Metody diagnostiky rostlinných virů EKOTECH metody detekce rostlinných patogenů Prof. Ing. Josef Špak, DrSc. Ústav molekulární biologie rostlin, Biologické centrum AV ČR, v.v.i.
Význam diagnostiky rostlinných virů Rychlá a spolehlivá detekce viru umožňuje při znalosti jeho biologie a epidemiologie přijetí účinných ochranných opatření. Citlivá detekce je předpokladem včasného odhalení viru při produkci viruprostých osiv a sadby, jejichž použití je nejúčinnější ochranou proti virózám.
Diagnostika rostlinných virů
Metody diagnostiky fytovirů - vizuální hodnocení příznaků - biologické testy - elektronová mikroskopie - sérologické metody - molekulární metody
Vizuální hodnocení příznaků SVBV (Strawberry vein banding virus)
Vizuální hodnocení příznaků
Vizuální hodnocení příznaků
TURNIP MOSAIC VIRUS - TuMV Virus mozaiky vodnice charakteristika čs. a světových izolátů
CAULIFLOWER MOSAIC VIRUS - CaMV Virus žilkové mozaiky květáku příprava antiséra charakteristika čs. izolátů ŠPAK, J.: Ochrana rostlin 25: 177-181, 1989. ŠPAK, J.: Ochrana rostlin 25: 241-247, 1989.
TURNIP YELLOW MOSAIC VIRUS - TYMV Virus žluté mozaiky vodnice první nález v ČR příprava antiséra charakteristika čs. izolátů ŠPAK, J., POLÁK, Z.:Ochrana rostlin 21: 13-20, 1985
ERYSIMUM LATENT VIRUS - ErLV Latentní virus hulevníku první nález v ČR příprava antiséra charakteristika čs. izolátů
RADISH MOSAIC VIRUS - RaMV Virus mozaiky ředkvičky první nález v ČR příprava antiséra charakteristika čs. izolátů
STRAWBERRY VEIN BANDING VIRUS - SVBV Virus lemování žilek jahodníku první nález v ČR charakteristika čs. Izolátů částečná purifikace viru
RASPBERRY BUSHY DWARF VIRUS - RBDV Virus keříčkovité zakrslosti maliníku první nález v ČR důkaz S a RB (resistance breaking) kmene v ČR
Vizuální hodnocení příznaků + levné + rychlé - vyžaduje zkušené oko - málo citlivé (nezachytí latentní infekce)
Biologické testy (přenos virů na indikátorové rostliny) - mechanická inokulace - roubování - přenos vektory
Biologické testy - mechanická inokulace
Diferenční hostitelské rostliny Tabáky N. tabacum cv. Samsun Rajče L. esculentum Merlíky Chenopodium quinoa Bobovité rostliny- hrách, fazol Jednoděložné - obiloviny Pro udržování a přenos izolátů virů volíme taxonomicky příbuzné druhy rostlin Význam pufru pro stabilizaci viru při homogenizaci rostlinných pletiv
ARABIS MOSAIC VIRUS - ArMV Virus mozaiky huseníku příprava antiséra charakteristika čs. izolátů
STRAWBERRY LATENT RINGSPOT VIRUS - SLRSV Virus latentní kroužkovitosti jahodníku Primární příznaky na inokulovaných listech Přiznaky systémové infekce na vrcholových listech
Biologické testy - roubování
Biologické testy - roubování Converse, 1987
Biologické testy - přenos vektory Brevicoryne brassicae Myzus persicae
Biologické testy + univerzální (viry, viroidy, fytoplasmy) + citlivost - pracné - nákladné - náročné na čas, prostor a zkušenost
Elektronová mikroskopie
Elektronová mikroskopie Příprava preparátů - smáčecí metoda - ultratenké řezy
Elektronová mikroskopie Ca Caulimovirus Carlavirus
Elektronová mikroskopie
Elektronová mikroskopie
Směsná infekce řepky z Uzbekistánu ŠPAK, J., NOVIKOV, V.K.: Acta Virologica 38: 39-42, 1994.
Elektronová mikroskopie
Elektronová mikroskopie + rychlost + citlivost - nákladné vybavení - náročná příprava a hodnocení preparátů - lze zpracovat jen omezené množství vzorků
Sérologické metody reakce protilátek s bílkovinným Ca obalem viru
Sérologické metody - Dvojitá difúze v agaru - ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) - ISEM (Immuno Sorbent Electron Microscopy)
Test difúze v agaru RADISH MOSAIC VIRUS - RaMV ŠPAK, J., KUBELKOVÁ, D.: J. Phytopathology 148: 371-377, 2000.
ELISA - Imunoglobuliny G - IgG - IgG konjugované s enzymem - Alkalická fosfatáza - Křenová peroxidáza - Substrát 4 nitrofenyl fosfát
ELISA Imuno-enzymatické stanovení
ELISA Význam extrakčních pufrů
ELISA
Výrobci komerčních souprav pro diagnostiku rostlinných patogenů
ELISA + rychlost + citlivost + automatizace + komerční kity - náklady - přístroje (pipety, diag. soupravy spektrofotometr)
ISEM (Immuno Sorbent Electron Microscopy)