A ÚVOD A-1 ÚVODNÍ SLOVO Laboratorní příručka Laboratoře Centra pracovního lékařství Pardubické krajské nemocnice, a.s. je dokument, kterým informujeme o našich službách. Tato příručka obsahuje pokyny k provedení správného odběru vzorků a podává Informace o skladování vzorků a manipulaci s nimi tak, aby nebyl ohrožen výsledek laboratorních vyšetření. Dodržování všech uvedených pokynů má zásadní význam pro spolehlivé vyšetření a tím i pro spokojenost klienta. Žadatelé o vyšetření mají v příručce základní informace o našich pracovních postupech, veškeré potřebné kontakty a v příloze průvodku pro laboratorní vyšetření. Laboratorní příručka je žadatelům o vyšetření dostupná na webových stránkách Pardubické krajské nemocnice, a.s. Laboratorní příručka je součástí řízené dokumentace Pardubické krajské nemocnice, a.s., je pravidelně aktualizována a doplňována. Laboratorní příručka je připravena v souladu s normou ČSN EN ISO 15189. A-2 OBSAH A ÚVOD A-1 Úvodní slovo 2 A-2 Obsah 2 B INFORMACE O LABORATOŘI B-1 Identifikace zařízení a důležité údaje 4 B-2 Základní informace o laboratoři 4 B-3 Zaměření laboratoře 5 B-4 Úroveň a stav akreditace pracoviště 5 B-5 Organizace laboratoře, její členění, vybavení a obsazení 5 B-6 Spektrum nabízených služeb 6 B-7 Popis nabízených služeb 6 C MANUÁL PRO ODBĚR PRIMÁRNÍCH VZORKŮ C-1 Základní informace 8 C-2 Požadavkové listy (žádanky) 8 C-3 Příprava pacienta pře vyšetřením 8 2/16
C-4 Identifikace pacienta na žádance a označení vzorků 9 C-5 Odběr a množství vzorku 9 C-6 Nezbytné operace se vzorkem, stabilita 9 C-7 Informace k dopravě vzorků 9 C-8 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky 10 D PREANALYTICKÉ PROCESY V LABORATOŘI D-1 Příjem žádanek a vzorků 10 D-2 Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí vadných primárních vzorků 11 D-3 Postupy při nesprávné identifikaci vzorku nebo žádanky 11 E VYDÁVÁNÍ VÝSLEDKŮ A KOMUNIKACE S LABORATOŘÍ E-1 Hlášení výsledků v kritických intervalech 12 E-2 Informace o formách vydávání výsledků 12 E-3 Intervaly od dodání vzorku k vydávání výsledku 12 E-4 Způsob řešení stížností 12 E-5 Konzultační činnost laboratoře 12 F POKYNY A INSTRUKCE F-1 Pokyny pro odběr žilní krve 13 F-2 Pokyny pro nakládání s odpady 13 PŘÍLOHY P-1 Průvodka pro cytogenetické vyšetření 14 P-2 Protokol cytogenetické analýzy lidských periferních lymfocytů 15 ODKAZY Literární a jiné informační zdroje 16 3/16
B INFORMACE O LABORATOŘI B-1 Identifikace zařízení a důležité údaje Název organizace Identifikační údaje IČO 27520536, DIČ CZ 27520536 Typ organizace Statutární zástupce organizace Akciová společnost MUDr. Tomáš Gottvald, člen představenstva a ředitel Ing. Petr Rudzan, místopředseda představenstva Adresa Kyjevská 44, 532 03 Pardubice Telefon 466 011 111 Fax 466 650 536 E-mail Webová stránka info@nemocnice-pardubice.cz www.nemocnice-pardubice.cz B-2 Základní informace o laboratoři Název laboratoře Identifikační údaje Předmět činnosti Laboratoř Centra pracovního lékařství IČP (Centrum pracovního lékařství) - 65001371 Laboratorní vyšetření v lékařské genetice: zhodnocení získaných aberací v periferní krvi Ředění vzorků látek z pracovišť k epikutánním testům Adresa Umístění laboratoře Primář oddělení Vrchní sestra Odborný pracovník, garant odbornosti 816 Telefony Kyjevská 44, 532 03 Pardubice Areál nemocnice, budova č. 13, 2. patro MUDr. Eichlerová Alexandra Kusínová Helena Mgr. Pivokonská Renata 46601 6301 primář oddělení 4/16
