. Kazda Jan Ing. CSc. Kostelanská Marta Ing. Kuchtová Perla Ing. Ph.D. Malachová Alexandra Ing. Mičák Libor Mikšík Vlastimil Ing. Ph.D. Pazderů Kateřina Ing. Ph.D. Plachká Eva Ing. Šafránková Marie Schulzová Věra Dr. Ing. Vepříková Zdeňka Ing. Vospělová Jaroslava Vykoukal Václav Zachariášová Milena Ing. další pracovník další řešitel další pracovník další řešitel další pracovník další pracovník řešitel řešitel další řešitel další řešitel další řešitel odpovědný řešitel další řešitel další pracovník další řešitel další pracovník další řešitel další pracovník další řešitel další řešitel další pracovník další pracovník další řešitel 3

5. Náklady na projekt celkem Celkové schválené náklady na projekt v roce 2011 činily 1 504 tis. Kč. Z toho přímé náklady 1 172 tis. Kč. Celkové uznané náklady na projekt na celou dobu řešení (2009-2011) činily 5 995 tis. Kč, z toho přímé náklady 4 628 tis. Kč. 6. Zhodnocení průběhu řešení 6.1. zhodnocení průběhu řešení 2011 Pokusy s mákem byly založeny na jaře roku 2011 na lokalitách: Uhříněves, Budyně nad Ohří (i podzim 2010 - ozimý mák), Červený Újezd, Opava, Vlčice (Jeseník), Praha 7 - Trója a Praha 6 - Suchdol. Na třech posledně jmenovaných lokalitách proběhly polní zkoušky osiv a vlivu ošetření. Pokusy byly založeny v agrotechnickém termínu, vzcházení a zapojení porostu v roce 2011 proběhlo na jednotlivých lokalitách uspokojivě. I přes vysoký výskyt krytonosce kořenového v Budyni nad Ohří odpovídaly porosty na všech lokalitách požadavkům a parametry byly v průběhu vegetace sledovatelné a hodnotitelné, s dobrou vypovídací schopností. Na pokusných plochách v Uhříněvsi došlo v době dozrávání v důsledku přívalových srážek a poryvů větru k 90-100 % polehnutí porostů (v ekologickém i integrovaném systému), které byly následně silně napadeny chorobami. Polehnutí znemožnilo mechanizovanou sklizeň a z porostů takto poškozených byly odebrány pouze makovice na rozbory. Z hlediska výskytu chorob byl průběh vegetačního období máku v roce 2011 spíše podprůměrný. Zaznamenali jsme až vysoké napadení makovic helmintosporiózou na některých pokusných lokalitách. 4

Na základě pozorování v porostu s vysokým napadením makovicovými škůdci byly zjištěny nové skutečnosti související s biologií a škodlivostí krytonosce makovicového a bejlomorky makovicové. Z hlediska škodlivosti krytonosce makovicového byl ověřen pozitivní vliv plochy ozimého máku vedle plochy s jarním mákem. Zajistit pokusy s mákem na všech lokalitách bylo náročné, plánované aktivity, ošetření i sledování však byly realizovány. Před sklizní byly odebrány makovice ke zjištění míry napadení chorobami a stanovení výnosových charakteristik. V průběhu posklizňových rozborů byly hodnoceny rozdíly mezi variantami ošetření v ekologickém a integrovaném systému pěstování, i mezi oběma systémy navzájem. U vybraných variant byl stanoven vliv technologie na obsah alkaloidů v makovině (metodou HPLC). Výsledky byly statisticky vyhodnoceny. Všechny důležité výsledky a závěry jsou součástí redakčně upravené zprávy. Výsledky byly zpracovávány průběžně. Vzhledem k rozsahu pokusů byly kompletní výsledky stanovení míry napadení makovic k dispozici v polovině prosince. Shrnutí 2011: byly realizovány zkoušky produkce, parametry osiva byly hodnoceny v souladu s metodikou byla optimalizována a validována metoda na principu UHPLC-TOFMS, použitá ke stanovení mykotoxinů v semeni máku většina vzorků semen neobsahovala mykotoxiny v detekovatelném množství osivo pro pokusné účely bylo ekologického i konvenčního původu, ošetřené v souladu s metodikami pokusy byly uskutečněny na plochách konvenčních i certifikovaných pro ekologické zemědělství v laboratorních podmínkách byl na vybraných partiích semen z různých lokalit zjišťován výskyt patogenů v/na osivu, výsledky u řešitele obsah alkaloidů v makovině odpovídal normě Byly splněny všechny plánované výstupy na rok 2011. Výstup V004 (Ověřit účinnost různých způsobů ošetření osiva proti patogenům osiva a vzcházejících rostlin máku na ekologických a konvenčních pěstitelských plochách) byl splněn v roce 2010. 5

6.2. zhodnocení průběhu řešení 2009-2011 6.2.1. Průběh celého řešení Řešení probíhalo podle stanoveného plánu, i když v rámci pokusnické činnosti bylo nutné přizpůsobit se průběhu počasí, stavu půdy a situaci na pokusných místech (pracovní síly, technika apod.). Klimatické excesy naštěstí nepřesáhly únosnou mez rizika a neohrozily pokusy. V roce 2009 byl na Opavsku zaznamenán vysoký výskyt bezsemenných makovic, zřejmě v důsledku nepříznivého počasí v době kvetení, pokusy však byly dotčeny minimálně. V roce 2010 byl v době po odkvětu zničen bouřkou s krupobitím ověřovací pokus (navíc - původně neplánovaný) vlivu ošetření osiva máku v integrované technologii na lokalitě Krásné Údolí. Tento výpadek nijak nenarušil průběh řešení. V roce 2011 došlo v době dozrávání porostu na lokalitě Uhříněves v důsledku větrné smrště následované obdobím mírných, leč trvalých, srážek k polehnutí a znehodnocení obou pokusných ploch ekologické i integrované. V době sklizně byly sice z těchto ploch odebrány z jednotlivých parcel makovice a tyto rozborovány, po chemické analýze však byl ve směsném vzorku semen z těchto makovic z organické plochy stanoven beauvericin (původce je půdní houba Beauveria bassiana ). Obsah beauvericinu je zřejmě následkem dlouhého období, kdy makovice byly v kontaktu se zemí. Některá opatření a následná sledování byla limitována (ne)výskytem škůdců na všech lokalitách. Vynikajícím místem pro sledování vlivu ošetření na škůdce i choroby je lokalita v Budyni nad Ohří, kde jsou podmínky pro zmíněné škodlivé faktory mimořádně příznivé. Lze konstatovat, že průběh řešení probíhal standardně a výzkumná činnost přinesla množství nových poznatků. 6.2.1.1. Projektový a řešitelský tým V průběhu řešení došlo k malým změnám v řešitelském týmu. Doc. Ing. E. Prokinovou, CSc. z důvodu vysokého pracovního vytížení nahradil Ing. J. Kazda, CSc. Jedna doktorandka se provdala změna jména. Kromě pracovníků uvedených v řešitelském týmu jsme spolupracovali na řešení s kolegy z VÚRV: stanovení patogenů a sledování škůdců a z ČZU ověření možnosti využít rostlinné silice k ošetření osiva. 6

6.2.1.2. Metodika řešení Metodika řešení byla dodržena. V průběhu řešení byly souladu s metodikou u pokusu s integrovaným pěstováním máku vyřazeny varianty, které ve výnosu nedosáhly průměrných výsledků (ve vztahu ke kontrole) a zařazeny další kombinace. Podobně u ekologických variant byla na jedné z lokalit upravena metodika pokusu (rozšířena o ošetření osiva). V rámci zkoušení osiva (včetně kombinací ošetření) byla v roce 2010 pokusná místa rozšířena o lokalitu Troja a v roce 2011 k této přibyly lokality Suchdol a Vlčice. POKUSNÉ LOKALITY 2009-2011 2009: Budyně nad Ohří, Uhříněves, Opava, Červený Újezd, Mšené Lázně, 2010: Budyně nad Ohří, Uhříněves, Opava, Červený Újezd, Mšené Lázně, Trója (Praha 7) 2011: Budyně nad Ohří, Uhříněves, Opava, Červený Újezd, Mšené Lázně, Trója (Praha 7), Praha 6 Suchdol, Vlčice (JE) 6.2.1.3. Dosažené výsledky Díky velkému rozsahu prací spojených s vyšším počtem pokusných míst a velkým s počtem pokusných variant se nám podařilo získat velké množství zajímavých výsledků, pocházejících z multifaktoriálních pokusů, což v průběhu řešení ztížilo jejich zpracování a exploataci. Po důkladné analýze se tyto výsledky stanou základem pro vypracování solidních studií pro praktické využití. 6.2.1.4. Náklady Byly čerpány v souladu s plánem a jejich výše odpovídá rozsahu vykonaných prací spojených s řešením projektu. 6.2.1.5. Další důležité skutečnosti 6.2.2. Shrnutí Komplexita řešení je naplněna tím, že začíná ošetřením osiva, založením porostu lišícím se podle pěstitelského systému (integrovaný a ekologický), řeší agrotechniku v oblasti ochrany při pěstování máku v ekologickém zemědělství využití šetrnějších prostředků ochrany proti chorobám a škůdcům (biofungicidy, přírodní látky) a končí sledováním vlivu pěstitelské technologie a použitých přípravků na zdravotní stav rostlin a kvalitu a bezpečnost produkce (včetně produkce osiv). 7

6.2.2.1. Výsledky projektu 1. Návrh alternativních pěstitelských technologií máku, zvyšujících potravinářskou kvalitu a bezpečnost 2. Návrh alternativních pěstitelských technologií máku, zvyšujících semenářskou kvalitu produkce. 3. Sestavení srovnávací metodiky pěstitelské technologie a ochrany rostlin proti houbovým chorobám pro ekologické a integrované pěstování máku. 4. Sestavení metodiky produkce osiva nejen pro ekologické zemědělství s využitím alternativních postupů. 6.2.2.2. Cíle projektu 1. Zárukou výnosové jistoty při použití alternativních pěstitelských technologií přispět k šíření pěstitelských systémů na orné půdě, šetrných k životnímu prostředí. 2. Zajistit bezpečnost produkce máku a zvýšenou publicitou této skutečnosti přispět ke stabilizaci cen máku a rozvoji dalšího tržního uplatnění této komodity. 3. Rozšířit možnosti rozvoje ekologického zemědělství na orné půdě v ČR. 6.2.2.3. Skutečné indikátory a prostředky ověření dosažení cíle 1. 2. 3. 4. Skutečné indikátory Rok Skutečné prostředky ověření dosažení cíle Rok 1 Rozšíření pěstitelských ploch Ročenka ekologického zemědělství, statistická šetření (ČSÚ, MZe: 2014 2015 s mákem v ekologickém režimu. http://eagri.cz/public/web/mze/zemedelstvi/ekologicke-zemedelstvi/statistika-a-pruzkumy/) Návrh alternativních pěstitelských technologií máku, zvyšujících procesní kvalitu, potravinářskou bezpečnost a semenářskou kvalitu produkce.( Sestavení srovnávací metodiky pěstitelské technologie a ochrany rostlin proti houbovým chorobám pro ekologické a integrované pěstování máku. Sestavení metodiky produkce osiva pro ekologické zemědělství s využitím alternativních postupů. 2012 2012 1. Ověřená technologie 2. Certifikovaná metodika multidetekční metody pracující na principu UHPLC-MS/MS, určené pro stanovení širokého spektra mykotoxinů v semenech máku. Výsledek bude veřejně přístupný, PDF metodiky bude k dostání na vyžádání u garanta metodiky (prof. Ing. Jana Hajšlová, CSc.). 1. Certifikovaná metodika pěstitelské technologie a ochrany rostlin pro integrovanou a ekologickou produkci máku 2. Výukový film pro posluchače VŠ 2012 Certifikovaná metodika produkce osiva pro ekologické zemědělství 2012 5. Nové postupy úpravy osiva máku. 2012 Certifikovaná metodika produkce osiva pro ekologické zemědělství 2012 1 Konečný termín uplatnění výsledků. 2015 2012 8

6.2.3. Srovnání dosažených výsledků s cíli projektu (generuje se do bodu 2.3. Smlouvy o využití výsledků) Cílem projektu bylo inovovat a ověřit šetrné postupy produkce máku s ohledem na kvalitu produkce a posílit konkurenceschopnost ekologických pěstitelů. V průběhu řešení byly potvrzeny hypotézy dílčích cílů. Dosažené a zpracované výsledky agrotechnických pokusů byly: 1. průběžně publikovány v odborném i recenzovaném odborném tisku. 2. průběžně prezentovány na odborných seminářích a workshopech Zbývající získané výsledky budou po dalším zpracování a statistickém vyhodnocení uplatněny formou: 1. certifikovaných metodik 2. workshopů a seminářů pro odbornou veřejnost 3. cizojazyčných článků v odborném recenzovaném tisku, periodicích s impakt faktorem 4. prezentace na konferencích v cizím jazyce (články ve sbornících, přednášky, postery) 5. ověřené technologie Dosažené výsledky odpovídají stanovenému cíli projektu. 6.2.4. Kritické předpoklady uplatnění dosažených výsledků 1. V souvislosti s finanční krizí existence organizací účastnících se projektu a jejich fungující infrastruktura 2. Řešitelé budou po dobu dokončování a uplatňování zbývajících výsledků zaměstnanci řešitelské organizace 3. Řešitelské organizace se budou podílet na přímém i nepřímém (zpracování a finalizace výsledků) finančním krytí nákladů spojených s uplatněním výsledků 4. Poptávka po produktech ekologického zemědělství spojená s vysokou cenou produkce 5. Socio-ekonomická podpora šetrných forem hospodaření 9

7. Přílohy 7.1. Přehled schválených aktivit 2011 A01/11 Zkoušení hodnoty osiv máku podle metodik ISTA. A02/11 Sledování vybraných fusariových a alternariových mykotoxinů v semeni máku A03/11 Různá ošetření osiva proti patogenům semen a vzcházejících rostlin spojené s hodnocením vlivu způsobu ošetření na zdravotní stav rostlin, produktivitu porostu a semenářskou jakost. (DP) A04/11 Založení a vedení pokusů s osivem máku ošetřeného biofungicidy na plochách konvenčních i certifikovaných pro EZ A05/11 Založení a vedení pokusu s vybranými parametry množitelského porostu s různým ošetřením chemickými i biologickými přípravky (herbicidy, insekticidy, fungicidy) během vegetace A06/11 Založení a vedení pokusu s biologickými přípravky během vegetace v pokusném porostu. A07/11 Sledování výskytu škůdců v porostech založených různými pěstitelskými technologiemi. A08/11 Sledování výskytu chorob v porostech založených různými pěstitelskými technologiemi. A09/11 Hodnocení zdravotního stavu osiva máku s cílem vyvinout metodu detekce původce helmintosporiózy v osivu máku pro rutinní využití při kontrole osiva A10/11 Sledování obsahu morfinu v makovině s cílem zjistit vliv pěstitelské technologie na kvalitu suroviny pro farmaceutický průmysl. Všechny schválené aktivity byly uskutečněny (tab. 1) 10

Tab. 1 Souhrn uskutečněných aktivit 2011 Aktivita A01/11 A02/11 A03/11 A04/11 A05/11 Název (cíl)aktivity Zkoušení hodnoty osiv máku podle metodik ISTA. Sledování vybraných fusariových a alternariových mykotoxinů v semenech máku Různá ošetření osiva proti patogenům semen a vzcházejících rostlin spojené s hodnocením vlivu způsobu ošetření na zdravotní stav rostlin, produktivitu porostu a semenářskou jakost. Založení a vedení pokusů s osivem máku ošetřeného biofungicidy na plochách konvenčních i certifikovaných pro EZ. Založení a vedení pokusu s vybranými parametry množitelského porostu s různým ošetřením chemickými i biologickými přípravky (herbicidy, insekticidy, fungicidy) během vegetace. Zahájení Ukončení 1.1.2011 31.12.2011 1.1.2011 31.12.2011 1.1.2011 31.12.2011 15.2.2011 31.12.2011 15.2.2011 31.12.2011 Skutečné Indikátory dosažení (dílčí výsledky) Prostředky ověření 2 Řešitelé 1 Bylo dosaženo vyššího biologického a produkčního potenciálu osiva ošetřeného alternativními způsoby proti variantě neošetřeného a chemicky ošetřeného osiva, který byl zjištěn na základě vyhodnocení výsledků zkoušení osiva podle metodik ISTA. Byla zjištěna přítomnost alternáriových a fusariových mykotoxinů v semenech máku. Díky použité analytické koncovce ultraúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrií typu Time-of-flight byly kromě již zavedených a validovaných mykotoxinů identifikovány další mykotoxiny. Na základě naměřených dat byla zhodnocena mykotoxinová kontaminace máku. Byl prokázán vyšší biologický a produkční potenciál osiva ošetřeného altarnativními způsoby proti variantám neošetřeného a chemicky ošetřeného osiva (klíčivost, polní vzcházivost, výnos), který byl prokázán na základě vyhodnocení výsledků realizovaných polních pokusů. Byl prokázán vysoký biologický a produkční potenciál porostu máku na ploše certifikované pro EZ, založeného z kalibrovaného a biofungicidy ošetřeného osiva. Lepší zdravotní stav rostlin ve srovnání s kontrolou. Vyšší výnos semen, vyšší kvalita sklizně. Byly testovány různé kombinace přípravků regulujících zaplevelení porostu a výskyt chorob a škůdců. Na základě testování byl prokázán zlepšující vliv některých přípravků na regulaci chorob, škůdců a zaplevelení, výnos semen a makoviny, i jejich pozitivní vliv na zdravotní stav a semenářské vlastnosti Laboratorní záznamy a protokoly. Zpráva za rok 2011. Příprava publikací. Závěrečné práce studentů. Zpráva za rok 2011. Příprava výsledků k publikaci. Pokusné záznamy,zpráva za rok 2011, zpracování a publikace výsledků Záznamy 2 Záznamy 2 sklizených semen oproti neošetřené kontrole. 1 Kdo se na řešení aktivity podílel : ČZU:P.Kuchtová, J. Kazda, P.Dvořák, další pracovníci a studenti, OSEVA VaV: M. Hájková, E. Plachká, J. Havel a další pracovníci, VŠCHT, Praha: J. Hajšlová, V. Schulzová, M. Kostelanská, M Zachariášová, Z. Vepříková, další doktorandi a diplomanti Ústavu chemie a analýzy potravin 2 Prostředky ověření : Záznamy a protokoly. Zpráva za rok 2011. Příprava publikací. Závěrečné práce studentů ČZU v Praze, OSEVA VaV VŠCHT, Praha ČZU v Praze, OSEVA VaV ČZU v Praze, OSEVA VaV ČZU v Praze, OSEVA VaV 11

Pokračování: Tab. 1 Souhrn uskutečněných aktivit 2011 Zahájení Aktivita Název (cíl)aktivity Ukončení A06/11 A07/11 A08/11 A09/11 A10/11 Založení a vedení pokusu s biologickými přípravky během vegetace v pokusném porostu. Sledování výskytu škůdců v porostech založených různými pěstitelskými technologiemi. Sledování výskytu chorob v porostech založených různými pěstitelskými technologiemi. Hodnocení zdravotního stavu osiva máku s cílem získat podklady pro vývoj metody detekce původce helmintosporiózy v osivu máku Sledování obsahu morfinu v makovině s cílem zjistit vliv pěstitelské technologie na kvalitu suroviny pro farmaceutický průmysl 15.2.2011 31.12.2011 15.2.2011 31.12.2011 15.2.2011 31.12.2011 1.1.2011 31.12.2011 1.1.2011 31.12.2011 Skutečné Indikátory dosažení (dílčí výsledky) Prostředky ověření Řešitelé 1 Byly testovány různé kombinace biologických přípravků regulujících výskyt chorob a škůdců. Na základě testování byl prokázán zlepšující vliv některých přípravků na regulaci chorob a škůdců, výnos semen a makoviny, i jejich pozitivní vliv na zdravotní stav a semenářské vlastnosti sklizených semen oproti neošetřené kontrole V průběhu sezóny byl monitorován výskyt škůdců v porostech máku založených různými pěstebními technologiemi. Byly zjištěny rozdíly mezi pokusnými variantami. V průběhu sezóny byl monitorován výskyt chorob v porostech máku založených různými pěstebními technologiemi. Byly zjištěny rozdíly mezi pokusnými variantami Byly uskutečněny testy pro optimalizaci metody detekce Dendryphion sp. v osivu máku a současně byly detekovány další druhy patogenů přítomných ve vzorcích osiva používaného v rámci řešení projektu.. Byly vybrány reprezentační varianty ze všech pokusných míst, vzorky makoviny byly homogenizovány a analyzovány metodou HPLC na obsah jednotlivých alkaloidů (morfin, thebain, kodein). Zjištěné údaje byly porovnány s výsledky z předchozích let testování. Záznamy 2 Záznamy 2 Záznamy 2 ČZU v Praze, OSEVA VaV ČZU v Praze, OSEVA VaV ČZU v Praze, OSEVA VaV Záznamy 2 poskytnutí osiva ČZU:Kuchtová - OSEVA VaV laboratorní záznamy a protokoly, závěrečná zpráva, příspěvek v odborném periodiku ČZU: Kuchtová - dodání vzorků makoviny OSEVA VaV 1 Kdo se na řešení aktivity podílel : ČZU:P.Kuchtová, J. Kazda, P.Dvořák, další pracovníci a studenti, OSEVA VaV: M. Hájková, E. Plachká, J. Havel a další pracovníci, VŠCHT, Praha: J. Hajšlová, V. Schulzová, M. Kostelanská, M Zachariášová, Z. Vepříková, další doktorandi a diplomanti Ústavu chemie a analýzy potravin 2 Prostředky ověření : Záznamy a protokoly. Zpráva za rok 2011. Příprava publikací. Závěrečné práce studentů. 12

