ÚSTAV FYZIKÁLNÍ BIOLOGIE JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH ZPRÁVA O UKONČENÍ PROJEKTU Projekt Název projektu: Optimalizace výtěru a hormonálně řízené ovulace jikernaček candáta obecného (Sander lucioperca, L.) Rozbor řešení projektu Candát obecný (Sander lucioperca L.) patří v celé řadě evropských zemí (např. Francie, Německo, Polsko, Švýcarsko, Česko) z hlediska chutnosti masa a sportovního rybolovu mezi nejcennější a nejvyhledávanější druhy ryb. V Evropě je ročně vyprodukováno 11 358 tun candáta odloveného z volných vod (především jezera) a 347 tun z akvakultury (FAO, 2007). Bohužel jeho produkce v posledních letech z jezer trvale klesá (Ruuhijärvi 1995). Za posledních dvacet let klesla celková produkce z volných vod o více než 6000 tun (FAO, 2007). Proto se předpokládá, že v následujících letech bude tržní produkce candáta získávána z větší části intenzivní akvakulturou, čili kontrolovanou reprodukcí a odchovem v intenzivních podmínkách (Kestemont a Dabrowski 1996; Fontaine 2009). U nás na tuzemském trhu chybí candát buď úplně, nebo je jeho cena tak vysoká, že si ho běžný spotřebitel prostě nemůže dovolit. Také úlovky ze sportovních revírů se rapidně snižují (Brožová, 2005). Částečně je to způsobeno tím, že kontrolovaná reprodukce candáta obecného je oproti kaprovi v České republice málo známá nebo špatně prováděná, a proto se v provozních podmínkách řízená reprodukce mnohdy nepovede vůbec nebo jen s nízkou úspěšností nebo se neprovádí (Kříž, vlastní sdělení). Cílem projektu bylo najít optimální dávku GnRH ([D-Ala 6 ]GnRHProNhet) a HCG (human chorionic gonadotropin) u hormonálně stimulovaných jikernaček, zjistit dobu latence, synchronizaci a porovnat poloumělý a umělý výtěr, aby se zvýšila produkce larev. Použitá literatura: Brožová M., 2005. Ryby situační a výhledová zpráva. MZe ČR, 43s. FAO, 2007. FAO Fisheries Department, Fishery Information, Data and statistics Unit., www.fao.org. Fontaine P., 2009. Development of European inland fish culture and domestication of new species. Cahiers Agricultures 18, 144-147. Kestemont P., Dabrowski K., 1996. Recent advances in the aquaculture of Percid fish. Journal of Applied Ichtyology 12, 137-200.
Ruuhijiirvi J. and Hyviirinen P.,1996. The status of pike-perch culture in Finland. Journal of Applied Ichthyology 12, 185-188. 1. Průběh řešení projektu: 1.1. Stanovení optimální dávky GnRH (aplikované v českém preparátu Supergestran) a hcg (aplikované v holandském preparátu Chorulon) a porovnání parametrů řízené reprodukce v rámci umělého výtěru candáta obecného (Sander lucioperca, L.). V experimentu byly využity 3-4 leté generační ryby candáta obecného s průměrnou hmotností 1230g ± 340g, umístěné v 800 litrových průtočných nádržích v experimentálně rybochovném objektu Fakulty rybářství a ochrany vod. Jikernačky byly označeny čipy a rozděleny do 11 experimentálních skupin (po 7 ks) a následně byly injikovány s hcg: 1.- 250 IU.kg -1, 2.- 500 IU.kg -1, 3. - 750 IU.kg -1, 4. - 1000 IU.kg -1 a s Supergestran: 5. 1 µg.kg -1, 6. - 2,5 µg.kg -1, 7. 5 µg.kg -1, 8. 10 µg.kg -1, 9. 25 µg.kg -1, 10. - 50 µg.kg -1. Ve všech skupinách byla použita jednorázová dávka, která byla aplikována intramasculárně. Kontrolní skupina byla injikována s 0,9 % NaCl, 0,9 cm 3.kg -1. Veškeré úkony s generačními rybami byly prováděny v anestezii hřebíčkového oleje o dávce 0.03 ml.l -1 (Dr. Kulich Ltd.) a délce expozice 10 min. Po injikaci byly vpichy ošetřeny roztokem manganistanu draselného. Následně byly ryby nasazeny do nádržích (700 l, t = 15 C ± 0.5 C, nasycení kyslíkem 80.4 ± 3.1 %) Dva dny po injikaci byly ryby každé dvě hodiny kontrolovány. Ovulující jikernačky byly přeneseny do anestezie a provedl se umělý výtěr. Poté tři malé vzorky jiker byly odebrány pro stanovení absolutní a relativní plodnosti a líhnivosti jiker. Také se provedlo u jednotlivých skupin měření jiker pomocí Quick PHOTO CAMERA 2.2 software (Olympus, Hamburg). 1.2. Porovnání produkce larev u umělého a poloumělého výtěru (tradiční metoda v ČR) u candáta obecného (Sander lucioperca, L.) V experimentu byly využity 3-4 leté generační ryby candáta obecného s průměrnou hmotností 1231 ± 290g. Generační ryby byly označeny značkami a rozděleny do dvou skupin a injikovány jednorázovou dávkou 500 IU HCG (viz. Metoda 1.1.). U první skupiny se provedl umělý výtěr (viz. metoda 1.1.). Druhá skupina se vytírala polouměle: do jednotlivé nádrže se nasadil jeden pár ryb a vložila se sem vytírací podložka hnízdo. Poté se hnízdo pětkrát denně kontrolovalo. Při výskytu jiker se přeneslo do připravených uhelonových klecích recirkulačního systému, kde se následně po vylíhnutí spočítala produkce larev. Veškerá data byla vyhodnocena pomocí statistického softwaru STATISTICA program (verze 8.0 pro Windows, StatSoft). Pro hodnocení rozdílu mezi sledovanými skupinami a kontrolní skupinou byla použita analýza variace (ANOVA) Tukeyův test. 2. Dosažené výsledky: 1. Stanovení optimální dávky GnRH (aplikované v českém preparátu Supergestran) a hcg (aplikované v holandském preparátu Chorulon) a porovnání parametrů řízené reprodukce v rámci umělého výtěru candáta obecného (Sander lucioperca, L.). U hcg bylo dosaženo 88 ± 12 % ovulujících jikernaček a u Supergestranu bylo dosaženo 80, 8 ± 10,9 %. Velikost jiker byla u hcg 0,95 ± 0,06 mm a u Supergestranu 0.98 ± 0.06 mm. Tyto parametry nebyly statisticky rozdílné (P < 0.05). Signifikantně rozdílná byla líhnivost
jiker, která byla u hcg 73.6 ± 14.4 % a u Supergestranu 50.6 ± 17.7 %. Z naší studie vyplývá, že jednorázová injikace může být úspěšně použita pro hormonální stimulaci jikernaček candáta obecného. Z tabulky 1. a 2. je patrné, že nejlepších výsledků bylo dosaženo u hcg (500 IU, 750 IU), ale také velice dobrých výsledků se dosáhlo u českého preparátu Supergestran o dávce 25 µg.kg -1, který je cenově výhodnější a běžně v České Republice na trhu dostupný. Tab 1. Ovulace, doba latence a líhnivost u candáta obecného (Sander lucioperca) ošetřeného jednorázovou dávkou chorulonem a Supergestranem Skupina (n=7) Ovulace (%) Doba latence (h) Líhnivost (%) hcg 250 IU 71 84.98 ± 9.89 70.9 bc ± 4.1 hcg 500 IU 100 78.05 ± 6.93 84.2 c ± 6.2 hcg 750 IU 100 78.59 ± 7.48 86.8 c ± 3.8 hcg 1000 IU 83 88.0 ± 12.05 52.5 b ± 4.5 mgnrha 1 µg.kg -1 86 89.29 ± 11.73 52.3 b ± 5.5 mgnrha 2.5 µg.kg -1 71 84.42 ± 11.46 65.5 b ± 2.5 mgnrha 5 µg.kg -1 71 83.90 ± 21.64 51.1 b ± 3.6 mgnrha 10 µg.kg -1 71 79.4 ± 9.24 52.2 b ± 4.5 mgnrha 25 µg.kg -1 100 83.0 ± 9.13 60.5 b ± 6.4 mgnrha 50 µg.kg -1 86 86.46 ± 27.67 22.10 a ± 7.2 control - - - Tab 2. Relativní hmotnost vytřených jiker (RHVJ), relativní plodnost, absolutní plodnost a velikost jiker candáta obecného (Sander lucioperca) ošetřeného jednorázovou dávkou chorulonem