Mateřské protilátky vs. vakcinace selat proti PCV2

Mateřské protilátky vs. vakcinace selat proti PCV2 MVDr. Petr Václavek, Ph.D. Státní veterinární ústav Jihlava VETfair - seminář CPVS, Hradec Králové, 12. dubna 2013

Mateřské protilátky vs. vakcinace selat proti PCV2 1) Aktuální PCV2 situace a otázky týkající se vakcinace 2) PCV2 imunologie a mateřské protilátky 3) Může získaná mateřská imunita ovlivnit účinnost vakcinace selat? 4) Zlomový titr mateřských protilátek 5) Závěrečné shrnutí 2

Aktuální PCV2 situace (2013) Víme, že imunitní systém hraje klíčovou roli při infekci porcinním cirkovirem 2 (PCV2) a to tak, že dokáže infekci většinou udržet v subklinickém stádiu. ALE jaké jsou přesné imunologické mechanismy, které způsobí, že se rozvine PMWS (PCVAD) nebo naopak zůstane subklinická infekce? 3

Definice? PMWS = Správné prase infikované ve správný moment správným virem? (J. Segalés) správné prase různá vnímavost/rezistence - geneticky podmíněno (Opriessing et al., 2006) správný moment imunologické okno + infekce + spouštěcí faktor/y + imunosuprese správný virus genotyp b vs. genotyp a (Grau- Roma et al. 2008) 4

Aktuální PCV2 situace (2013) vypadá to, že téměř vše důležité kolem PCV2 je vyřešeno hlavní vzplanutí choroby (PMWS) probíhalo v Evropě během let 1998 2004 máme účinné vakcíny nejčastější scénář: většina chovů či prasat je séropozitivních, ale jen málo z nich je sužováno PMWS, resp. jen málo prasat má klinické příznaky PMWS (popř. PCVAD) aktuálně nejčastější situace = subklinická infekce 5

ALE, stále zůstávají další otázky, např.: Mám vakcinovat v chovu, kde je pouze subklinická infekce PCV2? Jakou vakcínu mám zvolit? Jakou strategii vakcinace zvolit - měl bych vakcinovat prasnice nebo selata? Může získaná mateřská imunita ovlivnit účinnost vakcinace selat? 6

Mateřské protilátky u selat Většina prasnic PCV2 séropozitivní = většina selat má PCV2 titry mateřských protilátek (MDA) průměrný poločas rozpadu MDA u PCV2 je 19 dní (Opriessnig et al., 2004) ale může být delší či kratší v závislosti na plemeni MDA zmizí za 4-6 týdnů u selat s nízkými titry 6-10 týdnů u selat s průměrnými titry 8-14 týdnů u selat s vysokými titry 7

Mateřské protilátky u selat = MDA klesají v širokém rozmezí od 2-15 týdnů věku v závislosti na: vakcinaci či infekci matek příjmu kolostra kvalitě kolostra 8

Mateřské protilátky (MDA) MDA chrání záleží na množství obecně vysoké titry MDA jsou více protektivní než nízké titry i tak zcela nezabrání infekci ale chybí klinika ALE kolostrální imunita nejsou jen protilátky ale i lymfocyty (T lymfocyty a B lymfocyty) a růstové faktory kolostrální lymfocyty přecházejí přes střevní bariéru a podílejí se na nespecifické a specifické imunitní odpovědi selat. 9

Imunita novorozených selat: nevyzrálý imunitní sytém nedostatek imunitní paměti nižší počet imunitních buněk opožděná a slabší protilátková předpověď ALE PŘÍTOMNOST MDA Selata ve stáří 2-3 měsíce jsou schopna plné protilátkové odezvy na PVC2. 10

PCV2 a imunitní odpověď Adaptivní (specifická) imunitní odpověď protilátková: INFEKCE PCV2 -nejčastěji mezi 8-12 týdnem (začátek PCVAD nejčastěji 9-16 týden) IgM protilátky detekujeme 7-14 den po infekci (dpi) vrchol mají cca 24 dpi a pak plynule klesají do 50 dpi IgG protilátky detekujeme mezi 14-21 dpi. - titry stoupají až do cca 70 dpi. Segalés et al. 2005

V-shape hladina protilátek Hladiny mateřských protilátek klesají a sérokonverze po infekci nastupuje Segalés et al. 2005 12

PCV2 a imunitní odpověď u vakcinovaných selat detekujeme sérokonverzi kpcv-2cca14 dní po vakcinaci ALE důležité jsou neutralizační protilátky (NA) detekovatelné kolem 21 dne po vakcinaci (bez ohledu na věk během vakcinace) prasata s klinickým PMWS (PCVAD) mají nízké nebo žádné titry neutralizačních protilátek ELISA a IPMA stanovuje celkové protilátky neutralizační protilátky se stanovují virus neutralizačním testem (VNT) vycházíme z toho, že IgG korelují (+/-) s neutralizačními protilátkami 13

ALE, stále zůstávají otázky: Mám vakcinovat v chovu, kde je jen PCV2 subklinická infekce? Jakou vakcínu zvolit? Jakou strategii vakcinace zvolit, neboli měl bych vakcinovat prasnice nebo selata? Může získaná mateřská imunita ovlivnit účinnost vakcinace selat? 14