7.2. Komentář k vybraným uskutečněným aktivitám (tab. 1) v průběhu řešení (2009-2011) A01/11 Zkoušení hodnoty osiv máku podle metodik ISTA a A03/11 Různá ošetření osiva proti patogenům semen a vzcházejících rostlin spojené s hodnocením vlivu způsobu ošetření na zdravotní stav rostlin, produktivitu porostu a semenářskou jakost. Osivo pro pokusné účely pocházelo dílem z uznaného množení odrůdy Orfeus, dílem z ekologických pokusných ploch s vybranými parametry množitelských porostů. Ošetřováno bylo přípravky registrovanými pro užití v konvenčním i ekologickém zemědělství samostatně i v kombinacích tak, aby nebylo dotčeno hospodaření v ekologickém režimu Jedním z cílů bylo porovnání rozdílů mezi osivem ošetřeným a neošetřeným. K ošetření osiv použity přípravky Supresivit a Polyversum, výtažky přírodních látek (uplatněný výsledek 25) Pro zkoušení nových, k přírodě šetrných, ošetření jsme zahrnuli i využití fyzikálních metod (studené plasma - článek v tisku). Nevraceli jsme se k metodám HWT (hot water treatment), užitým v prvním roce řešení. Ve spolupráci s odd. mykologie VÚRV, Praze 6, byly u vybraných ošetřených a neošetřených osiv určeny druhy patogenů a jejich zastoupení (Přílohy 7.7.2): o Při ošetření plazmatem došlo u máku Eko Bud k výraznému snížení výskytu Rhizopus sp. Houba byla zjištěna na 14% neošetřených a na 4% ošetřených semenech. Bohužel Rhizopus sp. nebyl zjištěn na semenech z jiných lokalit a proto je málo průkazné, že použité plazma je účinné na potlačení hub z rodu Rhizopus. Pro ověření by bylo potřeba zjistit vliv plazmatu na dalších vzorcích s výskytem Rhizopus sp. A02/11 Sledování vybraných fusariových a alternariových mykotoxinů v semenech máku. Ze vzorků dodaných ČZU Praha byly na přítomnost mykotoxinové kontaminace pozitivní pouze 4 ze 14 a to vzorek 1, 2, 9 a 10. Nálezy v těchto vzorcích nebyly vysoké. Vzorky 9 (Červený Újezd) a 10 (Uhříněves) obsahovaly beauvericin. v případě Uhříněvsi je možným vysvětlením kontaminace vzorku půdním patogenem 13

(Beauveria bassiana) v důsledku dlouhého kontaktu makovic se zemí (polehnutí pokusů), kontaminace vzorku z Červeného Újezdu je z tohoto pohledu obtížnější. A06/11 Založení a vedení pokusu s biologickými přípravky během vegetace v pokusném porostu Pokusy byly zakládány a vedeny na plochách konvenčních (Červený Újezd, Uhříněves, Opava, Krásné Údolí) i certifikovaných pro ekologické zemědělství (Uhříněves, Budyně nad Ohří). Pokusná plocha v Krásném údolí byla zničena 19. 7. 2010 bouří s vichřicí. Sledování a výsledky z této lokality nejsou součástí této zprávy. Plán pokusu, metodika a část sledování jsou k dispozici u řešitelů. A07/11 Sledování výskytu škůdců v porostech založených různými pěstitelskými technologiemi. Sledován byl především výskyt hlavních škůdců máku: krytonosce kořenového a krytonosce makovicového Tab. 2 a,b). 2009 a 2010 na podzim byl v Budyni n. Ohří vedle pozemku pro výsev jarního máku (na jaře 2010, respektive 2011) vyset ozimý mák, který byl napaden v době květu více než jarní mák (dokumentace k dispozici, bude dále zpracována a publikována). Pásy ozimého máku by mohly sloužit jako záchytné plodiny pro škůdce a eliminovat tak škody na jarním máku. Problémem v tomto případě zůstává nalézt vhodná opatření v ochraně porostu jarního máku proti krytonosci kořenovému (v roce 2010 vysoké napadení řešil Neem Azal postřik ke kořenovým krčkům komentář J. Kazda, tab. 2a,b). A08/11 Sledování výskytu chorob v porostech založených různými pěstitelskými technologiemi. (Tab. 2a) 14

Tab. 2a Pozorování 2011 (J. Kazda) Mák 17. 5. 2011 25.5. 2011 14.6.2011 27.6.2011 BBCH 43-45 52 62-64 72 Ozimý Jarní škůdci choroby k. kořenový 1-5 larev/kořen většina rostlin plíseň maková sporadicky k. kořenový, k makovicový - silný výskyt, makovice - vajíčka, všechny instary larev na kořenech, žlabatka (klade), plíseň maková - nevýznamné k. makovicový, bejlomorka maková: středně silné napadení mšice maková - slabý výskyt kolonií k. makovicový, bejlomorka maková: poškození makovic 10%, larvy opustily makovice ojedinělé larvy a kukly žlabatky stonkové ve stoncích Sporadicky mšice maková a klopušky Sporadický výskyt houbových chorob zejména plísně šedé. Výskyt parazitoida žlabatky mrazová pozn. stonkové chalcidky poškození listy Trichomalus bracteatus BBCH 35-41 43-45 49-52 56 škůdci choroby pozn. k. kořenový 1-8 larev všechny rostliny, kořeny-žír řídký porost, odumřelé rostliny (k.kořenový?) k. kořenový-silný výskyt, všechny instary larev na kořenech mšice maková - slabý výskyt plíseň maková - nevýznamné nezjištěny larvy krytonosce kořenového* k. makovicový se objevuje v 10:30** Významý výskyt houbových chorob nezjištěn občas plíseň maková, plíseň šedá *ošetření přípravkem Neem Azal ** doporučená doba 4 dospělci k. makovicového v květech, poškozeno malé makovic larvami, částečně na okrajích mšice maková a klopušky - sporadicky. Larvy žlabatky stonkové nezjištěny Sporadický výskyt houbových chorob zejména plísně šedé Kořeny po žíru larev krytonosce kořenového nejsou napadeny houbovými chorobami, ale naopak regenerují, kořenový systém je dostatečně silný k zajištění výnosu pozorování: 12:00 Pozn.JK: Dle mého zatím nejlepší mák, který jsem na ekologické farmě během let viděl. Očekávám dobrý výnos. Ve všech termínech pozorování nebylo zjištěno žádné významné zaplevelení. Tab. 2b Výskyt mšice makové, slabý výskyt žlabatky stonkové. 14.6. 2011 Budyně nad Ohří (J. Kazda) BLOK (Varianta) Počet poškozených makovic krajní řádek Vnitřní řádek A 35 13 B 26 12 C 38 14 D 35 15 15

A09/11 Hodnocení zdravotního stavu osiva máku s cílem získat podklady pro vývoj metody detekce původce helmintosporiózy v osivu máku 2009 Opava: klíčivost semen - 5%. Mikroskopickým stanovením nebyly u semen nalezeny choroby. U některých se po objevení špičky klíčku růst zastavil, ani u těchto semen nebylo identifikováno napadení houbovými chorobami. 2010 Opava: klíčivost téměř 100 %. 1-2% semen jevila známky napadení chorobami (semena se zahnědlým klíčkem, jejichž vývoj po začátku klíčení ustal), mikroskopicky se nepodařilo u těchto poškozených semen nalézt možného původce poškození. 2011 Opava: Vysoký výskyt helmintosporiózy na rostlinách se projevil ve zvýšené kontaminaci semen. Klíčivost semen cca 90%. Na semenech bez příznaků napadení se helmintosporióza buď nevyskytovala, nebo byla intenzita napadení velmi slabá. 2010 a 2011 Červený Újezd: Klíčivost tohoto osiva byla 98 % a na nevyklíčených semenech nebyly nalezeny žádné známky napadení houbovými chorobami. Z výsledků vyplývá, že použitou metodu lze ke stanovení přítomnosti sledovaného patogena využít pouze v letech, kdy je napadení vyšší. Při nižším napadení metoda poskytuje nepřesné výsledky. Byl zjištěn rozdíl ve složení mykoflóry mezi jednotlivými lokalitami. Houby rodu Fusarium se vyskytovaly pouze na vzorku Eko Bud Ozim (ekologický ozimý mák Budyně) a na semenech Eko Uhřín (ekologický jarní mák, Uhříněves) byl zjištěn výrazně nižší výskyt Penicillium sp. A10/11 Sledování obsahu morfinu v makovině s cílem zjistit vliv pěstitelské technologie na kvalitu suroviny pro farmaceutický průmysl (7.4. zpráva Oseva ) K hodnocení obsahu morfinu ve vzorcích makoviny byly vybrány reprezentační varianty ze všech pokusných stanovišť. Varianty byly vybrány na základě minulých let řešení projektu. Vzorky makoviny byly na pracovišti v Opavě homogenizovány a analyzovány metodou HPLC na obsah jednotlivých alkaloidů (morfin, thebain, kodein) 16

7.2.1 Shrnutí: Byla optimalizována a validována multidetekční metoda pracující na principu UHPLC-TOFMS určená pro stanovení širokého spektra mykotoxinů v semeni máku. Metoda byla použita ke stanovení spektra mykotoxinů v semeni máku. Většina vzorků semen máku neobsahovala žádné mykotoxiny v detekovatelném množství. Osivo pro pokusné účely bylo jak ekologického tak konvenčního původu (certifikované osivo), ošetřováno bylo v souladu s metodikou a doporučenými postupy pro přírodní a chemosyntetické prostředky Parametry osiva byly hodnoceny v souladu s metodikou Pokusy byly zakládány a vedeny na plochách konvenčních i certifikovaných pro ekologické zemědělství Vzcházení na ekologických plochách bylo limitováno krytonoscem kořenovým V ochraně proti krytonosci makovicovému u jarního máku se osvědčily záchytné pásy ozimého máku odtud ovšem pochází masivní napadení vzcházejícího porostu jarního máku v Budyni nad Ohří. V ochraně proti krytonosci kořenovému poprvé použity pasti, jejichž účinek je sporný. Navíc jsou neselektivní. Mohou sloužit spíše k monitorování výskytu brouka. Ve druhé generaci byly larvy krytonosce kořenového (larvy na kořenech) a jejich škodlivost účinně redukovány užitím postřiku přípravkem Neem Azal ke kořenovým krčkům (možný účinek Neem Azalu i proti k. makovicovému zpráva J. Kazda) Výskyt rostlin napadených chorobami na parcelách byl v korelaci s použitými chemosyntetickými i přírodními prostředky ochrany rostlin V laboratorních podmínkách byl na vybraných partiích semen z různých lokalit zjišťován výskyt Dendryphion sp. v/na osivu, výsledky jsou k dispozici u řešitele Obsah morfinu v makovině odpovídal normě a pohyboval se podle původu vzorku v rozsahu 0,3-0,9 %, nejnižší obsah vykazovala makovina ozimého máku (0,3 %) V roce 2010 byl splněn výstup V004: Ověřit účinnost různých způsobů ošetření osiva proti patogenům osiva a vzcházejících rostlin máku na ekologických a konvenčních pěstitelských plochách. Výsledky byly prezentovány na seminářích a konferencích. Gliorex i Polyversum jsou, samostatně i v kombinaci s dalšími postupy (plasma), vhodné k ošetření osiva. Zlepšují zdravotní stav rostlin a zvyšují stabilitu výnosu. 17