46601 6302 příjem Centrum pracovního lékařství 46601 6309 vrchní sestra 46601 6310 laboratoř E-mail alexandra.eichlerova@nemocnice-pardubice.cz renata.pivokonska@nemocnice-pardubice.cz B-3 Zaměření laboratoře Laboratoř Centra pracovního lékařství provádí cytogenetickou analýzu periferních lymfocytů (zhodnocení získaných aberací v periferní krvi). Metoda cytogenetické analýzy je celosvětově rozšířena a používá se jako biologický expoziční test a jako biomarker expozice genotoxickým látkám v pracovním i enviromentálním prostředí. V laboratoři jsou dále ředěny vzorky látek z pracovišť k epikutánním testům. B-4 Úroveň a stav akreditace pracoviště Laboratoř Centra pracovního lékařství je vedena v registru klinických laboratoří a splňuje základní technické a personální požadavky pro vstup do tohoto registru. B-5 Organizace laboratoře, její vybavení a obsazení Organizační členění Centra pracovního lékařství Ambulance Laboratoř Umístění laboratoře Laboratoř se nachází ve druhém patře budovy č. 13 Pardubické krajské nemocnice, a.s. (budova u hlavní vrátnice). Příjem vzorků je přímo v laboratoři, případně v příjmové místnosti Centra pracovního lékařství. Provozní doba Pouze jednosměnný provoz PO PÁ: 7.00 15.30 příjem, zpracování vzorků, hodnocení a vydávání výsledků 5/16
Přístrojové vybavení laboratoře Laboratoř Centra pracovního lékařství je vybavena všemi přístroji potřebnými ke kvalitní a spolehlivé analýze dle standardního operačního postupu. Tyto přístroje jsou v požadovaných termínech kontrolovány a kalibrovány. Záznamy o kontrolách jsou zaneseny do provozních deníků, které jsou k dispozici u pověřeného pracovníka laboratoře. Personální obsazení vysokoškolák-nelékař se specializací v oboru Vyšetřovací metody v lékařské genetice-klinická cytogenetika B-6 Spektrum nabízených služeb cytogenetická analýza periferních lymfocytů (CAPL, zhodnocení získaných aberací v periferní krvi) ředění vzorků látek z pracovišť na epikutánní testy B-7 Popis nabízených služeb CYTOGENETICKÁ ANALÝZA PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ PRINCIP A POPIS METODY Tento cytogenetický test in vitro je krátkodobý test pro detekci strukturálních a numerických aberací v kultivovaných savčích buňkách. Po krátkodobé (48 hodin) kultivaci ve vhodném médiu se na dělící se lymfocyty působí mitotickým jedem, např. kolchicinem, který zastavuje dělení buněk v metafázi. Následuje hypotonizace, fixace a nakapání získané suspenze na podložní sklíčka. Preparáty jsou obarveny vhodným barvivem a metafázické buňky analyzovány z hlediska chromozómových abnormalit. INDIKACE K VYŠETŘENÍ rizikové pracovní prostředí: nadměrné vystavení škodlivým fyzikálním nebo chemickým vlivům (působení genotoxických látek, profesní expozice) terapie potencionálními mutageny (cytostatika, ionizační záření, imunosupresiva) kontrolní vyšetření u podchycených případů 6/16
KONTROLA KVALITY Uskutečňuje se analýzou zakódovaných preparátů zhotovených Národní referenční laboratoří pro genetickou toxikologii, SZÚ Praha. ŘEDĚNÍ VZORKŮ LÁTEK NA EPIKUTÁNNÍ TESTY Odběr vzorků látek k epikutánním testům z pracovního prostředí testované osoby obvykle zajišťuje oddělení hygieny práce Krajské hygienické stanice. Tyto látky se odebírají na žádost Centra pracovního lékařství v případech, kdy je třeba přezkoumat podezření na nemoc z povolání. Před testováním je třeba vyhodnotit vlastnosti odebraných látek ve vztahu k jejich aplikaci na kůži a zajistit potřebné ředění, aby nedošlo k poškození kůže testované osoby. V naší laboratoři jsou látky pouze naředěny, vlastní testování probíhá na Kožním oddělení Pardubické krajské nemocnice, a.s. DEFINICE EPIKUTÁNNÍCH TESTŮ Epikutánní testy (ET) jsou základní vyšetřovací metodou v diagnostice kontaktní alergické dermatitidy. Provádí se tak, že se aplikuje podezřelá substance v alergologické koncentraci a v přesně definovaném vehikulu na klinicky zdravou kůži zad. TESTOVANÝ MATERIÁL Pokud je třeba aplikovat speciální test je nutno požadovanou látku odměřit nebo zvážit a naředit do příslušné koncentrace. Koncentrace alergenů je obvykle udávaná v procentech. Koncentrace pro jednotlivé speciální alergeny je udávaná v odborné literatuře věnující se kontaktní dermatitidě nebo katalozích firem distribuujících alergeny. 7/16
C MANUÁL PRO ODBĚR PRIMÁRNÍCH VZORKŮ C-1 Základní informace CYTOGENETICKÁ ANALÝZA PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ Cytogenetické vyšetření bude provedeno pouze po předchozí (nejčastěji telefonické) dohodě. Centrum pracovního lékařství může zajistit odběry venózní krve pro cytogenetické vyšetření. Odběry pro cytogenetické vyšetření jsou prováděny v pondělí a v úterý, následuje-li poté nezkrácený týden. Centrum pracovního lékařství používá uzavřený odběrový systém Vacuette, odběry se provádějí na odběrovém sálku oddělení CPL. Odběr a transport materiálu do laboratoře může zajistit žadatel sám, instrukce pro odběr a transport viz oddíly C-5,6,7 a F-1. Dodržení níže uvedených pokynů je jednou z podmínek pro správné zpracování biologického materiálu a je nutné pro správné stanovení a interpretaci výsledků laboratoří ŘEDĚNÍ VZORKŮ LÁTEK NA EPIKUTÁNNÍ TESTY Odběr látek z pracovního prostředí testované osoby a jejich transport do laboratoře zajišťuje Oddělení hygieny práce Krajské hygienické stanice. Odstavce C-2 až C-8 se tohoto vyšetření netýkají. C-2 Požadavkové listy (žádanky) Základním požadavkovým listem pro vyšetření v Laboratoři Centra pracovního lékařství je formulář: Průvodka pro cytogenetické vyšetření (viz příloha P-1) Požadované a povinně uváděné informace na požadavkovém listě žádance jsou: Příjmení a jméno klienta, jeho bydliště, rodné číslo a zdravotní pojišťovna Účel vyšetření Pracoviště klienta a riziko, kterému je v pracovním prostředí exponován a kolik let Další informace vyplňuje klient, informovaný o vlivu mimopracovních faktorů na výsledky vyšetření, sám C-3 Příprava pacienta pře vyšetřením Před odběrem žilní krve nejsou na pacienta kladeny žádné speciální požadavky. 8/16
C-4 Identifikace pacienta na žádance a označení vzorků Standardně je na vyšetření požadována jedna žádanka a jedna zkumavka s biologickým materiálem Žádanka musí obsahovat příjmení a jméno klienta, jeho bydliště, rodné číslo a zdravotní pojišťovnu, účel vyšetření, pracoviště klienta a riziko, kterému je v pracovním prostředí exponován a kolik let Vzorek biologického materiálu musí být označen štítkem, na kterém je uvedeno příjmení a jméno klienta, jeho rodné číslo a zdravotní pojišťovna C-5 Odběr a množství vzorku Do zkumavky Vacuette (zelený uzávěr LH, Lithium Heparin) sterilně