Diagnostická účinnost měření mědi v biologických materiálech u Wilsonovy choroby M.Holečková 1, M.Michajlíková 1, B.Friedecký 1, P.Dědek 2 ÚKBD 1, Dětská klinika 2, Fakultní nemocnice, Hradec Králové Sympozium FONS, Pardubice, 23.-25.9.2012
Metabolismus mědi Absorpce Cu v tenkém střevě ve formě vazby na metalothionein, kompetice se zinkem Cu vazaná na albumin a transkuprein je transportována krví, vychytávána hepatocyty V játrech se měď zabuduje do metalothioneinu a ceruloplasminu CPL (90%), Cu vázaná na CPL je transportována krví do cílových tkání Exkrece Cu stolicí, močí, žlučí
Význam mědi v organismu součástí řady enzymů (aminooxidázy, cytochrom-c-oxidázy, Cu,Zn-SOD) antioxidační působení spolu s Fe nezbytná pro syntézu hemoglobinu, kolagenu součást faktoru V při srážení krve
Wilsonova choroba (WD) genetické autozomálně recesivní onemocnění způsobené poruchou metabolismu mědi (mutace genu ATP 7B) kumulace Cu nejprve v játrech, později v rohovce a nakonec v bazálních gangliích CNS bez terapie je fatální v časných fázích vývoje je účinně léčitelná prevalence 1 : 30 000
Klinický obraz Wilsonovy choroby Asymptomatická forma <10 let zvýšené hodnoty jaterních enzymů Hepatální forma > 10 let obraz akutní nebo chronické hepatitidy až jaterní cirhózy, fulminantní průběh Neurologická forma > 18 let anatomické změny v CNS postiženy somatosenzorické funkce - tremor, dyskoordinace - písmo, oblékání Oftalmologie - Kayser-Fleischerův prstenec
Terapie Wilsonovy choroby Dieta, léky cílem je odstranění nahromaděné Cu v organismu, snížení její toxicity Penicilamin chelační látka, tvorba komplex s Cu v postižených orgánech, vylučován močí, rychlý nástup účinku indukuce tvorby metalothioneinu v játrech, váže Cu do netoxické formy Zn - indukce tvorby metalothioneinu v buňkách sliznice GIT, blokuje resorpci Cu střevní sliznicí a zvyšuje tak vyloučení Cu stolicí - indukce tvorby metalothioneinu v játrech Transplantace jater u fulminantních stádií
Diagnostika Wilsonovy choroby jaterní enzymy Cu a ceruloplasminu v séru Cu v moči test s použitím penicilaminu, kdy po jeho p.o. podání dojde k výraznému zvýšení vylučování Cu močí Cu v jaterní tkáni (z jaterní biopsie) histologické a elektromikroskopické vyšetření jaterní tkáně genetické vyšetření (potvrzení mutace genu ATP 7B)
Metodika CPL imunoturbidimetrické stanovení, Modular, Roche Cu AAS DUO 280Z+240FS, Varian - plamenová technika (sérum) - elektrotermická technika Zeemanova korekce pozadí (moč, jaterní biopsie) Statistické hodnocení MedCalc, Belgie
Spolehlivost měření Cu Externí hodnocení kvality SEKK RfB (Referenzinstitut für Bioanalytik, Bonn) Vnitřní kontrola kvality kontrolní materiály: Bio-Rad Serum (FAAS) Bio-Rad Urine (ETAAS) CRM 185 Bovine Liver (ETAAS) Období 1 rok: 40 stanovení CV 7-11% BIAS do 8%
Soubor pacientů 100 pacientů s diagnózou Wilsonovy choroby získaných z 5 krajů ČR Brno, Olomouc, Ostrava, Plzeň, HK (průměrný věk 13,3 let ± 5,1) 131 pacientů s hepatopatiemi jiné etiologie (průměrný věk 13,8 let ± 3,8 ) porovnali jsme výsledky obou souborů a diagnostickou účinnost laboratorních testů jsme ověřili ROC analýzou
Výsledky Analyt Počet měření Hepatopatie S CPL 100 0,26 ± 0,08 g/l S Cu 99 17,6 ± 5,43 umol/l U Cu baz 92 0,5 ± 0,55 umol/24 U Cu baz bez fulminantních U Cu PNCA 88 0,5 ± 0,55 umol/24 44 5,2 ± 2,93 umol/24 Cu liver 74 54,7 ± 45,9 ug/g s.t. Průměr ± SD Wilson 0,15 ± 0,09 g/l 11,2 ± 6,07 umol/l 11,4 ± 53,47 umol/24 2,3 ± 1,4 umol/24 16,3 ± 11,18 umol/24 860,5 ± 463,5 ug/g s.t. P < 0,0001 < 0,0001 0,0523 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001
Výsledky ROC analýza Analyte Cut-off optim. Cu liver 261,25 ug/g s.t. U Cu baz 0,75 umol/24 S CPL 0,2 g/l S Cu 13,8 umol/l U Cu PNCA 9,25 umol/24 Senzitivity % Specificity % Plocha pod ROC +PV -PV 98,6 99,1 0,998 98,6 99,1 95,7 85,2 0,956 83,8 96,1 83,0 77,6 0,863 76,1 84,1 82,8 77,0 0,839 78,1 81,9 70,6 93,2 0,837 94,1 67,2
Výsledky - ROC analýza 100 80 Sensitivity 60 40 Bio Cu U_Cu_bazal S CPL S Cu U_Cu_PNCA 20 0 0 20 40 60 80 100 100-Specificity
Diagnostický postup při podezření na Wilsonovu chorobu ve FN HK 1.krok bazální odpad Cu v moči /24 hod 2.krok stanovení obsahu Cu v jaterní biopsii histologie, elektronová mikroskopie penicilaminový test nepřináší další výhody genetické vyšetření potvrzení diagnózy, rodinný screening (negativní vyšetření nevylučuje diagnózu WN)
Závěr plocha pod křivkou ROC, která kvantifikuje klinickou efektivitu testu, byla největší u stanovení Cu v jaterní tkáni stanovení Cu v jaterní tkáni lze považovat společně s genetickými metodami za diagnostický zlatý standard biochemická laboratoř tak přístrojově, metodicky i personálně významně přispívá ke správné diagnostice Wilsonovy choroby a její úspěšné léčbě
Děkuji za pozornost http://ukbd.fnhk.cz/