na třech druzích balkónových rostlin Experimenty realizovány ve Výzkumném ústavu Silva Taroucy pro krajinu a okrasné zahradnictví ve spolupráci s Dr. Šrámkem a Ing. Dubským, Průhonice, ČR http://www.vukoz.cz/ Adresa: Výzkumný ústav Silva Taroucy pro krajinu a okrasné zahradnictví, Květinové nám. 391, 252 43, Průhonice, ČR Symbio-m, s.r.o. Adresa firmy: Symbio-m, s.r.o. Nádražní 88 563 01 Lanškroun Adresa provozovny: skleníky a laboratoře Symbio-m, s.r.o. Sázava 170 563 01 Lanškroun Kontakty a objednávky: Tel/Fax: +420 465 320 640 Mobil: +420 777 770 955 Email: symbiom@symbiom.cz Web: www.symbiom.cz
Shrnutí: Vliv inokulace substrátu pro zakořenění rostlin arbuskulárními mykorhizními houbami, druhem Trichoderma harzianum nebo oběma variantami současně, a vliv aplikace fungicidu Previcur byly testovány na třech druzích balkonových rostlin (Verbena, Torenia, Diascia) rozmnožených z řízků. Mykorhizní inokulace pozitivně ovlivnila svěží hmotnost (větší o 25 %) a celkovou délku nadzemní části (větší o 30 %) jedinců druhu Verbena, suchou hmotnost (větší o 20 %) a celkovou délku nadzemní části (větší o 30 %) jedinců druhu Torenia. Mykorhiza zlepšila barvu listů všech tří druhů. Největší rozdíly v barvě listů mezi inokulovanými a neinokulovanými rostlinami byly nalezeny ještě před jejich přesazením, zatímco téměř vymizely na konci experimentu. Trichoderma harzianum neprokázala žádný vliv na růstové parametry ani na barvu listů. Rostliny ošetřené AM houbami a současně druhem Trichoderma harzianum vykázaly stejný pozitivní účinek na růst stejně jako v případě inokulace samotnými AM houbami. Cíle: Cílem tohoto experimentu bylo stanovit vliv inokulace substrátu pro zakořenění rostlin arbuskulárními mykorhizními houbami a druhem Trichoderma harzianum nebo oběma variantami současně na růst tří druhů balkónových rostlin Verbena, Torenia a Diascia rozmnožených z řízků. Materiál a metody: Bylinné řízky tří balkónových rostlin byly zakořeněny v substrátu obsahujícím 4 objemové díly rašeliny a perlitu (3:1) a 1 dílu Vermiculitu s aplikovaným nebo bez aplikovaného inokula (Tab. 1). Experiment se skládal ze 4 variant: neinokulované, kontrolní rostliny (C), rostliny inokulované AM houbami (M), rostliny inokulované druhem Trichoderma harzianum (T) a rostliny inokulované AM houbami a Trichoderma harzianum současně (MT). Inokulum AM hub bylo tvořeno sporami, myceliem a segmenty kořenů kolonizovaných třemi kulturami AM hub: Glomus fistulosum, G. mosseae a G. intraradices. Všechny kultury byly udržovány odděleně na kukuřici pěstované ve směsi Vermiculitu a písku (5:1) po dobu 4 měsíců ve skleníku. Pro lepší homogenizaci byl smíchán 1 objemový díl inokula AM hub s 9 díly Vemiculitu a tato směs byla přidána do pěstebního substrátu (rašelina-perlit). Inokulum bylo dávkováno v množství 0,02 l/l substrátu. Inokulum druhu Trichoderma harzianum bylo aplikováno stejně jako produkt "Supresivit" (Fytovita s.r.o., Praha, ČR) v koncentraci 0,002 g/l substrátu. Tab 1: Design experimentu s inokulací 3 druhů balkónových rostlin vegetativně rozmnožených z řízků a inokulovaných arbuskulárními mykorhizními houbami a druhem