PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK. Molecular Pathology Days. The 14 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry

Molecular Pathology Days PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK The 4 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry The 04 th Olomouc Diagnostic Seminar of the Czech Division of the International Academy of Pathology The 8 th Olomouc Days of Histologic Technicians JUNE 4 th 5 th, 08 OLOMOUC THE CZECH REPUBLIC ISBN 978-80-747-34-0

Just click. That s it. Introducing the SeqStudio Genetic Analyzer Same workflow, same trusted technology now with an innovative all-in-one cartridge that reduces setup time from hours to minutes. The new Applied Biosystems SeqStudio Genetic Analyzer is a low-throughput, easyto-use, and convenient benchtop system that delivers gold standard Sanger sequencing and fragment analysis with just a simple click. It is easily used across a broad range of applications as well as multiple users. Just click. That s it. Load up your samples, click in the cartridge, and go no need for technical experts for setup or maintenance, no calibration before each run, and no installation of capillaries, polymer, and anode buffer. The cartridge is stable for 4 months on the instrument. Access your data anytime, anywhere* This system features Thermo Fisher Cloud connectivity so you can set up your run, check its progress, and access your data from wherever you have Internet access, all without the need to stay in the lab.* Convenient and easy-to-use cartridge system includes the capillaries, polymer, and buffers required for each run Combine Sanger sequencing and fragment analysis reactions in the same instrument run Fast turnaround with a run time in as little as hour Set up and monitor your run. View, manage, and share your data from anywhere, using your phone, tablet, or computer (Mac computer or PC)* Instrument warranty included, low service costs, and SmartStart orientation will get you up and running quickly Get the same data quality, service, and support you ve come to expect from Applied Biosystems technology with a modernised experience at a price any lab can afford. * Internet connection and Thermo Fisher Cloud account required

The 4 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry The 04 th Olomouc Diagnostic Seminar of the Czech Division of the International Academy of Pathology The 8 th Olomouc Days of Histologic Technicians June 4 th 5 th, 08, Olomouc, Czech Republic Theoretical Institutes Building, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc Under the auspices of prof. J. Miller, M.A., Ph.D. / Rector of Palacky University, Olomouc prof. M. Kolář, M.D., Ph.D. / Dean of the Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc prof. R. Havlík, M.D., Ph.D. / Director of the University Hospital Olomouc Organized by The Czech Society of Pathologists The Molecular Pathology Working Group (The European Society of Pathology) The Czech Division of the International Academy of Pathology The Czech Oncological Society The Czech Society for Histochemistry and Cytochemistry The Czech Society of Laboratory Technicians The Department of Clinical and Molecular Pathology, FMD PU and UH Olomouc The Department of Pathological Anatomy, CU JFM and UH Martin, Slovakia The Institute of Molecular and Translation Medicine, FMD PU and UH Olomouc The Martin s Biopsy Center Ltd., Martin, Slovakia The Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc The University Hospital Olomouc Chairman of the Congress: prof. Zdeněk Kolář, M.D., Ph.D. The Department of Clinical and Molecular Pathology & the Laboratory of Molecular Pathology Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc, Hněvotínská 3, Olomouc, 775 5 Tel: +40/585 63 45; e-mail: zdenek.kolar@upol.cz Secretary of the Organizing & Programme Committee: Mrs. Jana Holinková, the Department of Clinical and Molecular Pathology, tel.: +40 603 440 88, holinkova.jana@centrum.cz JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 3

ISBN 978-80-747-34-0 Organizing & Programme Committee: Assoc. Professor Jan Bouchal M.Sc., Ph.D. Professor Jiří Ehrmann, M.D., Ph.D. Assoc. Professor Marian Hajdúch, M.D., Ph.D. Mrs. Danuše Kvapilová Mrs. Eva Srovnalová Tomáš Tichý, M.D. Monika Levková, M.Sc. Professor Lukáš Plank, M.D., Ph.D. Assoc. Professor Peter Szépe, M.D., Ph.D. Venue: Thursday, Friday, June 4 th 5 th, 08 Theoretical Institutes Building, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc Conference Language: The 4 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry English, Czech, Slovak The 04 th Olomouc Diagnostic Seminar of the Czech Division of the International Academy of Pathology Czech, Slovak The 8 th Olomouc Days of Histology Laboratory Technicians Czech, Slovak AKCE BYLA OZNAČENA SPOLEČNOSTÍ ETHICAL MEDTECH JAKO COMPLIANT Vydavatelem sborníku abstrakt je společnost SOLEN, s.r.o. Redakce: SOLEN, s.r.o., Mgr. Barbora Ludvová Grafické zpracování a sazba: DTP SOLEN, s.r.o., Milan Matoušek Za původnost a obsahovou správnost odpovídají autoři. Molecular Pathology Days PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK The 4 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry The 04 th Olomouc Diagnostic Seminar of the Czech Division of the International Academy of Pathology The 8 th Olomouc Days of Histologic Technicians JUNE 4 th 5 th, 08 OLOMOUC ISBN 978-80-747-34-0 THE CZECH REPUBLIC 4 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

FOREWORD / ÚVODNÍ SLOVO Foreword Dear friends of molecular pathology, I am honoured to welcome you in Olomouc at the 4 th annual Days of Molecular Pathology. In addition to the traditional Symposium of Molecular Pathology, attended also by invited experts from abroad, the 04 th Diagnostic Seminar and 8 th Days of Histology Laboratory Technicians will also be running. Pathology hope for life is the chosen theme for our 4 th Days of Molecular Pathology. It covers the new role of Pathology in the current healthcare system. Pathology is becoming more than a diagnostic tool, it has moved towards a predictive medicine where the cooperation between Pathologists and Clinicians is critical in determining optimal therapeutic approaches. The work of Physicians and Molecular Biologists would be entirely impossible without support of highly skilled mid-level healthcare personnel. Their participation in our meeting contributes a new dimension and provides a useful platform for discussion and debate of differing viewpoints in healthcare. This should lead to an improvement in the quality of patient treatment and therefore lead to better outcomes as well as patient satisfaction. Olomouc is well known not only for its historical University. By its geographical position and genius loci Olomouc is predetermined to become a Moravian centre for the development of new ideas, where the paths of many significant individuals meet, while also being a centre for rich culture and traditional hospitality. I hope that the events planned for this Symposium will fully utilise the potential of our city. It is my wish that we will find time for friendly chats about the joys of life and not only about the problems we all face daily in todays fast paced world. I hope that this event will provide you with the opportunity to expand your horizons and I hope you have a wonderful experience in Olomouc. Yours Faithfully, Zdeněk Kolář Úvodní slovo Vážení a milí příznivci molekulární patologie, Je mi ctí přivítat vás v Olomouci na 4. dnech molekulární patologie, jehož součástí bude kromě tradičního sympozia molekulární patologie s účastí pozvaných zahraničních odborníků také 04. diagnostický sklíčkový seminář a 8. dny histologických laborantů. Jako obecné téma našich 4. dnů molekulární patologie jsme zvolili Patologie naděje pro život. Vyjadřuje novou úlohu patologie v systému zdravotní péče, která se přesouvá z oblasti pouze diagnostické do oblasti prediktivní a znamená úzkou spolupráci patologa s klinikem při určení optimální terapie. Veškerá práce lékařů a molekulárních biologů není myslitelná bez erudice a pracovního nasazení středního zdravotnického personálu. Jejich účast na našem setkání přináší naší společné akci další rozměr a je užitečnou konfrontací dvou různých pohledů na činnost zdravotníků, která by měla vést ke spokojenosti a vyléčení pacientů. Olomouc je známá nejen svou starobylou univerzitou. Její geografická poloha a genius loci ji předurčují k tomu, aby se stala moravským centrem, kde se křižují cesty mnoha významných osobností přinášejících nové myšlenky, a současně centrem, které poskytuje tradiční pohostinnost a kulturní zázemí. Doufám, že plánovaná setkání využijí celý nabízený potenciál našeho města. Přál bych si, abychom si v dnešní uspěchané době našli chvíli na přátelský rozhovor, který se bude týkat nejen problémů, ale i radostí, které život přináší. Přeji vám příjemný pobyt a hodně nových informací i zážitků. Váš Zdeněk Kolář JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 5

PROGRAM / PROGRAMME The 4 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry 4. sympozium molekulární patologie a histo(cyto)chemie Thursday 4 th June 08 / Čtvrtek 4. 6. 08 Theoretical Institutes Building, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University Olomouc Molecular pathology I / Molekulární patologie I Chairs / Předsednictvo: L. Plank, Z. Kolář 9.00 9.5 Joint meeting ceremony / Slavnostní zahájení 9.5 9.40 Jiří Bártek (Denmark) Cancer addiction to stress support pathways: Mechanisms and opportunities for intervention 9.40 0.00 Lukáš Plank Bioptická diagnostika atypických gastrointestinálnych stromálnych nádorov 0.00 0.0 Zdeněk Kolář Predikce odpovídavosti nádorů prostaty na hormonální léčbu a chemoterapii 0.0 0.45 Jim White (Biomedica) Nanostring 3D Biology for Translational Research Simultaneous Single Molecule Quantification of DNA, RNAs & Proteins 0.45.00 Coffee break / Přestávka Molecular pathology II / Molekulární patologie II Chairs / Předsednictvo: G. Stanta, M. Hajdúch.00.0 Giorgio Stanta (Italy) Pathology Hope for Life: Integration of Clinical Research in Practical Clinics.0.40 Marián Hajdúch Proteomické analýzy v diagnostice a léčbě nádorových onemocnění.40.00 Pavel Dundr Význam molekulárních metod v gynekopatologii.00.0 Ondřej Slabý Translational Potential of Non Coding RNAs in Oncology.0.45 Carsten Weper (Life Technologies) Ion torrent Next Generation Sequencing in Immune-Oncology.45 3.45 Lunch break / Přestávka na oběd 6 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

PROGRAM / PROGRAMME Lung cancer pathology / Patologie nádorů plic Chairs / Předsednictvo: A. Soltermann, J. Ehrmann 3.45 4.0 Alex Soltermannn (Switzerland) Automated classification of non small cell lung cancer histologic subtypes by deep learning 4.0 4.30 Martina Bárthová 4.30 4.40 Anna Farkašová Vyšetrovanie ROS génu v pľúcnych nádoroch Využitie ctdna pri cielenej terapii pacientov s nemalobunkovým karcinómom pľúc 4.40 5.05 Bohdan Kadlec (Roche) Karcinom plic od prediktorů k léčbě 5.05 5.0 Coffee break / Přestávka Experimental pathology / Experimentální patologie Chairs / Předsednictvo: M. Strnad, J. Bouchal 5.0 5.45 Miroslav Strnad 5.45 5.55 Jiří Voller 5.55 6.05 Radek Jorda 6.05 6.5 Jan Bouchal Brassinosteroids a new generation of anticancer drugs? Plant hormones cytokinin ribosides as anticancer agents Selective inhibition reveals cyclin dependent kinase as another kinase that phosphorylates the androgen receptor at serine 8 Klinicky využitelné znaky v diagnostice a léčbě nádorů prostaty 6.5 6.45 Oral presentation of posters I (no. 0) / Komentované postery I (č. 0) 9.00 4.00 Social evening at Hotel Flora / Společenský večer v Hotelu Flora Friday 5 th June 08 / Pátek 5. 6. 08 Tumor microenvironment / Nádorové mikroprostředí Chairs / Předsednictvo: P. Murray, K. Smetana 9.30 0.00 Paul G. Murray (United Kingdom) 0.00 0.30 Karel Smetana Collagen signalling in cancer 0.30 0.40 Stjepan Uldrijan Mikroprostředí u maligního melanomu: nová cesta k terapii? The effect of metabolic stress on BRAF and NRAS oncogene-driven ERK signaling in melanoma JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 7

PROGRAM / PROGRAMME 0.40 0.50 Barbora Dvořánková Charakteristika novorozeneckých fibroblastů a keratinocytů a jejich vzájemné ovlivňování úspěšnost novorozeneckého hojení 0.50.00 Zdeněk Kinkor Chondroblastoma like maligní obrovskobuněčný tumor pažní kosti.00.5 Coffee break / Přestávka Molecular pathology III / Molekulární patologie III Chairs / Předsednictvo: Z. Kolář, Z. Lassabová.5.35 Zora Lasabová Molekulová podstata, detekcia a klinický význam hypermutovaných kolorektálnych nádorov.35.50 Romana Valenčíková Využitie Liquid Biopsy v monitoringu mutačného statusu génov RAS a BRAF u pacientov s mcrc.50.05 Ivana Tichá Spektrum a frekvence mutací u primárních melanomů detekovaných pomocí NGS.05.0 Markéta Kalinová Molekulární diagnostika a sledování minimální reziduální nemoci u pacientů s anaplastickým velkobuněčným lymfomem.0.45 Oral presentation of posters II (no. ) / Komentované postery II (č. ).45 3.45 Lunch break / Přestávka na oběd 04 th Olomouc Diagnostic Seminar of the Czech Division of the International Academy of Pathology 04. olomoucký diagnostický seminář České divize IAP Čtvrtek 4. 6. 08 / Thursday 4 th June 08 st part /. část 3.45 5.05 Chairs / Předsednictvo: M. Tichý, T. Tichý, P. Flodr, J. Janková Case no. / Případ č. Biopsie 5698/8, CN 3575: 77letý muž s tumorem těla pankreatu a suspektní invazí do lienální žíly. Provedena resekce těla a kaudy pankreatu, splenektomie a lymfadenektomie. Referuje T. Tichý, Ústav klinické a molekulární patologie Olomouc. 8 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

PROGRAM / PROGRAMME Case no. / Případ č. Biopsie H 500/8, CN 3576: Žena 35 let s tumorem levé ledviny ve sledování, stacionární nález poslední 3 roky, nyní progrese nálezu s indikací k nefrektomii. Tumor dle CT v největším rozměru 67 mm. Referuje: Z. Slobodová, Ústav klinické a molekulární patologie Olomouc. Case no. 3 / Případ č. 3 Biopsie 93/8, CN 3577: 77letá pacientka po hysterektomii. Předmětem bioptického vyšetření je polypoidní léze děložní dutiny. Referuje R. Ondruššek, Ústav patologie FN Ostrava, CGB laboratoř. Case no. 4 / Případ č. 4 Biopsie 78/3, CN 3578: 63letá žena s postmenopauzálním krvácením, menopauza v 5 letech. Transvaginální ultrazvuk prokázal nepravidelné ztluštění endometria, pacientka podstoupila kyretáž. Zaslaný materál z dutiny děložní zpracován v 5 blocích. Referuje K. Němejcová, Ústav patologie. LF a VFN v Praze. Case no. 5 / Případ č. 5 Biopsie H 6774/7, CN 3579: 38letá žena, u které byla provedena kožní biopsie pro vznik zatuhnutí levého boku. Anamnesticky uvádí před 3 měsíci tupé poranění, které bylo hodnoceno jako hluboký hematom, asi před měsícem došlo k progresi, navíc se přidaly teploty až 39 C. Referuje: S. Brychtová, Ph.D., Ústav klinické a molekulární patologie Olomouc. 4.05 5.0 Coffee break nd part /. část 5.0 6.45 Case no. 6 / Případ č. 6 Biopsie H4676/07, CN 3580: žena 58 let, přijata k provedení hysterektomie pro tumor v pánevní oblasti. Referuje: K. Franková, Laboratoře Agel, patologie Nový Jičín. Case no. 7 / Případ č. 7 Biopsie H 3559/8, CN 358: žena 4 let v době stanovení diagnózy. Byla provedena excize tumoru jazyka velikosti přibližně 4 mm, velikost celého vzorku dosahuje 5x3x5 mm. Referuje: P. Flodr, Ústav klinické a molekulární patologie Olomouc. Case no. 8 / Případ č. 8 Cytologie C 767/8, CN 358: letý chlapec bez klinických potíží, s normální funkcí ledvin, vyšetřován pro intermitentně mléčné zkalení moči. Referuje D. Kurfürstová, Ústav klinické a molekulární patologie Olomouc. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 9

PROGRAM / PROGRAMME Case no. 9 / Případ č. 9 Biopsie H645/7, CN 3583: 3letá žena, nullipara, vyšetřovaná pro bolesti v podbřišku. Na UZ vyšetření byly zjištěny dermoidní cysty pravého a levého ovaria a v dutině děložní polyp vzhledu submukózního myomu. K vyšetření dodán polyp těla dělohy. Referuje: J. Janková, Ústav klinické a molekulární patologie Olomouc. Presentation / Přednáška Histologické vyšetření v diagnostice a typizaci amyloidu P. Flodr Presentation / Přednáška Morfologické a molekulární prediktivní znaky u triple-negativních karcinomů prsu M. Kolečková 8 th Olomouc Days of Histologic Technicians 8. dny histologických laborantů Chairs / Předsednictvo: D. Kvapilová, E. Srovnalová Thursday 4 th June 08 / čtvrtek 4. 6. 08 3.45 4.00 Marie Petrová Prediktivní testování nádorů plic 4.00 4.5 Hana Mrňáková, Veronika Csernáková Myelin a jeho laboratorní průkaz 4.5 4.35 Tereza Behanová, Zuzana Fabíková Patologie prostaty a její zpracování v bioiptické a imunohistochemické laboratoři 4.35 5.05 Jaroslav Horáček, Danuše Kvapilová, Zuzana Slobodová Jistota a úskalí diagnostické cytologie 5.05 5.30 Ivo Überal Analýza obrazu v patologii 5.30 5.50 Mária Janíková Vyšetrenie hereditárnych nádorových syndrómov na ÚLG v Olomouci 5.50 6.0 Veronika Žižková Farmakogenetika v praxi 0 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

PROGRAM / PROGRAMME POSTER SECTION I / POSTEROVÁ SEKCE I Thursday 4 th June 08 / čtvrtek 4. 6. 08 6.5 6.45 Oral presentation of posters I (no. 0) / Komentované postery I (č. 0). Molecular profiling of synchronous endometrioid endometrial and ovarian carcinomas Hájková N., Tichá I., Němejcová K., Bártů M., Méhes G., Laco J., Geryk T., Dundr P.. Prognosticko prediktivní markery u IDH wild type glioblastomu Šporiková Z., Kalita O., Hajdúch M., Trojanec R., Megová Houdová M., Vaverka M., Hrabálek L., Zlevorová M., Vrána D., Drábek J., Tučková L., Ehrmann J. Jr., Vrbková J. 3. Stromální mikroprostředí u dobře diferencovaného kolorektálního karcinomu Gamratová M., Delongová P., Hulínová T., Brychtová S., Dvořáčková J. 4. Inflammatory cues induce expression of immune checkpoint molecule CD37 in breast cancer cells Friedlová N., Dúcka M., Beneš P., Knopfová L. 5. Zpracování pankreatu dle Leedského protokolu Götzová A., Brymová M. 6. Influence of duration of storage of tissue samples on immunostaining intensity Čížková K., Štetková I., Tauber Z. 7. Vyšetření mitotické aktivity u vybraných maligních nádorů v klasických preparátech a s využitím protilátky phh3 Delongová P., Gamratová M., Dvořáčková J., Vaculová J., Tomanová R., 8. Identifikace alternativních sestřihových variant HNFB ve vybraných tkáních předběžné výsledky Hojný J., Bártů M., Rosmusová J., Tichá I., Hájková N., Němejcová K., Dundr P. 9. Peroperační otisková cytologie sentinelové uzliny Šopíková M., Kotásková H., Vážan P., Kubelková I. 0. Vyšetření CT BRAF u pacienta s histiocytózou z langerhansových buněk Krsková L., Kalinová M., Švojgr K., Říha P., Kodet R. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC

PROGRAM / PROGRAMME POSTER SECTION II / POSTEROVÁ SEKCE II Friday 5 th June 08 / pátek 5. 6. 08.0.45 Oral presentation of posters II (no. ) / Komentované postery II (č. ). The detection of fibrosis in the heart of various species: histology and immunohistochemistry Kvasilová A., Olejníčková V., Sedmera D.. In vitro 3D systems for studying neurogenesis Mokry J., El Negiry A. A. M., Pisal R. V. 3. Imunohistochemické vyhodnocení mikrovaskulární denzity sledováním exprese protilátek Nestin a CD90 u kožních melanomů a melanocytárních névů Židlík V., Brychtová S., Žiak D., Uvírová M., Šnajdrová B., Rulíšek P., Hurník P., Vážan P., Kubelková I., Onduššek R., Dvořáčková J. 4. Anticancer activities of brassinosteroids and their derivatives Oklešťková J., Rárová L., Steigerová J., Strnad M. 5. The novel brassinosteroid analog BR4848 inhibits migration of human endothelial cells and also angiogenesis in vitro Rárová L., Sedlák D., Oklešťková J., Liebl J., Zahler S., Bartůněk P., Kvasnica M., Strnad M. 6. Diagnostika mutace T790M genu EGFR u pacientů s nemalobuněčným karcinomem plic (NSCLC) Bajerová M., Robešová B., Mazalová L., Skřičková J., Tomíšková M., Ježíšková I. 7. Nuclear RAD5 protein is associated with tumor infiltrating lymphocytes (TILs) and survival outcomes in non small cell lung cancer patients, treated with neoadjuvant chemo-/radiotherapy Gachechiladze M., Škarda J., Kolek V., Grygárková I., Langovac K., Vojta P., Vbrková J., Hajdúch M., Kolář Z., Stahel R., Weder W., Rulle U., Soltermann A., Joerger M. 8. Společné hodnocení procenta volného PSA a močových transkriptů přispívá ke zpřesnění indikace biopsie prostaty Hušková Z., Knillová J., Král M., Kolář Z., Bouchal J. 9. Vliv epigenetických modulátorů na expresi genů CDKNB (p5) a PDLIM4 (RIL) u buněčné linie RPMI 86 odvozené od mnohočetného myelomu Lužná P., Janovská L., Kolář Z., Smešný Trtková K. 0. Case report: Agresivní maligní tumor z malých modrých buněk když elektronová mikroskopie pomáhá Hurník P., Žiak D., Židlík V., Ondruššek R., Rulíšek P., Kubelková I., Vážan P., Szotkovská I., Bielniková H., Uvírová M., Dvořáčková J.. Využití speciálně vycvičených psů v diagnostice onkologických onemocnění Tavandzis S., Matulová P., Kaňa J., Roubec J., Lipková A. PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

INVITED GUESTS Jiří Bártek, Professor, M.D., Ph.D. Jiri Bartek is the Head of the Genome Integrity Unit at the Danish Cancer Society Research Center in Copenhagen, Denmark, and also leads the Genome Integrity group at the Karolinska Institute in Stockholm, Sweden, and laboratories at the Institute of Molecular and Translational Medicine, Palacky University Olomouc and Institute of Molecular Genetics in Prague. His work focuses on molecular mechanisms of cell cycle control and genome integrity maintenance, and aberrations of these pathways in human diseases, particularly cancer. The focus is on basic mechanistic studies, complemented by translational research on biomarkers and exploitation of cancer cell vulnerabilities for innovative treatments. He obtained his MD and PhD degrees from Palacky University in Olomouc and Institute of Molecular Genetics of the Czech Academy of Sciences in Prague (both in the Czech Republic), respectively. Before moving to his current position in Copenhagen in 99, he worked as a post-doctoral fellow at the Imperial Cancer Research Fund in London and the German Cancer Research Center in Heidelberg, and as a group leader at the Cancer Research Institute in Brno and Head of Department at the Institute of Hematology in Prague. Jiri Bartek published over 400 original articles and reviews in the fields of cell and cancer biology, cell cycle regulation and DNA damage response, that are widely cited (approx. 50.000 citations; h-index: ). His work was acknowledged by a number of prestigious awards in Denmark, Sweden, Israel and Czech Republic, he is a member of editorial boards of multiple biomedical journals and a member of EMBO. RNDr. Martina Barthová, PhD. Martina Barthová vedie laboratórium molekulovej patológie v Ústave patologickej anatómie Jesseniovej lekárskej fakulty Univerzity Komenského a Univerzitnej nemocnice v Martine, ktorý je súčasne ustanovený Ministerstvom zdravotníctva SR do pozície národného Konzultačného centra bioptickej diagnostiky lymfoidných a myeloidných neoplázií a aj Konzultačného centra bioptickej diagnostiky zriedkavých nádorových ochorení v SR. V tomto laboratóriu je zodpovedná za FISH analýzy bioptických materiálov pacientov s malígnymi lymfómami, nemalobunkovým pľúcnym karcinómom a niektorých ďalších zriedkavých nádorov. Od 994 do 999 študovala biológiu a genetiku na Prírodovedeckej fakulte Univerzity Komenského v Bratislave. Témou jej doktorandského štúdia (005 0) na Ústave patologickej anatómie JLF UK a UN v Martine bola Biológia chronickej lymfocytovej leukémie: analýza vybraných genetických faktorov identifikovaných v bioptickom materiáli. Po obhájení PhD. práce sa stala trvalou členkou tímu martinského univerzitného ústavu orientovaného na diagnostickú, prognostickú a prediktívnu molekulovú patológiu zhubných nádorových ochorení. Ako jedna z prvých na Slovensku zavádzala vyšetrovanie HER génu v karcinómoch prsníka a podieľala sa aj na príprave počiatočných interlaboratórnych 4 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

INVITED GUESTS kontrol tohto vyšetrenia v zainteresovaných laboratóriách Slovenska. Zaviedla a implementovala do rutinnej praxe aj do vedecko-výskumnej činnosti FISH metódy na tkanivových FFPE rezoch, čo umožnilo skvalitniť diagnostiku a dnes aj ovplyvniť výber liečby vybraných druhov malígnych lymfómov a ďalších nádorov. Stála tiež pri zavedení vyšetrovania ALK a ROS génov v nemalobunkovom pľúcnom karcinóme, ktoré je nevyhnutné pre cielenú terapiu tohto ochorenia a pre ktoré je jej pracovisko referenčným centrom pre slovenské pneumoonkologické pracoviská. prof. MUDr. Pavel Dundr, Ph.D. Ústav patologie. LF UK a VFN v Praze Pavel Dundr promoval na. lékařské fakultě UK v Praze v roce 995. V roce 009 obhájil dizertační práci na. LF UK v oborové radě Biologie a patologie buňky a získal titul Ph.D. V roce 00 byl jmenován docentem a v roce 06 profesorem v oboru patologie. Od roku 0 je přednosta Ústavu patologie. LF UK a VFN v Praze. Od roku 03 je členem výboru a od roku 06 je předsedou výboru Společnosti českých patologů ČLS JEP. Jeho odborné i výzkumné zájmy zahrnují zejména problematiku gynekopatologie se zaměřením na nádorová onemocnění. V rámci výzkumných projektů se v současné době zaměřuje hlavně na imunohistochemické profilování a molekulární aberace vyskytující se zejména u epitelových nádorů ovaria, děložního hrdla a endometria a také mezenchymálních nádorů dělohy. Předmětem zájmu je i nádorové mikroprostředí (tumor infiltrující lymfocyty) a problematika prediktivní patologie i v kontextu dalších nádorových onemocnění, včetně nádorů plic a maligního melanomu. Marián Hajdúch, Associate Professor, M.D., Ph.D. Scientist and medical professional mainly involved in molecular and translational medicine (disease area oncology and infectious diseases); long-term experience in project management; R&D and technology transfer activities, including the construction and management of large research infrastructures. Involved as principal investigator, investigator or clinical site manager in 4 clinical trials; actively participated in the research and/or management of more than 40 national and international projects; established major cancer research foundation in the country; two spin-off companies focused on manufacturing of molecular diagnostics and bioinformatics of NGS data; participated in creation of national network for personalized medicine and cancer management policies. Published more than >330 papers, >7 books/chapters, >48 patents, >3600 SCI citations, H-index 3. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 5

INVITED GUESTS Zora Lasabová, Associate Professor, M.Sc., Ph.D. Zora Lasabová studied biology with specialization molecular in biology and genetics at Martin-Luther-University in Halle, Germany. Afterwards she worked at the Institute of Preventive and Clinical Medicine and at the Cancer Research Institute of the Slovak Academy of Sciences in Bratislava, Slovakia. She was research fellow at the Department of Virology, Humboldt-University zu Berlin, and at the Institute of Human Genetics, Friedrich-Alexander-University in Erlangen, Germany. In 004, she obtained her Ph.D. degree in genetics performing her theses on colorectal cancer research with the focus on molecular analysis of the APC gene responsible for the adenomatous polyposis coli, at the Comenius University in Bratislava. In 0, she was conferred to the associate professor degree in medical biology at the Palacky University, Olomouc. Since 004, she has been working at the Jessenius Faculty of Medicine on the Department of Molecular Biology, since 006 as the head of the department and since 0 as the head of the Division Oncology at the Biomedical Center Martin. Her major research interest are genetics and epigenetics of cancer and development of new diagnostic methods for targeted cancer therapy and hereditary cancer syndromes. She is the author or the co-author of 49 articles in international scientific peer-reviewed journals. She is a member of Slovak Society of Medical Genetics, European Society of Human Genetics and European Association of Cancer Research. Paul Gerard Murray, Professor, M.Sc., Ph.D. Current position: Professor of Molecular Pathology, Institute of Cancer and Genomic Medicine, College of Medical and Dental Sciences, University of Birmingham. Research in the Murray lab is focused on the discovery of molecular pathways involved in the development and progression of haematological malignancies. Our objective is to better understand the pathogenesis of these malignancies and in doing so develop novel diagnostics and therapeutics. prof. MUDr. Lukáš Plank, CSc. Prof. MUDr. Lukáš Plank, CSc., je prednostom Ústavu patologickej anatómie Jesseniovej lekárskej fakulty Univerzity Komenského a Univerzitnej nemocnice v Martine a odborným garantom Martinského bioptického centra s.r.o. Tieto pracoviská získali v r. 07 od Ministerstva zdravotníctva SR štatút jednak Národného centra pre bioptickú diagnostiku lymfoidných a myeloidných neoplázií, ako aj Národného centra pre bioptickú diagnostiku zriedkavých nádorov (GISTov, NET-ov, vybraných molekulových podtypov NSCLC a pod.). 6 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

INVITED GUESTS Ním vedené pracoviská prepojili kvalitnú histomorfologickú a imunohistochemickú diagnostiku vybraných zhubných nádorových ochorení s využitím moderných technológií na molekulovo-patologické analýzy DNA izolovanej z tkaniva nádoru, ale aj z krvi, resp. plazmy pacientov s onkologickými ochoreniami. Tento integrovaný prístup využívajú nielen na analýzu diagnostických znakov nádorového ochorenia, ale aj na analýzu jeho prognostických a prediktívnych znakov. Takto získané výsledky sa využívajú pre voľbu adekvátnej tzv. cielenej (personalizovanej) liečby týchto ochorení a na sledovanie priebehu ochorenia a terapeutickej odpovede, resp. vzniku rezistencie. Ním vedené laboratórium sa stalo Centrom excelencie akreditovaným spoločnosťou Sysmex/Inostics (Japonsko) a získalo tak možnosť vyšetrovania mutácií cirkulujúcej nádorovej DNA z krvi onkologických pacientov s využitím vysokocitlivej metódy s využitím esejí OncoBEAM a platformy BEAMing. Prof. Plank získal viacero prestížnych domácich aj zahraničných ocenení, vrátane ocenení Slovenskej lekárskej spoločnosti a Českej lekárskej spoločnosti J.E. Purkyně, Hrubiškovej prednášky na Bratislavských hematologických dňoch v r. 06 a Wiedermannovej prednášky na Olomouckých hematologických dňoch 07. Najnovšie, v januári 08, sa stal laureátom prestížneho ocenenia Krištálové krídlo za oblasť medicíny a vedy za r. 07. doc. RNDr. Ondřej Slabý, Ph.D. Ondřej Slabý je docentem na Lékařské fakultě Masarykovy univerzity a. lékařské fakultě Univerzity Karlovy. Pracuje jako vedoucí výzkumné skupiny Molekulární onkologie ve Středoevropském technologickém institutu (CEITEC) na Masarykově univerzitě a jako vědecký tajemník Masarykova onkologického ústavu v Brně. Doc. Slabý významně publikoval v oblasti nekódujících RNA u solidních nádorů se speciálním zaměřením na jejich možné využití v diagnostice případně moderní protinádorové terapii (h-index 8, celkový počet citací bez autocitací > 3000). Je členem American Association of Cancer Research, European Association for Cancer Research, European Society for Translational Medicine, Czech Society of Oncology, Czech Society for Biochemistry and Molecular Biology (member of FEBS) a dalších. Od roku 08 je předsedou Česko-slovenské biologické společnosti. Je nositelem řady ocenění: cena České onkologické společnost v roce 00 a 0, cena České lékařské společnosti JEP za nejlepší knižní publikaci v roce 06, cena Ministra České republiky za medicínský výzkum v roce 04 a 06 nebo cena Novartis Discovery Award v roce 07. Je členem redakčních rad a spolupracuje jako hodnotitel s řadou prestižních časopisů v oboru. Spolupracuje rovněž jako hodnotitel pro tuzemské i zahraniční grantové agentury. Je předsedou panelu Nádorové choroby Agentury pro zdravotnický výzkum České republiky, členem panelu Klinický a preklinický výzkum Grantové agentury České republiky a místopředsedou hodnoticího panelu pro oblast zdraví Rady vlády pro výzkum, vývoj a inovace. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 7

INVITED GUESTS Karel Smetana, Jr., Professor, M.D., D.Sc. Karel Smetana is Professor of Anatomy and head at the Institute of Anatomy, st Faculty of Medicine, Charles University in Prague, from where he graduated in 983. Dr. Smetana is member of many professional commissions and scientific societies. His scientific work is focused on cell and developmental biology, especially of squamous epithelia and melanocytes in physiological and pathological condition and on glycobiology. He is an author of more than 6 papers, 0 patents and 5 textbook chapters, with articles cited 67 times and H-index of 8. His work has been recognized by the National Scientific Award of the Czech Republic (00), by the award of Int. J. Oncol (005) and by the Annual Award of Minister of Education, Youth and Sport of the Czech Republic (00). Alex Soltermann, Professor, M.D. Alex Soltermann is an asssistant professor of the University of Zurich (UZH) and consultant histopathologist at the Institute of Pathology and Molecular Pathology, University Hospital Zurich (Prof. H. Moch), where he is responsible for diagnostic lung and head neck pathology. He is also the head of the laboratory for in situ-techniques of the Institute. His professorship is entitled localized molecular analysis (LMA) of tumor tissue. Research focus on computerized image analysis and in-situ proteomics of NSCLC. He studied Medicine in Zurich and did his MD thesis on neuroendocrine lung tumors. He participated in the Postgraduate Course in Experimental Medicine and Biology (UZH/SNSF) whereby he joined the lab of Prof. S. Gasser at ISREC, Epalinges. Thereafter, he started a formation in Clinical Pathology FMH in Geneva. He did further residency stages in Pathology and Surgery in Baden and at IPMP Zurich. In 006, he obtained his board in Clinical Pathology. In 009, he visited the Department of Histopathology, Royal Brompton Hospital, London, Prof. A. Nicholson. In 0, he received the Venia legendi for his research work on epithelial-mesenchymal transition (EMT) in thoracic tumors. In 03, he was nominated assistant professor for localized molecular analysis (LMA) of tumor tissue by UZH. His main fields of research are lung cancer, computerized image analysis, microfluidic immunohistochemistry, tissue slice culture, liquid effusion culture, localized molecular analysis, laser microdissection, in-situ proteomics. Professor Soltermann has >90 original publications. The total impact factor is >500 with a citation index >400. He published in Cancer Res, Clin Cancer Res, Am J Pathol, Mod Pathol, Am J Surg Pathol, Lung Cancer, and Molecular Cancer. He is supervising MD as well as PhD masterworks and theses. He got many awards: 003 poster prize European Helicobacter Study Group, 004 Rodger C. Haggitt prize for Gastroenterology, 0 poster prize best basic research Swiss Society of Pathology (to Dr. V. Tischler), 03 second poster prize Swiss Society of Cytology (to Dr. V. Tischler), 03 Theiler-Haag research prize (to Dr. V. Tischler), 03 first prize case contest Pulmonary Pathology Society, 03 semester prize University of Zurich (to Mrs. A. Wulf), 04 & 07 prize best research talk, German Society of Pathology, Thoracic Pathology Working Group. 8 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

INVITED GUESTS Giorgio Stanta, Professor, M.D., Ph.D. For many years Prof. Giorgio Stanta s main interest has been the application of molecular analysis to fixed and paraffin-embedded tissues (all human tissues of biopsy or surgical origin), called archive tissues. This interest was first aroused in the Pathology Department of Yale University, where he worked for several years. He has developed several methods, in particular for RNA analysis. He is the head of the Molecular Histopathology Lab at the Medicine Department of the University of Trieste. He is the coordinator of the European group Archive Tissues: Improving Molecular Medicine Research and Clinical Practice IMPACTS (www. impactsnetwork.eu). Chairman of the Biobanking and Molecular Patho biology WG of the OECI (Organisation of European Cancer Institutes). Chairman of the Molecular Pathology WG of the ESP (European Society of Pathology). Member of the managing board of BBMRI.IT (Italian Biobanking Infrastructure), and coordinator of the Italian network of archive tissue biobanks (NIPAB). Member of the Committee of CEN (European Committee for Standardization) for Molecular in-vitro diagnostic examinations. He is the liaison representative from ESP to CEN/ TC 40. Member of the European Commission Initiative on Breast Cancer Quality Assurance Scheme Development Group (QASDG), in which he is the Chair of the Clinical Research Subgroup. He is also consultant of the Comprehensive Cancer Centre CRO in Aviano, Italy, and the person in charge of the Expert Centre Archive Tissue Molecular Analysis (ATMA) of the European Infrastructures BBMRI-ERIC. He is involved in the active European projects HERCULES on High Grade Serus Ovary Carcinoma, and SPIDIA4P project of QIAGEN on Preanalytical Conditions of Tissues. Miroslav Strnad, Professor, Engineer, Ph.D., D.Sc. Biographical sketch: Miroslav Strnad is professor in the Laboratory of Growth Regulators, Centre of the Region Haná for Biotechnological and Agricultural Research, Institute of Experimental Botany ASCR & Palacky University in Olomouc, Czech Republic (rustreg.upol.cz). Strnad s current focus is on the research and development of a new generation of compounds with anti-viral, anti-proliferative, anti-angiogenic and anti-senescence properties, the molecular mechanisms of their action and the potential combinatory therapies based on these compounds, new phytohormone derived cosmetic as well as plant growth regulators for plant biotechnology and agriculture. He graduated in Phytotechnologies from the Faculty of Agronomy, Mendel University, Brno, in 98 (Ing.). In 00 was promoted to Professor of the Palacký University in Olomouc, Czech Republic. In 998, he was awarded the Rhone-Poulenc Rorer Award by the Phytochemical Society of Europe, in recognition of his work on the identification, analysis and biochemistry of phytohormones topolins. Prof. Strnad has been widely publishing ( chapters in various scientific books; more than 350 papers in recognized journals; 3 books; 8 Czech and 49 international patents; citations > 0 000; Hirsch index: 50). He was president of the Phytochemical Society of Europe (04 06), since 06 vice-president. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 9

The 4 th Symposium of Molecular Pathology and Histo(cyto)chemistry 4. sympozium a workshop molekulární patologie a histo(cyto)chemie Cancer addiction to stress support pathways: Mechanisms and opportunities for intervention Bártek J. Danish Cancer Society Research Center, Copenhagen; Karolinska Institute, Stockholm; and Institute of Molecular and translational Medicine, Palacky University, Olomouc Replication stress (RS) is among the hallmarks of cancer, also implicated in aging, and an emerging therapeutic target in oncology. The lecture will present our recently published and unpublished data to highlight the following three, mutually closely linked topics, with focus on replication stress, its consequences and relevance to cancer. First, an overview of our recent insights into the molecular pathways that underlie replication stress and cellular responses to RS will be presented, with focus on signaling pathways and the concept of biological thresholds that guard genomic integrity. Second, mechanisms, functional links with RS and relevance to tumorigenesis of two other major cellular stress pathways, namely proteotoxic stress and ribosome biogenesis stress, will be discussed. Last but not least, examples of promising cancer treatment strategies and clinical trials from our work in this area will be presented, focusing on targeting stress -support and checkpoint pathways, including also the p97/npl4 segregase complex as a key element of the ubiquitin -proteasome protein recycling machinery, involved in various stress responses and an exploitable cancer vulnerability. Bioptická diagnostika atypických gastrointestinálnych stromálnych nádorov Plank L. Ústav patologickej anatómie a Národné centrum bioptickej diagnostiky zriedkavých nádorov JLF UK a UN v Martine Gastrointestinálne stromálne tumory (GIST -y) predstavujú všeobecne skupinu morfologicky, feno- a genotypove a tiež aj biologicky heterogénnych nádorov. Súčasne predstavujú, v protiklade k častejším epitelovým nádorom GIT -u, skupinu zriedkavých nádorov GIT -u mezenchýmového pôvodu, ktoré sú však najčastejšími sarkómami GIT -u. Ich bioptická diagnostika vyžaduje: a) dôkladnú histomorfologickú analýzu a identifikáciu 3 základných, resp. 8 presne definovaných morfologických podtypov, b) klasický imunohistochemický dôkaz pozitívnej expresie antigénov CD7, CD34 a DOG, s možnosťou doplnenia o dôkaz proteínov SDHB, PDGFRA a BRAF a pod., ako aj c) genetickú analýzu na dôkaz mutácie génu c KIT alebo PDGFRA, prípadne doplnenú o analýzu mutácií ďalších génov, najmä BRAFV600, SDHB, NF, RAS a pod. Mutačné analýzy sa realizujú všeobecne najčastejšie v DNA izolovanej z tkaniva nádoru, dnes sú možné už aj z krvi pacienta, resp. z plazmy (tzv. tekutá biopsia). Identifikácia uvedených faktorov má význam nielen diagnostický, ale aj prognostický (je možná prognostická stratifikácia pacientov podľa druhu a typu mutácie toho ktorého exonu/génu) navyše aj prediktívny pri voľbe vhodnej cielenej liečby. Incidencia pozitivity uvedených faktorov je rozdielna napr. DOG pozitivita býva prítomná v pribl. 98 %, CD7 v 95 % a CD34 v 70 80 % prípadov. Ak je GIST negatívny pri dôkaze antigénov CD7 aj DOG súčasne, tak predstavuje tzv. dvojito (imunohistochemicky) negatívny GIST ( double- negative alebo null -phenotypic GIST), ktorého 0 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

diagnostiku dorieši mutačná analýza obyčajne sa v takýchto prípadoch vyskytuje mutácia v exone c -KIT génu (najmä v kodonoch 557, 558). Primárne mutácie génov c KIT resp. PDGFRA bývajú identifikovateľné v pribl. 85 90 % všetkých GIST -ov. GIST bez nálezu mutácie v génoch KIT resp. PDGFRA (nesprávne aj v literatúre označovaný ako WT/WT GIST ) tvorí pribl. 0 5 % GIST -ov dospelých a pribl. 85 % GIST -ov detských pacientov. Predstavuje problém diagnostický, ale aj terapeutický v zmysle pochýb o efektivite TKI liečby. Takéto prípady vyžadujú analýzy ďalších vyššie uvedených génov (prípadne epigenetické analýzy), keď napr. alternatívnou mutáciou v ich tumorigenéze môžu byť mutácie BRAF génu (vyskytujú sa pribl. V,4 % všetkých GIST- ov a v pribl. 7 % tzv. WT GIST -ov. GIST bez mutácie v génoch KIT, PDGFRA a BRAF predstavuje tzv. triple negatívny GIST, ak chýba aj mutácia v génoch SDH rodiny, tak ide o tzv. quadruple negatívny GIST). Naopak, existujú aj tzv. double-/triple hit GISTy, buď s dvojitou mutáciou v géne c KIT, alebo v géne c KIT resp. PDGFRA v kombinácii s mutáciou iného génu (napr. mutácie PDGFRA + SDHB alebo KIT + BRAF). V práci uvádzame príklady a spôsoby riešenia takýchto problémových prípadov z vlastnej skúsenosti v konfrontácii s literárnymi údajmi. Poďakovanie: Podporené grantom APVV-4 073 Predikce odpovídavosti nádorů prostaty na hormonální léčbu a chemoterapii Kolář Z., Bouchal J. Ústav klinické a molekulární patologie, Lékařská fakulta Univerzity Palackého a Fakultní nemocnice Olomouc Stanovení PSA v krvi je, přes nízkou specificitu, poměrně spolehlivá skríningová metoda vyhledávající pacienty s karcinomem prostaty. Okolo 0 až 0 % takto nově zjištěných případů však je již v pokročilém stadiu choroby. Je proto třeba hledat nové diagnostické a prediktivní biomarkery, které by pomohly pacienty s různým stadiem choroby odhalit a úspěšně léčit. Pro vývoj a funkci normální prostaty, stejně jako pro vznik a vývoj karcinomu prostaty, mají rozhodující význam androgeny a regulační dráhy zprostředkované jejich receptory. Jejich blokádou je možné docílit uspokojivého terapeutického efektu, který ovšem většinou není trvalý a nemoc pak přechází do fáze tzv. kastračně rezistentního karcinomu. Za selhání antiandrogenové terapie mohou být odpovědné různé mechanismy. Podáváme stručný přehled těchto mechanismů, stejně jako přehled současných poznatků o jejich vlivu na vývoj rezistence k určitému typu chemo/radioterapie. Diskutujeme rovněž význam některých klasických i nových biomarkerů (klinicko patologické parametry, proliferační aktivita, microrna, molekulární fenotypizace atd.) z hlediska jejich možného využití pro predikci citlivosti karcinomů prostaty k různým typům terapie. Nanostring 3D Biology for Translational Research Simultaneous Single Molecule Quantification of DNA, RNAs & Proteins White J. Nanostaring Technologies, Inc. (Biomedica) The ability of mutated cells to give rise to cancer relies upon their capability to interact with cells of the immune system and ultimately evade immune recognition, suppress immune activity, and persist in a chronically inflamed environment. Many immune cell types are found in the tumor microenvironment, creating a complex milieu that affects the growth and evolution of cancerous cells. Robust immune monitoring assays are essential for characterizing the immune status of cancer patients, and insights gained from studying the immune response in treated patients will help transition promising research into the clinic. While tremendous growth in the understanding of the immune response to cancer is beginning to generate breakthroughs in cancer JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC

treatment, our understanding of immuno -oncology is far from complete. Particularly, a comprehensive view on cellular interactions and mutual regulation on DNA, RNA or protein levels is hampere d by difficulties to integrate results from a great variety of analysis platforms that have completely different data output formats and requiring large amounts of precious input sample. Also, relating quantitative expression information back to spatial coordinates within a sample is challenging, because it is limited to a low number of targets that can be adressed in an experiment and imprecise measurements. In the talk, we present solutions and examples for how to overcome these hurdles, in order to robustly and sensitively monitor changes in the immune response associated with potential therapeutic approaches. These solutions support a better understanding of immune evasion mechanism and can ultimately help to tailoring a treatment more specifically to the different conditions present in an individual cancer sample. Pathology Hope for Life: Integration of Clinical Research in Practical Clinics Stanta G. Department of Medical, Surgical and Health Sciences, University of Trieste Molecular evolution in precision medicine has led to integrate clinical research with clinical activity, especially in oncology. Only clinical material can help us define the extremely wide range of clinical heterogeneity. The complexity of biological knowledge has now reached the complexity of clinics decreasing the value of study on randomized populations, and new types of studies today are suggested, such as N- trials, basket, umbrella and platform studies. Even FDA has approved the first cancer treatment off -label. Pathology is in the frontline of this new type of development with two major goals: the first one is to establish molecular patterns and alterations in biopsy and surgical tissues to suggest a correct adjuvant therapy; the second goal is to study recurrent diseases by using liquid biopsies. In all these, the quality of molecular analyses and their reproducibility is the most important issues in diagnostics and clinical research. Many different European projects are developing new conditions to reach these goals. Intratumour molecular heterogeneity today is an important obstacle to reproducible molecular analysis, but also an opportunity to better understand cancer. Proteomické analýzy v diagnostice a léčbě nádorových onemocnění Hajdúch M., Džubák P., Holub D., Oždian T., Hruška M., Václavková J., Flodrová P., Flodr P. Ústav molekulární a translační medicíny Ústav klinické a molekulární patologie, Lékařská fakulta Univerzity Palackého v Olomouci Proteomika je celosvětově jednou z nejrychleji se rozvíjejících technologií nezbytnou pro pochopení genetické informace získané sekvenováním řady genomů, včetně genomu nádorového. Naše pracoviště se dlouhodobě zabývá vývojem protinádorových léčiv, identifikací jejich mechanismů účinku a hledáním prognostických a prediktivních markerů nádorových onemocnění na genomické i proteomické úrovni. Na konkrétních případech z našeho původního výzkumu budeme demonstrovat výhody a limitace proteomických metod pro:. Identifikaci molekulárních cílů a mechanismu účinku protinádorových léčiv.. Studium chemorezistence nádorových léčiv. 3. Identifikaci nových diagnostických, prognostických a prediktivních biomarkerů u karcinomu kolorekta. 4. Vývoj nových nástrojů pro detekci jednotlivých polymorfismů a mutací na proteinové úrovni prostřednictvím lepší interpretace stávajících informací z hmotnostní spektroskopie. PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

5. Využití netradičních zdrojů biologického materiálu u člověka pro identifikaci a validaci biomarkerů (plicní kondenzát, slzy, apod.) pro neinvazivní diagnostiku nádorů. V přehledném sdělení budeme diskutovat i stávající příležitosti pro aplikaci proteomických metod v rutinní diagnostice nádorových onemocnění. Význam molekulárních metod v gynekopatologii Dundr P. Ústav patologie. LF UK a VFN v Praze Kritéria pro diagnostiku nádorových onemocnění ženského genitálu se v průběhu let mění spolu se změnami v klasifikaci a prohlubujícími se znalostmi s ohledem na jejich etiopatogenezu, prekurzory, imunohistochemický profil a molekulární aberace. Rozvoj nových metod a léčebných postupů přináší zvýšené požadavky nejen na vlastní bioptickou diagnostiku, ale i na následná vyšetření prognostického či prediktivního významu. Cílem sdělení je zmínit problematiku molekulárního testování v gynekopatologii. Význam molekulárního testování je v obecné úrovni ve třech oblastech: v rámci diagnostických vyšetření, hodnocení prediktivních markerů, či v diagnostice některých hereditárních onemocnění. Indikace molekulárního testování v rámci diagnostických vyšetření zahrnuje: i) potvrzení histologického typu nádoru charakterizováno specifickou aberací (např. některé sex cord -stromální nádory či mezenchymální nádory dělohy vykazující specifické genetické aberace); ii) diferenciální diagnostika např. epitelových nádorů ovaria (i jiných oblastí ženského genitálu), které jsou charakterizovány výskytem určitých často odlišných genetických aberací to může být využito při diagnostice sporných případů vykazujících překryvné morfologické a imunohistochemické rysy; iii) pomoc při rozlišení primárního zdroje u synchronních nádorů (např. současné postižení ovaria a endometria či ovaria a děložního hrdla). Prediktivní vyšetřování v současné době souvisí zejména s léčbou PARP inhibitory a je tedy cíleno hlavně na high grade serózní karcinomy ovaria (testování mutačního stavu genu BRCA/). V brzké době lze však očekávat i testování dalších prediktivních markerů, a to zejména s ohledem na výrazný rozvoj imunoterapie. Kromě exprese PD -L se v tomto kontextu ukazují být přínosná i molekulární vyšetření, včetně např. testování mikrosatelitové instability (MSI), stanovení tzv. mutačního loadu či hodnocení imunitních signatur. Tyto markery však v současné době (s výjimkou MSI v některých indikacích) nejsou jako prediktor validované a zavedené do rutinní praxe. S ohledem na hereditární onemocnění je role patologa dána kontextem bioptického vyšetření, jehož výsledky mohou pro některý hereditární syndrom svědčit. Vlastní testování při podezření na přítomnost hereditárního nádorového onemocnění však indikuje klinický lékař a vyšetření provádí klinický genetik, nikoliv patolog. Jako nejvýznamnější se v tomto kontextu jeví Lynchův syndrom a mutace genu BRCA/. V oblasti ženského genitálu se však mohou vyskytovat i další nádory, které mohou souviset s hereditárními aberacemi, jako je například deficit fumarát hydratázy (syndrom hereditární leiomyomatózy a karcinomu ledviny) či mutace genu SMARCA4 vyskytující se u hyperkalcemického typu malobuněčného karcinomu ovaria (který představuje maligní rabdoidní nádor ovaria). Bez ohledu na pokračující metodický rozvoj však základem správné diagnostiky zůstává erudice patologa a prvním krokem v diagnostickém procesu je hodnocení preparátů barvených HE v kontextu makroskopického a dalších nálezů, případně rozšířeného o imunohistochemická vyšetření. Pouze na podkladě těchto nálezů a správné primární diagnózy jsou v některých případech indikována následná molekulární vyšetření. Molekulární vyšetření jsou přínosná zejména v uvedených indikacích a jejich spektrum se bude jistě rozšiřovat. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 3

Problémem je však v současné době jejich cena, dostupnost a v neposlední řadě nejasnosti v úhradě. Poděkování: Podpořeno projektem UNCE04065 a MZČR (projekt RVO VFN 6465) Translational Potential of Non Coding RNAs in Oncology Slaby O. Central European Institute of Technology, Masaryk University, Czech Republic Masaryk Memorial Cancer Institute, Czech Republic For many years, central dogma of molecular biology has been that RNA functions mainly as an informational intermediate between DNA sequence and its encoded protein. One of the great surprises of modern biology was discovery that protein -coding genes represent less than % of total genome sequence, and subsequently that almost 90% of human genome is actively transcribed. Thus, human transcriptome was found to be more complex than collection of protein -coding gene transcripts and their splice variants. Recent evidences have clearly shown that non -coding RNAs (ncrnas) play major biological roles in cellular development, physiology and pathologies. NcRNAs are grouped into two major classes based on transcript size; small ncrnas and long ncrnas. Each of these classes can be further divided, whereas novel subclasses are still being discovered and characterized. In last ten years, class of small ncrnas called micrornas was studied most intensively with more than fifty thousand hits at PubMed database. Huge amount of evidence has been accumulated to describe molecular mechanisms of novel RNA species functioning, providing insight into their functional roles in cellular biology and in human disease, especially in cancer. Knowledge regarding ncrnas functioning in cancer biology and their translational potential to serve as disease biomarkers and novel therapeutic targets in cancer will be summarized and demonstrated on several examples based on our recent observations. Ion torrent Next Generation Sequencing in Immune-Oncology Wepper C. Thermo Fisher Scientific Oncomine Tumor Mutation Load Assay: Immune checkpoint inhibitors have changed the treatment paradigm for a variety of cancers, but not all patients will respond to immunotherapies. Clinical biomarkers have been shown to be as important as the therapies they guide in our quest to help match patients with appropriate treatments. Given the complexity of the immune response and tumor biology, research is needed for additional biomarkers to evaluate their potential associations with responses to immuno-oncology (I-O) therapies. Automated classification of non small cell lung cancer histologic subtypes by deep learning Casanova R., Murina E., Dürr O., Sick B., Soltermann A. Institute of Pathology and Molecular Pathology, University Hospital Zurich, Switzerland Institute of Data Analysis and Process Design, University of Applied Sciences Zurich, Switzerland Background: Non -small cell lung cancer (NSCLC) encompasses an heterogeneous groups of histological subtypes. Typically, adenocarcinoma (LADC) and squamous cell carcinoma (LSCC), can be distinguished by trained pathologists based on distinctive histologic features such the formation of glandular structures for LADC and the presence of keratin and/or intercellular desmosomes for LSCC. Methods: In this study, we have developed a convolutional neural network to differentiate LADC from LSCC, on a cohort consisting of 08 4 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

NSCLC patients. Histologic slides were prepared from formalin -fixed paraffin embedded tumor blocks, stained by Hematoxylin and Eosin. Slides were scanned and 50 frames (8x8 pixels) were prepared for each tumor with a spatial resolution of.5 µm/pixel. Results: Patients cohorts were split into a training set (n=40 patients) and validation set (n=68). The performances of the CNN were evaluated on the validation set and are compared with the results of three experienced pathologists. Training and validation accuracy reached 9 and 93%, respectively. Among the validation set, artificial intelligence misclassified /68 cases and pathologists /68. However, at least of 3 pathologists classified 9/68 cases (43%) based on the HE image frames as NSCLC NOS. Correct classification by CNN was correlated with better -differentiated tumors, in particular lepidic -type adenocarcinoma and keratinizing squamous cell carcinoma; and therefore with better overall survival. Conclusions: Automated frameworks for histologic subtyping of cancer tissues using deep learning algorithms, could serve as potential analytic companion tools for pathologists in order to support and speed -up routine diagnostic tasks. Vyšetrovanie ROS génu v pľúcnych nádoroch Barthová M., Janáková Ľ., Farkašová A., Plank L. ÚPA Konzultačné centrum bioptickej diagnostiky ochorení krvotvorby JLF UK a UN Martin Martinské bioptické centrum, s. r. o., Martin Úvod: Prestavby ROS génov vedú u pacientov s pľúcnymi karcinómami k vzniku fúznych génov a následne proteínov s konštitutívnou ROS kinázovou aktivitou. Podľa klinických štúdií sú na liečbu ROS inhibítorom indikovaní pacienti s prestavbou ROS génu, u ktorých je FISH vyšetrením ROS zlomovou sondou dokázaných 5% a viac buniek so splitovým vzorom, kde sú 5 a 3 signály separované a/alebo so samostatným 3 signálom. Materiál a metódy: Od mája 04 do marca 08 bolo FISH metódou s použitím zlomovej ROS sondy od Zytovision vyšetrených 75 pacientov s pľúcnym karcinómom NSCLC typu, u ktorých neboli zistené mutácie v géne EGFR a nemali prestavbu ALK génu. Pacienti boli vyselektovaní na základe skríningu pomocou IHC analýzy expresie ros proteínu s použitím monoklonálnej protilátky ros, klon D4D6 od Cell Signaling Technology. FISH metódou boli vyšetrení všetci pacienti s pozitívnym IHC výsledkom (>75 % pozitívnych buniek nádoru, bez ohľadu na stupeň pozitivity) a všetci nejednoznační pacienti. Výsledky: V súbore bolo FISH metódou vyhodnotených 0 ROS pozitívnych pacientov (7 %). U 5 pacientov boli dominantným vzorom splitové signály. pacienti mali dominantný vzor izolovaný zelený signál (IGS). 3 pacienti vykazovali mix splitových a IGS signálov. Všetci ROS FISH pozitívni pacienti boli vyhodnotení aj ako ros IHC pozitívni. Diskrepantnú skupinu tvorili 9 ( %) ros IHC pozitívni pacienti, ktorí boli ROS FISH negatívni. Skupina 46 ROS FISH negatívnych pacientov (6 %) bola rozdelená do 3 podskupín ros IHC negatívnych pacientov. pacientov malo 50 75 % ros IHC pozitívnych buniek, 5 pacientov malo 49 % a 9 pacientov malo 0 % ros IHC pozitívnych buniek. Záver: Ak je pri skríningu prestavieb ROS génu použitá IHC metóda na detekciu expresie ros proteínu, mali by byť pozitívni pacienti verifikovaní s použitím FISH metódy. Nakoľko až 3 % ros IHC pozitívnych pacientov nevykazuje prestavbu ROS génu, je nevyhnutné hľadať nové možnosti skríningu a verifikácie skutočne pozitívnych pacientov, ktorí budú profitovať z liečby. U ROS FISH pozitívnych pacientov sa vyskytuje značná heterogenita v usporiadaní signálov. Je preto vhodné tieto vzory monitorovať a zisťovať ich súvis napr. s rezistenciou na liečbu. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 5

Pri hodnotení ROS génu treba zohľadniť, že môže dochádzať nielen k translokáciám, ale aj k inverziám a pri hodnotení stačí, aby bola vzdialenosť medzi červeným a zeleným signálom väčšia ako priemer väčšieho signálu. Poďakovanie: Podporené grantom spoločnosti Pfizer Slovensko. Využitie ctdna pri cielenej terapii pacientov s nemalobunkovým karcinómom pľúc Farkašová A., Scheerová K., Huťka Z., Plank L., Martinské bioptické centrum, s. r. o., Martin Ústav patologickej anatómie, Jesseniova lekárska fakulta Univerzity Komenského a Univerzitná nemocnica, Martin Úvod: Cirkulujúca nádorová DNA (ctdna) predstavuje nový potenciál v analýze mutačného stavu špecifických génov u onkologických pacientov. Do krvi onkologických pacientov je uvoľňovaná z nádorových buniek a môže byť využitá pri primodiagnostike nádorového ochorenia, ako aj pri monitoringu liečebnej odpovede a detekcii vzniku relapsu. U pacientov s nemalobunkovým karcinómo pľúc (NSCLC) je možné využiť analýzu ctdna najmä pre identifikáciu mutácií v géne EGFR, ktoré zásadne ovplyvňuje výber, ale aj efekt cielenej terapie. Materiál a metódy: Od decembra 05 aplikujeme mutačné analýzy ctdna izolovanej zo separovanej plazmy u pacientov s NSCLC, u ktorých nastal v priebehu liečby TKI relaps a takých, u ktorých bioptický alebo cytologický materiál nebol vhodný na analýzu mutačného stavu EGFR génu. DNA je izolovaná pomocou cobas cfdna Sample Preparation Kit. Testovanie je realizované na platforme cobas Z480 (Roche Molecular Diagnostics) s použitím CE -IVD kitu cobas EGFR Mutation test. Na základe výsledkov sme v júli 07 pristúpili k retestovaniu vybraných pacientov prostredníctvom TaqMan Liquid Biopsy dpcr Assays pre T790M (Thermofisher). Výsledky a závery: Na základe výsledkov našich analýz u pacientov pri primodiagnostike s ohľadom na záchyt tzv. aktivačných mutácií môžeme konštatovať, že výsledky analýz bioptického materiálu a ctdna sú porovnateľné. V skupine pacientov, u ktorých došlo k relapsu ochorenia, sme dosiahli senzitivitu záchytu tzv. rezistentnej mutácie T790M na úrovni,9 % (oproti 30 45 % uvádzaným v odbornej literatúre), čo môže byť spôsobené nízkym počtom vyšetrených pacientov (n = 3), nedostatočnou senzitivitou tejto metódy, príp. nižšou senzitivitou detekcie T790M mutácie vo všeobecnosti. Na základe našich výsledkov možno konštatovať, že ctdna môže byť využitá pri posúdení mutačného stavu EGFR génu u pacientov, u ktorých nie je možný odber kvantitatívne a kvalitatívne vhodného bioptického materiálu. Zároveň umožňuje opakované monitorovanie terapeutickej odpovede a skorú detekciu relapsu zapríčinenú vznikom rezistentných mutácií. Poďakovanie: Táto práca bola podporená grantom firmy Boehringer Ingelheim a AstraZeneca. Karcinom plic od prediktorů k léčbě Kadlec B. (Roche) Karcinom plic patří mezi nejčastěji diagnostikované druhy rakoviny a zůstává i hlavní příčinou úmrtnosti na nádory u nás i ve světě. Nemalobuněčný karcinom plic (NSCLC) je nejběžnější podskupinou a představuje 80 % všech případů plicních karcinomů. Tradiční léčbou většiny pacientů s NSCLC zůstává kombinovaná chemoterapie založená na platinovém derivátu. Zlepšující se možnosti molekulárního rozlišení jednotlivých kategorií nemalobuněčných karcinomů umožňují lépe definovat skupiny pacientů, kteří mají prospěch z cílené léčby. Zejména identifikace ovlivnitelné řídící mutace jako EGFR, ALK nebo ROS mohou pomoci rozhodnout, zda daný pacient s NSCLC 6 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

bude profitovat z efektivní a méně toxické cílené léčby. Dalším slibným přístupem v léčbě karcinomu plic je imunoterapie zaměřená na kontrolní body imunitního systému, pro kterou je taktéž důležitá identifikace optimálních kandidátů, kdy prozatím jediným relevantním parametrem je exprese proteinu PD -L. Prezentace je zaměřená na možnosti a úskalí cílené léčby a imunoterapie u karcinomu plic na základě vyšetření biomarkerů a je doplněna o názorné kazuistiky. Brassinosteroids a new generation of anticancer drugs? Strnad M., Rárová L., Oklešťková J., Kvasnic M., Steigerová J., Kolář Z. Laboratory of Growth Regulators & Department of Chemical Biology and Genetics, Centre of the Region Haná for Biotechnological and Agricultural Research, Institute of Experimental Botany ASCR & Palacky University, Olomouc Laboratory of Molecular Pathology, Department of Clinical and Molecular Pathology, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc Brassinosteroids (BRs) are a group of extremely low abundant (fg -pg/g) naturally occurring signaling molecules with a steroidal structure belonging to plant hormones. BRs are essential growth regulators that are widespread in the plant kingdom and have structures similar to those of animal steroid hormones. Similar to their animal counterparts, BRs influence many physiological processes throughout the plant life cycle, including germination, organ elongation, timing of senescence and flowering, male fertility and increased tolerance to stress caused by temperature, water, or salinity. The study of plant -derived compounds with effect at the molecular level has become an important approach in the selection of new agents with antitumour activity in humans. From this reason, molecular and cellular effects of natural as well as synthetic BRs were examined in different human cancer cell lines and in primary endothelial cells in vitro. BRs caused growth inhibition, cell cycle arrest and initiation of apoptosis in many different cancer cell lines. The inhibition of proliferation and migration of human endothelial cells by BRs was also demonstrated and evidences were obtained that BRs initiate cell death by apoptosis. Observed inhibition of migration and tube formation demonstrated the antiangiogenic activity of BRs. Investigation of the BR mechanisms of action in human cancer and endothelial cells indicated the possible involvement of steroid receptors in BR action. However, BRs were shown not to bind directly to steroid receptors which demonstrate that BRs act via steroid receptor -independent pathway(s). Our results suggest that tested BRs are promising leads for the development of a new generation of potential anticancer drugs. Plant hormones cytokinin ribosides as anticancer agents Voller J.,, Béres T., Zatloukal M., Kaminski P. A. 3, Doležal K., Džubák P., Hajdúch M., Strnad M. Laboratory of Growth Regulators, Centre of the Region Haná for Biotechnological and Agricultural Research, Institute of Experimental Botany ASCR & Palacky University, Olomouc Institute of Molecular and Translational Medicine, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc 3 The Institut Pasteur, Unit é de Biologie des Bactéries Pathogènes à Gram Positif, Centre National pour la Recherche Scientifique, Paris, France 4 BIOLOG Life Science Institute, Bremen, Germany Introduction: Cytokinin ribosides (CR) have demonstrated anticancer activity in various cultured cell lines, several xenografts and even a small clinical trial. Classical anticancer CRs, i.e. N6- isopentenyladenosine, N6-benzyladenosine (BAR) and kinetin riboside cause ATP depletion and activate the intrinsic pathway of apoptosis. Recently, we discovered that two ortho -hydroxylated BAR derivatives ortho -topolin riboside (otr) and JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 7

OH3MeOBAR (N6-(-hydroxy-3-methoxybenzyl) adenosine) are more active against various cancer and leukemia cell lines than the classical CRs. Here we report the inicial studies related to their mechanism of action. Material and methods: Effects of CRs were studied in leukemia cell line CCRF -CEM. Following cell death -related parameters were evaluated: ATP levels (luciferase assay), casp-3 activation (quantification fluorigenic substrate hydrolysis), membrane integrity and anexin translocation (flow -cytometry). Inhibitory activity against recombinant DNPH was evaluated in a biochemical assay. Metabolization of CRs was analyzed by capilary electrophoresis and HPLC. Finally, we analyzed NCI60 growth inhibition profiles. Results and conclusions: Although the structures of otr and OH3MeOBAR differ only by the presence of 3-methoxy group, their action mechanisms are clearly distinct. Whereas the effects of otr on energy levels and membrane permeability resemble those of classical CRs, OH3MeOBAR kills the cells without a marked ATP depletion. Notably, an analysis of NCI60 test data suggests that the activity of neither of them is dependent on the p53 status. Mechanism of action of OH3MeOBAR remains unclear, however we speculate that inhibition of a candidate oncogene DNPH by its metabolite 5 -monophosphate may be involved. Selective inhibition reveals cyclin dependent kinase as another kinase that phosphorylates the androgen receptor at serine 8 Jorda R., Bučková Z., Řezníčková E., Bouchal J., Kryštof V. Laboratory of Growth Regulators, Centre of the Region Haná for Biotechnological and Agricultural Research, Palacky University & Institute of Experimental Botany ASCR, Olomouc, Czech Republic Department of Clinical and Molecular Pathology, Institute of Molecular and Translational Medicine, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University Olomouc, Czech Republic Several studies have revealed that cyclin- dependent kinases (CDK) can mediate phosphorylation of steroid receptors at multiple sites, including serine 8 of the androgen receptor (AR). Phosphorylation of S8 is required for AR nuclear translocation in association with chromatin and also regulates endogenous AR -regulated transcription in response to hormones. Up to date, S8- phosphorylation has been studied using different CDK inhibitors. Nevertheless, most inhibitors are non -selective or have unknown selectivity. We investigated the selectivity of commercially available CDK inhibitors and identified compounds that will be suitable for further studies to identify the CDKs responsible for S8-AR phosphorylation. We confirmed the positive impact of CDK and CDK9 on phosphorylation of S8 of AR and its transcriptional activity. Although CDK-mediated phosphorylation was previously shown to occur physiologically during mitosis, our experiments did not confirm this hypothesis. By using chemical and genetic inhibition techniques, we identified that CDK contributes to S8-AR phosphorylation and transactivation while CDK4 was not shown to be involved in this process. Funding: Czech Science Foundation (grant 5-78Y). Klinicky využitelné znaky v diagnostice a léčbě nádorů prostaty Bouchal J., Hušková Z., Mičková A., Levková M., Kharaishvili G., Kurfurstová D., Prachař D., Gachechiladze M., Študent V., Král M., Kolář Z. Ústav klinické a molekulární patologie LF UP a FN Olomouc Urologická klinika LF UP a FN Olomouc 8 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

Karcinom prostaty je třetím onkologickým onemocněním v ČR způsobujícím nejvyšší mortalitu u mužů. Vedle klasického PSA screeningu jsou k dispozici také komerční stanovení Prostate Health Index [(-)propsa] nebo 4Kscore (hk, celkový, volný a intaktní PSA). Ta mohou být doplněna vyšetřením z moči, které přispívá ke zpřesnění indikace k diagnostické biopsii. Velká část nádorů prostaty může mít velmi dobrou prognózu, a proto validním přístupem je i tzv. aktivní monitoring. Identifikace pacientů s potenciálně agresivním onemocněním představuje jednu z hlavních výzev uroonkologického výzkumu. Vedle klinicko -patologických parametrů (klinické stadium, Gleasonovo skóre) má relativně velkou váhu imunohistochemické stanovení Ki67, p53, periostinu a dalších proteinů. Srovnatelné terapie lokalizovaného onemocnění představují prostatektomie a radioterapie. Samostatnou skupinu představují pacienti s metastatickým onemocněním. U nich je léčbou první volby hormonální terapie, která je však účinná pouze dočasně. Po jejím selhání patří vedle taxanové chemoterapie mezi nadějné přístupy inhibice PARP nebo imunoterapie. U pokročilých pacientů je možné získat pouze omezené množství nádorové tkáně, což omezuje rozsah stanovení prediktivních znaků. Vedle expanze v laboratorních myších ( patients derived xenografts ) se v současné době provádí 3D kultivace organoidů, na kterých je možné in- vitro testovat citlivost na potenciálně účinné léky. Collagen signalling in cancer Murray P., Vrzalikova K., Margielewska S., Ibrahim M., Cader Z. Institute of Cancer and Genomic Sciences, University of Birmingham, United Kingdom Collagen can act as a ligand for a number of collagen receptors. Collagens and collagen receptors are over -expressed in a number of cancer types, including B cell lymphoma. Over -expressed collagen receptors include the discoidin domain receptor- (DDR), a tyrosine kinase receptor that has been shown to promote cell survival, proliferation and migration in different cancer types. We present new data showing novel effects of DDR and potential oncogenic activities in cancer cells. We also report our findings on leukocyte -associated immunoglobulin -like receptor (LAIR), another collagen receptor that is over -expressed in B cell lymphoma and which might represent a novel immune checkpoint. Mikroprostředí u maligního melanomu: nová cesta k terapii? Smetana K. ml., Lacina L., Kodet O., Kučera J., Szabo P., Dvořánková B. Anatomický ústav a BIOCEV,. lékařská fakulta Karlovy univerzity, Praha a Vestec a Dermatovenerologická klinika,. lékařská fakulta Karlovy univerzity, Praha Maligní melanom sice nepatří k nejčastějším nádorům, ale možnost léčby tohoto onemocnění ve stadiu generalizace je i přes velký pokrok ve výzkumu velmi limitována. Detailní analýza primárního maligního melanomu a modelování in vitro ukázaly, že podobně jako u jiných typů nádorů má u maligního melanomu význam jeho mikroprostředí, obzvláště populace nádorově -asociovaných fibroblastů. Tyto buňky neovlivňují pouze vlastní buňky maligního melanomu, ale i další buněčné typy včetně buněk imunitního systému. Detailní genomická a proteomická analýza ukázaly, že IL6 a IL8 jsou významnými prostředníky mezibuněčné komunikace u tohoto typu nádoru. Tyto faktory jsou i možným cílem pro terapeutické ovlivnění mezibuněčné komunikace v tumoru. Literatura: Lacina L, Kodet O, Dvořánková B, Szabo P, Smetana K Jr.: Ecology of melanoma cell. Histol Histopathol 33: 47 54 (08) Podpořeno: GAČR 6 05534S JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 9

Vliv metabolického stresu na signální dráhu ERK aktivovanou onkogeny BRAF a NRAS v buňkách melanomu Uldrijan S.,, Verlande A., Biologický ústav, Lékařská fakulta, Masarykova univerzita, Brno Mezinárodní centrum klinického výzkumu (ICRC), Fakultní nemocnice u sv. Anny v Brně Genetické a epigenetické změny, ke kterým dochází během maligní transformace, přispívají k charakteristickým změnám buněčného metabolis mu. Nádorové buňky přijímají ve srovnání se zdravými buňkami výrazně více glukózy, díky čemuž je mj. možno využít pozitronovou emisní tomografii s radioaktivně značeným derivátem glukózy pro detekci nádorových ložisek v lidském těle. Namísto využití glukózy především oxidativní fosforylací, tak jako normální buňky, však nádorové buňky využívají většinu glukózy v glykolýze i za přítomnosti kyslíku (tzv. Warburgův efekt). Tato změna v energetickém metabolismu umožňuje rakovinným buňkám odvádět meziprodukty glykolýzy do anabolických procesů a tím podporovat nadměrný růst a proliferaci buněk. Nádorové buňky se také stávají závislými na zvýšeném příjmu neesenciální aminokyseliny glutaminu, kterou využívají jako zdroj uhlíku pro biosyntetické procesy. Deregulace metabolických drah je jednou z charakteristických vlastností nádorových buněk a jejich metabolismus se proto jeví jako nadějný terapeutický cíl. Několik nízkomolekulárních léčiv, cílících zejména na energetický metabolismus nádorových buněk, již vstoupilo do klinického testování. Maligní melanom je agresivní zhoubný nádor, jenž jen vzácně odpovídá na standardní chemoterapii či radioterapii. Cílená terapie se zaměřuje zejména na signální dráhu kinázy ERK, která je ve většině melanomů aktivována mutacemi onkogenů BRAF nebo NRAS. Nové inhibitory BRAF mohou zbrzdit postup onemocnění, většinou však dojde k vývoji rezistence na léčbu. Naše výsledky naznačují existenci dříve nepopsaného regulačního mechanismu, na němž se podílí proteiny z rodiny KSR a kináza AMPK, a který při metabolickém stresu vyvolaném inhibitory energetického metabolismu aktivně moduluje dráhu ERK aktivovanou onkogeny. V buňkách melanomu nesoucích mutaci NRAS podporuje metabolický stres interakce mezi proteiny KSR a kinázou CRAF, což vede k nadměrnému zvýšení signalizace ERK nezávisle na NRAS a k inhibici růstu rakovinných buněk. V buňkách melanomu s aktivující mutací BRAF metabolický stres taktéž stimuluje aktivitu ERK podporou interakcí mezi mutantním BRAF V600E a proteiny KSR. Vyšší úroveň metabolického stresu však vede k lokalizaci energetického senzoru AMPK do komplexu BRAF -KSR, následované rozpadem tohoto komplexu a inhibicí dráhy ERK. Naše výsledky ukazují, že zatímco aktivita ERK je u melanomu s mutací NRAS a BRAF ovlivněna metabolickým stresem rozdílně, v obou těchto hlavních molekulárních subtypech melanomu vede narušení energetického metabolismu k deregulaci dráhy ERK a k inhibici proliferace nádorových buněk. Podpořeno projektem Specifického vysokoškolského výzkumu Buněčná a molekulární biologie (MUNI/A/0754/07). Charakteristika novorozeneckých fibroblastů a keratinocytů a jejich vzájemné ovlivňování úspěšnost novorozeneckého hojení Dvořánková B.,, Živicová V., Mateu R. *, Kolář M. 3, Borský J. 4, Smetana K. Jr., Univerzita Karlova v Praze,. lékařská fakulta, Anatomický ústav, * Ústav biochemie a experimentální onkologie Biocev, Vestec 3 Ústav molekulární genetiky AVČR 4 Klinika ušní, nosní a krční. LFUK a FN Motol, Praha Rozštěp rtu a patra je častá vrozená vada. Její chirurgické řešení již v prvních dnech života vede k vynikajícím funkčním i kosmetickým výsledkům. 30 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

Měli jsme ojedinělou možnost získat zbytkovou tkáň od 36 novorozenců a 4 starších dětí. Ze vzorků tkáně jsme izolovali základní buněčné populace fibroblasty a keratinocyty a zkoumali jejich fenotyp pomocí imunocytochemie, western blotu, Elisa i RNA čipové analýzy. Také jsme provedli funkční testy jak izolovaných buněčných populací (proliferace, migrace, viabilita buněk, uzavírání defektu scratch test), tak jejich vzájemné epitelo -mezenchymové interakce. Ve srovnání s fibroblasty starších dětí a dospělých, novorozenecké exprimovaly velké množství nestinu, častěji hladký svalový aktin a byly schopné se diferencovat do adipocytů a chondrocytů. V kultuře novorozeneckých keratinocytů byla nalezena populace velmi malých, nízce diferencovaných keratinocytů se znaky kmenových buněk. Navíc byly novorozenecké keratinocyty ve velké míře též pozitivní na vimentin a vykazovaly velký migrační potenciál ve srovnání s buňkami starších pacientů. Pro udržení těchto znaků je však nezbytná přítomnost novorozeneckých fibroblastů. Ukazuje se, že epitelo -mezenchymová interakce hraje zásadní roli i v unikátním, novorozeneckém hojení. Studie byla podporována z prostředků grantu GAČR 6 05534S. Chondroblastoma like maligní obrovskobuněčný tumor pažní kosti Kinkor Z. Bioptická laboratoř Prezentován je případ třicetipětileté ženy s neustávající bolestí v rameni, u které byl zjištěn agresivně rostoucí tumor proximálního humeru. Nádor způsobil rozsáhlou cystickou osteolýzu metaepifýzy s destrukcí kortikalis, avšak bez známek šíření do přilehlých měkkých tkání. Po předčasně ukončené neoadjuvantní chemoterapii s nulovým efektem následovala resekce 3 cm kosti s aplikací modulární endoprotézy. Mikroskopicky se jednalo o jasně maligní nádor s vysokou reaktivní účastí osteoklastů a hojnou produkcí extracelulární chondroidní matrix, připomínající nezvyklým organoidním strukturálním uspořádáním chondroblastom. Naprosto převládaly velké atypické, solidně mozaikovité uspořádané, převážně dvoujaderné elementy s objemnou eozinofilní cytoplazmou. Jadernou pleomorfii zvýrazňovalo rýhování a přítomnost atypických mitotických figur. Extenzivní zpracování vzorku odhalilo ostře kontrastující miniaturní oblasti s duální kompozicí malých uniformních stromálních elementů a reaktivních osteoklastů, které budily dojem původní prekurzorové obrovskobuněčné léze. Nádorové elementy (vyjma osteoklastické příměsi) vykazovaly difuzní silnou pozitivitu s protilátkami SOX9 a D-40; kompletně negativní byly p63, S00 protein, SATB a desmin. Podstatu nádorové proliferace odhalila až prokázaná mutace c.03g T v exonu genu H3F3A vedoucí k popisnému označení maligní obrovskobuněčný kostní tumor napodobující chondroblastom. Na pozadí mikroskopické variability, histogeneze a složité diferenciální diagnostiky (maligních) obrovskobuněčných kostních lézí jsou diskutovány např. agresivní/ maligní chondroblastom, chondroblastoma like osteosarkom či giant cell rich osteosarkom a přínos specifické mutační analýzy v běžné praxi. Molekulová podstata, detekcia a klinický význam hypermutovaných kolorektálnych nádorov Lasabová Z., Kalman M., Kašubová I.,3, Holubeková V., Váňová B.,3, Plank L. Divízia Onkológia, Biomedicínske centrum Martin, Univerzita Komenského v Bratislave, Jesseniova lekárska fakulta v Martine Ústav patologickej anatómie, Univerzita Komenského v Bratislave, Jesseniova lekárska fakulta a Univerzitná nemocnica v Martine 3 Ústav molekulovej biológie, Univerzita Komenského v Bratislave, Jesseniova lekárska fakulta v Martine Nedávne celogenómové a celoexómové štúdie identifikovali stovky až tisíce somatických mutácií v nádorových bunkách, pričom len menšia časť JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 3

z nich predstavujú driver mutácie. Ukázalo sa, že nádory charakteristické vysokou mutačnou a neoantigénovou záťažou reagujú na liečbu inhibítormi strážnych bodov imunity. The Cancer Genome Atlas (TCGA) kategorizoval hypermutované kolorektálne karcinómy (KRK) do dvoch skupín. Prvú skupinu predstavujú takmer diploidné karcinómy s vysokou mutačnou záťažou v dôsledku deficitného systému opravy DNA MMR (mismatch repair) a/alebo s mutáciou v géne POLE alebo POLD, ktoré kódujú DNA polymerázu s funkciou opravy. Druhú skupinu nádorov tvoria karcinómy s vysokou mierou somatických CNV. V našej práci sme sa zamerali na prvú skupinu karcinómov. Úlohou POLE a POLD polymerázy je rozpoznať a odstrániť chyby DNA vznikajúce počas replikácie. Mutácie v týchto génoch sú zriedkavé a predstavujú 3 % sporadických karcinómov. V oboch génoch však boli zaznamenané aj zárodočné mutácie a často je ochorenie diagnostikované v skoršom veku. MMR systém opravuje postreplikačné chyby, ktoré unikli kontrolnej funkcii DNA polymerázy. Komplex proteínov MSH-MSH6 spolu s heterodimérom MLH- PMS rozpoznáva zle spárované bázy, malé inzercie a delécie. Deficitný MMR systém je charakteristickým znakom Lynchovho syndrómu (LS), ktorého predispozíciou je zárodočná mutácia v jednom z MMR génov MLH, MSH, MSH6, PMS, génu EPCAM, ktorý môže ovplyvniť expresiu MSH, alebo epimutácia MLH. Sporadické MMR deficitne karcinómy vznikajú v dôsledku promótorovej metylácie génu MLH. Charakteristickým znakom MMR deficitných karcinómov je mikrosatelitná instabilita (MSI) a tumor infiltrujúce lymfocyty. MSI je možné detegovať fragmentovou analýzou mononukleotidových markerov alebo imunohistochemickým vyšetrením expresie MMR proteínov. Na testovanie MSI v hypermutovaných KRK sme zaviedli metódu fragmentovej analýzy a IHC vyšetrenie expresie MMR proteínov. Pre detekciu POLE mutácii v MSS karcinómoch sme zaviedli metódu nested single tube PCR a Sangerovu dideoxysekvenáciu. Lymfocytová infiltrácia v nádorovom tkanive bola hodnotená štandardnými histopatologickými metódami. V súbore 70 pacientov s KRK bol priemerný vek pacientov 65,3 roka a bol zložený zo 64 mužov a 06 žien. U týchto 70 pacientov bolo 36 (87,4 %) vzoriek MSS, 3 pacientov (,5 %) malo vysoký stupeň MSI -H a 3 (, %) MSI -L. U 30 pacientov s kolorektálnym karcinómom s MSS a priemerným vekom pacientov 43,9 sme analyzovali exóny 9, a 3 génu POLE. Naším postupom sme nedetegovali žiadnu jednoznačne patologickú variantu. U pacientky s adenokarcinómom s mucinóznou zložkou, ktorá mala MSS potvrdenú na úrovni STR aj na úrovni IHC, a ktorá mala v čase diagnózy 48 rokov, sme identifikovali bodovú substitúciu c.893c T, ktorej výsledkom je tichá mutácia p. L83L. Zámenu c.893 C T sme potvrdili aj sekvenáciou reverzným primerom a v databáze dsnp nie je popísaná. Internetový nástroj Mutation taster označil túto substitúciu ako zámenu, ktorá môže mať vplyv na zostrih RNA. V súčasnosti prebiehajú mnohé štúdie zamerané na inhibítory strážnych bodov imunity v MMR deficitných karcinómoch, vrátane kolorektálneho karcinómu, ako aj pre POLE mutované karcinómy. Je dôležité mať nástroje na charakterizáciu nielen kolorektálnych karcinómov, ale aj pre iné typy hypermutovaných nádorov, ktoré pomôžu zvoliť pre pacientov vhodnú cielenú terapiu. Novou paradigmou je nedávno schválená cielená liečba pre MMR deficitné nádory pomocou pembrolizumabu, ktorá predstavuje širšie možnosti personalizovaných liečebných stratégií. Táto štúdia bola podporená projektom APVV 4 073, APVV 6 0066 a projektom financovaným zo štrukturálnych fondov EU Martinské centrum pre biomedicínu (BioMed Martin), ITMS 600787. 3 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

Využitie Liquid Biopsy v monitoringu mutačného statusu génov RAS a BRAF u pacientov s mcrc Valenčíková R., Šebest L., Závodná K., Lohajová Behulová R. Oddelenie lekárskej genetiky, Onkologický ústav sv. Alžbety, Bratislava Štúdie v posledných dvoch desaťročiach pou kázali na možnosť využitia tekutej biopsie ako zdroja informácií pre klinický manažment, prognózu a monitoring onkologických ochorení. Tekutá biopsia predstavuje neinvazívny biomarker, ktorý umožňuje opakovane reflektovať heterogénnu populáciu nádorových DNA v reálnom čase. V našej práci sa venujeme verifikácii poznatkov o využití tekutej biopsie pre monitoring pacientov s metastatickým karcinómom kolorekta. Ako zdroj genetického materiálu využívame cirkulujúcu nádorovú DNA (ctdna) analyzovanú z krvnej plazmy a fixované tkanivo primárneho tumoru. Na automatizovanej platforme Idylla stanovujeme mutačný status génov RAS a BRAF, pričom výsledky z oboch analyzovaných materiálov následne komparujeme. V súbore pacientov s opakovaným odberom plazmy sledujeme zmenu mutačného statusu v priebehu liečby a možnosť využitia ctdna monitoringu progresie ochorenia. Spektrum a frekvence mutací u primárních melanomů detekovaných pomocí NGS Tichá I., Hojný J., Němejcová K., Bártů M., Kodet O.,3, Hájková N., Michálková R., Krkavcová E., Dundr P. Ústav patologie,. LF UK a VFN v Praze Dermatovenerologická klinika,. LF UK a VFN v Praze 3 Anatomický ústav,. LF UK Praha PTEN, atd.). V této práci prezentujeme výsledky NGS analýzy vybraných genů spojovaných s vývojem onemocnění v 80 primárních melanomech. Genomová DNA izolovaná z 80 archivních parafinových vzorků primárních kožních melanomů (33 nodulárních a 47 superficiálně se šířících) bylo analyzováno pomocí NGS (MiSeq, Illumina) s nabohacením cílových genů a přilehlých intronových částí (9 kbp; Roche NimbleGen SeqCap EZ protocol). Data byla analyzována softwarem NextGENe (Softgenetics), a hodnoceny byly pouze varianty s minimálním průměrným pokrytím 50x a frekvencí mutované alely 0 %. Vybrané varianty byly konfirmovány pomocí přímého Sangerova sekvenování (ABI3500, ThermoFisher). Databáze mutací a in silico prediktory byly použity pro určení patogenity detekovaných variant. Celkem bylo hodnoceno 54 genů a 46 neslo mutaci. V každém vzorku bylo detekováno 0 3 (medián 4) mutací v 0 9 (medián 3) genech. Rozložení počtu mutací i mutovaných genů bylo rovnoměrné, nezávisle na stadiu nebo lokalitě nádoru. Mutace BRAF (44/80; 55 %) and NRAS (4/80; 30 %) byly vzájemně se vylučující. Výskyt BRAF mutace koreloval s kratším přežitím bez lokální rekurence (p = 0,036). Další relativně časté patogenní nebo pravděpodobně patogenní mutace byly detekovány v genech ATM (6/80; 7,5 %); PPP6C, ZEB (5/80; 6,3 %); a ARID, BRCA, TP53 nebo KDR (4/80; 5 %), některé jsou dosud nepopsané, např. v genech HNFB, KDR or ZEB. Naše výsledky jsou ve shodě s jinými studiemi a databázemi, nicméně byla identifikována řada dosud nepopsaných variant. Charakterizace všech detekovaných variant a rozšiřování souboru vzorků stále probíhá. Tato práce byla podpořena granty MZČR (výzkumný projekt AZV6 30954 A a RVO 6465, Všeobecná fakultní nemocnice v Praze). Řada genů je již spojována s predispozicí ke vzniku melanomu (např. CDKNA, CDK4, POT, BRCA/) a s jeho patogenezí (BRAF, NRAS, PIK3CA, JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 33

Molekulární diagnostika a sledování minimální reziduální nemoci u pacientů s anaplastickým velkobuněčným lymfomem Kalinová M., Hilská I., Mrhalová M., Kabíčková E., Říha P., Kodet R. Ústav patologie a molekulární medicíny,. LF UK a FN v Motole, Praha Klinika dětské hematologie a onkologie,. LF UK a FN v Motole, Praha Anaplastický velkobuněčný lymfom (ALCL) je zařazen do skupiny T lymfomů. V případě ALK protein pozitivního ALCL dochází k patologické aktivaci onkogenu ALK ležícím na p3 (gen anaplastic lymphoma kinase). Aktivace je způsobena chromozomální translokací, při které vznikají fúzní geny s různými translokačními partnery. Nejčastěji (75 %) nacházíme translokaci t(;5) (p3;q35), kdy dochází k fúzi s genem NPM (gen nukleofosmin). Molekulární diagnostika ALCL zahrnuje: ) detekci nejčastějšího fúzního genu NPM/ALK, ) u pacientů bez prokázané fúze NPM/ALK probíhá hledání translokačního partnera genu ALK pomocí metody 5 RACE, 3) u všech ALK protein pozitivních ALCL vyšetřujeme kvantitativní expresi translokované části genu ALK, která slouží jak k diagnostice ALK pozitivních ALCL, tak ke sledování minimální reziduální nemoci (MRN). Výsledky genové analýzy jsme porovnávali s imunohistochemickým průkazem (IHC) exprese proteinu ALK a jeho lokalizací v buňce a dále s výsledky fluorescenční in situ hybridizace na interfázických jádrech (I -FISH). Hladiny MRN jsme porovnávali s klinickým průběhem onemocnění. Celkem jsme vyšetřili 76 pacientů s ALCL ( 80 let; medián 7 let) s IHC prokázanou expresí proteinu ALK. U 7 pacientů jsme vyšetřili zlom chromozomu, v oblasti p3 a ve všech případech byl zlom detekován. V 57 případech jsme detekovali fúzní gen NPM/ ALK (75 %), v 7 případech ATIC/ALK, ve dvou případech CLTC/ALK, x jsme detekovali TPM4/ALK, TPM3/ALK, ALO7/ALK a MYH9/ALK. U 6 pacientů NPM/ALK negativních, ALK protein pozitivních jsme neměli dostatek materiálu (RNA) pro následné vyšetření metodou 5 RACE. U všech vyšetřených pacientů (73) jsme detekovali vysokou hladinu exprese translokované části genu ALK s mediánem 6946 kopií, kterou jsme u 3 pacientů využili ke sledování MRN bez ohledu na přítomný fúzní gen v době diagnózy. Celkem jsme vyšetřili 430 reziduálních vzorků (49x kostní dřeň, 69x periferní krev, x mozkomíšní mok) s mediánem doby sledování 798 dnů. Hladina MRN korelovala s klinickým průběhem onemocnění. Molekulární diagnostika umožňuje detekovat translokační partnery genu ALK u ALK pozitivního ALCL. Kvantitativní detekce exprese translokované části genu ALK slouží jak k diagnostice ALK pozitivních ALCL, tak ke sledování MRN. Podpořeno projektem (Ministerstva zdravotnictví) koncepčního rozvoje výzkumné organizace 0006403 (FN MOTOL). 34 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

8 th Olomouc Days of Histologic Technicians 8. dny histologických laborantů Prediktivní testování nádorů plic Petrová M. Ústav klinické a molekulární patologie LF UP a FN Olomouc Budoucnost onkologie je charakterizována co možná nejpřesnějším profilováním nádoru i pacienta, cílenou léčbou a zvládnutím vedlejších účinků léčby. I rakovina plic je soubor různých typů nádorů, z nichž každý má své molekulární charakteristiky a vyžaduje odlišnou léčbu. Toto je předmětem prediktivní onkologie, která se zabývá prediktivními znaky předpovídajícími účinnost určitého léčebného postupu. Myelin a jeho laboratorní průkaz Mrňáková H., Csernáková V. Ústav klinické a molekulární patologie LF UP a FN Olomouc Myelin je lipoprotein, který tvoří lipidové dvojvrstvy buněčných membrán kolem axonů neuronů známé jako myelinové pochvy. Je jednou ze základních složek bílé hmoty mozku a míchy a dodává jim bílé zbarvení. Jeho existence a správná distribuce je nezbytnou podmínkou pro řádné fungování centrální i periferní nervové soustavy. Tato práce se zaměřuje na jeho průkaz v mozkové tkáni, na našem pracovišti používáme barvení luxolovou modří. Patologie prostaty a její zpracování v bioiptické a imunohistochemické laboratoři Behanová T., Fabíková Z. Ústav klinické a molekulární patologie LF UP a FN Olomouc Charakteristika a zhodnocení procesu zpracování prostaty na ÚKMP ve FNOL, kde prostatu zpracováváme metodou histotopogramů. V případě nejistého nálezu He eo barvených preparátech, jak z punkčních proužků tkáně prostaty, tak v případě tkáně z radikální prostatektomie můžeme identifikovat karcinom pomocí protilátek P63 a CK -V. Jistota a úskalí diagnostické cytologie Horáček J., Kvapilová D., Slobodová Z. Ústav klinické a molekulární patologie LF UP a FN Olomouc Historie klinické cytodiagnostiky je spojena s rozvojem mikroskopie, barvicí techniky, imunohistochemie a s dalšími novějšími formami, jako jsou LBC, techniky molekulární, spojené s molekulární analýzou, klasifikací papilomavirů a s prohloubením klinické spolupráce s vazbou na histopatologii. Významným přínosem jsou nové definice a kritéria, které poskytují zpracované systémy Bethesda a zlatý hřeb označovaný jako korelace cytologicko- histologické. Je slušností k minulosti začátků rozvoje, zvláště onkologické cytologie, nezapomínat na její zakladatele, jejichž kritéria hodnocení jsou uznávaná dodnes. Významnou etapou vývoje cytologie po druhé světové válce byly monografie Papanicolaoua v cytologii gynekologické, dále barvení dle Giemzy v cytologii negynekologické. Jistoty a úskalí přináší vedle optimismu stejnou měrou i zklamání, které však nás nesmí odradit od další práce. Falešně pozitivní a falešně negativní výsledky však lze redukovat vzájemnou konzultací a školicími akcemi zainteresovaných odborníků. Budoucnost dalšího rozvoje cytologie však souvisí i s ekonomickými náklady, které je třeba pečlivě zvažovat ve prospěch pacientů. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 35

Literatura M. Bibbo et al.: Comprehensive cytopathology. Saunders, Elsevier 008. The Bethesda system for reporting cervical cytology. Springer 04. Herbeck, Ondruš, Dvořák, Mortakis: Atlas Kolposkopie. Maxdorf Jessenius 0. Horáček J., Kobylková J.: Gynekologická cytodiagnostika. Maxdorf Jessenius 03. Dvořáčková J.: Cytologie pankreatu. Maxdorf Jessenius 03. Analýza obrazu v patologii Überall I., Rulíšek P., Hlava P., Flodr P., Minařík J., Balik V. 3, Gallo J. 4, Faber E. 3, Kolář Z. Ústav klinické a molekulární patologie, LF UP v Olomouci Neurochirurgická klinika, FN Olomouc 3 Hemato onkologická klinika, FN Olomouc 4 Ortopedická klinika FN Olomouc Tématem příspěvku bude stručný úvod do problematiky analýzy obrazu jako kvantifikační metody. Budou popsány výhody a nevýhody analýzy obrazu a bude upozorněno na limity při jejím použití. Rovněž bude komentována možnost její kombinace s virtuální mikroskopií s praktickými příklady využití na Ústavu klinické a molekulární patologie LF UP v Olomouci a ostatních spolupracujících klinikách FN Olomouc. Vyšetrenie hereditárnych nádorových syndrómov na ÚLG v Olomouci Janíková M.,, Kratochvílová R., Synková H., Vrtěl R., Vodička R., Slavkovský R. 3, Procházka M. Ústav lékařské genetiky, Ústav klinické a molekulární patologie, 3 Ústav molekulární a translační medicíny, Fakultní nemocnice Olomouc a Lékařská fakulta Univerzity Palackého v Olomouci Vyšetrenie hereditárnych nádorových syndrómov predstavuje v súčasnosti majoritu analýz vykonávaných na našom Ústave lékařské genetiky vo FNOL. Toto vyšetrenie má veľký význam ako pre pacientov s nádorovými ochoreniami, tak aj pre ich rodinných príslušníkov. Vyšetruje sa 9 génov v paneli navrhnutom na mieru českej populácie (CZECANCA, Roche). Tieto gény vybrali poprední odborníci v ČR kvôli ich spojitosti so zvýšeným rizikom vzniku nádorov. Na základe získaných výsledkov je pacientom doporučovaná následná dispenzarizácia, a v prípade niektorých typov nádorov vaječníkov a prsníkov aj vhodná terapia. Práce podpořena MZ ČR RVO (FNOL, 0009889). Farmakogenetika v praxi Žižková V. Ústav klinické a molekulární patologie LF UP a FN Olomouc Farmakogenetika je rychle se rozvíjející obor na pomezí farmakologie a genetiky, který studuje dědičně podmíněnou variabilitu odpovědi organismu na léky, které jsou klinicky významné a mají úzký terapeutický index. Díky tomuto přístupu je možnost identifikace jedinců se zvýšeným rizikem konkrétního onemocnění a zároveň i zajištění lepší ochrany zdraví léčených osob a snížení nákladů na léčbu nežádoucích účinků. 36 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

POSTER ABSTRACTS / ABSTRAKTA POSTERŮ ) Molecular profiling of synchronous endometrioid endometrial and ovarian carcinomas Hájková N., Tichá I., Němejcová K., Bártů M., Méhes G., Laco J. 3, Geryk T. 3, Dundr P. Institute of Pathology, First Faculty of Medicine, Charles University and General University Hospital in Prague, Czech Republic Department of Pathology, University of Debrecen, Hungary 3 Fingerland Department of Pathology, Faculty of Medicine and University Hospital Hradec Kralove, Charles University, Czech Republic Introduction: Synchronous endometrial and ovarian carcinoma (SEO) occur in about 5% of endometrial and 0 0% of ovarian carcinomas. The distinction between simultaneous independent primary carcinomas, metastasis from the ovary to the endometrium or vice versa, is essential for prognostic and therapeutic considerations. The current criteria for this distinction are based on clinico -pathological features (grade, stage of the diseases, size of the tumor, depth of invasion, surface implants, etc.). However, the great benefit has been expected from molecular studies. Herein we present molecular characterization of SEOs. Methods: DNA was isolated from archived FFPE tissues. Samples for sequence capture NGS were prepared using the KAPA HyperPlus kit. Target sequences were enriched using commercial hybridization probes (Nimblegen, Roche) designed to human DNA regions of our interest (73 genes or gene parts; 9 kbp). Library was pair -end sequenced by MiSeq instrument (Illumina). Data were processed by NextGENe software (Softgenetics) according in -house pipeline and Variant comparison tool was used for evaluation of shared/different mutation between tumors of one patient. Results: All SEOs shared nonsynonymous somatic mutation in at least one gene: PTEN, AKT, PIK3CA, KRAS, TP53, ARIDA. A total of 7/ cases shared mutation in PTEN and 7/7 those SEOs shared also ARIDA mutation; / shared ARIDA, AKT and PIK3CA while PTEN mutation was not detected; / shared only AKT mutation and / case shared TP53 mutation. Conclusion: SEOs are clonally related irrespectively of their clinico -pathological features and molecular profiling is not helpful in the staging of these tumors. Current approach based on assessing clinico -pathological features should continue to be used for the classification of these tumors. Nevertheless, molecular profiling of SEOs can be helpful for a better understanding of the pathogenesis and may have clinical impact with respect to its prognostic or predictive meaning. This work was supported by Ministry of Health Czech Republic (Research project AZV 7-8404 A and Conceptual development of research organization 6465, General University Hospital in Prague) and by Charles University program SVV6048 and UNCE04065. ) Prognosticko prediktivní markery u IDH wild type glioblastomu Šporiková Z., Kalita O., Hajdúch M., Trojanec R., Megová Houdová M., Vaverka M., Hrabálek L., Zlevorová M. 3, Vrána D. 3, Drábek J., Tučková L. 4, Ehrmann J. Jr. 4, Vrbková J. Ústav molekulární a translační medicíny, Fakultní nemocnice Olomouc, Univerzita Palackého v Olomouci Neurochirurgická klinika, Fakultní nemocnice Olomouc 3 Onkologická klinika, Fakultní nemocnice Olomouc 4 Ústav klinické a molekulární patologie, Fakultní nemocnice Olomouc Úvod: Glioblastom multiforme (GBM, glioblastom) je nejčastější letální malignita centrálního nervového systému. I přes prokázaný benefit JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 37

kombinace chirurgické resekce a chemoradioterapie (tzv. Stuppův režim) je glioblastom charakterizován rychlou progresí, pouze <0 % pacientů přežije 5 let a mortalita je prakticky 00 %. I přes veškerou snahu definovat prognosticko prediktivní biomarkery, není molekulárně cytogenetická podstata tohoto onemocnění doposud zcela objasněna. Nejčastějšími genetickými alteracemi je overexprese EGFR, mutace v PTEN a ztráta chromozomu 0. Všeobecně genetické biomarkery pomáhají definovat populaci pacientů, kteří by mohli profitovat z personalizované terapie specifickými léčivy. Cíl: Cílem bylo nalézt cytogenetické markery, které by mohly specifikovat predikci a prognózu pacientů s primárním GBM IDH wild type léčených ve FNOL 06/006-06/04. Metodika: Na FFPE tkáních byla provedena metoda FISH s fluorescenčně značenými sondami LSI p36.3, LSI q5., LSI 9p.3, LSI 9q3, LSI EGFR, LSI CEP7, LSI MDM, LSI 0p., LSI BCR, LSI q., LSI CCND, LSI TP53, LSI RB, LSI 3q.. Data byla doplněna o IDH a IDH mutace pomocí CADMA PCR. Získané výsledky byly porovnány s klinickými daty. Statistika byla vyhodnocena R Statistical Software, Version 3.. a dále byly vypočteny hodnoty cut off pro každou sledovanou oblast. Výsledky: Byla prokázána korelace věku, pohlaví, Karnofskeho skóre, TP53, CCND a chemoterapie s přežitím pacientů. Vyšší počet kopií TP53 a CCND u pacientů léčených chemoradioterapií má pozitivní vliv na přežití bez progrese a celkové přežití. Závěr: Klinické faktory, jako jsou věk, Karnofskeho skóre, terapie a kouření spolu s cytogenetickými aberacemi v TP53, CCND, MDM a 0p, mají vliv na přežití pacientů s GBM IDH wild type. Podpořeno IGA_LF_08_005. 3) Stromální mikroprostředí u dobře diferencovaného kolorektálního karcinomu Gamratová M., Delongová P.,, Hulínová T., Brychtová S. 3,4, Dvořáčková J. Fakultní nemocnice Ostrava Lékařská fakulta Ostravské univerzity 3 Fakultní nemocnice Olomouc 4 Lékařská fakulta Univerzity Palackého v Olomouci Úvod: I přes zvyšující se incidenci kolorektálního karcinomu nejsou známé jeho jednoznačné prediktivní faktory, proto se kromě gradu (diferenciace) a stagu (stadia) hledají další nezávislé parametry umožňující posoudit jeho biologické chování a agresivitu. Bylo prokázáno, že významnou roli v biologickém chování nádoru hrají změny intercelulárních interakcí, které podmiňují migraci a invazivitu nádorových buněk. Za jeden z morfologických korelátů alterace intercelulárních vazeb se pokládá schopnost nádoru tvořit buněčné shluky, tzv. budding. Tyto jsou definovány jako menší shluky nádorových buněk bez přítomnosti žlázových struktur, pomocí kterých nádor snadněji proniká do okolní tkáně. Karcinomy se zvýšenou tvorbou těchto shluků bývají spojovány s vyšší agresivitou. Další nedílnou součástí nádorového mikroprostředí je angiogeneze, která může ovlivněním přísunu kyslíku a živin podstatně stimulovat růst nádorových buněk. Stupeň angiogeneze se hodnotí stanovováním mikrovaskulární denzity. Cílem práce je zhodnocení buddingu se změnami angiogeneze a exprese CD90/Thy u dobře diferencovaných adenokarcinomů různého stadia. Antigen CD90 je jednak markrem aktivovaných cév, a jednak je exprimován fibroblasty ve stromatu nádoru. Ovlivňuje stromální fenotyp, buněčnou adhezi a je součástí kontroly buněčné proliferace. Podílí se na regulaci apoptózy a aktivity tumor supresorových genů. Materiál: Byl vyšetřen soubor 30 parafinových bločků dobře diferencovaných adenokarcinomů stadia, a 3 fixovaných formalinem. Za budding byly považovány solidní shluky buněk v rozmezí 38 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

4 5 buněk počítané na plochu mm, které byly hodnocené z hematoxylin -eozinových preparátů. Protein CD90 byl detekován metodou nepřímé imunohistochemie s použitím monoklonální protilátky a hodnocen pomocí histoskóre (počítané jako násobek intenzity exprese a procenta pozitivních buněk) i stanovením mikrovaskulární denzity (MVD) jako míru angiogeneze ve tkáni. MVD jsme hodnotili jako počet drobných cévních prostor na ploše 0, mm ( zorné pole při zvětšení 400x) v místech s největší denzitou, v tzv. hot spots. Výsledky: Nejvíc případů buddingu bylo zjištěno u stadia 3 (až v 70 % případů), našel se však i u případů karcinomu stadia (ve 0 % případů). Střední a silná exprese CD90 buňkami stromatu byla pozorována v 80 % případů u stadia a 3 a v 70 % případů u stadia. Nulová exprese pozorována nebyla. Hodnota MVD bola nízká až v 60 % případů u stadia a, ale signifikantně se zvýšila u stadia 3. Závěry: Prokázali jsme, že i u dobře diferencovaných adenokarcinomů modulace stromálního mikroprostředí souvisí se stadiem onemocnění. U nádorů stadia 3 došlo k signifikantnímu vzestupu jak tvorby budding, tak mikrovaskulární denzity. U nádoru. a 3. stadia dochází k významné změně fenotypu stromálních fibroblastů s overexpresí CD90. Naše výsledky tak přispívají k porozumění rozdílného biologického chování dobře diferencovaných adenokarcinomů různých stadií onemocnění. Podpořeno MZ ČR RVO -FNOs/06. 4) Inflammatory cues induce expression of immune checkpoint molecule CD37 in breast cancer cells Friedlová N., Dúcka M., Beneš P., Knopfová L. Department of Experimental Biology, Faculty of Science, Masaryk University, Brno CD37 (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Member 9) was originally described as a T cell co-stimulatory molecule. In context of cancer it is a promising target for immunotherapy, as the agonist CD37 antibodies induce potent T cell- mediated antitumor immunity. However, tumor cells utilize CD37-based strategies, such as expression of its soluble variant, in order to prevent co-stimulation of T lymphocytes. Besides, immune checkpoint molecules have been shown to promote the epithelial-mesenchymal transition, the acquisition of tumor-initiating potential and resistance to apoptosis and antitumor drugs, as well as the propensity to disseminate and metastasize. Autocrine and paracrine effects of CD37 receptor/ ligand bidirectional signaling in breast cancer are still only marginally understood. We have recently described that CD37 expression is downregulated by metastasis suppressor c-myb in mammary cancer cells. On contrary, its expression is induced by inflammatory stimuli, such as TNFα. We explore how tumor-derived CD37 affects breast cancer biology and interactions with immune/stromal cells. This work was supported by Czech Science Foundation grant 7-08985Y and Rector s Programme MUNI/C/433/07. 5) Zpracování pankreatu dle Leedského protokolu Götzová A., Brymová M. I. patologicko-anatomický ústav LF a FN u sv. Anny v Brně Rakovina slinivky břišní patří mezi nejnebezpečnější typy nádorů. Kvůli svému anatomickému uložení totiž bývá diagnostikována až ve značně pokročilém stadiu, navíc jde o velmi agresivní typ nádoru s nejvyšší letalitou. Leedský protokol pomáhá k co nejpřesnějšímu určení rozsahu tumoru a tím i umožnění co nejpřesnější diagnózy a následné léčby. Cílem této práce je poukázat na významnost využití Leedského protokolu v praxi a jeho užitečnost v diagnostice a léčbě karcinomu pankreatu. Dále zjistit jaký byl záchyt karcinomu pankreatu na I. PAÚ za posledních 0 let. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 39

6) Influence of duration of storage of tissue samples on immunostaining intensity Čížková K.,, Štetková I., Tauber Z. Department of Histology and Embryology, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc Institute of Molecular and Translational Medicine, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc Pathological and histological archives represent an abundant resource of tissue samples which are essential source of material for epidemiologic and molecular aspects of disease. The archive of Department of histology and embryology, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University is a collection of tissue samples from clinically aborted embryos/foetuses. All tissues were presumed to be normal as no tissues were provided from cases known to have defects or adverse exposures. Because of general scarcity of human embryonic material this collection represents a valuable source of material. We detected Ki-67, cyclin A and β -actin in archived formol- or methacarn -fixed paraffin- embedded human embryonic/foetal liver, intestines and placenta by two step immunohistochemistry. The staining intensity was measured by ImageJ software. Then the reciprocal staining intensities for tissues stored for shorter period ( 8 year) and longer period ( 45 years) were compared. Our results showed that staining intensities of all three antigens in all three tissues types are significantly lower in longer stored samples. This loss of staining intensity should be taken into consideration in retrospective studies. 7) Vyšetření mitotické aktivity u vybraných maligních nádorů v klasických preparátech a s využitím protilátky phh3 Delongová P., Gamratová M.,, Dvořáčková J.,, Vaculová J.,, Tomanová R., Ústav patologie LF OU, Ostrava Ústav patologie FNO, Ostrava Klasifikace některých nádorů se mimo jiné opírá o hodnocení mitotických figur. Zaměřili jsme se na problematiku hodnocení mitotické aktivity u vybraných maligních onemocnění. Mitotická aktivita je běžně hodnocena v základním histologickém barvení, my využili i možnost ji vyšetřit pomocí imunohistochemické metody. Cílem naší práce bylo porovnat obě varianty vyšetření. Hodnotili jsme výsledky vyšetření mitotické aktivity v základním histologickém barvení hematoxylin -eozin s výsledky vyšetření s využitím polyklonální protilátky phh3 (Phosphohistone H3) u gliomů, meningiomů, karcinomu mléčné žlázy a maligního melanomu. Rozlišení a počítání mitóz k určení gradingu nádorů v klasicky obarvených histologických preparátech je obtížné a je zatíženo značnými interpersonálními rozdíly. V imunohistochemickém vyšetření protilátkou phh3 se přítomné mitózy označí a téměř bez interpretačních pochyb sečtou. Sníží se interpersonální rozdíly a tím podíl subjektivity na výsledku vyšetření. Počty mitóz v imunohistochemických preparátech byly výrazně vyšší než při běžně provedeném hodnocení preparátu stejného případu a je třeba k tomu přihlížet a individuálně posuzovat grading daného nádoru, aby nedošlo k přehodnocení výsledku. Jednodušší a objektivnější je hodnocení mitotické aktivity při jejím označení danou protilátkou, ale je třeba dbát na správné určení gradingu. Práce vznikla s podporou grantového projektu SGS9/LF/06-07. 40 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