Mám vakcinovat v chovu, kde je jen PCV2 subklinická infekce? 15

Vakcinace selat ve světě Odhadovaná frekvence vakcinace: Evropa: >80%: Německo, UK, Irsko, Rakousko, Švýcarsko <30%: Rusko, Dánsko, Polsko, ±60%: Španělsko USA, Kanada, Mexiko, Brazílie a Čile: 80-98% Korea a Japonsko: 70-90% Čína a Vietnam: <5% Baekbo et al., 2011 Česká republika? 16

Jakou vakcínu zvolit? všechny komerčně dostupné vakcíny snižují virémii = hlavní cíl vakcinace = zabránit virémii či snížit intenzitu virémie (vysoká virémie = problém) 17

Meta-analýza 66 pokusů (24 studií) Zvýšení průměrného denního přírůstku o 30-40g. Snížení mortality o více než 50%. nezávisle na vakcíně, na věku vakcinace a kvalitě publikace 18

Jakou strategii vakcinace zvolit? Vakcinovat: prasnice a selata jen prasnice jen selata selata 2x? Mezi výsledky různých přístupů nejsou zásadní statistické rozdíly resp. jsou zde nesignifikantní rozdíly ve snížení mortality a v PDP. 19

Může získaná mateřská imunita ovlivnit účinnost vakcinace selat? Potvrzená fakta: vakcína indukuje jak humorální tak buněčnou imunitu proti PCV2 mateřské protilátky chrání proti infekci (resp. zabraňují klinickým projevům infekce) Pokud mateřské protilátky chrání proti infekci, mohou také ovlivnit efekt vakcinace? 20

Jakými způsoby mohou mateřské protilátky snižovat účinnost vakcíny? neutralizace vakcinačních antigenů a maskování antigen-specifických epitopů mateřskými protilátkami inhibice aktivace B buněk = snížená humorální odezva zvýšená eliminace vakcinačního viru fagocyty Science Photo Library

Může získaná mateřská imunita ovlivnit účinnost vakcinace selat? Někteří výrobci vakcín deklarují, že mateřské protilátky neovlivňují imunologickou odpověď selat na vakcinaci. 22

Může získaná mateřská imunita ovlivnit účinnost vakcinace selat? ALE jsou zde studie, které potvrzují, že vysoké titry mateřských protilátek mají inhibiční efekt na imunitní odezvu. 23

Zlomové titry mateřských protilátek klíčový faktor = poměr množství ANTIGENU X MDA zlomový titr = maximální titr mateřských protilátek vhodný pro úspěšnou vakcinaci, neboli titr mateřských protilátek, jejichž vazbu je s to daná vakcína překonat Vysoké titry MDA = IPMA titry 10 log2 (titry 1024) ovlivňují sérokonverzi po vakcinaci Nízké titry MDA = IPMA 8 log2 (titry 256) dovolí vývoj správné protilátkové odezvy 24

Zlomové titry mateřských protilátek Titry IPMA 8-10 log2 = titry 256-1024 Fort et al. 2009

PCV2 IPMA titry u prasat při odstavu Příklad: Segalés J et al. 2013 26

Kdy tedy vakcinovat? vakcinovat co možná nejpozději nejdříve po odstavu (nejdříve 3-4 týden) ale minimálně 2-3 týdny před infekcí (nejlépe 4-5 týdnů před infekcí) = vysoké titry neutralizačních protilátek = mít ověřeno, kdy i nastupuje infekce (PMWS) v daném chovu sérologický screening různých věkových kategorií (např. 5, 8, 12 a 16 týden) A NEBO - OVĚŘIT SI TITRY MATEŘSKÝCH PROTILÁTEK U SELAT 27

Dostupné sérologické diagnostické testy ke stanovení titru protilátek imunoperoxidázový test (IPMA) nepřímý imunofluorescenční test (IFA) virus neutralizační test (VNT) semikvantitativní ELISA test 28

IPMA vs. ELISA X IMPA umožňuje titraci protilátek, ALE je to z hlediska přípravy komplikovaný test a z hlediska odečítání výsledků subjektivní ELISA robustní, standartní, objektivní, vysoká specifita i sensitivita, opakovatelnost a možnost testovat větší množství vzorků najednou, ALE výsledek jen ANO (+)/NE (-) MOŽNOSTI = IPMA příprava testu pomocí transfekce =ELISA zajistit kvantitativní výsledek (titr) 29

PCV2 Ab semikvantitativní ELISA SERELISA PCV2 Ab Mono Blocking ELISA (Synbiotics) částečně kvantitativní výsledek (titry protilátek) 30

Nahradí ELISA test IMPA? Joaquim Segales ajehotým-centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), Barcelona, Španělsko statisticky významná lineární korelace mezi IPMA titry a výsledky ELISA testů (OD) algoritmus ( kalkulátor ) na přepočet výsledku ELISA testu na titr IPMA bude k dispozici bude publikováno v roce 2013 testserelisa PCV2AbMonoBlocking ELISA (Synbiotics) bude možno využívat jako kvantitativní (titrační) sérologickou techniku 31

Závěrečné shrnutí vakcína indukuje jak humorální tak buněčnou imunitu proti PCV2 mateřské protilátky chrání proti infekci (resp. proti klinickým projevům PCVAD) vysoké titry mateřských protilátek ovlivňují imunologickou odpověď selat na vakcinaci snaha načasovat vakcinaci tak, aby se minimalizoval účinek mateřských protilátek, ale zároveň tak aby se zajistil včasný rozvoj protektivní imunity před infekcí PCV2 není uzavřené téma = stále zůstávají otázky = nutnost dalšího výzkumu v této problematiky 32

Děkuji za pozornost! 33