Trichoderma harzianum. Rostliny Varianty Počet opakování 5 Počet rostlin v každém opakování Verbena Temari hybrid Pink Diascia elegans Torenia hybrid Summer Wave C - kontrola M - arbuskulární mykorhizní houby T - Trichoderma harzianum MT - arbuskulární mykorhizní houby + Trichoderma harzianum Verbena 20, Torenia 10, Diascia 10 Substrát pro zakořenění rostlin rašelina-perlit + Vermiculit (s nebo bez mykorhizního inokula nebo inokula druhu Trichoderma harzianum), objemový podíl 4:1 Řízkování Substrát Druhy Verbena a Torenia nad druhým párem listů Směs rašeliny, štěpky a jílu (objemový podíl 2:2:1) se 3 g/l vápence, 2,5 g/l NPK hnojiva Hnojení 3 0,2 % živný roztok Kristalon Blue (20/6/19) 2
Plata s nezakořeněnými řízky byly umístěny v temperovaném skleníku (den/noc 20/18 C). Byly zakryty PE folií pod dobu 10 dní a poté propustnou folií po dobu dalších 7 dní. Po 1 měsíci kultivace, během které nebylo aplikováno hnojivo, byly řízky s kořeny přesazeny do pěstebního substrátu. Délka nejdelšího bočního výhonu rostlin druhu Verbena byla stanovena před přesazením, 20.5.1998. Svěží a suchá hmotnost, celková délka nadzemní části (Verbena, Torenia), listová plocha a počet květenství (pouze v případě druhu Verbena) byly stanoveny na konci experimentu, kdy rostliny dosáhly prodejní velikosti. Rostliny druhu Diascia byly hodnoceny pouze vizuálně podle barvy listů a velikosti rostlin. Segmenty kořenů deseti náhodně vybraných rostlin v každé variantě byly obarveny Trypanovou modří podle Phillipse a Haymana (1970) při použití laktoglycerolu místo laktofenolu. Mykorhizní kolonizace byla stanovena průsečíkovou metodou (Giovannetti a Mosse, 1980). Výsledky/diskuze: Mykorhizní inokulace substrátu pro zakořenění rostlin pozitivně ovlivnila růst a kvalitu (barva listů) všech tří testovaných rostlinných druhů. Vizuální rozdíly byly patrné zejména před přesazením. Barva listu rostlin ošetřených mykorhizními variantami (M, MT) byla zelenější ve srovnání s nemykorhizními variantami (C, T). Vliv mykorhizní inokulace na růst bočních výhonů byl signifikantní u rostlin druhu Verbena před jejich přesazením (Tab. 2). Relativně nízká hladina dostupných živin v substrátu pro zakořeňování rostlin (Tab. 3), který nebyl dodatečně hnojen, vytvořila příznivé podmínky pro správné fungování AM hub. Výsledky tohoto experimentu jsou v souladu s výsledky dalších autorů (Johnson et al., 1982; Chang, 1994). Po přesazení do pěstebního substrátu s vyšším obsahem dostupných živin (Tab. 3) a po aplikaci hnojiva byly rozdíly v barvě listů méně zřetelné, ale růstové trendy byly shodné s těmi, kterých bylo dosaženo v substrátu pro zakořenění rostlin. Detailní hodnocení na konci experimentu potvrdilo pozitivní účinek AM hub na růst rostlin. Mykorhizace signifikantně zvýšila svěží a suchou hmotnost, celkovou délku nadzemní části a počet květenství u druhu Verbena a suchou hmotnost a celkovou délku nadzemní části u druhu Torenia (Tab. 2, 4, 5). Aplikace druhu Trichoderma harzianum do substrátu pro zakořenění rostlin nevykázala žádný účinek na růst rostlin ani barvu listů ve srovnání s kontrolními rostlinami (Tab. 2, 4, 5). Nicméně druh