7.3. Evidence výstupů plánovaných a schválených v návrhu projektu a k nim náležejících výsledků uplatněných v průběhu řešení projektu Číslo výstupu V001 1.1.2009-31.12.2011 V002 1.1.2009-31.12.2011 Definice cíle Indikátory dosažení Prostředky ověření Definice cíle Indikátory dosažení Prostředky ověření V přesných polních pokusech s aplikacemi biologických přípravků zjistit a porovnat jejich vliv na zdravotní stav rostlin, výnosové a kvalitativní ukazatele produkce v podmínkách ekologického a integrovaného hospodaření. Výběr a označení konkrétních přípravků, jejichž aplikace (samostatná či v kombinaci) zlepšuje zdravotní stav rostlin a umožňuje dosažení vyšší výnosové jistoty a kvality než u neošetřené kontroly. Vypracování metodik standardní pěstitelské technologie pro ekologické zemědělství, doložených pracovními záznamy. Praktická doporučení pro optimalizaci pěstitelské technologie počínaje rokem 2010. Vědecké a odborné publikace, příspěvky na konferencích, výroční a závěrečné zprávy. V poloprovozních polních pokusech s aplikacemi biologických i chemických přípravků ověřit a porovnat jejich vliv na zdravotní stav rostlin, výnosové a kvalitativní ukazatele produkce v podmínkách ekologického i integrovaného zemědělství. Výběr konkrétních přípravků, jejichž použití (samostatné či v kombinaci) v provozních podmínkách zlepšuje zdravotní stav rostlin a umožňuje dosažení vyšší výnosové jistoty a kvality než u neošetřené kontroly. Vypracování metodik standardní pěstitelské technologie pro ekologické zemědělství, doložených výčtem pracovních charakteristik. Praktická doporučení pro optimalizaci pěstitelské technologie počínaje rokem 2010. Vědecké a odborné publikace, příspěvky na konferencích, výroční a závěrečné zprávy. Dosažené výsledky 1. QH92106/00/2010 Pokusy s ekologickým pěstováním máku 2. QH92106/03/2011 - Příčiny vzniku makovic bez semen. 3. QH92106/01/2011 - Je možné pěstovat mák v ekologickém zemědělství? 4. QH92106/05/2011 - Seminář pěstitelské technologie v ekologickém zemědělství. 5. QH92106/08/2010 - Kapitola v knize Mák, Ekologický mák 6. QH92106/02/2009 - Vliv vybraných přípravků a jejich kombinací na výnos máku (Papaver somniferum L.) 1. 1QH92106/01/2010 - Herbicidy v máku 2. QH92106/05/2010 - Kapitola v knize Mák. Podzimní výsevy máku s. 287-296 3. QH92106/10/2010 - Výsledky pokusů u máku v ekologické a integrované pěstitelské technologii. 4. QH92106/00/2009 - Zakládání porostů máku 5. QH92106/06/2010 - Pěstování máku na Opavsku v r. 2009 6. QH92106/06/2011 - Ochrana máku proti plevelům 7. QH92106/02/2011 - Výsledky pokusů se stimulátory v máku. 8. QH92106/03/2010 - Vliv stimulátorů na výnos máku setého. 18

Pokračování: Evidence výstupů plánovaných a schválených v návrhu projektu a k nim náležejících výsledků uplatněných v průběhu řešení projektu Dosažené výsledky Stanovit vliv založení a organizace porostu v kombinaci s aplikacemi Definice cíle biopesticidů na zdravotní stav porostu a sklizených semen z hlediska semenářské i potravinářské kvality. V003 1.1.2009-30.12.2011 V004 1.1.2009-31.12.2010 V005 1.1.2009-31.12.2011 V006 1.1.2009-31.12.2011 Indikátory dosažení Prostředky ověření Definice cíle Indikátory dosažení Prostředky ověření Definice cíle Indikátory dosažení Prostředky ověření Definice cíle Indikátory dosažení Prostředky ověření Statisticky hodnotitelné rozdíly v napadení rostlin a produkce chorobami a škůdci. Vypracování standardní metodiky pro pěstitelskou technologii produkce "bioosiva" máku, doložené výčtem pracovními záznamy. Polní záznamy. Statistické vyhodnocení. Praktická doporučení pro optimalizaci pěstitelské technologie počínaje rokem 2010. Ověřit účinnost různých způsobů ošetření osiva proti patogenům osiva a vzcházejících rostlin máku na ekologických a konvenčních pěstitelských plochách. Nové metody úpravy osiva máku, umožňující rychlejší a vyrovnanější vzcházení rostlin, nižší výskyt padání klíčních rostlin a dosažení vysoké a kvalitní produkce máku a makoviny. Praktická doporučení pro optimalizaci pěstitelské technologie počínaje rokem 2010. Vědecké a odborné publikace, příspěvky na konferencích, výroční a závěrečné zprávy. Stanovit vliv pěstitelské technologie na výnos, kvalitu a potravinovou bezpečnost produkce. Hodnotitelný rozdíl v obsahu sledovaných složek u variant pokusu uvedených ve V001 až V008. Výsledky laboratorních rozborů. Statistické vyhodnocení variant. Vědecké a odborné publikace, příspěvky na konferencích, výroční a závěrečné zprávy.srovnávací metodika pro stanovení obsahu mykotoxinů v produkci semen máku. Vývoj, optimalizace a validace multireziduální LC-MS/MS metody pro stanovení mykotoxinů v semeni máku. Sledování přítomnosti mykotoxinů v semeni máku. Výběr konkrétních mykotoxinů, jejichž výskyt je ve sledované komoditě rizikový. Vypracování standardního operačního postupu pro multireziduální stanovení cílových mykotoxinů, doložený výčtem pracovních charakteristik. Dílčí výsledky získané v průběhu řešení projektu budou předány ve formě závěrečných zpráv. Vybrané výsledky budou publikovány již druhým rokem v recenzovaných vědeckých periodikách a prezentovány na odborných seminářích a konferencích. 1. QH92106/04/2010 - Výsledky pokusů s mákem v ekologickém a integrovaném systému pěstování. 2. QH92106/05/2009 - Vliv vybranýchfaktorů na produkční schopnost máku setého (Papaver somniferum L.) 3. QH92106/05/2010 - Kapitola v knize Mák. Podzimní výsevy máku s. 287-296 QH92106/04/2011 - Vliv ošetření osiva na složky výnosu u ekologicky pěstovaného máku (Papaver somniferum) 1. QH92106/11/2010 - Kontaminace máku mykotoxiny 2. QH92106/12/2010 - Kontaminace máku mykotoxiny, poster 3. QH92106/02/2010 - Kvalitativní parametry sledované při šlechtění máku setého (Papaver somniferum L.) 1. QH92106/11/2010 - Kontaminace máku mykotoxiny 2. QH92106/12/2010 - Kontaminace máku mykotoxiny, poster 19

Pokračování: Evidence výstupů plánovaných a schválených v návrhu projektu a k nim náležejících výsledků uplatněných v průběhu řešení projektu Dosažené výsledky Definice cíle Stanovení vlivu pěstitelské technologie na výskyt chorob máku. V007 1.1.2009 - Indikátory dosažení Zjištění, zda lze vhodnou pěstitelskou technologií limitovat napadení máku chorobami. QH92106/01/2009 - Determinace fusarióz na Praktická doporučení pro optimalizaci pěstitelské technologie máku formou máku 31.12.2011 Prostředky publikace výsledků v odborném tisku, recenzovaných periodikách a na ověření semináři pro pěstitele, počínaje rokem 2010. Závěrečné práce studentů. Definice cíle V008 Indikátory 1.1.2009 - dosažení 31.12.2011 Prostředky ověření Stanovení vlivu pěstitelské technologie na výskyt škůdců máku Výsledkem bude zjištění, zda lze vhodnou pěstitelskou technologií snížit napadení máku škůdci. Vědecké a odborné publikace, příspěvky na konferencích, výroční a závěrečné zprávy. Pozn. Některé dosažené a uplatněné výsledky naplňují více cílů, proto se v tabulce mohou opakovat. 1. QH92106/04/2009 - Sledování výskytu škůdců a jejich hospodářského významu 2. QH92106/09/2010 - Výskyt krytonosce makovicového ve středních Čechách Poznámka: Evidenci i přesnost přiřazení jednotlivých výsledků by bývalo bylo výrazně zjednodušilo, pokud by řešitelé evidenci výsledků v roce 2009 založili na využití definic cílů (V001-V008). Za současného stavu věcí nelze již bohužel v elektronické verzi původní nastavení názvů výsledků měnit a proto se i v redakční zprávě držíme původního nastavení. 20

7.4. Evidence výsledků, které jsou předmětem PUV (plánovaného uplatnění výsledků) Způsob uplatnění Dosažený výsledke Termín 1 Článek v odborném časopise (cizí jazyk) (Jneimp) QH92106/02/2009 - Vliv vybraných přípravků a jejich kombinací na výnos máku (Papaver somniferum L.) QH92106/04/2010 - Výsledky pokusů s mákem v ekologickém a integrovaném systému pěstování. QH92106/04/2011 - Vliv ošetření osiva na složky výnosu u ekologicky pěstovaného máku (Papaver somniferum L.). Článek v impaktovaném periodiku (Jimp) Článek ve sborníku z konference (cizí jazyk) (Dp) Certifikovaná metodika multidetekční metody pracující na principu UHPLC-MS/MS, určené pro stanovení širokého spektra mykotoxinů v semenech máku. (N) Certifikovaná metodika pro ekologickou pěstitelskou technologii máku. Certifikovaná metodika pro integrovanou pěstitelskou technologii máku. QH92106/05/2009 - Vliv vybranýchfaktorů na produkční schopnost máku setého (Papaver somniferum L.) QH92106/11/2010 - Kontaminace máku mykotoxiny QH92106/02/2009 - Vliv vybraných přípravků a jejich kombinací na výnos máku (Papaver somniferum L.) QH92106/02/2011 - Výsledky pokusů se stimulátory v máku. QH92106/01/2011 - Je možné pěstovat mák v ekologickém zemědělství? QH92106/04/2009 - Sledování výskytu škůdců a jejich hospodářského významu QH92106/04/2011 - Vliv ošetření osiva na složky výnosu u ekologicky pěstovaného máku (Papaver somniferum L.). 31.12.2013 31.12.2014 31.12.2014 QH92106/11/2010 - Kontaminace máku mykotoxiny 31.12.2012 QH92106/04/2010 - Výsledky pokusů s mákem v ekologickém a integrovaném systému pěstování. 31.12.2012 QH92106/04/2010 - Výsledky pokusů s mákem v ekologickém a integrovaném Audiovizuální záznam (A) 31.12.2012 systému pěstování. Workshop (W) QH92106/05/2011 - Seminář pěstitelské technologie v ekologickém zemědělství. 30.6.2013 Ověřená technologie pro ekologickou produkci QH92106/04/2010 - Výsledky pokusů s mákem v ekologickém a integrovaném 31.12.2015 máku. (Z) systému pěstování. Nejzazší možný termín pro uplatnění výsledku 21

7.5. Roční technická zpráva OSEVA VaV OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. Purkyňova, Opava Tel./fax: +420, tel: +420 e-mail: hajkova@oseva.cz Charakteristika lokality Opava v roce 2011 Pokusné parcely byly vysety na honu č.4 v katastru Opavy Kylešovic. Pozemek leží v nadmořské výšce 252 m, svahovitost pozemku je 0 %. Patří do teplé oblasti s průměrnou roční teplotou 8,23 C, výrobního typu řepařského. Průběh počasí z automatické meteorologické stanice Otice v roce 2011 Měsíc Dekáda Průměrná dekádní t ( C) Denní srážek (mm) Leden I. -0,53 1,7 II. 3,49 4,9 III. -5,08 5,2 Únor I. 1,06 2,7 II. -2,46 5,9 III. -6,83 1,0 Březen I. -0,49 0,0 II. 5,79 26,1 III. 4,94 3,3 Duben I. 9,95 5,8 II. 7,14 8,1 III. 11,86 15,6 Květen I. 8,13 30,9 II. 14,42 10,5 III. 15,75 33,5 Červen I. 17,47 17,5 II. 15,83 9,5 III. 16,15 49,8 Červenec I. 15,98 42,1 II. 17,7 41,2 III. 14,58 65,7 Srpen I. 17,16 15 II. 17,73 18,4 III. 18,82 11,4 Září I. 15,49 9 II. 14,25 2,9 III. 13,95 0,1 Říjen I. 11,29 27,5 II. 6,18 8 III. 5,86 4,2 Listopad I. 4,26 0 II. -0,73 0 III. 0,77 0 22 Průměrná t/ normál srážek/ normál -0,85/-1,9 11,8/19,1-2,45/-0,5 9,6/22,4 3,46/3,1 29,4/29,4 9,65/8 29,5/43,6 12,86/13,2 74,9/73,8 16,48/16,3 76,8/86,3 16,04/17,9 149/90,1 17,93/17,4 44,8/71,2 14,56/13,4 12/54,6 7,72/8,7 39,7/37,2 1,43/3,6 0/39,8 Dlouhodobý normál ročního úhrnu srážek zde činí 640 mm. Půda je písčitohlinitá, podíl jednotlivých frakcí: jílovité 27 %, hlinité 44 %, písčité 29 %. Podíl humusu činí 3,08 %, ph

6,87 s hloubkou ornice 30 cm. Půdní analýza byla provedena v dubnu 2011 s těmito výsledky: Ca 0,52 %, P 96 mg, K 128 mg, Mg 190 mg. Zastoupení obilnin v osevním sledu je 50 %. Průběh počasí v Opavě: Po srážkově podprůměrném lednu a únoru se vystřídaly srážkově průměrný březen a podprůměrný duben. Nejvýrazněji se od dlouhodobého normálu odchýlil měsíc červenec. Byl poměrně chladný, ve srovnání s dlouhodobým normálem téměř o 2 C, a spadlo celkem 149 mm srážek, což je 165 % dlouhodobého normálu. V průběhu ostatních měsíců se teploty ani srážky nijak výrazně nelišily od dlouhodobých průměrů. Průběh pokusu v Opavě fungicidní a insekticidní bloky: Maloparcelkový pokus parcelami o velikosti 10 m 2 byl zaset 6.4.2011 do dobře připravené půdy. Výsevek byl 1,5 kg/ha. Ve fungicidním a insekticidním bloku byl preemergentně aplikován herbicid Merlin v dávce 80 g/ha. V důsledku sucha rostliny máku vzešly až 20.4.2011, vzešly však velice pravidelně, nebyla zaznamenána žádná mezerovistost. Rostliny měly i nadále ideální podmínky pro růst a vývoj. V období prvního hodnocení rostlin vykazujících příznaky vlivů patogenů byly zaznamenány pouze rostliny s příznaky napadení plísní makovou (Peronospora arborescens). U všech hodnocených variant se bez rozdílů vyskytovaly 1 až 2 napadené rostliny na parcele. Příznaky jiných chorob na rostlinách nebyly pozorovány. Neobjevovali se ani jedinci napadení bakteriózou, jako tomu bylo v roce 2009. 20.5.2011 byly parcely plošně ošetřeny herbicidem Laudis v dávce 2 l/ha, dále byl použit graminicid Pantera v pýrohubné dávce 2,5 l/ha dne 27.5.2011 a 30.5.2011 aplikací herbicidu Trophy byla zajištěna bezplevelnost parcel až do doby sklizně. Parcely byly 1.6.2011 přihnojeny dávkou 30-ti kg dusíku/ha ve formě LAV. Průběh počasí v dalším období byl velmi příznivý pro zdárné dozrávání máku, příznaky napadení chorobami hlavně na listech a tobolkách odpovídaly černím a helmintosporióze (Helminthosporium papaveris). Na pokusném stanovišti v Opavě bylo v průběhu roku pozorováno silně podprůměrné napadení škůdci, ať už se jednalo o krytonosce kořenového, který se v dřívějších letech poměrně pravidelně vyskytoval, nebo o žlabatku stonkovou. Výskyt dospělců obou sledovaných druhů v době založení pokusů ani dále v průběhu nebyl pozorován a při hodnocení napadení rostlin nebylo toto napadení prokázáno. Mšice maková byla na pokusných parcelách máku v tomto roce zaznamenána pouze sporadicky. 23

Poprvé jsme na naší lokalitě mohli pozorovat napadení krytonoscem makovicovým. Na okrajích pole na nejdříve odkvetlých makovicích bylo možno sledovat typické poškození několika málo makových tobolek, což je známkou šíření škůdce i do oblastí, kde se nedávno ještě vůbec nevykytoval. Tabulka 1: Agrotechnika v Opavě Předplodina: pšenice ozimá Podmítka srpen 2010, talířový podmítač Orba: konec 10/2010, střední orba Příprava půdy: 3.4.2011 urovnání povrchu, kompaktor Výsev: 6.4.2011 Odrůda: Orfeus, výsevní množství 1,5 kg/ha 9.4.2011 Merlin 750 WG 80 g/ha - PREE Herbicid: 20.5.2011 Laudis 2 l/ha Pantera QT 2,5 l/ha 31.5.2011 Trophy 2 l/ha Hnojení: 1.6.2011 LAV 30 kg N/ha Sklizeň: 11.8.2011 Varianty pokusu v Opavě insekticidní a fungicidní bloky: Číslo varianty Moření osiva Přípravek - postřik Dávka / ha Termín aplikace BLOK INSEKTICIDNÍ krytonosec kořenový 20 Chinook - moření - 21 - Nurelle D 0,6 l vzcházení 22 - Mospilan 120 g vzcházení 23 - Vaztak 10 EC 0,15 l vzcházení 24 - Vaztak 10 EC+Mospilan 0,15 l + 120 g vzcházení 25 kontrola kontrola - vzcházení BLOK INSEKTICIDNÍ žlabatka stonková 25 kontrola - 26 Vaztak 10 EC 0,15 27 Callypso 480 SC 0,2 28 Biscaya 240 OD 0,3 29 Mavrik 2 F 0,2 14.6.2011 50 cm BBCH 55 24

BLOK FUNGICIDNÍ Varianta 2011 2010 Cíl Ošetření Počet ošetření Dávka na ošetření osiva Ošetření (++osiva) Termíny ošetření vegetace variantu*** 1 1. Kontrolní Cruiser kontrolní - 0 0 2 7. 3 9 4 10 5 11 6 12 7 13 8 14 9 15 10 17** 11 18** 12 19** Plíseň maková, Helminto sporióza Cruiser 2 x Dithane DG Neotec 2 kg Helminto sporióza Choroby tobolek Cruiser Prosaro 250 EC 0,75 l Plíseň maková Helminto sporióza Cruiser Discus 0,25 kg Plíseň maková Helminto sporióza Cruiser Caramba 1,0 l Plíseň maková Helminto sporióza Cruiser Bumper Super (1,0 l) Plíseň maková Helminto sporióza Plíseň maková Helminto sporióza Plíseň maková Helminto sporióza 2009 2009 Cruiser Cruiser Cruiser Chinook Prosaro 250 EC 0,75 l + Hergit 0,2 l Prosaro 250 EC 0,75 l + Hergit 0,2 l + Zn 0,5 kg Prosaro 250 EC 0,75 l +Atonic 0,6 l 1. PROSARO 250 EC 0,75 +Biscaya* 0,3 l; 2. Prosaro 250 EC 0,75 l + Hergit 0,2 l 1. 2-4 listů až růžice, 2. 2 týdny po 1. oš 2 16 g háčkování až první otevřené květy 1 6 ml háčkování až první otevřené květy 1 2 g háčkování až první otevřené květy 1 16 ml háčkování až první otevřené květy 1 8 ml háčkování až poupě před otevřením 1 háčkování až poupě před otevřením 1 háčkování až první otevřené květy 1 1. 20 cm; 2. háčkování - poupě před otevřením 2 1.Talstar 0,1 l + Gliorex 3,0 kg; 2. Biscaya* 0,3 l; 3. Prosaro 250 EC 0,75 1. vzcházení; 2. 20 cm; l + Hergit 0,2 l + 3. háčkování - poupě Zn 0,5 kg Gliorex 2009 E-ventus +Chinook 2 x Aqua Vitrin 2,5 l/ha 6 ml + 1,6 ml 6 ml + 1,6 ml + 4 g 6 ml + 4,8 ml 1. 6 ml + 1,2 ml; 2. 6 ml + 1,6 ml 0,8 ml+24 g; 2,4 ml; 6 g + 1,6 ml + 4 g před otevřením 3 1. poupě; 2. 7-10 dní po 1. 2 20 ml 25

Výsledky pokusu v Opavě insekticidní blok I přes téměř nulové napadení rostlin sledovaným škůdcem se vliv použitého insekticidu na výnos semen projevil. Nejvyšší výnos byl zaznamenán u použití Vaztak 10 EC, také varianty ošetřené ostatními přípravky měly výnos vyšší než neošetřená kontrola. Nejvyšší výnos ve srovnání s neošetřenou kontrolou vykazovala varianty ošetřená přípravkem Vaztak 10 EC, ošetření přípravkem Biscaya bylo na úrovni kontroly a ostatní ošetřené parcely se dostaly výnosově pod neošetřenou kontrolu. Vzhledem k nízkému výskytu žlabatky stonkové (hodnoceno 19.7.2011 rozřezáváním stonků na neošetřené kontrole, kdy nebyl škůdce vůbec nalezen a podchycen) nelze vliv přípravku na výnos plodiny přičíst jednoznačně účinku na tohoto škodlivého činitele. Výsledky pokusu v Opavě fungicidní blok Graf. 1 Vzcházivost fungicidní blok Ve fázi BBCH 14-16 byly hodnoceny porosty založené jako poloprovozní pokus. Cílem bylo stanovit počty rostlin na metr čtvereční s přepočtem na %, přičemž 100% byl údaj u neošetřené kontroly (jako u předchozího grafu). Ve srovnání s počtem rostlin na neošetřené kontrole byl počet rostlin vyšší u přípravků Cruiser OSR a Chinook, naopak méně rostlin bylo napočítáno na variantách ošetřených přípravky Gliorex a Polyversum.. Hodnocení vzcházivosti, kdy počty vzešlých rostlin na metr čtvereční byly převedeny na %, přičemž 100 % byla neošetřená kontrola, proběhlo ve fázi BBCH 14-16. Všechny ošetřené varianty vykazovaly lepší vzcházivost než neošetřená kontrola, v průměru o 25 až 57 26