odebrat 3-5 ml periferní krve. Pokyny pro odběr žilní krve viz oddíl F-1. C-6 nezbytné operace se vzorkem, stabilita Odebranou krev ve zkumavce ihned několikrát převrátit, aby nedošlo ke sražení. Zkumavku opatřit štítkem klienta, vyplnit průvodku pro cytogenetické vyšetření a předat Laboratoři Centra pracovního lékařství. Vzorek v žádném případě nemrazit! Při prodlení s dodáním lze uchovat vzorek v chladničce při teplotě 4-10C. vzorky periferní krve jsou buď zpracovány v den příjmu nebo maximálně do 72 hodin po odběru krve vzorky krve pro cytogenetickou analýzu nemohou být skladovány dlouhodobě, protože buňky ztrácejí růstový potenciál. Vzorek krve může být skladován pro opakované použití v chladničce až cca 5 dní až do ověření kvality preparátů z prvního vyšetření. C-7 Informace k dopravě vzorků pokud se krev transportuje z místa odběru do laboratoře, je třeba použít transportních chlazených tašek, kde je krev udržována při teplotě 4-10C s materiálem se nesmí během přepravy prudce manipulovat aby nedošlo k mechanickému poškození průvodky musí být umístěny v samostatném obalu, aby nemohlo dojít k jejich potřísnění, při náhodném vylití biologického materiálu 9/16
C-8 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky Obecné zásady strategie bezpečnosti práce s biologickými materiály jsou uvedeny ve vyhlášce č. 306/2012 Sb. MZ ČR, o podmínkách předcházení vzniku a šíření infekčních onemocnění a o hygienických požadavcích na provoz zdravotnických zařízení a ústavů. Na základě této vyhlášky byly stanoveny tyto zásady pro práci s biologickým materiálem: každý vzorek krve je nutné považovat za potenciálně infekční žádanky ani vnější strana zkumavky nesmí být kontaminovány biologickým materiálem, může to být důvodem k odmítnutí vzorku vzorky jsou přepravovány v uzavřených zkumavkách, které jsou vloženy do plastové nádoby tak, aby během přepravy vzorku do laboratoře nemohlo dojít k rozlití, potřísnění biologickým materiálem nebo jinému znehodnocení vzorku laboratoř a spolupracující subjekty jsou povinni tyto pokyny aplikovat v plném rozsahu D PREANALYTICKÉ PROCESY V LABORATOŘI D-1 Příjem žádanek a vzorků CYTOGENETICKÁ ANALÝZA PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ Vzorky krve laboratoři předává pověřený pracovník žadatele o vyšetření nebo pověřená sestra Centra pracovního lékařství. Vzorky přijímá pracovník laboratoře, který je povinen zkontrolovat, zda je vzorek v předepsaných a neporušených odběrových zkumavkách a zda má žádanka o vyšetření všechny náležitosti. Každý vzorek je po přijetí zaevidován do záznamové knihy a je mu přiděleno evidenční číslo. Do záznamové knihy se dále zapíše příjmení a jméno klienta, jeho rodné číslo, zdravotní pojišťovna, datum odběru, pracoviště, pracovní riziko, typ vyšetření (preventivní, opakované) a kdo vzorek převzal. Po ukončení vyšetření je do záznamové knihy doplněn výsledek. ŘEDĚNÍ VZORKŮ LÁTEK NA EPIKUTÁNNÍ TESTY Vzorky látek z pracovního prostředí testované osoby předává pověřené sestře Centra pracovního lékařství pověřený pracovník Krajské hygienické stanice. Při předání obě strany zkontrolují, zda jsou odebrané vzorky v nepoškozených odběrových nádobkách a zda jsou přiloženy příslušné bezpečnostní listy a zpráva Hygienické stanice o provedeném odběru, ta musí obsahovat přesnou identifikaci pacienta příjmení, jméno, datum