T. harzianum byl kompatibilní s inokulovanými AM houbami a nedošlo k žádnému inhibičnímu účinku mykorhizní růstové reakce mykorhizovaných rostlin. Navíc nebyl prokázán žádný inhibiční efekt T. harzianum na vývoj mykorhizní kolonizace, což je v kontrastu s nedávno publikovanými výsledky T. harzianum na potlačení extraradikálního mycelia G. intraradices (Green et al., 1999). Nicméně v této studii nebyla pozorována žádná inhibice přenosu P přes houbové hyfy, což by nasvědčovalo pouhému využívání mrtvého mycelia AM hub. Naproti tomu Calvet et al., (1993) pozoroval zvýšení kolonizace AM houbami po předchozí inokulaci substrátu druhem Trichoderma aureoviride. Tab. 2. Vliv inokulace arbuskulárními mykorhizním houbami a druhem Trichoderma harzianum na růst druhu Verbena nedestruktivní analýza rostlin neinokulovaných (C) nebo inokulovaných arbuskulárními mykorhizními houbami (M), druhem Trichoderma harzianum (T) nebo oběma současně (MT). 1 Analyzováno pomocí ANOVA, průměry označené stejnými písmeny nejsou signifikantně rozdílné v rámci daného faktoru a parametru podle Duncan's Multiple Range test, p<0.05. Faktor Boční výhon (cm) Celková délka nadzemní části (cm) Mykor. Trich. 00 (C) 2.9 c 83.0 b 10 (M) 5.5 a 98.2 a 01 (T) 2.5 c 78.1 b 11 (MT) 5.6 a 95.3 a Tab. 3. Chemická analýza substrátů použitých v experimentu. Substráty ph EC ms/cm N-NH 4 A-NO 3 P 2O 5 K 2O CaO Substrát pro zakořenění rosltin 5.47 0.48 5 14 2 30 620 Pěstební substrát 5.18 1.62 4 44 53 52 970 3
Tab. 4: Vliv inokulace arbuskulárními mykorhizním houbami a druhem Trichoderma harzianum na růst druhu Verbena destruktivní analýza rostlin neinokulovaných (C) nebo inokulovaných arbuskulárními mykorhizními houbami (M), druhem Trichoderma harzianum (T) nebo oběma současně (MT). 1 Analyzováno pomocí ANOVA, průměry označené stejnými písmeny nejsou signifikantně rozdílné v rámci daného faktoru a parametru podle Duncan's Multiple Range test, p<0.05. Faktor Mykor. Trich. Svěží hmotnost(g) Celková délka nadzemní části (cm) Počet květenství Mykorhizní kolonizace (%) 00 (C) 8.8 b 84 b 0.05 b 0 b 10 (M) 11.3 a 106 a 1.00 a 25 a 01 (T) 8.7 b 84 b 0.10 b 0 b 11 (MT) 10.3 ab 111 a 0.60 ab 21 a Tab. 5. Vliv inokulace arbuskulárními mykorhizním houbami a druhem Trichoderma harzianum na růst druhu Torenia destruktivní analýza rostlin neinokulovaných (C) nebo inokulovaných arbuskulárními mykorhizními houbami (M), druhem Trichoderma harzianum (T) nebo oběma současně (MT). 1 Analyzováno pomocí ANOVA, průměry označené stejnými písmeny nejsou signifikantně rozdílné v rámci daného faktoru a parametru podle Duncan's Multiple Range test, p<0.05. Faktor Mykor. Trich. Suchá hmotnost nadzemní části (g) Celková délka nadzemní části (cm)) Mykorhizní kolonizace (%) 00 (C) 1.09 b 101 b 0 b 10 (M) 1.31 ab 134 a 20 a 01 (T) 1.17 b 104 b 0 b 11 (MT) 1.44 a 120 ab 19 a V žádné variantě ošetření nebyly nalezeny negativní vlivy inokulace AM hub, což potvrzuje výsledky mnoha praktických testů s inokulací AM hub provedených v oblasti zahradnictví (Němec, 1987). Nízká specifita AM hub k hostitelské rostlině se jeví jako velká výhoda, ale vývoj a účinnost introdukovaných