Stanovení autoprotilátek Seminář 7: diagnostika

Transkript

1 Testy autoimunity Stanovení autoprotilátek Seminář 7: diagnostika autoimunitních chorob II IMUNITNĚ ZPROSTŘEDKOVANÉ ANÉMIE typ onemocnění primární sekundární Coombsův test IgG C3 autoimunitní hem. anémie antinukleární protilátky (ANA) revmatoidní faktor (RF) protilátky proti erytrocytům (Coombs) imunohistochemie (protilátky proti thyreoglobulinu) 2% promytá suspenze Ery vyšetř. psa v PBS Coombsovo reagens (Goats anti Canine IgG, IgM, C3) 1:1 až 1:40 v PBS 50 µl 2% ERY 50 µl vyřed. Coombs. reagens v mikrotitr. desce součást SLE vyvolaná léky postinfekční 30min 37 oc, 30min 25 oc makroskopicky a mikroskopicky odečíst aglutinaci neonatální izoerytrolýza prim/sekund. nemoc chladových aglutininů

2 Regenerativní typ anémie DIFERENCIÁLNÍ DIAGNOSTIKA ANÉMIÍ predispozice klinické anémie (únava, apatie, zbarvení sliznic a kůže, srdeční šelest) hematologické znaky anemie (hematokrit, hemoglobin, počet a tvar erytrocytů přítomnost vývojových forem v krvi retikulocyty) hemolytická anémie autoaglutinace sférocytóza Coombsův test Další příčiny léky / toxiny < 5 dní > 5 dní akutní krvácení nebo hemolýza neregenerativní anémie hemobartonelóza hemolýza onemocnění kostní dřeně (parvovirus, estrogeny, nádorové) autoimunitní RBC regenerativní anémie babesióza ztráty krve Coombs pozitivní IMHA léky nebo vakcíny infekce, paraziti transfůze pozitivní negativní AIHA (ANA) Coombs negativní IMHA onemocnění mimodřeňová (CRF, hypotyreóza) biopsie kostní dřeně hemolytická anémie SLE AUTOIMUNITNÍ CHOROBY KŮŽE Pemfigus foliaceus Choroba Sliznice Nik.t IgG a C3 Prognóza P.Vulgaris mezibuněčné P. Vegetans m hlubší P. Foliaceus m horní P. Erythematosus m, bm Bulózní pemfgoid bazální m SLE m, bm, Dermatomyozitida,

3 IMUNOHISTOCHEMIE odběr vzorku biopsie, cytologický nátěr a pod. konjugát anti Dog Ig/FITC (Binding Site) inkubace 30 min. při 25 o C ve vlhké komůrce opláchnutí a promytí PBS zamontování pod krycí sklo s 80% glycerolem prohlížení ve fluorescenčním mikroskopu při 480 nm vazba sekundární protilátky, značené fluoresceinem, na protilátku primární Primární protilátka Sekundární protilátka FITC VYUŽITÍ IMUNOHISTOCHEMIE INTERCELULÁRNÍ SUBKORNEÁLNÍ U BAZÁLNÍ MEMBRÁNY kožní onemocnění (pemfigus, SLE) idiopatické záněty střeva glomerulonefritidy myositidy Pemfigus vulgaris Pemfigus foliaceus Bulózní pemfigoid GLOMERULONEFRITIDY CHRONICKÉ IDIOPATICKÉ ENTERITIDY lymfocytárníplasmacytární enteritida nejčastšjší příčina zvracení u psů, průjem, chřadnutí, úbytek hmotnosti hypertrofie krypt, lymfocyty, plazmatické b. v mukóze eozinofilní gastroenterokolitida hypersenzitivitida I. typu? atrofie klků s infiltrací eozinofily a histiocyty granulomatózní enterokolitida fokální zánět terminálního ilea atrofie klků, hypertrofie krypt, granulomatózní zánět, ulcerace histiocytární ulcerativní kolitida u boxerů, fr. buldočků, ulcerativní kolitida s infiltrací makrofágy s velkými vakuolami PAS

4 CHOROBY ENDOKRINNÍHO SYSTÉMU PACIENT 4497 am.kokr, pes, stáří 6 let autoimunitní hypothyreóza (Hashimotova choroba) u psů, autoprotilátky proti thyreoglobulinu a thyreoidální peroxidáze autoimunitní hyperthyreóza (Gravesova choroba) u koček, autoprotilátky proti TSH receptoru diabetes mellitus I. typu autoimunitní povaha u zvířat relativně vzácná autoprotilátky proti Langerhansovým buňkám diabetes mellitus II. typu autoprotilátky proti inzulinovému receptoru apatie, nechutenství, poslední vakcinace před rokem tachykardie, tachypnoe ikterus splenomegálie icterus PACIENT 4497 am.kokr, pes, stáří 6let bilirubinémie mírně zvýšené jaterní testy bilirubinurie, hemoglobinurie regenerativní anémie (ery 2,8 x /l) leukocytóza (leu 20,5 x 10 9 /l) Coombs test přímý 1:16 DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie PACIENT 1015 N.O., fena, stáří 7 let hubnutí, pruritus, kožní změny, trvá min. 1/2 roku T: 38,5 vyhublost, apatie alopecie na různých částech těla a končetin furunkulóza na hřbetě, břiše a v perianální oblasti Leu: 24,2 x 10 9 /l, Ne: 22,0 x 10 9 /l, Ly: 0,48 x 10 9 /l, mikrobiologie a parazitologie seškrab parazitol. negat., mykologie chlupů negat., S.intermedius Fag 88,5 %, CL: 62,8 / 207, BTL(SI): 2,2, 2,2, 2,0 Ig: 27,9 g/l, CIK:, LYS: 9,5 g/l DIAGNÓZA: hluboká pyodermie německých ovčáků PACIENT 1072 N.O., fena, stáří 2 r. apatie, neochota pohybu, sklon k tloustnutí, kožní změny, první vyšetření asi po 1 měs. od vzniku T: 38,5 D: n.d. P: n.d. furunkulóza na pánevní končetině mikrobiologie a parazitologie seškrab parazitol. negativní, bakteriologie nedělána Fag 80 %, BTL(SI): PhA 2,5, ConA 10,8, PwM 3,5 Ig: 15,9 g/l, CIK:, LYS: 5,5 g/l T4: < 10 nmol/l DIAGNÓZA: hypothyreóza, hluboká pyodermie PACIENT 4887 anémie petechiální hemoragie jaterní testy v normě hemoglobinurie regenerativní anémie (ery 1,9 x /l) leukocytóza (leu 22,3 x 10 9 /l) trombocytopenie Coombs test přímý 1:16 kříž., fena, stáří 2 roky DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie, Evansův syndrom

5 PACIENT 1260 retrívr fena stáří 5 let dlouhodobé pohybové problémy, občasné průjmy Mírně zvýšená teplota Pohybové potíže, výrazný otok a bolestivost 3 kloubů Při pohmatu citlivé, bolestivé břicho RTG neerozivní artritida Imunologické vyšetření ANA test 1:1000, homogenní imunofluorescence Diagnóza: Idiopatická artritida III. typu? Ulcerativní kolittida s artritidou PACIENT 4922 kříž., pes, stáří 3 roky apatie, nechutenství, bolest břicha, trvá asi 4 dny anémie zvýšené jaterní testy hemoglobinurie regenerativní anémie (ery 2,6 x /l) leukocytóza (leu 76,8 x 10 9 /l) Coombs test přímý 1:32 DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie