POROVNÁNÍ METOD STANOVENÍ INDIKÁTORVÝCH ORGANISMŮ V ČISTÍRENSKÝCH KALECH

Podobné dokumenty
JAK VYUŽÍT METODU COLILERT -18 A ENTEROLERT PRO STANOVENÍ INDIKÁTOROVÝCH ORGANISMŮ V ČISTÍRENSKÝCH KALECH

NOVINKY V MIKROBIOLOGII ODPADŮ

Státní zdravotní ústav Šrobárova 48, Praha 10

Součástí semináře bylo praktické procvičování účastníků ve vzorkování kalů pro stanovení mikrobiologických ukazatelů.

Mikrobiální kontaminace sedimentů. Dana Baudišová

Obecné zásady interpretace výsledků - mikrobiologie vody

Letem mikrobiologií kalů

LIMITY V MIKROBIOLOGII ODPADŮ LIMITY V MIKROBIOLOGII ODPADŮ

Mezilaboratorní porovnávání - Nové mikrobiologické metody k analýzám koupacích vod

ZKUŠENOSTI S OVĚŘOVÁNÍM ÚČINNOSTI HYGIENIZACE TECHNOLOGIÍ ZPRACOVÁVAJÍCÍCH BIOODPADY

Validace metody Colilert-18 pro testování kompostů a podobných matric na přítomnost Escherichia coli


HODNOCENÍ ÚČINNOSTI HYGIENIZACE BIOLOGICKY ROZLOŽITELNÝCH ODPADŮ

Validace metody Colilert-18 pro testování kompostů a podobných matric na přítomnost Escherichia coli

ABITEC, s.r.o. zkušební laboratoř Radiová 7, Praha 10

ČESKÁ TECHNICKÁ NORMA

Hodnocení vstupů a výstupů zařízení pro zpracování biologicky rozložitelnými odpady z kuchyní a stravoven

PT # V / 3 / 2011 MIKROBIOLOGICKÝ ROZBOR VODY PROGRAM ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI LABORATOŘÍ PRAHA, SRPEN 2011

STANOVENÍ KLOSTRIDIÍ VČISTÍRENSKÝCH KALECH POROVNÁNÍ METOD

VYBRANÉ PATOGENNÍ BAKTERIE V SEDIMENTECH. Dana Baudišová, Andrea Benáková

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Návrh vyhlášky o podmínkách použití upravených kalů na zemědělské půdě v kontextu se zákonem o hnojivech č. 156/1998 Sb.

Moderní metody stanovení mikroorganismů

Obsah. Zprávu vypracovali: RNDr. Jaroslav Šašek, Mgr. Petr Pumann, Ivana Jahnová, Alena Dvořáková

ČESKÁ TECHNICKÁ NORMA

Kalibrace analytických metod

Státní zdravotní ústav Šrobárova 48, Praha 10

MIKROBIOLOGICKÉ PARAMETRY PRO NAKLÁDÁNÍ S ODPADY ZE STRAVOVÁNÍ A KUCHYNÍ

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Analytické znaky laboratorní metody Interní kontrola kvality Externí kontrola kvality

Dana Baudišová. Novinky v mikrobiologii vody 2014

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti POSKYTOVATEL ZKOUŠENÍ ZPŮSOBILOSTI AKREDITOVANÝ ČIA

Úvod. Postup praktického testování

Evidenční list využití kalů v zemědělství za rok...

PT#V Mikrobiologický rozbor vody

Bakteriologická analýza potravin

MIKROBIOLOGIE ŠEDÝCH VOD

Aktualizované znění. 382/2001 Sb.

Baudišová D. Metody analýz koupacích vod v České republice

Kalibrace analytických metod. Miroslava Beňovská s využitím přednášky Dr. Breineka

ZKOUŠENÍ MALÝCH ČISTÍREN ODPADNÍCH VOD VE VÚV TGM, V.V.I

Ladislava Matějů Magdalena Zimová Státní zdravotní ústav Šrobárova 47, Praha 10

Chyby spektrometrických metod

Zkoušení malých čistíren odpadních vod ve VÚV TGM, v.v.i.

Číslo rozboru: Místo odběru: Obec Limit /nejistota +/- Fyzikální a chemické ukazatele:

VALIDACE METODY AEROBNÍ OXIDACE ODPADŮ. Svatopluk Krýsl

Vliv dešťových srážek na mikrobiologickou kvalitu koupacích vod

Acta hygienica, epidemiologica et microbiologica Číslo 1/2008

Legislativa vody. Pitná, teplá, rekreační, užitková, odpadní


Hodnocení výsledků PT/V/3/2019 a Novinky v mikrobiologii vody. RNDr. Dana Baudišová, Ph.D. Státní zdravotní ústav Praha

Mikrobiální kritéria pro použití kalů

P r a c o v n í n á v r h. VYHLÁŠKA ze dne 2013, o nákladech dodatečné kontroly. Předmět úpravy

Úvod do potravinářské legislativy Lekce 7-1: mikrobiologické požadavky na potraviny

VÝSLEDKY MEZILABORATORNÍHO ZKOUŠENÍ V KALECH Z ČIŠTĚNÍ ODPADNÍCH KOMUNÁLNÍCH VOD

Normy ČSN a ČSN ISO z oblasti aplikované statistiky (stav aktualizovaný k )

Laboratoř je způsobilá aktualizovat normy identifikující zkušební postupy. Laboratoř je způsobilá provádět samostatné vzorkování.

DETEKCE MIKROORGANISMŮ Srovnání s jinými mikrobiologickými metodami Praktické aplikace. Ladislav Čurda Ústav technologie mléka a tuků VŠCHT Praha

Validace sérologických testů výrobcem. Vidia spol. s r.o. Ing. František Konečný IV/2012

Protokol o zkoušce. : ALS Czech Republic, s.r.o. : Jan Dostál. : Zákaznický servis : Provozovna Dubá

Srovnávací praktické zkoušení upravených kalů mezi zúčastněnými laboratořemi sledovalo dílčí samostatné cíle:

Semestrální práce. 2. semestr

Protokol o zkoušce. : ALS Czech Republic, s.r.o. : Jan Dostál. : Zákaznický servis : Provozovna Dubá

Státní veterinární ústav Praha Zkušební laboratoř hygieny potravin a krmiv Sídlištní 136/24, Praha 6 Lysolaje

AGRITECH S C I E N C E, 1 1 KOMPOSTOVÁNÍ KALŮ Z ČISTÍREN ODPADNÍCH VOD

Optimalizace metody PCR pro její využití na vzorky KONTAMINOVANÝCH PITNÝCH VOD

Protokol o zkoušce. : ALS Czech Republic, s.r.o. : Jan Dostál. : Zákaznický servis : Provozovna Dubá

Mikrobiologické požadavky. Kamila Míková

Jméno a příjmení: Datum odevzdání protokolu:

Univerzita Pardubice Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie STATISTICKÉ ZPRACOVÁNÍ EXPERIMENTÁLNÍCH DAT

Úvod do potravinářské legislativy Lekce 7-1: mikrobiologické požadavky na potraviny

UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie Nám. Čs. Legií 565, Pardubice

12 Postupy vedoucí ke snižování environmentálních a zdravotních rizik při nakládání s biologicky rozložitelnými odpady

ČESKÁ TECHNICKÁ NORMA

Pravděpodobnost v závislosti na proměnné x je zde modelován pomocí logistického modelu. exp x. x x x. log 1

Od byla nabídka CCM rozšířena o 12 nových kontrolních. kultivačních médiích

Aplikace kalů z ČOV na zemědělskou půdu s ohledem zejména na obsah těžkých kovů v kalech

NAŘÍZENÍ KOMISE (EU) /... ze dne ,

Monitoring složek ŽP - instrumentální analytické metody

Protokol o zkoušce. : ALS Czech Republic, s.r.o. : Jan Dostál. : Zákaznický servis : Provozovna Dubá

Dana Baudišová. Novinky v mikrobiologii vody 2014

Fakulta chemicko technologická Katedra analytické chemie licenční studium Management systému jakosti Kalibrace a limity její přesnosti

Dana Baudišová. Doporučené metody ke stanovení E. coli a intestinálních enterokoků v povrchových vodách ke koupání v České republice

M. Laichmanová NOVINKY V NABÍDCE KONTROLNÍCH KMENŮ ČESKÉ SBÍRKY MIKROORGANISMŮ

ČESKÁ TECHNICKÁ NORMA

Protokol o zkoušce č /2016

Dana Baudišová. Mikrobiologický rozbor podle novely vyhlášky o pitné vodě

KALIBRACE. Definice kalibrace: mezinárodní metrologický slovník (VIM 3)

Univerzita Pardubice Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie

ZZ SČZL 4/2014. Zkouška rázem v ohybu metodou Charpy za okolní teploty. Ing. Jan Wozniak, CSc.

ČESKÁ TECHNICKÁ NORMA

Cíle práce. Výběr alternativních metod pro detekci:

přesnost (reprodukovatelnost) správnost (skutečná hodnota)? Skutečná hodnota použití různých metod

KRUHOVÝ TEST 4/2018/NIR

UPRAVENÉ KALY A JEJICH VYUŽITÍ V ZEMĚDĚLSTVÍ. Ing. Josef Svoboda, Ph.D. Odbor kontroly zemědělských vstupů ÚKZÚZ

Bakteriologická analýza potravin

MICROBIAL CONTAMINATION OF FRUIT TEAS

Předpoklad o normalitě rozdělení je zamítnut, protože hodnota testovacího kritéria χ exp je vyšší než tabulkový 2

257/2009 Sb. VYHLÁŠKA ze dne 5. srpna 2009

Transkript:

POROVNÁNÍ METOD STANOVENÍ INDIKÁTORVÝCH ORGANISMŮ V ČISTÍRENSKÝCH KALECH lmateju@szu.cz Vodárenská biologie 2009 Státní zdravotní ústav Šrobárova 47, Praha 10

Indikátorové organismy V členských zemích Evropského společenství vychází hodnocení mikrobiologické kontaminace čistírenských kalů pro využití v zemědělství z obecných požadavků směrnice Rady č. 86/278/EEC pro kaly kvalitativní parametry čistírenských kalů musí být určeny jednotlivými členskými zeměmi s tím, že musí postihovat snížení obsahu patogenních organismů a mikroorganismů na únosnou mez. Země Salmonella Ostatní kontaminace Francie 44-041 Itálie Dánsko SO/2000/49 Lucembursko 8 MPN na 10 g sušiny 1000 MPN na 1 g sušiny negativní nález enteroviry: 3 MPCN na 10 g sušiny vajíčka helminthů: 3 na 10 g sušiny fekální streptokoky < 100 na 1 g enterobakterie: 100 KTJ na 1 g negativní nález pro vajíčka helmintů Polsko negativní nález vajíčka parazitů 10 na 1kg sušiny (dle použití) Norsko negativní nález negativní nález pro vajíčka helmintů, obsah fekálních koliformních zárodků nižší než 2,5. 10 3 KTJ na 1gram sušiny Slovenská republika Česká republika Rakousko DolníRakousy, Salcbursko a Burgeland negativní v 50g negativní nález nález term. koliform. bakterie < 10 6 na 1g sušiny enterokoky < 10 6 na 1g sušiny term. koliform. bakterie < 10 3 na 1g sušiny enterokoky < 10 3 na 1g sušiny enterobakterie < 1000 na 1g sušiny negativní nález pro vajíčka parazitů

Porovnávané metody Salmonella Stanovení salmonel v kalech a bioodpadech (AHEM, ČR) CZ1 Salmonella Salmonella Salmonella Soils, sludges and treated biowastes Detection and enumeration of Salmonella spp. Part 1 : Membrane filtration method for quantitative resuscitation of sublethally stressed bacteria (to confirm efficacy of log reduction treatment procedures) Soils, sludges and treated biowastes Detection and enumeration of Salmonella spp. Part 2 : Liquid enrichment method in Selenite Cystine medium followed by enrichment in Rappaport Vassiliadis medium for semi quantitative Most Probable Number (MPN) determination Soils, sludges and treated biowastes Detection and enumeration of Salmonella spp. Part 3: Presence/absence method by liquid enrichment in peptone-novobiocin medium followed by Rappaport Vassiliadis medium EU1

Porovnávané metody E. coli Soils, sludges and treated bio-wastes Detection and enumeration of Escherichia coli Part 1: Membrane filtration method for quantification EU 2 E. coli Soils, sludges and treated bio-wastes Detection and enumeration of Escherichia coli Part 2: Miniaturised method (Most Probable Number) by inoculation in liquid medium EU3 E. coli Soils, sludges and treated bio-wastes Detection and enumeration of Escherichia coli Part 3: Macromethod (Most Probable Number) in liquid medium EU4 E.coli Stanovení termotolerantních koliformních bakterií a E.coli (AHEM, ČR) CZ2

Jednotná struktura postupu. Analýzy na reálných vzorcích se prováděly vždy v pěti opakováních z jednoho vzorku a bylo analyzováno 6 vzorků v 5ti opakováních pro salmonelu dvěma metodami a E. coli čtyřmi metodami. Pro všechny výše ověřované metody bylo provedeno ověření s 8 přídavky známých počtů KTJ (<10 KTJ, 19 KTJ, 38 KTJ, 10 2 KTJ, 10 3 KTJ, 10 4 KTJ, 10 5 KTJ a 10 6 KTJ ) v devíti opakováních. Vzhledem k časové náročnosti byly porovnávány v jednom časovém úseku metody CZ 1 a EU 1 CZ 2 a EU 2 a EU 3 a metody CZ 2 a EU 4 v jiném termínu.

Výsledky - salmonela na reálných vzorcích - analýza výsledků stanovení salmonel byla založena na logistické regresi bylo použito postupu podle normy ČSN EN ISO 17994: Kritéria pro zjištění ekvivalence dvou mikrobiologických metod přídavky - validace pro shodnost shodnost a opakovatelnost byly vyhodnocovány pomocí robustní lineární regrese podle Passinga a Babloka

Reálné vzorky Metody presence/absence (P/A) podle ČSN EN ISO 17994. Vyhodnocení metod P/A je založeno na Poissonově indexu disperze X 2. Hodnota toto indexu je dána vzorcem: Pokud je hodnota Poissonova indexu disperze X 2 4, jsou výsledky metod rozdílné. Pokud X 2 < 4, jsou výsledky metod bez rozdílu. n A je počet vzorků, kde je metoda A pozitivní a metoda B negativní, n B je počet vzorků, kde je metoda A negativní a metoda B pozitivní. počet vzorků, kde metodou CZ1 byl zjištěn pozitivní výsledek a metodou EU1 byl zjištěn negativní výsledek: na = 2 počet vzorků, kde metodou EU1 byl zjištěn pozitivní výsledek a metodou CZ1 byl zjištěn negativní výsledek výsledek: nb = 0 Poissonův index disperze = 2 a je menší než 4 (X2 < 4), z čehož vyplývá, že metody dávají výsledky bez rozdílu.

Reálné vzorky Logitová regrese, kontingenční tabulka a koeficientu asociace Metoda 2 Negativní Pozitivní Metoda 1 Negativní Pozitivní 13 3 2 54 Koeficient asociace má hodnotu 0.795 Hodnota Poissonova koeficientu disperze, spočítaná z této tabulky podle ČSN EN ISO 17994 je 0.2< 4 obě metody indikují přítomnost salmonel ve vzorku shodně.

Známé přídavky KTJ Metodou logitové regrese byla vyhodnocena závislost nálezu P/A Metoda CZ1 y = exp(2.58408+(5.09421)*x)/(1+exp(2.58408+(5.09421)*x)) Metoda EU1 y = exp(2.72886+(5.02928)*x)/(1+exp(2.72886+(5.02928)*x)) 1 Metoda CZ 2 Metoda EU 2 0 0.01 0.1 1 10 100 1000 10000 Koncentrace salmonel v kalu [KTJ/g]

Výsledky E.coli reálné vzorky Statistické vyhodnocení metod stanovení pro E. coli (porovnávání vždy referenční metody CZ a jedné porovnávané EU) pro na reálné vzorky bylo použito postupu podle normy ČSN EN ISO 17994: Kritéria pro zjištění ekvivalence dvou mikrobiologických metod a metody lineární regrese. CZ 2 a EU 2 EU 3 a CZ 2 CZ 2 a EU 4 Parametr Průměr 340,49 Směrodatná odchylka 210,65 Rozšířená nejistota 94,20 Konfidenční interval: Dolní mez x L 246,29 Horní mez x H 434,69 Parametr Průměr 242,51 Směrodatná odchylka 236,42 Rozšířená nejistota 105,73 Konfidenční interval: Dolní mez xl 136,78 Horní mez xh 348,23 Parametr Průměr 45,93 Směrodatná odchylk a Rozšířená nejistot a Konfidenční interval: 233,95 93,58 Dolní mez x L -47,65 Horní mez x H 139,51

CZ 2 a EU2 CZ 2 a EU 3 Absolutní člen 95% interval spolehlivosti Směrnice 95% interval spolehlivosti CZ 2 / EU 2 0.44-0.43 3.72 0.62-0.02 0.86 CZ 2 / EU 3 1.92-0.61 5.86 0.40 0.33 0.98 CZ 2 / EU 4-0.21-47.56 0.67 1.04 0.45 21.78 CZ 2 a EU 4

Výsledky E.coli - přídavky Opakovatelnost a shodnost Metoda Shodnost Shodnost Metoda Opakovateln ost Opakovateln ost CZ 2 0.0406 0.0708 CZ 2 0.1136 0.1983 EU 2 0.1945 EU 2 0.5446 EU 3 0.4957 EU 3 1.3878 EU 4 0.3301 EU 4 0.9242

Výsledky E.coli - přídavky Porovnání lineární regresí. EU 1 EU 2 EU 3 EU 4

Výsledky E.coli - přídavky Porovnání lineární regresí Metod a Absolutní člen 95% interval spolehli vosti Směrnice 95% interval spolehli vosti CZ 2 EU 2 EU 3 EU 4-0.63-1.33-0.06 1.08 0.92 1.25-0.48-0.79 0.24 0.95 0.82 1.15-0.71-1.49 0.53 1.07 0.71 1.26-0.13-0.92 0.58 1.01 0.81 1.29 nejlepší charakteristiku má metoda EU 4, přestože vykazuje mírné stejnoměrné podceňování výsledků z grafického zpracování, je zřejmé, že metoda CZ 2 podhodnocuje výsledky (shoda s vyhodnocením porovnání metod na reálných vzorcích) chyba se mění v rozsahu hodnot, směrnice přímky není 1, u nižších hodnot metoda podhodnocuje, u vyšších se k reálným hodnotám přibližuje. metoda EU 2 podhodnocuje nejvíce, ale stejně v celém rozsahu koncentrací přídavku EU 3 podhodnocuje také ve vyšších koncentracích víc než metoda CZ 2.

Závěr Vybrané metody budou dále ověřovány ještě v mezilaboratorním porovnání v dalších letech řešení. Z ověřovaných metod lze jako nejméně vhodnou, na základě získaného souboru dat, považovat metodu EU 3 miniaturizovaná destičková metoda. Metody pro salmonelu vykazovaly naprostou shodu a je možné již na základě tohoto souboru dat doporučit obě k další validaci. Mikrobi jsou potvory, hlavně tehdy, když se mají najít