narození a zaměstnavatele a seznam odebraných vzorků látek k epikutánním testům. O převzetí je proveden záznam a tato zpráva je vložena do zdravotní dokumentace pacienta. Pověřená sestra Centra pracovního lékařství předá vzorky látek a příslušnou dokumentaci pracovníkovi laboratoře. Předání je zapsáno do záznamové knihy a sadě látek jednoho pacienta je přiděleno evidenční číslo. Do záznamové knihy se dále zapíše příjmení a jméno pacienta, datum narození a jeho pracoviště. Vzorky jsou skladovány v chladničce při teplotě 4-10 C. 10/16
Protokol ředění látek na epikutánní testy, ve kterém je uvedeno, jak byl každý vzorek z dané sady naředěn a další detaily, je založen do zdravotní dokumentace pacienta. Naředěné látky, původní vzorky a příslušná dokumentace jsou v domluvený termín předány pověřenému pracovníkovi Kožního oddělení, Pardubické krajské nemocnice, a.s. Termín předání je zapsán do záznamové knihy. D-2 Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí vadných (kolizních) primárních vzorků Při neúplnosti údajů na průvodce a dalších komplikacích se ihned komunikuje se žadatelem o vyšetření a zajistí veškeré potřebné informace pro možnost zpracování materiálu a uvolnění výsledku. V případě, že vzorek nelze zpracovat (znehodnocení, rozlití, rozbití během transportu), informuje pracovník laboratoře telefonicky žadatele. CYTOGENETICKÁ ANALÝZA PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ Odmítnout lze: průvodku s biologickým materiálem, na které chybí základní údaje nebo jsou nečitelné průvodku nebo odběrovou nádobu znečištěnou biologickým materiálem nedostatečné množství biologického materiálu nutné pro zpracování biologický materiál bez průvodky nádobu s biologickým materiálem, kde zjevně došlo k porušení doporučení o preanalytické fázi ŘEDĚNÍ VZORKŮ LÁTEK NA EPIKUTÁNNÍ TESTY Odmítnout lze: převzetí vzorků bez příslušné dokumentace (zpráva o odběru vzorků látek k epikutánním testům, bezpečnostní listy látek) dokumentaci nebo odběrové nádobky znečistěné odebranými vzorky D-3 Postupy při nesprávné identifikaci vzorku nebo žádanky Při neúplnosti údajů na průvodce a dalších komplikacích se ihned komunikuje se žadatelem o vyšetření. 11/16
Veškeré problémy s údaji, identifikací, kvalitou vzorku, transportem apod. jsou zapsány do Knihy neshod s uvedením data, identifikace pacienta, pracovníka laboratoře, důvodu odmítnutí a komu byla neshoda hlášena. E VYDÁVÁNÍ VÝSLEDKŮ A KOMUNIKACE S LABORATOŘÍ (Tento oddíl se netýká ředění látek na epikutánní testy.) E-1 Hlášení výsledků v kritických intervalech Zhodnocení získaných aberací v periferní krvi je vyšetření, které má preventivní charakter. Ani nadlimitní nálezy nepředstavují přímé ohrožení zdraví jedince. Takové výsledky jsou konzultovány s lékařem Centra pracovního lékařství, který zvolí další postup (opakované vyšetření s určitým časovým odstupem nebo jiné specializované vyšetření). E-2 Informace o formách vydávání výsledků Výsledky odesílá vedoucí pracovník laboratoře v písemné podobě žadateli o vyšetření, kterým je nejčastěji poskytovatel pracovnělékařských služeb klienta nebo jiný specialista. Závěrečná zpráva obsahuje přesnou identifikaci klienta, zjištěné průměrné procento aberantních buněk, interpretaci výsledku a další doporučení. O výsledcích skupinových testů informujeme příslušnou Krajskou hygienickou