Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě Petr Pumann

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě Petr Pumann"

Alois Štefan Navrátil
před 5 lety
Počet zobrazení:

1 Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě Petr Pumann Determinační kurz Dolní Věstonice

2 Co se nachází při mikroskopickém rozboru vody? sinice a řasy prvoci (bezbarví bičíkovci, nálevníci) bakterie jen omezeně většinou jsou příliš malé vířníci a korýši (buchanky, vznášivky, peroločky) jen ojedinělé nálezy (při standardním objemu vzorku) abioseston neživé částice Státní

3 Státní sinice a řasy

4 Státní prvoci

5 100 µm

6 Důležité naučit se určovat chvíli trvá rozhodně ne všechno lze určit, i když to už docela umíte Státní

7 Oblast využití mikroskopická kontrola pitné vody pro účely vyhlášky č. 252/2004 Sb. mikroskopická kontrola surové vody a vody v procesu úpravy pro účely vyhlášky č. 428/2001 Sb. mikroskopické rozbory povrchových a podzemních vod pro různé účely Státní

8 Co by měl pracovník provádějící mikroskopické rozbory vody znát metodické postupy včetně toho, jak správně mikroskopovat mikroskopické organismy a další ve vodě se běžně vyskytující objekty chování jednotlivých vyšetřovaných systémů (pro správnou interpretaci nálezu) Státní

9 Metodické normy ČSN Jakost vod Biologický rozbor Stanovení biosestonu (2005) ČSN Jakost vod Biologický rozbor Stanovení abiosestonu (1998) Státní

10 Odběr Státní odběrové normy normy řady ČSN (EN) ISO 5667 vzorkovnice plnit cca do 4/5 objemu u dezinfikovaných pitných vod je nutné neutralizovat účinky dezinfekce thiosíranem sodným stejným způsobem jako u vzorků pro mikrobiologický rozbor na každých 100 ml jejího objemu 0,1 ml 1,8 % (m/m) roztoku pentahydrátu thiosíranu sodného pozor na vzorkovnice se zábrusem možnost uvolňování drobných skleněných střepů

11 Státní

12 Státní

13 Transport vzorků zpracování do 24 hodin předepsáno ČSN teplota: 2 5 C tma Státní

14 Staré vzorky změna kvantity i druhového složení pomnožení některých organismů (např. Anthophysa vegetans, bezbarví bičíkovci, měňavky) Státní

15 Státní

16 Zahuštění odstředění, centrifugace Státní

17 Pomůcky - odstředivka odstředivka s výkyvným rotorem úhlový rotor nepřípustný kontrola otáček Státní

18 Parametry odstřeďování 2000 otáček za minutu po dobu 5 min. bez uvedení poloměru rotoru je údaj, který necharakterizuje přesně podmínky odstřeďování přejata informativní příloha, ve které je uveden přepočet otáček v závislosti na poloměru rotoru Státní

19 Pomůcky - zkumavky kalibrace na 10 ml; 1 ml; 0,5 ml; 0,2 ml ověření kalibrace osobou, která bude provádět zahušťování Státní

20 Zahuštění - objemy z 10 ml na? pitná voda 0,2 ml povrchová podle množství přítomných organismů Státní

21 Počítací komůrka Cyrus I plocha 1 cm 2 40 x 40 pásů 0,1 mm = 100 μm Státní

22 250 μm 1000 μm 125 μm

23 Státní

24 Státní

25 Státní

26 Státní

27 Jednotky pro vyjádření výsledků posun od protěžování jedinců k rovnoprávnosti vyjadřování výsledků v jedincích či buňkách v závislosti na účelu rozboru jedinci rychlé, v některých případech je však obtížné interpretovat výsledek buňky - především u řas a sinic, ale u některých organismů (např. velké kolonie) je nelze spočítat Státní

28 Termín jedinec (organismus) Za jedince se považuje samostatná buňka (nezáleží na její velikosti), dále cenobium nebo kolonie do velikosti 100µm a vlákna do délky 100µm. Cenobia, kolonie a vlákna překračující uvedené rozměry se vyjadřují jako jejich násobky. U koloniálních nálevníků, vířníků a drobných mnohobuněčných živočichů se počítá každý jedinec zvlášť. Státní

29 Státní

30 Státní

32 250 μm 1000 μm Státní 125 μm

33 1 nebo 3? 1 nebo 3? 1, 2 nebo 3? 1 nebo 8? 1 nebo 8? 1 1 nebo nebo 2? 2?