8) Identifikace alternativních sestřihových variant HNFB ve vybraných tkáních předběžné výsledky Hojný J., Bártů M., Rosmusová J., Tichá I., Hájková N., Němejcová K., Dundr P. Ústav patologie,. lékařská fakulta, Univerzita Karlova a Všeobecná fakultní nemocnice v Praze Úvod a cíle: Hepatocyte nuclear factor homeobox B (HNFB) je transkripční faktor, který reguluje expresi řady genů účastnících se regulace buněčného cyklu a apoptózy a dále metabolismu glukózy. V nedávné době byla popsána souvislost mezi sníženou expresí HNFB a lékovou rezistencí u ovariálního karcinomu a další studie dále naznačují spojení mezi aberantním zastavením buněčného cyklu v G fázi a overexpresí HNFB, které vede k chemorezistenci. Avšak o expresi HNFB a jeho transkripčních variant se mnoho neví, stejně jako o jejich klinickém dopadu. Naším cílem je zevrubně popsat mrna izoformy HNFB, identifikovat tkáňově specifické sestřihové varianty a jejich expresi napříč nádorovými i nenádorovými vzorky získanými ze tkání těla děložního, slinivky břišní, tlustého střeva a prostaty. Metody: Charakterizovaná RNA (RIN), izolovaná ze tkání skladovaných v RNA lateru, byla přepsána do cdna pomocí SSIII reverzní transkriptázy za využití náhodných hexamerů. Transkripční varianty mrna HNFB byly identifikovány pomocí vysoce senzitivní NGS (MiSeq, Illumina) s hlubokým pokrytím všech přítomných exon -exonových spojení, které byly získány pomocí specifické multiplexní PCR. Výsledky: Identifikovali jsme několik dosud nepopsaných predominantních (Δ5, Δ6-8, Δ7, Δ8) a dále 9 dalších sestřihových variant HNFB. Dvě třetiny nově identifikovaných variant vykazovaly tkáňově specifickou expresi. Závěr: Detekce s vysokou citlivostí za využití NGS odhalila řadu dosud neznámých sestřihových variant HNFB. Kvantifikace těchto variant pomocí qpcr analýzy s využitím primerů nasedajících do unikátních exonových spojení na širokém spektru tkání probíhá. Tato práce byla podpořena granty MZČR (výzkumný projekt AZV 7-8404 A a projekt dlouhodobého koncepčního rozvoje RVO 6465, Všeobecná fakultní nemocnice v Praze) 9) Peroperační otisková cytologie sentinelové uzliny Šopíková M., Kotásková H., Vážan P., Kubelková I. CGB laboratoř, a. s., Zlín Otisková cytologie je součástí peroperačního vyšetření sentinelové uzliny (SLN) u karcinomu prsu a je zpracovávána souběžně s peroperační biopsií uzliny. Vyšetření přináší benefit pro pacienta, neboť při nepřítomnosti maligních buněk v SLN není nutný další zatěžující, rozsáhlejší chirurgický výkon disekce axily, naopak při pozitivitě může být díky peroperačnímu vyšetření provedena disekce axily v rámci jedné operace. Barvicí metodika pro otiskovou cytologii musí být jednoduchá, velmi rychlá a musí poskytovat kvalitní výsledek barvení. Předmětem posteru je i srovnání dvou metod barvení: Hematoxylin eosin a MGG Quick Stain. Obě metody se jeví použitelné pro hodnocení peroperačních otiskových cytologií, ale vzhledem k lepšímu barevnému znázornění a kontrastnosti buněk, kratší době barvení preferujeme použití metody MGG Quick Stain jako primární metody. V roce 07 bylo v naší laboratoři vyšetřeno 53 případů karcinomu prsu, u kterých bylo provedeno peroperační vyšetření SLN, z toho u 4 případů byla zachycena peroperačně mikro či makrometastáza karcinomu v SLN. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 4

0) Vyšetření CT BRAF u pacienta s histiocytózou z langerhansových buněk Krsková L., Kalinová M., Švojgr K., Říha P., Kodet R. Ústav patologie a molekulární medicíny. LF UK a FNM, Praha KDHO FNM, Praha Histiocytóza z Langerhansových buněk (LCH) je vzácné idiopatické onemocnění charakterizované tvorbou infiltrátů s přítomností Langerhansových dendritických buněk a dalších buněčných elementů, typicky eozinofilních leukocytů a lymfocytů. Onemocnění lze rozdělit do dvou základních skupin: na chorobu postihující jeden orgán a na typ multisystémový napadající dva a více orgánů. Právě rozsah a lokalizace postižení orgánů a tkání vede k rozdílným klinickým projevům choroby. Průběh onemocnění je variabilní v rozsahu od spontánní regrese až po velmi agresivní chování s fatálními výsledky. Většina LCH pacientů má mutovánu BRAF (BRAF -V 600E) či MAPK (mitogen -activated protein) kinázu. Rozhodující slovo při stanovení diagnózy nádorového onemocnění má bioptické vyšetření a následný histologický rozbor tkáně. Posun v této oblasti přinesla i tzv. tekutá biopsie, neinvazivní vyšetření nádorových složek volně se vyskytujících v krevní plazmě, popř. v moči. Díky tekuté biopsii je možné detekovat množství cirkulujících nádorových buněk (CTCs) i cirkulující nádorovou DNA (ctd- NA). CtDNA je v plazmě přítomna ve fragmentech DNA o velikosti stovek nukleotidů a její koncentrace je velmi nízká a závislá na stavu onemocnění. K detekci slouží nádorově specifické genetické změny (mutace genů apod.) a pro analýzu jsou vyvinuty a používány speciální technologie, které zajišťují vysokou citlivost. Prezentujeme kazuistiku téměř 3letého pacienta s multisystémovou LCH léčeného od jednoho roku života. Ve vzorku DNA izolovaném z kožní excize diagnostického materiálu byla prokázána mutace v genu BRAF V600E. Pacient podstoupil allogenní transplantaci periferních kmenových buněk pro refrakterní LCH a byl léčen pomocí BRAF inhibitoru (Vemurafenib) a následně pro progresi v II. linii Dabrafenibem s následným přidáním Trametinibu (MEK inhibitor). V průběhu léčby je u pacienta podrobně sledována hladina ctbraf V600E pomocí systému Idylla Biocartis. Z dvouletého sledování se nám jeví, že metoda odráží klinický stav pacienta a detekuje opakované progerese/regrese na cílené terapii. Závěr: Metodou detekce ctdna je možné monitorovat úspěšnost terapie pacientů s V600E BRAF mutovanou LCH. Podpořeno projektem (Ministerstva zdravotnictví) koncepčního rozvoje výzkumné organizace 0006403 (FN MOTOL) ) The detection of fibrosis in the heart of various species: histology and immunohistochemistry Kvasilová A., Olejníčková V.,, Sedmera D., Institute of Anatomy, First Faculty of Medicine, Charles University, Prague Institute of Physiology, The Czech Academy of Sciences, Prague The cardiac myocytes form an electrical syncytium, embedded in a supportive fibroblast -rich extracellular matrix (ECM) designed to optimize electromechanical coupling for maximal contractile efficiency of the embryonic and adult heart pump. The fibrotic process is characterized by accumulation of fibroblasts and deposition of increasing amount of ECM proteins in the myocardium. In an injured heart, the stimulated fibroblasts produce collagen and glycosaminoglycans. Using histology and immunohistochemistry we compared the fibrotization process in various experimental animals. Frozen sections of cardiac tissue of the adult rat, rabbit and sheep were used for all the staining protocols. The myocardial ar- 4 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

chitecture and fibrosis were studied by histology with Picrosirius red (PSR) staining and by immunohistochemistry with Collagen I / Wheat germ agglutinin (WGA) staining. The amount of collagen was quantified by transmitted and polarized light on Olympus BX50 upright microscope, Olympus DP 7 CCD camera and Olympus FluoView confocal laser-scanning microscope. PSR staining was able to provide a general histological overview of collagen deposition in the heart. PSR in polarized light enabled us to distinguish the mature and immature collagen fibres. Collagen I was the most widely expressed collagen at the protein level and closely matched the PSR staining of total collagen deposition. WGA, as a member of the lectin family found on the surface of cell membranes, outlined the cell borders and was also strongly expressed in the adventitia, the valves, and the subepicardium. In the developing heart, impaired collagen distribution may lead to detrimental tissue remodelling and the formation of cardiac defects. Fibrotic remodelling in the adult hearts accompanies various cardiovascular diseases. Detailed morphological description of fibrotic process could advance our understanding of various cardiovascular disorders. Supported by PROGRES Q38/06038-, AZV 7-865 A, GAUK 4567 and SVV. ) In vitro 3D systems for studying neurogenesis Mokry J., El Negiry A. A. M., Pisal R. V. Department of Histology and Embryology, Charles University, Medical Faculty in Hradec Králové A large self -renewing and proliferative potential of stem cells allows their extensive propagation in vitro and also their exploitation for modelling developmental processes. Stem cell models for neurogenesis utilize tissue -specific stem cells or pluripotent stem cells. The advantage of the first approach is that neural stem cells are already committed to production of neuronal and glial cells and their specification depends on time of isolation of these stem cells from the brain. On the contrary, pluripotent stem cells are not specified; they are hierarchically placed above the tissue -specific stem cells and can generate any cell of the body. Cultivation of neural stem cells is based on neurospheral assay requires exposure of single cell suspension containing neural stem cells to chemically- defined medium enriched for mitogenic factors. We isolated neural stem cells from the embryonic forebrain (ED 8.5-3.5) and cultured them as floating cells in serum -free DMEM/Ham s F medium supplemented with 0 ng/ml bfgf and 0 ng/ml EGF and N and B7 supplements. Pluripotent cells, e.g. induced pluripotent stem (ips) cells have to be first differentiated via directed differentiation or embryoid body formation using a floating protocol. Specimens were harvested at different cultivation times, examined at phase contrast and processed for histology, immunohistochemistry and RT -PCR. As the inner structure of the neurospheres does not correspond to embryonic development such assay is more suitable for maintenance and expansion of neural stem cells, for analyses of proliferation capacity and its dependence on stem cell specification. For estimation of neuronal vs. glial differentiation, neurospheres must be exposed to different culture conditions that allow cell adhesion and cultivation medium supplemented with 0% fetal calf serum. Embryoid body formation more closely mimics natural developmental processes and as such neural stem cells show more complex organisation resembling arrangement of neuroepithelial cells in the developing neural tube. In -day old embryoid bodies, neural stem cells are arranged radially like rosettes of pseudostratified columnar epithelium surrounding the pseudoventricular lumen and exhibit features of polarized neuroepithelium. Rarely more complex structures like optic cup retina can be found. The presence of neural JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 43

stem cells was identified according to expression of PAX-6 (regulator in neurogenesis), MSI- (control of self -renewal and differentiation and intermediate filament nestin. Proneurogenic activity was verified immunohistochemically with identification of neural markers including nestin, vimentin, beta -III tubulin, MAP- and GFAP. Both in vitro systems for culturing neural stem cells and generation neuronal and glial cells have their advantages. Neurosphere assay is suitable for maintenance and expansion of neural stem cells, for analyses of proliferation capacity and its dependence on stem cell specification. Due to their more complex 3D arrangement formation of embryoid bodies from pluripotent cells is more suitable to study neural tube development, model neural tube disorders and allows isolating early not specified neural stem cells, which can be further expanded as neurospheres. Moreover, a simultaneous usage of both systems extends the possibilities for in vitro study of neurogenesis. This work was supported by GACR 7-05466S. 3) Imunohistochemické vyhodnocení mikrovaskulární denzity sledováním exprese protilátek Nestin a CD90 u kožních melanomů a melanocytárních névů Židlík V.,, Brychtová S. 3, Žiak D.,, Uvírová M., Šnajdrová B., Rulíšek P., Hurník P.,, Vážan P., Kubelková I., Onduššek R.,, Dvořáčková J., CGB laboratoř, a. s., Ostrava Fakultní nemocnice Ostrava, Ostrava 3 Ústav klinické a molekulární patologie, Lékařská fakulta Univerzity Palackého Olomouc Úvod: Angiogeneze je důležitý faktor ovlivňující progresi nádorového onemocnění. V iniciální fázi je růst nádoru umožněn difuzí kyslíku z okolních tkání. S rostoucí velikostí tumoru se zvyšují nároky na tvorbu vlastní kapilární sítě a proces neovaskularizace se tak stává důležitou součástí progrese nádoru. Cílem naší práce bylo vyhodocení mikrovaskulární denzity (MVD) v různých stadiích kožního melanomu ve srovnání s kontrolní skupinou kožních névů. Pro imunohistochemické hodnocení MVD jsme použili protilátku Nestin, protein ze skupiny intermediárních filament exprimovnaý kromě melanocytárních névů a melanomů také v neuroentodermálních kmenových a progenitorových buňkách. Druhou protilátkou je adhezní glykoprotien CD90 exprimovaný na aktivovaných endotelových buňkách v místě zánětu a nádorovém prostředí. Ve zdravých tkáních exprimován není. Materiál a metody: Vyšetřili jsme soubor 95 kožních melanomů a 5 melanocytárních névů. Melanomy byly rozděleny dle TNM klasifikace do čtyř skupin pt (n = 35 melanomů), pt (n = melanomů), pt3 (n = melanomů) a pt4 (n = 8 melanomů). Tkáňové řezy byly barveny v automatu VENTANA inkubací s primární monoklonální myší protilátkou Nestin (Millipore, klon 0C, ředění : 75, čas inkubace 0 min.) a primární monoklonální králičí protilátkou CD90 (Abcam, klon EPR333, ředění :00, čas inkubace 30 min.). Jako chromogen byl použit DAB (diaminobenzidin). Množství pozitivních cév jsme hodnotili na ploše mm v místě největšího zastoupení buněk (tzv. hot spot ) v centru (C) a na periferii (P) léze. Výsledky: Zaznamenali jsme signifikantní nárůst hodnot MVD u sledované exprese proteinů Nestin (p = 0,000) a CD90 (p = 0,000) mezi jednotlivými stadii melanomu ve srovnání se skupinou melanocytárních névů. Závěr: Zjištěné výsledky ukazují zvyšování MVD ve spojení se stupněm progrese tumoru s nejvyššími hodnotami u pokročilých stadií melanomu (pt3, pt4), kde je patrná pozitivní korelace mezi MVD a hloubkou invaze. Zajímavým zjištěním je u obou protilátek zvýšená exprese převážně na periferii tumoru, u CD90 taktéž v centru léze. Předpokládáme, že MVD právě v těchto místech podporuje invazivní a agresivní růst nádorových buněk. Hodnocení mikrovaskulární denzity tak může být významným negativním prognostickým faktorem. 44 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

4) Anticancer activities of brassinosteroids and their derivatives Oklešťková J., Rárová L., Steigerová J. 3, Strnad M. Department of Chemical Biology and Genetics, Centre of the Region Haná for Biotechnological and Agricultural Research, Institute of Experimental Botany ASCR & Palacky University, Olomouc Laboratory of Growth Regulators, Institute of Experimental Botany ASCR & Palacky University, Olomouc 3 Laboratory of Molecular Pathology, Department of Clinical and Molecular Pathology, Faculty of Medicine, Palacky University, Olomouc Polyhydroxylated sterol derivatives with close structural similarity to animal and insect steroid hormones, brassinosteroids (BRs), are plant growth regulators representing a group of newly -discovered agents with relatively wide -ranging effects in plants. The study of plant -derived compounds and their analogues with effect at the molecular level has become an important approach in the selection of new agents with antitumour activity in humans. Molecular and cellular effects of natural BRs and their derivatives were examined in different human cancer cell lines and in primary endothelial cells in vitro. BRs and analogues caused growth inhibition, cell cycle arrest and initiation of apoptosis in many different cancer cell lines and also inhibition of angiogenesis in vitro in human endothelial cells. These findings indicate a potential use of BRs in the prevention of metastasis development. Investigation of the mechanisms of action of BRs and derivatives in human cancer and endothelial cells using cellular and molecular techniques indicated the possible involvement of steroid receptors in BR action. However, BRs were shown not to bind directly to steroid receptors which demonstrate that BRs act via steroid receptor -independent pathway(s). Our results suggest that tested BRs and their analogues are promising leads for the development of a new generation of potential anticancer drugs. This work was supported by project of the Ministry of Education, Youth and Sports CR NPUI N. LO04. 5) The novel brassinosteroid analog BR4848 inhibits migration of human endothelial cells and also angiogenesis in vitro Rárová L., Sedlák D., Oklešťkova J. 3, Liebl J. 4, Zahler S. 4, Bartůněk P. 4, Kvasnica M. 3, Strnad M. 3 Department of Chemical Biology and Genetics, Centre of the Region Haná for Biotechnological and Agricultural Research, Faculty of Science, Palacky University, Olomouc CZ OPENSCREEN: National Infrastructure for Chemical Biology, Institute of Molecular Genetics Academy of Sciences of the Czech Republic, Praha 3 Laboratory of Growth Regulators, Institute of Experimental Botany ASCR & Palacky University, Olomouc 4 Department of Pharmacy, LMU Munich Center for Drug Research Pharmaceutical Biology, Munich, Germany Searching for new agents with antitumor or antiangiogenic activity in humans has become an important approach nowadays within plant- derived compounds with effect at the cellular or molecular level. The phytohormones, brassinosteroids (BRs), play an important role in hormone signalling and physiological response in the plant organism. Recently, cytotoxic effects of natural brassinosteroids and their synthetic analogs in human cancer cells derived from tumours and in primary endothelial cells in vitro were determined by our group. Synthetic brassinosteroid analog α,3α- dihydroxy-6-oxo-5α -androstan-7β -yl N-(tert- butoxycarbonyl)-d,l -valinate (BR4848) inhibited migration of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) after 0 h of treatment. Furthermore, the developed analog exhibited in vitro antiangiogenic activity in HUVECs. BR4848 reduced cell adhesion, migration, proliferation and tube formation of endothelial cells by inhibition of FAK, Erk /, CDK5, VEGFR, TNFα -stimulated production of inducer of endothelial cell migration and proliferation IL-6, and subsequently of angiopoietin- and Jagged. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 45