symbiontů může být ovlivněna chemickými vlastnosti pěstebního substrátu, zvláště pak obsahem dostupných živin. Toto také naznačila lepší reakce rostlin na inokulace AM hub v raných stadiích kultivace v méně úživném substrátu. Zvláštní pozornost by měla být věnována kvalitě a čistotě inokula během jeho přípravy, protože AM houby nemohou růst bez přístupu kyslíku a proto hrozí nebezpečí kontaminace inokula např. kořenovými patogeny přenesenými z hrnkových kultur běžně používaných pro produkci inokula. Jak navrhl Chang (1994) kombinace plodina - AM houby by měly být také testovány ve zvláštním kultivačním systému před samotnou velkoplošnou kultivací. Inokulace samotnými AM houbami, popř. jejich kombinace s druhem Trichoderma harzianum mohou být vhodnou biotechnologickou metodou používanou v zahradnictví pro lepší využití živin obsažených v pěstebním substrátu a pro zlepšení růst rostlin. LITERATURA: Giovannetti, M. - Mosse, B.: An evaluation of techniques to measure VA infection in roots. New Phytol., 84, 1980: 489-500. Phillips, J.M. - Hayman, D.S.: Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Transact. Brit. Mycol. Soc., 55, 1970: 158-161. Nemec, S.: VA Mycorrhizae in horticultural systems. In: SAFIR, G.R. (ed.): Ecophysiology of VA mycorrhizal plants. CRC Press, Boca Raton, Florida, 1987: 193-212. Calvet, C. - pera, j. - barea, j.m. 1993: Growth responses of marigold (Tagetes erecta L.) to inoculation with Glomus mosseae, Trichoderma aureoviride and Pythium ultimum in a peat-perlite mixture. Plant Soil, 148: 1-6. Camprubí, A. - Calvet, C. - Estaún, V. 1995: Growth enhancement of Citrus reshni after inoculation with Glomus mosseae and Trichoderma aureoviride and associated effects on microbial populations and enzyme activity in potting mixes. Plant Soil, 173: 233-238. Green, H. - Larsen, J. - Olsson, P.A. - Jensen, D.F. - Jakobsen I.: Suppression of the biocontrol agent Trichoderma harzianum by mycelium of the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus intraradices in root-free soil. Appl. Envir. Microbiol. 65, 1999: 1428-1434. Johnson, C.R. - Menge, J.A. - Johnson, E.L.V.: Effect of vesicular-arbuscular mycorrhizae on growth of Chrysanthemum morrifolium RAMAT. Sci. Hortic., 17, 1982: 265-269. Chang, D.C.: What is the potential for management of vesicular-arbuscular mycorrhizae in horticulture? In: Robson, A.D. - Abbot, L.K., - Malajczuk, N. (eds.): Management of mycorrhizas in agriculture, horticulture and forestry. Kluwer Academic Publishers, Netherlands, 1994: 187-190. 4
Kontrola Inokulováno Inokulované rostliny druhu Verbena kvetly signifikantně více při srovnání s neinokulovanými, kontrolními (nahoře) rostlinami stejného stáří. Kořen kolonizovaný endomykorhizní houbou. Kulovité objekty jsou spory zapletené v extraradikálním myceliu. Kontrola Inokulováno Neinokulované, kontrolní (vlevo) a inokulované (vpravo) rostliny Verbena, Torenia a Diascia už v ranných fázích propagace byl patrný vliv mykorhizní kolonizace. 5
Kořen kolonizovaný arbuskulárními mykorhizními houbami se zřetelnými arbuskulami (žluté šipky) a hyfami (červená šipka). Dokumentace Symbio-m, s.r.o. 6