Cytogenetika telomera chromosom jádro centomera telomera buňka histony páry bazí dvoušroubovice DNA
Typy chromosomů
Karyotyp člověka 46 chromosomů 22 párů autosomů (1-22 od největšího po nejmenší) 1 pár gonosomů (X a Y) 7 skupin - dle velikosti a morfologie (A-G) 46,XX nebo 46,XY
Cytogenetické vyšetření Preimplantační - vyšetření embrya před implantací do těla matky (při umělém oplodnění) Prenatální vyšetření plodu Postnatální
Materiál pro cytogenetické vyšetření Periferní krev Fibroblasty z kožní biopsie Kostní dřeň Nádor Sekční materiál (v případě úmrtí pacienta)
Kultivace periferní krve Fytohemaglutinin vysoce imunogenní látka působí proliferaci lymfocytů kolcemid Vzorek krve Kultivace Hypotonizace Fixace
Barvení chromosomů Klasické barvení (Giemsovo barvivo)
G - pruhování 46,XX 46,XY
Základní morfologické skupiny chromozomů A B 4 5 C6 12 D13 15 E F G 19 20 21 22
Karyotyp člověka Skupina Chromosomy Tvar a velikost A 1 3 veliký metacentrický B 4 5 veliký submetacentrický C 6 12 (+X) stř. submetacentrický D 13 15 stř. akrocentrický E 16 18 malý submetacentrický F 19 20 malý metacentrický G 21, 22, Y malý akrocentický
velké metacentry malé metacentry velké akrocentry malé akrocentry zbytek - submetacentry
Každý G-pruh má své číslo Chromozom X s očíslovanými G-pruhy Syndrom fragilního X Xq27.3
Další metody barvení chromozomů R-pruhování reverse banding C-pruhování constitutive heterochromatin Ag-NOR nucleolar organizers (barvení stříbrem) Q-pruhování quinacrine (chinakrin)
Chromosomální aberace numerické (změny v počtu chromosomů) polyploidie - změna v počtu celých chromosomových sad triploidie tetraploidie aneuploidie - změna v počtu jednotlivých chromosomů monosomie trisomie strukturální (přestavby částí chromosomů) nebalancované balancované
Chromosomální aberace strukturální (přestavby částí chromosomů) nebalancované balancované
DELECE - del INTERSTICIÁLNÍ
DELECE TERMINÁLNÍ
RING CHROMOSOM
ISOCHROMOSOM
INVERZE paracentrická pericentrická
Inverze paracentrická Nosiči - snížená plodnost - riziko narození postiženého dítěte nízká
Inverze pericentrická Nosiči riziko narození postiženého dítěte 1-10% v závislosti na velikosti inverze
TRANSLOKACE RECIPROKÁ
TRANSLOKACE ROBERTSONOVA
Metoda FISH (fluoresceční in situ hybridizace)
FISH (fluorescenční in situ hybridizace ) kombinace cytogenetické a molekulární metody bez nutnosti izolace DNA pomocí značených DNA sond umožňuje vizualizaci úseků DNA v chromozomech, buňkách nebo tkáních přímo na mikroskopickém preparátu (= in situ) cíl DNA sondy - gen, celý chromozom či jeho část
Metoda FISH - spojení postupů klasické cytogenetiky a technologie molekulární genetiky Založena na schopnosti jednovláknové (denaturované) sondy DNA vázat se k cílové sekvenci (princip komplementarity) Použití pro vyšetření chromosomů v mitóze nebo v interfázi DNA sonda je předem označena některým fluorochromem (př. Texas Red, FITC, atd.) Je možné použít několik typů sond centromerické, lokus-specifické, malovací, konkrétní sondu volíme podle indikace vyšetření Centromerické sondy: tvořeny -satelitními sekvencemi repetitivní DNA přítomné v oblasti centromery rychlá detekce numerických aberací, zejména v nedělících se buňkách Lokus-specifické sondy: váží se specificky na vybrané místo (lokus) na chromosomu stanovení některých strukturálních změn (mikrodeleční syndromy, specifické translokace u některých malignit atp.)
Hybridizace cílová DNA denaturace hybridizace sonda
FISH
Délka sondy pro FISH cca 300 600 bp. pokud je cílový úsek delší, musí být sonda před použitím naštěpena. NE!
Mnohobarevná malovací sonda karyotyp nádor hyperdiploidní počet chromosomů + přestavby
Typy sond centromerická telomerická centromerická
Typy sond malovací 1, 4 a 8 X- a Y-centromerická lokus - specifická
Barvení chromosomů Mnohobarevné pruhování (M-BAND) nejnovější modifikace metody mnohobarevné FISH (M-FISH zpřesnění cytogenetické diagnostiky CA v jedné reakci analyzuje celý genom použitím mixu 24 rozdílných DNA sond každý chromosomový pár jinou barva tzv. parciálních malovacích sond specifické pro určitou oblast vyšetřovaného chromozomu 5 spektrálně odlišnými fluorochromy a jejich vzájemnou kombinací. G-pruhy FISH M-BAND parciální karyotyp: duplikace krátkého ramena chromosomu 9 výsledný obraz nasnímané jednotlivé fluorochromy intenzity jednotlivých fluorochromů ideogram chromosomu pseudo G-pruhy
Lokus specifické sondy vyšetření amplifikace onkogenu HER2/NEU Normální nález Amplifikace prokázána