6) Diagnostika mutace T790M genu EGFR u pacientů s nemalobuněčným karcinomem plic (NSCLC) Bajerová M., Robešová B., Mazalová L., Skřičková J., Tomíšková M., Ježíšková I. Interní hematologická a onkologická klinika, FN Brno a LF MU Brno Klinika nemocí plicních a tuberkulózy, FN Brno a LF MU Brno Úvod: V cílené terapii pacientů s NSCLC se uplatňují EGFR tyrozinkinázové inhibitory (EGFR TKI). Komplikací spojenou s účinností první generace EGFR TKI je existence rezistence vůči léčbě. Tato je vztažena k určité skupině mutací genu EGFR, především k výskytu mutace T790M. Rezistence vůči první generaci EGFR TKI je v praxi řešena indikací vyšších generací EGFR TKI, jejichž účinnost byla prokázána i u EGFR T790M pozitivních pacientů. Přesná diagnostika mutací zodpovědných za rezistenci u NSCLC pacientů, především mutace T790M, je proto důležitým předpokladem pro nastavení vhodné léčebné strategie. Cíl: Cílem práce bylo zhodnotit frekvenci výskytu mutací spojovaných s rezistencí k terapii EGFR TKI u pacientů léčených ve FN Brno. Metody: Mutační status genu EGFR byl ve FN Brno v období mezi lety 0 a 08 vyšetřen u skupiny celkem 06 pacientů s NSCLC. Vyšetřována byla fixovaná nádorová tkáň (FFPE) nebo cytologické nátěry po histologické konfirmaci. DNA byla izolována pomocí DNA Sample Preparation Kit (Roche). Vlastní mutační analýza genu EGFR byla provedena pomocí Cobas EGFR mutation test (Roche) a EGFR XL StripAssay (ViennaLab). Výsledky: Z 06 vyšetřovaných pacientů s NSCLC byla mutace genu EGFR detekována u 3 pacientů (0,9 %). Mutace spojované s rezistencí vůči TKI tvořily 6, % (8/3) všech v době záchytu detekovaných mutací. Mutace T790M byla detekována u /8 (,6 % všech pacientů s mutací) a inzerce v exonu 0 u 6/8 (4,8 % všech pacientů s mutací). U 48/ 06 testovaných pacientů byly k dispozici párové vzorky ze záchytu i progrese onemocnění. U 8/48 (6,7 %) pacientů s párovými vzorky byla detekována mutace T790M, a to až v období progrese onemocnění. Výskyt mutace T790M byl ve případech spojen se společným (kumulativním) výskytem tří různých mutací (typů) v jednom vyšetřovaném materiálu. Závěr: Frekvence výskytu rezistentních mutací v testovaném souboru pacientů odpovídá publikovaným datům. Dle očekávání byl výskyt mutace T790M prokázán ve vzorcích z období progrese onemocnění, kde pravděpodobně došlo k rozvoji klonu s mutací až v souvislosti s léčbou EGFR TKI. Byly prokázány i raritní případy kumulativního výskytu více mutací genu EGFR. Přesná molekulárně genetická identifikace karcinomu plic významnou měrou přispívá k nastavení vhodné léčby u pacientů s NSCLC. Podpořeno MZ ČR RVO (FNBr, 6569705). 7) Nuclear RAD5 protein is associated with tumor infiltrating lymphocytes (TILs) and survival outcomes in non small cell lung cancer patients, treated with neoadjuvant chemo-/radiotherapy Gachechiladze M., Skarda J., Kolek V., Grygarkova I., Langovac K. 3, Vojta P. 4, Vbrkova J. 5, Hajduch M. 5, Kolar Z., Stahel R. 6, Weder W. 7, Rulle U. 8, Soltermann A. 5, Joerger M. 6 Department of Clinical and Molecular Pathology, Institute of Translational and Molecular Medicine, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc Department of Tuberculosis and Respiratory Diseases, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University and University Hospital, Olomouc 3 Department of Medical Biophysics, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University Olomouc 4 Laboratory of Genomics, Institute of Molecular and Translational Medicine Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University, Olomouc 46 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

5 Institute of Molecular and Translational Medicine, Faculty of Medicine and Dentistry, Palacky University and University Hospital in Olomouc, Olomouc 6 Clinic of Oncology, University Hospital, Zurich, Switzerland 7 Department of Thoracic Surgery, University Hospital, Zurich, Switzerland 8 Department of Pathology and Molecular Pathology, University Hospital, Zurich, Switzerland 9 Department of Medical Oncology and Hematology, Cantonal Hospital, Switzerland Background: The effect of DNA repair on the tumor microenvironment is not well studied. We aimed to analyse the relationship between the expression of nuclear RAD5 protein and tumor infiltrating lymphocytes (TILs) chemotherapy -naive versus chemotherapy -pretreated patients non small cell lung cancer (NSCLC). Material and Methods: The training set included 96 patients from the University Hospital Olomouc, Czech Republic, from which 0 patients were treated with platinum -based neoadjuvant chemotherapy. The validation set included 09 patients from the University Hospital, Zurich, Switzerland, from which 6 were treated with neoadjuvant platinum -based chemotherapy and/ or radiotherapy. TMA sections from training and validation sets were staind with antibodies against RAD5, CD8, CD68 and PD -L. TILs were assesed in matched H & E slides. Results: The loss of nuclear RAD5 protein was associated with increased number of TILs in patients treated with neoadjuvant chemo-/radiotherapy in both training (r = -0.388, p = 0.00) and validation (r = -0.9, p = 0.0) sets. In addition nuclear RAD5 positivity (Hscore > 0.) and decreased numbers of TILs (dichotomised for median) was associated with poor overall and disease free survivals (p < 0.05). Conclusions: The present results suggest low RAD5 expression to be a surrogate marker for a high tumor mutational burden in patients with NSCLC receiving neoadjuvant treatment. RAD5 expression should further be assessed as a potential biomarker for the treatment with PD-(L) targeting monocloncal antibodies. 8) Společné hodnocení procenta volného PSA a močových transkriptů přispívá ke zpřesnění indikace biopsie prostaty Hušková Z., Knillová J., Král M., Kolář Z., Bouchal J. Ústav klinické a molekulární patologie, Univerzita Palackého, Olomouc Urologická klinika, Fakultní nemocnice, Olomouc Východiska: Hlavní výhodou močových biomarkerů je jejich neinvazivní charakter a možnost detekce multifokálního karcinomu prostaty (CaP). V dřívější studii se nám podařilo optimalizovat a zavést do klinické praxe multiplexní stanovení PCA3, AMACR, TRPM8 a MSMB. Naším cílem bylo validovat tuto metodu na rozšířeném souboru pacientů a také otestovat další vybrané transkripty a klinické parametry. Soubor pacientů a metody: V hlavním souboru 55 mužů s PSA hladinami,5 0 ng/ml ( CaP, 43 BPH) jsme provedli vyšetření již dříve optimalizovaných močových onkomarkerů (PCA3, AMACR, TRPM8 a MSMB s normalizací na KLK3). Bylo také testováno pacientů s karcinomem prostaty s nižšími hladinami PSA a mužů s benigním nálezem na prostatě a vyššími hladinami PSA. V menším souboru (69 CaP a 77 BPH) jsme analyzovali také další vybrané transkripty (CD45, EpCAM, EZH, Ki67, PAG4, PSGR, RHOA, TBP). Vždy byla po masáži prostaty odebrána a centrifugována první porce moči a buněčný sediment byl stabilizován v lyzačním pufru. Následně byla provedena izolace RNA, reverzní transkripce a kvantitativní PCR pro vybrané transkripty. Výsledky byly statisticky zpracovány (včetně ROC analýzy a AUC; receiver operating characteristic, area under curve) s ohledem na klinicko -patologické parametry (procento volného PSA, zánět v benigní tkáni, Gleason skóre a stadium nádoru). JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 47

Výsledky: Ve skupině pacientů vyšetřovaných na čtyři optimalizované biomarkery bylo pozorováno, že PCA3, AMACR, TRPM8 a procento volného PSA rozlišují karcinom prostaty od benigní hyperplazie (AUC 0,59, 0,56, 0,60 a 0,66, resp.). Společné hodnocení těchto parametrů vykazovalo AUC 0,73 (senzitivita 69 % při specificitě 63 %). KLK3 silně koreloval s PCA3, AMACR, TRPM8 a MSMB (Rs > 0,7). U souboru vzorků analyzovaných na další vybrané markery se jako vhodnými transkripty pro rozlišení karcinomu od hyperplazie ukázaly být PCA3, TRPM8 a volného PSA (AUC 0,64, 0,6 a 0,66, resp.). KLK3 dále silně koreloval s PCA3, AMACR, TRPM8, MSMB a PSGR (Rs > 0,6) a CD45 silně korelovalo s transkripty EZH, RHOA a TBP (Rs > 0,7). Silná korelace byla pozorována také mezi RHOA a PAG4 (Rs > 0,8). Závěr: Společné hodnocení procenta volného PSA a močových markerů PCA3, AMACR a TRPM8 přispívá ke zpřesnění indikace biopsie prostaty. 9) Vliv epigenetických modulátorů na expresi genů CDKNB (p5) a PDLIM4 (RIL) u buněčné linie RPMI 86 odvozené od mnohočetného myelomu Lužná P., Janovská L., Kolář Z., Smešný Trtková K. Ústav klinické a molekulární patologie, Lékařská fakulta Univerzity Palackého a Fakultní nemocnice Olomouc Ústav mikrobiologie, Lékařská fakulta Univerzity Palackého a Fakultní nemocnice Olomouc Východiska: Látky, které ovlivňují epigenetický status genů, jsou v posledních letech intenzivně studovány, jelikož mají potenciál být využívány v léčbě nádorových onemocnění. U onkologicky nemocných pacientů dochází v jejich genomu k epigenetickým změnám, které mohou ovlivňovat patogenezi onemocnění. Látka s demetylačními účinky 5-aza- -deoxycytidine, komerčně známá pod názvem decitabine (DAC), je v hematoonkologii dokonce již využívána pro léčbu pacientů s myelodysplastickým syndromem. Studium demetylačního účinku látek ovlivňujících epigenetické mechanizmy může přispět k jejich potenciální aplikaci do léčebné praxe. Může se jednat o zcela nová léčiva, která jsou aktuálně ve fázi klinických testování (disulfiram v praxi prozatím využíván pouze pro léčbu alkoholismu, suberohydroxamic acid), nebo léčiva, která jsou již pro léčbu některých onkologických onemocnění využívána a mohla by být uplatněna při léčbě dalších typů onemocnění (viz zmíněný decitabine). Materiál a metody: Komerčně dostupná myelomová buněčná linie RPMI86 (CCL55) odvozená od pacienta s mnohočetným myelomem byla ovlivněna dvěma typy látek s demetylačními účinky: 3,75 µm a 5 µm DAC, 0, µm, µm a µm DSF a inhibitorem histonových deacetyláz 0 µm a 50 µm SBHA po dobu 48 hodin. Pro další analýzy byla provedena izolace nukleových kyselin (RNA i DNA) z ovlivněných buněk a buněk kontrolních (DMSO). Izolovaná RNA byla metodou reverzní transkripce přepsána do cdna a následně byla real -time PCR kvantifikována exprese genů p5 a RIL. U DNA po bisulfitové modifikaci byl metodou pyrosekvenování stanoven metylační status specifických úseků zmíněných genů. Výsledky: Analyzované úseky genu p5 nevykazují metylační změny u neovlivněných buněk myelomové linie RPMI86. Detekovali jsme metylační změny ve sledovaných úsecích genu RIL. Myelomové buňky po 48hodinovém ovlivnění DAC vykazují změnu metylačního stavu v promotorové oblasti tohoto genu. U buněk ovlivněných SBHA a DSF změna metylačního stavu nebyla detekována, ačkoliv došlo ke zvýšení exprese genu RIL. Závěr: Naše studie poukazuje na vliv epigenetických modulátorů, které mohou ovlivňovat expresi tumor -supresorových genů nebo genů účastnících se regulace buněčného cyklu. Práce byla podpořena studentským grantem LF_07_0. 48 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

0) Case report: Agresivní maligní tumor z malých modrých buněk když elektronová mikroskopie pomáhá Hurník P.,,3, Žiak D.,, Židlík V.,, Ondruššek R.,, Rulíšek P., Kubelková I. 4, Vážan P. 4, Szotkovská I.,3, Bielniková H.,3, Uvírová M.,3, Dvořáčková J.,,3 CGB Laboratoř, Ostrava Fakultní nemocnice Ostrava, Ústav patologie, Ostrava 3 Lékařská fakulta Ostravské univerzity, Ústav patologie, Ostrava 4 CGB Laboratoř, Zlín Úvod: V našem sdělení referujeme diagnosticky obtížný případ dvacetičtyřletého muže, u kterého byly při endoskopii horní části zažívacího traktu nalezeny v oblasti kardioezofageální junkce výrazně povrchově nekrotizované masy klinicky vyhlížejícího maligního tumoru. Z primárního endoskopického odběru byla patologem stanovena diagnóza maligního adenoneuroendokrinního karcinomu (MANEC), kdy pacient dále podstoupil parciální gastrektomii. Materiál a metodika: K prvnímu vyšetření byly zaslány mnohočetné malé částice z endoskopického odběru, ke druhému vyšetření pak resekát žaludku a distálního jícnu, kdy všechny vzorky byly standardně histologicky zpracovány (fixovány ve formalínu, zality do parafínu, krájeny na mikrotomu a barveny hematoxilinem -eosinem). K bližšímu určení tumoru bylo použito také imunohistochemické analýzy s výsledkem nejednoznačné exprese CD56, Synaptofyzinu, Chromograninu a negativitou v CK AE/AE3, CK7, CK5/6, CK0 a dalších jako například S00, AFP, CD7, CD99, EMA, CEA případně CDX. Byla dále provedena elektronová mikroskopie a cytogenetické vyšetření. Výsledky: První, diagnostický bioptický material z endoskopie byl zhodnocen jako MANEC v kombinaci nízce diferencovaného endokrinního karcinomu (NEC G3) a dobře diferencovaného adenokarcinomu. Definitivní diagnostický závěr z bioptického vyšetření resekátu však potvrdil pouze nízce diferencovaný neuroendokrinní karcinom bez invazivní komponenty adenokarcinomu. Ve žlázové složce kardiální sliznice byla zastižena pouze těžká dysplázie. Vzhledem k neshodě diagnostikujících patologů bylo dále provedeno cytogenetické vyšetření vylučující změny asociované s diagnózou PNET. Elektronovou mikroskopií pak byla potvrzena přítomnost neurosekrečních granul potrvzujících diagnózu NEC. Diskuze: Úkolem tohoto case reportu je upozornit čtenáře na diagnosticky velmi obtížný případ, kdy byly elektronová mikroskopie a cytogenetická analýza kvůli nejednoznačnému výsledku imunohistochemie a názorovému nesouladu hodnotících patologů klíčovými metodami vedoucími ke správné diagnóze. I přes intenzivní terapii pacient nicméně umírá 4 měsíců od prvního vyšetření. ) Využití speciálně vycvičených psů v diagnostice onkologických onemocnění Tavandzis S.,, Matulová P., Kaňa J., Roubec J. 3, Lipková A. 4 České centrum signálních zvířat, z.s., Kopřivnice Laboratoře Agel, a. s., Nový Jičín 3 Plicní oddělení Nemocnice Vítkovice, a. s., Ostrava 4 Gynekologická ambulance GPG Centrum, s. r. o., Ostrava Těkavé organické sloučeniny uvolňované z nádorových buněk do tělních tekutin lze kromě diagnostických přístrojů detekovat také pomocí kvalitně vycvičených signálních psů. Taková zvířata jsou již využívána k výzkumu v různých zemích Evropy i jinde ve světě s různou mírou úspěšnosti, co se týče senzitivity a specificity. Toto sdělení si klade za cíl seznámit posluchače se současným stavem poznání v tomto oboru a také s vlastními výsledky z výcviku, včetně prezentace krátkého videa. Budou shrnuty současné výsledky a poznatky především v oblasti diagnostiky nádorů vaječníků a plic, které bývají často rozpoznány v pokročilejších stadiích vývoje. Posluchači budou také seznámeni s problémy tohoto výzkumu. Primárním cílem projektu je připravit dostatečný počet zvířat tak, aby bylo možné zahájit výzkumnou fázi v oblasti časné diagnostiky onkologických onemocnění. JUNE 4 th 5 th, 08 / OLOMOUC / THE CZECH REPUBLIC 49

PODĚKOVÁNÍ / THANKS GENERÁLNÍ PARTNEŘI / GENERAL PARTNERS HLAVNÍ PARTNEŘI / MAIN PARTNERS PARTNEŘI / PARTNERS 50 PROGRAMME AND ABSTRACT BOOK

nanostring BIOMEDICA ČS, s.r.o. Sokolovská 00/94 86 00 Praha 8 Karlín T +40 83 933 605 F +40 83 93 507 office@bmgrp.cz www.bmgrp.cz

See more with the VENTANA MMR IHC Panel Now featuring the exclusive VENTANA BRAF V600E (VE) antibody The VENTANA MMR IHC Panel and benefits: Consists of 5 assays that identify patients at high risk of Lynch Syndrome Includes VENTANA BRAF V600E (VE) antibody Features OptiView DAB IHC Detection Kit Is supported by siginifcant performance data, including concordance to NGS Provides interpretation guidance on all 5 assays, including challenging cases US Class II IVD, CE marked Product Simplifies workflow using full automation and ready to use reagents with use that reflects current clinical practice guidelines Reduces unnecessary downstream testing by identifying sporadic CRC in MLH deficient cases Robust detection Confidence knowing developement and testing is in alignment with current clinical practice Provides pathologist training for both common and challenging cases Trust in knowing your MMR testing meets the highest standard of regulatory compliance Ordering code VENTANA MLH (M) Mouse Monoclonal Primary Antibody 0803366800 VENTANA MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody 0803367600 VENTANA MSH (G9-9) Mouse Monoclonal Primary Antibody 0803368400 VENTANA PMS (A6-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody 080336900 VENTANA BRAF V600E (VE) Mouse Monoclonal Primary Antibody 0803370600 More info: Roche s.r.o., Diagnostics Division, prague_marketing.propagace@roche.com, www.ventana.com