34 Důležitá informace o jedincích moc si s tím nelámat hlavu, tak nanejvýš v okružních rozborech Státní

35 Zahuštění na různé objemy podle oživení vzorku původní normy umožňovaly zahušťovat pouze na 0,2 ml revidovaná norma podle oživení vzorku zahušťovat lze v rozmezí 0,1 1 ml nezahušťovat vzorky od počtů jedinců/ml a více (původně od jedinců/ml) Státní

36 Fixace Lugolovým roztokem podle Utermöhla povinnost zpracovávat část vzorku po fixaci Lugolovým roztokem podle Utermöhla při výskytu organismů, které špatně sedimentují (typicky sinice vodních květů) při výskytu většího množství organismů, které snadno podléhají destrukci Státní

38 Rozměry objektů hrubé odhady podle velikosti zorného pole podle mřížky počítací komůrky měření (nutnost kalibrace) mikrometr analýza obrazu Státní

39 Využití fluorescence při výskytu velmi drobných organismů počítání velmi drobných organismů v počítacích komůrkách Cyrus I, Burker apod. je zatíženo velkou chybou usnadnění pomocí fluorescence i přesto bude stanovení zatíženo velkou chybou Státní

40 Rozlišení biologického stavu (tj. odlišení živých organismů) pro organismy s chlorofylem využita autofluorescence chlorofylu postup i pro organismy neobsahující chlorofyl (pohyb, stav protoplastu) Státní

41 Státní Fluorescenční mikroskop

42 Státní Nitzschia živá x mrtvá

43 Státní

46 Státní

47 Státní

48 Státní

49 Státní

50 Omezení velmi drobné organismy využít lepších optických vlastností tenkého krycího skla není dodržena standardní výška komůrky stanovení pouze orientační (cca 90% původního objemu) Státní

51 Státní Abioseston

schránek obrněnek, korýšů, vířníků, hmyzu, pylová a škrobová zrna, zbytky

52 Abioseston ve vodě Státní pozůstatky těl různých organismů (např. produkty metabolizmu železitých bakterií, prázdné schránky rozsivek, zbytky schránek obrněnek, korýšů, vířníků, hmyzu, pylová a škrobová zrna, zbytky rostlinných pletiv, detritus) částice anorganického původu (např. produkty koroze, různé sraženiny, půdní částice)

53 Vyjádření abiosestonu kvalitativní - textová informace o typu přítomných částic abiosestonu kvantitativní odhad pokryvnosti zorného pole mikroskopu v procentech (limit pro pitnou vodu 10 %) Státní

Kvantitativní stanovení abiosestonu podle ČSN 75 7713 společně s biosestonem odstředění 10 ml vzorku zahuštění na 0,2

54 Kvantitativní stanovení abiosestonu podle ČSN společně s biosestonem odstředění 10 ml vzorku zahuštění na 0,2 ml přenesení do komůrky Cyrus I. pozorování při 200 násobném zvětšení odhad pokryvnosti zorného pole v procentech Státní

55 ? %

56 MPZ abioseston abioseston (%)

57 MPZ abioseston abioseston (%)

58 MPZ abioseston abioseston (%)

59 MPZ abioseston abioseston (%)

60 Možné vylepšení metody v budoucnosti - Analýza obrazu stejné jako u ČSN místo odhadu použití analýzy obrazu nutné vybavení mikroskop s digitálním fotoaparátem nebo kamerou vhodný software Státní

61 Státní

62 Státní

63 Státní

64 Problémy analýzy obrazu některé mikroskopické objekty jsou problematické (většinou částečně průsvitné) problém při vyšším zastoupení organismů Státní

Podobné dokumenty

Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě

Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě Petr Pumann Státní duben 2007 Co se nachází při mikroskopickém rozboru vody? organismy sinice a řasy prvoci (bezbarví bičíkovci, nálevníci) bakterie jen omezeně