%. Protože ve fungicidním bloku bylo přípravkem Criser OSR ošetřeno 8 variant, pro hodnocení byl z těchto variant vypočítán průměr a ten pak byl porovnán s neošetřenou kontrolou a ostatními variantami. Jako kontrola bez ošetření byla použita varianta z vedlejšího bloku pokusů, která přímo sousedila s blokem fungicidním. Graf. 2 Vzcházivost poloprovoz Požerky krytonosce kořenového na listech bylo hodnoceno vždy na 50-ti rostlinách z parcely ve fázi BBCH 14-16 ve třech stupních: 1 - bez výskytu, 2 - ojediněle, slabý výskyt, 3 - proděravělé listy, silný výsky. Výskyt však nebyl ani na neošetřených kontrolách zaznamenán. Toto bylo potvrzeno také následujícím hodnocením ve fázi BBCH 85, kdy bylo hodnoceno % napadení kořenového krčku krytonoscem kořenovým. Na odebraných rostlinách na neošetřené kontrole měla být hodnocena míra žíru krytonosce kořenového na kořenovém krčku a porovnána s ošetřenými variantami. Z již dříve zmíněného důvodů však toto hodnocení nebylo možné, žádná z odebraných rostlin nevykazovala sebemenší poškození sledovaným škůdcem. Tatáž situace se opakovala při hodnocení výskytu mšice makové. Její výskyty byly jen sporadické, řádné hodnocení proto nemělo smysl. Dne 22.6. 2011 ve fázi BBCH 51-57 byl hodnocen počet rostlin napadených plísní makovou na parcele. Na každé pokusné parcele se vyskytovala 1 2 napadené rostliny bez rozdílů. Příznaky napadení dalšími patogeny rostliny nevykazovaly. O měsíc později dne 19.7. ve fázi BBCH 69-71 byl výskyt chorob hodnocen podruhé, tentokrát stupněm napadení: 1=10%, 2=20%, 3=30%, 4=40% atd.. Většina parcely byla zařazena do stupně 3, ale graf ukazuje na vliv ošetření na jednotlivé varianty. Jednoznačně 27

nejvíce napadená je neošetřená kontrola, hned po ní var.12. Vliv umístění parcel v pokusu na stupeň napadení v letošním roce patrný nebyl. Graf.3 Choroby 2. termín V celém průběhu pokusů nebyly patrny žádné rozdíly ve výšce mezi jednotlivými pokusnými variantami. Graf. 4 Výnosy (t/ha) a HTS (g). Krytonosec. 28

Graf. 5 Výnosy (t/ha) a HTS (g). Žlabatka. U všech ošetřených variant došlo ke zvýšení výnosu semen ve srovnání s neošetřenou kontrolou, nejvíce se zvýšení výnosu projevilo u variant 3, 4, 8, 9, 10 a 11 a to o více než 20 %. Poměr makoviny k semenům se pohybovala okolo 42 %, výnos makoviny kopíroval výnos semen u jednotlivých variant. Graf. 6Výnos semen (t/ha, %) 29

Graf.7 Výnos semen a makoviny (t/ha) Pouze u varianty 2 byla HTS (0,475 g) nižší než u neošetřené kontroly (0,48 g), ostatní ošetřené varianty vykazovaly HTS vyšší (0,5 0,52 g). Graf. 8 Výnos semen (t/ha) a HTS (g) 30

Graf. 9 Klíčivost Energie klíčivosti a klíčivost sklizených semen se u jednotlivých sledovaných variant pohybovala v rozmezí od 47,5 až po 69,25 %. Všechny ošetřené varianty překonaly neošetřenou kontrolu. V letošním roce tedy jakékoli opatření ve formě přípravku aplikovaného v daný čas do porostu maku byl ku prospěchu kvality sklizených semen jako možného osiva. Graf. 10 Energie klíčivosti 31

Průběh pokusu v Opavě herbicidní blok: Sled herbicidů v máku Cílem pokusu bylo u sledů pre- a postemergentních nebo dvou postemergentních herbicidů ověřit jejich selektivitu k máku a účinnost na plevele. Pokus byl pouze informativní bez opakování. Účinek herbicidů na plevele byl hodnocen odhadem, kdy do jedné hodnoty bylo zahrnuto snížení počtu plevelů na parcele a fytotoxický účinek herbicidů na plevele. Pokud se objevila fytotoxicita, tak jednotlivé příznaky byly hodnoceny % poškození rostlin ve srovnání s neošetřenou kontrolou. Byl sledován především projev fytotoxicity vyvolané sledem herbicidů, fytotoxicita typická pro konkrétní herbicidy (rozklesnutí rostlin po Starane, vyblednutí po Callistu a Laudisu) byla sledována jen okrajově. Hodnocení výnosu semen nebylo plánováno kvůli silnému zaplevelení a možnému poškození některých kombinací. Na každou parcelu bylo přiseto asi 20 semen ozimé řepky pro simulaci výdrolu. Pokus byl zaset 6.4. a preemergentně ošetřen 7.4. 2011. Preemergentní aplikace 2011 0- neoš. 0 0 0 0 0 0 0 0 Callisto Lentipur Merlin Callisto Lentipur Merlin Callisto Lentipur Merlin Callisto Lentipur Merlin Callisto Lentipur Merlin Callisto Lentipur Merlin Callisto Callisto Callisto Lentipur Lentipur Lentipur Merlin Merlin Merlin Callisto 0,25 l/ha, Lentipur 1,3 l/ha, Merlin 100g/ha, Command 0,2 l/ha Commandem byl ošetřen celý pás okraje, (3x Calllisto, Lentipur a Merlin). Zde byl porost hodnocen jen po vzejití z hlediska možné fytotoxicity, později zastával funkci okraje. Postemergentní herbicidy 1. aplikace 1. aplikace postemergentních herbicidů byla provedena 19.5.2011. Snahou bylo ošetřit porost co nejpřesněji ve fázi 6 pravých listů, aby nepřerostly plevele tam, kde nebyly použity preemergentní herbicidy a současně dodržet doporučený odstup tří dnů od posledního deště. 32

1 2 3 4 5 6 Herbicid Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran Dávka 2 l/ha 2 l/ha 0,6 l/ha 0,2 l/ha 2 l/ha 2 kg/ha 0 0 0 0 0 x x x x Lentipur Lentipur Lentipur Lentipur Lentipur Lentipur Lentipur Lentipur Lentipur Protugan Protugan Protugan Protugan Protugan Protugan Protugan Protugan Protugan Starane Starane Starane Starane Starane Starane Starane Starane Starane Callisto Callisto Callisto Callisto Callisto Callisto Callisto Callisto Callisto Laudis Laudis Laudis Laudis Laudis Laudis Laudis Laudis Laudis Lentagr Lentagr Lentagr Lentagr Lentagr Lentagr Lentagr Lentagr Lentagr 0 0 0 0 0 0 0 0 0 x parcely použité pro jiné účely nesouvisející s uvedeným pokusem Postemergentní herbicidy 2. aplikace Aplikace byla provedena 1.6.2011 ve fázi listové růžice (BBCH 19). 1 2 3 4 5 6 Herbicid Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran Dávka 2 l/ha 27 ml/4 l 2 l/ha 27 ml/4 l 0,6 l/ha 8ml/4 l 0,2 l/ha 2,7 ml/4 l 2 l/ha 27 ml/4 l 2 kg/ha 27 g/4 l Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran. Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Výsledky Pozemek byl dost silně zaplevelen, ale spektrum plevelů bylo poměrně omezené. Dominantními druhy plevelů byly merlíky (bílý a fíkolistý), zemědým lékařský, kokoška pastuší tobolka, v menší míře se vyskytoval ptačinec prostřední, pryšec kolovratec, rdesno blešník a hořčice rolní. Vysoké zaplevelení zemědýmem je v této pokusné lokalitě dost netypické, na jiných pozemcích v okolí se tak velké zastoupení zemědýmu nevyskytuje. 33

Preemergentní aplikace Souhrnný účinek na plevele Callisto + Lentipur + Merlin + Herbicid Callisto Lentipur Merlin Command Command Command Téměř bez Účinek 50% 70% 80% 50% 70% účinku V uvedeném druhovém spektru plevelů žádná z variant uvedených přípravků nedokázala zajistit dobré odplevelení vzcházejícího máku. Všechny varianty měly velmi dobrý účinek na kokošku a mimo Lentipuru i poměrně dobrý (70 90%) účinek na merlíky. Zcela nedostatečný byl u všech variant účinek na zemědým a ani řepku nedokázalo žádné ošetření zcela potlačit. Žádné projevy fytotoxicity nebyly pozorovány. Sled preemergentní a 1. postemergentní aplikace V tabulce je uvedeno souhrnné potlačení plevelů na parcele v % v porovnání se stavem na neošetřené kontrole u těch plevelů, které se na dané parcele vyskytovaly. Plevele které v době hodnocení byly zcela potlačeny proto v tabulce nejsou uvedeny (rdesno, ptačinec, hořčice rolní). Nejlepší účinek měla kombinace Merlin + Callisto, která porost zcela vyčistila. Poměrně dobrý účinek na plevele měly i další kombinace s Merlinem, účinek sledů s Lentipurem a Callistem byl horší. V tomto sledu nebyly pozorovány žádné významnější projevy fytotoxicity, které by byly podmíněny sledem ošetření. Účinek sledů herbicidů na plevele v %: Lentipur Protugan Starane Callisto Laudis Lentagran řepka 90 řepka 90 zemědým 90 pryšec 90 zemědým 90 pryšec 90 Merlin merlík 90 zemědým 80 pryšec 80 řepka 70 Lentipur merlík 75 zemědým 20 řepka 30 Callisto preem. kokoška 50 merlík 90 řepka 50 zemědým 90 pryšec 50 merlík 90 další plevele bez účinku zemědým 90 merlík 90 pryšec 70 řepka 90 merlík 50 kokoška 0 řepka 0 zemědým 50 merlík 50 zemědým 70 pryšec 50 34 merlík 90 zemědým 50 pryšec 20 zemědým 90 pryšec 90 zemědým 0 kokoška 80 pryšec 80 zemědým 90 pryšec 90 merlík 50 řepka 20 pryšec 50 merlík 0 kokoška 30 řepka 0 zemědým 70 zemědým 50 merlík 30 další plevele bez účinku Stejně jako v předchozí tabulce je zde uvedena míra potlačení plevelů v % u těch plevelů, které se na dané parcele vyskytovaly. Rdesno, ptačinec a hořčice rolní byly zcela vyhubeny ve všech variantách. 1. aplikace postemergentních herbicidů byla provedena ihned, jakmile porost dosáhl fáze 6 pravých listů a byly za sebou 3 dny bez deště, pro dostatečný účinek některých herbicidů to už ale bylo pozdě, protože plevele byly v době aplikace zřejmě již příliš vyvinuté. Dokonalé vyčištění porostu bylo dosaženo u sledů Starane Callisto,

Callisto Callisto, Laudis Callisto a Callisto Laudis. Výrazně nižší zaplevelení bylo u sledů obsahujících Callisto a Laudis, sledy jiných herbicidů byly zapleveleny podstatně více. Nebyl pozorován žádný projev fytotoxicity, který by bylo možno spojit se sledem herbicidů. V minulosti pozorované velmi dramatické projevy fytotoxicity u sledů chlorotoluron izoproturon a při použití Laudisu jako 2. herbicidu se v tomto roce neprojevily. Sled 1. a 2. postemergentní aplikace Účinek sledů herbicidů na plevele v %, vodorovně 1. aplikace, svisle 2. aplikace Lentagran Laudis 1.Lentipur 1.Protugan 1.Starane 1.Callisto 1.Laudis 1.Lentagran merlík 50 merlík 70 merlík 90 kokoška 50 merlík 90 kokoška 0 kokoška 50 kokoška 50 další plevele bez kokoška 50 řepka 50 řepka 0 řepka 0 řepka 0 účinku pryšec 50 zemědým30 pryšec 50 kokoška 90 zemědým50 kokoška 80 Callisto řepka 50 řepka 50 Starane Protugan Lentipur zemědým 0 kokoška 0 merlík 50 řepka 50 merlík 90 kokoška 70 zemědým30 pryšec 50 merlík 70 kokoška 90 zemědým90 řepka 0 kokoška 0 zemědým50 merlík 50 řepka 50 kokoška 50 zemědým90 řepka 20 merlík 90 zemědým90 kokoška 50 řepka 50 zemědým50 kokoška 70 kokoška 0 zemědým 0 merlík 20 kokoška 0 merlík 90 zemědým90 řepka 50 merlík 50 zemědým90 kokoška 90 řepka 70 pryšec 90 zemědým90 merlík 95 merlík 95 řepka 95 zemědým90 merlík 90 zemědým 70 kokoška 50 zemědým 50 kokoška 50 zemědým80 zemědým90 kokoška 10 zemědým50 pryšec 20 kokoška 90 merlík 90 řepka 50 merlík 30 kokoška 0 řepka 0 zemědým50 řepka 0 kokoška 0 zemědým90 merlík 80 zemědým80 kokoška 90 merlík 90 řepka 50 Závěr Z dosažených výsledků vyplývá, že použití preemergentních herbicidů výrazně usnadní odplevelení porostu, ale dokonalé odplevelení dokážou preemergentní herbicidy zajistit jen výjimečně. Použití pouze postemergentních herbicidů je více riskantní, protože malé opoždění v načasování první aplikace vede k výraznému snížení účinku a ani následné ošetření už nemusí situaci uspokojivě vyřešit. Některé sledy přípravků mohou být výrazně fytotoxické, tento problém bude nutno dále studovat. 35

Číslo aktivity A09/11 Název (cíl)aktivity Hodnocení zdravotního stavu osiva máku s cílem získat podklady pro vývoj metody detekce původce helmintosporiózy v osivu máku Zahájení aktivity 1.1.2011 Ukončení aktivity 31.12.2011 Indikátory dosažení (dílčí výsledky) Bude optimalizována metoda detekce Dendryphion sp. v osivu máku. Testy budou probíhat se vzorky osiva používaného v rámci řešení projektu. Prostředky ověření (dílčích výsledků) polní a laboratorní záznamy, výroční zpráva Kdo se na řešení aktivity podílí OSEVA VaV: Miroslava Hájková, Eva Plachká, Jiří Havel a další pracovníci - poskytnutí osiva, kultivace a následná detekce Dendryphion sp. v osivu ČZU: Perla Kuchtová - poskytnutí osiva Stanovení původců napadení sklizených semen máku Pro stanovení byla použita semena máku sklizená kombajnem, protože zde je větší pravděpodobnost výskytu kontaminovaných semen uvolněných ze shluků v makovicích při mlácení. Semena byla umístěna na vlhký filtrační papír v Petriho misce a kultivována na světle za pokojové teploty 7 8 dnů. U semen se symptomy poškození vlivem houbových chorob byly popsány symptomy poškození a pod mikroskopem byl determinován původce tohoto poškození. Pro kontrolu byl také mikroskopicky ověřen zdravotní stav semen bez symptomů napadení. Osivo z roku 2009 původ Opava Zima 2008/09 trvala neobvykle dlouho. Na začátku dubna 2009 se počasí změnilo na neobvykle teplé a suché. Mák bylo proto možno zasít teprve 7.4.2009. Vlhká půda při setí výrazně snížila vzcházení rostlin z nemořeného osiva. Přestože pro zásev byl použit zvýšený výsevek nemořeného osiva, výsledný porost byl řidší, než z mořeného osiva. Pokračující sucho a neobvykle vysoké teploty způsobily, že mák vzcházel pomalu a nerovnoměrně. Vlivem sucha byl porost řidší, pokus ale byl hodnotitelný. V druhé polovině května přišlo období výrazně deštivého počasí, které trvalo až do konce června. Toto extrémní kolísání počasí způsobilo, že porost skoro do konce července dokvétal a zmlazoval. Normálně mák kvete většinou na přelomu června a července a doba kvetení nepřesahuje 10 dnů. Kromě toho se vliv počasí projevil i na výskytu bezsemenných makovic. Příčinou jejich vzniku je kombinace stresových faktorů, které naruší vývoj pylu a špatného počasí v době květu, kdy 36

nemohou létat včely a nedojde proto k opylení cizím životaschopným pylem (např. Havel J. Neparazitární poškození máku. Rostlinolékař 3, 2008, s.15 17, ISSN 1211-3565). Stejně byly postiženy porosty praktických pěstitelů v okolí, kde výnos velmi pěkně vypadajících porostů nakonec nepřesáhl 0,5 t/ha.. Vlivem teplého a suchého počasí v srpnu porost rychle a stejnoměrně dozrál. Extrémně deštivé počasí v červnu pravděpodobně podpořilo časný a vysoký výskyt chorob máku včetně neobvyklých (Havel J., Nedělník J., Moravcová H., Slezáková L., Sumíková T. Fuzarióza nová choroba na máku. Úroda 8, 2009, s. 29 30, ISSN 0139-6013). V době plného květu na začátku července již spodní listy jevily známky napadení houbovými chorobami, někde dosahovalo napadení až střední intenzity (30 50%). V porostu se vyskytovalo větší množství rostlin napadených plísní makovou (viz. hodnocení napadení stonků 2.7.2009) a začaly se objevovat příznaky napadení bakteriemi Xanthomonas papavericola (vodnaté skvrny na listech) a Erwinia carotovora (černání a mokrá hniloba stonků). Pro bližší determinaci chorob na listech byly na začátku července kultivovány listy ve vlhké komůrce na pracovišti v Opavě a vzorky listů byly 8.7.2009 zaslány k identifikaci do VÚRV Praha. Na pracovišti v Opavě byly identifikovány konidie plísně makové a dvou druhů fusarií. Na VÚRV Praha identifikovala Mgr. Slezáková druhy Alternarium, Cladosporium, Acremonium, Fusarium, Gonatobotrys a plíseň makovou. V odběrech z počátku července nebyla ani na jednom pracovišti nalezena helmintosporióza. Konidie helmintosporiózy se začaly objevovat ve vzorcích z konce července, jejich výskyt byl ale poměrně malý. Nález většího množství askospor helmintosporiózy ve vzorcích z konce července se nepotvrdil, dle pracovníků katedry ochrany rostlin na ČZU se ve skutečnosti jedná o černě. Souhrnně lze tedy říci, že na rostlinách máku se vyskytoval celý komplex patogenů s výraznějším zastoupením plísně makové. Helmintosporióza se vyskytovala na listech v malém množství až před dozráváním a i napadení tobolek helmintosporiózou bylo menší než obvykle. Extrémní průběh počasí a minimální výskyt helmintosporiózy v porostu se projevil i na zdravotním stavu sklizených semen. Testovaná semena byla neobvykle špatně klíčivá, klíčivost byla okolo 5%. Mikroskopickým stanovením nebyly u semen z tohoto ročníku nalezeny vůbec žádné choroby, semena byla zcela zdravá. U některých semen se po objevení špičky klíčku růst zastavil, ani u těchto semen nebylo identifikováno napadení houbovými chorobami. 37

Osivo z roku 2010 původ Opava Po nepříznivém roce 2009 přišel ještě horší rok 2010. Mák se podařilo dobře zasít a až do začátku května porosty vypadaly nadějně. Květen byl extrémně deštivý, pršelo každý den a spadlo celkem 246,9 % dlouhodobého průměru srážek. Porosty máku byly na rovinách silně poškozené vymáčením a silným zaplevelením, protože na pozemky se v květnu nedalo vůbec vjet a na některé nešlo vjet ani v červnu. Červen a červenec byly také srážkově nadnormální. Velké množství porostů bylo zaoráno a ty, které na rovinatých částech Opavska zbyly, pomalu ani nestály za sklizeň. Dalo by se očekávat, že tak mokrý rok bude podporovat rozvoj chorob na máku, ale nestalo se tak. Mák strádal vlivem dlouhodobého přemokření půdy a nadbytku srážek, rostliny byly téměř po celou dobu vegetace zřetelně retardované a poměrně brzy dozrály. Výraznější výskyt helmintosporiózy na listech a v tobolkách nebyl zaznamenán. Na rozdíl od předchozího roku byla semena sklizená v roce 2010 téměř stoprocentně klíčivá. Jen asi 1-2% semen jevily známky možného napadení chorobami (semena se zahnědlým klíčkem, jejichž vývoj po začátku klíčení ustal), mikroskopicky se ale nepodařilo u těchto poškozených semen nalézt žádného možného původce poškození. Osivo z roku 2011 - původ Opava Mák byl zaset 4.4.2011 do dobře připravené půdy. Až do konce června byl průběh počasí příznivý, mák dobře vzešel a vyvíjel se. Vzhledem k příznivým podmínkám nemořený mák vzcházel srovnatelně s mořeným, žádný propad ve vzcházení nebyl pozorován. Výskyt plísně makové v květnu a červnu byl velmi nízký. Červenec byl velmi deštivý, což podporovalo rozvoj chorob. Na listech po kultivaci ve vlhké komůrce byla jako dominantní choroba zjištěna helmintosporióza, plíseň maková zjištěna nebyla. Neobyčejně vysoké bylo i napadení tobolek, v porovnání s předchozími lety byla úroveň napadení 2 3 x vyšší. Vysoký výskyt helmintosporiózy na rostlinách se projevil ve zvýšené kontaminaci semen. Klíčivost semen ze sklizně 2011 byla velmi dobrá, pohybovala se okolo 90%. Na semenech bez příznaků napadení se helmintosporióza buď nevyskytovala, anebo intenzita napadení byla velmi slabá. Nevyklíčená semena měla klíčky buď zčásti nebo zcela zahnědlé, některá semena byla pokryta šedivým povlakem připomínajícím plíseň šedou. Semena se zahnědlými a odumřelými klíčky byla ve většině případů napadena helmintosporiózou, intenzita napadení u těchto semen byla vysoká. Houba se vyvíjí souběžně s klíčícím semenem a při vyšší intenzitě napadení způsobí rychlé odumření klíčícího semene. U semen pokrytých šedivým povlakem nebyla zjištěna přítomnost plísně šedé. Tento šedý povlak zřejmě není 38

spojen s infekcí helmintosporiózou, protože u poloviny testovaných semen s šedým povlakem nebylo zjištěno napadení helmintosporiózou. Odumírající zahnědlé klíčky by mohly být indikátorem napadení semen helmintosporiózou, nelze je ale vizuálně odlišit od semen zaschlých vlivem nedostatku vody při klíčení. Osivo z roku 2010 a 2011 původ Červený Újezd Ve stejném smyslu bylo testováno také osivo původem z pokusného stanoviště Červený Újezd. Klíčivost tohoto osiva byla 98 % a na nevyklíčených semenech nebyly nalezeny žádné známky napadení houbovými chorobami. Závěr Úroveň napadení semen je úměrná výskytu helmintosporiózy na rostlinách. Bez determinace pomocí mikroskopu je ale obtížné stanovit skutečnou úroveň napadení rostlin, protože nekrotické skvrny na listech vznikají kombinací infekce houbových patogenů, přirozeným odumíráním listových pletiv a výskytem saprofytických hub na odumírajících pletivech. V některých letech se na rostlinách vyskytuje směsná infekce helmintosporiózy a plísně makové, pak jsou symptomy napadení velmi variabilní a nelze je jednoznačně přiřadit k určitému patogenu. Odumírání klíčků při klíčení semen by v letech s výrazně vysokým výskytem helmintosporiózy mohlo být indikátorem úrovně napadení osiva, bez potvrzení výskytu choroby pomocí mikroskopu jde ale jen o hrubě orientační hledisko. Z výsledků vyplývá, že použitou metodu lze ke stanovení přítomnosti sledovaného patogena využít pouze v letech, kdy je napadení vyšší. Při nižším napadení metoda poskytuje nepřesné výsledky Výsledková část posklizňové rozbory Před sklizní bylo odebráno 30 makovic z každé parcely. Tyto makovice byly zařazeny do jednoho ze tří stupňů podle míry napadení houbovými chorobami vyjádřená v %, většina makovice byla zařazena do skupiny s napadením 31 60 %. 39