a Supergestranem Skupina RHVJ Relativní plodnost Absolutní plodnost Velikost jiker (%) (počet jiker 10 3 / kg) (počet jiker 10 3 ) (mm.10-1 ) hcg 250 IU 8.08 a ± 1.3 88.7 a ± 18 180.7 a ± 99 10.10 a ± 0.6 hcg 500 IU 7.00 a ± 3.0 101.3 a ± 23 189.2 a ± 64 9.71 a ± 0.5 hcg 750 IU 9.21 a ± 5.3 116.7 a ± 58 181.6 a ± 89 9.82 a ± 0.5 hcg 1000 IU 6.51 a ± 2.6 106.1 a ± 45 168.8 a ± 50 9.46 a ± 0.5 mgnrha 1 µg.kg -1 9.26 a ± 2.8 120.1 a ± 64 208.3 a ± 86 9.28 a ± 0.5 mgnrha 2.5 µg.kg -1 10.89 a ± 1.8 88.0 a ± 82 124.5 a ± 73 9.49 a ± 0.4 mgnrha 5 µg.kg -1 9.52 a ± 6.2 133.9 a ± 60 175.0 a ± 78 10.12 a ± 0.6
mgnrha 10 µg.kg -1 7.93 a ± 2.5 142.3 a ± 79 168.7 a ± 86 9.78 a ± 0.2 mgnrha 25 µg.kg -1 7.58 a ± 3.9 144.6 a ± 82 196.0 a ± 80 9.20 a ± 0.5 mgnrha 50 µg.kg -1 5.22 a ± 3.5 127.6 a ± 67 164.6 a ± 82.6 9.17 a ± 0.1 control n.d. n.d. n.d. n.d. 2. Porovnání produkce larev u umělého a poloumělého výtěru (tradiční metoda v ČR) u candáta obecného (Sander lucioperca, L.) U umělého výtěru bylo dosaženo 87,5 % ovulujících jikernaček s čehož 37,5% jikernaček ovulovalo samovolně a 12,5% neovulovalo. Oproti tomu u poloumělého bylo dosaženo 100% ovulujících jikernaček a 0% samovolně ovulujících či neovulujících jikernaček. Produkce larev u poloumělého a umělého výtěru candáta obecného byla signifikantně rozdílná (P < 0.05) a je znázorněna v grafu č 1. Graf č. 1 Produkce larev u poloumělého a umělého výtěru candáta obecného (Sander lucioperca) 3. Využitelnost dosažených výsledků a navazující práce: Tato studie byla zaměřena na optimalizaci řízené reprodukce candáta obecného (Sander lucioperca). Námi vykonané experimenty přinesly velmi důležité poznatky z hlediska praktické aplikace hormonálních preparátů (přesná specifikace účinné dávky). Lze tedy říci, že pro candáta obecného je velice důležitá hormonální indukce (zlepšení ovulace a synchronizace výtěru). U porovnání poloumělého a umělého výtěru je z hlediska ovulace optimálnější poloumělý výtěr (zamezení samovolné ovulace), ale z hlediska produkce larev je výhodnější výtěr umělý. Z našich výsledků vyplývá, že je pro tento okounovitý druh nejvhodnější kombinace poloumělého a umělého výtěru s použitím hormonálního preparátu. Tyto výsledky byly přijaty ve vědeckém časopise Aquaculture International - Křisťan, J., Alavi, S.M.H., Stejskal, V., Policar, T. 2011. Hormonal induction of ovulation in pikeperch (Sander lucioperca L.) using human chorionic gonadotropin (hcg) and mammalian GnRH without dopamine inhibitor
Výsledky byly také prezentovány na mezinárodní konferenci - Diversification in Inland Finfish Aquaculture, Písek, 16.-18. května 2011, p. 105. 4. Stav čerpání finančních prostředků: Rozpis Poskytnuté prostředky v Kč Skutečně čerpáno v Kč 1. Náklady na pořízení drobného hmotného a nehmotného majetku 36 000 Kč 31 117 Kč 2. Náklady na publikace 2 000 Kč 0 Kč 3. Doplňkové náklady (režijní náklady) 0 Kč 0 Kč 4. Celkem 38 000 KČ 31 117 KČ Na zjištění přesné hmotnosti jikernaček před injikací byla zakoupená váha RADWAG 19 491 Kč (bez DPH) Pro zjištění obsahu rozpuštěného kyslíku byl zakoupen digitální oximetr GOX20 4 721,45 Kč (bez DPH) Pro dezinfekci byly zakoupeny chemikálie (manganistan draselný, formaldehyd) 316,84 Kč (bez DPH) Pro značkování a odběry vzorků bylo zakoupeno laboratorní náčiní (pinzety,...) 1529,02 Kč (bez DPH) Celkem 26 058,31 Kč Celkem s DPH 31 117,07 Kč