stanici. Pokud je klient zároveň pacientem Centra pracovního lékařství je kopie průvodky pro cytogenetické vyšetření s doplněnými výsledky založena do jeho zdravotní dokumentace. Všechny výsledky jsou v laboratoři dostupné v tištěné i elektronické formě, v obou podobách jsou výsledky také archivovány. E-3 Intervaly od dodání vzorku k vydávání výsledku Zhodnocení získaných aberací v periferní krvi je vyšetření, které má preventivní charakter. Výsledky individuálních vyšetření jsou zasílány ihned po ukončení mikroskopické analýzy vzorku. U skupinových testů se výsledky zasílají až po statistickém vyhodnocení výsledků všech pracovníků ve skupině. E-4 Způsob řešení stížností Veškeré stížnosti (ústní, písemné) řeší vedoucí pracovník laboratoře. Závažnější stížnosti hlásí primáři Centra pracovního lékařství. Drobné připomínky k práci laboratoře se řeší ihned. Závažnější stížnost a postup řešení se zapíší do záznamové knihy laboratoře. E-5 Konzultační činnost laboratoře Konzultace v souvislosti s výsledky vyšetření podává pouze odborný pracovník-vysokoškolák se specializovanou způsobilostí případně lékař Centra pracovního lékařství. 12/16
F POKYNY A INSTRUKCE F-1 Pokyny pro odběr žilní krve Obecně platné pokyny jsou mj. zakotveny v Hygienicko-protiepidemickém řádu, Pardubické krajské nemocnice, a.s. (ŘD_6_12_PKN). odběr žilní krve pro cytogenetické vyšetření lze provést kdykoliv v průběhu dne, pacient nemusí být nalačno odběr se provádí v poloze vsedě nebo vleže ze žíly v paži kontrola identifikace pacienta a identifikačních údajů na zkumavce/stříkačce odběrová sestra aplikuje škrtidlo a instruuje pacienta k sevření pěsti dezinfekce místa vpichu doporučeným prostředkem, po dezinfekci je nutné kůži nechat oschnout při použití vakuových systémů se vloží vhodná jehla do držáku, palcem se pod místem odběru stabilizuje poloha žíly, provede se venepunkce a teprve poté se nasadí vhodná zkumavka (pro cytogenetické vyšetření je to zkumavka se zeleným uzávěrem, obsahuje Lithium Heparin). Jakmile začne krev pomocí vakua vtékat do zkumavky, lze odstranit škrtidlo, pozice jehly v žíle se přitom nesmí změnit. místo vpichu i s jehlou se zakryje sterilním gázovým čtverečkem, na něj se jemně zatlačí a pomalým tahem se odstraní jehla ze žíly. Poté se místo vpichu překryje novým sterilním gázovým čtverečkem a přelepí se náplastí a pacientovi se doporučí tisknout minimálně 2 minuty náplast k místu vpichu, aby se předešlo případnému krvácení a vzniku hematomu. zkumavku s odebranou krví a heparinem je nutné ihned po odběru promíchat šetrným převracením bezprostředně po odběru je nutné bezpečně zlikvidovat použité jehly F-2 Pokyny pro nakládání s odpady Laboratoř Centra pracovního lékařství se řídí organizační směrnicí OS_51_13_PKN Nakládání s odpady v Pardubické krajské nemocnici, a.s. 13/16
P PŘÍLOHY P-1 PRŮVODKA PRO CYTOGENETICKÉ VYŠETŘENÍ 14/16
P-2 PROTOKOL CYTOGENETICKÉ ANALÝZY LIDSKÝCH PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ 15/16
ODKAZY Literární a jiné informační zdroje CYTOGENETICKÁ ANALÝZA PERIFERNÍCH LYMFOCYTŮ: Aktualizace platné standardní metodiky (Příloha AHEM 1/2007), www.szu.cz/svi/pdf/full-2007-01.pdf Anton C. de Groot, Patch Testing, Test concentrations and vehicles for 4350 chemicals, Third Edition, 2008 Eugen Hegyi, Diagnostika profesionálného ekzému, 1960 www.epitesty.cz 16/16