Graf. 11 Míra napadení makovic. Opava 2011. U jednotlivých odebraných makovic byl zjišťován výnos semen a makoviny, z grafu lze také vyčíst poměr mezi makovinou a semeny. Graf. 12 Výnos semen a makoviny ze 30 makovic. Opava 2011. Tento graf prezentuje % makoviny ve vztahu k semenům. Hodnoty se pohybují od 40,67 do 44,26 %, zatímco loni se hodnoty pohybovaly v rozmezí od 53,5 do 57,3 %. 40

Graf. 13 Procento makoviny ve vztahu k semenům. Opava 2011. Tyto grafy ukazují na napadení jednotlivých makovic helmintosporiózou v závislosti na variantě ošetření. Graf. 14 Procento makovic napadených helmintosporiózou. Opava 2011. Obsah alkaloidů v makovině K hodnocení obsahu morfinu ve vzorcích makoviny byly vybrány reprezentační varianty ze všech pokusných stanovišť, které byly vybrány na základě minulých let řešení projektu. Vzorky makoviny byly na pracovišti v Opavě homogenizovány a analyzovány metodou HPLC na obsah jednotlivých alkaloidů (morfin, thebain, kodein). 41

Graf. 15 obsah morfinu v makovině (%). Opava 2010. 0,60 Obsah morfinu v makovině v % - Opava 0,50 0,40 % 0,30 Morfin 0,20 0,10 0,00 1 Opava 7 Opava 8 Opava 10 Opava 11 Opava 12 Opava varianty Graf. 16 obsah morfinu v makovině (%). Všechny lokality. 2011 Obsah morfinu v makovině v % 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 % 0,30 0,20 0,10 0,00 1 Opava 7 Opava 8 Opava 10 Opava 11 Opava 12 Opava 1.BUD.OZ. 7.TROJA 5.UH integ. 4.UH EKO 2. BUD j. 9.SUCHDOL 6.UH EKOCHME varianty Pozn. BUD OZ Budyně nad Ohří -ozimý mák, UH Uhříněves integr jarní mákv integrovaném pěstování, UH EKO Uhříněves ekologický jarní mák, BUD j. - ekologický jarní mák, Graf. 17 obsah alkaloidů v makovině (%). Všechny lokality. 2011 0,80 0,70 0,60 0,50 % 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00 1 Opava 7 Opava 8 Opava 10 Opava 11 Opava 12 Opava 1.BUD.OZ. 7.TROJA Morfin % Kodein % Thebain % 5.UH integ. varianty 4.UH EKO 2. BUD j. 9.SUCHDOL 6.UH EKOCHME 42

Graf. 18 obsah kodeinu a thebainu v semenech (%). Všechny lokality. 2011 0,14 0,12 0,10 % 0,08 0,06 0,04 0,02 0,00 1 Opava 7 Opava Kodein % Thebain % 8 Opava 10 Opava 11 Opava 12 Opava 1.BUD.OZ. 7.TROJA 5.UH integ. varianty 4.UH EKO 2. BUD j. 9.SUCHDOL 6.UH EKOCHME Tab. Srovnání minimálních a maximálních obsahů jednotlivých alkaloidů v pokusných letech 2009 min. 2009 max. 2010 min. 2010 max. 2011-min. 2011-max Morfin 0,46 0,92 0,62 0,92 0,35 0,75 Kodein 0,02 0,08 0,04 0,08 0,01 0,12 Thebain 0 0,02 0,01 0,04 0 0,02 Vyjádření obsahu alkaloidů v makovině v % Tab. Srovnání minimálních a maximálních obsahů jednotlivých alkaloidů v pokusných letech Morfin Kodein Thebain 2009 min. 0,46 0,02 0 2010 min. 0,62 * 0,04 0,01 2009 max. 0,92 0,08 0,02 2010 max. 0,92 0,08 0,04 2011 min. 0,35 0,1 0 2011 max. 0,75 0,12 0,02 Vyjádření obsahu alkaloidů v makovině v % 43

7.6. Roční technická zpráva VŠCHT VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Ústav chemie a analýzy potravin Technická 3, 166 28 Praha 6 tel./fax: +420 220443185, tel: +420 2 24314096, +420602833424 e-mail: jana.hajslova@vscht.cz ROČNÍ TECHNICKÁ ZPRÁVA 2011 Kód projektu: QH92106 Aktivita: A02/11 Sledování vybraných fusariových a alternariových mykotoxinů v semenech máku Řešitelský tým: Vypracoval: Vysoká škola chemicko-technologická v Praze Ing. Zdenka Vepříková Ing. Milena Zachariášová, PhD., Ing. Marta Václavíková, PhD., doc. Dr. Ing. Věra Schulzová a Prof. Ing. Jana Hajšlová, CSc. Cílem aktivity bylo stanovit množství mykotoxinové kontaminace i) komerčních a ii) výzkumných vzorků semen máku. Pozornost byla zaměřena na vybrané i) fusariové mykotoxiny (deoxynivalenol (DON), deoxynivalenol-3-glucosid (D3G), nivalenol (NIV), 3- acetyldeoxynivalenol (3-ADON), HT-2 toxin (HT-2), T-2 toxin (T-2), zearalenon (ZEA) a jeho metabolity (α ZOL, β ZOL), enniatin A, enniatin A1, enniatin B, enniatin B1 a beauvericin), ii) alternariové mykotoxiny (alternariol (AOH), alternariolmonomethylether (AME) a altenuen (ALT)), iii) aflatoxiny (AFB1, AFB2, AFG1, AFG2), iv) ergotové mykotoxiny (ergosin, ergokryptin, ergokristin, ergotamin), v) další vybrané mykotoxiny (diacetoxyscirpenol (DAS), ochratoxin A (OTA), sterigmatocystin (ST), penitrem A). Extrakční postup byl optimalizován s ohledem na povahu matrice. Pro kvantitativní stanovení sledovaných analytů byla použita metoda vysokotlaké kapalinové chromatografie 44

ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem QTRAP 5500, AB Sciex (U-PLC- MS/MS), jejíž uspořádání je detailněji popsáno níže. Optimalizace dosavadního postupu přípravy vzorků V rámci optimalizace metody s přečištěním za pomoci disperzní SPE C-18 byla oproti loňskému roku snížena navážka vzorku na 2 g z původních 4 g a při extrakci bylo použito 10 ml 0,1% HCOOH oproti původně používaným 7,5 ml vody. Dále byla prodloužena doba extrakce na 30 min z původních 3 min z důvodu zajištění vyšších výtěžností mykotoxinů. Postup spočíval v navážení 2 g homogenizovaného vzorku semen máku, které byly extrahovány směsí 10 ml 0,1% HCOOH a 10 ml acetonitrilu po dobu 30 minut na třepačce při 240 ot./min. Následně byl přidán 1 g chloridu sodného a 4 g síranu hořečnatého. Tato směs byla třepána 3 min v ruce a poté centrifugována po dobu 10 min při 10 000 ot./min., díky čemuž došlo k oddělení jednotlivých fází. Cílové analyty byly vysoleny do horní acetonitrilové vrstvy, zatímco polární matriční koextrakty (např. cukry nebo aminokyseliny) zůstaly ve fázi vodné. Alikvotní podíl 2 ml organické fáze acetonitrilu byl převeden do nové kyvety a následně k němu bylo přidáno 100 mg sorbetu Bondesil (modifikovaný C18 silikagel, který sloužil k vyvázání nepolárních koextraktů) a 300 mg síranu hořečnatého. Tato směs byla třepána po dobu 1 min a následně centrifugována po dobu 2 min při 5000 ot./min. Alikvotní podíl 1 ml byl filtrován přes mikrofiltr a odebrán do vialky. 1 ml finálního vzorku připraveného tímto způsobem obsahoval 0,2 g původní matrice. Takto připravený vzorek byl připraven k analýze. Zavedení alternativní modifikace metody přípravy vzorku odstranění tuků s využitím hexanu Kromě sorbentu Bondesil byla testována možnost použití hexanu pro odstranění nepolárních látek před samotnou extrakcí, díky čemuž by mohl být krok přečištění v původním postupu vynechán. Bylo tedy nutné provést optimalizaci metody a stanovit její výtěžnost. Do plastové kyvety bylo ke 2 g homogenizovaného vzorku semen máku přidáno i) 5 ml, ii) 10 ml, iii) 20 ml hexanu. Vzorek s hexanem byl třepán po dobu 5 min. na třepačce při 240 ot./min. Poté bylo přidáno 10 ml 0,1% HCOOH a 10 ml acetonitrilu a znovu třepáno na třepačce po dobu 30 minut při 240 ot./min. Následně byly přidány soli - 1 g NaCl a 4 g MgSO4. Tato směs byla třepána 3 min v ruce a poté centrifugována po dobu 10 min při 45

10 000 ot./min., díky čemuž došlo k oddělení jednotlivých fází. Alikvotní podíl 1 ml acetonitrilové fáze, která se nacházela mezi hexanovou a vodnou fází, byl filtrován přes mikrofiltr a odebrán do vialky. 1 ml finálního vzorku obsahoval stejné množství matrice jako u metody s disperzní SPE C-18 a to 0,2 g. Pro zjištění výtěžnosti pracovního postupu za použití různého objemu hexanu i) iii) bylo využito vzorku semen máku (neobsahoval detekovatelné množství vybraných mykotoxinů) s přídavkem standardu na hladině 50 µg/kg. Výtěžnosti pro metody s hexanem (5, 10, 20 ml) a původní metodu s přečištěním pomocí sorbentu C-18 jsou uvedeny v Obr. 1. Dle naměřený dat bylo zjištěno, že žádná varianta metody s využitím hexanu nevykazovala tak vysokou výtěžnost jako metoda s použitím sorbentu C-18 (Bondesil). Překvapující byla skutečnost, že u zvyšujícího se přídavku hexanu u jednotlivých variant byl zaznamenán klesající trend u jednotlivých výtěžností, což mohlo být zapříčiněno částečným přechodem analytů do nepolární fáze, která byla v nadměrném přebytku. Optimální metodou odstranění tuků ze vzorku byla vyhodnocena metoda dispersní SPE s využitím C-18. Obr. 1 Grafické znázornění výtěžností metod s použitím hexanu (modře) a sorbentu C-18 Bondesil (zeleně) Identifikace a kvantifikace Separace analytů byla provedena za podmínek dále popsané kapalinové chromatografie na koloně Acquity UPLC HSS T3 (100 mm x 2,1 mm, 1,8 µm, Waters). Pro analyty ionizující 46